AST (GOT) opt

abc

Aspartato Aminotransferasa EC 2.6.1.1

IFCC
MANUAL

PARA SU USO
Para el anlisis cuantitativo in vitro de aspartato
aminotransferasa (AST) en suero y plasma. Este producto
es adecuado para su utilizacin en Manual.
Cat. No.
AS 1202
20 x 2 ml

AS 1204
10 x 10 ml

AS 1267
5 x 20 ml

AS 2359
5 x 100 ml

1. Tampn/Sustrato
2. Enzima/Coenzima/
-oxoglutarato

1 x 70 ml
20 x 2 ml

1. Tampn/Sustrato
2. Enzima/Coenzima/
-oxoglutarato

1 x 105 ml
10 x 10 ml

1. Tampn/Sustrato
2. Enzima/Coenzima/
-oxoglutarato

1 x 105 ml
5 x 20 ml

1. Tampn/Sustrato
2. Enzima/Coenzima/
-oxoglutarato

5 x 100 ml
5 x 100 ml

COMPOSICIN DEL REACTIVO

METODO UV
Este es un mtodo estndar optimizado segn las
concentraciones recomendadas por la IFCC.
SIGNIFICADO CLINICO(1,2,3,4)
Las aminotransferasas son un grupo de enzimas que
catalizan las inter conversiones de aminocidos y
-oxocidos por medio de la transferencia de grupos amino.
La GOT (aspartato aminotransferasa o transaminasa de
oxaloacetato glutamato) se ha encontrado en el citoplasma y
mitocondrias de las clulas estudiadas. En caso de un ligero
dao del tejido como por ej. el hgado, la forma predominante
de la GOT en suero es la del citoplasma, con una cantidad
ms pequea proviniente de las mitocondrias. Un dao ms
severo del tejido dar como resultado una mayor liberacin de
enzima mitocondrial. Los niveles elevados de AST pueden
ser una seal de infarto de miocardio, enfermedad heptica,
distrofia muscular y dao de rganos.
Los msculos del corazn son los que muestran ms
actividad de sta enzima, sin embargo tambin se ha
encontrado en el cerebro, hgado, mucosa gstrica, tejido
adiposo y riones humanos.
La IFCC recomienda actualmente (1980) procedimientos
estandarizados para los anlisis de GOT incluyendo:1. optimizacin de las concentraciones de substrato.
2. Empleo de tampones Tris (en lugar de fosfato, el cual se
ha demostrado que inhibe la recombinacin de la
apoenzima con el fosfato piridoxal).
3. Preincubacin de suero y tampn combinado para
permitir que tengan lugar posibles reacciones con NADH.
4. Substrato de inicio (-oxoglutarato)
5. Activacin de fosfato piridoxal opcional.
Este es un mtodo estndar optimizado de acuerdo a las
recomendaciones de la IFCC.
PRINCIPIO
El -oxoglutarato reacciona con la L-aspartato en presencia
de GOT para formar L-glutamato mas oxaloacetato. La
reaccin indicadora utiliza el oxaloacetato para la
determinacin cintica del consumo de NADH.
-oxoglutarato + L-aspartato

oxaloacetato + NADH + H+

AST

L-glutamato + oxaloacetato
MDH

(5)

EXTRACCION Y PREPARACION DE MUESTRAS

Suero:- Utilizar suero libre de hemlisis. El suero se deber
separar del coaglo durante la hora siguiente a su
extraccin.
Plasma:- Se puede utilizar EDTA o heparina como
anticoagulante. El plasma se deger separar de las
clulas durante la hora siguiente a su extraccin.
Las muestras se debern refrigerar si no se utilizan
inmediatamente:Las muestras que se almacenen durante ms de 3
das se debern congelar a -20C.

L-malato + NAD+

Componentes

Concentraciones en la prueba

1. Tampn/Sustrato
Tampn Tris
L-aspartato
2. Enzima/Coenzima/-oxoglutarato
-oxoglutarato
MDH
LD
NADH

80 mmol/l, pH 7,5
240 mmol/l
12 mmol/l
420 U/l
600 U/l
0,18 mmol/l

PRECAUCIONES DE SEGURIDAD
Unicamente para diagnstico in vitro. No pipetear con la
boca. Respetar las precauciones normales necesarias que
se requieren al manejar reactivos de laboratorio.
La solucin 1 contiene Azida Sdica. Evitar su ingestin o
contacto con la piel y mucosas. En caso de contacto con la
piel, lavar inmediatamente el rea afectada con agua
abundante. En caso de ingestin o contacto con los ojos
llamar inmediatamente a un mdico.
La Azida Sdica reacciona con el cobre y el plomo de las
tuberas, lo que podra producir azidas explosivas. Cuando
se deseche este reactivo enjuagar abundantemente con
agua para evitar la formacin de estas azidas explosivas.
Las superficies metlicas que hayan sido puestas en
contacto con la azida sdica deben ser lavadas con
hidrxido sdico al 10%.
Hojas informativas sobre Salud y Seguridad estn
disponibles si se desean.
Los reactivos deben ser utilizados solo para los
propsitos indicados por personal adecuado
cualificado de laboratorio bajo condiciones apropiadas
de laboratorio.

MANUAL - AST (GOT) opt. - AS 1202

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ESTABILIDAD Y PREPARACIN DE LOS REACTIVOS

1. Tampn/Sustrato
Listo para su uso. Estables hasta la fecha de caducidad
cuando se conservan entre +2 y +8C.
2. Enzima/Coenzima/-oxoglutarato
Reconstituir un vial de Enzima/Coenzima/-oxoglutarato
2 con el volumen adecuado de Tampn/Sustrato 1:
2 ml para el kit de 20 x 2 ml
(AS1202)
10 ml para el kit de 10 x 10 ml (AS1204)
20 ml para el kit de 5 x 20 ml
(AS1267)
Es estable durante 14 das conservado entre +2 y +8C
24 horas entre +15 y +25C
Cat. No. AS 2359 5 x 100 ml
Disolver el contenido de una botella de Enzima/
Coenzima/-oxoglutarato 2 con un pequeo volumen de
Tampn/Sustrato 1 y luego transferir el contenido a la
botella 1, enjuagando varias veces la botella 2. Es
estable durante 14 das cuando se conserva entre +2 y
+8oC 24 horas entre +15 y +25oC.
MATERIALES SUMINISTRADOS
Tampn/Sustrato
Enzima/Coenzima/-oxoglutarato
MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS
Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y
Nivel 3 (No. Cat. HE 1532)
PROCEDIMIENTO
Longitud de onda:
Cubeta:
Temperatura:
Medicin:

340 nm (Hg 334 nm Hg 365 nm)

1 cm de espesor
25/30/37C
Frente al aire

Pipetear en cubeta:

Macro

Micro

Muestra
Enzima/Coenzima/-oxoglutarato 2

0,2 ml
2,0 ml

0,1 ml
1,0 ml

Mezclar, leer la absorbancia inicial al cabo de 1 min. Leer

de nuevo al cabo de 1, 2 y 3 min. Observar si la variacin
de la absorbancia por minuto se sita entre
0,11 y 0,16 a 340/Hg 334 nm
0,06 y 0,08 a Hg 365 nm
para el clculo usar slo los valores obtenidos durante los 2
primeros minutos.
CALCULOS
Para calcular la actividad de la GOT utilizar las frmulas
siguientes:
U/l = 1746 x A 340 nm/min
U/l = 1780 x A Hg 334 nm/min
U/l = 3235 x A Hg 365 nm/min

CONTROL DE CALIDAD
Se recomiendan los Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y
Nivel 3 para el control de calidad diario. Analizar dos niveles
distintos de controles al menos una vez al da. Los valores
obtenidos debern encontrarse dentro del rango especificado.
Si los valores se encuentran fuera del rango y su repeticin
excluye error, se debern seguir los siguientes pasos:
1. Comprobar la programacin del instrumento y la lmpara.
2. Comprobar que todo material est limpio.
3. Comprobar el agua, contaminacin ej. el crecimiento
bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los
resultados.
4. Comprobar la temperatura de reaccin
5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus
componentes.
6. Ponerse en contacto con el Soporte Tcnico al Cliente de
los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28
94422413.
(6,7)

ESPECIFICIDAD/INTERFERENCIA
La hemlisis bruta producir falsos resultados elevados.
Se deber tomar en consideracin los efectos de varios
frmacos en la actividad de La GOT en los casos de
pacientes que estn recibiendo grandes dosis de frmacos.
Los siguientes analitos se analizaron hasta los siguientes
niveles y se encontr que no interfieren:
Hemoglobina
Bilirrubina libre
Bilirrubina conjugada
Triglicridos

Intralipid

250 mg/dl
25 mg/dl)
25 mg/dl)
1000 mg/dl)
200 mg/dl

Young et cols y Friedman et cols dan una lista de

sustancias y condiciones que se conoce que afectan a la
actividad in vivo de La GOT . La integridad de esta lista y la
exactitud de la informacin que en ella se suministra no
representa necesariamente la opinin de Randox
Laboratories, Ltd.
(8,9)

VALORES NORMALES EN SUERO

Hombre:
Mujer :

25C

30C

37C

Hasta 18 U/l
Hasta 15 U/l

Hasta 25 U/l
Hasta 21 U/l

Hasta 37 U/l
Hasta 31 U/l

Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio

rango que refleje la edad, sexo, dieta y localidad geogrfica
de la poblacin.
LINEALIDAD
Si la variacin de absorbancia por minuto excede de:
0,16 a 340 nm/Hg 334nm
0,08 a Hg 365 nm
diluir 0,1 ml de muestra con 0,9 ml de NaCl al 0,9% y
repetir la prueba. Multiplicar el resultado por 10.

RANDOX Laboratories Ltd., Ardmore, Diamond Road, Crumlin, Co. Antrim, United Kingdom, BT29 4QY
Tel:CRUMLIN (028)94422413 Fax.No.INT.44 (028)94452912 UK (028)94452912
Email: applications@randox.com Website: www.randox.com

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REFERENCIAS
1. Wroblewski F, La Due J.S: Ann Intern Med. 1956; 45:
801.
2. Wroblewski F, La Due J.S: Proc Soc Exp Biol Med
1956; 91: 569.
3. Bergmeyer HU, Bowers GN Jr, et al: Clin Chem 1977;
23: 887.
4. Bergmeyer HU, Bowers GN Jr, et al: J.Clin Chem Clin
Biochem 1980; 18: 521-534.
5. Tietz N W: Fundamentals of Clinical Chemistry ed 3.
Philadelphia, WB Saunders Co. 1987, pg 372.
6. Young D S, et al: Clin Chem 1975, 21; No5.
7. Friedman RB, et al: Clin Chem 1980, 26; No4.
8. Wallnofer H, Schmidt.E, Schmidt FW, eds: Synopsis
der Leberkrankheiten Stuttgart, Georg Thieme Verlag,
1974.
9. Thefeld W, et al: Dtsch Med Wschr 1974; 99: 343.

Revisado 02/02/04 wpt

RANDOX Laboratories Ltd., Ardmore, Diamond Road, Crumlin, Co. Antrim, United Kingdom, BT29 4QY
Tel:CRUMLIN (028)94422413 Fax.No.INT.44 (028)94452912 UK (028)94452912
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