Siembra de Muestras Microbiológicas CASR - Aspx

A
COMPLEJO ASISTENCIAL DR. STERO DEL RIO

AVENIDA CONCHA Y TORO #3459 PUENTE ALTO Requerimiento Cdigo Cdigo interno N Revisin Fecha Vigencia Pgina : APL 1.3 : SDUA/LAB/0126 M-PT-01 : 01 : 20/04/2010 :1-13
SIEMBRA DE MUESTRAS MICROBIOLOGICAS
1. PROPOSITO Establecer el procedimiento correcto de siembra para las muestras primarias en medios de cultivos adecuados, de acuerdo al tipo de muestra, para el aislamiento del (los) agente(s) etiolgico(s). 2. CAMPO DE APLICACIN Seccin de Microbiologa de la unidad de Laboratorio Clnico CASR. Seccin Urgencia de la unidad de Laboratorio Clnico CASR 3. PRINCIPIO DEL PROCEDIMIENTO USADO PARA EL EXAMEN No aplica 4. ESPECIFICACIONES DE DESEMPEO No aplica. 5. TIPO DE MUESTRA PRIMARIA: Muestras de Fluidos estriles Muestras obtenidas en trula Muestras de Orina Muestras de tracto respiratorio Muestras anaerbicas Muestras de tejidos Muestras de catter Muestras de piel 6. RESPONSABLES Profesionales y tcnicos paramdicos involucrados en el proceso. 7. DOCUMENTOS RELACIONADOS -MT-01 Manual de Toma de Muestras -Norma Chilena 2547,5.5.1 -Clinical Microbiology Procedures Handbook. 8. TERMINOLOGA 8.1 Siembra de muestras: El proceso en el cual la muestra es inoculada en medios de cultivos adecuados para obtener un rendimiento bacteriolgico. 8.2 Medios de Cultivo: Conjunto de sustratos, o una solucin de nutrientes (selectivos, enriquecidos o no) en la cual crecen los microorganismos. Pueden ser slidos o lquidos. 8.3 Muestra apta para cultivo: Muestra primaria contenida en un recipiente estril proporcionado por la Unidad de Laboratorio Clnico. 8.4 Satelitismo: Desarrollo bacteriano en agar sangre de cordero alrededor de una estra realizada con cepa de Staphylococcus aureus. 9. EQUIPOS, HERRAMIENTAS Y SOFTWARE
Elaborado por: M. A. PereiraJC Valenzuela Cargo: TM Unidad de Laboratorio Clnico CASR Fecha: 30/05/2009 Revisado por: BQ Eduardo Espejo D. Aprobado por: BQ. A Gimena Salas M.
Cargo: Jefe Unidad de Laboratorio Clnico CASR Fecha: 20/06/2009
Cargo: Subdirector(a) Unidades de Apoyo CASR Fecha: 20/04/2010

9.1 Medios de Cultivo: Medios estndares de acuerdo a la tabla de siembra (anexo I) 9.2 Insumos bsicos: Pipetas Pasteur estriles Asa calibrada (1 ul., 10 ul.) Asa de platino para estriar e inocular muestras Mortero estril para macerar muestras de tejido. Lminas limpias y desengrasadas para frotis. Cubreobjetos 9.3 Equipamiento: Gabinete de Bioseguridad Estufas de cultivo 35 - 37 Centrifuga Mechero a gas y elctrico Estufa a 35 y con atmsfera de CO2 10. PROCEDIMIENTOS DE CALIBRACION No aplica. 11. ACTIVIDADES DEL PROCEDIMIENTO 11.1 El laboratorio de Microbiologa y de Urgencia verifican que la muestra sea apta para cultivo y registra su recepcin en un Libro de Ingreso 11.2 Todas las muestras se siembran en al menos un medio liquido y en un medio slido De acuerdo a la Tabla de Siembra de Muestras.(anexo I) 11.3 Toda siembra inicial de muestras bacteriolgicas se realiza de acuerdo a las siguientes pautas mnimas: -Observar si es necesario algn paso previo (centrifugacin, maceramiento) -Aspirar con pipeta estril la muestra o usar la trula correspondiente -Inocular los medios de cultivos lquidos con 2 a 3 gotas en cada tubo. -Luego, inocular los medios slidos de acuerdo a la pauta de siembra. -En los medios slidos depositar 2 a 3 gotas en un cuadrante de la placa y con un asa de Platino, esterilizada en mechero, diseminar la muestra en el cuadrante inicial, incinerar el asa y estriar hasta obtener finalmente cuatro cuadrantes sin incinerar el asa entre el cuadrante 2 al 4.( ver anexo) -Agregar satelitismo en lquidos y muestras que lo requieran, de acuerdo a la tabla de Siembra (ANEXO N1 Tabla de siembra de muestras primarias) -Finalmente realizar frotis para tincin de Gram. -Incubar medios de cultivo a 37 Celsius y en condiciones aerbicas o de CO2 segn el tipo de muestra y por el tiempo observado en la Tabla de siembra de muestras. 12. CONTROL DE CALIDAD Control de Desempeo de Medios de cultivo. Ver Manual de Medios de Cultivo 13. INTERFERENCIAS

No aplica 14. CALCULO DE RESULTADOS No aplica 15. INTERVALOS DE REFERENCIA No aplica. 16. INTERVALO VALIDO PARA INFORMAR RESULTADOS No aplica. 17. VALORES ALERTA Y/O CRITICOS No aplica 18. INTERPRETACION DEL LABORATORIO No aplica. 19. REGISTROS M-PT-01-RE-01 Registro de ingreso de muestras por servicio de hospitalizado adulto. M-PT-01-RE-02 Registro de ingreso de muestras por servicio de hospitalizado peditrico. M-PT-01-RE-03 Listado de trabajo microbiologa M-PT-01-RE-04 Hoja de trabajo individual microbiologa. PG-08-RE-01 Sistema informtico de laboratorio (SIL) PG-09-RE-01 Formulario de solicitud de exmenes.
Elaborado por: M. A. PereiraJC Valenzuela Cargo: TM Unidad de Laboratorio Clnico CASR Fecha: 30/05/2009
Revisado por: BQ Eduardo Espejo D.
Aprobado por: BQ. A Gimena Salas M.

20. DIAGRAMA DE FLUJO Muestra en proceso
Siembra en Medios Lquidos
Siembra en Medios Slidos
Frotis para Tincin de Gram.
Incubacin en Temperatura y atmsfera adecuadas
Lectura Microscpica
21. ANEXOS ANEXO N 1 Tabla de siembra de muestras primarias ANEXO N 2 Esquema de Siembra por estras ANEXO N 3 Cultivo traqueal cuantitativo en adultos ANEXO N 4 Cultivo de Sec tica (puncin timpnica) 22. EQUIPO PARTICIPANTE.
TM Mara Anglica Pereira A. TM Juan Carlos Valenzuela S. TM Karina Morales S. BQ Claudia Soto R BQ Eduardo Espejo D

ANEXO N 1
TABLA DE PROCESAMIENTO DE MUESTRAS BACTERIOLOGICAS MEDIO CULTIVO Caldo T, tioglicolato Agar Chocolate* A. Sangre satelitismo* Frotis para Gram. A. Sangre humana Choco Caldo T, tioglicolato Gram Caldo T, tioglicolato Choco* Sangre satelitismo* Frotis para Gram. Caldo hemocultivo Sangre satetiltismo*, caldo T Frotis para Gram. Frotis para Gram. Sangre choco B10 Caldo Tripticasa Sangre + cortes Sangre, tioglicolato frotis para Gram. Sangre *, Sabouraud Frotis para Gram. Sangre * Thayer Martn*, Sabouraud Frotis para Gram. Sangre humana* Sabouraud Frotis para Gram. Sangre, Frotis para Gram. INCUBACION * C02 por 72 hrs. OBSERVACIONES Centrifugar 2500 rpm x 15 min. Resuspender sedimento y sembrar Guardar muestra por 7 das Centrifugar 2500 rpm x 15 minutos Resuspender sedimento en 1cc aprox. Centrifugar 2500 rpm x 15 minutos. Resuspender sedimento y sembrar Guardar muestra por 7 das
MUESTRA LCR L. ventricular L. subdural L. amnitico
CO2 por 48 hrs.
L. articular/sinovial L. pleural
*C02 por 48 hrs.
L. ascitico L. abdominal S. ocular/conjuntival
37 aerbica 7 das * C02 por 48 hrs.
S. tica
*C02 por 48 hrs.
S. farngea S. herida, piel, pstula S. uretral S. endocervical
37aerbica 24 hrs. 37 aerbica, 48 hrs. C02 48 hrs. Hongos 7 das C02 48 hrs. Hongos 7 das C02 48 hrs. Hongos 7 das C02 48 hrs. En nia agregar agar Thayer.Martin. < 12 aos Gram sugerente de Haemophilus agregar choco C02
Sospecha de gonorrea agregar agarThayer Martn
F. vaginal Fondo saco vaginal S. nasal

Coprocultivo
MUESTRA Expectoracin S. traqueal S. bronquial
MacConkey,(2) SS, 37 aerbica, 48 2 aos TCBS, hrs. Vigilancia en TCBS frotis MEDIO CULTIVO INCUBACION OBSERVACIONES Sangre, Gram : screening celular Sangre, choco B10 Gram screening celular C02 48 hrs. C02 48 hrs. Chocolate con Gram sugerente
LAB. Urgencia realiza screening celular A toda muestra respiratoria, para evaluar calidad de la muestra.
Aspirado bronquial L. peritoneal, bilis, absceso Punta catter 5cm Anaerobios
Sangre, chocoB10 Frotis para Gram Sabouraud Tioglicolato, sangre Frotis para Gram Sangre
CO2 48 hrs Hongos 15 das 37 aerbica, 48 hrs. 37 aerbica, 48 hrs. jarra anaerbica 48 hrs. aerbico 7dias anaerbico 37 *C02 ** aerbico 48 hrs. Hongos 15 das Tcnica de Maki .Registrar medida de catter (aprox.). Gram sugerente agregar Mac.Conkey agar. Lab. Urgencia solo ingresa el medio de transporte por 72 hrs. *asa amarilla (1 ul) Guardar sedimento por 7 das &Lab. Urgencia solo siembra directa y Tincin de Gram.
Anaerobio*: Asa, Tioglicolato anaerobio C02: Asa Tioglicolato Gram &Directo: sangre*y choco* Sedimento: sangre** Sabouraud (2) KOH Frotis para Gram, Estudio de Koch Tioglicolato, caldo Tripticasa, choco*, Sangre*, Sabouraud (2) KOH Frotis (2) Koch Sangre y McConkey con asa*
Lavado bronco alveolar
Tejido
CO2 48 hrs. Hongos 15 das
Guardar macerado por 7 das Lab. Urgencia solo agregar caldo T a la muestra.
Orina
Asa amarilla: orina 2 chorro, sonda folley


S. traqueal cuantitativa
Sangre y MacConkey con asa amarilla Gram
37 48 hrs.
Asa azul orina por sondeo vesical Pipeta 100 ul en puncin vesical Agregar igual volumen de suero fisiolgico y 4 perlas vidrio estriles, agitar con vortex, sembrar

ANEXO N 2
ESQUEMA DE SIEMBRA POR ESTRAS

ANEXO N 3
CULTIVO TRAQUEAL CUANTITATIVO EN ADULTOS
1. MATERIALES E INSUMOS Tubo plstico cnico con la muestra (1 a 2 ml) Agar Sangre Agar Mac Conkey Portaobjetos Tubo con suero fisiolgico estril Pipeta volumtrica Perlas de vidrio estriles Asa calibrada de 10 ul Asa de platino 2. EQUIPOS Gabinete de Bioseguridad Microscopio Estufa de CO2. Estufa a 37 C. Mechero elctrico Vortex 3. ACTIVIDADES 3.1 Propsito: Identificar microorganismos causantes de infeccin respiratoria baja en pacientes con ventilacin mecnica durante mas de 48 hrs. 3.2 Hacer lmina para tincin de Gram y screening celular 3.3 Agregar al tubo cnico que contiene la muestra, igual volumen de suero fisiolgico estril. 3.4 Agregar 3 a 4 perlas de vidrio estril y agitar en vortex hasta que lice. 3.5 Realizar una dilucin de la muestra 1/100, agregando 100 ul de muestra en 9.9 ml de suero fisiolgico estril. 3.6 Agitar en vortex y sembrar alcuotas de 10 ul con asa calibrada en agar sangre y agar Mac Conkey y estriar. 3.7 Incubar la placa de agar sangre en estufa a 35 C con 5% de CO2 y la placa de agar Mac Conkey en estufa a 37 C en atmsfera normal. 3.8 Realizar la lectura de la lmina de acuerdo a pauta de lectura de tincin de Gram, toda muestra respiratoria con ms de 25 clulas por campo con objetivo de 10x es una muestra no apta para cultivo, por lo tanto se informa y se solicita nueva muestra. 3.9 Revisar las placas a las 24 y 48 horas de incubacin. Si hay crecimiento se identifica el o los microorganismo y se realiza estudio de susceptibilidad si corresponde 3.10 Lectura del cultivo: Realizar recuento de cada microorganismo considerando que 1 colonia equivale a 20.000 UFC/ML. 3.11 Informe del examen:

Cultivo Positivo: Se obtuvo desarrollo de ....... ufc/ml de: (identificacin del microorganismo(s) con la susceptibilidad correspondiente) Cultivo Negativo: Negativo a las 48 horas de incubacin. 4. REGISTROS PG-08-RE-01 SISTEMA INFORMTICO DE LABORATORIO (SIL) PG-09-RE-01 FORMULARIO DE SOLICITUD DE EXMENES.

ANEXO N 4
CULTIVO DE SECRECIN OTICA (PUNCION TIMPANICA)
1. MATERIALES E INSUMOS Tubo con muestra otica Agar Sangre cordero Agar chocolate Caldo tripticasa Asa de platino Lamina portaobjetos 2. EQUIPOS Gabinete de Bioseguridad Microscopio Estufa de CO2. Estufa a 37 C. Mechero elctrico 3. ACTIVIDADES Propsito: Identificar microorganismos causantes de otitis media aguda 3.1 Muestra enviada en tubo de transporte 3.1.1 Hacer lmina para tincin de Gram. 3.1.2 Inocular la muestra en placa de agar sangre de cordero, placa de agar chocolate y caldo tripticasa y estriar 3.1.3. Incubar las placas de agar en estufa a 35 C con 5% de CO2 y el tubo de caldo en estufa a 37 C en atmsfera normal. 3.2 Muestra enviada al Laboratorio inoculada en medio de cultivo (agar chocolate y caldo tripticasa) 3.2.1 Al llegar al laboratorio incubar los medios de cultivo segn punto 3.1.3 3.2.3 Despus de 24 hrs. de incubacin realizar un subcultivo en agar sangre desde el caldo tripticasa 3.3 Realizar la lectura de la lmina de acuerdo a pauta de lectura de tincin de Gram, e informar en la orden de trabajo. 3.4 Revisar las placas a las 24 y 48 horas de incubacin. Si hay crecimiento se identifica el o los microorganismo ver M-PT-05 Diagnostico e identificacin bacteriana y se realiza estudio de susceptibilidad si corresponde ver M-PT-08 Susceptibilidad antimicrobiana 3.5 Informe del examen: Cultivo Positivo: Se obtuvo desarrollo de: (identificacin del microorganismo(s) con la susceptibilidad correspondiente) Cultivo Negativo: Negativo a las 48 horas de incubacin. 4. REGISTROS

PG-08-RE-01 SISTEMA INFORMTICO DE LABORATORIO. PG-09-RE-01 FORMULARIO DE SOLICITUD DE EXMENES.

23. MODIFICACIONES DEL DOCUMENTO Cdigo 00 01 Fecha Vigencia actual Fecha Vigencia anterior Puntos Descripcin breve modificados creacin Cambio de formato Creacin del documento en ULC Nuevo formato CASR

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MUESTRA LCR L. ventricular L. subdural L. amnitico

CO2 por 48 hrs.

*C02 por 48 hrs.

L. ascitico L. abdominal S. ocular/conjuntival

37 aerbica 7 das * C02 por 48 hrs.

*C02 por 48 hrs.

S. farngea S. herida, piel, pstula S. uretral S. endocervical

Sospecha de gonorrea agregar agarThayer Martn

F. vaginal Fondo saco vaginal S. nasal

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MUESTRA Expectoracin S. traqueal S. bronquial

Aspirado bronquial L. peritoneal, bilis, absceso Punta catter 5cm Anaerobios

Lavado bronco alveolar

CO2 48 hrs. Hongos 15 das

Asa amarilla: orina 2 chorro, sonda folley

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Sangre y MacConkey con asa amarilla Gram

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