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ÍNDICE
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2.2 ALGUNOS EJEMPLOS DE DESINFECTANTES Y ANTISPTICOS Y DE SUS APLICACIONES 3 3.1 3.1.1 3.1.1.1 3.1.1.2 3.1.2 3.2 3.2.1 QUIMIOTERPICOS QUIMIOTERPICOS DE SNTESIS ANLOGOS DE FACTORES DE CRECIMIENTO MICROBIANO SULFAMIDAS OTROS ANLOGOS DE FACTORES DE CRECIMIENTO OTROS QUIMIOTERPICOS DE SNTESIS: LAS QUINOLONAS ANTIBIOTICOS INTRODUCCION
3.2.2 INHIBIDORES DE LA BIOSINTESIS DE LA PARED CELULAR BACTERIANA 3.2.2.1 3.2.2.2 VANCOMICINA ANTIBIOTICOS -LACTAMICOS
3.2.3 ANTIBIOTICOS QUE INTERFIEREN EN LA BIOSINTESIS DE PROTEINAS 3.2.3.1 INHIBIDORES DE LA FASE INICIAL DE LA ELONGACION: TETRACICLINAS 3.2.3.2 INDUCTORES DE ERRORES EN LA LECTURA DEL ARNm: AMINOGLUCSIDOS 3.2.3.3 INHIBIDORES DE LA TRANSLOCACION: MACRLIDOS
1 CONCEPTOS GENERALES
Existen ciertas sustancias qumicas que influyen negativamente sobre las bacterias, pudiendo ejercer dos tipos de efectos diferentes: bacteriostticos: cuando impiden el crecimiento bacteriano; bactericidas: cuando destruyen (matan) las bacterias. En general, si no slo nos referimos a las bacterias, sino a cualquier tipo de microorganismos, hablamos respectivamente de agentes microbiostticos y microbicidas. Ahora bien, para una misma sustancia qumica, la lnea de demarcacin entre un efecto microbiosttico y otro microbicida depende muchas veces de la concentracin de dicha sustancia y del tiempo durante el que acta. Cmo podemos saber que un microorganismo est muerto? El nico criterio vlido es la prdida irreversible de la capacidad de divisin celular, es decir, de la prdida de viabilidad, y se suele comprobar empleando tcnicas con placas de Petri (es decir, confirmando que no crecen en medios slidos adecuados). Antes de proceder al estudio de las diversas molculas que pueden afectar el crecimiento o la viabilidad de los microorganismos, veamos unas cuantas definiciones bsicas. Agentes esterilizantes son aquellos que producen la inactivacin total de todas las formas de vida microbiana (o sea, su muerte o prdida irreversible de su viabilidad). (Tambin existen agentes fsicos esterilizantes, como ya vimos en los dos captulos anteriores). Agentes desinfectantes (o germicidas) son agentes (sobre todo qumicos) antimicrobianos capaces de matar los microorganismos patgenos (infecciosos) de un material. Pueden (y en muchos casos suelen) presentar efectos txicos sobre tejidos vivos, por lo que se suelen emplear slo sobre materiales inertes. Agentes antispticos son sustancias qumicas antimicrobianas que se oponen a la sepsis o putrefaccin de materiales vivos. Se trata de desinfectantes con baja actividad txica hacia los tejidos vivos donde se aplican. Quimioterpicos son compuestos qumicos con actividad microbicida o microbiosttica, con una toxicidad suficientemente baja como para permitir su administracin a un organismo superior, en cuyos fluidos corporales y tejidos permanece estable un cierto tiempo a concentraciones tales que los hace eficaces como antimicrobianos dentro del organismo.
Todos los das usamos agentes qumicos para controlar el crecimiento microbiano: detergentes y jabones para el cuerpo y la ropa, cloracin de las aguas potables, antispticos para la piel y el tratamiento de heridas, desinfectantes para tratar superficies en la industria y en los laboratorios, quimioterpicos y antibiticos para tratar enfermedades bacterianas, etc.
2 DESINFECTANTES Y ANTISPTICOS
Como se recordar cuando tratamos el tema del calor como agentes esterilizante, la muerte de una poblacin bacteriana se poda representar como una curva exponencial, expresin de la cintica de primer orden. Este tipo de cintica tambin es aplicable a la muerte microbiana cuando se aplica un agente qumico a una concentracin suficientemente alta. Sin embargo, cuando se aplican menores concentraciones del agente, se pueden encontrar cinticas diferentes, expresables como curvas sigmoidales.
protenas, hasta el punto que pueden llegar a hacerlos inactivos en cuanto a su poder desinfectante o esterilizante. Por lo tanto, para el empleo eficaz de muchos desinfectantes hay que contar con este factor, determinando previamente el gasto de materia orgnica inerte, o calculando la potencia neta del desinfectante en presencia de la materia orgnica.
3 QUIMIOTERPICOS
Los quimioterpicos son sustancias con actividad antimicrobiana (microbicida o microbiosttica) con toxicidad suficientemente baja como para poder ser administrados a un organismo por la va adecuada, hasta alcanzar y mantener concentraciones eficaces en los tejidos. Aunque en el captulo 1 ya hablamos del arranque y desarrollo de la Quimioterapia, recordemos aqu esta pgina notable de la historia de la Microbiologa:
1900-15 Ehrlich concibe la idea de usar compuestos qumicos de sntesis como balas mgicas selectivas hacia microorganismos, pero inofensivas para las personas o animales superiores. En 1909 descubre que el salvarsn es efectivo contra la sfilis. Acua el trmino quimioterapia. Domagk, siguiendo los pasos de Ehrlich, descubre la accin del rojo de prontosilo (la primera sulfamida) sobre el neumococo y otros estreptococos in vivo Woods descubre el mecanismo de accin de las sulfamidas. Estamos en plena Edad de oro de la Quimioterapia de sntesis. Fleming descubre la penicilina, el primer antibitico natural, pero fracasa en su intento de purificarlo. La industria farmacutica se muestra "indiferente. Chain y Florey purifican la penicilina. Se usa en la 2 Guerra Mundial. Comienza la era de los antibiticos naturales Waksman, un microbilogo de suelos, ha iniciado una bsqueda de microorganismos productores de antibiticos. Descubre la estreptomicina. Comienza la poca dorada de los antibiticos (quimioterpicos naturales), y la bsqueda racional rinde decenas de nuevos antimicrobianos procedentes de Actinomicetos, otras bacterias y hongos.
Las propiedades deseables de un quimioterpico ideal seran las siguientes: 1) Que tenga toxicidad selectiva, es decir, actuar segn el principio de bala mgica que daa al microorganismo respetando al hospedador 2) Que sea microbicida, es decir, que mate o inactive irreversiblemente el microorganismo, provocando la prdida total de viabilidad. En el mundo real, sin embargo, hay muchos quimioterpicos microbiostticos. En estos casos, los sistemas de defensa natural del hospedador (mecanismos de inmunidad) hacen el resto, eliminando el agente microbiano previamente inhibido por el quimioterpico. 3) Los microorganismos susceptibles no deberan desarrollar resistencias al quimioterpico. Pero desgraciadamente, en muchos casos, al cabo de un tiempo de uso del antimicrobiano comienzan a surgir cepas microbianas resistentes al mismo. La quimioterapia es una autntica escalada de armamentos entre los microorganismos y los humanos, en los que ante una nueva arma de estos ltimos los microbios pueden responder al cabo del tiempo con estrategias de resistencia, lo que obliga a un uso racional de los quimioterpicos, y a una bsqueda continua de nuevos agentes. 4) Que el quimioterpico sea efectivo contra un amplio espectro de microorganismos. Pero no existe (ni existir) un solo agente capaz de inhibir a todos los microorganismos. Algunos antibiticos son de amplio espectro, pero no
son eficaces contra todos los microorganismos. Por otro lado, existen quimioterpicos de espectro estrecho, pero muy selectivos contra ciertas bacterias que son patgenas importantes. 5) Que no sea alergnico, y que no tenga efectos secundarios. 6) Que permanezca de forma activa en plasma, tejidos, etc. durante el tiempo necesario. A ser posible, que sea soluble en agua y que alcance pronto la concentracin teraputica en los tejidos.
Como se puede ver, la dihidropteroil-sintetasa cataliza la condensacin del PABA con el 2-amino,4-hidroxi, 6-hidroximetil dihidropteroil-pirofosfato, que lleva a la sntesis de cido dihidropteroico (una de las fases intermedias de la sntesis del tetrahidroflico THF). En la figura se puede apreciar que el PABA y las sulfamidas son muy parecidas. De hecho, la sulfamida es usada por la enzima como un sustrato alternativo al PABA. En este caso, la enzima cataliza una reaccin que genera un producto que no puede actuar como intermediario en los siguientes pasos de la ruta de sntesis del THF. Los microorganismos son sensibles a las sulfamidas porque sus necesidades de THF las han de satisfacer sintetizndolo a partir de PABA usando la ruta de la que estamos hablando. Sin embargo, los animales son resistentes, debido a que carecen de esta ruta, y en cambio, se aprovisionan de flico directamente en su dieta. A partir de la sulfanilamida se sintetizaron desde entonces gran nmero de derivados por sustitucin de uno de los hidrgenos del grupo sulfonamida, formando estos derivados la llamada familia de las sulfamidas. Lo que tienen en comn las sulfamidas con actividad antibacteriana es:
tener libre el grupo amino en para grupo sulfona (-SO2-) unido al anillo bencnico; La sustitucin del grupo amido unido a la sulfona, aunque no modifica sustancialmente la actividad antibacteriana, puede suponer una serie de ventajas de tipo farmacolgico. 3.1.1.2 OTROS ANLOGOS DE FACTORES DE CRECIMIENTO Las sulfonas son derivados de la dapsona (=4,4'-diamino-difenilsulfona). Aunque no se usa contra infecciones normales, ha encontrado una importante aplicacin en el tratamiento de la lepra (producida por Mycobacterium leprae); de hecho es el quimioterpico de eleccin para esta enfermedad. Probablemente su mecanismo de accin est basado en actuar como competidor del PABA. La isoniazida es la hidrazida del cido isonicotnico (tambin conocida por sus iniciales inglesas, INH). Como se puede ver, es un anlogo estructural de dos vitaminas: la nicotinamida y el piridoxal. Tiene efecto bactericida incluso a bajas concentraciones (1g/ml) e incluso intracelularmente, lo que permite su empleo contra las especies patgenas de Mycobacterium , y en general contra bacterias cido-alcohol resistentes (Nocardia, Corynebacterium). Es el tratamiento ms usado contra el bacilo de la tuberculosis (Mycobacterium tuberculosis). Ejerce varios efectos: interferencia -por mecanismo an desconocido- con la biosntesis de la pared celular de las bacterias AAR, que conduce a desorganizar los cidos miclicos; actuacin como antimetabolito de nicotinamida y piridoxal.
3.2 ANTIBITICOS
3.2.1 INTRODUCCIN
Los antibiticos son sustancias normalmente de bajo peso molecular producidas por seres vivos (antibiticos naturales) o modificadas artificialmente a partir de ellas (antibiticos semisintticos), que a pequeas concentraciones tienen efectos antimicrobianos (microbicidas o microbiostticos), tras ser administrados por va adecuada a un organismo receptor. La mayor parte de los antibiticos proceden del metabolismo secundario de microorganismos procariotas (actinomicetos, Bacillus, etc.) o eucariotas (hongos de los gneros Penicillium, Cephalosporium, etc.). Se conocen unos 5.000 antibiticos distintos, y cada ao se descubre unos 300 nuevos, pero en clnica solo se usa un 1% de los descubiertos. Su importancia econmica se pone de manifiesto al pensar en las 100.000 Tm. de antibiticos producidas al ao, por un valor equivalente a 3.000 millones de euros, lo cual representa una de las industrias biotecnolgicas ms importantes.
La mayor parte de los antibiticos comerciales se emplea para tratar enfermedades de etiologa bacteriana, aunque algunos se usan contra hongos y levaduras, y unos pocos presentan actividad antitumoral. Desde el punto de vista qumico, se clasifican en grandes familias: antibiticos que contienen carbohidratos; lactonas macrocclicas; quinonas y compuestos relacionados; antibiticos peptdicos y con aminocidos; heterociclos del N; heterociclos del O; aromticos; alifticos, etc. La mayora de los antibiticos son molculas relativamente pequeas pero complejas, con regiones hidrofbicas que facilitan el transporte al interior celular. Muchos poseen varios anillos, algunos de los cuales mejoran la interaccin de la molcula con su diana macromolecular. Para estudiarlos es ms til agrupar a los antibiticos no por clases segn su naturaleza qumica, sino en funcin de las dianas sobre las que actan y con las que interfieren: A) antibiticos que interfieren con la biosntesis de la pared celular B) antibiticos que actan sobre la membrana celular
C) antibiticos que inhiben la sntesis de protenas D) antibiticos que actan sobre la sntesis de cidos nucleicos. Los antibiticos ms abundantes, y los mejor estudiados, son los que interfieren con enzimas de la biosntesis del peptidoglucano de las eubacterias, y los que interfieren con la funcin del ribosoma eubacteriano (obviamente, esto cumple el requerimiento de balas mgicas). A continuacin estudiaremos algunos grupos importantes de antibiticos, dando importancia a sus mecanismos de accin.
Como ya sabemos, las penicilinas fueron los primeros antibiticos naturales en descubrirse, pero en general, todos los -lactmicos tienen el mismo mecanismo de accin. Actualmente las penicilinas suponen un 17% del mercado total de antibiticos. El grupo comn a todas las penicilinas es el cido 6-aminopenicilnico (6-APA), que en realidad es un dipptido ciclado por condensacin de L-cys y D-val, que genera el anillo -lactmico (anillo A) y el anillo tiazolidnico (anillo B). Las distintas penicilinas se pueden considerar derivadas del 6-APA, sustituyendo el hidroxilo (-OH) del grupo carboxilo por un radical acilo (-R). Este radical acilo es variable de unas penicilinas a otras.
Estructura general de las penicilinas. Observa que el ncleo de 6-APA consta del anillo betalactmico y del anillo tiazolidnico. En celeste se muestra el radical acilo, que se puede modificar para generar distintas penicilinas semisintticas con propiedades diferentes a la penicilina natural
La penicilina natural, purificada por primera vez en los aos 40, es la penicilina-G (o benzil-penicilina), en la que el radical acilo es el grupo bencilo (=fenilactico). Esta penicilina presenta una serie de limitaciones e inconvenientes: tiene un espectro estrecho: acta frente a estreptococos y otros cocos Gram-positivos, pero no frente a la mayora de bacterias Gram-negativas, porque estas ltimas son impermebles debido a su membrana externa. Es sensible a cidos, por lo que no puede ser administrada va oral (se inactiva a su paso por el estmago). Es susceptible a enzimas inactivadoras (penicilinasas) producidas por muchas bacterias. Para solventar estos problemas se fueron creando variantes de esta penicilina que mejoraban algunas de sus cualidades. La mayor parte de estas variantes son penicilinas semisintticas, que se obtienen de la natural introduciendo artificialmente nuevos grupos radicales (-R) con carboxilo en el cido 6-aminopenicilnico. 1. Resistentes a penicilinasas (p. ej., meticilina, oxacilina). Se usan sobre todo frente a cocos Gram-positivos (Staphylococcus aureus, S. epidermidis). Adems, son resistentes en medio cido, lo que permite su administracin va oral. 2. De espectro ampliado. Permiten un uso efectivo frente a muchas bacterias Gramnegativas (Haemophilus influenzae, E. coli, Proteus, Salmonella, Shigella, etc). Dentro de este grupo, destacamos las aminopenicilinas, como la ampicilina, o la amoxicilina: el grupo -NH2 del radical acilo permite que estas penicilinas puedan atravesar la membrana externa de las bacterias Gram-negativas. Resisten los cidos, pero desgraciadamente slo tienen la mitad de actividad contra Gram-positivas, y algunas son inactivadas por -lactamasas. 3. Penicilinas anti-Pseudomonas. La carbenicilina se usa frente a Pseudomonas, un patgeno oportunista muy peligroso cuando coloniza grandes quemaduras, heridas quirrgicas, etc. Mecanismo de accin de las penicilinas y otros antibiticos -lactmicos:
Todas las penicilinas (incluidas las semisintticas), son bactericidas sobre bacterias en crecimiento, y poseen el mismo mecanismo: Inhiben el sistema enzimtico implicado en la reaccin de transpeptidacin del peptidoglucano naciente, o sea que impiden los entrecruzamientos entre cadenas de PG. Ello origina: acumulacin de precursores del PG, sin ensamblar; activacin de una serie de autolisinas (amidasas, glucosidasas), que hidrilozan el PG maduro de la bacteria; si la bacteria se encuentra en un medio hipotnico, termina lisndose. Por lo tanto, la accin bactericida y ltica de las penicilinas depende de que la bacteria se encuentre creciendo en un medio hipotnico (en un medio hipertnico se originan protoplastos y esferoplastos). Cuando la bacteria no est creciendo, no est haciendo renovacin (turnover) de su pared celular, lo que implica que la penicilina no tiene diana sobre la que actuar; por lo tanto, en estas condiciones la bacteria puede sobrevivir. Las penicilinas tienen como dianas a una serie de autolisinas llamadas protenas de unin a la penicilina (PBPs). Como ya vimos en el captulo 5, las PBPs son protenas implicadas en las ltimas fases de la sntesis y maduracin del PG. Concretamente, las PBPs 1 a 3 son esenciales para la bacteria, y son las dianas de las penicilinas que explican la actividad bactericida. 3.2.2.2.2 CEFALOSPORINAS Y CEFAMICINAS El ncleo de estos -lactmicos es el cido 7-aminocefalospornico. El anillo B es el anillo dihidrotiazina (esqueleto de 6 tomos) en lugar del anillo tiazolidina (esqueleto de 5 tomos). Las cefalosporinas estn producidas por hongos del gnero Cephalosporium, mientras que las cefamicinas lo son por ciertas especies de actinomicetos del gnero Streptomyces. Estos antibiticos son muy usados actualmente en clnica, suponiendo casi el 40% del total. La cefalosporina natural tiene poca actividad, pero sustituyendo artificialmente R1 y R2 se obtienen derivados semisintticos muy activos. Como es habitual con muchos antibiticos de uso clnico, a lo largo de los aos la industria farmacutica ha ido creando sucesivas generaciones de estos compuestos, con aplicaciones y ventajas diferentes. Las cefalosporinas y cefamicinas de tercera generacin han sustituido en muchos casos a las penicilinas, debido a su mayor espectro de accin y a que resisten mejor las -lactamasas.
naciente del polipptido. Obviamente, los ms tiles son aquellos que tienen efectos selectivos frente a los ribosomas 70S procariticos, pero no sobre los 80S eucariticos. Dentro de ellos, y siguiendo el orden natural del funcionamiento de la elongacin de la cadena polipeptdica, podemos agruparlos segn la fase concreta de la elongacin sobre la que actan: 1. inhibicin del reconocimiento de un aminoacil-ARNt (aa-ARNt) hacia el sitio A del ribosoma; 2. introduccin de errores en la lectura de los ARNm; 3. inhibicin de la reaccin de formacin del enlace peptdico; 4. inhibicin de la traslocacin del peptidil-ARNt (pp-ARNt) desde el sitio A al sitio P. 5. bloqueo de los factores de elongacin. 3.2.3.1 INHIBIDORES DE LA FASE INICIAL DE LA ELONGACIN: TETRACICLINAS Las tetraciclinas son antibiticos de muy amplio espectro (frente a Gram-positivas, Gram-negativas, Rickettsias y Clamidias, e incluso Micoplasmas), producidos por distintas especies de Streptomyces. Se basan en el cudruple anillo del naftaceno. Actan como bacteriostticos, siempre y cuando las bacterias estn en crecimiento activo. Como se puede ver por su espectro, son tiles incluso contra bacterias que viven como parsitos intracelulares (como las Rickettsias), debido a que su carcter hidrofbico facilita su difusin a travs de membranas. Mecanismo de accin: provocan que la unin del aa-ARNt al sitio A del ribosoma sea inestable y est distorsionada, con lo cual se evita la elongacin de la cadena. In vitro actan tanto frente a ribosomas 70S como frente a los 80S. Entonces, por qu in vivo slo inhiben a las bacterias? La explicacin est en el hecho de que las bacterias transportan complejos tetraciclina-Mg de forma suicida, cosa que no ocurre en eucariotas. 3.2.3.2 INDUCTORES DE ERRORES EN LA LECTURA DEL ARNm: AMINOGLUCSIDOS Los aminoglucsidos constituyen un grupo amplio y variado de antibiticos de amplio espectro, producidos por diversas especies de Streptomyces. Como se puede ver en las figuras, todos tienen en comn varios rasgos qumicos: son muy polares, policatinicos; presentan un anillo de aminociclitol (un ciclohexitol o inositol con grupo amino); uno o ms azcares, incluyendo al menos un aminoazcar (aparte del aminociclitol); as, por ejemplo, la estreptomicina contiene como aminociclitol la llamada estreptidina, mientras que otros aminoglucsidos presentan la 2-desoxiestreptamina). Ejemplos de de uso clnico bacteria productora
Mecanismo de accin: se unen a los polirribosomas que estn traduciendo el ARNm, provocando errores en la lectura del ARNm, al distorsionar la estructura del ribosoma. Por lo tanto, la bacteria comienza a sintetizar protenas defectuosas; con un efecto final que es bactericida. La estreptomicina ya no se emplea en clnica humana, pero fue importante histricamente, debido a que constituy el primer agente eficaz contra la tuberculosis. Actualmente la produccin de aminoglucsidos solo constituye el 3% del total de antibiticos, y se emplean como antibiticos de reserva cuando otros fallan. 3.2.3.3 INHIBIDORES DE LA TRANSLOCACIN: MACRLIDOS Los macrlidos son antibiticos con grandes anillos lactona unidos a uno o unos pocos azcares. Suponen un 11% del total de produccin de antibiticos. El macrlido prototipo es la eritromicina, pero actualmente se usan mucho en clnica dos derivados semisintticos de ella: la roxitromicina y la claritromicina. La produce un actinomiceto llamado Saccharopolyspora erithraea, y es un agente bacteriosttico que se administra en infecciones de vas respiratorias ocasionadas por Mycoplasma pneumoniae, Legionella pneumophila (legionelosis), Corynebacterium dyphteriae (difteria) y Bordetella pertussis (tosferina). Mecanismo de accin: se une a la protena L15, que forma parte del centro peptidiltransferasa de la subunidad grande del ribosoma 70S. Bloquea el paso de translocacin interfiriendo especficamente con la liberacin del ARNt desacilado, es decir, impide que el ARNt descargado (una vez que ha cumplido su misin al transferirse el pptido naciente al aa-ARNt del sitio A) salga del sitio P; por lo tanto, el pp-ARNt cargado y situado en el sitio A no puede translocarse al sitio P, y se produce la parada de la sntesis de proteinas.
por un largo puente de naturaleza aliftica. Su mecanismo de accin estriba en la inhibicin del inicio de la transcripcin, unindose de modo no covalente a la subunidad de la ARN polimerasa eubacteriana.