BIOQUMICA HUMANA: SNTESIS DE PROTENAS / ANTIBITICOS - Cdigo gentico: El conjunto de reglas que establecen una correspondencia entre una

secuencia de nucletidos y uno o ms aminocidos. La mnima unidad de significado del lenguaje de nucletidos son tripletes de dichas molculas. Estos tripletes de nucletidos son llamados codones, y se leen de 5 a 3. El cdigo gentico tiene las siguientes caractersticas: - Especfico: Un codn particular siempre especifica el mismo aminocido. - Degenerado o redundante: Un aminocido puede estar codificado por varios codones. - Casi universal: Comn a todas las especies, habiendo ciertas excepciones. La mutacin ms comn en un gen es la transicin, en la que se sustituye una purina por otra, o una pirimidina por otra, o viceversa. Menos comn es la transversin, en la que se cambia una purina por una pirimidina o viceversa. Estas mutaciones pueden ocurrir por modificaciones qumicas de la base, o por la introduccin de una base incorrecta en la duplicacin del ADN. Las mutaciones de cambio de base pueden ser: - Mutacin sin sentido: Si el cambio de la base genera un codn de terminacin en el ARN que se transcribe a partir del ADN, se produce una terminacin prematura de la protena traducida, que no cumple con su funcin normal. - Mutacin de cambio de sentido: Un cambio en una base produce un codn que codifica para otro aminocido, alterando la estructura primaria de la protena. Dependiendo del sector donde est la mutacin, la protena puede funcionar casi normalmente (mutacin parcialmente aceptable) o puede anular su funcin normal (mutacin inaceptable). - Mutacin no detectable: Debido a que el cdigo gentico es degenerado, la mutacin de una base puede no tener efecto en la protena. Esto es ms probable si la mutacin se produce en el tercer nucletido del codn, que es el ms inespecfico, debido al fenmeno de bamboleo: Hay algunos ARNt que pueden reconocer varios codones distintos, que varan slo en su tercer nucletido (UCU, UCC, UCA, por ejemplo), y que sin embargo se unen al mismo aminocido. Por ello es que no es necesario tener 64 ARNt distintos para leer los posibles 64 codones. Las inserciones o deleciones de nucletidos ocasionan un corrimiento en el marco de lectura, que adems de modificar todos los aminocidos a partir de la mutacin, puede ocasionar una protena ms larga o ms corta, segn se forme un codn de terminacin ms cercano o ms lejano al original. Las mutaciones sin sentido y con cambio de sentido pueden ser corregidas o suprimidas por el ARNt, con mutaciones en el anticodn que las compensen. A estas mutaciones del ARNt se las llamas supresiones intragnicas. El ARNt tambin puede corregir mutaciones por insercin. Hay ARNt que poseen un nucletido extra en el anticodn, y son llamados supresores de corrimiento de marco. Por ejemplo, el anticodn para Glicina CCC se reemplaza por CCCC, para corregir la insercin de una G en el codn del ARNm GGG. MUTACIONES EN HEMOGLOBINA - Hemoglobina S: Es un cambio de A por U en un codn para glutamato, en la cadena beta de la Hb A. Esto origina la Hb S, que debido a la mutacin posee una zona adherente en la cadena beta. Esta superficie es complementaria con la Hb desoxigenada, lo que provoca que las Hb desoxigenadas se unan entre s formando largas cadenas insolubles que deforman al eritrocito y ocasionan anemia falciforme. - Talasemias: Son un grupo de enfermedades en las que hay un desbalance en la proporcin de cadenas alfa y beta. Segn afecte a la beta-globina o a la alfa-globina, son: - Beta-talasemias: En una variedad de beta-talasemia, una mutacin determina la terminacin temprana de la beta-globina. Esto hace que no pueda asociarse con la alfa-globina, causando que se acumule y precipite. Esto daa la membrana plasmtica del eritrocito y produce anemia hemoltica. - Alfa-talasemias: En algunos casos, las alfa-globinas mutadas son muy largas y se hallan en poca cantidad. Su largo se debe a una mutacin en el codn de terminacin original, y su pequea cantidad podra deberse a una sntesis disminuida, o a una destruccin aumentada. - Hemoglobina de McKees Rocks: Un codn para tirosina muta a uno de terminacin, lo que produce una Hb con altsima afinidad al O2. Al haber hipoxia tisular (porque la Hb no libera el O2 a los tejidos) se estimula la produccin de eritrocitos, dando lugar a la policitemia.

TRADUCCIN ARN DE TRANSFERENCIA Los ARNt son molculas adaptadoras entre los ARNm y los aminocidos. Los ARNt tienen dos sectores funcionales importantes: - Anticodn: conjunto de tres nucletidos, cuyas bases son complementarias con las del cdn del ARN. - El extremo 3, donde va a ser unido un aminocido en particular. Siempre su secuencia de bases termina en CCA. El ARNt sufre un procesamiento post-transcripcional, en el cual algunas de sus bases son modificadas para generar bases alteradas. Estas bases alteradas le dan al ARNt la capacidad de adoptar su forma tridimensional caracterstica, y se hallan en los brazos laterales de la molcula. La modificacin ms comn es el agregado de un grupo metilo. El loop T contiene pseudouridilato, y el loop D contiene dihidrouridina. RIBOSOMAS Los ribosomas estn formados por protenas + ARNr. Tienen una subunidad mayor y una subunidad menor, formados por distintos ARNr. En eucariotas: - La subunidad mayor es de 60S, y contiene ARNr 5s, 28s y 5,8s. - La subunidad menor es de 40S, y contiene slo ARNr 18s. En procariotas: - La subunidad mayor es de 50S, y contiene ARNr 5s y 23s - La subunidad menor es de 30S, y contiene slo ARNr 16s. En eucariotas, los ARNr se sintetizan inicialmente en el nucleolo, donde se genera un gran ARNr precursor 45s formado por la ARN pol I, que luego es cortado en tres ARNr. - Los ARNr de origen nucleolar son los 18s, 28s y 5,8s, y son transcriptos por la ARNpol I. - El ARNr 5s tiene un origen distinto, se halla codificado en los intrones de otros genes, y est codificado en el ncleo y por la ARNpol III. El clivaje del ARNr precursor est catalizado por otros ARN pequeos, llamados snoRNA (ARN pequeos nucleolares), que son ribonucleasas. Una vez separadas las subunidades, adoptan su lugar definitivo en las subunidades. Finalmente, a la subunidad grande se le incorpora el ARN 5S, y cada subunidad se transporta por separado al citoplasma. Los ribosomas son enormes ribozimas, es decir, estructuras de ARN con actividad cataltica. Las protenas que forman parte del ribosoma se sintetizan en el citosol, son importadas al ncleo y all se ensamblan con el ARNr correspondiente, para formar una subunidad. Luego las subunidades son exportadas del ncleo, y las protenas ribosomales no son importadas nuevamente porque al formar parte de una subunidad ribosomal, esconden su NLS. El alto contenido de ARN de los ribosomas explica su alta fidelidad, ya que la traduccin se basa en la complementariedad de bases. SNTESIS PROTEICA Los aminocidos por s mismos no tienen afinidad por los nucletidos, sino que deben combinarse con molculas adaptadoras, que son los ARNt para traducir el codn del ARNm a un aminocido. Esto se logra en 2 etapas: 1) Activacin de los aminocidos Se forma un anhdrido mixto, aminoacil-AMP-enzima. Esta reaccin est catalizada por las aminoacilARNtsintetasas, que slo reconocen L-aminocidos. 2) Reconocimiento Comprende la unin del aminocido activado al ARNt especfico, por un enlace ster en OH de la adenosina terminal, en el extremo 3 del ARNt (CCA). El grupo carboxilo del aminocido activado se une al OH 3 de la ribosa del adenilato del ARNt. La unin ster que se forma tiene una gran energa libre negativa para su hidrlisis. Esta es la fuerza que impulsar el enlace peptdico posterior. 1a) INICIACIN DE LA TRADUCCIN EN BACTERIAS El ARNm procariota es policistrnico, o sea que codifica para varias protenas.

Primero se ensambla un complejo de iniciacin 70S, compuesto por un ribosoma funcional 70S (las subunidades unidas junto con un ARNm) ms un ARNt iniciador (ARNti). Este ARNti se localiza en el sitio P del ribosoma, apareado con el codn inicial del ARNm. El proceso es complejo, y requiere de factores de iniciacin. La precisin de la asociacin del ARNt con el codn es fundamental, pues implica la identificacin correcta del triplete AUG (codn de iniciacin) que abre el marco de traduccin. En bacterias, la subunidad 30S del ribosoma es guiada hacia la zona de iniciacin del ARNm por una secuencia nucleotdica corta, ubicada a unos 10 nucletidos hacia el extremo 5 del codn de iniciacin AUG. Esta secuencia se denomina de Shine-Dalgarno. La secuencia de S-D se complementa con una secuencia del ARN 16S presente en la subunidad 30S del ribosoma. El proceso de iniciacin tiene varias etapas: 1. El factor de iniciacin IF-3 se une a la subunidad 30S. El IF-3 promueve la disociacin del ribosoma 70S en sus subunidades. 2. IF-2 se requiere para la seleccin del ARNti. El IF-2 es una protena que tiene un sitio de unin para GTP. IF-2 forma un complejo con GTP y ARNti. Este complejo ternario, junto con el ARNm y otra protena, IF-1, se unen a la subunidad 30S, formando el complejo de iniciacin 30S. Complejo de iniciacin 30S: (IF-2 + GTP + ARNti) + ARNm + IF-1 + (subunidad 30S + IF-3) 3. Se liberan IF-1 y IF-3. Luego de esta liberacin, la subunidad 50S se une al complejo de iniciacin 30S, ya que al liberarse IF-1 y IF-3 aumenta su afinidad. As se forma el complejo de iniciacin 70s. Esto causa que el IF-2 hidrolice el GTP a GDP+Pi, y que IF-2 se libere del complejo. La hidrlisis de GTP produce un cambio conformacional en la subunidad 50S, de modo que el complejo de iniciacin 70S se acomoda para aceptar la unin de los siguientes aminoacilARNt. El nico aaARNt que puede formar el complejo de iniciacin es el ARNti (ARNt + formilmetionina). El ARNt en realidad se une a la metionina, pero una enzima la transforma en formilmetionina. El loop T del ARNt est involucrado en la unin del aaARNt al ribosoma. El loop D del ARNt es importante en el reconocimiento de un ARNt por las aminoaciltransferasas. 1b) INICIACIN DE LA TRADUCCIN EN EUCARIOTAS El ARNm eucariota sufre un procesamiento para pasar del ncleo al citosol. Para acceder al ARNm se necesitan de varios factores de iniciacin (eIF) que lo liberen de sus agregados. Hay 4 pasos en la iniciacin eucariota: 1. Disociacin ribosomal: Los eIF-1A y eIF3 permiten que la subunidad 40S permanezca disociada de la 60S. El eIF-3 se une a la subunidad 40S bloqueando su unin con la 60S. 2. Formacin del complejo de preiniciacin 43S: Primero se forma un complejo ternario, compuesto por: eIF-2, que se une a GTP, y al ARNt de iniciacin unido a metionina (met-ARNti). Entonces, el complejo de preiniciacin 43S est formado por: (subunidad 40S + eIF3 + eIF-1A) + (eIF-2 + GTP + met-ARNti) Es importante aclarar que el met-ARNtm (que lleva metionina a codones ubicados en sitios que no son el de iniciacin) no es reconocido por el eIF-2, y por lo tanto, no puede formar parte del complejo. 3. Formacin del complejo de iniciacin 48S: El ARNm eucariota tiene agregados no codificantes en sus extremos (Cap en 5 y poly-A en 3). Estas modificaciones postranscripcionales son importantes en la velocidad de traduccin y estabilidad del ARNm. a) El ARNm forma se une con eIF4-F, que es un complejo proteico formado por eIF4-E y el complejo eIF4-G + e-IF4-A. El eIF4-F se une al Cap del ARNm. b) Luego, el eIF4-A y el eIF4-B se unen y reducen la estructura 2 del extremo 5 por medio de actividad ATPasa y helicasa. La hidrlisis de ATP es el determinante de la velocidad de la traduccin. c) El IF-3 que forma parte del complejo de preiniciacin 43S, se une con alta afinidad con el componente eIF4-G de la eIF4-F, enlazando as a la subunidad 40S con el complejo multiproteico. d) Comienza entonces la bsqueda y ubicacin del complejo de preiniciacin sobre el codn de iniciacin del ARNm. Una vez que se encuentran y unen, se forma el complejo de iniciacin 48S. Adems del codn AUG, hay una secuencia cercana llamada secuencia de consenso de Kozaak, que contribuye a la precisin de la formacin del complejo.

La cola poly-A del ARNm tambin es importante, ya que una protena se una a esa cola y a los factores de iniciacin unidos al Cap, formando as una estructura circular que ayuda a dirigir la subunidad 40S hacia el codn de iniciacin. 4) Unin de la subunidad 60S y formacin del complejo 80S: Cuando la subunidad pequea (formando parte del complejo de iniciacin 48S) llega al codn de iniciacin se detiene, y se une a la subunidad 60S con la intervencin de eIF-5. As se forma el complejo de iniciacin 80S. Aqu se liberan los factores de iniciacin que formaban parte del complejo 48S. y se hidroliza el GTP unido al eIF-2. Una vez ubicado el Met-ARNti sobre el ribosoma, el eIF-2 se libera unido a GDP (inactivo). Hay otro factor, el eIF-2B, que se une al eIF-2 inactivo, y lo hace afn al GTP, y as vuelve a estar listo para un nuevo ciclo. Las diferencias principales entre traduccin eucariota y procariota estn resumidas aqu: Eucariotas * Usa met-ARNt para iniciar la traduccin. * met-ARNti, GTP y eIF-2 forman un complejo aislado independiente de la subunidad 40S. * Los factores de iniciacin son ms numerosos que en bacterias y sin protenas compuestas por mltiples subunidades * Se requiere la presencia del Cap 5 terminal en el ARNm para iniciar la traduccin. Procariotas * Usa fenilMet-ARNt para inicar la traduccin. * fMet-ARNt forma un complejo con GTP y IF-2. * Hay slo 3 factores de iniciacin. * No requiere estructura Cap en el ARNm. 2) ELONGACIN Consiste en la ubicacin de todos los aminocidos, excepto el primero que es Met, e involucra 3 pasos que se repiten para cada aminocido entrante. 1) Unin del aminoacil-ARNt al sitio A En el sitio A del ribosoma llega el aminoacil-ARNt nuevo. Luego de la iniciacin, el fMet-ARNt (bacterias) o Met-ARNt (eucariotas) est ubicado en el sitio P del complejo de iniciacin 70S u 80S. El prximo aminoacil-ARNt llega al sitio A con ayuda del factor de elongacin EF-1 (eucariotas) o EF-Tu (bacterias), con hidrlisis de GTP. En bacterias, al hidrolizarse el GTP, se fija el aminoacil-ARNt y se libera el GDP junto al EFtu (liberacin de complejo EFtu-GDP). El GDP se libera del complejo, cuando el complejo se une a otro factor de elongacin, el EFts. Asimismo, el EFts se libera cuando otra molcula de GTP se une a EFTu. Este intercambio es el que limita la velocidad de la traduccin en procariotas, y es importante porque permite al ribosoma verificar que el aa-ARNt se apare correctamente con un codn del ARNm. EFtu no reacciona con el fMet-ARNt, lo que explica que los codones AUG internos del ARNm no sean ledos por el ARNti. La fidelidad de la traduccin depende de que en el sitio A del ribosoma se halle el aa-ARNt correcto. Este es el punto de no retorno, ya que las clulas no tienen mecanismos para eliminar un residuo de aminocido una vez formado el enlace peptdico. El tiempo que dura el chequeo del correcto aa-ARNt es el ciclo GTPasa de EFtu: no se puede formar un enlace peptdico hasta que se disocie del mismo el aa-ARNt y se hidrolice el GTP. Durante este intervalo, un aa-ARNt incorrecto no se unir fuertemente al ribosoma y se disociar rpidamente, mientras que uno correcto permanecer unido el tiempo suficiente como para que se forme el enlace. 2) Formacin de la unin peptdica El grupo COOH de la metionina se une con el amino del aa-ARNt nuevo, en el sitio A. As se forma un peptidil-ARNt en el sitio A. En el sitio P queda el ARNt sin su aminocido, que haba iniciado la sntesis de la cadena polipeptdica. En el sitio A queda el ARNt con la metionina y el nuevo aminocido unidos (peptidil-ARNt). La reaccin la lleva a cabo la peptidiltransferasa, en la subunidad 60S, y requiere de la integridad del ribosoma (que contiene ribozimas) y de energa, aportada por la unin de alta energa del met-ARNt. 3) Movimiento o translocacin del peptidil-ARNt al sitio P Cuando se produce la transferencia peptdica, el ARNm se mueve con respecto a la subunidad mayor, exactamente 1 codn en direccin 3, desplazando a los ARNt en sus espacios. Es decir, el ARNt que estaba en el sitio A, unido a un aminocido, ahora estar en el sitio P, donde est la cadena polipeptdica en crecimiento. El ARNt que estaba en el sitio P, pasa al sitio E, que es donde van los ARNt que ya no estn unidos ni a una cadena polipeptdica ni a un aminocido.

El prximo aa-ARNt al sitio A hace que el ARNt deacilado ubicado en el sitio E se libere mediante hidrlisis de GTP con ayuda de una translocasa, llamada EF-2 en eucariotes, y EF-G en bacterias. As se completa un ciclo. En bacterias la traduccin puede comenzar mientras se est transcribiendo el ARNm a partir del ADN. Cuando hay muchos ribosomas sobre la misma molcula de ARNm se forma un polirribosoma o polisoma. Estas estructuras existen en procariotas y en eucariotas, tanto libres en el citosol (traduccin de protenas intracelulares) como en las membranas del REG (protenas de membrana y exportacin). TERMINACIN Requiere uno o ms factores de terminacin, que reconocen los codones de terminacin (UAA, UAG y UGA). En bacterias se llaman RF1 y RF2 reconocen distintos codones de terminacin. RF3 es una protena G. La secuencia de terminacin en procariotas es: 1) RF1 o RF2 reconocen el codn de terminacin en el sitio A del ribosoma. El RF induce a la transferencia del pptido desde el peptidil-ARNt hacia el citosol, en vez de a otro aa-ARNt. As se produce un ARNt descargado en el sitio P y un polipptido libre. 2) El RF3, una protena G, se une al ribosoma unido junto a GTP. La hidrlisis de ese GTp induce al ribosoma a liberar su RF1 o RF2 unidos. 3) El factor de reciclaje del ribosoma (RRF) se une al sitio A, seguido por EF-G + GTP. 4) EF-G hidroliza su GTP, lo que causa que RFF se mueva al sitio P y los ARNt que ocupaban los sitios P y E se liberen. Al final, RRF y luego EF-G + GDP y el ARNm se disocian del ribosoma. ANTIBITICOS (ATB) Son sustancias producidas por microorganismos, que inhiben el desarrollo de otros microorganismos. Su mecanismo de accin interfiere algunas etapas de la sntesis de cidos nucleicos y protenas. Las diferencias en la sntesis eucariota y procariota hace que los ATB contra bacterias sean inocuos en eucariotas. Sin embargo, las mitocondrias, dado su origen ancestral bacteriano, pueden verse afectadas. 1- Inhibidores de la sntesis de protenas * Provoca errores en la lectura y bloquea la formacin del enlace peptdico y la translocacin en el ribosoma. * Suelen actuar sobre el ARNr y no sobre las protenas del ribosoma. 2- Inhibidores de la iniciacin Estreptomicina * Produce lectura incorrecta del cdigo gentico en bacterias, e inhibe el inicio de la sntesis. * Se une fsicamente a la subunidad 30S, e interfiere en la unin de fMet-ARNt con el ribosoma. 3- Inhibidores de la elongacin Tetraciclina * Bloquea el sitio A del ribosoma, inhibiendo la fijacin de aa-ARNt y bloqueando la traduccin. * Acta en procariotas y en eucariotas. Cloranfenicol * Inhibe la actividad de la peptidiltransferasa de la subunidad 50S. * Se une al loop del ARNr 23S que interacciona con el CCA 3 del ARNt. * Acta en procariotas, mitocondrias y cloroplastos, pero muy poco en eucariotas. Puromicina * Estructura muy similar al aminoacilo terminal de un aa-ARNt. * Su grupo amino se une al carboxilo de la cadena polipeptdica creciente: forma un enlace peptdico con la cadena, formando una peptidil-puromicina. * Sin embargo, no se fija al sitio P ni se transloca, por lo que la peptidil-puromicina se disocia del ribosoma y termina prematuramente la sntesis de la protena. * Slo tiene uso experimental, no clnico. Cicloheximida * Bloquea a la peptidiltransferasa de la subunidad 60S. * Acta slo en eucariotas. * Slo tiene uso experimental, no clnico. Neomicina, kanamicina y gentamicina * Interfieren con una zona del ARNr 16S de la subunidad 30S, que interacciona con la base oscilante del anticodn del ARNt.

Eritromicina * Se une a un lugar especfico en el ARN 23S de la subunidad 50S, e inhibe la translocacin. cido fusdico * Inhibe la translocacin unindose a la translocasa (EF-G). RESISTENCIA A ATB Los genes que dan resistencia a ATB se hallan mayormente en plsmidos (molculas de ADN extracromosmico presentes en la bacteria, que se replican y transcriben independientemente del ADN cromosmico), y pueden pasar a los cromosomas bacterianos por el movimiento de genes de un cromosoma a otro. Los genes de resistencia a ATB se denominan R (factor de resistencia). Estos genes tienen una regin RTF (factor que transfiere la resistencia), y una regin r que codifica enzimas capaces de inactivar algunos frmacos. REGULACIN DE LA TRADUCCIN Generalmente el control de la sntesis proteica es a nivel de la transcripcin, pero a veces se regula a nivel de la traduccin. La regulacin traduccional se usa para regular la sntesis de protenas que se ensamblan formando complejos, o cuya expresin debe controlarse muy estrictamente. Hay diversos mecanismos de regulacin de la traduccin: 1) Fosforilacin del eIF-4E. Efecto de la insulina. La familia de protenas eIF4-BP se unen e inactivan a eIF-4E. La insulina, entre otras sustancias (PDFG, angiotensina II, etc), inducen la fosforilacin de eIF4-BP, haciendo que se disocie de eIF-4E, y permitiendo se una a eIF-4G, para formar el eIF-4F, que se une al CAP del ARNm. Es decir, la fosforilacin de eIF4-BP permite el inicio de la formacin del complejo de iniciacin 48S. Las mismas sustancias tambin causan la fosforilacin de la propia eIF4-E, haciendo que se una con mayor afinidad al CAP que la eIF4-E no fosforilada. Entonces, la insulina y otros factores de crecimiento, aumentan la velocidad de sntesis al permitir la formacin del complejo de iniciacin 48S y aumentar la afinidad de eIF4-E al CAP. 2) Fosforilacin del eIF-2 El eIF-2 es otro punto de control para el control de la traduccin. Este factor interviene en un ciclo junto con el eIF2-B, tambin llamado GEF, que intercambia GTP por GDP. El ciclo es el siguiente: Una vez ubicado el Met-ARNti sobre el ribosoma, la subunidad alfa de eIF-2 se libera en forma inactiva (unido a GDP). Luego, el eIF-2alfa se une al eIF2-B. Esta unin causa que se incremente la afinidad de eIF-2alfa por GTP. GDP se desplaza del eIF-2alfa para unirse a GTP, y as vuelve a su estado activo. El eIF-2alfa es fosforilado por varias kinasas ante el stress celular o condiciones de baja energa. Esta fosforilacin hace que el eIF-2 + GDP se una fuertemente a eIF-2B, inactivando a este ltimo. Al no poder actuar el eIF-2B, GDP no puede reemplazarse por GTP y por lo tanto no se puede reiniciar el ciclo de la sntesis. Entonces, la fosforilacin de eIF-2 impide la formacin del complejo de preiniciacin 43S. Unos ejemplos de regulacin a este nivel son: - Sntesis de Hb: Las cadenas alfa y beta se sintetizan separadamente a partir de distintos ARNm, y luego se asocian con el grupo hemo para formar la Hb. Las cantidades de alfa, beta y hemo deben estar muy balanceadas. Esta regulacin depende de la presencia del hemo: en ausencia de hemo, una kinasa llamada ICH (inhibidor controlado por hemo) se activa y fosforila al eIF-2, interrumpiendo la formacin del complejo 43S y as la sntesis proteica de ambas cadenas. - Interferones: Son glicoprotenas que segregan las clulas ante la infeccin por virus. El ARN viral activa una kinasa de eIF-2, este factor es fosforilado, y se interrumple la traduccin para que la clula no sirva a los fines del virus. 3) Regulacin de la proporcin de ARNm activos respecto a los inactivos El ARNm se encuentra en el citosol en dos estados: - Libres y accesibles a la traduccin por los ribosomas en polisomas - Combinados con protenas especficas formando ribonucleoprotenas (RNPm). En este estado son inactivos, y pueden estar como RNPm en el citosol hasta que son necesarios. Un ejemplo de esta regulacin se da en los islotes de Langerhans pancreticos: el ARNm de la insulina se halla en gran cantidad inactivo, en forma de RNPm. Ante la deteccin de altos niveles de glucemia, el ARNm se libera y es traducido por los polisomas. 4) Longitud de las colas de poli A Los ARNm con su cola poliA son traducidos ms eficientemente.

5) Regulacin de la elongacin La toxina diftrica inhibe la sntesis de protenas al nivel de la translocacin en el ribosoma. El mecanismo implica la ADP-ribosilacin del EF-2 (translocasa) sobre un residuo de Histidina, inactivndolo. TRFICO INTRACELULAR DE PROTENAS Las protenas sintetizadas en el citosol se dirigen a mitocondrias, ncleo, peroxisomas, o permanecen en el citosol. Las protenas sintetizadas en el REG se dirigen a la membrana del RE, membrana del Golgi, la membrana plasmtica, vesculas secretorias, o lisosomas. Sin embargo, todas las protenas sin excepcin comienzan su sntesis en ribosomas citoslicos. Si la cadena polipeptdica que est siendo sintetizada posee una secuencia especial, llamada pptido seal, el ribosoma se une a la membrana del REG, y el polipptido se transloca hacia el lumen del REG, mientras contina su traduccin. Una vez finalizada la sntesis de la protena, esta puede permanecer en el REG, pero la mayora de las protenas se empaquetan en vesculas de transporte, y se dirigen hacia el Golgi, donde se liberan. All, la protena sufre modificaciones, y luego son empaquetadas en vesculas de secrecin y secretadas a su destino final: membrana, lisosoma, o el exterior. HIPTESIS DE LA SEAL Generalmente las protenas integrales de membrana y las de secrecin tienen en su extremo amino terminal una secuencia llamada pptido seal (PS) caracterstica. Los aminocidos que componen al PS deben tener, por lo menos: - Un residuo con carga positiva - 10-15 residuos hidrofbicos centrales, para interactuar con la membrana. - 5 residuos ms polares que el centro hidrofbico del pptido seal, en su extremo carboxilo. La hiptesis de la seal propone que la protena es translocada al lumen del REG simultneamente a su traduccin. Esto la distingue de la importacin de protenas a las mitocondrias y al ncleo, que es postraduccional. A medida que el PS seal emerge del ribosoma, es reconocido por una partcula de reconocimiento al pptido seal (SRP). SRP tiene dos dominos: uno se une al PS, y el otro interfiere con la elongacin, colocndose en el sitio A e inhibiendo a la peptidiltransferasa. La unin del SRP al PS y la detencin de la elongacin evita el plegamiento del polipptido naciente. En la superficie de la membrana del REG hay una protena receptora del SRP. El complejo SRP-PS-ribosoma se une entonces a la membrana del REG. La unin del SRP con su receptor hace que SRP se disocie del complejo, causando que la elongacin ya no est ms detenida, y que la traduccin se reanude, pero esta vez hacia el interior del REG. El polipptido crece hacia la luz del REG gracias a que el PS se une a un complejo de translocacin, que es una protena integral de la membrana del REG, que facilita su insercin en la membrana. El mecanismo exacto por el que el pptido naciente atraviesa la membrana no se conoce. El PS es cortado posteriormente por una peptidasa que se halla en el REG. PROTENAS INTEGRALES DE MEMBRANA Las GP integrales se sintetizan en el REG. Algunas tienen una secuencia de aa hidrofbicos, llamada secuencia de anclaje, que forma una alfa-hlice en la bicapa lipdica. Esta secuencia sirve para ubicar correctamente a la protena sobre la membrana del REG. El extremo amino terminal de la cadena polipeptdica cruza la membrana hasta que mediante la secuencia de anclaje, se detiene la translocacin a travs de la membrana, quedado el extremo C del lado citoslico y el N en el luminal del REG. La protena as ubicada, puede transportarse en vesculas en las cuales respetar su orientacin o permanecer en el REG. TRANSPORTE A TRAVS DE VESCULAS Desde el REG, las protenas son empaquetadas en vesculas, que son transportadas al Golgi, donde son liberadas. El transporte requiere GTP, y slo las protenas con una estructura 3 adecuada pueden ser transportadas. Las chaperonas son las que ayudan al correcto plegamiento proteico. Algunas son las hsp 60 y 70, las calnexinas, la disulfuro isomerasa y la prolil-cis-transisomerasa. En el REG hay una hsp70 llamada BIP, que acta cotraduccionalmente. Las hsp60 actan luego, formando un recipiente en el que la protena mal plegada puede plegarse bien. En ambos casos se gasta ATP. Las calnexinas son fosfoprotenas integrales de membrana del REG. Son ligadores de Ca++, y funcionan como chaperonas de glicoprotenas recin sintetizadas.

Las protenas salen del compartimiento trans del Golgi hacia vesculas de secrecin continua (por ejemplo el colgeno) o regulada (por ejemplo la insulina). PROTENAS LISOSOMALES Las protenas lisosomales (hidrolasas cidas) tienen una estructura tridimensional que es reconocida por glicosiltransferasas, que les agregan un oligosacrido con Manosa-6-P. Esto sucede en el cis Golgi. En el trans Golgi hay receptores para M6P, que aseguran que estas protenas se asocien con vesculas que se dirigen a los lisosomas. Luego, la protena lisosomal pierde su grupo fosfato y es transportada a un lisosoma, mientras que el receptor de M6P se recicla. En la mucolipidosis II, los pacientes sintetizan normalmente las protenas lisosomales y el receptor de M6P. Lo que pasa es que hay una deficiencia en la enzima que fosforila los residuos de manosa. Por lo tanto, la seal de M6P no se adiciona a la protena lisosomal, causando que se secreten. Esto produce que se acumulen residuos en las clulas, alterando el equilibrio del organismo. Los sindromes de Hurler y de Hunter se deben a defectos en enzimas lisosomales requeridas para degradar GAGs sulfatados. CONSERVACIN DE LA ASIMETRA DE LAS MEMBRANAS Es conservada durante el transporte: el lado luminal de las vesculas de transporte y el Golgi, corresponden al lado luminal del REG. Cuando una vescula secretoria se funde con la membrana plasmtica, su contenido se libera por exocitosis. Esto aumenta el tamao de la membrana transitoriamente, pero luego los componentes de membrana son reciclados por endocitosis. PROTENAS SINTETIZADAS POR RIBOSOMAS LIBRES Son protenas solubles y la mayora de las protenas perifricas de membrana, como la espectrina. PROTENAS MITOCONDRIALES Slo hay 13 protenas codificadas por el genoma mitocondrial. La mayora de ellas se sintetizan en el citosol, en ribosomas libres, y se translocan postraduccionalmente a la matriz mitocondrial. Las protenas que sern translocadas a las mitocondrias tienen cerca del extremo N-terminal una secuencia seal, consistente en un grupo de aminocidos con una estructura 2 caracteristica, anfiptica, sin ser tan importante la secuencia exacta de aminocidos. En la superficie de las mitocondrias hay receptores que reconocen esta secuencia, y las translocan desde el citosol hacia el espacio intermembrana, hacia la matriz mitocondrial o hacia las membranas mitocondriales (si son protenas transmembrana). El reconocimiento se da gracias a complejos proteicos especiales: - Complejos TOM: Se hallan en la membrana mitocondrial externa, y translocan protenas a travs de ella hacia el espacio intermembrana. - Complejos TIM: Se hallan en la membrana mitocondrial interna, y translocan protenas a travs de ella hacia la matriz mitocondrial. Como la translocacin a las mitocondrias es postraduccional, el plegamiento impedira el pasaje a travs de los TOM y TIM. Algunas protenas tienen una estructura que hacen que los TOM y los TIM interacten entre s, en zonas donde las membranas externa e interna estn casi fusionadas. Como los TOM y los TIM tienen canales acuosos, estas protenas pueden llegar a la matriz mitocondrial. En la matriz, la secuencia seal anfiptica es cortada y la protena ya es residente de la matriz. Otras protenas no se liberan totalmente del TIM y quedan incluidas en la membrana interna, y otras directamente no provocan interaccion TOM-TIM, por lo que slo atraviesan TOM y quedan en el espacio intermembrana. Las protenas chaperonas hsp70 reconocen pptidos que estn siendo sintetizadas y evitan que se plieguen hasta que contacten con la membrana mitocondrial externa. Una vez dentro de la mitocondria, protenas residentes de all sustituyen a las chaperonas (que son protenas citoslicas) hasta que el pptido alcanza su compartimiento de destino final. El pegado y despegado de las hsp70 y de las protenas mitocondriales para mantener desplegado al pptido es con gasto de ATP. Esta hidrlisis de ATP tambin empuja a la protena a travs de los TOM y TIM para ser translocada. Adems, se necesita energa de un gradiente

electroqumico: la matriz mitocondrial est cargada negativamente respecto al espacio intermembrana, y el pptido a translocar tiene carga global positiva. Esto favorece la incorporacin de protenas a las mitocondrias. PROTENAS NUCLEARES Todas las protenas nucleares (reguladores de genes, histonas, polimerasas, etc.) se sintetizan en el citosol. Su importacin es muy distinta a la de las dems organelas, debido a que las protenas de bajo PM pasan al ncleo a travs de complejos de poros nucleares, y no por fusin de membranas. Los poros tienen receptores que reconocen seales de importacin de protenas nucleares, pero se desconoce el mecanismo de transporte. La seal es un pequeo pptido cargado positivamente, llamado seal de localizacin nuclear (NLS). Unas protenas llamadas importinas reconocen al NLS y se unen a l, y con ayuda de otras protenas, el complejo formado se acopla al poro nuclear. Las protenas Ran son reguladoras de la translocacin al ncleo. Son GTPasas que regulan el pasaje segn su unin a GDP o GTP. DEGRADACIN DE PROTENAS Cada protena se degrada a diferentes velocidades, segn las demandas del organismo. La susceptibilidad de una protena a la degradacin es su vida media. Las proteasas intracelulares hidrolizan enlaces peptdicos, formando pptidos, que luego son degradados a aminocidos libres por peptidasas. LISOSOMAS La degradacin de protenas que vienen del exterior se realiza en los lisosomas. La protena ingresa por endocitosis, y se degrada en el lisosoma sin gasto de ATP. Las proteasas lisosomales se llaman catepsinas, y funcionan a pH bajo. APARATO DE GOLGI Y RE Contienen proteasas que actan en la maduracin de las protenas, en su camino secretorio. DEGRADACIN DE PROTENAS CITOSLICAS Requiere de ATP, de una protena llamada ubiquitina, y de un complejo de proteasas llamado proteasoma. 1- Las protenas daadas o defectuosas adquieren un enlace tioester con la enzima activadora de ubiquitina (E1), sin gasto de ATP. 2- La ubiquitina se une a una protena llamada enzima conjugadora de ubiquitina (E2). 3- La enzima ligasa de ubiquitina (E3) transfiere la ubiquitina desde E2 a la protena blanco. Para que se degrade, una protena debe estar unida a al menos 4 molculas de ubiquitina. 4- Por ltimo, las protenas con ubiquitina se digieren en los proteasomas. Un determinante importante para la accin de la ubiquitina es la identidad del aminocido en el N-terminal de la protena a ser degradada. Hay aa que dan ms estabilidad a las protenas, como Met o Ser. Otros, son desestabilizantes, como Lys, Asp y Arg. Esta es la llamada regla Nterminal, que se asocia a la vida media de las protenas: las protenas de vida media ms larga tienen ms aa estabilizantes, mientras que las de secrecin o extracelulares son ms variables. Las que tienen mucha Pro, Glu, Ser y Thr son llamadas protenas PEST, y se degradan rpidamente. CASPASAS Son proteasas dependientes de Ca++, presentes en la mayora de las clulas. Son responsables de la apoptosis o muerte celular programada.