2014

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UNIVERSIDAD NACIONAL
FEDERICO VILLARREAL
FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES Y
MATEMTICA
PROYECTO
EFECTOS DEL CLORURO DE ALUMINIO EN LA DIVISIN
CELULAR EN RAICES DE CEBOLLA Allium cepa L.

Profesor:
- Pvel Rubio Ramrez
Alumna:
- Maricruz Olano Paitn
- Jossy Salinas Cornejo
- Julissa Salirrosas Rodriguez
- Martn Soto Crdenas

CITOGENTICA PRCTICA - LABORATORIO 16/05/2014

EFECTOS DEL CLORURO DE ALUMINIO EN LA DIVISIN CELULAR EN RAICES
DE CEBOLLA Allium cepa L.
Olano, M.; Salirrosas, J.; Salinas, J. & Soto, M.
RESUMEN
Teniendo en cuenta que la toxicidad por aluminio es el efecto ms importante en los
suelos cidos y constituye el mayor factor limitante del crecimiento y la produccin
vegetal, as como tambin para la salud humana debido al uso que se le ha conferido
como antitranspirante, entre otros, se desea realizar una investigacin que tiene
como objetivo fundamental determinar el efecto del aluminio en los procesos de
divisin celular en las races de cebolla (Allium cepa), as como la relacin de stos
con la inhibicin del crecimiento radical. Se emplearon diferentes concentraciones de
aluminio para imponer la condicin de estrs y los efectos perjudiciales en la divisin
celular de los pices radiculares. Sern sometidos al procesamiento tradicional para
microscopa ptica. Las secciones teidas se observaron al microscopio ptico
(Zeiss) con capturas de cmara digital por lo que las dimensiones celulares y fases
de divisin celular se cuantificaron con un mnimo de 100 clulas por lmina para
conseguir datos representativos. Se determin que el ndice mittico como indicador
del proceso de divisin celular, se pudo apreciar una disminucin progresiva del
mismo con el aumento en los niveles de aluminio para la variedad de cebolla Allium
cepa y tambin se observ que el ndice mittico es inversamente proporcional a la
concentracin de AlCl3.
Palabras clave: aluminio, salud, divisiones celulares, cebolla.
INTRODUCCIN
Cuando un bulbo de cebolla (Alliumsp.) se rehidrata se produce una estimulacin del
crecimiento de las clulas, lo cual permite la elongacin de las races de la planta.
Sin embargo, cuando la hidratacin se lleva a cabo en presencia de sustancias
txicas, la divisin celular de los meristemos radiculares puede inhibirse, ya sea
retardando el proceso de mitosis o destruyendo las clulas. Este tipo de alteraciones
generalmente impide el crecimiento normal de la raz, y por tanto su elongacin
(Fiskesj 1985, 1993, 1997)
Cuando se trabaja con bulbos de dimetro pequeo, las pruebas se realizan en tubos
de ensayo de 10 cm de longitud x 1.5 cm de ancho. En el caso de bulbos de mayor
dimetro pueden utilizarse tubos o recipientes de mayor volumen, dependiendo del
tamao de los mismos. Es importante destacar que la profundidad de los recipientes
debe ser tal que, al trmino de la prueba, la elongacin mxima no alcance el fondo
del recipiente (Fiskesj, 1985).
OBJETIVOS
- Determinar el efecto del cloruro de aluminio (AlCl3) en los procesos de
divisin celular en las races de cebolla (Allium cepa).
- Comparar el efecto del cloruro de aluminio en las diferentes concentraciones
con la inhibicin de la divisin celular y el crecimiento radical.

MATERIALES Y MTODOS
LUGAR
El estudio se realiz en el laboratorio de Citogentica, Departamento de Ciencias
Biolgicas Facultad de Ciencias Naturales y Matemticas, de la Universidad
Nacional Federico Villarreal (UNFV).
MATERIAL
Vasos descartables (para colocar los bulbos), bistur y reglilla para hacer mediciones
en cm o mm, laminas porta y cubreobjetos, reloj o cronometro y microscopio.
REACTIVOS
Se utiliz agua de la llave como medio de crecimiento. El control negativo (agua de
llave) y el agua utilizada para preparar las diluciones de los compuestos o las
muestras debern ser los mismos. El control positivo a utilizar fue Cu (II) y el
compuesto toxico a estudiar AlCl
3
a distintas concentraciones.
ORGANISMOS DE PRUEBA
Para la elaboracin de las pruebas se seleccionaron bulbos de Allium sp. (Cebolla
amarilla) de 1.5 cm de dimetro, secos y sin formacin de hojas o raz. stos fueron
obtenidos del mercado local.
Previo al montaje de la prueba, los bulbos fueron limpiados eliminando la epidermis
seca y removiendo, con un bistur o instrumento punzante, los restos de tejido y
races del rea radicular (No se deben daar las races primordiales). Con el fin de
eliminar los restos de tejido, es conveniente colocar los bulbos en agua destilada por
2 horas y dejar secar. (Ver Figura 1.)

ALMACENAMIENTO DE LOS BULBOS DE CEBOLLA
Se recomienda almacenar los bulbos en un lugar donde se puedan garantizar
condiciones secas y una temperatura entre 10 y 20 C.






Figura 1. Esquema grfico de los pasos a seguir en la prueba con Allium cepa L. 1)
limpieza y pelado de bulbos; 2) ubicacin de bulbos en tubos para exposicin a las
soluciones de ensayo; 3) colocacin de tubos en soporte; 4) agregado de soluciones
en los tubos durante el ensayo; 5) medicin de longitud del haz de races al finalizar
el tiempo de exposicin de los bulbos

























PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA
Control De Calidad En Las Pruebas Con A. Cepa
Un elemento importante en la elaboracin de las pruebas es el proceso de
pelado de los bulbos. Durante este procedimiento debe evitarse el dao del
anillo radicular. Igualmente, se debe trabajar con un alto nmero de rplicas
para controlar la variabilidad de las pruebas. Se recomienda utilizar 3 rplicas
por concentracin. En el caso que exista un bajo desarrollo radicular en ms
de 2 bulbos del control, se considera que el lote de bulbos tiene problemas,
por tanto los resultados no sern vlidos.

Preparacin De Diluciones
Generalmente, se sugiere el empleo de una serie de 3 concentraciones, un
control negativo y 1 positivo; este ltimo contiene el compuesto de referencia
Cu (II)
Para su preparacin se emplea el mtodo de dilucin en forma secuencial
aplicando un factor de 0.2 o 0.3.
Cuando se va a llevar a cabo una evaluacin exploratoria, puede emplearse
una serie de diluciones logartmicas (por ejemplo: 100; 10; 1; 0.1; 0.01), lo
cual permitir establecer el intervalo de concentracin conveniente para la
determinacin de la Concentracin Inhibitoria Media (CI
50
)
Desarrollo De La Prueba
El ensayo se inicia con el llenado de los tubos con cada una de las diluciones
y controles; este llenado debe hacerse hasta el borde del tubo. A continuacin
se colocan los bulbos limpios sobre la boca del tubo, cuidando que la zona
radicular quede inmersa en el lquido (Ver Figura 1)
Los tubos se colocan en una gradilla, la cual se localiza sobre una mesa que
no presente vibraciones y se mantienen a temperatura ambiente (20 C)
durante un perodo de 72 horas. Debe evitarse la iluminacin directa.
Dos veces al da durante el perodo de prueba, se debe reponer el volumen
perdido por evaporacin o absorcin. Para reponer este volumen se utiliza la
muestra o dilucin correspondiente. Se recomienda inclinar el bulbo sin sacar
las races del tubo, adicionando cuidadosamente el volumen con ayuda de
una pipeta Pasteur En la tabla 1.0 y en las figuras 1 y 2 se resumen las
condiciones de prueba.

Figura 2. Ensayo de toxicidad en Allium cepa L.



Tabla 1.0. Condiciones recomendadas para las pruebas de toxicidad con Allium
cepa L.
Tipo de ensayo Esttico
Temperatura 20C, ambiente
Cantidad de Luz Fluorescente, blanco-fro
Iluminacin Indirecta
Recipientes de prueba Tubos de Ensayo de 10 cm x 1.5 cm dimetro
Nmero de rplicas 12
Material biolgico Bulbos de aproximadamente 1.5 cm dimetro
Condicin de bulbos Pelar los bulbos y la base, evitar daar el anillo
radicular.
Agua de dilucin Agua de la llave
Nmero de concentraciones 5
Duracin de la prueba 72 horas
Efecto medido Inhibicin de crecimiento de las races
Control negativo Agua de llave
Control positivo Cobre (II) a partir de una solucin CuSO
4

Resultado final CL
50


RESULTADOS


Fig.01. Observacin microscpica de la divisin celular en una concentracin de AlCl3 a
1x10-3 M. A. Primera repeticin B. Segunda Repeticin C. Tercera repeticin



Fig.02. Observacin microscpica de la divisin celular en una concentracin de AlCl3 a
1x10-6 M. A. Primera repeticin B. Segunda Repeticin C. Tercera repeticin



Fig.03. Observacin microscpica de la divisin celular en una concentracin de AlCl3 a
1x10-9 M. A. Primera repeticin B. Segunda Repeticin C. Tercera repeticin




Fig.04. Observacin microscpica de la divisin celular de una muestra positiva (CuII). A.
Primera repeticin B. Segunda Repeticin C. Tercera repeticin



Fig.05. Observacin microscpica de la divisin celular en una muestra negativa (agua de
llave). A. Primera repeticin B. Segunda Repeticin C. Tercera repeticin
D.C
La divisin celular es un proceso que acompaa al crecimiento en los
tejidos meristemticos. Por este motivo el estudio del efecto del in Al3+
en la divisin celular estuvo confinado a la zona de divisin de la radcula y
se evalu mediante la determinacin del ndice mittico (IM), como
indicador cuantitativo de este proceso celular.
Los clculos del ndice mittico se realizaron a travs de la ecuacin:
IM = M x 100/T, donde:
IM: ndice Mittico,
M: Clulas en mitosis (profase, metafase, anafase y telofase) y
T: Total de clulas contadas (Mitosis + Interfase).

Tabla.01.
Efecto del cloruro de aluminio (AlCl3), a diferentes concentraciones, en la divisin
celular en races de Allium cepa
[
]
AlCl3 AlCl3 AlCl3 Positivo Negativo
1.10-3 M 1.10-6 M 1.10-9 M + -
Interfase 159 137 135 158 118
Profase 30 45 50 25 55
Metafase 7 6 4 3 12
Anafase 3 7 7 6 8
Telofase 1 5 4 8 7
suma 41 63 65 42 82
N
totales
de
celulas
200 200 200 200 200
IM 21 32 33 21 41


DISCUSIONES Y CONCLUSIONES
Se observa que la concentracin 10
-3
de AlCl3 fue la ms perjudicial en las clulas de
Allium cepa, el cual present una disminucin del 40% del ndice mittico, y el cul
se ve que se obtuvo el mismo ndice mittico que el control positivo que se realiz
con xido cprico.
El tratamiento con concentraciones de 10
-3
y 10
-6
presentaron un ndice mittico
parecido.
El tratamiento con concentracin de 10
-3
presento mayor cantidad de clulas en
profase e interfase, lo cual indica que hay un mayor desintegracin del uso mittico.
Se concluye que el ndice mittico es inversamente proporcional a la concentracin
de AlCl3.
La divisin celular no es por s misma un mecanismo de crecimiento, ya
que no conduce necesariamente a un incremento en el tamao; no
obstante es un proceso que acompaa al crecimiento en los tejidos
meristemticos. Por este motivo el estudio del efecto del in Al3+ en la
divisin celular estuvo confinado a la zona de divisin de la radcula y se
evalu mediante la determinacin del ndice mittico (IM), como indicador
cuantitativo de este proceso celular.
Segn los resultados realizados en Efectos Del Aluminio En La Divisin Y El
Alargamiento celular En Plntulas De Arroz (Oryza Sativa L.), en la revista Scielo,
2012; dice que la evaluacin del ndice mittico demostr una afectacin
importante en este proceso, sobretodo en concentraciones parecidas a
nuestro tratamiento, ya que el porciento de clulas en la fase mittica
disminuy ante la presencia del in, este comportamiento sugiri la
posibilidad de que el aluminio pudiera afectar algn elemento en la
interfase que impidiera la entrada de la clula a la fase mittica; lo cual se
corrobora con nuestro resultado.
Por otro lado en un artculo publicado por Teresa Garzn Lopez en Estudio
de la Compartimentacin celular en plantas modelo sometidas a estrs por
aluminio se observa que tambin hay una disminucin en la tasa de
crecimiento en Phaseolus vulgaris como en Zea mays; que tambin est
acorde a nuestro resultado, ya que hay una disminucin del ndice
mittico.
La evaluacin del ndice mittico, como indicador de crecimiento, demostr
una afectacin importante en este proceso, ya que el porciento de clulas
en la fase mittica disminuy ante la presencia del in, sobre todo, en el
tratamiento con la concentracin 10
-3
. Este comportamiento sugiri la
posibilidad de que el aluminio pudiera afectar algn elemento en la
interfase que impidiera la entrada de la clula a la fase mittica.

BIBLIOGRAFA / WEBGRAFA
- Ramrez, P. & Mendoza, A. Ensayo de Toxicidad Aguda con Bulbos de
cebolla Allium cepa L. mediante la evaluacin de la Inhibicin del crecimiento
promedio de races. Ensayos toxicolgicos para la evaluacin de sustancias
qumicas en agua y suelo. La experiencia en Mxico. 1 Edicin-enero 2008.
- Pereira, L.M.; Tabaldi, L.A.; Gonalves, J.F.; Jucoski, G.O.; Pauletto, M.M.;
Weis, S.N.; Nicoloso, F.T.; Borher, D.; Rocha, J.B.T.; Schetinger, M.R.C.
Effect of aluminium on d-aminolevulinic acid dehydratase (ALA-D) and the
development of cucumber (Cucumis sativus).Environ. Exp. Bot. 2006, 57,106
115.
- Schwarzerov, K.; Zlenkova, S.; Nick, P.; Opatrn, Z. Aluminium induced rapid
changes in the microtubular cytoskeleton of tobacco cell lines. Plant and Cell
Physiol. 2002,43, 207-216.
- Liu, Q.; Yang, J.L.; He, L.S.; Li, Y.; Zheng, S.J. Effect of aluminium on cell
wall, plasma membrane, antioxidants and root elongation in triticale. Biologia
Plantarum. 2008, 52, 87-92.
- Wang, J.W.; Kao, C.H. Effect of aluminium on endosperm reserve mobilization
in germinating rice grains. Biologia Plantarum. 2007, 49,

- http://scielo.sld.cu/scielo.php?pid=S025859362012000100005&script=sci_artt
ext
- http://cloruro-de-magnesio.net/blog/cloruro-de-aluminio-cuales-son-sus
beneficios-para-nuestro-organismo/
- http://www.tdx.cat/bitstream/handle/10803/3661/tgl1de1.pdf?sequence=1