Universidad Catlica del Norte

Magister en Acuicultura 2008 - 2009

Acuicultura y Biotecnologa Aplicaciones Biotecnolgicas para el Control de la Reproduccin del San Pedro (Oplegnathus insignis) (Oplegnathus insignis

Alumno: Avelino Muoz Manterola Profesor: Nelson F. Daz

Coquimbo, Mayo de 2008

Acuicultura y Biotecnologa

Control de la Reproduccin de San Pedro (Oplegnathus insignis)

Contenido
Introduccin ........................................................................................................................................ 3 Identificacin del Problema ................................................................................................................ 4 Solucin Propuesta.............................................................................................................................. 5 Descripcin de Tcnicas Biotecnolgicas Propuestas ......................................................................... 6 Biotecnologa Propuesta ................................................................................................................. 6 Mtodos de Aplicacin.................................................................................................................... 6 Materiales y Equipamiento ............................................................................................................. 6 Diseo Experimental ........................................................................................................................... 7 Resultados Esperados ....................................................................................................................... 11 Bibliografa ........................................................................................................................................ 12

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Control de la Reproduccin de San Pedro (Oplegnathus insignis)

Introduccin
Dentro de las nuevas especies potenciales de cultivo en Chile se encuentra el San Pedro (Oplegnathus insignis), esta especie ha sido cuestin de estudio desde el ao 2000, logrndose alentadores resultados en cuanto a la reproduccin y produccin de juveniles, actualmente se desarrolla el proyecto Innova Chile Optimizacin de la Tecnologa de Produccin de Juveniles de San Pedro (Oplegnathus insignis), ejecutado por la Corporacin de Desarrollo de la Universidad Arturo Prat en instalaciones ubicadas en la ciudad de Iquique. Cabe destacar, que esta especie, adems de presentar condiciones favorables para el desarrollo de su cultivo en aspectos tecnolgicos, tambin presenta reales alternativas de posicionarse en los mercados internacionales tanto de Amrica como de Asia. En este contexto, es que se busca optimizar procesos crticos de produccin, principalmente los relacionados con el control de la reproduccin, seleccin de reproductores y nutricin. La informacin biolgica de la especie es escasa, aunque se cuenta con el conocimiento bsico en los aspectos reproductivos naturales, los cuales han servido como base para el desarrollo de la tecnologa de reproduccin, sin embargo, an no es posible controlar este proceso de manera eficiente de acuerdo a los objetivos productivos planteados en las investigaciones que se estn realizando actualmente. En relacin a lo anterior, es que el presente trabajo plantea la metodologa para evaluar mecanismos biotecnolgicos de origen fisiolgico para el control de la maduracin y desove de ejemplares reproductores de esta especie en condiciones controladas fuera de su estacin natural de reproduccin.

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Identificacin del Problema

Oplegnathus insignis es una especie nativa de las costas del norte de Chile, se distribuye desde Paita (Per) hasta Antofagasta, adems se reporta su presencia en las Islas Galpagos, vive en el intermareal y submareal rocoso del litoral en profundidades de hasta 14 mt. En el ao 2000, se iniciaron las primeras investigaciones en torno a la reproduccin en cautiverio de las especie. A partir de ejemplares reproductores de origen silvestre capturados en las costas de la Provincia de Iquique entre abril y agosto de 2003, fue posible realizar la aclimatacin y acondicionamiento de los ejemplares obteniendo desoves espontneos entre diciembre de 2003 y marzo de 2004, posteriormente las experiencias realizadas con el mismo plantel de reproductores produjeron desoves entre diciembre de 2006 y marzo de 2007. Lo anterior corrobora que la poca de desove natural de la especie es en los meses de verano en la I Regin, similares resultados se reportan para la especie en el litoral de la II Regin, Campe, 1975, reporta que en los meses de verano y otoo se encuentra el mayor porcentaje de individuos maduros, adems indica que los individuos inmaduros o juveniles corresponden a las tallas de hasta 22 cm de largo, los que estn sobre los 22 cm hasta 30 cm son individuos inmaduros y corresponderan a los llamados reclutas y que posteriormente iniciaran su maduracin. Los individuos de ms de 30 cm de longitud que presentan un estado de madurez sexual similar a los inmaduros, corresponden a individuos que ya desovaron y se encuentran en recuperacin gondica. O. insignis es un desovador mltiple y los huevos se comportan como huevos pelgicos aislados con un dimetro de 0.87 a 0.96 mm, los cuales exhiben una gota lipdica con un dimetro de 0.16 mm a 0.21 mm. La relacin entre cantidad de desoves y temperatura promedio del agua 4 das antes del desove muestra una fuerte relacin a 19,6 C. De acuerdo a lo anterior y dado el relativo xito del manejo y aclimatacin de los reproductores de la especie para el desove espontneo en condiciones controladas en poca reproductiva natural es que se plantea llevar adelante las experiencias para controlar la maduracin sexual y el desove fuera de este perodo. Lo anterior responde a las necesidades propias de un cultivo integral de peces marinos en donde el control de los procesos reproductivos es clave para el suministro y abastecimiento seguro de juveniles para las siguientes fases de produccin. Si bien, las tcnicas biotecnolgicas en este aspecto son variadas y han sido estudiadas para varias especies de peces, su aplicacin en recursos como O. insignis requieren de una metodologa propia de acuerdo a las caractersticas fisiolgicas y reproductivas de esta especie.

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Solucin Propuesta
La solucin propuesta para el problema antes planteado es la aplicacin de una biotecnologa de naturaleza fisiolgica que dice relacin con la induccin ambiental de la reproduccin, la cual se basa en el control del fotoperodo para gatillar el inicio de la maduracin sexual de los peces. De acuerdo a lo planteado por Daz (2006), el ciclo reproductivo gonadal y la poca de desove natural estn modulados fuertemente por las variaciones del ciclo fotoperodico anual, por lo cual la tcnica del manejo del fotoperodo consiste en acortar o aumentar la duracin del ciclo del fotoperodo. En peces la poca reproductiva generalmente es corta y dependiente de las caractersticas propias de cada especie, para que se produzca el desove o puesta es necesario que previamente se haya producido el desarrollo y maduracin de las gnadas. Por otro lado, numerosos autores citan la importancia de la temperatura en la maduracin final de los peces, por lo cual una adecuada combinacin del control del fotoperodo y la temperatura debera gatillar y desencadenar los procesos de maduracin y desove respectivamente. En este contexto, la aplicacin combinada de ambos parmetros debera ser la tcnica biotecnolgica adecuada para inducir los procesos reproductivos en O. insignis. Por lo tanto se propone el majo del fotoperodo con incrementos bimensuales de las horas de luz desde 11 hasta 14 horas luz/da a partir de los meses de invierno hasta la primavera, con el objetivo de comprimir el perodo natural de desove de la especie por lo menos en un mes. Adems, se plantea combinar el fotoperodo con alzas graduales de la temperatura en un sistema de recirculacin de agua, con aumentos bimensuales de 1C, desde 16 a 18 C, en los meses de invierno (junio a septiembre) hasta la primavera (septiembre a noviembre).

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Descripcin de Tcnicas Biotecnolgicas Propuestas

Biotecnologa Propuesta
Control de la maduracin gonadal y el desove de O. insignis a travs del manejo combinado del fotoperodo y la temperatura.

Mtodos de Aplicacin
La aplicacin de esta biotecnologa consiste en controlar la longitud de los das con fotoperodos artificiales. Para esto se pueden acondicionar estanques con sistemas de recirculacin e iluminacin artificial con lmparas de haluro metlico de 400 W sobre el nivel del agua generando entre 500 a 1000 lux. Se debe tener precaucin que los estanques sometidos a fotoperodo estn totalmente aislados de luz natural dado que el umbral de respuesta de los peces a luz es muy bajo. De esta manera es posible estimular la recrudecencia de los peces con una disminucin temprana de las horas de luz, lo que implica que estos desovaran un tiempo antes que en el ciclo natural de fotoperodo, inversamente, si se aplica una disminucin tarda de las horas de luz, lo que implica una expansin del fotoperodo, los peces desovarn en forma posterior a la poca natural dado que existir un retraso en la ovulacin de las hembras. Por otro lado, se debe tener en cuenta que la respuesta de los peces a esta tcnica variar dependiendo del sexo, la edad, historia reproductiva, crecimiento y caractersticas genticas (Daz et al. 2006).

Materiales y Equipamiento
Para la aplicacin de esta biotecnologa es necesario contar con sistemas de iluminacin adecuados, lmparas sumergibles o de superficie que generen entre 500 a 1000 lux, adems deben estar conectadas a sistemas de control de encendido y apagado automticos. Tambin es necesario contar sistemas de control de temperatura como chillers o heat pump que regulen en forma automtica la temperatura del agua. Asimismo es necesario contar con equipos para la medicin de parmetros de cultivo como medidores de oxgeno, ph, amonio, nitritos y nitratos, salinidad y slidos disueltos. Adems, se debe contar con estanques capaces de albergar los peces reproductores, los cuales dependern del tamao de los reproductores, la densidad y el nmero de ejemplares en confinamiento. Paralelamente se debe contar con instrumental de precisin para realizar las mediciones de los niveles de sustancias plasmticas y cuantificacin de clulas sanguneas si los parmetros de evaluacin de la actividad reproductiva estn asociados a anlisis sanguneos.
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Diseo Experimental
Manejo de Reproductores Se contempla la utilizacin de 2 estanques de ontempla 20 m3 de capacidad en los cuales se dispondrn dos grupos de reproductores silvestres de 10 individuos cada uno, con una relacin macho hembra de 1:1, la cual ha dados buenos resultados en los desoves espontneos registrados con anterioridad anterioridad, con suministro constante de aire stante aire. Alimentacin La alimentacin ser a saciedad en base a alimento fresco de acuerdo a la alimentacin natural de O. insignis, reportada por Campe, 1975, con adicin de un suplemento rico en cidos grasos poliinsaturados (Selco, INVE). Grupos Experimentales de Reproductores Los dos grupos de reproductores sern mantenidos en condiciones diferentes de fotoperodo y temperatura como se describe a continuacin: Grupo 1: Este plantel corresponde al grupo control, el cual ser mantenido en : condiciones de fotoperodo y temperatura normal. El siguiente grfico muestra el ondiciones fico comportamiento de la temperatura en un ciclo normal de desove de O. insignis. insignis

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Grupo 2: Este plantel ser mantenido en un sistema de recirculacin de agua con : control de fotoperodo y temperatura Se contempla aplicar un fotoperodo gradual temperatura. entre 11 a 14 hrs luz desde junio a noviembre aumentando 1 hora luz bimensualmente, y una temperatura que aumentar gradualmente desde 16 a 18 C con un incremento bimensual de 1 C. La siguiente figura muestra la estrategia propuesta para el control de los parmetros controlados en el grupo experimental de reproductores.

Seleccin de Reproductores Los reproductores sern seleccionados en base a sus condiciones de aspecto externo y el factor de condicin registrado en los meses previos a la experiencia, el rango de peso de los ejemplares machos estar entre 750 a 1200 gr y las hembras estarn en un rango de 950 a 2500 gr. Control del fotoperodo y temperatura El fotoperodo del grupo experimental ser controlado con el uso de una lmpara sumergible de 400 watts de potencia conectada a un temporizador para el control automtico del perodo de iluminacin. La temperatura ser controlada por medio de una bomba de calor marca Aquanetic Modelo A A-10 de 100 gpm y 45000 btu.

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Muestreos Mensuales (Talla-Peso) Se realizarn muestreos de talla y peso mensualmente, se registrar la longitud estndar, longitud total y el peso de cuerpo. Basado en el resultado del muestreo, el ndice de condicin (K) se utilizar como medida inicial para estimar el grado de maduracin. ndice de Condicin = 100

Donde K es el ndice de condicin, W es el peso en gr, y L es la longitud en cm. Muestreos Bimensuales (sangre y biopsias gonadales) Bimensualmente se tomarn muestras de sangre mediante puncin en el seno caudal de aproximadamente 2 ml, las que sern analizadas para determinar los niveles de esteroides sexuales y testosterona por el mtodo de Fluoroinmunoensayo. Adems, se tomarn biopsias gonadales de las hembras con una cnula de 1,5 mm de dimetro por el oviducto, realizando una suave succin. Estas muestras sern fijadas en formalina bufferada al 10% en agua de mar filtrada de acuerdo a lo descrito por Watanabe et al. (1988). Obtencin de ovas Para esto se implementar un estanque recolector de huevos a un costado del estanque de reproduccin, en su interior se colocado un colector el cual cumple la funcin de acumular los huevos que por rebalse salen del estanque de reproductores, para la recoleccin de las ovas se instala un colector de 50 cm de dimetro con forma cnica, hecho de malla de 200 micras, las ovas pasan por rebalse desde el estanque de reproductores al estanque con el colector, con un sistema de codos de 90 instalados dentro del colector, las ovas ingresan con el flujo de agua y no caen directamente sobre la malla o la superficie del agua lo cual puede provocarles dao. El manejo de los huevos captados contempla primero la extraccin desde el colector de malla, traspasando el total del material captado a un recipiente de 10 lt.,
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posteriormente para realizar la separacin de las impurezas y ovas muertas de las ovas fertilizadas se coloca el contenido del recipiente en un estanque cilindrocnico de 80 lts de capacidad, con abundante aireacin para homogenizar el contenido y proceder al recuento total de las ovas obtenidas, tomando con una pipeta 5 muestras de 10 ml, luego y por decantacin (ovas muertas sedimentan y ovas viables flotan) se separarn los huevos viables eliminando el fondo del estanque hasta un 60 % del volumen de agua y rellenando nuevamente hasta 70 lt., esta operacin se debe repetir hasta que las ovas estn libres de impurezas, luego se homogenizar nuevamente el contenido del estanque para realizar el recuento de ovas viables y calcular su porcentaje tomando nuevamente 5 muestras de 10 ml cada una. Evaluacin de los desoves (calidad larval) La evaluacin de la calidad de los desoves ser determinada a travs del clculo de la tasa de eclosin y el ndice de actividad larval. Para ello se aplicarn las siguientes frmulas: Tasa de Eclosin = . + . + 100

ndice de Actividad Especfica = 1

Donde N es el nmero total de larvas, hi la mortalidad acumulada al da i, y k el nmero de das hasta la mortalidad de todas las larvas por inanicin (Radonic et al. 2005).

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Resultados Esperados
Los resultados esperados del presenta trabajo son los siguientes: 1. Acondicionar reproductores de Oplegnathus insignis para el desove con el control del fotoperodo y la temperatura. 2. Lograr la maduracin sexual de ejemplares reproductores de O. insignis antes del perodo normal de maduracin de la especie. 3. Desencadenar el desove espontneo de O. insignis por medio del control del fotoperodo y la temperatura fuera de la estacin normal de desove de la especie. 4. Obtener larvas de buena calidad producto del desove controlado fuera de estacin normal de reproduccin. 5. Definir una metodologa estndar para el control de la reproduccin de O. insignis mediante el manejo del fotoperodo y la temperatura. 6. Controlar el ciclo reproductivo integral de O. insignis a partir de reproductores de origen silvestre aclimatados y acondicionados a condiciones de cautividad.

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Bibliografa
Bambill Gabriel A., Masakazu Oka, Mariela Radonic, Andrea V. Lpez, Mnica I. Mller, Juan J. Boccanfuso and Federico A. Bianca. Manejo de reproductores e induccin de desoves del lenguado Paralichthys orbignyanus (Valenciennes, 1839) en sistema cerrado de recirculacin. Revista de Biologa Marina y Oceanografa 41(1): 45 55, julio de 2006. Castao-Rivera F y Botero-Arango J. Monitoreo de los niveles de testosterona y estradiol en el plasma sanguneo de Hembras de pargo palmero lutjanus analis Mantenidas bajo dos termoperiodos de acondicionamiento diferentes. Bol. Invest. Mar. Cost. 34 243-255 ISSN 0122-9761 Santa Marta, Colombia, 2005 Daz N. F. y R. Neira. Biotecnologa Aplicada a la Acuicultura I. Biotecnologas clsicas aplicadas a la reproduccin de especies cultivadas. Cien. Inv. Agr. 32(1): 45-59. 2005. Daz, Nelson F. Manual de Biotecnologas para el Manejo Reproductivo en Peces. Facultad de Ciencias de la Universidad de Chile. 2006. 109 pp. Futagawa, M. 2007. Relacin entre el desove de Oplegnathus insignis (Kner, 1867) y la temperatura del agua en el norte de Chile. Corporacin Privada para el Desarrollo de la Universidad Arturo Prat, CORDUNAP, Iquique, Chile, Mayo 31, 2007. Shimizu A. Effect of photoperiod and temperature on gonadal activity and plasma steroid levels in a reared strain of the mummichog (Fundulus heteroclitus) during different phases of its annual reproductive cycle. General and Comparative Endocrinology 131 (2003) 310324. Watanabe, W.O., E.P. Ellis, S.C. Ellis, J. Chaves, C. Manfredi, R.W. Hagood, M. Sparsis y S. Arneson. 1998. Artificial propagation of Mutton Snapper Lutjanus analis, a new candidate marine fish for aquaculture. J. World Aquac. Soc. 29: 176-187.

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