Estudio en terreno de plantas Materiales y reactivos Mortero (8 cm dim.), embudo de filtracin ( 5 cm dim.

), papel para filtrado rpido ( Whatman n4, 9 cm.), tubos de ensayo (12x1.5 cm), pipetas ( 0.1 y 1 mL), arena limpia, piseta con alcohol desnaturalizado. cido ascrbico (solucin acuosa al 5%, vida til 24 hrs)(ASC). Reactivo nitroprusiato (NP), reactivo de Ehrlich. Preparacin de reactivos: Nitroprusiato: se toman 10 mL de una solucin acuosa al 5% p/v de nitroprusiato sdico (Na2[Fe(CN)5NO]2H2O) y se le agregan 0.1 mL de una solucin 0.1M de NaOH ( vida til 24 h). El nitroprusiato sdico es foto-lbil por lo que debe guardarse en la oscuridad. Ehrlich: 5 g de 4-dimetilaminobenzaldehido se disuelven en una mezcla de 60 mL de cido actico, 30 mL de agua destilada y 10 mL de cido perclrico al 60% (vida til, 1 semana si se mantiene en la oscuridad) Procedimiento: Se toma entre 0.2 y 1 g de material vegetal fresco (flores, hojas o tallos delgados) y se muelen en el mortero junto con 8 mL aprox de ASC y una pequea cantidad de arena, hasta que se hayan desintegrado completamente. La solucin es filtrada y dividida en 2 porciones iguales (muestra y blanco) que se pasan a tubos de ensayo. Se agrega a la muestra entre 0.1 a 0.2 de reactivo NP. A temperatura ambiente de 20-25 se esperan 20 minutos para agregar 1 mL del reactivo de Ehrlich a ambos tubos, calentando los tubos a 70-80C se espera 1 minuto. Luego de agregar el reactivo de Ehrlich, se dejan reaccionar lo tubos 10 minutos a temperatura ambiente y 1 minuto a 70.80C. El color de la muestra se compara con el del blanco. La aparicin de un color magenta en la muestra indica la presencia de un N-xido de PA insaturado. El blanco puede presentar color si la planta contiene compuestos como ndoles o pirroles, los cuales pueden dar color en presencia del reactivo de Ehrlich. La intensidad del color en la muestra comparada con el blanco puede dar una idea de la cantidad de alcaloides presentes e indica que se necesita un estudio qumico o toxicolgico ms amplio. En la prctica, la mayora de las plantas que contienen Pas tienen suficientes alcaloides en su forma de N-xidos para reaccionar positivo en este test, que es capaz de detectar hasta 5 g de alcaloides. La principal excepcin son algunas semillas de Crotalaria, pero en el resto de plantas la proporcin de N-xidos es suficientemente grande como para permitir la reaccin. Por lo que es el mtodo colorimtrico ms til para detectar compuestos de pirrolizidina potencialmente hepatotxicos.