UNIVERSIDAD PRIVADA ANTENOR ORREGO

FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS

ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA

LEPTOSPIROSIS
Juan Carlos Ordez Fernndez

PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA

DOCENTE: JOSE VILLENA SUAREZ, M.V. MSc.

LEPTOSPIROSIS

INTRODUCCION

La leptospirosis es una enfermedad bacteriana causada por especies patgenas del Gnero Leptospira. La enfermedad ocurremundialmente en numerosos huspedes animales, incluyendo al perro. La enfermedad en el canino se presenta como unainfeccin aguda de rin e hgado y, a veces, como una septicemia. La enfermedad crnica renal es una secuela comn deinfeccin y los abortos pueden ocurrir en hembras preadas. Debido a que varios aspectos de la infeccin no se entiendenbien, existe la posibilidad que le enfermedad en perros no sea diagnosticada. En algunos pases los eventos relacionados a la infeccin por esta bacteria, hancolocado a la leptospirosis a la cabeza de la lista de diagnsticos diferenciales para perros que se presentan con signos deenfermedad aguda de hgado y/o rin. Mientras que los mtodos diagnsticos se han perfeccionado a lo largo de los aos, lamayora son relativamente insensibles. La informacin acerca de la leptospirosis es an ms complicada debido a grandescambios en la clasificacin taxonmica del Gnero Leptospira. Para poder comprender patrones cambiantes de la enfermedaden los perros, es necesario reconocer que esta infeccin re-emergente est influenciada por los ciclos de infeccin en animalessalvajes, desde donde la infeccin podra diseminarse hacia poblaciones de animales domsticos. Otros factores que afectanel patrn de enfermedad en perros son la historia de vacunacin y el uso de antibiticos

ETIOLOGIA. La leptospirosis, enfermedad zoontica de importancia mundial en muchos animales, es causada por infeccin de serotipos antignicamente distintos del Leptospira interrogans. Se encuentran en la naturaleza en muchos animales salvajes y domsticos que fungen como huspedes reservorios y sirven como fuente potencial de infeccin para los seres humanos y otros huspedes accidentales. La leptospira es una bacteria delgada, flexible y filamentosa (de 0.1 a 0.2 m de ancho por 6 a 12 m de largo) compuesta por finas espirales con terminaciones en forma de gancho. Est compuesta por un cilindro protoplasmtico enrollado alrededor de un filamento axial central recto. La cubierta externa se compone de mucopptido antignico. Tiene motilidad, movimientos de contorsin y flexibilidad mientras rota a lo largo de su eje.

Las L. icterohaemorrhagiae, L. canicola y L. grippotyphosa son los serotipos ms frecuentes aislados de perros con leptospirosis. Pese a la gran cantidad de ttulos de anticuerpos en la poblacin felina, las referencias clnicas de leptospirosis no son frecuentes. Al parecer los gatos se ven menos afectados que los perros tanto en infecciones espontneas como en experimentales. Las leptospiras se transmiten entre los animales mediante contacto directo, transmisin venrea o placentaria, mordedura o ingestin de comida infectada. La difusin de la infeccin aumenta al hacinar a los animales. Los perros que se recuperan de la infeccin, excretan los microorganismo mediante la orina en forma intermitente durante meses o aos despus de la infeccin. La transmisin directa ocurre cuando se expone a los animales susceptibles a vegetacin, tierra, comida, agua u otros fmites contaminados. Las espiroquetas sobreviven en insectos y otros huspedes invertebrados, pero el papel de estos vectores en la transmisin es poco claro.

La Leptospira no se multiplica fuera del husped y su supervivencia depende de las condiciones medioambientales en las cuales las leptospiras se encuentren, por ejemplo, condiciones del suelo y agua. La Leptospira es altamente susceptible a la desecacin y a los cambios de pH - pH<6 y pH>8 son inhibidores; temperaturas < 7 - 10C (44.6 - 50F) y temperaturas >34 - 36C (93 - 96F) son nocivas. Los organismos de Leptospira sobreviven hasta 180 das en suelos hmedos, por varios meses en superficies acuosas y sobreviven an mejor en agua estancada que en movimiento. La fuente de infeccin para animales es ya sea por contacto directo con orina infectada, material fluidos fetales y placentarios, descargas uterinas, o por contacto indirecto con el ambiente contaminado. Una mayor incidencia de la enfermedad ocurre en suelos con pH alcalino, durante las estaciones hmedas (reas de alta precipitacin), en reas bajas donde es susceptible que la lluvia corra, climas clidos y hmedos, reas con abundante superficie de agua generando campos pantanosos y reas barrosas. Adems, perros en patios cercados pueden exponerse a orina de animales salvajes, incluyendo roedores; perros que son ejercitados mediante caminatas en parques y aquellos que vagan en el campo o nadan en estanques o lagunas y en arroyos con poco y lento caudal estn en un mayor riesgo a la exposicin de la leptospirosis. Los perros como razas de caza, animales de exhibicin, y todo perro con acceso a estanques o lagunas o arroyos con poco y lento caudal se encuentran en mayor riesgo que mascotas caseras.

Esquema de Leptospira sp

EPIZOOTIOLOGA La Leptospirosis ocurre mundialmente; sin embargo, no es poco comn encontrarla de forma endmica en una regin geogrfica particular causada por infeccin con slo uno, o varios, serovares. La Leptospira se adapt a "huspedes reservorios primarios", los cuales comnmente son animales salvajes. Estas mismas especies de Leptospira tambin ocurren en casi cualquier otro husped mamfero como "huspedes incidentales o accidentales". El perro es el "husped reservorio primario" para la L. canicola (L. canicola se encuentra en los huspedes accidentales como ratas, mapaches, erizos, ratones de campo y zorrillos) y la L. bataviae (L. bataviae ocurre en los huspedes accidentales como son los erizos y campaoles o ratn de campo). Los perros adems pueden infectarse con varios serovares ms y servir como "huspedes accidentales incidentales". Histricamente, los serovares asociados con la enfermedad clnica en el perro incluan a L. canicola y L. icterohemorrhagiae (el husped reservorio primario es la rata; los huspedes incidentales son ratones, mapaches, zarigeyas, puercoespines, zorros, marmotas, zorrillos, y ratn almizclero). Sin embargo, la idea que se tena de la enfermedad en el Noreste de USA cambi cuando cientos de casos de leptospirosis fueron reportados en Long Island, NuevaYork (USA) en 1996. Desde entonces, ambos L. grippotyphosa (el husped reservorio primario es el ratn de campo;huspedes incidentales son ratones, ratas, mapaches, zarigeyas, zorros, ardillas, zorrillos, puercoespines, rata almizclera,topo) y L. pomona (los huspedes reservorios primarios son bovinos y porcinos; los huspedes incidentales son ciervo, ratn,mapache, zarigeya, puercoespn, zorro, marmota, ratn de campo) se han convertido en ms prevalente en esa regin. La L. bratislava (reservorio primario en cerdos y caballos) emergi en el 2000 como un problema adicional. Laprevalencia/incidencia reportada de leptospirosis en perros podra estar subestimada, porque aparentemente la enfermedadcanina es

subdiagnosticada ya que muchas infecciones son asintomticas. Adems, muchos veterinarios no han incluidoleptospirosis en el diagnstico diferencial de enfermedad renal aguda, o los dueos no han buscado ayuda veterinaria. Debera reconocerse que la seroconversin no siempre se correlaciona con la enfermedad clnica declarada en el perro. Lasleptospiras no se multiplican fuera de la especie animal husped, pero sobreviven bien en un ambiente con ptimascondiciones, como se dijo anteriormente. Con respecto a la ocurrencia de infeccin directa, los perros deben estar expuestos aleptospiras por

orinas infectadas, va transplacentaria y ruta venrea, heridas por mordedura, o ingesta de carne contaminada. La fuente ms comn de leptospirosis en perros es el agua contaminada. La transmisin indirecta adems ocurre desdevegetacin, suelo, o comida contaminada por orina infectada.

PATOGENIA El entendimiento de la patognesis de la leptospirosis es incompleto. Las formas clnicas de la enfermedad se veninfluenciadas por diversos factores, incluyendo el husped, el cual puede ser el husped reservorio primario o un huspedincidental. La enfermedad en huspedes reservorios primarios tiende a ser ms crnica, o asintomtica con una dbilrespuesta de anticuerpos. En contraste, la enfermedad en un husped incidental tiende a ser aguda y severa con marcadarespuesta de anticuerpos. El espectro de enfermedad en el perro va desde subclnico, a subagudo, agudo (severo), o crnico;puede adems haber aborto con o sin placentitis. Inicialmente, las leptospiras penetran las membranas mucosas o piel intacta o raspada. Luego, durante los 4 a 11 dasprximos, los organismos rpidamente invaden el torrente sanguneo, creando una leptospiremia. La leptospiremia tempranase asocia con los signos clnicos de fiebre, anemia transitoria debida a la hemlisis, leucocitosis, hemoglobinuria yalbuminuria. En perros susceptibles, las leptospiras usualmente establecen una septicemia y se esparcen

sistemticamente alos rganos internos, incluyendo el hgado y riones, o a la placenta y feto. El desarrollo extensivo de lesiones especficasdepende del serovar particular y su virulencia, as como tambin del estado inmune del perro. Si un perro ha sido vacunado,probablemente aun tenga anticuerpos en su suero, o puede montar una respuesta anamnsica ante la ausencia de anticuerpos. Los factores de virulencia de Leptospira descritos incluyen factores de adherencia asociados con protenas de superficie(OSP) que le permiten adjuntarse a la fibronectina y colgeno del husped, as como tambin factores desconocidos que lepermiten la invasin a travs de las membranas mucosas o piel hmeda y ablandada. Los factores adicionales incluyen laactividad endotxica del lipooligosacarido (LOS) de Leptospira y su accin sobre monocitos; liberacin de

linfocinas,desencadenando la reaccin de coagulacin intravascular diseminada (CID), incluyendo

hemorragia y sangrados anormales;trombocitopenia y agregacin plaquetaria; el acumulo de LOS presente; la actividad del lpido A de LOS y sus efectostxicos; LOS y sus efectos protectores contra los efectos bactericidas del suero normal; varias hemolisinas y su accincausando hemoglobinuria, anemia hemoltica, y otros daos tisulares; esfingomielinasa C; fosfolipasa A y otras citotoxinas. La L. icterohemorrhagiae usualmente causa fiebre, hemorragia, anemia, e ictericia; mientras que una severa insuficienciarenal aguda y/o hepatitis crnica activa es comn por L. grippotyphosa, resultando en una enfermedad mucho ms severa queaquella causada por L. pomona. Las infecciones por L. pomona son a menudo subclnicas, pero es comn un estado portadorcrnico. La infeccin del perro con el husped adaptado L. canicola comnmente resulta en una nefritis intersticial crnica Los perros jvenes no vacunados, o cuyas madres no fueron vacunadas, se encuentran en un mayor riesgo de enfermedadsevera y muerte que podra ocurrir debido a una septicemia aguda anemia hemoltica. Los perros de mayor edad,previamente vacunados, que luego se infectan naturalmente con una cepa homloga al serovar de la vacuna generalmentetienen signos clnicos mnimos. Durante el perodo de invasin tisular podra ocurrir necrosis heptica como as tambincapilar y dao de clulas endoteliales. Como consecuencia, hemorragias petequiales podran ocurrir en el parnquima renaljunto con dao vascular, nefritis intersticial focal, anoxia anmica, y nefrosis hemoglobinrica. A esta altura puedeocurrir la muerte debido a la falla renal causada por una nefritis intersticial. Hacia el final del estadio de bacteriemia, 7 - 10 das pos-infeccin, la fiebre normalmente baja y las leptospiras desaparecendel torrente sanguneo a medida que emergen los anticuerpos. La recuperacin ocurre a medida que se incrementan losanticuerpos en sangre y la bacteriemia finaliza; la velocidad de recuperacin depende del grado de dao visceral. Lasleptospiras que se han localizado en los tbulos renales, ojo, o tracto reproductivo estn protegidas de los efectosbactericidas de los anticuerpos; por lo tanto una leptospiuria persistente puede desarrollarse, con episodios peridicos defiebre. La emisin de orina infectada puede durar por perodos prolongados, pero los niveles de anticuerpos eventualmente declinanya que las leptospiras, protegidas en los tbulos renales, no estimulan la produccin de anticuerpos. Eventualmente, losperros recuperados pero excretando,

pueden ser seronegativos al analizarse, sin embargo, los organismos continanmultiplicndose y persisten.

Patogenia de la Leptospirosis

El hgado es el segundo rgano parenquimatoso que ms daa la leptospirosis. Pueden producirse profundas disfunciones hepticas sin grandes cambios histolgicos debido al dao subcelular producido por las toxinas leptospirales. El grado de ictericia en casos de leptospirosis tanto en perros como en seres humanos por lo general corresponde a la gravedad de la necrosis heptica. En contraste, la ictericia, hemoglobinemia y hemoglobinuria que se producen en el ganado afectado de leptospirosis, se deben a una toxina hemoltica de un serotipo de L. Pomona. La hepatitis crnica activa es una secuela de la infeccin por L. grippotyphosa en los perros. Tal vez el dao hepatocelular inicial y la persistencia del organismo en el hgado, producen una alteracin en la circulacin heptica, fibrosis y desrdenes inmunolgicos que perpetan la respuesta inflamatoria crnica. Este proceso llega a ocasionar fibrosis e insuficiencia heptica extensas.

Otros sistemas corporales sufren daos durante la fase aguda de la infeccin. Una meningitis benigna se produce cuando las leptospiras invaden el sistema nervioso. Ocasionalmente se produce uvetis en la leptospirosis clnica y experimental debido a una reaccin inmunolgica en el ojo. Se han presentado aborto e infertilidad por la transmisin transplacentaria de leptospiras en un perro con infeccin por L. bataviae.

MANIFESTACIONES CLINICAS. Los signos clnicos en la leptospirosis canina dependen de la edad e inmunidad del husped, los factores del entorno que afectan al organismo y la virulencia del serotipo infectante. Las infecciones leptospirales hiperagudas se manifiestan por una leptospiremia generalizada y muerte. Los primeros signos son pirexia (39.5 a 40C), temblor y debilidad muscular generalizada. Ms tarde se observan vmito, deshidratacin rpida y deterioro vascular perifrico; tambin hay taquipnea, pulso rpido e irregular y mala perfusin capilar, defectos de coagulacin y dao vascular con hematemesis, hematoquecia, melena, epistaxis y petequias generalizadas. Los perros enfermos que se hallan en etapa terminal se deprimen, presentan hipotermia y ya no les queda tiempo para que desarrollen insuficiencia renal y heptica.

Las infecciones subagudas se caracterizan por fiebre, anorexia, vmito, deshidratacin con incremento de la sed. La renuencia a moverse y la hiperestesia paraespinal en los perros puede

deberse a inflamacin muscular, renal o de meninges. Las membranas mucosas parecen inyectadas y hay petequias y hemorragias equimticas generalizadas. La conjuntivitis, rinitis y tonsilitis usualmente van acompaadas de tos y disnea. El deterioro progresivo de la funcin renal se manifiesta mediante oliguria o anuria. La funcin renal de los perros que sobreviven a la infecciones subagudas puede regresar a la normalidad en dos a tres semanas o tal vez se presente insuficiencia renal crnica polirica compensada. La ictericia es ms frecuente en perros afectados con la modalidad subaguda de la enfermedad. La colestasis intraheptica resultante de la inflamacin heptica puede ser tan completa que el color fecal cambia del color caf a gris. Perros con hepatitis crnica activa o fibrosis heptica crnica como secuela de leptospirosis pueden mostrar signos manifiestos de insuficiencia del hgado, entre ellos inapetencia crnica, prdida de peso, ascitis, ictericia o hepatoencefalopata. Con cierta frecuencia se presentan intususcepciones intestinales en perros con infeccin subaguda. Una palpacin abdominal cuidadosa se debe efectuar en los perros que presentan vmito y diarrea persistentes. En estos casos hay pocas heces y aparece hematoquecia o melena.

DIAGNOSTICO Hallazgos de laboratorio Los hallazgos clnicos en casos tpicos de leptospirosis canina incluyen leucocitosis y trombocitopenia. El conteo de leucocitosis flucta segn grado y gravedad de la infeccin. La leucopenia, frecuente en la fase leptospirmica se convierte en leucocitosis con desviacin a la izquierda. Hay un marcado aumento en los valores de la sedimentacin eritroctica relacionado con la hiperfibrinognemia e hiperglobulinemia. Se encuentra incremente en el nitrgeno ureico sanguneo (BUN) y en la creatinina en perros con grados variantes de insuficiencia renal. Las alteraciones en los electrolitos por lo general acompaan el grado de disfuncin renal y gastrointestinal. En la mayor parte de los casos hay hiponatremia, hipocloremia, hipopotasemia e hiperfosfatemia, mientras la hiperpotasemia y la hiperglucemia se desarrollan en casos con insuficiencia renal terminal. Se relaciona una ligera hipocalcemia con hipoalbuminemia y la disminucin de la concentracin de la fraccin de calcio ligada a protenas. En los animales gravemente afectados se reducen las concentraciones de

bicarbonato srico y el pH sanguneo, lo cual refleja una acidosis metablica. En ocasiones se presenta hipoglucemia con insuficiencia heptica grave. El dao heptico se demuestra mediante el incremento de la actividad de ALT, AST, deshidrogenasa lctica en suero, la actividad de ALP en suero y la concentracin de la bilirrubina. Por lo regular una bilirrubinuria marcada precede a una hiperbilirrubinemia. Se encuentra sobre todo bilirrubina conjugada en el suero y sta logra su mxima concentracin a los seis u ocho das siguientes al inicio de la enfermedad. Puede encontrarse aumento en la retencin de sulfobromoftalena (>5%) en la leptospirosis aguda anterior al inicio de la ictericia y en perros ms tarde presentan hepatitis activa crnica. El aumento en la concentracin de amilasa srica sin los cambios correspondientes en la lipasa srica refleja liberacin de las fuentes hepticas y del intestino delgado, as como una disminucin en la funcin renal. Perros con intususcepcin tienen las ms altas concentraciones de amilasa srica. La actividad de la creatininfosfocinasa srica aumenta cuando hay inflamacin del msculo esqueltico. El uroanlisis revela proteinuria y bilirrubinuria por el aumento en el nmero de desechos granulares, leucocitos y eritrocitos en el sedimento. Hace poco tiempo se encontr trombocitopenia y aumento en la degradacin de los productos de fibringeno en perros infectados experimentalmente con L. icterohaemorrhagiae. En la mayora de los perros, los otros parmetros de coagulacin son normales, l cual indica mecanismos hemostticos compensados. Los perros gravemente afectados a menudo presentan dao endotelial vascular con hipofibrinogenemia y trombocitopenia, resultad de la coagulacin intravascular diseminada (CID). Aunque en muchos perros aparece una meningitis subclnica, el aumento en la concentracin de protena y el conteo celular pueden detectarse mediante un anlisis de lquido cefalorraqudeo (LCR).
QUIMICA SANGUINEA
B N A

HEMOGRAMA
B N A

ANALISIS ORINA
B N/A A

BUN Creatinina glucosa bilirrubina directa bilirrubina total colesterol triglicridos cidos biliares

leucocitos totales neutrfilos en banda neutrfilos linfocitos monocitos eosinfilos basfilos

pH densidad albmina glucosa cuerpos cetnicos sangre oculta bilirrubina leucocitos

Ca P Na K HCO3 Cl AST (SGOT) ALT (SGPT) CPK GGT fosfatasa alcalina amilasa lipasa albmina globulina protena total

hemates totales hemoglobina hematcrito (VPG) VCM hemates nucleados reticulocitos cuerpos de Heinz plaquetas

hemates clulas epiteliales cilindros cristales bacterias

Pruebas serolgicas La prueba de aglutinacin microscpica (AM), el medio serolgico habitual para diagnosticar leptospirosis, requiere un microscopio de campo oscuro. Es bastante inespecfico. Por lo que deben de usarse muchos antgenos para identificar el serotipo que ocasiona la enfermedad. Los microorganismos crecen en medios lquidos y se exponen a diluciones en serie del suero del paciente. El objetivo es la dilucin srica ms alta que hace que 50% de los microorganismos se aglutine. Las reacciones positivas no son necesariamente serotipo-especficas. Se realizan difusiones adicionales contra las reacciones positivas de antgenos con el propsito de definir qu anticuerpo est presente en la ms alta concentracin. Para confirmar la enfermedad, a menudo se requiere cuatro aumentos en los ttulos de AM pues por lo general resultan negativos durante la primera semana de la enfermedad. Debe obtenerse una segunda y a veces una tercera muestra de suero cn intervalos de dos a cuatro semanas. Una prueba de ELISA se ha formulado para usarse en perros; dicha prueba detecta los anticuerpos IgG e IgM contra las leptospiras. En comparacin, los ttulos de la AM se parecen ms a los de la IgM que a los de los IgG. Las IgM de la prueba ELISA aumentan dentro de la primera semana despus de la infeccin inicial, y el ttulo mximo se desarrolla dentro de 14 das, con una disminucin a partir de ese momento. Las IgM de la prueba ELISA parecen ms sensibles para

detectar anticuerpos y dan ms especificidad en los serotipos que la prueba de AM para determinar la infeccin en perros. Los perros que mueren durante la primera semana de la enfermedad cursan con altos ttulos de IgM, mientras que los ttulos AM no tuvieron tiempo de incrementarse. El incremento de los ttulos IgG de la prueba ELISA se produce dos o tres semanas despus de la infeccin, y se encuentra su ttulo mximo despus de un mes. Las IgG en ELISA se relacionan mejor con una proteccin paralela contra la infeccin que los ttulos AM. Usando medidas combinadas de IGG e IgM, la prueba ELISA tiene mayor capacidad para distinguir entre infeccin natural y la inmunidad producida por vacunacin que la prueba AM. En perros que han recibido ms de una vacunacin, la prueba ELISA ha mostrado altos ttulos de IgG acompaado de ttulos bajos o negativos de IgM, aun dentro de las primeras semanas despus de la vacunacin. En contraste, los ttulos AM aumentan despus de una exposicin natural a la enfermedad y de una vacunacin, aunque los ttulos mayores a 1:300 que persisten pueden indicar infeccin. Se ha elaborado una prueba de aglutinacin microcapsular microscpica (PAMM) mediante un polmero sinttico para transportar antgenos leptospirales. Al usar la PAMM en perros infectados, aumentan los ttulos sricos durante un corto periodo despus de la inoculacin. Los ttulos de la PAMM se relacionan con los anticuerpos IgM y parecen detectar infecciones recientes. Reaccin en cadena de polimerasa (PCR), con la aparicin de la prueba de PCR, la deteccin rpida de gnero y serovarespecfico de leptospiras a partir de especmenes clnicos debera ser posible. Este mtodo est siendo ms utilizado enlaboratorios de diagnstico y permite una identificacin precisa y rpida. Histopatologa - Tinciones especiales, por ejemplo, tincin de plata de Warthin-Starry o por inmunohistoqumica, utilizandoanticuerpos monoclonales, deben ser realizados en secciones fijadas en formalina de tejido renal, heptico, y feto/placentario.

Aislamiento Una programacin y una tcnica adecuadas son importantes para recuperar leptospiras pues tienen grandes exigencias de crecimiento y susceptibilidad a las condiciones adversas del entorno. Las muestras deben de tomarse antes de iniciar la teraputica con antibiticos. Los perros

presentan leptospiremia durante la primera semana de infeccin, pero el nmero de organismos circulantes disminuye posteriormente a medida que los ttulos de anticuerpos sricos aumentan. La presencia de leptospiras en el LCR es paralela a la de la sangre. Despus de stos la orina es el lquido ideal para cultivarlas; sin embargo, se requieren muestras mltiples debido a la eliminacin intermitente de los microorganismos. Se prefiere el aislamiento en el animal vivo pues los contaminantes del tejido muerto superarn el nmero de las frgiles leptospiras a menos que se empleen medios de cultivo selectivos. Debe tomarse en forma asptica una pequea porcin del tejido (de preferencia hgado o rin) o lquido corporal para cultivo en un recipiente de vidrio, limpio y estril. La orina que se obtiene mediante cateterizacin o vaciamiento a menudo se contamina con la flora normal que interfiere con el crecimiento de las leptospiras; por ello se prefiere la cistocentesis. Para inhibir sustancias como los anticuerpos en tejidos y lquidos del husped, se requiere diluir la muestra por lo menos 1:10 (v/v) con solucin salina amortiguada, 1% de albmina srica bovina o medios de cultivo. Como opcin 0.25 a 0.5 ml de sangre, orina o LCR tomados en la etapa adecuada de la infeccin pueden ser inoculados directamente en siete a 10 ml de medios de transporte. Si no puede diluirse inmediatamente, la sangre debe llevar un anticoagulante con heparina o sulfonato polietileno de sodio para transporte al laboratorio. Deben evitarse los anticoagulantes a base de citrato, pues ste inhibe a las leptospiras. Es posible alcalinizar la orina diluida durante el transporte para aumentar la recuperacin de los microorganismos. Las muestras de tejidos o lquidos, si tienen que trasladarse a lugares lejanos, deben mantenerse en un medio de transporte o hielo, pero no congelarse. Para propsitos de investigacin, los organismos pueden congelarse en medios semislidos o de transporte y almacenarse a temperaturas de -60 a -70C hasta seis aos antes de cultivarlos. Los medios de aislamiento de leptospiras son lquidos, semislidos o slidos. El EMJH es un medio lquido o semislido que contiene polisorbato 80 y suero fetal de becerro o albmina srica bovina. La modificacin de un medio habitual agregndole antibiticos o 5-fluorouracil ha producido mejores resultados en el aislamiento de ciertos serotipos de leptospiras. Las leptospiras por lo regular pierden su virulencia en los medios artificiales de cultivo, pero esto puede revertirse mediante el paso a animales sensibles.

Identificacin del microorganismo. El examen en campo oscuro es necesario para una identificacin rpida de leptospiras vivas ya que no pueden ser coloreadas mediante mtodos sencillos de tinturas anilina. Preparaciones en medios hmedos son tambin necesarias para ayudar a caracterizar sus movimientos de contorsin y flexin. Una variedad de bacterias que pueden confundirse con las leptospiras producen ms movimientos aleatorios en las preparaciones en medios hmedos. Fibrillas celulares o protuberancias y filamentos de fibrina que pueden ser tomados por microorganismos deben retirarse mediante centrifugacin. Debido a las inexactitudes de la prueba de campo oscuro, a sta siempre deben seguir cultivos o pruebas serolgicas. Las leptospiras son observables mediante el microscopio de luz en secciones de tejido o en frotis secados al aire con tincin de Giemsa o impregnaciones de plata. La tcnica de anticuerpos fluorescentes (AF) se ha adaptado para identificar serotipos de leptospiras en tejidos y lquidos corporales. La prueba de AF puede emplearse como mtodo de tamiz para identificar a los animales que dispersan los microorganismos en la orina cuando un cultivo es imposible o exige demasiado tiempo. Las leptospiras han sido detectadas en lquidos biolgicos mediante el mtodo de la hibridacin de DNA, que resulta muy sensible. Las tcnicas de absorcin-aglutinacin se han empleado en laboratorios especializados para aislar serotipos especficos. El anlisis de restriccin de endonucleasa ha mostrado ser sensible y un medio taxonmico exacto en comparacin con la serotipificacin. Se han usado pruebas genricas para detectar la dispersin de leptospiras en la orina.

HALLAZGOS PATOLOGICOS Las lesiones externas considerables incluyen membrana mucosas infamadas e ictricas con petequias generalizadas. Se observan ulceraciones focales en lengua y cavidad bucal, adems de que en general se presenta agrandamiento tonsilar. Todo el tracto respiratorio puede estar edematoso. Los pulmones a menudo presentan congestin e infiltrados neumnicos, en placas o difusos. A menudo se presenta hemorragias petequiales y equimticas en la superficie de la pleura. El hgado se agranda y deteriora, con marcas interlobulares pronunciadas y coloracin amarilla caf; se encuentra petequias y equimosis a lo largo de las leptomeninges.

Ocasionalmente, se presenta necrosis y hemorragias en el intestino con intususcepcin. A menudo se encuentra heces con sangre libre o aclicas en colon y recto de algunos animales. El bazo aparece plido y contrado. Los riones de animales que murieron por infeccin aguda,se muestran agrandados, plidos,de color amarillo grisceo y presenta protuberancia en la superficie de corte. La capsula renal puede estar adherida a la superficie de los riones y son frecuentes las hemorragias subcapsulares. Puede observarse inflamacin,manchas blancas y focales en la corteza renal o en secciones de corte. Puede cultivarse leptospiras de los macerados de tejido renal.

Izq. Rin sano, der. Rin afectado por la leptospira

Los cambios histolgicos en el pulmn consisten en necrosis fibrinoide de los vasos sanguneos y hemorragias perivasculares,intraalveolares y subpleurales; infiltrados de clulas mononucleares rodean los vasos pulmonares tromboticos.se presenta necrosis focal del parnquimaheptico. Los hepatocitos estn rodeados, con un ncleo picntico y contiene un citoplasma granular eosinfilos. Son evidentes la estasis biliar intraheptica y una grave lesin hepatocelular en los animales ictricos.La gravedad clnica de la enfermedad heptica y los cambios histolgicos en el hgadoestn claramente relacionados con la leptospirosis.es frecuente q en los casos subclnicos,los hepatocitos tenga ligeros cambios grasos mientras que los perros ligeramente enfermos tienen las placas de hepatocitos fragmentadas,con infiltrados linfociticos en zona de necrosis y los perros con afeccin grave presenta necrosis generalizada del parnquimaheptico y desintegracin del ncleo. Los perros con infeccincrnica muestran hepatitis crnica activa y fibrosis heptica. Los organismos pueden ser intercelulares dentro de las placas hepticas.

En leptospirosis a menudo el bazo se encuentra hinchado y plido.

El dao neurolgico incluye hemorragias perivasculares (no frecuente en el gato) infiltrados celulares mononucleares y en ocasiones trombosis vascular. Cuando se usa una tintura de plata, puede encontrarse leptospiras en zonas pericapilares. Aunque el corazn no presenta lesiones macroscpicas, en el examen histolgico aparece

miocarditis linfoctica focal. Los cambios histolgicos que se observan en el tejido renal incluyen descamacin del epitelio tubular renal degenerativo e inflamacin glomerular y la necrosis est vinculada con los infiltrados celulares mononucleares. Las anormalidades de las funciones renales no siempretienen que ver con cambios histolgicos. Los riones de animales con afeccincrnica tienen un infiltrado linfocitico de ligero generalizado, con macrfagos desordenadamente esparcidos. Hay un gran nmero de tbulos atrofiados que contienen desechos tubulares eosinfilos. Losglomrulos de algunos animales estn inflamados y tienen acumulaciones protenicas en el espacio de Bowman.

DIAGNOSTICO DIFERENCIAL Los diagnsticos diferenciales de enfermedad hiperaguda o aguda en el perro incluyen enfermedad porgusanos cardiacos (dirofilariosis), anemia autoinmune hemoltica, bacteriemia (debido a heridas por mordedura, prostatitis,enfermedad dental), hepatitis infecciosa viral canina (generalmente recuento leucocitario bajo), neoplasia heptica, trauma, Lupus, fiebre maculosa de las MontaasRocosas, Ehrlichiosis (leucopenia, neutropenia, niveles sricos altos de globulinas, anemia no regenerativa), toxoplasmosis, neoplasia renal, y clculos renales; pielonefritis (cilindros y leucocitos en el sedimento urinario, bacterias en cultivo urinario, generalmente bilirrubinemia o bilirrubinuria); Intoxicacin por etilenglicol (ausencia de leucocitosis, de ictericia y necrosis heptica o muscular); Hepatitis txica aguda (recuento leucocitario normal, actividad de CPK srica normal). Los diagnsticos diferenciales de enfermedadcrnica, por ejemplo, aborto, sndrome del cachorro dbil, incluyen brucelosis canina, infeccin canina por herpesvirus ydistemper. Los anlisis de laboratorio incluyen perfiles qumicos hematolgicos y del suero, urianlisis, serologa y estudiosbacteriolgicos y virales de especmenes apropiados; hepatitis viral (leucopenia, inclusiones virales).

TRATAMIENTO Los perros usualmente se recuperan despus de 2 semanas, si son tratados prontamente con antibiticos y fluidosendovenosos. Sin embargo, si el dao renal o heptico es severo la infeccin

puede ser fatal.Un tratamiento exitoso depende de una evaluacin de la severidad de la enfermedad del perro. La terapia antimicrobianainicial, donde hay evidencia de disfuncin renal y/o leptospiremia, debera incluir el uso. El tratamiento de apoyo para animales con leptospirosis depende de la gravedad de la infeccin y de la presencia de insuficiencia renal o heptica y otras complicaciones. Deshidratacin y shock aparecen en los animales afectados. El vmito y la diarrea ocasionan prdida de lquidos y deben emplearse lquidos poliinicos balanceados por va IV para corregir las deficiencias. Las hemorragias petequiales y equimticas indican trombocitopenia que puede corregirse con transfusiones de sangre total fresca en animales muy graves. No obstante las transfusiones deben aplicarse con cautela y slo con bajas dosis de heparina para mejorar la CID. La oliguria y anuria se tratan en un inicio mediante rehidratacin. Los diurticos osmticos, como glucosa al 10% (5 ml/kg) o el manitol deben aplicarse IV cuando persiste la funcin renal deteriorada aun despus de la rehidratacin. Si el tratamiento con estos diurticos no mejora la situacin, debe administrarse dopamina (10 g/kg) o dobutamina en infusin IV. Diurticos tubulares como la furosemida pueden emplearse como ltimo recurso para aumentar el flujo de orina, empero, el efecto sobre el crecimiento de la filtracin glomerular queda por establecerse. Deben administrase lquidos suficientes una vez que se presenta la deficiencia polirica. Puede considerarse la dilisis peritoneal si persiste la oliguria, ya que la funcin renal resulta irreversible en potencia. Por lo general, los antibiticos reducen la fiebre pocas horas despus de su administracin. Inhiben inmediatamente la multiplicacin del organismo y reducen con rapidez las complicaciones de infeccin tales como la insuficiencia heptica y renal, que ocasionan la muerte. La penicilina G procaina (40,000 a80,000 unidades por kg, IM, una vez al da, o en dosis divididas, dos veces al da) es el antibitico de eleccin para terminar con la leptospiremia, hasta el retorno de la funcin renal. La tetraciclina y el cloranfenicol son menos efectivos. La dihidroestreptomicina (10 a15 mg per kg, IM, dos veces al da por 2 semanas), es el frmaco de eleccin para eliminar el organismo del rin y eliminar el estado de portador sano, pero no debe utilizarse hasta que la funcin renal haya regresado a la normalidad. La tetraciclina tambin elimina las leptospiras del rin. La ampicilina y la doxiciclina (administracin oral de5.0 mg por kg una vez) han sido efectivas en el tratamiento de leptospirosis en seres humanos. En estudios experimentales, la cefalosporina y la eritromicina tambin son efectivas.

Los aminoglicsidos no pueden utilizarse en pacientes hasta que serestablezca la funcin renal.

PREVENCION. La prevencin de leptospirosis entraa eliminar el estado de portador sano. Desafortunadamente, los mismos animales salvajes que actan como reservorio y los domsticos con afeccin subclnica continan albergando y esparciendo microorganismos. Por lo tanto, controlar a los roedores en las perreras, mantener condiciones ambientales que eviten la supervivencia bacteriana, y aislar animales infectados es importante para evitar la diseminacin de la enfermedad. Se ha administrado doxiciclina en dosis bajas (200 mg una vez a la semana) en seres humanos en zonas endmicas como profilaxis cuando no se puede obtener una vacunacin con los serotipos apropiados. Para los perros, se han elaborado bacterinas bivalentes que contienen dos serotipos importantes: L. canicola y L. icterohaemorrhagiae. Idealmente, las vacunas deben contener serotipos que tengan un amplio espectro inmunognico ya que la proteccin cruzada es limitada. Hoy en da las inmunizaciones comerciales consisten en cultivos enteros qumicamente inactivadas, lo cual los hace bastante alergnicos en comparacin con las lneas de cultivo en tejido de las inmunizaciones de virus. La inmunizacin ha resultado efectiva para reducir la prevalencia y gravedad de la leptospirosis canina, pero no ha evitado el estado de portador sano. La inmunizacin inicial adecuada, mediante muchos de los productos de que pueda disponerse en el mercado, implica tres a cuatro inyecciones con dos a tres semanas de intervalo con el objeto de producir una inmunizacin por seis a ocho meses. Nuevas vacunas, producidas por leptospiras cultivadas en medios sintticos libres de protenas, protegen contra el estado de portador en perros que fueron examinados dos a cuatro semanas despus de dos dosis de vacunas. Se han producido vacunas experimentales a partir de la envoltura externa (membrana compleja) de la leptospira, sitio de actividad leptospirocidal de anticuerpo y complemento. En estas vacunas se ha disminuido el material antignico mediante cultivos libres de protenas, se han eliminado los coadyuvantes y se han incluido hasta cinco serotipos de leptospira. Los ttulos mximos de anticuerpos se han producido en los perros dentro de las dos semanas siguientes a una sola

vacunacin y se les ha protegido contra la infeccin y la diseminacin urinaria posterior. Otra vacuna incorpora la fraccin de envoltura externa del organismo, inicialmente el producto fue creado para reducir las reacciones alrgicas vinculadas con antgenos leptospirales combinados con los coadyuvantes vacunales coronavirus. Los ttulos de IgG, directamente responsables de la proteccin, se producen por lo menos durante un ao despus de la tercera vacuna en los perros. Puesto que los ttulos ms altos se producen por medio de inyecciones mltiples, deben aplicarse vacunaciones frecuentes a los perros de zonas endmicas y todos deben recibir por lo menos tres inyecciones en su primera seria de vacunacin.

CONSIDERACIONES. La mayor parte de las infecciones en seres humanos se localiza en los que practican actividades deportivas acuticas o que por su ocupacin se exponen a los huspedes animales de vida salvaje como domstica. La orina contaminada es sumamente infecciosa para los seres humanos y para las especies animales sensibles, por lo tanto debe evitarse el contacto de sta con membranas mucosas o piel lesionada. La infeccin canina y la leptospiruria se han encontrado en perros sanos que fueron vacunados, las cuales ocasionan enfermedad en los seres humanos. Todos los animales que se sepa o sospeche que sean diseminadores de la enfermedad deben ser tratados con dihidroestreptomicina o estreptomicina. Las zonas contaminadas por orina infectada deben lavarse con detergentes a base de yodo, al cual los organismos son muy sensibles.

BIBLIOGRAFIA

BIRCHARD & SHERDING. Manual Clnico de Pequeas Especies. Ed. Interamericana McGraw Hill.Mxico. 1996.

GREENE, CRAIG E. Enfermedades Infeccionas en Peros y Gatos.Segunda Edicin. Ed. Interamericana McGraw Hill. Mxico. 1993.

SODIKOFF, CHARLES. Pruebas diagnsticas y de laboratorio en las enfermedades de pequeos animales. 2da Edici{on. Mosby/Doyma Libros, S.A. 1996. Espaa.

WWW.IVIS.ORG. Documento No. A0112.0701.ES. 2000.