INSTITUTO TECNOLGICO SUPERIOR DE

TANTOYUCA

CARRERA: INGENIERA AMBIENTAL

INTEGRANTES DEL EQUIPO:

SAMARA YATZIRI PALMA ANDRADE

OLGA LIDIA ALEJANDRES FRANCO
JORGE ALBERTO CRUZ HERNANDEZ
JULIO CESAR ESTRADA ALARCON
JOHANNA BEATRIZ PREZ ANDRADE

MATERIA: TOXICOLOGIA AMBIENTAL

DOCENTE: DOC. YENNY LIZZETH CUOHO UICAB

TRABAJO: BIOENSAYO DE GERMINACION DE SEMILLAS DE RABANO Raphanus

sativus)

FECHA: 06 DE DICIEMBRE DE 2013

Introduccin
Las plantas son esenciales en los ecosistemas porque son las responsables de transformar la energa
solar en energa qumica, al tiempo que absorben dixido de carbono. De esta manera proveen de
alimento y oxgeno al resto de los organismos. Adems, las plantas son uno de los componentes ms
importantes de los ecosistemas terrestres porque proporcionan refugio y sitio de anidamiento para

numerosos organismos, y participan de forma primordial en el reciclaje de nutrientes y en la

estabilizacin de los suelos (Wang y Freemark, 1995).
Un agua clara y potable es una necesidad humana bsica, pero el acceso a ella contina siendo una
gran dificultad para algunas ciudades en pases en desarrollo como el nuestro. En la actualidad se
reconoce que la caracterizacin y medicin de los txicos o componentes de los residuos peligrosos
por separado no es suficiente para asegurar la ausencia de efectos indeseables, puesto que tanto la
mezcla de los residuos como posibles transformaciones en el ambiente pueden modificar su efecto
nocivo.
De ah que el uso de ensayos biolgicos est siendo considerado cada vez con mayor intensidad para
la evaluacin de la toxicidad global de estos contaminantes. El objetivo de este trabajo fue evaluar la
toxicidad de las aguas residuales del instituto tecnolgico superior de Tantoyuca, empleando los
bioensayos de la inhibicin de la semilla de rbano ( Raphanus sativus).
El dao a las plantas por los contaminantes puede afectar directamente a la estructura y la funcin de
un ecosistema, al reducir la produccin primaria, incrementar el lavado y erosin del suelo y degradar
el hbitat de la vida silvestre. Los efectos letales de los contaminantes sobre las plantas pueden
significar prdidas ecolgicas y econmicas muy importantes; incluso los efectos sub letales tienen un
impacto significativo sobre la produccin de alimentos y el desarrollo de la vegetacin natural, e
implicaciones adversas para los organismos pertenecientes a niveles superiores en la cadena
alimenticia (Wang y Freemark, 1995).
En los bioensayos de toxicidad con semillas se evalan los efectos adversos de los contaminantes en
el proceso de germinacin y en el desarrollo de las plntulas durante los primeros das de crecimiento.
Como respuesta se determina la inhibicin en la germinacin y de la elongacin de la radcula y del
hipocotleo.
Es importante destacar que durante la germinacin y los primeros das de desarrollo ocurren
numerosos procesos fisiolgicos en los que la presencia de un compuesto toxico puede interferir y
alterar la supervivencia y el desarrollo normal de las plntulas. La divisin celular de los pices
radiculares puede afectarse, retardando el proceso de mitosis o alterando el proceso de alargamiento
radicular, por lo que la fitotoxicidad de un compuesto puede ser determinada a travs de la medicin
de dichas respuestas (Uribe, 2008).

Raphanus sativus
Raphanus sativus, el rbano, es una planta de la familia Brassicaceae que se cultiva por sus races
comestibles.
Hay ciertas subespecies que reciben nombres vulgares diferentes, por ejemplo, R. sativus var. sativus
es el rbano o rabanito y R. sativus var. longipinnatus se conoce, entre otros nombres, como rbano
blanco, rbano japons o daikon.
Planta anual o bienal de raz axonomorfa. Tallo de 20-100 cm, erecto, poco ramificado, glabro o algo
hispido en la base. Hojas basales de hasta 30cm, pecioladas, en rosetas, lirado-pinnatisectas, con 2-3
pares de segmentos laterales y uno terminal de mayor tamao, sub-orbicular; las superiores, de
ovadas a oblongo-lanceoladas. Racimos de 10-50 flores con pedicelos de 5-15 mm en la antesis, 1030 en la fortificacin.
Spalos de 6-11 mm y ptalos 15-20 mm, blanco-rosados o violetas ms o menos veteados. Los
frutos son silicuas indehiscentes de 30-60 por 6-12 mm, erecto-patentes con artejo valvar residual de
1,5-2,5 mm,sin semilla], raramente monospermo y el superior de 25-70 por 8-15 mm, cilndrico,
longitudinalmente estriado, con 2-10 semillas y terminado en un pico cnico de 10-15 mm. Dichas
semillas, de 3-4 mm, de contorno elipsoidal truncado, reticulada-estriadas y de color verde cuando son

inmaduras y que se tornan pardas en la madurez, estn inmersas en un tupido tejido esponjoso
blanco que se desarrolla durante esta maduracin.

Composicin qumica del rbano:

Agua 95%
Hidratos de carbono 3% (fibra 1%)
Protenas 1%
Lpidos 0, 2%
Vitamina C 20 mg/100 g
Potasio 240 mg/100 g
Sodio 40 mg/100 g
Calcio 34 mg/100 g
Fsforo 27 mg/100 g

Plagas y enfermedades del rbano:

- Oruga de la col.
- Pulgones.
- Rosquilla negra.
- Mildiu.
- Acorchado.

El proceso de germinacin est constituido por varias fases: i) Absorcin de agua por la semilla o
imbibicin; ii) Activacin del metabolismo y proceso de respiracin, sntesis de protenas y
movilizacin de sustancias de reserva; iii) Elongacin del embrin y ruptura de la testa a travs de la
cual se observa salida de la radcula.
El proceso de germinacin est influenciado tanto por factores internos como externos. Dentro de los
factores internos estn la viabilidad del embrin, la cantidad y calidad del tejido de reserva y los
diferentes tipos de dormancia. Algunos de los factores externos que regulan el proceso son el grosor
de la testa, disponibilidad de agua, temperatura y tipos de luz. El estudio de la biologa y fisiologa de
las semillas es de vital importancia para el hombre, ya que la mayora de las especies cultivadas como
los cereales son propagadas a partir de semillas sexuales (Russo et l. 2010).
Imbibicin: es el proceso de absorcin de agua por la semilla. Se da por las diferencias de potencial
hdrico (mtrico) entre la semilla y la solucin de imbibicin.
Este proceso consta de tres fases: i) incremento rpido en la absorcin de agua; ii) fase de
estabilizacin y movilizacin de nutrientes; iii) absorcin de agua que generalmente coincide con el
proceso de germinacin (Figura 2)

Figura 2. Fases del proceso de germinacin en Phaseolus vulgaris . (Fuente: Laboratorio de fisiologa y
bioqumica vegetal, Departamento de Biologa, Universidad Nacional de Colombia)

Objetivo
Determinar la calidad del agua de dos fuentes del ITSTA mediante bioensayos de germinacin de
semillas de rbano (Raphanus sativus) y para evaluar el efecto que pueden producir en este.

Materiales y mtodos
.

REA DE ESTUDIO

Imagen1. Instituto Tecnolgico Superior de Tantoyuca

El muestreo se realiz el mismo da del ensayo en dos diferentes puntos del ITSTA

MATERIALES
Muestra de agua de las piletas del tecnolgico y de las y aguas residual de la misma as como agua
destilada y semillas de Raphanus sativus.
Se usaron 9 placas Petri con papel filtro

Ensayo de la toxicidad con semillas de Raphanus sativus

Es una prueba esttica de toxicidad aguda (168 horas de exposicin) en la que se evalan los efectos
citotxicos de compuestos puros o de mezclas complejas en el proceso de germinacin de las
semillas y en el desarrollo de plntulas durante los primeros das de crecimiento.
Las semillas de Raphanus sativus fueron adquiridas en una sumillera local.
Se coloc en cada placa Petri un disco de papel de filtro. Se satur el papel de filtro con 3 o 4 mL de la
dilucin evitando la formacin de bolsas de aire (Imagen 2). De forma manual y utilizando guantes
cuidadosamente se colocaron 20 semillas en cada una de las placas Petri (Imagen 3), dejando
espacio suficiente entre ellas para permitir la elongacin de las races (Imagen 4).
Se taparon las placas y se colocaron en bolsas plsticas para evitar la prdida de humedad. Se incub
durante 168 horas (7 das) a una temperatura de 24 2 C.
Terminado el periodo de exposicin (420 horas), se procedi a cuantificar el efecto de la germinacin y
en la elongacin de la radcula y del hipocotleo.
Se registr el nmero de semillas que germinaron normalmente, teniendo como criterio de
germinacin la aparicin visible de la radcula.
Utilizando una regla o papel milimetrado se midi cuidadosamente la longitud de la radcula y del
hipocotleo de cada una de las plntulas correspondientes a cada concentracin de txico o dilucin

de muestra y a los controles. La medida de elongacin de la radcula se consider desde el nudo

hasta el pice radicular. La medida de elongacin del hipocotleo se consider desde el nudo hasta el
sitio de insercin de los dos cotiledones.
Para la toma de resultados se observaron cada una de las placas Petri cada 24 hrs durante los 7 das
Da 1 (Martes 26 de noviembre del 2013)

Imagen 2.

Imagen 3.

Se colocaron de 3 a 4
ml de la muestra en el
papel filtro.

Colocacin de las semillas, 5

filas de 4 semillas.

Imagen 4.
Se sella la caja
petri.

Resultados

Da 2 (Mircoles 27 de noviembre del 2013)

Muestra
Blanco
Blanco R1
Blanco R2
M1
MR1
MR2
M2
MR1
MR2

Caractersticas
Se nota que el crecimiento comenz y se distingue el de
dos semillas
Todas las semillas empezaron a germinar
Todas las semillas tiene un crecimiento mayor a todas

Imagen 5. Muestras de agua destilada

Imagen 6. Muestra agua del grifo

Imagen 7. Muestra agua residual

Da 3 (Jueves 28 de noviembre del 2013)

Muestra
Blanco
Blanco R1
Blanco R2
M1
MR1
MR2
M2
MR1
MR2

Caractersticas
La raz de todas las semillas creci considerablemente, los
pelos radiculares empiezan a notarse.
10 de las semillas cuentan con una raz pequea, las dems
miden aproximadamente 2 cm.
No se registr ningn cambio.
Solo crecieron las races de la mitad de las semillas
considerablemente, las dems no presentan cambio alguno.
Todas las races tienen la parte inferior la presencia de pelos
radiculares, las races han crecido 0.2 cm.
10 de las semillas tuvieron un incremento en su raz, las
dems no registraron algn cambio.
Todas las races crecieron aproximadamente 0.5 cm, los
pelos radiculares empiezan a notarse en la parte inferior.
En todas las races empiezan a notarse los pelitos
radiculares en la parte inferior.
En estas semillas las races han crecido considerablemente
a comparacin de las dems muestras, aqu tambin
empiezan a notarse las pelos radiculares.

Imagen 8.
Muestras de agua destilada

Imagen 9. Muestra agua del grifo

Imagen 10. Muestra agua residual

Da 4 (Viernes 29 de noviembre del 2013)

Muestra
Blanco
Blanco R1
Blanco R2
M1
MR1
MR2
M2
MR1
MR2
Observaciones:

Caractersticas
Todas abrieron con una raz mediana
Solo dos semillas no abrieron y tiene una raz pequea
Todas las semillas abrieron y cinco tiene una raz pequea
Todas las semillas germinaron con una raz larga
Dos semillas no abrieron completamente, las dems con raz
pequea
Todas las semillas germinaron dos con raz larga y las dems
pequeas
Todas las semillas abrieron con una raz larga observndose
pelitos
Todas germinaron con raz larga y con pelitos blancos cerca de
la semilla
Todas abrieron, tienen una raz ms larga que las dems

Raz larga 3.5cm

Raz mediana 2.5cm
Raz pequea 1cm

Imagen 11. Muestras de agua destilada

Imagen 12. Muestra agua del grifo

Imagen 13. Muestra agua residual

Da 5 (Sabado 30 de noviembre del 2013)

Muestra
Blanco
Blanco R1
Blanco R2
M1
MR1
MR2
M2
MR1
MR2

Caractersticas
No se registr ningn cambio en las semillas.
En 5 semillas creci la raz, aproximadamente 0.1cm. En
las cuales empezaba a notarse la flor.
Solo 3 semillas empezaron a florear, las dems no tienen
ningn cambio.
Todas las races tuvieron un crecimiento de 0.5 cm. Las
flores amarillas empiezan a brotar.
En 3 semillas empieza a notarse el brote de la flor, las
dems solo creci la raz envueltas de pelos radiculares.
Todas las semillas estn floreando notndose un poco
solamente, se encuentran envueltas de pelos radiculares.
La mitad de las semillas empezaron a florear, las pelos
radiculares se encuentran en todas las races
10 de las semillas empiezan a florear. Solo se observa un
pequeo crecimiento de las races.
Todas las semillas empiezan a florear. Teniendo un
crecimiento de la raz notable, todas envueltas de pelos
radiculares.

Imagen 14. Muestras de agua destilada

Imagen 15. Muestra agua del grifo

Imagen 16. Muestra agua residual

Da 6 (Domingo 01 de diciembre del 2013)

Muestra
Blanco
Blanco R1
Blanco R2
M1

MR1
MR2

M2
MR1
MR2

Caractersticas
Las semillas empiezan a florear, las races se encuentran
cubiertas de pelos radiculares.
Las semillas que empezaron a florear se encuentran ms
grandes, cubiertas de pelos radiculares.
Las 3 semillas que haban floreado se encuentran ms
grandes, las dems empiezan a brotar.
Las semillas florearon tiendo un mayor crecimiento, las
races tambin crecieron y se encuentran envueltas de
pelos radiculares.
Las 3 semillas que brotaron la flor esta ms grande, en las
dems se nota el crecimiento menor.
Ya se encuentran todas las semillas floreadas, notndose
el crecimiento mayor en la mitad de ellas, todas con pelos
radiculares.
Todas las semillas tienen un crecimiento de las flores
notable, las races crecieron 0.5 cm.
En todas las races abri la flor, tienen un crecimiento
mayor.
Todas las races se encuentran ms largas, las semillas
cuentan con un brote ms grande.

Imagen 17. Muestras de agua destilada

Imagen 18. Muestra agua del grifo

Imagen 19. Muestra agua residual

Da 7 (Lunes 02 de diciembre de 2013)

Muestra
blanco
Blanco R1
Blanco R2
M1
MR1
MR2
M2

MR1

MR2

Caractersticas
Todas las semillas florearon ms, los pelos radiculares son
ms largos.
La mayora de las semillas florearon, todos los pelos
radiculares son pequeos
No hay gran diferencia en la flor, los pelos radiculares
empiezan a crecer.
Las races han crecido aproximadamente 2 cm ms, los
pelos radiculares tambin.
El tamao de la flor es el mismo, solo la raz creci 3 cm
Cinco de las races crecieron 2 cm ms, las dems siguen
igual, los pelos radiculares empiezan a crecer.
Los pelos radiculares han crecido 1 cm, las races
aproximadamente 2 cm en cada semilla, el tamao de la
flor es el mismo.
La flor ha crecido considerablemente, las races al menos
3 cm ms, los pelos radiculares crecieron 1 cm, todas las
semillas se encuentran unidas por las races.
El tamao de la flor es el mismo, la raz creci
aproximadamente 2 cm y los pelos radiculares entre 0.5 y
1 cm. Tres de las races tienen una tonalidad rosa y tres
con tonalidad azul en la parte inferior.

Imagen 20. Muestras de agua destilada

Imagen 21. Muestra agua del grifo

Imagen 22. Muestra agua residual.

Notacin:
BLANCO----------- MUESTRA AGUA DESTILADA
BLANCO R1--------MUESTRA REPETICION 1
BLANCO R2----------------- MUESTRA REPETICION 2
M1------------------- MUESTRA AGUA DEL GRIFO
MR1----------------- MUESTRA REPETICION 1
MR2-----------------MUESTRA REPETICION 2
M2------------------- MUESTRA AGUA RESIDUAL
MR1----------------- MUESTRA REPETICION 1
MR2-----------------MUESTRA REPETICION 2

Muestra

Tiempo en horas
24

48

72

96

120

144

Blanco

0.1

2.5

2.5

4.5

Blanco R1

0.2

0.5

1.3

2.2

3.3

Blanco R2

0.1

0.4

1.3

1.9

2.4

promedio

0.133

0.967

1.5

1.7

2.367

3.4

inhibicin

10 % de inhibicin

M1

0.1

3.5

4.5

MR1

0.2

0.2

1.5

2.5

3.6

MR2

0.2

1.6

2.5

3.9

0.167

1.267

2.333

2.833

3.633

4.533

promedio
inhibicin

10 % de inhibicin

M2

0.2

0.5

3.5

3.7

4.5

5.7

MR1

0.3

1.3

3.5

3.6

4.3

6.6

MR2

0.2

1.2

3.5

3.7

4.6

5.7

0.233

3.5

3.667

4.467

promedio
inhibicin

0 % de inhibicin

Cuadro A. Resultados de la prueba de toxicidad del agua e inhibicin de la germinacin utilizando

Raphanus sativus

blanco (agua destilada)

crcimiento de la raiz en cm

6
5.5
5
4.5
4
3.5
3 Muestra grifo
2.5
2
1.5
1
0.5
0
0
24
48

Muestra agua residual

72

96

120

144

168

tiempo hrs

Grafica 1. Comparacin del crecimiento promedio de las semillas de Raphanus sativus

Conclusiones
De acuerdo a lo obtenido en la presente prctica, concluimos que el porcentaje de germinacin de los
tratamientos y el testigo fue cercano al 90% indicando que no presentaron toxicidad alguna que
pudiera inhibir el proceso de germinacin.
Las aguas de las piletas utilizadas en los bioensayos con Raphanus sativus presentaron altos valores
del ndice de germinacin, lo cual indicara que no son Fito txicas y resulta de buena calidad para ser
utilizadas con fines de riego en las parcelas de la institucin.

As como la recomendacin de la especie Raphanus sativus por su rpido crecimiento y resistencia

aguas residuales, el bajo costo de los anlisis y la buena respuesta a situaciones de contaminacin
atmosfrica. Raphanus adems aguanta las bajas temperaturas de invierno, as que es apta para
mediciones durante todo al ao.

Bibliografa

Uribe, R. 2008. Ensayo de inhibicin de la germinacin y del alargamiento radicular en semillas de cebolla
Allium cepa y soya Glycine max. 2008.
Ramrez-Romero, P., Mendoza-Cant, A. (compiladoras). Ensayos toxicolgicos para la evaluacin de
sustancias qumicas en agua y suelo. La experiencia en Mxico. Instituto Nacional de Ecologa, Secretaria de
Medio Ambiente y Recursos Naturales. Mxico
Wang, W., Freemark, K. 1995. Use of plants for environmental monitoring and assessment. Ecotoxicology and
Environmental Safety. 30, 289-301.
Taiz L. Y Zeiger E. Fisiologa vegetal Volumen 10 de Cinces experimentals, Universitat Jaume I, 2006.
Raphanus sativus en Flora Ibrica, RJB/CSIC, Madrid, p. p.
(http://www.floraiberica.es/floraiberica/texto/pdfs/04_072_74_Raphanus.pdf).
Raphanus sativus en The Plant List (http://www.theplantlist.org/tpl/record/kew-2422375).