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TERMINOLOGÍA ANALÍTICA

- PROCESO ANALÍTICO
- TÉCNICA ANALÍTICA
- MÉTODO ANALÍTICO
- PROCEDIMIENTO ANALÍTICO
- PROTOCOLO ANALÍTICO
PROCESO ANALÍTICO
Conjunto de operaciones analíticas intercaladas que se
realizan entre la muestra y el resultado
Muestra
Operaciones
previas
Medida de
la señal
Toma y
tratamiento de
datos
Resultado
TÉCNICA ANALÍTICA
Principio científico adaptado a uno o varios instrumentos,
que nos es útil o necesario para obtener información
sobre la composición de la muestra (fluorimetría,
potenciometría etc.)
MÉTODO ANALÍTICO
Adaptación variada de una técnica, para llevar a cabo
una medida determinada. (Pueden existir varios métodos
analíticos distintos para determinar el mismo analito
mediante la misma técnica).
PROCEDIMIENTO ANALÍTICO
Las instrucciones generales escritas necesarias para
utilizar un método. (Normalmente son normas de carácter
oficial Ej. ASTM D-2914 análisis de SO
2
en vino).
PROTOCOLO ANALÍTICO
Las directrices específicas escritas que recogen los pasos
necesarios para desarrollar el método analítico sin
excepción. (Contiene detalles específicos que no recoge
el método).
SELECCIÓN DE UN MÉTODO ANALÍTICO
DEFINICIÓN DEL PROBLEMA
1.- ¿Qué exactitud se requiere?
2.- ¿De cuánta muestra se dispone?
3.- ¿En qué intervalo de concentraciones está el
analito?
4.- ¿Qué componentes de la muestra interfieren?
5.- ¿Cuáles son las propiedades físicas y químicas
de la matriz de la muestra?
6.- ¿Cuántas muestras hay que analizar?
CARACTERÍSTICAS DE FUNCIONAMIENTO
Criterios de Fiabilidad (criterios numéricos)
Criterios de Practicabilidad (otras características
a valorar)
Criterios de Fiabilidad
Precisión
Exactitud
Sesgo
Linealidad
Intervalo de Linealidad
Límite de Detección
Límite de Cuantificación
Sensibilidad
Selectividad
Robustez
Criterios de Practicabilidad
Velocidad
Coste y disponibilidad de
equipo
Toxicidad de los reactivos
Habilidad del operador
Facilidad y comodidad
Seguridad en el laboratorio
Coste por muestra
Características de Funcionamiento del método analítico
EXACTITUD
Grado de coincidencia entre el valor
obtenido de la magnitud medida y el valor real
de la misma. (medida del error sistemático)
PRECISIÓN
Grado de concordancia mutua entre los
datos que se han obtenido de una misma
forma. (medida del error aleatorio)
EXACTITUD / PRECISIÓN
PRECISO
INEXACTO
EXACTO
IMPRECISO
INEXACTO
INEXACTO
SESGADO
INSESGADO
(Grado de aproximación entre los resultados)
- Repetibilidad
- Precisión intermedia
+ Variación interdía, por instrumentos, por analistas etc.
- Reproducibilidad
+ Ensayos interlaboratorio
Se expresará a través de la desviación estándar, coeficiente de
variación y el intervalo de confianza para cada caso.
PRECISIÓN
+ Variación de los resultados dentro del curso del mismo
análisis
LINEALIDAD
INTERVALO DE LINEALIDAD
Es la capacidad del método para establecer una
relación directamente (o matemáticamente)
proporcional entre el resultado y la concentración
del analito en la muestra.
y = mx+b . (S = mc + S
blanco
)
Se expresa en términos de variación de la
pendiente de la línea obtenida por regresión
Es el intervalo de concentración entre los niveles
de analito extremos (mayor y menor) que puede
utilizarse con precisión, exactitud y linealidad
Se expresa en unidades de concentración
LÍMITE DE DETECCIÓN
a) Evaluación visual (métodos no instrumentales)
b) Evaluación basada en la relación Señal/Ruido (3:1)
c) Evaluación basada en la desviación estándar de la
respuesta instrumental y la pendiente de la curva (m)
(DL= 3
σ σσ σ
/ m)
“Es la mínima concentración (o cantidad) de analito en
una muestra que puede ser detectada, pero no
necesariamente cuantificada, bajo las condiciones
experimentales establecidas”.
La desviación estándar del blanco
La determinación de σ σσ σ se corresponde con:
LÍMITE DE CUANTIFICACIÓN
a) Evaluación visual (métodos no instrumentales)
b) Evaluación basada en la relación Señal/Ruido (10:1)
c) Evaluación basada en la desviación estándar de la
respuesta instrumental y la pendiente de la curva (m)
(QL= 10
σ σσ σ
/ m)
La desviación estándar del blanco
La determinación de σ σσ σ se corresponde con:
“Es la mínima concentración (o cantidad) de analito en
una muestra que puede ser determinado con aceptable
exactitud y precisión, bajo las condiciones experimentales
establecidas”.
LINEALIDAD E INTERVALO DE LINEALIDAD
Intervalo lineal
Señal S
Concentracion C
Limite de
cuantiIicacion
S = mc + S
Blanco
m
m =
S
Blanco
Capacidad del instrumento para discriminar
pequeñas diferencias en la concentración del
analito.
Dos factores limitan la sensibilidad
- La pendiente de la curva de calibrado
- La precisión
a) Sensibilidad de Calibración (IUPAC)
S = mC + S
Blanco
,
SENSIBILIDAD
C
S S
m
Blanco

=
Señales
m

σ
γ =
b) Sensibilidad analítica
SELECTIVIDAD
Expresa la capacidad del método analítico para medir
con exactitud y de modo específico el analito en
presencia de otros componentes que pueden formar
parte de la matriz.
Se mide comparando los resultados de un análisis de
muestras que contienen impurezas, productos de
degradación o ingredientes placebo, con los resultados
de la misma muestra sin los componentes anteriores
ROBUSTEZ
Expresa la capacidad del método para permanecer
invariable a pequeñas modificaciones ambientales o de
procedimiento.
Se mide mediante la reproducibilidad
ROBUSTEZ
(Influencia de las variaciones ambientales o de procedimiento)
- Estabilidad de las disoluciones
- Tiempos de extracción
- En HPLC:
+ Variaciones de pH de la fase móvil
+ Variaciones de composición de la fase móvil
+ Diferentes columnas (lotes y suministradores)
+ Temperatura y caudal
- En GC
+ Diferentes columnas (lotes y suministradores)
+ Temperatura y caudal
VALIDACIÓN
Se define la validación analítica como el trabajo
experimental encaminado a obtener pruebas documentadas
de que un método analítico proporciona consistentemente la
información requerida al uso al que se destina.
Los criterios de validación se deben relacionar con las
especificaciones a examinar, por lo que el método deberá
poseer la característica básica necesaria para discriminar
de forma segura la información analítica de interés.
La ICH (International Conference on Harmonization
http://www.ich.org) (1996) establece las características que
deben considerarse en la validación de un método analítico
para evaluar la calidad de los medicamentos.
Criterios para juzgar la calidad de los medicamentos
Pruebas de Identidad
-Tienen por objeto demostrar que la muestra examinada se
corresponde con la sustancia que debe ser.
Pruebas de Pureza
-Límite de las concentraciones aceptables de impurezas de los
medicamentos.
Pruebas de Actividad
-Límites admitidos de concentración del ingrediente o
ingredientes activos en el medicamento o materia prima.
Pruebas de Efecto o Acción
-Garantía de que la forma farmacéutica actuará del modo
previsto.
CALIBRACIÓN
La calibración consiste en comparar el valor de la magnitud
medida (o representada) por el sistema de medición, con los
los valores que, bajo condiciones estrictamente definidas,
producen patrones conocidos o materiales de referencia.
- Calibración directa.
La magnitud medida coincide con la del patrón
- Calibración indirecta.
La respuesta del instrumento no coincide con
la magnitud medida
- Métodos de calibración
+ Curva de calibrado
+ Adición estándar
+ Patrón interno
Contenido:
Definiciones
Tipos de defectos
Crítico
Principal
Secundario
Niveles de Inspección
Normal
Rigurosa
Reducida
Clases de Muestreo
Simple
Doble
Múltiple
Planes de Muestreo
Curvas OC
Método de la curva de calibrado
Blanco C÷1 C÷2 C÷3 C÷4
MEDIDA EN EL INSTRUMENTO
Señal
Concentracion
Blanco C÷1 C÷2 C÷3 C÷4
Concentracion de
la muestra
interpolacion
Señal de muestra
Método de la adición estándar
Muestra Muestra Muestra Muestra Muestra
Blanco C÷1 C÷2 C÷3 C÷4
Analito
Patrón
MEDIDA EN EL INSTRUMENTO
Concentracion del Patron
Blanco
C÷1 C÷2 C÷3 C÷4
Señal
C÷Muestra
Blanco Pat. Int. Pat. Int. Pat. Int. Pat. Int.
Blanco
Pat. Anal
C÷1
Pat. Anal
C÷2
Pat. Anal
C÷3
Pat. Anal
C÷4
Método del Patrón interno
Patrón
interno
Patrón
Del Analito
MEDIDA EN EL INSTRUMENTO
De dos señales diferentes
Interno Patron
Analito del Patron
Señal
Señal
Método del Patrón interno
Blanco
Concentracion del patron del Analito
C÷1 C÷2 C÷3 C÷4
Concentracion de
la muestra
interpolacion
Relacion de señales
de la muestra con el
P. interno añadido
GRÁFICAS DE CONTROL DE CALIDAD
Gráficas de control tipo Shewhart
(De valores individuales, Xi)
Gráficas de “Rango” o “Recorrido” (R)
Gráficas de control de datos acumulados
(Gráficas de “Cusum”)
GRÁFICAS DE CONTROL Xi SHEWHART
VALOR
DIANA
1 2 3 4 5 6 7 8
CONTROLES
Invalidación (probabilidad de azar = 1%)
+3
σ σ σ σ
X
Alarma (probabilidad de azar = 5%)
+2
σ σ σ σ
X
Invalidación (probabilidad de azar = 1%)
-3
σ σ σ σ
X
Alarma (probabilidad de azar = 5%)
-2
σ σ σ σ
X
Indicadores para interpretar graficas X
El procedimiento de medida estará fuera de control
cuando:
1) Uno o más puntos superen los niveles de
invalidación (>3σ σσ σ de X)
2) Dos o más puntos consecutivos por encima del
límite de alarma (>2σ σσ σ de X)
3) Una serie de 7 o más puntos por arriba o por
abajo de la media X
4) Una tendencia de incremento o disminución
GRÁFICAS DE R (RECORRIDO)
Invalidación (probabilidad de azar = 1%)
VALOR
RECORRIDO
MEDIO
+2,5σ σ σ σ R
+3,3σ σ σ σ R
Alarma (probabilidad de azar = 5%)
1 2 3 4 5 6 7 8
CONTROLES
CUSUM (V-VALOR DIANA) VALOR (V) CONTROL Nº
-23 -5 75 15
-18 -4 76 14
-14 -4 76 13
-10 -3 77 12
-7 -4 76 11
-3 0 80 10
-3 -2 78 9
-1 -1 79 8
0 0 80 7
0 -1 79 6
+1 +2 82 5
-1 -2 78 4
+1 0 80 3
+1 -1 79 2
+2 +2 82 1
Tabla del gráfico de CUSUM (Valor diana ÷ 80)
5 10 15
C
U
S
U
M
30
20
10
0
-10
-20
-30
ALARMA
ALARMA
INVALIDACIÓN
INVALIDACIÓN
GRÁFICAS DE CUSUM
CUSUM
SHEWHART
Calidad del Control
Documentacion
Deberan existir procedimientos normalizados de trabajo
(PNTs) escritos sobre las especiIicaciones de cada instrumento en el
que se reIleje la veriIicacion de su Iuncionamiento, asi como el
calendario de los chequeos correspondientes.
Dichos procedimientos deberan estar Iirmados por el jeIe del
departamento y aprobados el JeIe de la unidad de garantia de calidad
De especial interes en el Control de calidad es lo relativo a la
integridad de los Datos Primarios (raw data)
Homologacion, CertiIicacion y Acreditacion de laboratorios de analisis
Normas NCF, BPL, UNE-EN ISO 17025 etc.

PROCESO ANALÍTICO Conjunto de operaciones analíticas intercaladas que se realizan entre la muestra y el resultado
Toma y tratamiento de datos

Muestra

Operaciones previas

Medida de la señal

Resultado

TÉCNICA ANALÍTICA Principio científico adaptado a uno o varios instrumentos, que nos es útil o necesario para obtener información sobre la composición de la muestra (fluorimetría, potenciometría etc.)

MÉTODO ANALÍTICO Adaptación variada de una técnica, para llevar a cabo una medida determinada. (Pueden existir varios métodos analíticos distintos para determinar el mismo analito mediante la misma técnica). PROCEDIMIENTO ANALÍTICO Las instrucciones generales escritas necesarias para utilizar un método. (Normalmente son normas de carácter oficial Ej. ASTM D-2914 análisis de SO2 en vino). PROTOCOLO ANALÍTICO Las directrices específicas escritas que recogen los pasos necesarios para desarrollar el método analítico sin excepción. (Contiene detalles específicos que no recoge el método).

.¿Cuáles son las propiedades físicas y químicas de la matriz de la muestra? 6...¿Qué exactitud se requiere? 2.SELECCIÓN DE UN MÉTODO ANALÍTICO DEFINICIÓN DEL PROBLEMA 1...¿En qué intervalo de concentraciones está el analito? 4.¿Qué componentes de la muestra interfieren? 5.¿Cuántas muestras hay que analizar? CARACTERÍSTICAS DE FUNCIONAMIENTO Criterios de Fiabilidad (criterios numéricos) Criterios de Practicabilidad (otras características a valorar) .¿De cuánta muestra se dispone? 3..

Características de Funcionamiento del método analítico Criterios de Fiabilidad Precisión Exactitud Sesgo Linealidad Intervalo de Linealidad Límite de Detección Límite de Cuantificación Sensibilidad Selectividad Robustez Criterios de Practicabilidad Velocidad Coste y disponibilidad de equipo Toxicidad de los reactivos Habilidad del operador Facilidad y comodidad Seguridad en el laboratorio Coste por muestra .

(medida del error aleatorio) . (medida del error sistemático) PRECISIÓN Grado de concordancia mutua entre los datos que se han obtenido de una misma forma.EXACTITUD Grado de coincidencia entre el valor obtenido de la magnitud medida y el valor real de la misma.

EXACTITUD / PRECISIÓN PRECISO IMPRECISO SESGADO INEXACTO INEXACTO INSESGADO EXACTO INEXACTO .

PRECISIÓN (Grado de aproximación entre los resultados) . por instrumentos. . coeficiente de variación y el intervalo de confianza para cada caso.Repetibilidad + Variación de los resultados dentro del curso del mismo análisis . .Precisión intermedia + Variación interdía.Reproducibilidad + Ensayos interlaboratorio Se expresará a través de la desviación estándar. por analistas etc.

exactitud y linealidad Se expresa en unidades de concentración .LINEALIDAD Es la capacidad del método para establecer una relación directamente (o matemáticamente) proporcional entre el resultado y la concentración del analito en la muestra. y = mx+b . (S = mc + Sblanco ) Se expresa en términos de variación de la pendiente de la línea obtenida por regresión INTERVALO DE LINEALIDAD Es el intervalo de concentración entre los niveles de analito extremos (mayor y menor) que puede utilizarse con precisión.

a) Evaluación visual (métodos no instrumentales) b) Evaluación basada en la relación Señal/Ruido (3:1) c) Evaluación basada en la desviación estándar de la respuesta instrumental y la pendiente de la curva (m) (DL= 3 σ / m) La determinación de σ se corresponde con: La desviación estándar del blanco . pero no necesariamente cuantificada.LÍMITE DE DETECCIÓN “Es la mínima concentración (o cantidad) de analito en una muestra que puede ser detectada. bajo las condiciones experimentales establecidas”.

LÍMITE DE CUANTIFICACIÓN “Es la mínima concentración (o cantidad) de analito en una muestra que puede ser determinado con aceptable exactitud y precisión. bajo las condiciones experimentales establecidas”. a) Evaluación visual (métodos no instrumentales) b) Evaluación basada en la relación Señal/Ruido (10:1) c) Evaluación basada en la desviación estándar de la respuesta instrumental y la pendiente de la curva (m) (QL= 10 σ / m) La determinación de σ se corresponde con: La desviación estándar del blanco .

LINEALIDAD E INTERVALO DE LINEALIDAD S S = mc + SBlanco m= m SBlanco C .

La precisión a) Sensibilidad de Calibración (IUPAC) S = mC + SBlanco . Dos factores limitan la sensibilidad . S − SBlanco m= C b) Sensibilidad analítica γ =σ m Señales .La pendiente de la curva de calibrado .SENSIBILIDAD Capacidad del instrumento para discriminar pequeñas diferencias en la concentración del analito.

Se mide mediante la reproducibilidad . con los resultados de la misma muestra sin los componentes anteriores ROBUSTEZ Expresa la capacidad del método para permanecer invariable a pequeñas modificaciones ambientales o de procedimiento.SELECTIVIDAD Expresa la capacidad del método analítico para medir con exactitud y de modo específico el analito en presencia de otros componentes que pueden formar parte de la matriz. Se mide comparando los resultados de un análisis de muestras que contienen impurezas. productos de degradación o ingredientes placebo.

Tiempos de extracción .En GC + Diferentes columnas (lotes y suministradores) + Temperatura y caudal .Estabilidad de las disoluciones .En HPLC: + Variaciones de pH de la fase móvil + Variaciones de composición de la fase móvil + Diferentes columnas (lotes y suministradores) + Temperatura y caudal .ROBUSTEZ (Influencia de las variaciones ambientales o de procedimiento) .

ich.org) (1996) establece las características que deben considerarse en la validación de un método analítico para evaluar la calidad de los medicamentos. .VALIDACIÓN Se define la validación analítica como el trabajo experimental encaminado a obtener pruebas documentadas de que un método analítico proporciona consistentemente la información requerida al uso al que se destina. por lo que el método deberá poseer la característica básica necesaria para discriminar de forma segura la información analítica de interés. Los criterios de validación se deben relacionar con las especificaciones a examinar. La ICH (International Conference on Harmonization http://www.

o Pruebas de Efecto o Acción -Garantía de que la forma farmacéutica actuará del modo previsto. Pruebas de Actividad -Límites admitidos de concentración del ingrediente ingredientes activos en el medicamento o materia prima. Pruebas de Pureza -Límite de las concentraciones aceptables de impurezas de los medicamentos.Criterios para juzgar la calidad de los medicamentos Pruebas de Identidad -Tienen por objeto demostrar que la muestra examinada se corresponde con la sustancia que debe ser. .

Calibración indirecta. bajo condiciones estrictamente definidas. La magnitud medida coincide con la del patrón .CALIBRACIÓN La calibración consiste en comparar el valor de la magnitud medida (o representada) por el sistema de medición.Métodos de calibración + Curva de calibrado + Adición estándar + Patrón interno . con los los valores que. La respuesta del instrumento no coincide con la magnitud medida . producen patrones conocidos o materiales de referencia .Calibración directa.

Contenido: Definiciones Tipos de defectos Crítico Principal Secundario Niveles de Inspección Normal Rigurosa Reducida Clases de Muestreo Simple Doble Múltiple MEDIDA EN EL INSTRUMENTO Planes de Muestreo Curvas OC .

.

Patrón Analito MEDIDA EN EL INSTRUMENTO .

! .

Patrón Del Analito Patrón interno ! ! " ! ! " ! ! " ! ! " MEDIDA EN EL INSTRUMENTO De dos señales diferentes .

# ! " .

GRÁFICAS DE CONTROL DE CALIDAD Gráficas de control tipo Shewhart (De valores individuales. Xi) Gráficas de “Rango” o “Recorrido” (R) Gráficas de control de datos acumulados (Gráficas de “Cusum”) .

GRÁFICAS DE CONTROL Xi SHEWHART +3σ X +2σ X VALOR DIANA Invalidación (probabilidad de azar = 1%) Alarma (probabilidad de azar = 5%) -2σ X -3σ X Alarma (probabilidad de azar = 5%) Invalidación (probabilidad de azar = 1%) 1 2 3 4 5 6 7 8 CONTROLES .

Indicadores para interpretar graficas X El procedimiento de medida estará fuera de control cuando: 1) Uno o más puntos superen los niveles de invalidación (>3σ de X) 2) Dos o más puntos consecutivos por encima del límite de alarma (>2σ de X) 3) Una serie de 7 o más puntos por arriba o por abajo de la media X 4) Una tendencia de incremento o disminución .

GRÁFICAS DE R (RECORRIDO) +3.3σ R σ +2.5σ R σ VALOR RECORRIDO MEDIO Invalidación (probabilidad de azar = 1%) Alarma (probabilidad de azar = 5%) 1 2 3 4 5 6 7 8 CONTROLES .

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GRÁFICAS DE CUSUM CUSUM 30 20 10 0 -10 -20 -30 ALARMA INVALIDACIÓN INVALIDACIÓN ALARMA 5 10 15 CUSUM SHEWHART .

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