REF 43 641 / 43 649 12695 H - es - 2011/06 Medio chromID Ottaviani Agosti (OAA) Para control microbiolgico exclusivamente

Medio cromognico para el aislamiento selectivo, recuento e identificacin presuntiva de Listeria monocytogenes y otras Listeria spp en productos alimenticios y muestras de ambientes de produccin agroalimentaria. RESUMEN Y EXPLICACIN El medio chromID Ottaviani Agosti (1) es un medio cromgeno destinado al aislamiento selectivo, al recuento y a la identificacin presuntiva de Listeria monocytogenes y otras Listeria spp. en productos alimenticios y en muestras medio-ambientales de produccin agro-alimentaria (2). Cumple las normas EN ISO 11290-1/A1 y 11290-2/A1 (3, 4, 5, 6) y est descrito en el Manual Analtico de Bacteriologa (7). Adems se puede usar siguiendo varios protocolos certificados NF VALIDATION y AOAC RI: - protocolo corto para la deteccin de Listeria monocytogenes. - protocolo simplificado para recuento de Listeria monocytogenes. - protocolo corto para la deteccin de Listeria spp. PRINCIPIO El medio chromID Ottaviani Agosti contiene una base nutritiva que asocia diferentes peptonas y dos substratos, uno de ellos cromgeno. Esto favorece el crecimiento de todas las Listeria spp. y revela la presencia de ciertas actividades enzimticas. Todas las especies de Listeria se desarrollan en el medio, dando colonias azul-turquesa (actividad glucosidasa). La diferenciacin de Listeria monocytogenes se basa en la aparicin de un halo opaco alrededor de la colonia (actividad fosfolipasa C) (1, 8). La mezcla selectiva permite inhibir a la mayora del resto de las bacterias y levaduras. CONTENIDO DEL KIT Medio listo al empleo 2 x 10 placas (90 mm) 10 x 10 placas (90 mm) OAA * REACTIVOS Y MATERIAL NECESARIO NO SUMINISTRADO Reactivos: Los siguientes reactivos se indican a modo de orientacin: Caldo Fraser-Semi (frascos ref. 42 048 y 42 615, tubos ref. 42 112, bolsas ref. 42 627 y minibolsas ref. 42 727). Caldo Fraser (ref. 42 072). Agua de peptona tamponada (frascos ref. 42 042, 42 043, bolsas ref. 42 629 y minibolsas ref. 42 729). Agar PALCAM (ref. 43 559). Agar Oxford (ref. 43 560). Agar Tripticasa Soja (ref. 43 011). Agar Tripticasa Soja + sangre de cordero (ref. 43 001). Solucin salina de peptona o Triptona Sal (ref. 42 076). Material: Estufa bacteriolgica para incubacin a 30 C, 35 C y 37 C. OTROS REACTIVOS Y MATERIALES POSIBLES RAPIDEC Lmono (ref. 03 700). API Suspension Medium 2 ml (ref. 70 700). Varillas agitadoras desechables. API Listeria (ref. 10 300). AccuProbe Listeria monocytogenes (ref. 39 500). ID Color Catalasa (ref. 55 561). VIDAS LMO2 (ref. 30 704) ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES Para control microbiolgico exclusivamente. nicamente para uso profesional. Este kit contiene productos de origen animal. Aunque se conozcan la procedencia o el estado sanitario de los animales por los correspondientes certificados, la ausencia de agentes patgenos transmisibles no est totalmente garantizada. As pues, se recomienda tratar estos productos como potencialmente infecciosos y manipularlos con las precauciones de seguridad habituales (no ingerir ni inhalar). Todas las muestras, cultivos microbianos y productos inoculados deben considerarse infecciosos y manipularse adecuadamente. Deben seguirse durante todo el procedimiento la tcnica asptica y las precauciones habituales de manipulacin del grupo bacteriano objeto de estudio. Consulte la ltima M29-A, Protection of actualizacin de "CLSI Laboratory Workers From Occupationally Acquired Infections; Approved Guideline". Para obtener ms informacin sobre precauciones de manipulacin, consulte la ltima edicin de "Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories CDC/NIH" o la normativa vigente en el pas correspondiente. Deben seguirse las Buenas Prcticas de Laboratorio (p. ej. la norma ISO 7218) (10).

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* Distintivo impreso en cada placa COMPOSICIN

Frmula terica (3, 5). Este medio puede ser ajustado y/o suplementado en funcin de los criterios de prestaciones requeridas (9): Peptona de casena y de carne (bovina y porcina) ............................24 g Extracto de levadura .........................................................................10 g Piruvato sdico ....................................................................................2 g Glucosa ...............................................................................................2 g Glicerofosfato de magnesio .................................................................1 g Sulfato de magnesio .........................................................................0,5 g Cloruro sdico .....................................................................................5 g Cloruro de litio ...................................................................................10 g Hidrogenofosfato disdico ................................................................2,5 g 5-bromo-4-cloro-3- indol--D-glucopiransido ................................0,05 g L- - fosfatidil-inositol...........................................................................2 g cido nalidxico...............................................................................0,02 g Ceftazidima.....................................................................................0,02 g Sulfato de polimixina B ............................................................... 76700 U Cicloheximida ................................................................................0,05 g Agar...................................................................................................13 g Agua purificada ..................................................................................... 1l pH 7,2 Agar de color amarillo plido, opaco

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Listeria monocytogenes puede causar enfermedades graves en los grupos de riesgo, como son las mujeres embarazadas, las personas inmunodeprimidas y los ancianos. Es fundamental tener en cuenta el tiempo necesario para que las soluciones alcancen la temperatura, especialmente si las matrices estn congeladas, y emplear caldos que hayan alcanzado la temperatura ambiente. Los tiempos de incubacin deberan calcularse desde el momento en que la temperatura se acerca a la temperatura ambiente. Los medios de cultivo no deben utilizarse como materiales o componentes de fabricacin. No utilice las placas despus de la fecha de caducidad. No utilice las placas si su envase est daado. No utilice placas contaminadas o placas que exuden humedad. El uso de este medio puede ser complicado para aquellas personas que tengan dificultades en la apreciacin de colores. Este medio debe utilizarse segn el procedimiento detallado en este prospecto. Toda modificacin del procedimiento puede afectar a los resultados. CONDICIONES DE ALMACENAMIENTO Almacene las placas en su envase a 2-8 C hasta la fecha de caducidad. Conservar protegido de la luz. Los medios no se alteran si se mantienen a temperatura ambiente y expuestos a la luz, durante no ms de 24 horas antes de ser utilizados. La duracin de conservacin de las placas fuera de su envase, en bolsa de celofn, es de 2 semanas a 2-8C. MUESTRAS Seguir las recomendaciones de las normas en vigor para la realizacin de la recogida de muestras y la preparacin de las muestras. Conviene respetar las correctas prcticas de laboratorio en trminos de recogida de muestras y de transporte, adaptadas a cada tipo de muestra. MODO DE EMPLEO Espere a que las placas de agar, caldos de enriquecimiento y los diluyentes alcancen la temperatura ambiente. I- Mtodo normalizado ISO: a) Para la deteccin de Listeria monocytogenes segn la metodologa descrita en la norma EN ISO 11290-1/A1:2005 (3, 4) : Enriquecimiento primario: 1. Proceder al enriquecimiento selectivo primario en un caldo Fraser-Semi (dilucin al 1/10). 2. Incubar 24 2 horas a 30 1C. 3. Sembrar una placa de agar chromID Ottaviani Agosti y una placa de otro agar selectivo (Agar PALCAM, Oxford.). 4. Incubar el agar OAA a 37 1C durante 24 3 horas y 24 3 horas suplementarias si es necesario. Incubar el segundo medio segn las recomendaciones del fabricante.

Enriquecimiento secundario: 5. Proceder al enriquecimiento selectivo secundario en 10 ml de caldo Fraser a partir de 0,1 ml del enriquecimiento primario. 6. Incubar 48 2 horas a 37 1C. 7. Sembrar una placa de agar OAA y una placa de otro agar selectivo (Medio PALCAM, Oxford.) a partir del enriquecimiento secundario. 8. Incubar el agar OAA a 37 1C durante 24 3 horas y 24 3 horas suplementarias si es necesario. Incubar el segundo medio segn las recomendaciones del fabricante. b) Para el recuento de Listeria monocytogenes segn la metodologa descrita en la norma EN ISO 11290-2/A1:2005 (5, 6) : 1. Preparar la dilucin 1/10 de la muestra en Agua de peptona tamponada o Caldo Fraser sin antibiticos. 2. Dejar reposar durante 1 hora a 20C, conforme la ISO 11290-2. 3. Sembrar 0,1 ml en dos placas de agar chromID Ottaviani Agosti por extensin en superficie. Repetir la operacin con las diluciones decimales siguientes si es necesario. Conforme la norma ISO 7218 (9), es suficiente una placa por dilucin, si se analizan dos diluciones sucesivas. 4. Dejar las placas aproximadamente 15 minutos a temperatura ambiente para que el inculo se absorba. 5. Incubar a 37 1C durante 24 3 horas y 24 3 horas suplementarias si es necesario. II- Mtodo certificado NF VALIDATION y AOAC RI segn las recomendaciones de la norma EN ISO 16140 (6): a) Protocolo corto para la deteccin de Listeria monocytogenes y Listeria spp.: 1. Proceder al enriquecimiento de la muestra en caldo Fraser-Semi (dilucin al 1/10). 2. Incubar 24 2 horas a 30 1C. 3. Sembrar 100 l en una placa de medio chromID Ottaviani Agosti segn el mtodo descrito anteriormente. 4. Incubar el agar OAA a 37 1C (NF VALIDATION) o 35-37 C (AOAC) durante 22 -26 horas. Nota: Durante el procedimiento de obtencin del certificado NF VALIDATION, no se realizaron ensayos de muestras con volmenes mayores de 25 g. Nota: Para recoger muestras ambientales de superficies, el dispositivo de toma de muestras debe humedecerse con un diluyente estril (p. ej. agua de peptona tamponada) que contenga, si fuera necesario, un agente neutralizante adecuado (p. ej. mezcla de lecitina-polisorbato-L-histidina-tiosulfato de sodio o Dey-Engley para protocolo AOAC). Tras recoger la muestra, introduzca el dispositivo en un volumen adecuado de caldo de enriquecimiento o diluyente (p. ej. hisopo en 10 ml, esponja en 100 ml)

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Mtodo de siembra: 1. Depositar 100 l sobre la seccin 1 del agar. 2. Extender la siembra sobre la seccin 1 mediante el uso de un asa estril. 3. Cambiar de asa. 4. Sembrar la seccin 2 mediante 10 estras utilizando la siembra extendida sobre la seccin 1.

Confirmacin de los resultados positivos a) Deteccin y recuento de Listeria monocytogenes: En caso de usarse el protocolo normalizado de identificacin o recuento, confirmar las colonias sospechosas de Listeria monocytogenes (1 a 5 colonias tpicas para identificacin y 5 colonias para recuento), 24 horas despus de la incubacin o 48 horas despus de la incubacin si no apareciesen colonias tpicas a las 24 horas. En el caso de usarse el protocolo corto de deteccin, o el protocolo simple de recuento certificado NF VALIDATION, confirmar de 1 a 5 colonias tpicas sospechosas de Listeria monocytogenes, despus de la incubacin. Si la confirmacin no se pudiera iniciar al trmino de la incubacin, el agar OAA se debera almacenar a 28C. La confirmacin debe realizarse en el plazo de las 48 horas posteriores al trmino del perodo de incubacin. Si la primera colonia diera un resultado negativo, proseguir con las otras 4. Nota: si se identifica una colonia de Listeria monocytogenes al final del mtodo de deteccin/recuento certificado segn protocolo EN ISO 16140 (11), no es necesario confirmar las colonias obtenidas mediante el protocolo de deteccin/recuento si se realiza con la misma muestra. Realice la confirmacin siguiendo uno de los 5 mtodos descritos a continuacin: 1. Realizacin de pruebas convencionales descritas en los mtodos normalizados por CEN o ISO (incluido un paso de purificacin) (4, 6). 2. RAPIDEC L mono test Durante el procedimiento de obtencin del certificado NF VALIDATION, se realiz una identificacin directa de colonias sospechosas a partir de colonias tpicas de Listeria monocytogenes aisladas. Si las colonias tpicas no estn aisladas, purifique realizando un subcultivo en un nuevo Agar chromID Ottaviani Agosti, un Agar Tripticasa Soja (TSA) o en una placa de agar sangre antes de la prueba de identificacin. Es recomendable comprobar, en el medio de subcultivo seleccionado, que las colonias por identificar son aquellas que inicialmente eran tpicas en el Agar chromID Ottaviani Agosti (siga las instrucciones del prospecto de RAPIDEC L mono). Al realizar aislamientos en TSA o agar sangre, si no se obtiene un color verde tras 6h de incubacin, ampliar la incubacin a 24h a 37C. 3. Galera API Listeria. Durante el procedimiento NF VALIDATION, se realiz directamente la identificacin directa de colonias sospechosas a partir de colonias tpicas de Listeria monocytogenes aisladas. Si las colonias tpicas no estn aisladas, purifique realizando un subcultivo antes de la prueba de identificacin. Utilizando una colonia tpica aislada de Listeria monocytogenes (azul turquesa con halo), prepare una suspensin en una ampolla de 2 ml de agua desmineralizada (API Suspension Medium) para inocular la galera API (siga las instrucciones del prospecto de API Listeria).
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Nota: El mtodo de aislamiento estndar (4 cuadrantes) realizado con cuidado, tambin ofrece buenos resultados. b) Protocolo simple para el recuento de Listeria monocytogenes: 1. Preparar la dilucin inicial 1/10 de la muestra en Agua de peptona tamponada o Caldo Fraser sin antibiticos. 2. Dejar reposar durante 1 hora a 20C, conforme la ISO 11290-2 (9). 3. Sembrar 0,1 ml en una placa de agar chromID Ottaviani Agosti por extensin en superficie. Repetir el procedimiento con diluciones sucesivas si fuera necesario. 4. Dejar las placas aproximadamente 15 minutos a temperatura ambiente para que el inculo se absorba. 5. Incubar las placas a 37 1C (NF VALIDATION) o 35-37 C (AOAC). El recuento final se obtiene a las 48 2 horas. No obstante, puede realizarse una lectura preliminar a las 24 2 horas para detectar muestras muy contaminadas ms rpidamente. Nota: para determinados productos, si es necesario estimar recuentos bajos de Listeria monocytogenes, distribuir 1ml del inculo en la superficie del agar en 3 placas chromID Ottaviani Agosti (90 mm), equivalentes a una placa de 140mm. LECTURA E INTERPRETACIN: Despus de incubar, observar el crecimiento bacteriano. Observar y contar la presencia de colonias caractersticas azul-turquesa rodeadas de un halo opaco: L. monocytogenes and L. ivanovii. Deteccin de Listeria: compruebe si hay colonias tpicas de color azul-turquesa rodeadas o no de un halo opaco. La identificacin de los microorganismos aislados debe ser confirmada por pruebas complementarias.

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Sin embargo es necesario volver a aislar sobre agar sangre para comprobar la pureza de la siembra, observar el tipo de hemlisis, realizar ensayos suplementarios (coloracin Gram, catalasa, etc.). Si estn presentes varios tipos de colonias sobre el agar sangre, repetir el test de identificacin con una colonia aislada hemoltica. 4. Prueba de AccuProbe Listeria monocytogenes. La suspensin se puede preparar a partir de una colonia sospechosa aislada (aprox. 1 mm) o de varias colonias (3 4) recogidas con ayuda de un asa si las colonias sospechosas no estn bien aisladas. 5. VIDAS LMO2. Prepare una suspensin en 2 ml de Solucin salina de peptona o Caldo Triptona Sal con una colonia tpica (aislada o no). Dosifique 0,5 ml de esta suspensin en el pocillo de la muestra del cartucho VIDAS LMO2 y realice el test VIDAS . Un resultado positivo confirma la presencia de Listeria monocytogenes Nota: Si se obtuviesen resultados discrepantes (presencia de colonias azules con un halo, no confirmadas como L. monocytogenes por el mtodo de confirmacin utilizado), el laboratorio debe tomar las medidas necesarias para garantizar que los resultados obtenidos sean exactos. Por ejemplo en presencia de L.ivanovii. b) Deteccin de Listeria spp: Si se emplea el protocolo corto certificado NF VALIDATION, confirmar de 1 a 5 colonias tpicas sospechosas de Listeria spp (azules o verde-azuladas con o sin halo), tras 22-26 horas de incubacin. Si la confirmacin no se pudiera iniciar al trmino de la incubacin de 24 2h, el agar OAA se debera almacenar a 2-8C. La confirmacin debe realizarse en el plazo de las 48 horas posteriores al trmino del perodo de incubacin. Si la primera colonia diera un resultado negativo, proseguir con las otras 4. Realice la confirmacin siguiendo uno de los mtodos descritos a continuacin: 1. Confirmacin del gnero mediante los test descritos en las normas CEN o ISO (tincin Gram, catalasa y test de la motilidad, si es necesario) incluyendo una etapa de purificacin (10). 2. Confirmacin del gnero, sin etapa de purificacin mediante una tincin Gram y realizando la catalasa directamente sobre las colonias aisladas con el reactivo ID catalasa. 3. Desde una colonia aislada, sembrar una placa PALCAM en estras (hasta 15 estras por placa). Incubar el medio 24 2 h a 37 1C. La presencia de colonias tpicas confirma el gnero Listeria.

c) Deteccin de Listeria monocytogenes y Listeria spp. y recuento de Listeria monocytogenes segn protocolo validado AOAC: Confirme las colonias sospechosas tpicas de Listeria monocytogenes (de 1 a 5 colonias), empleando el caldo Fraser-Semi no calentado almacenado a 2-8C. La confirmacin debera iniciarse dentro de las 48 horas siguientes al final del periodo de incubacin a 30 C. - Para productos crnicos y muestras ambientales, siga los test descritos en la gua USDA/FSIS Microbiology Laboratory Guidebook (12). - Para el resto de productos, siga los test bioqumicos descritos en AOAC Official Method 993.12 (13) o en el captulo 10 del Bacteriological Analytical Manual (7). Dentro de la validacin AOAC tambin se contempla el uso de VITEK 1, VITEK 2 GP, RAPIDEC Lmono y API Listeria. CONTROL DE CALIDAD El agar chromID Ottaviani Agosti ha sido concebido y desarrollado con el fin de responder a las exigencias de calidad ms estrictas. Se realiza el control de calidad segn las recomendaciones de las normas 11290-1/A1 (3) y 11290-2/A1 (4) y el procedimiento de la norma XP CEN ISO/TS 11133-2 (9). Los resultados de las cepas estudiadas durante el control de calidad lote a lote figuran en el certificado de control de calidad disponible bajo pedido. LIMITES DEL TEST La especie L. ivanovii se desarrolla en el medio dando colonias caractersticas (azul-turquesa rodeadas de un halo opaco). Sin embargo, el crecimiento de algunas cepas puede ser dbil o polimrfico Algunas cepas distintas de Listeria pueden desarrollarse en el medio dando colonias caractersticas (ciertos Bacillus) El desarrollo est en funcin de las exigencias propias de cada microorganismo. Es por tanto posible que algunas cepas de Listeria con exigencias especficas no se desarrollen (por ejemplo L. seeligeri). Se ha evaluado el agar chromID Ottaviani Agosti sobre numerosas cepas bacterianas y matrices alimenticias. Sin embargo teniendo en cuenta la diversidad de los productos alimenticios, los procesos de fabricacin y la flora microbiana, puede resultar necesario verificar que el agar chromID Ottaviani Agosti est bien adaptado a la especificidad de los productos a ensayar. La calidad de preparacin de la muestra resulta particularmente importante en la deteccin de Listeria monocytogenes. La muestra recogida debe ser representativa y homognea. Siga las recomendaciones de las normas para la toma, almacenamiento y preparacin de muestras.

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PRESTACIONES a) En el procedimiento de obtencin del certificado NF VALIDATION del agar chromID Ottaviani Agosti segn el protocolo corto de deteccin de L.monocytogenes, el estudio preliminar dio los siguientes resultados: Inclusividad: Se detectaron todas las 153 cepas de Listeria monocytogenes ensayadas (aspecto caracterstico sobre el agar OAA). Exclusividad: Ninguna de las 63 cepas que no eran Listeria tenan aspecto tpico sobre el agar OAA (azul con halo). Se cultivaron la totalidad de las 62 cepas de Listeria que no eran L. monocytogenes y todas ellas crecieron produciendo colonias azules sin halo, a excepcin de las 29 cepas de Listeria ivanovii (de las 29 ensayadas) que produjeron colonias tpicas con halo. Exactitud relativa, sensibilidad relativa y especificidad relativa: Se han ensayado segn el protocolo corto OAA, 335 muestras, de las cuales 121 se han contaminado de forma natural y 31 que se han contaminado de forma artificial, en paralelo con el mtodo EN ISO 11290-1/A1 (3). Se obtuvieron los siguientes resultados: Resultados suplementarios positivos con el mtodo OAA: 3 Resultados falsos negativos con el mtodo OAA: 4 Resultados concordantes: 328 b) En el procedimiento de obtencin del certificado NF VALIDATION del agar chromID Ottaviani Agosti segn el protocolo corto de deteccin de Listeria spp., el estudio preliminar dio los siguientes resultados: Inclusividad: Se detectaron la totalidad de las 215 cepas de Listeria, incluyendo 153 Listeria monocytogenes, 29 Listeria ivanovii, 14 Listeria innocua, 8 Listeria welshimeri, 7 Listeria seeligeri y 4 Listeria grayi (apariencia tpica sobre agar OAA). Exclusividad: Se detectaron 9 cepas confirmadas como no-Listeria mediante el mtodo de confirmacin, en el agar OAA (colonias azules sin halo). Exactitud relativa, sensibilidad relativa y especificidad relativa: Se han ensayado segn el protocolo corto OAA, 341 muestras, y en paralelo con el mtodo EN ISO 11290-2/A1 (5). Se obtuvieron los siguientes resultados: Resultados suplementarios positivos con el mtodo OAA: 2 Resultados falsos negativos con el mtodo OAA: 5 Resultados concordantes: 334

El protocolo corto para la deteccin de Listeria monocytogenes y Listeria spp. usando el agar chromID Ottaviani Agosti est certificado NF VALIDATION como mtodo alternativo de anlisis para todos los productos alimenticios, as como las muestras medio-ambientales con respecto al mtodo de referencia descrito en la norma internacional EN ISO 11290-1/A1 (3), EN ISO 11290-1(4), de acuerdo a la norma de referencia EN ISO 16140 (11). El certificado BIO 12/14-04/05 puede solicitarse a nuestro Departamento de Asistencia Tcnica o a AFNOR Certification. La fecha de caducidad de la certificacin AFNOR VALIDATION est indicada en el certificado.

BIO 12/14 04/05 METODOS ALTERNATIVOS DE ANALISIS AGROALIMENTARIOS Certificado por AFNOR Certification www.afnor-validation.org www.afnor-validation.com

El protocolo simple para la deteccin de Listeria monocytogenes, empleando chromID Ottaviani Agosti tiene la certificacin NF VALIDATION como mtodo alternativo en el anlisis de alimentos en comparacin al mtodo de referencia descrito en las normas internacionales EN ISO 11290-2/A1 (5), EN ISO 11290-2 (6) y conforme la norma EN ISO 16140 (11). El certificado BIO- 12/24-03/08 puede solicitarse a nuestro Departamento de Asistencia Tcnica o a AFNOR Certification. La fecha de caducidad de la certificacin AFNOR VALIDATION est indicada en el certificado.

BIO 12/24 03/08 METODOS ALTERNATIVOS DE ANALISIS AGROALIMENTARIOS Certificado por AFNOR Certification www.afnor-validation.org www.afnor-validation.com

El agar chromID Ottaviani Agosti, ha sido validado por AOAC Research Institute como un Performance Tested Method (Certificat n. 041102) para la deteccin y recuento de Listeria monocytogenes y para la deteccin de Listeria spp. en productos alimenticios y muestras medioambientales.

PERFORMANCE TESTED METHOD Certificado por AOAC Research Institute www.aoac.org

Se incluyeron las siguientes matrices en la validacin AOAC: carne vacuno picada cruda, salchichas Frankfurt de pollo, acero inoxidable, plstico, goma (muestreada con esponja), cermica y hormign.

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ELIMINACIN DE RESIDUOS Los reactivos no utilizados pueden ser eliminados como desechos no peligrosos. Eliminar los reactivos as como los materiales de un solo uso contaminados siguiendo los procedimientos relativos a los productos infecciosos o potencialmente infecciosos. Es responsabilidad de cada laboratorio gestionar los residuos y los efluentes que produzca segn su naturaleza y peligrosidad, garantizando (o haciendo garantizar) el tratamiento y la eliminacin segn las reglamentaciones aplicables. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
1. Ottaviani F., Ottaviani M., Agosti M. - Esperienze su un agar selettivo e differenziale per Listeria monocytogenes. Industrie Alimentaria. 26 (1997). 2. Norme ISO 18593 Microbiologie des aliments Mthodes horizontales pour les techniques de prlvement sur des surfaces, au moyen de botes de contact et dcouvillons (2004). 3. EN ISO 11290-1/A1 (2005) - Microbiologie des aliments Mthode horizontale pour la recherche et le dnombrement de Listeria monocytogenes - Partie 1: mthode de recherche - Amendement 1. 4. EN ISO 11290-1 (1997) - Microbiologie des aliments Mthode horizontale pour la recherche et le dnombrement de Listeria monocytogenes - Partie 1: mthode de recherche. 5. EN ISO 11290-2/A1 (2005) - Microbiologie des aliments Mthode horizontale pour la recherche et le dnombrement de Listeria monocytogenes - Partie 2: mthode de dnombrement - Amendement 1. 6. EN ISO 11290-2 (1998) - Microbiologie des aliments Mthode horizontale pour la recherche et le dnombrement de Listeria monocytogenes - Partie 2: mthode de dnombrement. 7. Bacteriological Analytical Manual - Chapter 10 : Detection and enumeration of Listeria monocytogenes in foods - U.S. Food and Drug Administration 2001 http://www.fda.gov/Food/ScienceResearch/LaboratoryMetho ds/BacteriologicalAnalyticalManualBAM/UCM071400. 8. Beumer R.R., Curtis G.D.W. - Culture media and methods for the isolation of Listeria monocytogenes. Chapter 5 Handbook of Culture Media for Food Microbiology. Corry J.E.L. et al. (Eds) 2003. Elsevier. Science. 9. XP CEN ISO/TS 11133-2 (2004) -Microbiologie des aliments. Guide pour la prparation et la production de milieux de culture. Partie 2: Guide gnral pour les essais de performances des milieux de culture. 10. ISO 7218 (2007) Microbiologie des aliments Exigences gnrales et recommandations. 11. EN ISO 16140 (2003) - Microbiologie des aliments. Protocole pour la validation des mthodes alternatives. 12. Isolation and identification of Listeria monocytogenes from Red Meat, Poultry, egg products and environmental samples USDA - http://www.fsis.usda.gov/PDF/MLG_8_07.pdf. 13. AOAC Official Methods 993.12 - Listeria monocytogenes in milk and dairy products - Microbiological Methods 2000 AOAC.

TABLA DE SMBOLOS Smbolo Significado Nmero de referencia Fabricante Lmite de temperatura Fecha de caducidad Cdigo de lote Consulte las instrucciones de uso Proteger de la luz Contenido suficiente para <n> ensayos

BIOMERIEUX, el logo azul, RAPIDEC, API, VIDAS y chromID son marcas utilizadas, depositadas y/o registradas pertenecientes a CLSI es una marca comercial perteneciente a Clinical and Laboratory Standards Institute Inc. Cualquier otro nombre o marca registrada pertenece a su propietario respectivo.

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