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FACULTAD DE CIENCIAS FARMACÉUTICAS Y BIOQUÍMICA

ASIGNATURA:

BIOQUIMICA II

PRÁCTICA N º 3: REVELACIÓN DE ENZIMAS ALUMNA: CICLO: ROJAS RÉVOLO ROSARIO DIANA VII TURNO MAÑANA

DOCENTE:

Q.F. JAVIER JACK CALDERÓN GÓMEZ

LIMA – PERÚ 2012

PRÁCTICA Nº 2 CINETICA ENZIMATICA
UNIVERSIDAD INCA GARCILASO DE LA VEGA Facultad de Ciencias Farmacéuticas y Bioquímica

Revelar la Enzima de La Leche (Aldehídoxidasa) Revelar la enzima Peroxidasa (actúa sobre peróxidos).ALDEHÍDO -----. debe tomar Leche ya que tiene la enzima (Aldehidooxidasa) que acelera el metabolismo del aldehído. que consumimos en nuestra dieta. para que éste sea metabolizado dentro del organismo. ALIMENTO -----. Si el O2 ingresa de por medio no se observa la reacción. estos aldehídos se forman de alimentos que producen fermentos. Por Sistema de Aldehido Oxidasa en el organismo desdobla al aldehído convirtiéndolo en Peróxido (el cual produce radicales Libres).1): La Aldehidooxidasa es una Enzima Oxido Reductasa que trabaja con un FAD en primera instancia en su estado oxidado. - FINALIDAD DE LA VASELINA Producir una Capa en el Sistema que impida el ingreso de O2 en la reacción. La aldehídoxidasa metaboliza aldehídos.FERMENTO -----.OBJETIVO: • • • Revelar las distintas clases de Enzimas (Antioxidantes) de los alimentos.3. los peróxidos a la larga producen radicales libres (cáncer) REVELACIÓN DE ALDEHIDOXIDASA (EC 1.(El Aldehído es más tóxico que un Peróxido) por eso cuando una persona bebe alcohol. La vaselina queda sobrenadando en la solución acuosa ya que el agua es más densa que la vaselina. UNIVERSIDAD INCA GARCILASO DE LA VEGA Facultad de Ciencias Farmacéuticas y Bioquímica . para desintoxicarse.2. su cuerpo produce Aldehídos. ya que el aldehído es muy tóxico dentro del cuerpo.

.M. Oxidado: Color Azul . “Azul de Metileno” queda reducido.A.PRÁCTICA Nº 2 CINETICA ENZIMATICA RESULTADOS: TUBO 1 5 mL Leche + 1 ml H20 Dest.M.Es decir se formó A. UNIVERSIDAD INCA GARCILASO DE LA VEGA Facultad de Ciencias Farmacéuticas y Bioquímica VITRO . Reducido: Color Blanco .Benzaldehído+H2O) + 1mL Azul Metileno (Desplaza al O2) + 1 mL Vaselina 1 2 BM 38 ºC hasta ver Reacción Reacción (+) Decoloración de Azul a Blanco REACCIÓN QUÍMICA: VIVO Reacción producida en Ausencia de O2 .A.M.El azul de Metileno ayuda al FADH2 a reoxidarse aceptando sus Hidrógenos. en su forma “Leico” de color Blanco. + 1mL Azul Metileno + 1 mL Vaselina TUBO 2 5 mL Leche (Enzima Aldehídoxidasa + H2O) + 1 ml Aldehído (Rvo.

Benzidina + II gtas H2O2 TUBO 10 1 mL Pepino + V gts. Benzidina + II gtas H2O2 +++ (-) +++ 4 5 + TUBO 6 1 mL Manzana + V gts. Benzidina + II gtas H2O2 BM 38 ºC hasta ver Reacción +++ + +++ ++ 8 9 1 TUBO 8 1 mL Tomate + V gts. Benzidina + TUBO 12 1 mL Fresa + V gts.1. Benzidina + II gtas H2O2 TUBO 7 1 mL Yacón + V gts.1. Benzidina + TUBO 13 1 mL Kiwi + V gts.REVELACIÓN DE LA PEROXIDASA (EC1.1. Benzidina + II gtas H2O2 ++ ++ 6 7 TUBO 11 1 mL Camote Morado + V gts. Benzidina + II gtas H2O2 1 1 1 UNIVERSIDAD INCA GARCILASO DE LA VEGA Facultad de Ciencias Farmacéuticas y Bioquímica . V gts. V gts. Benzidina + II gtas H2O2 TUBO 2 TUBO 3 TUBO 4 1 mL 1 mL 1 mL Betarraga Naranja Rabanito + + + V gts. Benzidina Benzidina Benzidina + + + II gtas H2O2 II gtas H2O2 II gtas H2O2 BM 38 ºC hasta ver Reacción + ++ 1 2 3 TUBO 5 1 mL Nabo + V gts. Benzidina + II gtas H2O2 TUBO 9 1 mL Camote Amarillo + V gts.7) RESULTADOS: TEST DE BENZIDINA: (Zumos) Reacción (+) para BENZIDINA: Verde Azulado TUBO 1 1 mL papa + V gts.

. he ahí el fundamento de consumo de Peroxidasas en nuestra dieta. porque los Peroxidos (H2O2) que a la larga forman radicales libres los cuales son dañinos para el organismo son contrarrestados y convertidos constantemente en H20. ocurren simultáneamente las siguientes reacciones: 1. Reagrupación y 3. UNIVERSIDAD INCA GARCILASO DE LA VEGA Facultad de Ciencias Farmacéuticas y Bioquímica .II gtas H2O2 II gtas H2O2 BM 38 ºC hasta ver Reacción + (-) PRÁCTICA Nº 2 CINETICA ENZIMATICA REACCIÓN QUÍMICA: BENZIDINA: La Benzidina trabaja con los zumos de la muestra . Las Peroxidasas desdoblan constantemente en H20. peróxidos. Debido a éstas reacciones el Pirogalol producto de su oxidación se convierte en Purpurogalina ó Trioxibenzol –a-B-Tropalona responsable de la coloración parduzco amarillento en el pp sobre los trozos de la muestra.La Benzidina en la reacción se va a oxidar. En tanto que. los H+ que pierde la Benzidina son aceptados por el Peróxido (H2O2). convirtiéndolos (-) El H20 que es menos tóxica para el organismo se metaboliza. Oxidación 2. Descarboxilación. convirtiéndose en moléculas de H2O.En éste Sistema. es decir la enzima le va a arrancar H+ a la benzidina. PIROGALOL: El Pirogalol trabaja con los trozos de la muestra. producto de ésta Oxidación se va a formar el Difenoquinoidiimina responsable del producto color verde azulado.

por que proviene del ácido Úrico. La Ureasa rompe al sustrato producto de la hidrólisis. el Peróxido (H2O2) los acepta y se desdobla para formar H20. PRÁCTICA Nº 2 CINETICA ENZIMATICA REVELACIÓN DE UREASA: La Ureasa enzima presente en la Harina soya. Reacción (+) para UREASA: Rojo Grosella TUBO 1 2 mL Urea + II gts Fenolftaleína + 0. por ésta hidrólisis se va a formar un producto en forma de gas con pH alcalino (Amoniaco). Harina Soya BM 38 ºC hasta ver Reacción Reacción (+) Rojo Grosella REACCIÓN QUÍMICA: UREASA: En la reacción. desdobla a la Urea formando Amoniaco y CO2 . el gas amoniaco interacciona con la fenolftaleína dando la coloración rojo grosella característico para los álcalis. se libera una molécula de CO 2 (Descarboxilación) y como el Pirogalol pierde sus H+ producto de la oxidación. la Urea producto de su Hidrólisis (por Ureasa y H 20). pH de la Urea es ácido. el cual interacciona con la fenolftaleína produciendo un color rojo grosella.- Además de la oxidación.25 gr. UNIVERSIDAD INCA GARCILASO DE LA VEGA Facultad de Ciencias Farmacéuticas y Bioquímica .

Parduzco Amarillento TUBO 1 Trozos de papa + 2 mL Pirogalol + II gtas H2O2 TUBO 2 Trozos de Rábano + 2 mL Pirogalol + II gtas H2O2 TUBO 3 Trozos de Betarraga + 2 mL Pirogalol + II gtas H2O2 TUBO 4 Trozos de Nabo + 2 mL Pirogalol + II gtas H2O2 TUBO 5 Trozos de Yacón + 2 mL Pirogalol + II gtas H2O2 BM 38 ºC hasta ver Reacción +++ +++ 1 2 +++ +++ 3 4 + TUBO 6 Trozos de Camote Amarillo + 2 mL Pirogalol + II gtas H2O2 TUBO 7 Trozos de Kiwi + 2 mL Pirogalol + II gtas H2O2 TUBO 9 Trozos de Camote Morado + 2 mL Pirogalol + II gtas H2O2 BM 38 ºC hasta ver Reacción (-) +++ ++ 7 8 9 6 TUBO 8 Trozos de Pepino + 2 mL Pirogalol + II gtas H2O2 TUBO 10 Trozos de Tomate + 2 mL Pirogalol + II gtas H2O2 +++ 5 +++ 1 TUBO 11 Trozos de Fresa + 2 mL Pirogalol + II gtas H2O2 TUBO 12 Trozos de Manzana + 2 mL Pirogalol + II gtas H2O2 1 1 UNIVERSIDAD INCA GARCILASO DE LA VEGA Facultad de Ciencias Farmacéuticas y Bioquímica .PRÁCTICA Nº 2 CINETICA ENZIMATICA TEST PIROGALOL: Reacción (+) para PIROGALOL: pp.

Benzidina 2.Las reacciones saldrán (+) si las enzimas se encontraran intactas. para que éste sea metabolizado dentro del organismo. ya que el Agua es menos tóxico que el peróxido en el Organismo. convirtiéndolos constantemente en H20. Pirogalol Con el Pirogalol se puede diferenciar mejor que con benzidina por la proporción de precipitado que hay en cada sistema. es decir que los alimentos no se encuentren procesados ó crudos. - - - - UNIVERSIDAD INCA GARCILASO DE LA VEGA Facultad de Ciencias Farmacéuticas y Bioquímica . Demostramos en el Laboratorio la actividad peroxidasa que presentan los alimentos de nuestra dieta. Las Peroxidasas desdoblan al Peróxido si entra en agua. ya que si estuvieran cocidos las enzimas se encontrarían desnaturalizadas. No todas las leches tienen ALDEHíDOXIDASA. Tenemos 02 Sistemas para diferencias Peroxidasa: 1. ya que el aldehído es muy tóxico dentro del cuerpo.BM 38 ºC hasta ver Reacción (-) + PRÁCTICA Nº 2 CINETICA ENZIMATICA OBSERVACIONES: . En objetivo en ambos sistemas (Pirogalol y Benzidina) es que las Peroxidasas desdoblen peróxidos. CONCLUSIONES: Por Sistema de Aldehido Oxidasa en el organismo desdobla al aldehído convirtiéndolo en Peróxido (el cual produce radicales Libres). En la Revelación de Aldehidoxidasa el Azul de Metileno reemplaza a la actividad de O2.