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El significado del microscopio significa del griego micropequeo y ecopio observar Es un instrumento que permite observar objetos pequeos

s a simple vista

El microscopio se invento, hacia 1610, por Galileo, segn los italianos, o por Jansen, en opinin de los holandeses. La palabra microscopio fue utilizada por primera vez por los componentes de la "Accademia dei Lincei" una sociedad cientfica a la que perteneca Galileo y que publicaron un trabajo sobre la observacin microscpica del aspecto de una abeja.

Sin embargo las primeras publicaciones importantes en el campo de la microscopia aparecen en 1660 y 1665 cuando Malpighi prueba la teora de Harvey sobre la circulacin sangunea al observar al microscopio los capilares sanguneos y Hooke publica su obra Micrographia.

A mediados del siglo XVII un comerciante holands, Leenwenhoek, utilizando microscopios simples de fabricacin propia describi por primera vez protozoos, bacterias, espermatozoides y glbulos rojos.

Durante el siglo XVIII el microscopio sufri diversos adelantos mecnicos que aumentaron su estabilidad y su facilidad de uso aunque no se desarrollaron mejoras pticas. Las mejoras mas importantes de la ptica surgieron en 1877 cuando Abbe publica su teora del microscopio y por encargo de Carl Zeiss mejora la microscopa de inmersin sustituyendo el agua por aceite de cedro lo que permite obtener aumentos de 2000A principios de los aos 30 se habia alcanzado el limite terico para los microscopios pticos no consiguiendo estos, aumentos superiores a 500X o 1000X sin embargo existia un deseo cientfico de observar los detalles de estructuras celulares ( ncleo, mitochondria... etc.).

El microscopio electrnico de transmisin (T.E.M.) fu el primer tipo de microscopio electrnico desarrollado este utiliza un haz de electrones en lugar de luz para enfocar la muestra consiguiendo aumentos de 100.000 X. Fue desarrollada por Max Knoll y Ernst Ruska en Alemania en 1931. Posteriormente, en 1942 se desarrolla el microscopio electrnico de barrido (SEM).

Qumica

Estudio de Cristales.

Fsica

Investigacin en las propiedades fsicas de los materiales. Anlisis de la composicin mineralgica de algunas rocas.

Geologa

Biologa celular

Estudio de estructuras microscpicas de la materia viva.

Lab. de Histologa y Anatoma patolgica

Diagnstico de certeza de cncer, lpidos, protenas, depsitos seos, etc.

Microbiologa

Observar estructuras de virus.

Con este tipo de microscopio se deben utilizar mtodos de tincin porque el campo claro de este no produce un nivel til de contraste

Permite observar clulas sin colorear y resulta

especialmente til para clulas vivas. Este aprovecha las pequeas diferencias de los ndices de refraccin en las distintas partes de una clula y en distintas partes de una muestra de tejido.

el microscopio de campo oscuro est equipado con

un condensador especial que ilumina la muestra con luz fuerte indirecta. Es til para observar autorradiografas, cristales en la orina y para detectar espiroquetas en particular el Treponema pallidum microorganismo causante de la sfilis.

Se usa para revelar molculas fluorescentes

naturales, como la vitamina A y algunos neurotransmisores. Al ser escasas las molculas autofluorecentes su aplicacin ms difundida es para revelar una fluorescencia agregada, como en la deteccin de antgenos o anticuerpos en procedimientos de coloracin inmunocitoqumica.

La imagen en el microscopio de luz ultravioleta depende de la

absorcin de esa luz por las molculas de la muestra. Este sirve para detectar cidos nucleicos, protenas que contienen determinados aminocidos. Mediante longitudes de ondas especficas para la iluminacin se puede obtener mediciones espectrofotomtricas para cuantificar el DNA y el RNA de cada

clula.

Se usa para estudiar la estructura de los

materiales biolgicos. Emplea un sistema de iluminacin con rayo lser Este mtodo tiene la ventaja de que se pueden tomar imgenes de la muestra en cortes muy finos.

Este microscopio contiene un filtro polarizante llamado

polarizador entre la fuente de luz y la muestra y se ubica un segundo polarizador, denominado analizador entre el objetivo y el observador. Este tipo de microscopio se usa para poder identificar sustancias cristalinas (minerales) o fibrosas (como el citoesqueleto), sustancia amiloide, asbesto,colgeno, cristales de uratos, queratina, slice, polen, etc.

Dentro de los microscopios electrnico tenemos el de barrido y el de transmisin. La ventaja de los microscopios electrnicos frente a los pticos esta en que aumenta la resolucin.

Lo caracterstico de este microscopio es el uso de una muestra ultrafina y

que la imagen se obtenga de los electrones que atraviesan la muestra. Los microscopios electrnicos de transmisin pueden aumentar un objeto hasta un milln de veces. La principal funcin del microscopio electrnico de transmisin es estudio de los metales y minerales y el estudio de las clulas a nivel molecular. A su vez se utiliza en la microbiologa, para observar la estructura de los virus.

Son ampliamente utilizados en la biologa celular. Aunque permite

una menor capacidad de aumento que el microscopio electrnico de transmisin, ste permite apreciar con mayor facilidad texturas y objetos en tres dimensiones que hayan sido pulverizados metlicamente antes de su observacin. Por esta razn solamente pueden ser observados organismos muertos, y no se puede ir ms all de la textura externa que se quiera ver. Los microscopios electrnicos slo pueden ofrecer imgenes en blanco y negro puesto que no utilizan la luz.

Es un microscopio ptico que tiene ms de una lente objetivo. Se utilizan especialmente para examinar objetos transparentes, o cortados en lminas tan finas que se transparentan. Adems se emplea para aumentar o ampliar las imgenes de objetos y organismos no visibles a simple vista. El microscopio ptico comn est conformado por tres sistemas: El sistema mecnico El sistema de iluminacin El sistema ptico

Fue ideado por Leeuwenhoek. Un microscopio simple es aquel que

utiliza una sola lente de aumento. El ejemplo ms clsico es la lupa.

Sistema mecnico.

Microscopio

Sistema ptico.

Sistema de iluminacin

Est

constituido por una serie de piezas en las que van instaladas las lentes que permiten el movimiento para el enfoque.

BRAZO.- Es la parte de donde se debe sujetar, las pinzas el carro el tubo del microscopio y el revolver. Adems sirve para trasladar el microscopio de un lugar a otro.
BASE O PIE.- Es una pieza que proporciona estabilidad y sirve de soporte a todas las partes del microscopio.

PLATINA.- Es una pieza metlica, cuadrada, que tiene en su centro una abertura circular por la que pasar la luz del sistema de iluminacin. Aqu se coloca el portaobjetos con la muestra a observar PINZAS DE SUJECION.- Parte mecnica que sirve para sujetar la preparacin.

TORNILLO

MACROMETRICO: Permite hacer un movimiento rpido hacia arriba o hacia abajo del tubo o la platina, y se utiliza para localizar la imagen a observar. MICROMETRICO.- Parte mecnica de movimiento giratorio que nos permite colocar en posicin cualquiera de los objetivos que se encuentran en l. Parte mecnica que proporciona sostn a los oculares y objetivos. Permite que el movimiento de los tornillos macro y micromtrico sea de mayor o de menor amplitud.

TORNILLO

TUBO.-

CREMALLERA.-

El

revlver: es una pieza giratoria provista de orificios en los que se enroscan los objetivos. Al girar el revlver, los objetivos pasan por el eje del tubo y se colocan en posicin de trabajo, lo que se nota por el ruido de un pin que lo fija. Carro mvil: es un dispositivo que consta de dos tornillos y est colocado sobre la platina, que permite deslizar la preparacin con movimiento ortogonal de adelante hacia atrs y de derecha a izquierda

Comprende

un conjunto de lentes dispuestas de tal manera que produce el aumento de las imgenes que se observan a travs de ellas

OCULAR.-

Se localiza en la parte superior del tubo ocular y son las lentes que Capta y amplia la imagen formada en los objetivos. OBJETIVOS: Se encuentran incrustados en el revolver Son unos pequeos cilindros colocados en el revolver que proporciona el poder de resolucin del microscopio y determinan la cantidad total de aumento.

1.- La lupa (4 X) que sirve para hacer observaciones a bajo aumento. 2.- El objetivo seco dbil (10 X) que se utiliza para localizar la imagen que se va a observar.

Objetivos

3.- El objetivo seco fuerte (40 X) aumenta la imagen anterior, para poder observar se necesita primero acercar el objetivo al portaobjetos y posteriormente, enfocar el objetivo hasta que aparezca la imagen. 4.- El objetivo de inmersin (100 X) es un lente especial para observar imgenes tan pequeas como las bacterias. Y se requiere del aceite de inmersin para lograr una buena observacin.

La

parte ptica del microscopio es la que determina el nmero de aumentos que presenta la imagen observada . El aumento total que permite un microscopio ptico se calcula multiplicando la magnificacin que producen el objetivo por la que producen los oculares.

Num. del objetivo X nm. de ocular = nm. de aumentos

Comprende

las partes del microscopio que reflejan, transmiten y regulan la cantidad de luz necesaria para efectuar la observacin a travs del microscopio.

est formado por un sistema de lentes, cuya finalidad es concentrar los rayos luminosos sobre el plano de la preparacin, formando un cono de luz con el mismo ngulo que el del campo del objetivo DIAFRAGMA: Existe un diafragma en el condensador, que elimina el exceso de luminosidad para tener una buena iluminacin del objeto a observar
CONDENSADOR. FUENTE

DE LUZ.- Para observar la muestra microscpica es necesario que sta se ilumine con algn tipo de luz y nuestros microscopios cuentan con un foco que da energa elctrica que dirige sus rayos luminosos hacia el sistema condensador.

Al

ser el microscopio un aparato de precisin y, por lo tanto, delicado, es muy conveniente asegurar un buen funcionamiento atendiendo siempre a las siguientes normas:

1.

Para transportar el microscopio deben utilizarse siempre las dos manos, sujetndolo por el brazo con una mano y por el pie con la palma de la otra. Una vez colocado el microscopio en su sitio, no debe moverse hasta que finalice la prctica. Mover siempre suave y lentamente cualquier elemento del microscopio. Nunca poner los dedos en las lentes del ocular ni del objetivo

2.

3.

4.

5.

Al enfocar, sobre todo con los objetivos de mayor aumento, hay que evitar que el extremo del objetivo choque con la preparacin. Para ello acercaremos el objetivo a la preparacin mirando lateralmente y luego, mirando ya a travs del ocular, enfocamos alejando el objetivo.

El

microscopio debe estar protegido del polvo, humedad y otros agentes que pudieran daarlo. Mientras no est en uso debe guardarse en un estuche o gabinete, o bien cubrirlo con una bolsa plstica o campana de vidrio. Las partes mecnicas deben limpiarse con un pao suave; en algunos casos, ste se puede humedecer con xileno para disolver ciertas manchas de grasa, aceite de cedro, parafina, etc. Que hayan cado sobre ciertas partes

La

limpieza de las partes pticas requiere precauciones especiales. Para ello debe emplearse papel de ptico que expiden las casas distribuidoras de material de laboratorio fotografa o utilizar un pao de algodn. Para el polvillo se puede utilizar un perilla con pincel de pelo de camello. Nunca deben tocarse las lentes del ocular, objetivo y condensador con los dedos; las huellas digitales perjudican la visibilidad, y cuando se secan resulta trabajoso eliminarlas. Para una buena limpieza de las lentes puede humedecerse el papel de ptica, envolviendo un palillo con algo de punta con una solucin de ter/alcohol

Para guardarlo se acostumbra colocar el objetivo de menor aumento sobre la platina y bajado hasta el tope; el condensador debe estar en su posicin ms baja, para evitar que tropiece con alguno de los objetivos
en lugares secos, para evitar que la humedad favorezca la formacin de hongos. Ciertos cidos y otras sustancias qumicas que producen emanaciones fuertes, deben mantenerse alejados del microscopio

Gurdese

Se utiliza para el estudio de protozoos y hongos principalmente ya que solo sirve para observar objetos muy finos. Se utiliza para la investigacin de los caracteres de movilidad bacteriana y morfolgica, agrupacin y estructura de resistencias de parsitos.

*Nota:

Requiere mxima limpieza

1.-

PREPARACIONES HUMEDAS: Para observar organismos acuticos (algas, larvas). Se pone una gota de liquido que los contiene sobre el portaobjetos y el cubreobjetos es puesto con cuidado para evitar burbujas de aire.

Se

utilizan portaobjetos excavados. Se puede observar el movimiento de los microorganismos.

Nota: *Puede modificar la realidad de lo que se esta viendo

Se

aade nigrosina (tinta china) Se pueden distinguir bacterias incoloras Primordial para el estudio de capsulas y flagelos.

1.-

lquidos fisiolgicos: conservan las condiciones mas parecidas a las que se desenvuelve el microorganismo. 2.- lquidos de adiccin: aclara los objetos de estudio poco transparentes (insectos, pelos). * lactoferol *clorofenol

Permite

poner de relieve detalles sin matar al organismo. No tien Es una sustancia toxica, as que se debe de usar en bajas concentraciones 1.- azul de metileno 2.- rojo neutro 3.- rojo cong 4.- verde Jannus

1.-

Difusin: en el espacio entre el portaobjetos y el cubreobjetos de una preparacin en fresco se pone una gota de colorante que penetra por capilaridad. 2.- mezclando una gota de colorante con el material que se va a usar.

Consiste

en la observacin de clulas y tejidos muertos

Matar

a la clula lo mas pronto posible para que mantenga sus caractersticas morfolgicas y fisiolgicas. Evita que el tejido se pudra y se desintegre. La muestra no debe tener mas de 3 mm de espesor El fijador debe exceder en 50:1 a la muestra * Nota: Los fijadores son voltiles

Fsicos

Calor: hmedo, seco Frio: congelacin rpida


Qumicos

*Alcohol metlico *Bicromato de potasio *Erlinck *Formol 100% tamponeado

Permite

conservar la muestra Se endurece con parafina, colodin o gelatina.

A)

Deshidratacin: pasar la muestra por una gradacin creciente de alcoholes. Los tiempos dependen de si se realiza manual o automtico (histoquineter)

B)

Aclaracin: se baa la muestra 3 veces durante 30-40 minutos en un disolvente de parafina Disolventes de parafina: *xilol *benzol *tolvol

C)

Impregnacin en parafina: para evaporar el disolvente de la parafina y que esta pueda penetrar la pieza. Se incluye en parafina fundida 2 veces durante 5 horas Para que se funda la parafina se debe tener 24 hrs. a 56-60C.
D)

Inclusin definitiva: la pieza se mete en parafina fundida para obtener bloques.

El

corte se realiza mediante aparatos llamados micrtomos. 1.- corte de clulas vegetales de rgano duro: se utiliza el micrtomo de mano.
2.-

cortes de rganos animales y vegetales: se utiliza el de rotacin. Corte fino: 5-10 micrometros Corte semifino: 0.5-5 micrometros

Para

teir los cortes no deben tener parafina Si tienen parafina se sumergen en Xilol y este se elimina en alcohol absoluto, alcohol 70,alcohol 90 y agua destilada.

Origen:

Naturales: animales o vegetales, ejemplo: eosina azafrn y carmn de cochinilla. Artificiales: carbn mineral cidos: tien lo bsico; eosina Bsicos: tien lo acido; azul de metileno Neutros: aniones y cationes son colorantes

Naturaleza

1.-

Gota pendiente 2.- Extensin: se extiende la gota sobre el portaobjetos con ayuda de otro para que no se coagule, el liquido extendido se fija, colorea y monta de manera normal (sangre, bacterias) 3.- Aplastamiento: los cortes se ponen en el portaobjetos y se cubren *nota: no duraran mas de 3 horas.

Se

coloca: 1.- nombre 2.- especie 3.- tcnica 4.- fecha de realizacin.

1.-

se verifica que la iluminacin este correcta. 2.- verificar que los lentes estn limpios. 3.- el centrado del revolver portaobjeto debe estar correcto. 4.- verificar la limpieza de todo el sistema ptico. 5.- asegurarse de que el objetivo este bien enroscado.