PRCTICA NO 7

CUANTIFICACIN DE CAFENA POR ESPECTROFOTOMETRA

INTRODUCCIN
Las tcnicas espectroscpicas o espectrofotomtricas se basan en la utilizacin de energa
luminosa de cierta longitud de onda para identificar y cuantificar analitos de una muestra. Es
comn clasificar estas tcnicas atendiendo a la regin del espectro electromagntico que
utilizan, y as por ejemplo se tiene la espectroscopa de rayos X (usa longitudes de onda que
van de 100 pm a 10 nm), la espectroscopa en el ultravioleta (de 180 a 380 nm),
espectroscopa en el visible (de 380 a 780 nm) y espectroscopa de infrarrojo (de 0.78 a 50
m) (Harris, 2001). Las radiaciones ultravioleta y visible (UV-Visible) se usan ampliamente
con fines analticos y ambas pueden ser medidas con los espectrofotmetros comunes.
Cuando un analito en disolucin capaz de absorber luz se coloca en la celda de un
espectrofotmetro y se le hace incidir luz de cierta longitud de onda (monocromtica o de un
solo color), parte de la luz incidente es absorbida por el analito y el resto atraviesa y llega al
fototubo del equipo que la detecta y mide (Verde y col., 1999). Estas propiedades se conocen
como absorbancia y transmitancia y se definen como se indica a continuacin. Si Po es la
energa radiante incidente y P la energa radiante transmitida, la transmitancia, definida como
la fraccin de la energa radiante que pasa a travs de la muestra (disolucin conteniendo al
analito), se expresa como:
T = P/Po, o bien T % = (P/Po)100
Mientras que la absorbancia, definida como la fraccin de la energa radiante que es absorbida
por la muestra y que est relacionada logartmicamente con la transmitancia, se expresa como:
A = -log T = log10 (Po/P)
La ley de Beer, tambin conocida como ley de Beer-Lambert, indica cuantitativamente
como la absorbancia depende de la concentracin de las molculas absorbentes y de la
longitud del trayecto, paso ptico o recorrido de la luz en la celda. Cuanto mayor sea la
concentracin de las molculas absorbentes mayor ser la absorbancia pues habr ms
molculas absorbiendo por unidad de volumen, e igualmente entre mayor sea la longitud del

paso ptico, mayor ser la absorbancia pues existirn ms molculas en el trayecto recorrido
por la luz (Skoog y col., 2008). La ley de Beer dice por lo tanto, que la absorbancia es
directamente proporcional a la concentracin de la especie absorbente (c) y a la longitud del
paso ptico (b) y se expresa como:
A = abc
En donde:
a = constante de proporcionalidad llamada absortividad
b = longitud de paso ptico en cm
c = concentracin de la especie absorbente
La concentracin (c) puede expresarse en g/l o en otras unidades de concentracin, pero si se
expresa en molaridad (M) entonces la absortividad se denomina molar y sus unidades son M1

cm-1 y se representa por psilon (), en tal caso:

A = bc
Ntese que A es adimensional.
La ley de Beer slo se cumple con radiacin monocromtica y en disoluciones diludas
(10-2-10-6 M) debido a que en disoluciones concentradas las molculas de soluto interaccionan
entre s y cambian sus propiedades, entre ellas, la absortividad (Harris, 2001). Bajo estas
condiciones, un gran nmero de compuestos siguen la ley de Beer, pero algunos no muestran
una relacin lineal entre absorbancia y concentracin. Para saber el intervalo de
concentraciones en el que un compuesto sigue una relacin lineal con la absorbancia (ley de
Beer), se elabora una curva de calibracin midiendo las absorbancias de disoluciones del
analito de concentraciones conocidas.
Las mediciones espectrofotomtricas son ms confiables con valores de absorbancia
en el intervalo de 0.187 a 0.824, o bien, con valores de transmitancia entre 15 y 65%, debido a
que si la absorbancia es muy grande y pasa muy poca luz a travs de la muestra es difcil
medir esta energa radiante, y si por el contrario pasa demasiada luz (absorbancia muy
pequea), es difcil apreciar la diferencia entre la muestra y el blanco o referencia (disolucin
que lleva todos los reactivos menos el analito) (Harris, 2001).

En el anlisis espectrofotomtrico, normalmente se escoge la longitud de onda de

mxima absorbancia del analito (Max) debido, entre otras razones, a que la sensibilidad del
anlisis es mxima a esta , es decir, se consigue la mxima respuesta para una concentracin
dada de analito. La Max se obtiene mediante un espectro de absorcin que es una grfica que
muestra como vara la absorbancia (A) o la absortividad molar () al variar la longitud de
onda y se obtiene efectuando mediciones de absorbancia del analito en un intervalo amplio de
longitudes de onda, por ejemplo de 380 a 780 nm en la regin del visible.
Las celdas o depsitos transparentes que contienen la muestra (analito en disolucin) o
el blanco pueden ser de cuarzo, vidrio ptico o plstico y generalmente tienen 1 cm de
longitud de paso ptico. Las de cuarzo se usan para medidas espectrofotomtricas en el UVVisible, las de vidrio ptico, como absorben radiacin ultravioleta, slo son apropiadas para
mediciones en la regin del visible, y las de plstico slo se utilizan para disoluciones acuosas
y las hay para mediciones en el visible, y recientemente, en el ultravioleta.
OBJETIVO
El alumno determinar el espectro de absorcin y la curva patrn de un analito y usar esta
informacin para cuantificar una muestra problema del mismo analito.
MATERIALES Y REACTIVOS
POR EQUIPO
Espectrofotmetro Genesys o Biomate
2 celdas para el espectrofotmetro
6 Tubos de ensaye
1 gradilla
Papel seda
POR GRUPO
5 matraces volumtricos de 100 ml
1 matraz volumtrico de 250 ml
Balanza analtica
1 pipeta graduada de 1 ml
1 pipeta graduada de 5 ml
1 pipetas graduadas de 10 ml
1 esptula
1 propipeta
1 agitador de vidrio

PROCEDIMIENTO
Determinacin de la Curva de Calibracin de cafena a partir de diluciones.
La concentracin de la solucin madre de cafena es de 500ppm
Prepare la siguiente serie de tubos:
Tubo

Solucin madre
de cafena
(ml)

H2O
(ml)

Vol final
(ml)

100

Concentracin
de cafena
(ppm)
0

100

10

100

20

100

30

100

40

100

50

Mezcle por inversin y lea inmediatamente la absorbancia a la longitud de onda de mxima

absorbancia (Max) encontrada en su espectro de absorcin. Ajuste la absorbancia con el
blanco (tubo 1).
Determinacin de la concentracin cafena en la Disolucin Problema
Coloque en una celda tubo la disolucin problema de cafena y lea la absorbancia a la
longitud de onda de mxima absorbancia (Max) encontrada en su espectro de absorcin.
Ajuste la absorbancia con el blanco. Realice por triplicado esta determinacin.
REPORTE DE LA PRCTICA
Determinacin de la Curva de Calibracin de cafena
Construya una grfica de absorbancia contra concentracin molar de cafena. Compruebe en
que intervalo hay linearidad y por lo tanto, la ley de Beer se cumple. Obtenga la ecuacin de

la recta y el coeficiente de correlacin para ver que tan bien se ajustan sus datos a la lnea
recta.

CUESTIONARIO
1. Cul es la diferencia entre absortividad (a) y absortividad molar ()?
2. Qu cuidados se deben tener con las celdas del espectrofotmetro?
3. Plantee tres problemas en donde se aplique la ley de Beer. Ponga atencin en
proporcionar todos los datos requeridos para su resolucin.

BIBLIOGRAFA
Harris D. C., 2001 Anlisis Qumico Cuantitativo. 2 edicin. Editorial Revert, S.A. Mxico.
Skoog D. A., West D.M., Holler F.J., Crouch, S.R. 2008. Fundamentos de Qumica Analtica.
8 edicin. Thomson Learning, Mxico.
Verde Calvo Jos Ramn, Escamilla Hurtado Ma. de Lourdes, reyes Dorantes Alberto y
Malpica Snchez Frida. Manual de Prcticas de Qumica Analtica II. 1 edicin.
Universidad Autnoma Metropolitana-Iztapalapa, Mxico.