1 Curvas de Titulacin de Aminocidos

Curvas de Titulacin de Aminocidos

Guadalupe A. Abreu Hernndez.

Objetivos. a) Determinar el comportamiento de un cido fuerte y uno dbil al titularse con una base fuerte. b) Comprobar el carcter anfotrico de los aminocidos. c) Comprobar la estructura de ion dipolar de los aminocidos. INTRODUCCIN. Los cidos clorhdrico, sulfrico y ntrico, (cidos fuertes), estn completamente ionizados en soluciones acuosas diluidas; al igual que las bases fuertes NaOH y KOH. Los bioqumicos estn frecuentemente ms interesados en el comportamiento de los cidos y bases dbiles, que son los que estn parcialmente ionizados al disolverse en el agua. Un dador protnico y su correspondiente aceptor forman un par cido-base conjugados. Cada cido tiene una tendencia caracterstica a perder su protn en solucin acuosa. Cuanto ms fuerte sea el cido mayor ser la tendencia a perder el protn. La tendencia de cualquier cido (HA) a perder un protn y formar su base conjugada (A-) se define mediante una constante de equilibrio (K) para la reaccin reversible:

de pH. La relacin cuantitativa entre pH, la accin tamponante de una mezcla de cido dbil con su base conjugada, y el pKadel cido dbil viene dada por la ecuacin de Henderson-Hasselbach, que se anuncia a continuacin en su forma ms general:

La estructura general de los aminocidos presentes en las protenas, es la siguiente:

Con excepcin de la naturaleza del grupo R, esta estructura es comn a todos los aminocidos, y el ms sencillo de stos es la glicina:

Las constantes de disociacin de los cidos (constantes de equilibrio) son a menudo designadas como Ka. Los cidos ms fuertes como el frmico y el lctico, tienen constantes de disociacin ms altas; el pKa es anlogo al pH y se define mediante las ecuaciones: pH = -log [H+] ; pKa = log = -log Ka

La titulacin se utiliza para determinar la cantidad de un cido en una solucin, se titula un volumen determinado de cido con una solucin de una base fuerte, normalmente NaOH, de concentracin conocida. El NaOH se aade en pequeas porciones hasta que se ha consumido (neutralizado) el cido segn se determina mediante un colorante indicador o un pHmetro. Al graficar el pH frente a la cantidad de NaOH aadido, obtenemos la curva de titulacin. En el punto medio de la titulacin las concentraciones del dador de protones y del aceptor de protones son iguales, en este punto el pH es numricamente igual al pKa. El rasgo ms importante de la curva de titulacin de un cido dbil es que muestra grficamente que un cido dbil y su anin, un par cido-base conjugados, pueden actuar como tampones, es decir, presentar una buena capacidad amortiguadora de cambios

Los aminocidos en solucin acuosa estn ionizados y pueden actuar como cidos o como bases. El conocimiento de las propiedades cido-base de los aminocidos es muy importante para comprender las propiedades fsicas y biolgicas de las protenas. Adems las tecnologas de separacin, identificacin y cuantificacin de los diferentes aminocidos se basan en estas propiedades. La estructura que se muestra anteriormente de la glicina, es su forma no inica, pero a pH neutro predomina su estructura zwitterinica, que es la siguiente:

Los aminocidos tienen curvas de titulacin caractersticas.

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RESULTADOS

pKa Glicina: 2.25, pKbGlicina: 9.71; pKa Glicina(Reportado en la literatura):2.34, pKbGlicina (Literatura):9.6. pK CH3COOH: 4.6; pK CH3COOH (Literatura):4.76. pI: 5.98; pI (Literatura): 5.97. ANLISIS DE RESULTADOS Al graficar los datos de pH obtenidos experimentalmente, construimos la curva de titulacin del HCL y del CH3COOH, el primero un cido fuerte y el segundo uno dbil, (Ver grafica 1 anexa) ambos titulados con una base fuerte (NaOH) y lo que observamos es que en el HCl el valor de pH se mantiene casi constante hasta llegar a la mitad de la titulacin, donde sube bruscamente hacia su pH neutro. En el caso del CH3COOH al ser titulado con NaOH observamos en nuestra curva de titulacin cambios bruscos al inicio y al final de la valoracin, mientras que en la parte media el pH casi no vara, entonces decimos que esta zona presenta una buena capacidad amortiguadora ante cambios de pH, o es un tampn. Sabemos que el HCl es un cido fuerte, mientras que el CH3COOH es un cido dbil, el que sea un cido fuerte nos indica que se disocia totalmente, pero un cido dbil slo se disocia parcialmente, para calcular cuantitativamente la proporcin en que lo hace, nos ayuda la constante de disociacin o Kd. La cual se expresa como el cociente de productos sobre reactivos, en el caso del CH3COOH, el cual empleamos: Ahora bien, a la mitad de nuestra titulacin, la cantidad de cido actico y su sal conjugada con la que contamos, es la misma, a este punto lo llamamos punto de equivalencia, usando la ecuacin de Henderson-Hasselbach:

Obtenemos: pH = pK; Por lo que decimos que el pK es el pH cuando la concentracin de cido y su base conjugada son las mismas, interpolando en la grafica, el punto de equivalencia, obtuvimos un pK de 4.6. Y utilizando la frmula: pK = -log Kd. Kd = 10 -4.6 Kd = 2.511 x 10-5 Este fue el valor de constante de disociacin del cido actico que obtuvimos experimentalmente.

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En la Grafica 2, se observan las titulaciones de la Glicina, con HCl y NaOH, en las cuales las curvas que obtuvimos estn invertidas una respecto a la otra, con esto comprobamos el carcter anfotrico de los aminocidos pues nos indica que el grupo amino en estado ionizado (NH3+) se comporta como cido y el carboxilo en estado ionizado se comporta como base. Adems al agregar formol neutro (CH2O) a la glicina la curva de titulacin con HCl no vara apreciablemente, mientras que en la curva de titulacin con NaOH s se observa un gran cambio, esto porque al titular con una base fuerte, el grupo amino pasa de ser una amina secundaria a una terciaria (se vuelve ms cido) El pH al cual la glicina se encuentran en su forma zwitterinica, es conocido como punto isoelctrico pI, el cual se calcula mediante la ecuacin: pH = pKa + log [HCO3-] [H2CO3] 7.4-6.4 = log [HCO3-] [H2CO3] [HCO3-] [H2CO3] 101 10

Por lo que en este sistema, la concentracin de sal conjugada debe ser 10 veces mayor a la del cido, esto nos indica que hay una mayor capacidad de regular sustancias cidas en nuestra sangre. 2. Investigar la estructura del cido glutmico, sus estructuras ionizables, valores de pK para cada una, su curva de titulacin y su curva de titulacin con formol.

Y nuestro valor de punto isoelctrico obtenido experimentalmente fue: pI = 2.25 + 9.7 2 pI= 5.98 *El pKa lo obtuvimos al interpolar en la grafica el pH a la mitad de la titulacin de la glicina con HCl y el pKb al interpolar el pH a la mitad de la titulacin con NaOH. CONCLUSIONES Esta prctica, aunque su desarrollo fue sencillo, nos deja conocimientos amplios, sobre todo las curvas de titulacin, que son herramientas muy poderosas, ya que a travs de stas pudimos determinar, por ejemplo, el pKa, el pKb, y por medio de stos, el punto isoelctrico de un aminocido. El conocer el comportamiento cido-base de los aminocidos es de vital importancia, por ejemplo, para su separacin. Adems esta prctica nos ayuda a entender las propiedades de los aminocidos, como su elevado punto de fusin, que podemos atribuir a su estructura de in dipolar. CUESTIONARIO 1. Investigar cules son los principales pares cidobase conjugados que se encargan de regular el pH en el plasma sanguneo. Investigar su pK.

Tabla 2. Valores de pK para las estructuras ionizables del cido Glutamico. Aminocido c. glutmico pK1 (-COOH) 2.19 pK2 (-NH3+) 9.67 pK3 (R) 4.25

BIBLIOGRAFA Lehninger, Albert., Nelson, David L., Cox, Michael M., (1993) Principios de Bioqumica. Segunda Edicin, Ediciones Omega, Barcelona, Espaa

El sistema tampn del bicarbonato (H2CO3 - HCO3-) es el principal regulador del plasma sanguneo. pH H2CO3= 3.8; pH HCO3- = 10.2; pKa= 6.4, pK H2CO3=3.8; pK HCO3- = 10.2

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