EL TIEMPO NO ESPERA A NADIE (los ritmos biolgicos tampoco)

Diego A. Golombek Universidad Nacional de Quilmes/ CONICET

Dnde est el tiempo?

Entre el da y la noche hay un territorio inexplorado. No es sol ni es sombra: es tiempo Octavio Paz

Otros dioses

En aquella desolada regin, encontr un pequeo rancho habitado por un gaucho y su familia y pas la noche all. Los chajs andaban alrededor del rancho y parecan tan mansos como las aves domsticas y cuando sal a buscar algn sitio donde mi caballo pudiera hallar buen pasto, los pjaros no echaron a volar, sino que se apartaron un poco como para dejarme pasar. Seran las nueve y estbamos comiendo, cuando toda aquella multitud de aves que cubra un espacio de varios kilmetros, prorrumpi en un tremendo concierto nocturno. Es imposible describir el efecto que produca ese inmenso coro nunca odo. Dejo que el lector trate de imaginar a medio milln de gritos, cada uno ms fuerte que los que se pueden or en Regcnts Park, estallando en la atmsfera silenciosa de la solitaria llanura, en medio de la oscuridad noche. Una peculiaridad de ese inmenso coro, mas que el ruido atronador de la marejada cuando choca los acantilados de una costa, es que me era posible distinguir centenares y hasta millares de voces individuales. Me olvid de mi cena, me quede inmvil, sobrecogido de asombro mientras el aire y hasta el frgil rancho parecan temblar bajo la accin de aquella tempestad de ruidos. Cuando ces y quedamos en silencio, el gaucho me dijo, sonriendo: Estamos acostumbrados a esto, seor; todas las noches tenemos este concierto. Era un concierto por el que vala la pena haber galopado treinta leguas para orlo.(*) (*) Extrado de El naturalista en el Plata, de Guillermo Enrique Hudson, Ed. Elefante Blanco, ciudad de Buenos Aires.

Linneo

El reloj floral de Linneo (siglo XVIII), con el cual puede saberse la hora (entre las 6 AM y las 6 PM) de acuerdo a qu flores estn abiertas o cerradas en el campo.

de Mairan

La primera demostracin de un ritmo circadiano por Jean Jacques dOrtous de Mairan en 1729

Darwin

Fliess

Los malditos biorritmos

What synchronizes an organisms circadian clocks? Circadian clock genes have popped up in all types of creatures and in many parts of the body. Now the challenge is figuring out how all the gears fit together and what keeps the clocks set to the same time.

QUIMICO

Los ritmos ocurren en todos los niveles de organizacin

CELULAR

FISIOLOGICO

CONDUCTUAL

POBLACIONAL

CELULAR FISIOLGICO CONDUCTUAL

Expresin gnica, actividad elctrica, sntesis y liberacin de neurotransmisores. Temperatura, presin arterial, frecuencia cardaca, niveles de hormonas en sangre. Conducta alimentaria, ciclo sueo/vigilia, actividad locomotora.

Y en todo bicho que est en un planeta que gira!

MODELOS EN CRONOBIOLOGIA Bacterias Neurospora Algas (Gonyaulax) Plantas (Arabidopsis) Drosophila Cangrejos Moluscos (Bulla) Anfibios (Xenopus) Reptiles (Iguana) Aves Primates/Humanos Gusanos! Roedores (ratn, hamster)

Frecuencias de los ritmos biolgicos

TIPO DE RITMO PERIODO 0,1 seg. 1 seg. ULTRADIANO 6 seg. 60 min. 90 min. CIRCADIANO INFRADIANO 24 horas 28 das 365 das EJEMPLOS Electroencefalograma Ritmo cardaco Ritmo respiratorio Secreciones hormonales Alternancia de estados de sueo Actividad Reposo Temperatura corporal Ciclo menstrual Hibernacin

Otros tiempos

Edad Metabolismo Inters Frmacos

zeitgeber

L:O

reloj

NSQ

ritmos Cmo se pone en hora? Dnde est el reloj? Cmo funciona? Cmo controla los ritmos del cuerpo?

Actividad

Endgeno o exgeno?

Nosotros tenemos un reloj adentro Dnde ...?

El tiempo entra por los ojos, eso lo sabe cualquiera. J. Cortzar

El tiempo entra por los ojos. Eso lo sabe cualquiera Julio Cortzar

Los ncleos supraquiasmticos (NSQ) son la sede del reloj biolgico en mamferos
CARACTERISTICAS NEUROQUIMICAS EXPRESION GENES RELOJ Regin dorsomedial EXPRESION RITMICA
AVP CALB VIP
QUIASMA PTICO

Regin ventrolateral EXPRESION INDUCIDA POR LUZ

AVP VASOPRESINA VIP PEPTIDO VASOACTIVO INTESTINAL

NSQ

CALB CALBINDINA 3V: TERCER VENTRICULO

QO

QO: QUIASMA OPTICO

LOS NSQ COMO UN RELOJ BIOLGICO Localizacin Ablacin Autonoma Explanto Clulas Transplante

40 X

Mutaciones circadianas
Hamster Tau Yo soy mutante porque el mundo me ha hecho as...

Ratn Clock

CMO SE SOSTIENE LA ACTIVIDAD CIRCADIANA DE UNA CLULA?

Mecanismo de oscilacin: el reloj molecular

Degradacin va proteosoma CRY PER

CLOCK BMAL

CRY PER CKI Per PER CRY PER

E-box

Genes blanco

Cry

Rev

NUCLEO

otros

CITOPLASMA

Qu le dice la luz al reloj?

La luz es el principal agente sincronizador del reloj

Pelcula Quicktime

Subjective Night 0

Subjective Day Hours 24

Light pulse

Phase advance

Light pulse

Phase delay

Subjective Day

Subjective Night

Photic PRC advances

0 12 24

Phase shifts

delays

Circadian time (hours)

Light
Ca2+ Glu NMDA-R

RyR

Ca2+
IP3R

Segundos mensajeros Enzimas

GMPc

ER

Genes reloj

fase

Ca2+ Glu NMDA-R

Luz

Ca2+ Ca2+-Calmodulina CaMKII

Noche temprana
RyR ER IP3R

NOS

Noche tarda
NO
GC cGMP PKG

NO

PDE

Ca2+
? Retraso de fase

? Adelanto de fase

cGMP in the SCN

A
B
3V

SCN

OC

cGMP-IR in the hamster suprachiasmatic nucleus using (A) avidinebiotine and DAB as a staining or (B) avidine-rhodamine and fluorescence. Abbreviations: SCN, suprachiasmatic nucleus; 3V, third ventricule; OC, optic quiasm

Rol de cGMP en el sistema circadiano Glial o neuronal?

A
3V

B
3V

C
3V

cGMP/ GFAP

OC

OC

OC

E
3V

F
3V

G
3V

cGMP/ NeuN

OC

OC

OC

Barras de escala: 100 m (A-C, E-G) y 20 m (D, H).

LD
fmoles cGMP / g protein
0.35 (n=11) (n=10) 0.30 0.25 0.20 0.15 0.10 0.05 (n=17) (n=11) (n=10) (n=9) (n=13)

A
(n=9) (n=13)

Variaciones diarias y circadianas de cGMP en los NSQ

(n=10)

(n=17) (n=10)

**

**

8 12 16 20 24

8 12 16 20 24

DD
fmoles cGMP / g protein
0.35 0.30 0.25 0.20 0.15 0.10 0.05

B
#
(n=5) (n=5) (n=5) (n=4) (n=4)

#
(n=5) (n=5) (n=5)

(n=6)

(n=6) (n=6)

Valores mximos durante el da

(n=6)

**

**

8 12 16 20 24

8 12 16 20 24

CT

Los niveles y actividad de PKG tambin son rtmicos!

1400

fmoles Pi / g protein x 5 min

fmoles Pi / g protein x 5 min

1400 1200 1000 800 600 400 200

B
#

**

1200 1000 800 600 400

**

#
200

4 8 12 16 20 24

4 8 12 16 20 24

4 8 12 16 20 24

4 8 12 16 20 24 CT

ZT

20 24 04 08 12 16

20 24 04 08 12 16

La va PKG est involucrada en los avances de fase fticos

A
0.18 0.16

B
cGMP levels in the SCN
300

cGK activity in the SCN

*
fmolesPi/ g protein x 5 min
250

pmoles cGMP / g protein

0.14 0.12 0.10 0.08 0.06 0.04 0.02 0.00 CTRL Pulse CTRL Pulse

200

150

100

50

0 CTRL Pulse CTRL Pulse

CT14

CT 18

CT14

CT 18

A: a 5-min light pulse increases cGMP levels at CT 18 but not at CT 14 (modified from Ferreyra and Golombek, 2001). B: PKG activity significantly increased after a 5-min light pulse at CT 18 but was unaffected by the same photic stimulus at CT 14 (Golombek et al, 2004)

La inhibicin de la va bloqueda los cambios de fase

phase shift (h)

Inhibition of light-induced phase advances by ODQ (GC blocker) or KT-5823 (PKG blocker)

0 Vehicle ODQ KT-5823

180

B
pmol cGMP/g prot x 15 min

pmol cGMP/ g prot x 30 min

La actividad de PDE es rtmica en los NSQ

**
150 120

0.8

0.6

90

0.4

60 0.2 30

0.0

ZT4

ZT16

ZT4

ZT16

Cmo usar esto en trminos prcticos? Qu sucede si se inhibe la PDE de GMPs?

VIAGRA PARA TODO EL MUNDO!

Sildenafil acelera la resincronizacin luego de un avance de 6 horas en el ciclo luz/oscuridad

Vehculo +6h avance

Sildenafil +6h avance

***
Adelanto de fase (minutos)
Nmero de das necesarios para alcanzar la resincronizacin
400

300

*** * *** *** **

14 12 10 8 6 4 2 0

200

100

Vehculo Sildenafil (3,5 mg/kg, i.p.)

0 2 4 6 8 10 12 14 16 18

Das post adelanto de 6 horas del ciclo LD

Vehculo 1 mg/kg 3.5 mg/kg 10 mg/kg sildenafil sildenafil sildenafil

CONCLUSIONES
Las enzimas CaMKII y nNOS participan en la va de sealizacin ftica, mediando tanto los retrasos como los adelantos de fase. El xido ntrico podra actuar como un mensajero intercelular que comunica a las distintas regiones de los NSQ. La va cGMP GC PKG es especfica para adelantos de fase y est implicada en la activacin por luz de los genes reloj per. La isoforma 5 de PDE (PDE-5) est presente en el reloj biolgico de mamferos. El incremento en los niveles de cGMP, a travs de la inhibicin de PDE-5, acelera la resincronizacin frente a adelantos del ciclo luz/oscuridad.

REPERCUSIONES

REPERCUSIONES

REPERCUSIONES

The IgNobel prize

Y CON ESTO QU?

Ritmos circadianos en Humanos

Hormonas: prolactina, hormone de crecimiento, insulina, cortisol, TSH, melatonina. Sist. Cardiovascular: presin sanguinea, frecuencia cardaca, volemia y flujo, funcin muscular cardaca y respuesta a hormonas. Reactividad bronquial. Funcin renal y formacin de orina: volumen de orina, electrolitos en orina. Sistema inmune y funciones plasmticas celulares. Temperatura. Actividad. Estado de nimo. Concentracin.

Yo, reloj
Mayor frecuencia de relaciones sexuales Comienzo del descenso de temperatura y de la secrecin de melatonina Mayor tolerancia al alcohol

11:00 P.M.

medianoche 1:00 A.M. Comienzo de trabajos de parto

12:00

9:00 P.M.

2:00 A.M.

Sueo profundo

3:00 A.M.

Pico en procesos de reparacin

8:00 P.M.

4:00 A.M.

Temperatura corporal mxima Presin sangunea mxima Mayor eficiencia cardiovascular y fuerza muscular Mejor tiempo de reaccin Mxima coordinacin manual

7:00 P.M.

Mayor nmero de nacimientos espontneos

5:00 A.M.

6:00 P.M.

Temperatura corporal mnima Alta secrecin de cortisol

6:00 A.M.

5:00 P.M.

6:45 A.M. 8:00 A.M.

Aumento agudo de la presin sangunea

3:30 P.M.

2:30 P.M.

Aumento de movimientos de vientre 9:00 A.M. Mnimo peso corporal

10:00 A.M. 12:00

medioda

Aumento en las funciones de alerta

Cronotipos

BUHOS ALONDRAS
Bases fisiolgicas Desarrollo Pautas sociales

Dime con qu genes andas y te dir a qu hora.

Polimorfismos en genes reloj involucrados en diferencias fenotpicas de preferencia diurna.

El perodo endgeno del reloj circadiano de una persona est relacionado con su cronotipo, es decir, con su fenotipo de preferencia diurna. Individuos con preferencia matutina estn asociados a un perodo menor a 24 horas y, de forma inversa, los individuos vespertinos se asocian a perodos mayores.

Alteraciones de los ritmos circadianos humanos

Factores endgenos envejecimiento ceguera enfermedades crnicas alteraciones del sueo trastornos psiquitricos trastornos neurolgicos Factores exgenos trabajo en turnos (Shiftwork) jet-lag

Trastornos circadianos del sueo Insomnio por retraso de fase Insomnio por adelanto de fase Alteraciones perodo Alteraciones de amplitud

Factores endgenos alteraciones del sueo

Insomnio por retraso de fase Insomnio por adelanto de fase Perodo diferente de 24 horas Disminucin de la amplitud

Cronobitico: sustancia que mueve las agujas del reloj Melatonina como cronobitico?

Aplicaciones de la Cronobiologa
Tratamiento de alteraciones en la sincronizacin Aplicaciones ergonmicas Aplicaciones diagnsticas Aplicaciones teraputicas Fototerapia Cronoterapia Actividad fsica Dieta Melatonina Otros frmacos Jet-lag Shiftwork Turnos escolares

Cronofarmacologa

Cuando viajamos a Europa, nuestra alma tarda unos das ms en llegar (Garca Mrquez)

Factores exgenos jet-lag Un estudio de pilotos de aviacin

PORCENTAJE DE PUNTOS LOGRADOS

100

80

60

%
40 20 0

Amrica

Resto

De paso: mayores goleadas a favor 12-0 Ecuador en contra 1-6 Checoslovaquia

A QUE HORA JUGAMOS? Basquetbol Records olmpicos Beisbol Ms de 1 da de incrementa el score en 1.6 puntos Eldescanso desempeo vespertino El Los picoequipos de desempeo est con un de 3 das que viajan de costa oeste a este pierden supera al matutino. El descanso mximo Viajar hacia elde oeste es mejor puntos) ms frecuentemente! records se da(4 entre las que hacia el este 12:00 y las 21:00 h. Hay mejor desempeo luego de viajes hacia el oeste

Factores exgenos trabajo en turnos (Shiftwork)

Aumento de su requerimiento por produccin continua Problemas de sueo y fatiga Aumento de accidentes de trabajo Menor produccin Mayor incidencia de enfermedades Pasible de fototerapia

Entonces perspectivas de aplicacin Tratamiento de trastornos circadianos: -Jet Lag -Shiftwork -Alteraciones de fase del sueo -Sundowning, SAD -Sincronizacin Cronoasesoras

CRONOFARMACOLOGA
Las Cronocintica purgas debern aplicarse de arriba hacia abajo en verano y Cronestesia de abajo hacia arriba en invierno (Hipcrates) Cronergia Cronotoxicologa La estupidez de administrar un medicamento tres veces al da (J. Virey)

Beta-bloqueantes Hipnticos-sedantes Analgsicos Antialrgicos Antitumorales

Ritmos y sociedad?

Es que estamos hechos para un mundo que ya no existe?

O an existe ese mundo?

CAMBIOS FOTOPERIODICOS ANUALES

00:00 21:36 19:12 16:48 14:24 12:00 09:36 07:12 04:48 02:24 00:00 Feb-00 Mar-00 May-00 Ene-00 Ene-00 Ago-00 Sep-00 Oct-00 Abr-00 Jun-00 Jul-00 Nov-00 Dic-00

alba atardecer salida de sol puesta de sol

hora

mes

16:48 15:36 14:24 13:12 12:00 10:48 09:36 08:24 07:12 Oct-00 Abr-00 Mar-00 Mar-00 Nov-00 Jun-00 May-00 Ene-00 Ene-00 Ago-00 Sep-00 Dic-00 Jul-00

horas

fotoperodo (luminosidad) fotoperodo (salida y puesta de sol)

mes

Cronobiologa de la comunidad mapuche de Millan-Curical

Un poco de historia: las crnicas de viajes patagnicos como herramienta biolgica La entrada a la comunidad: historia oral Estructura cclica social y mdica Diarios de sueo Estimacin del tiempo Pruebas fisiolgicas?

Humanos estacionales!

25 verano invierno 20

15

horas

* *

10

0 despertar dormir vigilia

X Data

Formas de despertar por la maana Formas de despertar por la maana

50

40

30

%
20 10 0 gallo famliar despertador solo claridad

Consultas mdicas a lo largo del ao

CONSULTAS MEDICAS
2600

2400

2200

2000

1800

1600

1400 ene feb mar abr may jun jul ago sep oct nov dic

CONSULTAS PARAMEDICAS
170 160 150 140 130 120 110 100 90 ene feb mar abr may jun jul ago sep oct nov dic

Y, por supuesto el horario de verano!

versus

El tiempo es un crculo que se dobla sobre s mismo

En este mundo hay dos tiempos. Un tiempo mecnnico y un tiempo orgnico

En este mundo el tiempo es una dimensin visible En este mundo el tiempo es como el fluir del agua Un mundo en el cual causa y efecto son errticos El tiempo fluye ms lentamente lejos del centro de la Tierra En este mundo, el tiempo es un fenmeno local El tiempo es visible Imaginen un tiempo en el que no hay tiempo. Slo imgenes

Imaginen que la gente vive para siempre Un mundo en el que la gente vive slo un da

El tiempo no es una cantidad sino una cualidad, como la luminosidad de la noche... El tiempo existe pero no puede ser medido

Factores endgenos envejecimiento

Cambios en amplitud Cambios en sincronizacin Desaparicin de neuronas

... el tiempo no espera a nadie Freddie Mercury

Factores endgenos trastornos psiquitricos

Qu es el da y la noche para aqul que est sumido en la tristeza? William Blake La melancola es, en suma, un problema musical, una disonancia,un ritmo trastornado Alejandra Pizarnik

Depresin mayor Enfermedad bipolar Trastorno afectivo estacional

Modelos animales

Hibernacin Cambios dietarios Cambios en el sueo Migracin Fototerapia

El laboratorio de cronobiologa de la UNQ