BENEMRITA UNIVERSIDAD AUTNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOLOGA

2013

REGLAS DE LABORATORIO Estas reglas han sido por mucho tiempo probadas y recomendadas por los profesionales ms expertos. 1. Usar y conservar limpio su lugar de trabajo. 2. Saber qu es lo que se va a hacer; si tiene dudas detenga su trabajo y orintese sobre el mismo antes de seguir. No se precipite a probar cosas. 3. Tenga su mesa de trabajo en orden. Tenga un lugar definido para cada objeto. Etiquete todas las sustancias, reactivos, y soluciones nunca confe la identificacin de los mismos a sus sentidos. 4. Tenga cuidado de no dejar restos de sustancias txicas o residuos infectocontagiosos en sus manos o guantes. Usar siempre la bata de laboratorio. 5. No arroje slidos dentro del fregadero. Inunde con agua el fregadero cuando vace en l cidos o colorantes. 6. Al pesar reactivos slidos tenga cuidado de evitar contaminacin, proteja los platillos de la balanza con papel. 7. No use una misma pipeta indistintamente, tenga una para cada tipo de reactivo, solucin o colorante, y cuando esto no sea posible, entonces proceda a lavarla antes de que se utilice nuevamente en otro reactivo. 8. Tome amplias precauciones en todo momento, no aspire vapores irritantes y no permita que le pasen cerca d los ojos, para estos casos es necesario utilizar la campana de extraccin, tampoco pipetear directamente reactivos txicos, use una perilla. 9. En colecciones de materiales, recuerde que los cambios en los tejidos ocurren con rapidez despus de haber sido cortados, simplifique lo ms posible el tiempo entre el corte del tejido y su fijacin, esto no debe rebasar unos cuantos minutos. 10. Haga pruebas de coloracin tomando en cuanta los colorantes que desee utilizar, as como el tiempo que se deber emplear para obtener ptimos resultados. En un registro anote cuidadosamente los resultados obtenidos y as evitar trabajar con datos poco confiables. 11. Antes de empezar un trabajo piense en el material que necesitar para su actividad. Nunca empiece nada sin estar seguro de tener lo necesario. 12. Sea paciente con su propio trabajo si obtiene resultados que a su juicio son triviales, pruebe todas las veces necesarias hasta obtener el resultado que desea. 13. Recuerde manejar correctamente los residuos infecto contagiosos con los que trabaj, depositando en el contenedor adecuado los materiales punzo cortantes, y en las bolsas de color (rojo, amarillo o negro), los desechos que correspondan. 14. Finalmente recuerde que los buenos resultados dependen de la limpieza que se tenga, no slo en lo que se refiere al material empleado, sino tambin al lugar donde

se realiza el trabajo; por lo tanto ES RESPONSABILIDAD DE TODOS LOS QUE TRABAJAN EN EL LABORATORIO CONSERVAR LA LIMPIEZA DEL MISMO.

PRCTICA 1. EL MICROSCOPIO. En la actualidad existen dos tipos de microscopa segn la forma en que se amplifica la imagen: la microscopa ptica y la electrnica.

LA MICROSCOPA OPTICA: En esta la imagen es amplificada sucesivamente por una serie de lentes, este sistema permite obtener aumentos de 100 a 1000 dimetros, y en algunos casos hasta 2000, segn el tipo de luz que utilicen y la forma de iluminar el objeto de estudio (o preparacin), los microscopios pticos pueden ser: de campo claro, de campo oscuro, de contraste de fases, de fluorescencia y ultravioleta. El de campo claro es el ms utilizado para el estudio microbiolgico en general.

LA MICROSCOPIA ELECTRNICA: La amplificacin de la imagen se obtiene mediante un haz de electrones (que sustituye a la luz), y un campo magntico (que hace las veces de lentes), produce aumentos de la imagen de 200 mil a 400 mil dimetros.

MICROSCOPIO DE CAMPO CLARO: Explicado de manera muy breve, su fundamento es el siguiente: la luz procedente de la lmpara y del condensador atraviesa la preparacin (en la cual se encuentra el objeto de estudio), y permite que la primera lente (objetivo), forme una imagen aumentada de lo que hay en ella, antes de ser vista, esta lente es nuevamente amplificada por otra lente (ocular). Consta de un sistema ptico que permite iluminar el objeto de estudio y amplificar su imagen y un sistema mecnico que da soporte y movimiento a los componentes pticos.

A continuacin se describen brevemente las funciones de los componentes fundamentales del microscopio, sealando al sistema al que pertenecen, localcelos en l.

SISTEMA PTICO: 1. OCULAR: Es la lente a travs de la cual se observa amplificada la imagen procedente del objetivo. Los oculares se encuentran insertados en los tubos, pues son intercambiables.

2. OBJETIVOS: Son las lentes que amplifican la imagen del objeto de estudio, la mayora de los microscopios tienen 4 objetivos de diferentes aumentos, lupa (5X), seco dbil (10X), seco fuerte (40X) e inmersin (100X). 3. CONDENSADOR: Concentra la luz que recibe de la lmpara, de tal manera que los rayos penetren a la lente del objetivo con el mayor ngulo posible, despus de haber atravesado la preparacin.

SISTEMA MECNICO: 1. REVLVER: es el disco que soporta a los objetivos y se gira para colocar el objetivo requerido bajo el tubo. 2. PLATINA: En ella se coloca la preparacin o portaobjetos para su estudio, est equipada con pinzas para sujetar la preparacin y dos tornillos para su desplazamiento vertical y horizontal, para facilitar la revisin de la preparacin. 3. DIAGRAGMA IRIS: Regula el paso de luz a la preparacin para dar nitidez a la imagen. Se opera mediante una pequea palanca situada entre el condensador y la platina. 4. TORNILLO MACROMTRICO: O de enfoque aproximado. Acerca el objetivo a la preparacin. 5. TORNILLO MICROMTRICO: O de enfoque preciso. Permite movimientos finos que se requieren para el ajuste del enfoque.

SISTEMA ELCTRICO: 1. FUENTE DE LUZ: Emite la luz que despus de pasar por el condensador ilumina la preparacin, se encuentra colocado en la base del microscopio.

DATOS DEL MICROSCOPIO: Adems de saber enfocar el microscopio es necesario conocer el aumento que se tiene que utilizar al realizar una observacin, y las condiciones en las que se puede emplear cada objetivo, los datos se encuentran grabados en cada ocular y objetivo. En el objetivo se indica su coeficiente de aumento individual, que es el producto de los aumentos del ocular y del objetivo, por ejemplo 10X, que significa que su poder de aumento es de 10 veces o 10 dimetros. Apertura numrica (AN), que permite calcular los lmites de aumento tiles, multiplicndola por 500 y por 1000, esto comparable a lo que sucede cuando se observa un mosaico tan lejos que slo se ven colores, pero no figuras delimitadas, o tan cerca que se ve cada piedrecilla, pero se pierde el conjunto.

Longitud mecnica del tubo, expresada en milmetros, y es la distancia que debe haber entre el ocular y el objetivo. Espesor del cubreobjetos, generalmente 0.17mm, pero hay objetivos que pueden utilizarse sin cubreobjetos.

OBJETIVO: Conocer el funcionamiento del microscopio, el enfoque, limpieza y cuidados el mismo, conocer sus componentes y saber la funcin que desempean.

MATERIAL: Microscopios, recortes de impresos son letras muy pequeas, tijeras, portaobjetos, cubreobjetos.

PROCEDIMIENTO: Identificar cada componente del microscopio, sealar su funcin. Observar y anotar las cifras grabadas en el ocular y objetivos. Enfoque de varias preparaciones.

PRCTICA NO. 2 LA CLULA VEGETAL.

INTRODUCCIN. Es de todos conocida la importancia que representa el Reino Vegetal. Los vegetales son casi los nicos seres vivos capacitados para captar energa, la cual, en unin de las sustancias inorgnicas que toman del aire y del suelo la emplean para la elaboracin de sus propios alimentos; la energa as utilizada la obtienen de la luz solar. Los otros organismos como las plantas no verdes y los animales, obtienen esa energa de los alimentos que toman de otros seres vivos, donde sta se encuentra almacenada y en estado potencial. Por lo tanto casi toda la energa contenida en las substancias de que se hallan compuestas los organismos, inclusive el hombre, procede en ltimo trmino de la luz solar captada por los vegetales verdes. Por consiguiente los vegetales verdes son e capital importancia para el mantenimiento de la vida. Los vegetales comprenden desde plantas unicelulares, por ejemplo levaduras y algunas algas verdes, hasta las plantas mayormente diferenciadas. Para apreciar la organizacin de los procesos bioqumicos comprendidos en la produccin de los metabolitos primarios y secundarios de la plantas es necesario tener conocimiento de la delicada estructura de la clula vegetal.

OBJETIVO: Que el alumno conozca algunas estructuras de la clula vegetal y pueda identificarlas.

MATERIAL: Microscopio, bistur, agujas, cuentagotas, portaobjetos, cubreobjetos, caja petri, pipetas pasteur.

MATERIAL BIOLGICO: Trocitos de cebolla, papa, pltano, semillas de legumbres, cereales, tallos y ptalos de flores, cscara de ctricos, lechuga, jitomate, zanahoria, pera, aceituna.

REACTIVOS: Solucin de nitrato de plata al 0.1N. soln de lugol, soln de EDTA 0.1 M, glicerina verde de metilo, cido actico, alcohol de 70, carmn alumnico, vede brillante.

PROCEDIMIENTO: a) Limpie la cebolla de las hojas exteriores secas, separe una de las hojas internas y desprenda la membrana tenue que est adherida por su cara interna cncava. Lleve esta muestra al portaobjetos evitando que se formen burbujas de aire. Squelo al aire, vierta unas gotas de verde de metilo actico por 5 minutos, lave con agua para quitar el exceso de colorante, agregue una gota de glicerina, coloque encima el cubreobjetos y observe al microscopio. Observar las clulas de formas alargadas y bastante grandes. La pared celular celulsica se destaca muy clara teida por el colorante. Los ncleos son grandes y muy visibles, en su interior pueden llegar a observarse granulaciones; son los nucletidos. El citoplasma tiene aspecto bastante claro, en el que se distinguen algunas vacuolas grandes coloreadas dbilmente. b) Tome una hoja externa seca de la cebolla y corte un trocito de 1cm2 , depostelo sobre un portaobjetos que contenga una gota de glicerina y observe al microscopio. Observar capas de clulas secas, con poco contenido celular y las membranas de unas capas de clulas con otras superpuestas. Al enfocar con cuidado observar unas formas polidricas transparentes con aspecto cristalino, si enfoca en distintos planos, podr observar las caras de cristales de oxalato de calcio. Estos son abundantes en los vegetales y tienen formas variadas, agujas, prismas alargados y puntiagudos, etc. En la cebolla presentan aspecto de prisma. c) Para hacer evidentes los cloroplastos y poderlos observar fcilmente, podemos usar una sustancia que puede ser reducida por ellos, (capacidad reductora de los plstidos) como el nitrato de plata. Extender nuevamente un pedacito de membrana de la cebolla en un portaobjetos evitando que se formen burbujas, agregar una gota de solucin de nitrato de plata 0.1N y observe a 40X. Espere el efecto de ennegrecimiento de los cloroplastos. d) Los amiloplastos son importantes porque representan la sustancia de reserva (almidn), de la clula vegetal, se puede encontrar en mayor proporcin en los cereales y semillas de legumbres, as como algunos tubrculos o frutos, para identificarlos parta y raspe el cereal, leguminosa o tubrculo con el bistur, deposite el producto obtenido en el portaobjetos. Agregue una gota de agua y una de lugol, coloque el cubreobjetos y observe. Los granos de almidn se tien de color violeta intenso debido al lugol que contiene yodo. e) Los cromoplastos contienen substancias del tipo de los carotenos y pueden observarse de la siguiente forma: Coloque una pequea muestra de jitomate en un portaobjetos sin agregar agua, coloque el cubreobjetos y comprima suavemente, observe al microscopio. La pulpa del jitomate muestra por lo general las clulas bastante sueltas unas de otras, se percibe en el citoplasma una serie de grnulos rojizos- anaranjados que son los cromoplastos. Tambin puede obtener un corte fino de zanahoria, depostelo en un

portaobjetos, agregue una gota de agua, colquele el cubreobjetos y observe al microscopio. En las clulas de la zanahoria se observan una multitud de corpsculos irregulares de color rojizo dbil hasta anaranjado. f) Los tallos o pecolos de las plantas tienen una resistencia mecnica relativa y sirven de sostn, debido a que las clulas tienen gran cantidad de celulosa que las engruesa. A este tejido se le da el nombre de colnquima y est formado por clulas alargadas. Corte secciones transversales de tallo o pecolos de malva lo ms finamente posible, fije con alcohol de 70 durante dos minutos, lave con agua y tia con carmn alumnico por 15 minutos, lave abundantemente con agua y monte el corte en un portaobjetos con una gota de glicerina, cubra y observe. Con seco dbil observar una especie de granulado de puntos rojos, cambie a seco fuerte y despus a inmersin. g) El mesocarpio del fruto de la pera y la aceituna representan el esclernquima. Este tejido est formado por grupos o nidos de clulas impregnadas de lignina a esto se debe la dureza de los frutos cuando no estn maduros. La Lignina se tie con verde brillante. Perta la pera y la aceituna y obtenga un raspado de cada uno por separado, colquelo en un portaobjetos y agregue una gota de verde brillante, dejarlo actuar por un minuto y lavar cuidadosamente con agua, seque el exceso con papel filtro y ponga una gota de glicerina, cubra y observe al microscopio. h) La cscara o pericarpio de los frutos ctricos (naranja, mandarina, limn, toronja, etc) poseen cavidades hechas por las mismas clulas y estn llenas del aceite esencial al que deben su aroma. Haga cortes delgados de la cscara de los frutos, coloque la muestra en un portaobjetos, agregue una gota de agua, cbralo y observe con poco aumento. i) Los tallos de lechuga o acelga tienen vasos llenos de ltex que los hace menos transparentes. Haga cortes longitudinales del tallo de la lechuga o acelga, colquelos en el portaobjetos con una gota de agua, se observan ramificaciones irregulares que tienen color ms oscuro que el resto de las clulas que corresponden a los vasos de ltex.

PRCTICA NO. 3. LA CLULA FIJADA. INTRODUCCIN. Las principales funciones que tienen los lquidos fijadores utilizados, son las de matar y fijar los tejidos, o sea detener el proceso de vida sin que se distorsionen dichos tejidos, adems de hacerlos lo suficientemente firmes para el manejo. Una de las operaciones ms crticas en el procesamiento de tejidos es la muerte del citoplasma. Los lquidos fijadores pueden agruparse de acuerdo con las sustancias que las componen. Algunas frmulas son estables y pueden conservarse para utilizarse al instante; otras se hacen como soluciones stock. El lapso de tiempo necesario para la muerte y el endurecimiento del material vara y se determina por el carcter del lquido usado, el volumen de la pieza individual y la resistencia del material a la penetracin el reactivo. Por otro lado la seleccin de un colorante para el estudio de las clulas por medio del microscopio, depende de distintos factores, que incluyen la naturaleza del material a estudiar, el tipo de fijador utilizado y la reactividad qumica del colorante. La tincin de las bacterias por el mtodo de Gram, permite clasificar a las bacterias selectivamente en dos grandes grupos: Gram positivas y Gram negativas. Las primeras retienen el colorante violeta de genciana sin decolorarse por los reactivos diferenciadores que se aplican en la tcnica de tincin, mientras que las Gram negativas pierden el violeta de genciana cuando se las somete a diferenciacin, pero retienen el colorante safranina que se aplica al final de la tcnica de tincin. Las bacterias Gram positivas aparecen en visin microscpica teidas de morado intenso por el violeta de genciana. Las bacterias Gram negativas se tien de sonrosado dbil por la safranina.

OBJETIVO: Que el alumno aprenda la tincin de Gram para las bacterias, como introduccin a la identificacin morfolgica y afinidad tintorial de ciertos organismos procariotes fijados.

MATERIAL BIOLGICO: Ndulos de las races de leguminosas, alfalfa, trbol, soya, etc. Vino agriado, yogurt, infusin vegetal. REACTIVOS: Alcohol- cloroformo, alcohol 96, violeta de genciana, lugol, safranina, aceite de inmersin.

PROCEDIMIENTO: 1. Se lavan los ndulos de las races de leguminosas, se parten y colocan sobre portaobjetos, se agrega una gota de agua, se quitan los residuos y se fijan a la llama del mechero, se colocan en el puente de tincin y se tien. 2. Con una asa se toma una pequea porcin de la superficie del vino agriado y se extiende sobre un porta con una gota de agua, se fija a la llama del mechero y se tie. 3. Con un asa se toma una pequea porcin de yogurt, se disuelve en una pequea gota de agua y se extiende sobre un porta, se lava, se agregan unas gotas de alcohol cloroformo, se deja secar y se tie. 4. se toma una pequea porcin de la pelcula fina que aparece en la superficie de la infusin, haciendo un frote sobre un porta, se seca a la llama del mechero y se tie.

TCNICA DE GRAM. 1. El paso del portaobjetos sobre la llama del mechero, debe ser rpido, por lo general basta con hacerlo 3 0 4 veces. La temperatura del portaobjetos debe ser la que soporta el dorso de la mano sin quemarla. 2. Coloque unas gotas de colorante violeta de genciana, cubriendo la extensin; durante 2 minutos. 3. Lave con agua destilada para arrastrar el exceso de colorante. 4. Ponga solucin de lugol durante 1 minuto. 5. Lave nuevamente con agua destilada. 6. Decolore con unas gotas de alcohol del 96 de 30 segundos a un minuto, para arrastrar el colorante que quede libre. 7. Lave con agua destilada. 8. Agregue unas gotas de safranina por 1 minuto. 9. Lave con agua destilada. 10. Seque al aire. 11. Observe al microscopio. 12. Reporte sus resultados.

PRCTICA NO 4. PERMEABILIDAD CELULAR. INTRODUCCIN: Una membrana celular es una capa de macromolculas que encierra todas las clulas y muchos organelos, se denomina membrana plasmtica cuando forma el lmite exterior de una clula, Todas las membranas, sin considerar el tipo de organismo o clula, se construyen del mismo modo a partir del mismo modo, a partir de dos tipos de macromolculas: los fosfolpidos que proveen la estructura; y las protenas, que proveen las funciones especficas de la membrana. Las membranas animales tambin contienen el colesterol, que estabiliza la capa de fosfolpidos. La estructura nica de una membrana celular se describe frecuentemente como un mosaico fluido. Es un fluido porque antes que un slido, el fosfolpido es un lquido, es un mosaico a causa de la disposicin de diversas protenas dentro de la capa de fosfolpidos. Una membrana celular es una barrera selectivamente permeable: algunos materiales cruzan de manera libre y otros cruzan slo en ciertos momentos. El paso es controlado por la misma bicapa de fosfolpidos, y por el particular ordenamiento de las protenas en ella empotradas. La estructura fosfolipdica es impermeable a muchos materiales. Slo materiales muy pequeos o sin ninguna carga elctrica pueden penetrar esta barrera. Los materiales cruzan las membranas celulares de cuatro maneras: difusin simple, difusin facilitada, transporte activo y transporte de volumen, y se resumen en la siguiente tabla:

TIPO DE TIPOS DE DIRECCIN TRANSPORTE MATERIALES Difusin simple Difusin facilitada

REQUISITOS

Esteroides, grasa, O2, Altas a bajas Ninguno CO2, H2O concentraciones Glucosa, Iones Altas a bajas Protena de canal, concentraciones protena receptora

Transporte activo Transporte partculas suspensin

Aminocidos

Bajas a altas Protenas de concentraciones transporte, energa

de Hormonas no Dentro o fuera de la Energa, algunas en esteroideas, enzimas, clula segn veces protenas moco, microbios, necesidad receptoras. neutronsmisores, residuos

OSMOSIS: La difusin de agua a travs de una membrana celular tiene un nombre especial, smosis. Las molculas de agua son suficientemente pequeas para difundirse mediante orificios en la estructura de fosfolpidos, mientras que muchas molculas e iones no lo son. El agua se difunde desde el lado de la membrana donde se concentra ms (es decir, donde hay menos materiales disueltos) al lado donde es menos concentrada (es decir, donde hay ms materiales disueltos). La direccin de la smosis es muy importante para la clula. El hecho de que el agua entre o salga de una clula depende de las concentraciones relativas de materiales disueltos dentro y fuera de la clula. Tres trminos describen estas concentraciones relativas: isotnico, (mismo), hipertnico, (por encima de), e hipotnico (por debajo de). Estas concentraciones y sus efectos de definen en la siguiente tabla:

TRMINO

CONCENTRACIN CONCENTRACIN DIRECCIN DE MATERIALES DE AGUA NETA DE FLUJO DISUELTOS DE AGUA Igualdad dentro fuera de la clula y Igualdad dentro fuera de la clula y Ninguna

Ambiente isotnico Ambiente Hipertnico Ambiente Hipotnico

Ms alta fuera de la Ms baja fuera de la Fuera de la clula clula clula Ms baja fuera de la Ms alta fuera de la Dentro de la clula clula clula

OBJETIVO: Que el alumno compruebe la funcin de permeabilidad de la membrana citoplasmtica, y su funcin de separar dos medios, el intracelular y el extracelular, tanto en clulas animales como en clulas vegetales, as como observar los efectos que sobre la clula ejercen sustancias diferentes al medio intracelular.

MATERIAL: Microscopio, tubos de ensaye, lancetas, portaobjetos, cubreobjetos, bistur, pipetas pasteur. MATERIAL BIOLGICO: Sangre (para observar eritrocitos), ptalos de flores, de preferencia de color fuerte, para que las vacuolas de antocianinas sean ms visibles con el efecto de las soluciones. REACTIVOS: Anticoagulante, solucin salina isotnica, hipertnica e hipotnica.

PROCEDIMIENTO: 1. Obtenga unas gotas de sangre, por puncin en la yema del dedo, y depostelas en un tubo con anticoagulante. 2. Marque sus tubos como 1, 2, y 3 y coloque unas gotas de solucin isotnica en el primer tubo, hipotnica en el segundo e hipertnica en el tercero. 3. Agite suavemente (para no romper los eritrocitos) y mezcle. Tome una gota y depostela en un portaobjetos, cbralo y observe a seco fuerte, anote sus resultados. 4. Tome un ptalo y haga una incisin con el bistur hasta la mitad del grosor del ptalo y desprenda la capa aterciopelada. 5. Coloque en portaobjetos un fragmento de esta capa, 3 cortes en cada uno y agregue a l primero solucin isotnica, al segundo solucin hipertnica y al tercero, solucin hipotnica. Observe a seco fuerte y anote sus resultados.

PRCTICA NO. 5. OBSERVACIN DE DIVISIN CELULAR.

INTRODUCCIN: Toda clula procede de otra clula preexistente. Las clulas vegetales crecen debido sobre todo a la toma de agua. Cuando alcanzan un tamao determinado se dividen, formando cada una de ellas dos clulas hijas idnticas. Las diversas partes de la clula a menudo estn distribuidas asimtricamente y han de repartirse entre las dos clulas hijas de tal modo que las nuevas clulas sean copias exactas de la clula original. En los eucariontes, el material hereditario forma parte de cromosomas complejos, la reparticin equitativa de este material requiere por tanto un mecanismo ms complicado, mediante el cual los cromosomas se dupliquen, se separen y se distribuyan de una manera precisa entre dos clulas hijas, este mecanismo es la MITOSIS. La mitosis o divisin celular, apareci evolutivamente como una solucin al problema de asegurar una reparticin equitativa del material nuclear entre las clulas hijas, en los organismos eucariticos. Es un proceso continuo que convencionalmente se divide en cuatro fases principales, profase, metafase, anafase y telofase. En el tiempo antes y despus de la mitosis la clula est en interfase. En la mitosis los cromosomas aparecen como largas fibras estiradas que se van acortando a medida que avanza su enrollamiento y que se dirigen hacia el centro de la clula cuando se han contrado completamente. Entonces se escinden longitudinalmente en las dos mitades idnticas, las cuales son llevadas a los polos opuestos de la clula mediante una serie de microtbulos. En estos dos grupos equivalentes genticamente, los cromosomas se desenrollan y se establecen en los ncleos de las clulas hijas. Una planta conserva la mayora de las clulas que se forman durante su vida y va produciendo otras nuevas en regiones en activa divisin celular, localizadas en los pices de las ramas y las races. En los pices se localizan reas especializadas de divisin celular activa, llamadas meristemas (del griego meristos = dividido). En el extremo de cada tallo hay un meristema apical que produce un flujo continuo de clulas hijas a medida que el tallo se alarga ms y ms. Este alargamiento es el resultado no solo de la divisin celular, sino tambin de que las clulas nuevas absorben agua y aumentan de tamao. Luego las clulas se diferencian en formas adaptadas a la funcin que desempean en la planta adulta. El meristema apical de la raz produce clulas hijas hacia delante y hacia atrs. Hacia delante originan la pilorriza, una cubierta dura de clulas que se desgasta continuamente a medida que la raz avanza a travs del suelo y que es regenerada desde atrs por divisin celular por el sistema apical.

OBJETIVO: Que el alumno observe en clulas vegetales las diferentes etapas de la mitosis, as como la morfologa de los cromosomas.

MATERIAL: Microscopio, portaobjetos, cubreobjetos, bistur, caja de petri. MATERIAL BIOLGICO: Un bulbo de cebolla. REACTIVOS: HCl 1N, cido actico al 45%, acetorcena, papel absorbente.

PROCEDIMIENTO: 1. Con una semana de anticipacin a la prctica, coloque un bulbo de cebolla en un recipiente con agua, para estimular el crecimiento de las races. El tamao ptimo para observar mitosis es de 2 a 4 cm. 2. elija una de las races, puede elegir de diferentes tamaos parea comparar, crtela por la base con un bistur y colquela sobre un portaobjetos. 3. Sujtela por la base y con el bistur elimine la cofia, (cubierta protectora, cuyas clulas no estn en divisin). 4. Inmediatamente por debajo de la cofia se encuentran las clulas meristmicas, corte con el bistur una porcin de 2 mm de la parte apical, colquela sobre el portaobjetos y ste sobre la caja petri. 5. Cubra la porcin cortada con 2 a 3 gotas de HCl 1N, dejndolo actuar de 8 a 10 minutos, (para hidrolizar). 6. Elimine el exceso con papel absorbente. 7. Cubra el corte con 2 a 3 gotas de la solucin de acetorcena para teir, durante 15 a 20 minutos (este colorante es algo txico y puede irritar la piel). 8. Lave el excedente de la acetorcena con el cido actico al 45%. 9. Con una gota de cido actico al 45% coloque un cubreobjetos sobre el corte, presione firmemente sobre el cubreobjetos sin moverlo para lograr el aplastamiento. 10. Examine al microscopio con seco dbil, seco fuerte e inmersin para observar las clulas meristmicas en divisin.

PRCTICA NO. 6 MEDICIONES AL MICROSCOPIO.

INTRODUCCIN: La medicin de los objetos microscpicos es relativamente sencilla, aunque implica el empleo de los siguientes medios auxiliares o accesorios: micrmetro objetivo y micrmetro ocular. El micrmetro objetivo es un cristal de 76 X 25.5 mm con una escala grabada sobre l. La escala es por lo general de 1 a 0.1 mm de longitud, y est dividida en 0.1 a 0.01 partes de mm. El micrmetro ocular puede ser una escala lineal de 10 mm dividida en 1 y 0.1 mm. El valor de una divisin ocular se determina para cada combinacin ptica a emplear anotando en cada caso el objetivo, ocular y longitud del microscopio.

PROCEDIMIENTO: 1. Se coloca el micrmetro ocular en lugar del ocular del microscopio. 2. Se enfoca la lente superior de modo que el ojo perciba con nitidez la divisin de la escala del ocular. 3. Se coloca el micrmetro objetivo sobre la platina y se enfoca la divisin, ahora aparecen ntidas ambas escalas, y girando el ocular se disponen exactamente paralelas. 4. Se comprueba que nmero de trazos en el micrmetro ocular corresponden a qu longitud en el micrmetro objetivo y con ello se determina la longitud que equivale a un trazo de divisin en el micrmetro ocular. Esta relacin se define como coeficiente micromtrico C.M y matemticamente se expresa como sigue.

C.M= L x 10 l En donde L= al nmero de divisiones del micrmetro objetivo l = al nmero de divisiones del micrmetro ocular.

5. El valor micromtrico encontrado de esta manera vale nicamente para el objetivo con el cual se ha efectuado la medicin. En lo sucesivo, basta multiplicar por el valor micromtrico el nmero de trazos el ocular de medicin que cubren una distancia en el objeto, para calcular sta en el plano del objeto.

OBJETIVO: Que el alumno aprenda a tomar medidas microscpicas y conocer su aplicacin en el laboratorio. MATERIAL: Microscopio, micrmetro objetivo, micrmetro ocular, preparaciones biolgicas. DESARROLLO: Obtenga el C.M para el objetivo de menor aumento (10X). Obtenga el C.M para el objetivo de mayor aumento (40X). Obtenga el C.M para el objetivo de inmersin (100X). Determine la medida de la preparacin biolgica que le proporcione su profesor, segn sus instrucciones. REPORTE: Informar los resultados obtenidos. a) b) c) d)

PRCTICA NO. 7. VARIABILIDAD DE LOS SERES VIVOS.

INTRODUCCIN: Hay muchas diferencias entre los seres vivos, tus compaeros de clase tienen diferentes edades, peso, altura, color del cabello, de ojos, etc. Es decir hay variabilidad entre ustedes. Igual ocurre en plantas y animales de la misma especie. Estas propiedades que cambian de unos a otros, son caractersticas de los seres vivos. La variabilidad de los seres vivos es un efecto de los genes, del ambiente o una combinacin de ambos factores. Las variaciones causadas en los seres vivos se pueden transmitir a la descendencia; en cambio, las que origina el ambiente no.

DESARROLLO: Vas a realizar una investigacin para medir la variacin humana. Para ello utilizars como muestra a todos tus compaeros de laboratorio, Elige la caracterstica que quieres investigar. Algunas sugerencias pueden ser: el peso, el dimetro del cuello, la estatura, la longitud del pie, de la mano, la forma del lbulo de la oreja, la lengua en rollo, los grupos sanguneos, enfermedades crnicas que padezcan los padres, el uso de lentes, etc. Para que el estudio sea cientfico debes hacer las mediciones de modo sistemtico. Escribe tus anotaciones en una columna. Haz categoras (grupos) de tus mediciones. El rango de las categoras depender de lo que hayas medido. Construye un histograma poniendo las categoras en el eje de las abscisas y el nmero de cada categora en el eje de las ordenadas. Describe la forma de tu grfica y comprala con la de tus compaeros (se har en sesin plenaria), Son iguales o hay diferencias?, En qu caracteres son iguales las grficas y en cuales son diferentes? Reflexiona sobre las posibles causas de la variacin de los caracteres que has medido. Pueden haber sido producidos por accin de los genes? , o bien. por efecto de la dieta o del ejercicio fsico, o por otras causas?, crees que los descendientes la podrn heredar? Explica las respuestas. A este tipo de diferencias entre los individuos de la misma especie se le denomina variabilidad intraespecfica. Al analizar las diferentes grficas construidas, vemos que estas se pueden agrupar en dos tipos distintos: las que expresan variaciones de tipo continuo como la altura y el

peso, y las que marcan caracteres de tipo discontinuo, como la lengua en rollo. Las variaciones continuas son controladas por genes y pueden estar influenciadas por factores ambientales, la grfica representa una distribucin normal. En las variaciones discontinuas no existe influencia del ambiente y la grfica no muestra una distribucin normal. Intenta explicar si las caractersticas de tu investigacin es continua o discontinua. Razona la explicacin. Anota las investigaciones que han hecho tus compaeros y elabora un cuadro donde se seale en cada caso que tipo de variabilidad existe y si se trata de influencia gentica, ambiental o combinada.

CRITERIOS DE EVALUACIN: La acreditacin del Laboratorio de Biologa te da derecho a la evaluacin de la Teora. Asistencia 100%. (dos retardos equivalen a una falta). Presentacin del seminario correspondiente a la prctica que por equipo les toca exponer. Presentacin de un pequeo proyecto de investigacin, (Prctica No. 8)