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Objetivos
Que el alumno:
1. Identifique la existencia de soluciones en
los sistemas biolgicos.
2. Explique los clculos y procedimientos
para preparar soluciones porcentuales,
molares y normales, as como las diferentes
diluciones de stas.
3. Presente ejemplos de soluciones utilizadas
en medicina (solucin isotnica, Ringer,
Darrow y Hartman).
Responda a las siguientes preguntas:
1. Qu es una solucin?
2. Cuntas clases de soluciones existen?
3. Qu significan los siguientes trminos:
mol, solucin molar y solucin normal?
4. Qu significan: v/v, p/v, p/p y ppm?
5. Cul es la composicin de las siguientes
soluciones: solucin isotnica de cloruro de
sodio, suero glucosado a 5%, Ringer-lactato?
6. Cules son los tipos de soluciones que
existen in vivo? Mencionar ejemplos.
7. Qu es una solucin isotnica?
8. Qu es una solucin osmolar?
9. Cmo se calcula la osmolaridad de una
solucin?
10. Qu les pasa a los eritrocitos cuando se
ponen en contacto con soluciones salinas de
diferente osmolaridad?
11. Qu se entiende por dilucin y dilucin
seriada de las soluciones?
Material
Por equipo:
3 vasos de precipitado de 10 ml
3 pipetas de 1.0 ml
3 pipetas de 5.0 ml
3 pipetas de 10.0 ml
Resultados
REFERENCIAS
1. Villazn SA, Crdenas CO, Villazn DO,
Sierra UA. Fluidos y electrlitos. Mxico: JGH
Editores; 2000.
2. Pea-Daz A, Arroyo BA, Gmez PA,
Tapia IR, Gmez EC. Bioqumica. Undcima
reimpresin de la 2a. ed. Mxico: Editorial
Limusa; 2004.
3. Laguna J, Pia E. Bioqumica de Laguna.
5a.ed. Mxico: Editorial El Manual Moderno;
2002: p. 41-56.
4. Holum JR. Fundamentos de qumica
general, orgnica y bioqumica para ciencias
de la salud. Mxico: Editorial Limusa Wiley;
2001.
5. Farias GM. Qumica clnica. Dcima
edicin Mxico: Editorial El Manual Moderno;
1999.
6. Bloomfield MM.Qumica de los organismos
vivos. Mxico: Editorial Limusa; 1997.
el equipo y
enrollar el
2
6
9
Prctica 2
3
4
Prctica 2
5
Objetivos
1. Al finalizar la prctica, el alumno
constatar las actividades reguladoras del
pulmn y el rin para mantener el equilibrio
cido-base en condiciones que tienden a
romperlo.
2. Mediante la determinacin del pH
observar la variacin de la concentracin de
hidrogeniones en la orina de un individuo que
ha realizado ejercicio muscular intenso.
3. Relacionar los resultados obtenidos con
los cambios metablicos originados por el
ejercicio muscular intenso.
Conteste las siguientes preguntas:
1. Por qu es importante que se mantenga
constante, dentro de ciertos lmites, el pH en
el organismo?
2. Cules son las fuentes de iones H + en el
organismo?
3. Cules son los sistemas reguladores que
facilitan la eliminacin del H+ producido en el
organismo con el fin de mantener constante
el pH sanguneo?
4. Cules son las reacciones de formacin
del cido carbnico (H2CO3) a partir de CO2 y
H2O, y de su disociacin para formar el ion
bicarbonato? Escrbalas.
5. Qu sistemas amortiguadores participan
directamente en la regulacin del pH
sanguneo?
6. Cules son los sistemas extrasanguneos
que tienden a mantener el pH extracelular?
Escriba la ecuacin de Henderson
Hasselbalch aplicada al sistema
REFERENCIAS
1. Devlin TM. Bioqumica. Libro de texto con
aplicaciones clnicas. 4a. ed. Barcelona:
Editorial Reverte; 2004.
2. Montgomery R. Bioqumica: casos y texto.
6a. ed. Editorial Harcourt-Brace; 1998: cap.4.
3. Villazn SA, Crdenas CO,Villazn
Mtodo
Prctica 3
Objetivos
Que el alumno:
1. Experimente y entienda cmo se comporta
un sistema amortiguador de pH.
2. Aprenda el uso de la ecuacin de
Henderson-Hasselbalch.
3. Aprenda a calcular el pK de un par cidobase.
4. Mida el pH de diferentes sustancias y
calcule su concentracin de H+.
5. Aplique estos conocimientos al estudio de
las propiedades de los aminocidos.
Para lograr lo anterior conteste las
siguientes preguntas y planteamientos:
1. Qu es el pH de una solucin?
2. Qu es un sistema amortiguador cidobase y para qu sirve?
3. Cules son los sistemas amortiguadores
ms importantes en biologa?
4. Escribir la ecuacin de HendersonHasselbalch.
5. Qu es el pK de un par cido base?
6. Por qu es importante la concentracin
de H+ en los seres vivos?
7. Dibujar la frmula de la glicina, de la lisina,
de la histidina y del cido asprtico
e identificar a los grupos -amino y carboxilo de estos aminocidos, as como su
radical, e indicar la naturaleza del mismo.
8. Qu les pasa a estos grupos funcionales
cuando se someten a pH cido o bsico?
9. Se pueden usar los aminocidos como
amortiguadores de pH?
10.
Son
los
aminocidos
buenos
amortiguadores a pH de 7.0?
Anlisis de resultados
1. Hacer una grfica de pH vs volumen en
ml de NaOH gastados luego de tomar en
cuenta que cada 0.1 ml de NaOH diluido en
20 ml aumenta la concentracin de OH en 5
mM.
2. Localizar en la grfica el pI y los
diferentes pK de los aminocidos.
3. Mediante la ecuacin de HendersonHasselbalch cuantificar la relacin entre cada
par de especies ionizables de los
aminocidos a diferentes pH.
4. Identificar a qu pH tienen poder
amortiguador.
Prctica 4
Objetivos
1. Aplicar los conocimientos generales sobre
las protenas al estudio de las protenas
corporales.
2. Conocer las alteraciones ms frecuentes de
las
protenas
plasmticas
y
sus
consecuencias.
3. Conocer los mtodos generales para el
estudio de las protenas plasmticas.
4. Determinar la concentracin srica de
protena total y de albmina e interpretar los
resultados obtenidos.
INTRODUCCIN
Las protenas son polmeros lineales
constituidos por los aminocidos, que se unen
entre s por medio de enlaces tipo amida
denominados enlaces peptdicos.
Los
polmeros
compuestos
por
dos
aminocidos forman un dipptido, por tres, un
tripptido; cuando el nmero de aminocidos
es mayor, oligopptidos y polipptidos o
simplemente se denominan pptidos. Las
protenas son molculas constituidas por una o
ms cadenas polipptidicas.
Las protenas pueden ser clasificadas en
funcin de aspectos tan diversos como su
composicin, su disposicin espacial, su
funcin biolgica y su localizacin.
Atendiendo a su localizacin dentro del
organismo humano, las protenas pueden
clasificarse en:
Hsticas o tisulares, son las protenas de los
tejidos.
Albmina
La albmina es la principal protena plasmtica
y es sintetizada y secretada por el hgado a
razn de 12 g al da. Supone alrededor de 25%
de la produccin proteica heptica total y la
mitad de toda su protena secretada. La
albmina es una protena globular compuesta
por 585 aminocidos en una sola cadena
polipeptdica con 50% de -hlice y 15% de
estructura , posee 17 puentes disulfuro y
tiene una vida media entre 14 y 20 das.
En el adulto normal se degradan diariamente
12 g de albmina que pueden proveer de
aminocidos para la sntesis de otras
protenas. Adems de esta funcin nutritiva, la
albmina ayuda a conservar la distribucin
normal de agua ya que produce cerca de 80%
del efecto osmtico de las protenas
plasmticas totales, debido a su alta
concentracin y bajo peso molecular. La
albmina interviene en el equilibrio cidobsico y se encarga tambin del transporte de
varias sustancias como son los cidos grasos,
la bilirrubina, varias hormonas e incluso
algunos frmacos (sulfonamidas, penicilina G,
aspirina, entre otras).
Alteraciones en la concentracin de albmina.
La ms comn es la disminucin en su
concentracin o hipoalbuminemia. En general,
la disminucin de 1 g de albmina srica
equivale a una prdida de 30 g de protena
tisular.
Las
principales
causas
de
hipoalbuminemia son las enfermedades
renales, la desnutricin por baja ingestin de
protenas y la sntesis deficiente como
consecuencia de la insuficiencia heptica,
sobre todo en casos de cirrosis. La
manifestacin clnica ms llamativa de la
hipoalbuminemia es el edema.
Las cifras normales de albmina son de 4.5
g/dl y las cifras lmite entre 3.5 y 5 g/dl. La
relacin normal A/G es mayor de uno y es un
indicador importante en algunos estados
patolgicos. Una relacin A/G baja puede
Tabla
5.1
Algunas
protenas
cuya
concentracin se determina en el suero
NOMBRE DE LA
PROTENA
g/L
PROPIEDADES Y
FUNCIN
MOTIVO PARA LA
PRUEBA
Albmina
35-50
Transporte de
mltiples
sustancias
Desnutricin
Hepatopata
Neoplasias
Ig G
8-17
Inmunidad
humoral
Inmunodeficiencias
Mieloma
C3
0.50.9
Protena del
complemento
Obstruccin biliar
Lupus eritematoso
Protena C
reactiva
<0.005
Implicada en la
respuesta
inmune
Infecciones agudas
Protena fijadora
de vitamina D
0.20.55
Une y
transporta
vitamina D3
Dao heptico
grave
Haptoglobina
0.53.2
Fija la
hemoglobina
Hemlisis
Sndrome nefrtico
Fibronectina
0.250.4
Promueve la
adhesin
celular, une
fibrina
Sepsis
Leucemia
Pancreatitis aguda
Transferrina
2.34.3
Transporte de
hierro
Hemocromatosis
malnutricin
Ceruloplasmina
0.20.55
Transporte de
cobre
Dao heptico
grave
Sndrome nefrtico
1. Blanco
2. Estndar
25 l
-
3. Suero
problema
25 l
1 ml
1 ml
1 ml
1. Blanco
2. Estndar
10 l
-
3. Suero
problema
10 l
2 ml
2 ml
2 ml
REFERENCIAS
1. Peters TJ. Clin Chem. 1968; 14: 1147.
2. Murray KR, Granner DK, Mayes PA,
Rodwell VW. Bioqumica de Harper. 16a. ed.
Mxico: Editorial El Manual Moderno; 2004.
3. Gonzlez de Buitrago JM. Bioqumica
clnica. Madrid: McGraw-Hill Interamericana;
1999.
4. Laguna-Pia. Bioqumica. 4a. ed. Mxico:
Salvat; 1990. Cap. 4.
5. Pacheco Leal D. Bioqumica mdica.
Mxico: Editorial Limusa; 2004.
Prctica 5
Cintica enzimtica.
Efecto de la concentracin del sustrato
sobre la velocidad de reaccin enzimtica
Objetivos
El alumno:
1. Explicar el efecto de la concentracin de
sustrato sobre la velocidad de una reaccin
enzimtica.
2. Calcular por mtodos grficos la velocidad
mxima y la constante de Michaelis de una
reaccin enzimtica.
3. Conocer los diferentes tipos de inhibidores
que existen y estudiar su efecto sobre la Km y
V mx.
4. Conocer
aspectos
bsicos
de
fotocolorimetra (ver pg, 115).
Para lograr los objetivos de esta prctica
contestar las siguientes preguntas:
1. Qu es la velocidad de una reaccin
enzimtica?
2. Cmo se define la constante de Michaelis
(Km) de una reaccin enzimtica?
3. Cmo se define la velocidad mxima (V
mx) de una reaccin?
4. Para qu le sirve a un mdico la
determinacin de la actividad de algunas
enzimas?
5. Cules son las enzimas cuya determinacin
tiene valor diagnstico?
Hiptesis
Si la velocidad de una reaccin enzimtica es
proporcional a la concentracin del sustrato;
cuando la concentracin del sustrato es muy
alta, por lo tanto la enzima se satura y alcanza
su velocidad mxima.
La enzima que sirve de modelo en esta prctica
es la glucosa oxidasa acoplada a la peroxidasa.
Fundamento
El mtodo se basa en el hecho de que la
glucosa, en presencia del oxgeno del aire y con
la participacin de la glucosa oxidasa, se oxida
hasta cido glucnico. El perxido de hidrgeno
que se forma en el curso del proceso se
descompone mediante la peroxidasa. El oxgeno
atmico que se desprende en esta ltima
reaccin se combina con un cromgeno que se
colorea al oxidarse. La intensidad de la
coloracin
del
cromgeno
oxidado
es
proporcional a la concentracin de glucosa.
La glucosa oxidasa (-D-glucosa: oxgeno
xidorreductasa, EC1.1.2.4) tiene un peso
molecular de 160 000. Existe en forma dimrica
y contiene dos moles de FAD como grupo
prosttico por mol de enzima. La glucosa
oxidasa es altamente especfica, hecho que ha
permitido su empleo para el anlisis cuantitativo
de glucosa. La reaccin consiste de dos pasos:
1. Glucosa+glucosa oxidasa-FAD
Glucosa + O2
ES
E+P
Material y reactivos
2 Gradillas con 8 tubos de ensaye cada una.
1 Pipeta de 5 ml.
2 Pipetas de 5 ml.
1 Matraz Erlemeyer de 100 ml.
Fotocolormetro con filtro azul.
Solucin estndar de glucosa 40 mmol/l y una
dilucin 1:10 de sta para los tubos 2, 3 y 4.
2 frascos con solucin de enzimas: 41.6 Uml1
de glucosa oxidasa, 4.6 Uml1 de peroxidasa,
ortodianisidina 0.21 mmol/l.
Solucin de azida de sodio 400 mmol/l como
inhibidor.
Gotero con HCl.
Mtodo I (con azida de sodio)
1. En un matraz Erlenmeyer de 100 ml
preincubar 20 minutos la solucin de enzimas
con 0.3 ml del inhibidor.
2. Preparar la siguiente serie de tubos (tabla 1).
3.- Considerar un intervalo de 30 segundos para
cada tubo al agregar la enzima.
4.- Agitar cada tubo e incubar 5 minutos
temperatura ambiente y de inmediato detener la
reaccin agregando 3 gotas de HCl concentrado
Considerar un intervalo de 30 segundos para
cada tubo al agregar el HCl.
REFERENCIAS
1. Devlin TM. Bioqumica. Libro de texto con
aplicaciones clnicas. 4a. ed. Barcelona: Editorial
Revert; 2004.
2. Lehninger AL, Nelson, DL. Principios de
bioqumica. 4a. ed. Barcelona: Ediciones
Omega; 2005.
3. Mathews CK, van Holde KE. Bioqumica. 3a.
ed. Espaa: McGraw-Hill Interamericana; 2003.
Tubo
No.
1
2
3
4
5
6
7
8
Solucin
glucosa (ml)
de
H2O
(ml)
Soucin de
enzimas
(ml)
0.0
1.0
3
dil 1:10
0.1
0.9
3
dil 1:10
0.25
0.75
3
dil 1:10
0.5
0.5
3
0.1
0.9
3
0.25
0.75
3
05.
0.5
3
1.0
0.0
3
4. Voet D, Voet JG, Pratt C. Fundamentals of
biochemistry. USA: John Wiley and Sons; 1999.
Tubo
No
Concentracin
de sustrato
molas de
glucosa inicial
-1
ml
ABCISAS (X)
Velocidad de
la reaccin
unidades Klett
5 min-1
ORDENADAS
(y)
Velocidad de
la
reaccin
con
INHIBIDOR
Unidades
-1
Klett 5 min
1
2
3
4
5
6
7
8
Tubo
No.
1
2
3
4
5
6
7
8
Concentracin
de sustrato
molas de
glucosa inicial
ml-1
ABCISAS (X)
Velocidad de la
reaccin
unidades Klett 5
min-1 1/V
ORDENADAS (Y)
Velocidad de
la reaccin
con
INHIBIDOR
1/V
Unidades
Klett 5 min1
(Y)