UNIVERSIDAD DE EL SALVADOR FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES Y MATEMTICA ESCUELA DE BIOLOGA

UNIDAD 6. MITOCONDRIA. 6.1. Membrana y matriz mitocondrial. 6.2. Oxidacin del piruvato. 6.3. Reacciones del Ciclo de Krebs. 6.4. Sistema de transporte de electrones y transporte de protones. 6.5. Fosforilacin oxidativa. 6.6. Hiptesis del acoplamiento quimiosmtico. 6.7. Genoma mitocondrial

Organelo celular en el cual se realiza la transformacin de la energa aerobia al oxidarse los intermediarios metablicos como el piruvato que produce ATP. Las mitocondrias son los organelos celulares encargados de suministrar la mayor parte de la energa necesaria para la actividad celular. Actan, por lo tanto, como centrales energticas de la clula y sintetizan ATP a expensas de los carburantes metablicos (glucosa, cidos grasos y aminocidos).

6.1. MEMBRANA Y MATRIZ MITOCONDRIAL.

La mitocondria presenta una membrana exterior permeable a iones, metabolitos y muchos polipptidos. Eso es debido a que contiene protenas que forman poros llamados porinas o VDAC (canal aninico dependiente de voltaje), que permiten el paso de molculas de hasta 10 kD y un dimetro aproximado de 20 .

Mitocondria. a) Fibroblasto viviente observado con microscopio de contraste de fases. Las mitocondrias se ven como corpsculos oscuros alargados, b) Micrografa electrnica de transmisin de una delgada seccin a travs de una mitocondria que revela la estructura interna del organelo, particularmente los pliegues membranosos (crestas) de la membrana interna, c) Localizacin de las mitocondrias en la pieza media del espermatozoide que rodea la porcin proximal del flagelo, (a: Cortesa de Norman K. Wessels; b: K.R. Porter/Photo Researchers; c: cortesa de Don W. Fawcett.)

Porinas. Las bacterias gramnegativas poseen una membrana externa que contiene lpidos por fuera de la membrana plasmtica como parte de su pared celular. Esta membrana externa contiene protenas, denominadas porinas, que constan de una hoja como barril y forman una abertura a travs de la cual puedan penetrar molculas de tamao moderado. Las porinas tambin se observan en la membrana mitocondrial externa de clulas eucariotas.

6.2. OXIDACIN DEL PIRUVATO.

El catabolismo est representado principalmente por el conjunto de reacciones que integran la Respiracin Celular, proceso por el cual se degradan los nutrientes, principalmente la glucosa como tambin aminocidos y cidos grasos. Las reacciones que se llevan a cabo en este proceso son de tipo oxidativas.
A partir de la glucosa obtenida, se lleva a cabo la Glucolisis, que produce piruvato. Segn el tipo de clula y las circunstancias metablicas, el piruvato puede degradarse en dos vas distintas, la fermentacin o la acetilacin, donde se obtiene acetil-CoA, el cual se incorpora al Ciclo de Krebs. En la degradacin completa de la glucosa se consume oxgeno y se obtiene como productos finales dixido de carbono y energa en forma de ATP.

Gliclisis y Fermentacin: Es una etapa parcial del catabolismo de la glucosa y se realiza en el citosol. En la gluclisis se distinguen dos etapas: En la primera se consume energa y en la segunda se obtiene energa. El balance neto del proceso es: 2 ATP (4 ATP generados - 2 ATP gastados). De esto resulta que la produccin de ATP en la gluclisis es pobre, pero muy rpido y, por ello, el piruvato debe ingresar a la mitocondria para aumentar el rendimiento de ATP.

Destino del piruvato.

El producto final de la gluclisis es piruvato que an contiene una gran cantidad de energa. En condiciones anaerbicas (es decir en ausencia de O2) el piruvato es degradada a lactato o en etanol, por un proceso denominado como fermentacin.

En condiciones aerbicas (en presencia de O2), el piruvato sufre una oxidacin y da lugar a acetil-CoA, NADH+H y CO2.

La va aerobia para la oxidacin de piruvato Los aerobios emplean oxgeno molecular para extraer gran cantidad de energa a partir de los dos productos de la gluclisis, piruvato y NADH, suficiente para sintetizar ms de 30 molculas adicionales de ATP. Este proceso tiene lugar en las mitocondrias. Iniciaremos con el piruvato y ms tarde volveremos a considerar el destino del NADH. Cada molcula de piruvato producida por gluclisis se transporta a travs de la membrana mitocondrial interna hacia el interior de la matriz, donde es descarboxilada para formar un grupo acetilo de dos carbonos (CH3COO-).

A continuacin, el grupo acetilo forma un complejo con la coenzima A (un compuesto orgnico complejo derivado de la vitamina cido pantotnico) para formar acetil-CoA.
Piruvato + HSCoA + NAD+ Acetil CoA + CO2 + NADH + H+

La descarboxilacin de piruvato y la transferencia del grupo acetilo a la CoA es catalizada por el complejo multienzimtico gigante piruvato deshidrogenasa.

El descubrimiento de la acetil-CoA por Fritz Lipmann, en 1961, fue la ltima pieza en el enigma de la oxidacin de la glucosa.

La glucosa es fosforilada a expensas de un ATP, sufre redistribucin estructural para formar fosfato de fructosa, y luego es fosforilada una vez ms a expensas de un segundo ATP. Los dos grupos fosfato se sitan en los dos extremos (C1, C6) de la cadena de fructosa. El difosfato de seis carbonos se desdobla en dos monofosfatos de tres carbonos.

El aldehido de tres carbonos se oxida para formar un cido conforme se emplean los electrones eliminados del sustrato para reducir la coenzima NAD+ a NADH. Adems, el cido C1 se fosforila para formar un acilfosfato, el cual posee un potencial elevado para transferir grupos fosfato.

El grupo fosfato de C1 se transfiere a ADP para formar ATP por fosforilacin a nivel de sustrato. Por cada glucosa oxidada se forman dos ATP

Estas reacciones dan como resultado la redistribucin y deshidratacin del sustrato para formar un enolfosfato en la posicin C2, que tiene un elevado potencial de transferencia de grupos fosfato.

El grupo fosfato se transfiere al ADP formando ATP por fosforilacin a nivel de sustrato, generando una cetona en la posicin C2. Por cada glucosa oxidada se forman dos ATP.

REACCIN NETA:

Glucosa + 2 NAD+ + 2 ADP + 2 Pi

2 piruvato + 2 ATP + 2 NADH + 2 H+ + 2 H20

Acetilacin: Una vez que el piruvato ingresa a la mitocondria sufre la transformacin en acetilcoenzima A, que es el compuesto que ingresa al ciclo de Krebs.

Este proceso tiene lugar en la matriz

mitocondrial.

Diagrama del metabolismo de carbohidratos en clulas eucariotas. Las reacciones de gluclisis generan piruvato y NADH en el citoplasma. En ausencia de O2, el piruvato se reduce a lactato (u otro producto de fermentacin, como etanol en las levaduras), que se excreta, en tanto que el NAD+ se vuelve a utilizar para continuar la gluclisis. En presencia de O2 el piruvato se desplaza al interior de la matriz (facilitado por un transportador de membrana), en donde se descarboxila y se une a la coenzima A (CoA), una reaccin que genera NADH. El NADH producido durante la gluclisis dona sus electrones de alta energa a un compuesto que atraviesa la membrana mitocondrial interna, llevando los electrones a FAD (o NAD+) para formar FADH2 (o NADH). La acetil-CoA ingresa al ciclo del cido tricarboxlico , que genera GTP, NADH y FADH2. Los electrones de estas molculas de NADH y FADH2 viajan a lo largo de la cadena transportadora de electrones, constituida por portadores integrados en la membrana mitocondrial interna, hasta el O2 molecular. La energa liberada durante el transporte de electrones se emplea para la sntesis de ATP. Si toda la energa del transporte de electrones fuera utilizada para la sntesis de ATP se podran generar aproximadamente 36 ATP (incluyendo GTP) a partir de una sola molcula de glucosa.

6.3. Reacciones del Ciclo de Krebs.

Ciclo del cido tricarboxlico (ATC) Una vez formada, la acetil-CoA se introduce a la va cclica denominada ciclo del cido tricarboxlico (ATC), donde oxida al sustrato y conserva su energa.

Con excepcin de la succinato deshidrogenasa, enlazada a la membrana interna,

todas las enzimas del ciclo del cido tricarboxlico residen en la fase soluble de la matriz.

El ciclo del cido tricarboxlico tambin se refiere como ciclo de Krebs, por el bioqumico ingls Hans Krebs, quien trabaj en esta va en los aos de 1930. Irnicamente, cuando Krebs obtuvo por primera vez datos suficientes para apoyar la idea de un ciclo metablico, escribi un artculo acerca de su investigacin y lo envi a la revista britnica Nature. Varios das despus le regresaron el manuscrito acompaado de una carta de rechazo. El editor concluy que careca de la suficiente importancia para publicarse en esa revista.

El primer paso del ciclo del cido tricarboxlico es la condensacin del grupo acetilo de dos carbonos con un oxalacetato de cuatro carbonos para formar una molcula de citrato de seis carbonos. Durante el ciclo, la molcula de citrato disminuye la longitud de su cadena, un tomo de carbono cada vez, y regenera la molcula de oxalacetato de cuatro carbonos, la cual se condensa con otra acetil-CoA. Estos dos carbonos eliminados durante el ciclo del cido tricarboxlico (que no son los mismos unidos al grupo acetilo) se oxidan por completo hasta dixido de carbono. Durante el ciclo del cido tricarboxlico pueden ocurrir cuatro reacciones, en las cuales se transfiere un par de electrones de un sustrato a una coenzima aceptora de electrones. Tres de las reacciones utilizan NAD+ para formar NADH, una reaccin emplea FAD (derivada de la vitamina riboflavina) para formar FADH2- La ecuacin neta para la reaccin del ciclo del cido tricarboxlico se puede escribir:

Acetil-CoA + 2H2O + FAD + 3NAD+ + GDP + P 2CO2 + FADH2 + 3NADH + 3H+ + GTP + HSCoA

Importancia de las coenzimas reducidas en la formacin de ATP

A partir de la ecuacin neta del ciclo del cido tricarboxlico es evidente que los productos primarios de las reacciones del cido tricarboxlico son las coenzimas reducidas FADH2 y NADH, que contienen los electrones tomados de diferentes sustratos oxidados. El NADH tambin es un producto primario de la gluclisis. Las mitocondrias no tienen capacidad para importar el NADH formado en el citoplasma mediante gluclisis. En vez de eso, los electrones de NADH se emplean para reducir un metabolito de bajo peso molecular, que entonces: 1) puede entrar a las mitocondrias (a travs de una va denominada va alterna entre malato y aspartato) y reducir NAH+ a NADH, o 2) transferir sus electrones a FAD (a travs de una va denominada va alterna entre glicerol y fosfato) para producir FADH2.

Ahora que podemos explicarnos la formacin de NADH y FADH2 por la gluclisis y el ciclo del cido tricarboxlico, volveremos a los pasos que siguen estas coenzimas reducidas para producir ATP. El proceso total se puede dividir en dos etapas distintas. Etapa 1. Los electrones pasan desde FADH2 o NADH a una serie de portadores de electrones que constituyen la cadena de transporte localizada en la membrana mitocondrial interna. El aceptor terminal de electrones de la cadena respiratoria es el oxgeno molecular (02), el cual se reduce para formar agua. Conforme los electrones avanzan a lo largo de la cadena respiratoria, los cambios de conformacin en los portadores desplazan protones hacia afuera a travs de la membrana mitocondrial interna, estableciendo por lo tanto un gradiente de protones a travs de dicha membrana. Etapa 2. El movimiento controlado de los protones (H+) los regresa a travs de la membrana por medio de una enzima sintetizadora de ATP que suministra la energa necesaria para efectuar la reaccin endergnica que conduce a la sntesis de ATP.

La importancia de los movimientos de protones en la formacin de ATP fue propuesta por primera vez en 1961 por Peter Mitchell, de la Universidad de Edinburgo. Cada par de electrones transferidos del NADH al oxgeno por medio de la cadena transportadora de electrones libera suficiente energa para formar unas tres molculas de ATP. Cada par donado por FADH2 libera bastante energa para formar casi dos molculas de ATP. Si se suman todas las molculas de ATP formadas a partir de una molcula de glucosa completamente catabolizada por medio de gluclisis y el ciclo del cido tricarboxlico, la ganancia neta mxima es de 36 ATP (que incluye el GTP formado en cada vuelta del ciclo). Recordemos que la verdadera cantidad de ATP formado por las molculas oxidadas de glucosa depende de la relacin [ATP]/[ADP] dentro de la clula y las actividades particulares en las cuales participa la clula.

Las mitocondrias utilizan un gradiente inico a travs de su membrana interna para efectuar gran nmero de actividades que requieren energa, principalmente sntesis de ATP.

Cuando la formacin de ATP se realiza por la energa liberada de los electrones eliminados durante la oxidacin del sustrato, el proceso se denomina FOSFORILACIN OXIDATIVA.
La fosforilacin oxidativa se puede comparar con la fosforilacin a nivel de sustrato. Para comprender el mecanismo de la fosforilacin oxidativa primero es necesario considerar de qu manera la oxidacin del sustrato puede liberar energa libre.

6.4. SISTEMA DE TRANSPORTE DE ELECTRONES Y TRANSPORTE DE PROTONES.

Transporte de electrones
La mayor parte de las enzimas del ciclo del cido tricarboxlico se encuentran libres dentro de la matriz fluida de la mitocondria. El NADH formado en la matriz se disocia de su respectiva deshidrogenasa y transfiere sus electrones a otros transportadores relacionados con la membrana mitocondrial interna. Cada uno de los casi 20 transportadores de electrones que constituyen la cadena transportadora puede existir en su estado reducido u oxidado. Cada transportador se reduce sucesivamente porque gana electrones procedentes del transportador precedente en la cadena y a continuacin se oxida porque dona sus electrones al transportador subsecuente.

Por lo tanto, los electrones pasan de un transportador al siguiente hasta que el aceptor final se reduce. El aceptor final de esta "cadena de cubetas" de electrones es el CO2, el cual se reduce para formar agua. A lo largo de la lnea cada transportador de electrones tiene un potencial redox ms positivo que el transportador previo, y en cada transferencia sucesiva los electrones pierden energa libre adicional. La energa libre liberada por la transferencia de electrones se emplea para generar un gradiente de protones, el cual se utiliza posteriormente para efectuar la sntesis endergnica de ATP.

Tipos de transportadores
La cadena de transporte de electrones (o cadena espiratoria) de la membrana mitocondrial interna se compone de cuatro tipos de transportadores de electrones enlazados a la membrana: flavoprotenas, citocromos, ubiquinona, y Protenas de hierro y azufre. Con excepcin de la ubiquinona, todos los centros redox dentro de la cadena respiratoria que aceptan y donan electrones son grupos prostticos (componentes no aminocidos) relacionados con protenas.

Las flavoprotenas constan de un polipptido fuertemente enlazado a uno de los grupos prostticos relacionados, sea dinucletido de adenina flavina (FAD) o mononucletido de flavina (FMN).
Los grupos prostticos de las flavoprotenas se derivan de la riboflavina (vitamina B2) y cada uno puede aceptar y donar dos protones y dos electrones. El estado de oxidacin de la flavoprotena puede determinarse por mtodos espectroscpicos midiendo la cantidad de luz absorbida a diferentes longitudes de onda. Las protenas totalmente oxidadas muestran un mximo de absorcin a 370 y 450 nm, en tanto que los grupos reducidos slo tienen un mximo a 370 nm. Las principales flavoprotenas de las mitocondrias son la NADH deshidrogenasa de la cadena transportadora de electrones y la succinato deshidrogenasa del ciclo del cido tricarboxlico.

Los citocromos son protenas que contienen grupos hem (como el de la mioglobina). El tomo de hierro de un hem puede sufrir una transicin reversible entre los estados de oxidacin Fe3+ y Fe2+ como consecuencia de la aceptacin y prdida de un solo electrn. Hay cuando menos cinco especies de citocromos presentes en la cadena transportadora de electrones, a, a3, b, c y c1 que difieren entre s por las sustituciones efectuadas en el grupo hem y tambin por la secuencia de aminocidos de la cadena del polipptido. Los grupos hem de la citocromo oxidasa tambin se relacionan con iones Cobre que pueden desempear un papel clave en la transferencia de electrones a O2 . La ubiquinona (UQ, o coenzima Q) es una molcula liposoluble que contiene una larga cadena hidrfoba compuesta por unidades isoprenoides de cinco carbonos, Igual que las flavoprotenas, cada ubiquinona puede aceptar y donar dos electrones y dos protones. Similar a flavoprotenas y citocromos, la ubiquinona se puede detectar espectroscpicamente debido a que posee una banda de absorcin a 280 nm que desaparece en el estado reducido.

A principios del decenio de 1960 se descubri un nuevo grupo de transportadores de electrones en la membrana interna. Estos componentes, llamados protenas de hierro y azufre, se descubrieron mediante resonancia electrnica de giro (el hierro reducido tiene un electrn impar que da lugar a una seal electrnica de giro). Los tomos de hierro de las protenas de hierro y azufre no se localizan en un grupo hem, sino que estn ntimamente unidos a tomos de azufre inorgnico como parte de un centro de hierro y azufre. Los centros ms comunes contienen dos o cuatro tomos de hierro y de azufre, designados [2Fe-2S] y [4Fe-4S], unidos a la protena en los residuos de cisterna.

Un solo centro puede tener varios tomos de hierro, pero todo el complejo slo puede aceptar y donar un electrn. El potencial redox de un centro de hierro y azufre depende mucho de los residuos aminocidos que constituyen su entorno local; como grupo, las protenas de hierro y azufre presentan potenciales que varan de -400 mV hasta +300 mV, correspondiendo a una mayor porcin del espacio en el que ocurre el transporte de electrones. Se ha identificado ms de una docena de protenas de hierro y azufre dentro de las mitocondrias y todas estn ntimamente relacionadas con otros portadores de electrones.

Transportadores complejos de electrones Cuando la membrana mitocondrial interna se rompe pueden aislarse los diferentes portadores de electrones que forman parte de cuatro complejos asimtricos distintos que rodean a la membrana, identificados como complejos I, II, III y IV. Dos componentes de la cadena de transporte de electrones, citocromo c y ubiquinona, no forman parte de alguno de los cuatro complejos, sino que existen de manera independiente en la membrana. La ubiquinona ocurre como un grupo de molculas disueltas en la bicapa de lpidos y el citocromo c como una protena perifrica de la membrana. Se piensa que el citocromo c y la ubiquinona se desplazan dentro de la membrana o a lo largo de la misma, transportando electrones entre los grandes complejos protenicos relativamente inmviles. Una vez dentro de uno de los grandes complejos multiprotenas se cree que los electrones viajan a lo largo de vas definidas entre centros redox adyacentes cuyas posiciones estn en sus respectivos lugares.

Si el donador de electrones es NADH, los electrones entran a la cadena respiratoria por la va del complejo I, que transfiere electrones a la ubiquinona. Cuando el donador es FADH2, los electrones pasan directamente de la succinato deshidrogenasa del ciclo del cido tricarboxlco (que constituye el complejo II) a la ubiquinona, pasando por alto el extremo "izquierdo" de la cadena que posee un potencial redox demasiado negativo para aceptar los electrones menos energticos del nucletido de flavina.

Cada uno de estos sitios se encuentra entre portadores que son parte de uno de los tres complejos, I, III y IV. La energa libre liberada en forma de electrones que pasa a travs de estos tres sitios se conserva mediante translocacin de protones desde la matriz a travs de la membrana interna al espacio intermembrana. La translocacin de protones por estos complejos transportadores de electrones establece el gradiente de protones que efectan la sntesis de ATP.

Complejo I (NADH-UQ deshidrogenasa).

oxirreductasa

NADH

El complejo I, que cataliza la transferencia de un par de electrones del NADH a la ubiquinona (UQ), es enorme, contiene hasta 30 polpptidos distintos y representa una masa de casi un milln de daltons. El complejo I incluye hasta nueve centros distintos de hierro y azufre adems de flavoprotena. El paso de electrones a travs del complejo I se acompaa de la translocacin de protones al interior del espacio intermembrana; la estequiometra talvez sea de 3 a 4 H+ por cada par de electrones transferidos.

Complejo II (succinato-UQ deshidrogenasa).

oxidorreductasa

succinato

El complejo II consta de varios polipptidos, dos de los cuales estn compuestos de succinato deshidrogenasa, enzima que contiene FAD enlazada a membrana que cataliza una reaccin clave del ciclo del cido tricarboxlico. Todos son codificados por genes nucleares. El complejo II proporciona una va para introducir electrones de "baja energa del succinato al FAD o a la ubiquinona. La transferencia de electrones a travs del complejo II no se acompaa de translocacin de protones.

Complejo III (UQH2-citocromo c oxidorreductasa o citocromo bci). El complejo III cataliza la transferencia de electrones desde la ubiquinona reducida (UQH/?) al citocromo c, que es una protena perifrica de membrana y no parte integral de alguno de los complejos de la cadena respiratoria. Se calcula que cuatro H+ se translocan a travs de la membrana por cada par de electrones transferidos por medio de la ubiquinona al complejo III. El complejo III contiene casi 10 polipptidos, uno codificado por el genoma mitocondrial, e incluye varios grupos hem y centros de hierro y azufre.

Complejo IV (citocromo c-O2 oxidorreductasa o citocromo c oxidasa).

El paso final del transporte de electrones en la mitocondria es la transferencia de cuatro electrones del citocromo c (c. c) al oxgeno segn la reaccin 4cit c 2+ + O2 + 4H+ - 4cit c 3+ + 2H2O

catalizada por el complejo IV, un enorme ensamblamiento de polipptidos comnmente denominado citocromo oxidasa.
Adems de reducir el 02, la citocromo oxidasa tambin transloca protones a travs de la membrana interna.

La reaccin ocurre paso a paso. Primero se transfieren electrones, uno cada vez, del citocromo c a travs de un ion cobre (CUA) de la subunidad II al hem (hem o) de la subunidad I.
Desde ah, los electrones pasan, uno cada vez, a un centro redox (binuclear) localizado en la subunidad I que contiene un segundo hem (hem a3) y a un segundo ion cobre (CuB) situado a una distancia menor de 5. Una vez que el centro en a3-CuB acepta su segundo electrn, una molcula de O2 se une al centro y acepta el par de electrones, formando un peroxianin O22-. Para impedir su liberacin, el ion perxido reactivo se mantiene en su sitio como un puente entre los componentes con carga positiva a3 y CUB. -

En el siguiente paso se transfiere un tercer electrn al centro binuclear, que acepta un protn procedente de la matriz y rompe el enlace covalente O-O para reducir uno de los tomos O. El paso de un cuarto electrn y la entrada de tres protones adicionales procedentes de la matriz conduce a la formacin de dos molculas de agua. Por cada protn eliminado de la matriz queda detrs un exceso de carga negativa (en forma de un OH~), y por lo tanto contribuye directamente al gradiente inico a travs de la membrana mitocondrial interna. Algunos venenos respiratorios potentes, incluyendo monxido de carbono (CO),y cianuro (CN~), producen su efecto txico por enlace al sitio cataltico de la citocromo oxidasa. (El monxido de carbono tambin se enlaza al grupo hem de la hemoglobina.)

Adems de actuar como agente reductor de O2, la citocromo oxidasa es una bomba de protones.
De alguna manera, el paso de electrones a travs de las partes del complejo citocromo oxidasa induce cambios de conformacin, que causa que los protones se desplacen desde la matriz al interior del espacio intermembrana.

La transferencia de electrones del citocromo c al O2 ocurre por un gran descenso del potencial redox (cuando menos 300 mV).

Un descenso de cuatro electrones en este potencial puede explicar la translocacin de hasta seis H+ a travs de la

membrana, adems de los cuatro protones derivados de la

matriz que se consumen en la conversin de O2 a agua. La verdadera proporcin tal vez se aproxime ms a los cuatro H+ bombeados por molcula de O2 reducida, pero an es un tema de considerable debate.

Translocacin de protones y establecimiento de una fuerza motriz de protones

La energa libre liberada en forma de electrones pasa de NADH o de FADH2 al oxgeno molecular y se emplea para desplazar protones de la matriz al espacio intermembrana. La translocacin de protones a travs de la membrana interna es electrgena (o sea, produce voltaje), debido a que proviene de un mayor nmero de cargas positivas en el espacio intermembrana y el citoplasma, y un mayor nmero de cargas negativas dentro de la matriz. Por lo tanto, se deben considerar dos componentes en el gradiente de protones. Uno es la diferencia de concentracin entre los iones hidrgeno a un lado de la membrana en comparacin con el otro lado; ste es un gradiente de pH (pH). El otro componente es el voltaje () que resulta de la separacin de cargas a travs de la membrana.

Un gradiente con un componente de concentracin (qumico) y un componente elctrico (voltaje) es un gradiente electroqumico. La energa presente en ambos componentes del gradiente electroqumico de protones se puede combinar y expresar como fuerza motriz de protones (p), que se mide en milivoltios. Por lo tanto, p = V - 2.3 RT/F pH

Ya que 2.3 RT/F es igual a 59 mV a 25C, la ecuacin3 se puede replantear como p = V - 59 pH donde pH se expresa con valor negativo en tanto [H+] sea mayor en el espacio intermembrana que en la matriz.

6.5. FOSFORILACIN OXIDATIVA Y MODELO QUIMIOSMTICO. Cuando los electrones se transfieren a los aceptores a lo largo de la cadena de transporte electrnico, descienden por una cuesta de energa. En tres puntos de esta cuesta se libera suficiente cantidad de energa para transportar protones a travs de la membrana mitocondrial interna, y finalmente sinterizar ATP. La transferencia de cada par de electrones, del NADH al oxgeno, rinde tres molculas de ATP.

El flujo de electrones est estrechamente acoplado con la fosforilacion del ADP, y no habr flujo de electrones a menos que tambin ocurra la fosforilacin. En cierta forma esto impide que haya desperdicio, ya que no habr flujo de electrones, a menos que se produzcan fosfatos de alto contenido energtico. Si el flujo de electrones no se acoplara con la fosforilacin, la energa de los electrones sera desperdiciada en forma de calor, y no habra produccin de ATP.

Ya que la fosforilacin del ADP, a fin de formar ATP, se acopla a la oxidacin de los componenete del sistema de transporte electrnico, este proceso es llamado fosforilacin oxidativa.

Desde hace tiempo se sabe que la fosforilacin oxidativa se lleva a cabo en la mitocondria , y muchos experimentos han modtrado que la transferencia de electrones del ANDH al oxgeno produce tres molculas de ATP; sin embargo, por largo tiempo fue un misterio la forma en que se sintetizan estos ATP. As, en 1961, Peter Mitchell propuso el modelo quimiosmtico, por el cual le otorgaron el premio Nobel en 1978. Mitchel propuso que el transporte de electrones y la sntesis de ATP se acoplan mediante un gradiente protnico a travs de la membrana mitocondrial. Segn este modelo, la secuencia en la transferencia de electrones del NADH o del FADH2 al oxgeno (mediante acarreadores de electrones), da lugar a un bombeo de protones hacia el espacio intermembranoso de la membrana mitocondrial interna.

Los protones son bombeados fuera de la matriz por tres complejos de transferencia de electrones; cada uno de ellos asociado con determinadas etapas del sistema de transporte de electrones. Este proceso genera un potencial de membrana a travs de la membrana mitocondrial interna, y el medio en el espacio intermembranoso tiene una carga positiva. La diferencia en la concentracin de protones entre la matriz y el espacio intermembranoso representa una energa potencial. Este potencial de energa dervia en parte de la diferencia en el pH, y en parte de la diferencia en la carga elctrica, entre ambos lados de la membrana. La membrana mitocondrial interna es impermeable al paso de protones, los cuales pueden desplazarse, de regreso a la matriz mitocondrial, slo a travs de canales especiales en la membrana. Estos canales se encuentran en la ATPsintetasa , tambin llamada complejo Fo-F1 . La ATP sintentasa forma complejos llamados crestas respiratorias los cuales se proyectan hacia adentro y fuera de la membrana mitocondrial. Los canales protnicos se componen de cadenas de protenas que atraviesan la membrana. A medida que los protones se desplazan a favor de un gradiente elctrico, la ATP sintetasa utiliza la energa liberada a fin de producir ATP.

La ATP sintetasa acta como una turbina, convirtiendo una forma de energa en otra. El gradiente protnico a travs de la membrana mitocondrial interna acopla la fosforilacin con la oxidacin. En el proceso de la fosforilacin oxidativa, la energa del potencial de transferencia de electrones del NADH (es decir su capacidad de transferir electrones a otro compuesto ) se convierte en energa del potencial de transferencia de fosfatos del ATP (capacidad del ATP de transferir grupos fosfato a otros compuestos). El potencial de transferencia de electrones de un compuesto se refleja en su potencial redox, que se expresa en volts.
El potencial redox del gas hidrgeno, H2, se define como cero volts. Un compuesto con un potencial redox negativo tiene menor afinidad electrnica y , por tanto, pierde electrones con mayor facilidad que el H2 . Un compuesto con un potencial redox positivo tiene mayor afinidad por los electrones, y por tanto acepta electrones con mayor facilidad que el H2. Un reductor fuerte, como el NADH, tiene un potencial redox negativo , un agente oxidante como el O2, tiene un potencial redox positivo . La fuerza que conduce a la fosforilacin oxidativa es el potencial de transferencia de electrones del NADH

Peroxisomas
En 1954, el examen con microscopio electrnico de las clulas de los tbulos renales revel una partcula con apariencia granular densa de 0.5 a 1.0/im de dimetro, aproximadamente, enlazada a la membrana. Nada se saba acerca de la funcin de esta estructura y se le denomin microcorpsculo. Posteriormente se encontraron organelos similares en varias clulas eucariotas. Conforme se conoci ms acerca de su funcin se le dividi en dos tipos principales: peroxisomas, presentes tanto en plantas como en animales, y glioxisomas, que slo se observan en las plantas. Los microcorpsculos comparten dos propiedades con las mitocondrias: participan en el metabolismo oxidativo e importan sus protenas despus de ser traducidas.

Los peroxisomas son vesculas simples rodeadas por una membrana y con frecuencia contienen un ncleo cristalino denso consistente en una enzima oxidativa.
Los peroxisomas son "fbricas" metablicas muy verstiles, con enzimas que participan en actividades tan diversas como oxidacin de cidos grasos de cadena muy larga; sntesis heptica de colesterol y cidos biliares; y sntesis de plasmalgenos, un tipo importante de fosfolpidos del tejido cerebral, en los cuales un cido graso se une al glicerol mediante una unin ter en vez de una unin ster. La enzima luciferasa, que genera la luz emitida por las lucirnagas, tambin es una enzima peroxismica.

Estos organelos se denominaron "peroxisomas" debido a que se encuentran en los sitios donde se forma perxido de hidrgeno (H2O2), un agente oxidante txico y muy reactivo. El perxido de hidrgeno se sintetiza por accin de varias enzimas, incluyendo urato oxidasa, glucolato oxidasa y aminocido oxidasas, que utilizan el oxgeno molecular para oxidar sus respectivos sustratos. El H2O2 generado en estas reacciones rpidamente se descompone por accin de la enzima catalasa, presente en elevada concentracin en estos organelos. Igual que en la mitocondria, las protenas encontradas entre los peroxisomas se sintetizan en el citoplasma y luego son importados al organelo despus de su traduccin.

El otro tipo principal de microcorpsculos, los glioxisomas, contienen algunas de las mismas enzimas encontradas en los peroxisomas (como catalasa y enzimas para la oxidacin de cidos grasos), pero adems contienen otras enzimas. Los glioxisomas son ms prominentes en las plantas de semilla, que dependen de los cidos grasos almacenados para obtener energa y materiales para iniciar la formacin de una nueva planta. Una de las actividades metablicas primaras en estas semillas germinantes es convertir los cidos grasos almacenados en carbohidratos (gluconeognesis). El desdoblamiento de los cidos grasos almacenados genera acetil-CoA, que puede condensarse con oxaloacetato para formar citrato, el cual a su vez puede convertirse en glucosa mediante una serie de enzimas localizadas en el glioxisoma.

6.7. Genoma mitocondrial

Esquema del ADNmt humano

El ADNmt humano fue completamente secuenciado en 1981 por Anderson y colaboradores y hoy se utiliza esa primera secuencia como referencia. Las dos hebras complementarias o cadenas del ADNmt tienen diferencias significativas en la composicin de las bases que conforman sus nucletidos de manera que se denomina cadena pesada o H (Heavy) a aquella que es rica en bases pricas y cadena ligera o L (Light) a la que por el contrario posee un nmero mayor de bases pirimidnicas. Adems de la regin codificante, hay una regin no codificante denominada regin control y debido a las estructuras visibles bajo microscopia electrnica durante la replicacin tambin es llamada asa de desdoblamiento (D-Loop).

La nomenclatura que se utiliza para nombrar la posicin que ocupa cada nucletido fue elegir arbitrariamente una posicin intermedia en la regin control y denominar a esta posicin 1 y continuar en sentido 5 a 3 alrededor del crculo hasta la posicin 16569 pares de bases. La regin control es responsable de la regulacin de la molcula de ADNmt, tiene aproximadamente 1122 pares de bases de longitud y contiene los promotores de transcripcin de ambas cadenas y el origen de replicacin de la cadena pesada. La regin control abarca desde la posicin 16024 hasta la 16569 continuando desde la posicin 1 hasta la 576.

Mapa del genoma mitocondrial humano y ampliacin de la regin control (Holland et al. Forensic Science Review. Vol 11 N. 1)

A diferencia de lo que ocurre en las regiones codificantes del ADNmt, la regin control tiene una alta variabilidad entre individuos, razn por la cual se ha convertido en objeto de anlisis en estudios antropolgicos e investigacin en gentica forense.

Podemos dividir la regin control en otras regiones en funcin de su grado de variabilidad. Por un lado las mas ampliamente estudiadas y conocidas por su alto grado de variabilidad; son la regin hipervariable 1 (HV1) que abarca las posiciones 16024-16365 y la regin hipervariable 2 (HV2) que va desde la posicin 73 a la 340 (a veces se habla de una tercera regin hipervariable: la HV3 entre las posiciones 440-560). Pero adems existen otras regiones con un menor grado de variabilidad conocidas como regin variable 1 (VR1) localizadas desde la posicin 16366 hasta la 72 y regin variable 2 (VR2) que esta comprendida entre las posiciones 341-576

La explicacin a la herencia materna es que las mitocondrias de los espermatozoides no contribuyen en la fertilizacin debido en primer lugar a que en sus cabezas hay solo unas pocas copias de ADNmt en comparacin con los varios miles de copias de ADNmt del vulo, pero adems parece haber un mecanismo de reconocimiento especfico que elimina las pocas mitocondrias paternas que pudieran introducirse en el vulo. Por lo tanto y como consecuencia de lo anterior el ADNmt no esta sometido a procesos de recombinacin.

Alto nmero de copias: Aunque el ADNmt contiene mucha menos informacin que el ADN nuclear, en cambio, tiene muchas mas copias por clula. Por trmino medio se estima que hay de 10-100 mitocondrias por clula y de 10-100 copias de ADNmt por mitocondria, lo que supone de 100-10000 copias de ADNmt por clula.