3

Capítulo

Técnicas de identificación
J. L. López-Hontangas, F. J. Castillo y M. Salavert

1.   Introducción El propósito fundamental del diagnóstico microbiológico clínico es optimizar la asistencia que se presta al paciente. Para alcanzar este objetivo es esencial obtener y comunicar, lo antes posible, al médico responsable del mismo resultados útiles para su manejo y tratamiento, usando eficientemente los recursos disponibles. Conjugar estos objetivos, con el máximo rigor científico y una creciente demanda asistencial, es lo que se persigue en los Servicios de Microbiología Clínica. El diagnóstico etiológico directo de las enfermedades infecciosas pretende demostrar la presencia del microorganismo causal en productos patológicos adecuados obtenidos del paciente e incluye, entre otros procedimientos, el cultivo, el cual persigue el aislamiento del microorganismo causante de la infección. Cuando es factible, el cultivo se considera el método diagnóstico de elección, porque permite la identificación del microorganismo implicado, el estudio de su sensibilidad a los antimicrobianos apropiados y facilita la aplicación de marcadores epidemiológicos. Una vez aislado el microorganismo de la muestra, se procede a su identificación, es decir, a clasificarlo dentro de un grupo o taxón ya establecido, con el que tenga la mayor semejanza. La complejidad de este proceso depende del nivel de precisión o discriminación que se pretende conseguir. Aunque en los últimos años se ha asistido a un crecimiento importante en la oferta de métodos genotípicos aplicados al diagnóstico microbiológico, en la mayor parte de los procesos de identificación se siguen utilizando métodos fenotípicos, puesto que su realización, lectura y coste los hacen más asequibles. En este capítulo se revisan las técnicas de identificación de las bacterias patógenas. Los métodos clásicos para la tipificación de las bacterias se basan en sus características morfológicas y metabólicas. Las pruebas diagnósticas se seleccionan en una base empírica, con el fin de proporcionar información sufi-

3

También permite realizar un seguimiento y control de las infecciones hospitalarias. por ejemplo. Una colonia en cultivo puro está compuesta por un solo tipo de microorganismo y procede de una sola célula original. Diferenciar un microorganismo patógeno per se. Además. y una menor generación de resistencias en los microorganismos. y deducir sus posibles mecanismos de resistencia. 2. facilita el tratamiento de la enfermedad infecciosa con la mayor eficiencia posible. La economía y la práctica dictan el uso de un número mínimo de pruebas diagnósticas. las categorías y definiciones más utilizadas son familia (un grupo de géneros relacionados entre sí). Dentro de la clasificación taxonómica.   Identificación BACTERIANA La taxonomía bacteriana tiene como objetivo la construcción de sistemas que permitan clasificar a las bacterias. especie (un grupo de cepas relacionadas entre sí). Cómo se logra este compromiso es lo que determina la calidad diagnóstica en Microbiología. y la rapidez y la economía por otra. potencialmente patógeno o contaminante. Para poder ser clínicamente útil. la identificación de un microorganismo debe ser lo más rápida posible. Las pruebas de identificación se deben hacer siempre con colonias únicas procedentes de cultivos puros. serotipo) y cepa (aislamiento concreto de una especie en particular). por una parte. género (un grupo de especies relacionadas entre sí). hoy en día. 3. las técnicas de biología molecular (basadas en la caracterización de genes específicos o segmentos de ellos) son cada vez más comunes y utilizadas en Microbiología Clínica. Uno de los factores clave para identificar a las bacterias como agentes patógenos depende de su aislamiento en cultivo puro.28 Microbiología aplicada al paciente crítico ciente para hacer posible la discriminación entre los géneros y especies. la identificación en Microbiología Clínica representará siempre un compromiso entre la exactitud y precisión. .  Objetivos Y utilidad DE LAS TÉCNICAS DE identificación La identificación de una bacteria sospechosa de ser la causa de una infección es uno de los instrumentos principales del diagnóstico y tratamiento de las enfermedades infecciosas. detectar un posible brote infeccioso y establecer una política de antibióticos coherente y apropiada en concordancia con el centro hospitalario o el área asistencial. tipo (grupos de cepas interrelacionados dentro de las especies. Por necesidad. lo que traerá consigo una disminución de las infecciones nosocomiales y/o comunitarias. biotipo.

pruebas de detección de antígenos y de anticuerpos. Las reacciones buscadas pueden ser obtenidas en un  Criterios y ejemplos metodológicos aplicados a la identificación bacteriana Metodología de ejemplo Tabla 1.1. Los equipos comercializados son habitualmente sistemas de pruebas miniaturizadas que utilizan sustratos cromogénicos o fluorogénicos para estudiar las enzimas preformadas. Criterio Observación macroscópica Observación e inspección de colonias: disposición. Los procedimientos microscópicos que utilizan tinciones estándar y/o anticuerpos fluorescentes para detectar microorganismos específicos se consideran métodos rápidos y se utilizan para la diferenciación inicial o la identificación presuntiva de ciertos grupos de microorganismos. La identificación rápida de los cultivos clínicos también incluye equipos de identificación comerciales e instrumentos o sistemas robóticos e informáticos completamente automatizados. etcétera Resistencia a antibióticos: antibiograma y antibiotipos. fagotipos. técnicas de identificación bioquímicas. ribotipos. etcétera Observación microscópica Metabolismo Otras propiedades Tinciones: formas.   Métodos rápidos de identificación bacteriana El término de “método rápido” en microbiología engloba una amplia variedad de procedimientos y técnicas que permiten obtener resultados en menos tiempo que las pruebas diagnósticas convencionales. Existen métodos rápidos aplicables a la microscopía. cápsula. etcétera Baterías bioquímicas: uso de sustratos (oxidación/fermentación). textura. estudio de las concentraciones mínimas inhibitorias. como los que se resumen a modo de ejemplo en la tabla 1. etcétera .Técnicas de identificación 29 La taxonomía bacteriana convencional permite la identificación de géneros y especies mediante la aplicación de diversos criterios. Incluso en las técnicas de diagnóstico molecular existe una gradación de celeridad. 3. agrupación. pigmentos. esporas. formas. estudio de sinergias o antagonismos. producción de metabolitos secundarios. flagelos. tamaños. siendo algunas de estas pruebas tan “rápidas” como la PCR “a tiempo real” .

determinados colorantes (Tabla 3). • Otras: hematoxilina férrica. ya que permite hacer diferenciaciones taxonómicas. la preparación de los cultivos y.   Tinciones rápidas El examen de las muestras debe iniciarse con la inspección visual ordinaria y proceder al nivel de magnificación necesario para visualizar el patógeno o determinar la ausencia del mismo. realizando de forma secuencial la incubación. según se comporten ante esta tinción. siendo las más usadas las tinciones diferenciales. recuento de leucocitos. 3. Las capacidades y prestaciones de estos equipos y sistemas son muy variables y suelen incorporar sistemas de lectura mecanizada y automatizada mediante espectrofotómetros. por lo tanto. y gram-negativas. un examen microscópico mediante las tinciones elegidas (Tabla 2). Wright-­ Giemsa. aunque algunas de ellas pudieran requerir una incubación ampliada hasta el día siguiente. separando dos grandes grupos de bacterias (gram-positivas. En la mayoría de los Servicios de Microbiología se realiza un examen macroscópico de la muestra mediante la inspección visual en el momento de realizar la extensión sobre el portaobjetos. de color violeta azulado. Se dice que son microorganismos ácido-alcohol resistentes. May Grunwald-Giemsa. Las muestras pueden prepararse de diferentes formas para hacer a los microorganismos más fácilmente visibles y mostrar sus características estructurales. o no. detección de parásitos o protozoos o visualización de estructuras fúngicas. que permiten distinguir a los microorganismos por alguna de sus características tintoriales peculiares: • Tinción de Gram: es de gran importancia en Microbiología.2. de color granate o rojo-rosado).30 Microbiología aplicada al paciente crítico tiempo de 2 a 6 horas de incubación. tricrómica. dado que permite la observación de microorganismos que no pueden ser apreciados con detalle a simple vista. . Las tinciones pueden realizarse siguiendo distintos métodos. por otra parte. como motilidad bacteriana. códigos numéricos y bases de datos computarizadas. Las suspensiones en fresco permiten valorar algunos elementos. el microscopio es el instrumento más necesario para un microbiólogo. posteriormente. lectura e interpretación de los resultados de las pruebas. • Tinción ácido-alcohol resistente: se basa en que ciertos microorganismos no pierden la coloración por una mezcla de ácido y alcohol si han sido previamente teñidos con fucsina fenicada. las tinciones microbiológicas permiten observar a los microorganismos en función de la capacidad de los mismos para retener.

carácter tintorial). temperaturas y atmósferas de incubación. agrupación. como sucede con los esputos y otras muestras del tracto respiratorio. •   Clínico: permite un diagnóstico presuntivo de bacteriuria significativa. etcétera.000 150 a 100 millones 20-10. •   Control de calidad y validez de la muestra remitida para cultivo. •   Guía para el procesamiento de la muestra: orienta sobre la elección de los medios de cultivo. la tinción de Gram. Ojo humano Lupa o gafa-lupa  Sistemas de observación de los microorganismos patógenos Magnificación (x) Aplicación Herramienta 0 5 2. . etc.000 100-400 100-400 100-1.000 La tinción más utilizada en microbiología es. forma. los cuales pueden teñir direc­ tamente las células o pueden acoplarse a anticuerpos que se fijan a las células Determina la ultraestructura de los orgá­ nulos celulares Determina las formas y estructuras de la superficie celular Microscopio de disección Microscopio óptico: –  De campo claro –  De campo oscuro –  Contraste de fases Microscopio de fluorescencia Microscopio electrónico: –  De transmisión –  De barrido 100-1.Técnicas de identificación 31 Tabla 2. sin lugar a dudas. requerimientos nutricionales adicionales. también un diagnóstico etiológico orientativo del líquido cefalorraquídeo (LCR) de un paciente con sospecha de meningitis. más apropiados según los microorganismos observados en la tinción. que proporciona información sobre los siguientes aspectos: •   Taxonómico: permite la clasificación inicial de las bacterias usando criterios morfológicos (tamaño.5-30 Examen visual ordinario Examen visual ordinario con precisión Examen y manipulación visual precisa y detallada Células teñidas Células no fácilmente teñidas para visua­ lización en campo claro Células vivas y/o no teñidas Preparaciones usando tinciones con fluo­ rocromos.

la cápsula no se tiñe. orina. levaduras. en neumonía y meningitis de la morfología de bacterias comunes adecuada. contrastado sobre cortos o largos y las nocardias. sangre y orina para Cryptococcus polisacáridos que aparece como un halo requiere experiencia para diferenciar sobre un fondo oscuro leucocitos de levaduras Digiere las proteínas de las muestras y facilita la visualización Microbiología aplicada al paciente crítico KOH 10% Examen directo de las extensiones de piel. reconocimiento Requiere experiencia para valoración sobre todo. muestras Morfología general de las estructuras Permite visualizar bacterias. pero puede diferenciar leva­ duras Los microorganismos AAR muestran un Las micobacterias son ba­ cilos rectos. permite detectar arboriformes y ramificados también parásitos como Cryptosporidium y Cyclospora Requiere experiencia Tinciones de muestras (esputos. bacilos un fondo azulado. LBA.) para identificar bacterias Ziehl-Neelsen. Los criptococos poseen una cápsula de Tinción inversa. etc. color rojo granate. Visualiza elementos fúngicos pelos y uñas para ver dermatofitos . LCR. preparaciones de Tzanck.32 Tabla 3. con fondo celular complejo ce­ lulares parásitos e inclusiones virales Corynebacterium diphteriae Azul de metileno Gránulos metacromáticos de corinebac­ Morfología general y seleccionada terias Gram Permite hacer diagnóstico presuntivo. Aplicación Resultados esperados Comentarios Tinciones y métodos microscópicos para la detección rápida de microorganismos en muestras y materiales   infectados Tinción o método Wright-Giemsa LBA. Detección de leucocitos. Kinyoun ácido-alcohol resistentes (AAR) y para diferenciación de micobacterias y algunos actinomicetales aerobios (AAR parcial) Microscopía de campo oscuro Examen directo de lesiones con sospecha Se ven espiroquetas móviles de sífilis primaria Tinta china Examen directo de la extensión de LCR. no incluye otros agentes in­ bacteriana fecciosos.

fluorescen tanto bacterias viables como no viables Blanco calcoflúor Examen directo de LCR. LBA y otros Las levaduras y mohos muestran una Tinción fluorescente que se fija a la pared líquidos corporales para detectar estruc.fluorescencia blanquecina suave celular de hongos y levaduras. especial­ de micobacterias mente. que muestran rescencia te en hemocultivos fluorescencia naranja sobre un fondo oscuro.Tabla 3. pero no turas fúngicas y algunos quistes parasi­ a bacterias o células inflamatorias. se tarios prefiere a la tinta china y a preparaciones de KOH Requiere el uso de microscopio de fluo­ rescencia Auramina-rodamina Es útil para búsqueda de AAR en una Extensiones concentradas de sedimentos variedad de muestras clínicas. Aplicación Resultados esperados Comentarios Tinciones y métodos microscópicos para la detección rápida de microorganismos en muestras y materiales   infectados (continuación) Técnicas de identificación Tinción o método Naranja de acridina Es eficaz para diferenciar verdaderos mi­ . especialmen. las más contaminadas con flora normal Tinción preferida para microorganismos AAR. por su rendimiento en el cribado de gran número de muestras Requiere el uso de microscopio de fluo­ rescencia 33 .nú­ cleos de las bacterias.Tinción de fluorocromo fijada a los Requiere el uso de microscopio de fluo­ cro­ organismos de artefactos.

espirales o helicoidales. etc. El aspecto de las bacterias en el microscopio permite plantear las siguientes cuestiones clave para el diagnóstico microbiológico: • ¿Qué características tintoriales presentan las imágenes o elementos visualizados en las preparaciones?: ¿se trata de bacterias gram-positivas o gram-negativas?. tanto en pautas terapéuticas empíricas de antimicrobianos. agrupamientos ordenados o desordenados. pero no permiten el aislamiento de una sola especie bacteriana a partir de muestras propensas a la contaminación con un gran número de microorganismos comensales. sistemas indicadores y tampones que ayudan a la . • ¿Cuál es su disposición y estructura individual o integrada?.   Identificación presuntiva por la morfología de las colonias Gracias al cultivo microbiológico se obtiene información adicional que es muy valiosa para aislar e identificar a los microorganismos. pequeñas. Los medios de cultivo sólidos pueden clasificarse en: 1.   “Medios selectivos”: ayudan en el aislamiento de especies de importancia médica en presencia de especies comensales. cocos. racimos. mediante la adición de sustancias inhibidoras. difteromorfos o corinebacteriformes. ¿aparecen las células en forma separada o configurando cadenas. recuperan o aislan por cultivo. o sólo parcialmente? • ¿Cuál es la morfología de las células bacterianas visualizadas?: bastones o bacilos. técnicas de biología molecular). 2. de dimensiones bacterianas o de aspecto fúngico (levaduriforme o filamentoso micelial)? 3. parejas. •   Puede proporcionar ayuda para orientar la asistencia. ¿son bacilos ácido-alcohol resistentes (BAAR). pleomórficas (forma variable).    “Medios no selectivos” (agar sangre y agar chocolate): posibilitan el crecimiento de muchas especies diferentes de bacterias. cocobacilos. o no.34 Microbiología aplicada al paciente crítico •   Puede indicar la conveniencia de aplicar otras técnicas de diagnóstico rápido (detección de antígenos o de anticuerpos. •   Guía la calidad del proceso que exige concordancia entre los microorganismos que se observan en la visión directa y los que se obtienen.3. tétradas.? y… • ¿De qué tamaño son las células?: ¿grandes. como en la adopción precoz de medidas preventivas y de control epidemiológico.

se deben apreciar las principales características de las colonias: tamaño (en general. • a-hemólisis: eliminación parcial de la sangre en torno a la colonia. Reacciones en el medio de agar usadas para la identificación de bacterias: 1. indicadores de pH y otros componentes meta- . sirve de ayuda para la identificación presuntiva. estreptococos del grupo viridans). forma.). agar CLED. y debe valorarse frontalmente y por transiluminación. de los estreptococos.: Streptococcus pyo­ genes. a veces.Técnicas de identificación 35 detección diferencial (agar MacConkey. agar VCAT o VCN). densidad. orina o exudados genitourinarios). pneumoniae. con brillo metálico (P. púrpura (Chromobacterium violaceum) o marrón negruzco (Prevotella melanino­ ge­ nica). originando una decoloración verduzca en el medio (ej. Streptococcus agalactiae. agar XLD. consistencia y olor. superficie. Se utilizan para sembrar diferentes tipos de muestras contaminadas (intraabdominales. Es posible hacer una identificación preliminar de muchas bacterias importantes en la clínica. Tipo de hemólisis en el medio de agar sangre. borde. azul (Kluyvera spp. Cambios en medios diferenciales: en los medios de cultivo diferenciales se incluyen diversos colorantes. Producción de pigmentos en medio de agar: es una de las características inherentes de cada microorganismo específico y pueden estar confinados a la propia colonia o colorear el medio: verde. las bacterias gram-positivas producen colonias algo más pequeñas que las gram-negativas). 2. basándose en unas pocas y sencillas características macroscópicas de las células apreciables en su disposición en forma de colonias sobre los medios de cultivos en que crecen y se aislan. La hemólisis es una reacción observada en el medio circundante o subyacente a la colonia. requiere una evaluación de las colonias con una sistemática bien estructurada. color. aeruginosa). Listeria monocytogenes). grado de elevación. rojo-rosado (Serratia marcescens).: S. después de 24-48 h de incubación. Características macroscópicas de las colonias: Después de un examen visual del desarrollo en la superficie de las placas de agar. particularmente. heces. • b-hemólisis: eliminación completa de la sangre circundante o subyacente a las colonias por lisis completa de los hematíes (ej. La interpretación de los cultivos primarios.

En la tabla 4 se resumen los principios.  Baterías y pruebas adicionales En la práctica. muy útiles en determinados tipos de muestras. los modos de acción y las aplicaciones de algunos de estos procedimientos. 1) o usando una batería de pruebas simultáneas que permita la identificación aproximada o defi- . con un algoritmo de identificación consensuado o estandarizado (Fig. como los coprocultivos y urocultivos. estas pruebas pueden orientar sobre las técnicas adicionales necesarias para hacer una identificación definitiva. la identificación bacteriana se puede realizar con métodos convencionales o con métodos semi o totalmente automatizados. •   Incrementar la calidad de los cuidados del paciente a través de la comunicación rápida de los resultados.   Pruebas bioquímicas rápidas Existen varias pruebas bioquímicas de realización fácil y rápida sobre colonias aisladas a partir de medios de cultivo que permiten la diferenciación presuntiva rápida entre grupos de microorganismos o entre especies bacterianas. valorando la correlación de los resultados generados con la identificación esperada. 3. Crecimiento en medios líquidos: hay claves importantes para la identificación de los microorganismos que pueden ser detectadas observando el crecimiento en los medios líquidos. en el caldo de tioglicolato o en otros como el Brain-Heart-Infusion (BHI).5.4. 3. aumentando el coste-efectividad de las pruebas microbiológicas (diferenciación de patógenos potenciales de la flora normal). que actúan como indicadores de las actividades enzimáticas y ayudan a identificar a las bacterias aisladas.36 Microbiología aplicada al paciente crítico bólicos. La capacidad de la morfología colonial para hacer una identificación presuntiva permite: •   Realizar un diagnóstico presuntivo rápido en un momento de necesidad crítica basado en el juicio razonado del microbiólogo. especialmente. Los métodos convencionales se suelen llevar a cabo en forma de cascada decisoria. de los procedimientos automatizados y de otros sistemas de identificación comercial disponibles (evitar interpretaciones erróneas. especialmente. •   Tener un papel significativo en el control de calidad. debidas a inóculos mixtos que alterarían la identificación). Además.

Identificación de estreptococos del grupo A de naftilamida) amino-peptidasa Lancefield. coli. sangre o LCR Catalasa Solubilidad en bilis PYR (L-pirrolidonil-B. Proteus. Diferencia. Vibrio y Campylobacter Catalasa Diferenciación de estafilococos (reacción + con burbujeo) de estreptococos (reacción -) y de Listeria de los estreptococos Identificación presuntiva de Streptococcus pneumoniae (colonias lisadas) en cultivos de esputo. Neisseria lactamica de especies patógenas de Neisseria Oxidasa Citocromo C oxi­ Diferenciación entre los no-fermentadores dasa (reacción +.L. Proteus vulgaris Determina la fermentación de lactosa (color amarillo) en fermentadores lentos de la lactosa. Aeromonas. Siempre se parte de una identificación preliminar (basada en la tinción de Gram. etc.pirroglutamil. . color azul-morado). modos de acción y aplicaciones de algunas pruebas bioquímicas rápidas Enzima bacteriana Aplicaciones Indol ONPG Triptofanasa b-galactosidasa Reacción positiva (color rojo) identifica a E. color rojo) para Cryptococcus. por ej.. también ayuda a la identificación de Neisseria. morfología colonial. Campy­ lobacter jejuni y Listeria Diferencia S. Diferencia Enterococcus de los es­ treptococos del grupo D (reacción +. Prueba  Principios. color rojo brillante) Ureasa (rápida) Ureasa Prueba de cribado (positiva.Técnicas de identificación 37 Tabla 4. Klebsiella y Yersinia ente­ rocolitica Especiación de Streptococcus agalactiae. aureus de estafilococos coagulasa negativos Hipurato (rápido) Plasmocoagulasa nitiva.) que permite simplificar la batería a un mínimo de pruebas necesarias y apropiadas.

se realiza una batería de pruebas bioquímicas con la que se identifica a los que se aíslan más frecuentemente en nuestro medio. . Phoenix® o Wider®).38 Microbiología aplicada al paciente crítico Gram y morfología Coco gram-positivo Catalasa Negativa Positiva Coagulasa Negativa ECN Positiva Staphylococcus aureus No coco gram-positivo Figura 1. ya que existe una gran variedad de géneros. crecimiento en forma de satélite con una cepa de S. Además. lo más habitual es utilizar galerías comerciales (API rapid ID 32 STREP®. piracinamidasa.   Ejemplo de identificación por algoritmo en cascada. hidrólisis del hipurato. y en algún caso. la especie (patrón hemolítico. Si interesa la identificación de la especie. que permitan identificar el género. aureus hemolítica. Por otra parte. ECN: estafilococos negativos para la coagulasa. Para la identificación de los bacilos gram-negativos (BGN) aerobios. para la identificación de los cocos gram-positivos catalasa negativos. prueba del CAMP. se aconseja una identificación en cascada con unas pocas pruebas convencionales. En la identificación de los cocos gram-positivos catalasa positivos es muy importante diferenciar a Staphylococcus aureus (coagulasa positivo) del resto de los estafilococos coagulasa negativos (ECN). conocer el fenotipo de sensibilidad antibiótica de una determinada especie ayuda de forma determinante a la identificación final. MicroScan Walk-Away®. Por ello. la identificación preliminar es esencial. del tipo de las enterobacterias. solubilidad en bilis y optocina). Vitek2®.

la diferenciación preliminar debe hacerse por la morfología de la colonia. Una identificación definitiva se puede realizar con galería de pruebas como el API rapid ID 32 A®. identifican bien a los BGN del tipo de las enterobacterias y a los BGN no fermentadores. Todos los sistemas automáticos actuales son parecidos en cuanto a rendimiento de porcentajes de identificación. los métodos auto­ máticos se deberían utilizar para la identificación sistemática en el laboratorio de microbiología. dado que en su base de datos incluyen a la gran mayoría de las bacterias clínicamente importantes. Phoenix® (Becton-Dickinson) y Wider® (Soria Melguizo). La principal característica de estos métodos es su fácil y cómoda realización. el microbiólogo debe comprobar que los resultados de los métodos automáticos se corresponden con los de otras pruebas y con su sospecha diagnóstica. MicroScan Walk-Away ® (Dade). o el API 50 CHB® para el género Bacillus o mediante métodos automáticos. permitiendo conseguir la identificación de la especie. Además. a algunos estreptococos alfa-hemolíticos y a los estafilococos. que permite. hemólisis. etc. características al microscopio. estos sistemas requieren controles de calidad estrictos. Para la identificación de bacterias anaerobias es importante realizar una identificación preliminar. La diferencia fundamental se encuentra . En general. en función de la morfología.Técnicas de identificación 39 Para la identificación de los bacilos gram-positivos de los géneros Coryne­ bacterium y Bacillus. Corynebac­ terium y Bacillus) y levaduras. como el sistema Phoenix®. conocer el género. presencia de esporas. 3. a los enterococos. tinción de Gram. además. a los estreptococos beta-hemolíticos.   Métodos semi o completamente automatizados En el mercado existen varios métodos de identificación semiautomáticos y automáticos que superan a los métodos convencionales por su fácil realización y el menor tiempo que requieren para alcanzar una identificación definitiva de la especie. BGP (como los de los géneros Listeria. Por lo tanto. Aunque para una mayor seguridad en la identificación se puede utilizar también un sistema de galerías para los bacilos corineformes (API Coryne)®. muchos de estos sistemas permiten realizar las pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos al mismo tiempo. En general.6. Algunos sistemas disponen de paneles especiales para Streptococcus pneumoniae. Entre los métodos de identificación automáticos comercializados se en­ cuen­ tran Vitek2® (bio-Mérieux). color. pero estos métodos no permiten siempre la identificación de todas las bacterias. en algunos casos. disposición y patrón de hemólisis.

colonizante o contaminante. o en documentos de consenso. al menos. identificación y análisis de las bacterias que causan enfermedades en los seres humanos es una de las principales funciones del microbiológo clínico. adquirir nuevos genes y sufrir mutaciones plantea continuos retos diagnósticos al microbiólogo en relación con el aislamiento y caracterización de los microorganismos asociados a las infecciones en humanos. así como de sus fenotipos. –   Clasificación e identificación de los microorganismos después de haber sido aislados. como el Vitek2®. •   La capacidad de las bacterias para cambiar rápidamente. para tres de las áreas fundamentales de la microbiología médica: –  Cultivo de los microorganismos a partir de las muestras de los pacientes. Resumen •   El aislamiento. El conocimiento de la estructura. –  Predicción e interpretación de su posible papel patógeno.40 Microbiología aplicada al paciente crítico en las pruebas de sensibilidad y en el sistema experto que utilizan. y que son actualizadas periódicamente. Unos emplean simples reglas que aplican a los resultados y otros. •   El conocimiento de los requerimientos nutricionales de una bacteria concreta permite al microbiólogo seleccionar los medios apropiados de cultivo primario y optimizar las posibilidades de aislamiento del patógeno. utiliza el AES (sistema experto avanzado) que está basado en el reconocimiento fenotípico del mecanismo de resistencia de la bacteria deducido a partir de la CMI y aplicando la comparación con una base de datos que incorpora los resultados de las CMI publicadas en la bibliografía. basadas en las diferencias de la estructura de la pared celular. patrones y mecanismos de resistencia. •   La determinación de las características tintoriales. es el primer paso hacia la clasificación taxonómica de la bacteria. •   Las diferencias bioquímicas y metabólicas entre microorganismos conforman la base de la mayoría de los sistemas de identificación bacteriana actualmente en uso. . fisiología y metabolismo bacteriano es muy importante.

Técnicas de identificación 41 4. Janda EM. 4. Texto y Atlas Color. et al. López Hontangas JL. 5. Saunders Company. 8ª  ed. Washington: ASM Press. 3. Philadelphia. Textbook of diagnostic microbiology. . 5ª ed. En: Enfoque clínico de los grandes síndromes infecciosos. 1995. Murray PR. 2003. 2.B. 2006. Pennsylvania. Identificación bacteriana. Enferm Infecc Microbiol Clin.  BIBLIOGRAFÍA 1. Gobernado M. 2):54-60. Métodos microbiológicos en el diagnóstico de infecciones. editors. Manuselis G Jr. Mahon CR. Manual of Clinical Microbiology. Koneman EW. Gobernado S. López-Hontangas JL.21(Supl. 2003. Jorgensen JH. Baron EJ. Córdoba J. Allen SD. Diagnóstico Microbiológico. 2ª ed. USA: W. Madrid.. 1999. Editorial Médica Panamericana.

Sign up to vote on this title
UsefulNot useful