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Técnicas de Identificación Bacteriana
Técnicas de Identificación Bacteriana
Tcnicas de identificacin
J. L. Lpez-Hontangas, F. J. Castillo y M. Salavert
1. Introduccin
El propsito fundamental del diagnstico microbiolgico clnico es optimizar
la asistencia que se presta al paciente. Para alcanzar este objetivo es esencial obtener y comunicar, lo antes posible, al mdico responsable del mismo
resultados tiles para su manejo y tratamiento, usando eficientemente los
recursos disponibles. Conjugar estos objetivos, con el mximo rigor cientfico
y una creciente demanda asistencial, es lo que se persigue en los Servicios de
Microbiologa Clnica.
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ciente para hacer posible la discriminacin entre los gneros y especies. Adems,
hoy en da, las tcnicas de biologa molecular (basadas en la caracterizacin de
genes especficos o segmentos de ellos) son cada vez ms comunes y utilizadas
en Microbiologa Clnica.
2.Objetivos Y utilidad DE LAS TCNICAS DE identificacin
La identificacin de una bacteria sospechosa de ser la causa de una infeccin es uno de los instrumentos principales del diagnstico y tratamiento de
las enfermedades infecciosas. Diferenciar un microorganismo patgeno per se,
potencialmente patgeno o contaminante, y deducir sus posibles mecanismos
de resistencia, facilita el tratamiento de la enfermedad infecciosa con la mayor
eficiencia posible. Tambin permite realizar un seguimiento y control de las infecciones hospitalarias, detectar un posible brote infeccioso y establecer una poltica
de antibiticos coherente y apropiada en concordancia con el centro hospitalario
o el rea asistencial, lo que traer consigo una disminucin de las infecciones
nosocomiales y/o comunitarias, y una menor generacin de resistencias en los
microorganismos.
Para poder ser clnicamente til, la identificacin de un microorganismo debe
ser lo ms rpida posible. La economa y la prctica dictan el uso de un nmero
mnimo de pruebas diagnsticas. Por necesidad, la identificacin en Microbiologa
Clnica representar siempre un compromiso entre la exactitud y precisin, por
una parte, y la rapidez y la economa por otra. Cmo se logra este compromiso
es lo que determina la calidad diagnstica en Microbiologa.
3. Identificacin BACTERIANA
La taxonoma bacteriana tiene como objetivo la construccin de sistemas
que permitan clasificar a las bacterias. Dentro de la clasificacin taxonmica,
las categoras y definiciones ms utilizadas son familia (un grupo de gneros
relacionados entre s), gnero (un grupo de especies relacionadas entre s),
especie (un grupo de cepas relacionadas entre s), tipo (grupos de cepas interrelacionados dentro de las especies; por ejemplo, biotipo, serotipo) y cepa
(aislamiento concreto de una especie en particular).
Uno de los factores clave para identificar a las bacterias como agentes
patgenos depende de su aislamiento en cultivo puro. Una colonia en cultivo
puro est compuesta por un solo tipo de microorganismo y procede de una
sola clula original. Las pruebas de identificacin se deben hacer siempre con
colonias nicas procedentes de cultivos puros.
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Tabla 1.
Criterio
Metodologa de ejemplo
Metabolismo
Otras propiedades
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Tabla 2.
Herramienta
Magnificacin (x)
Aplicacin
Ojo humano
Lupa o gafa-lupa
Microscopio de diseccin
2,5-30
Microscopio ptico:
De campo claro
100-1.000
De campo oscuro
100-400
Contraste de fases
100-400
Microscopio de fluorescencia
Clulas teidas
100-1.000
20-10.000
Microscopio electrnico:
De transmisin
De barrido
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Comentarios
KOH 10%
Examen directo de la extensin de LCR, Los criptococos poseen una cpsula de Tincin inversa, la cpsula no se tie;
sangre y orina para Cryptococcus
polisacridos que aparece como un halo requiere experiencia para diferenciar
sobre un fondo oscuro
leucocitos de levaduras
Tinta china
Requiere experiencia
Microscopa de campo
oscuro
Gram
Permite hacer diagnstico presuntivo, Deteccin de leucocitos, reconocimiento Requiere experiencia para valoracin
sobre todo, en neumona y meningitis de la morfologa de bacterias comunes adecuada; no incluye otros agentes inbacteriana
fecciosos, pero puede diferenciar leva
duras
Corynebacterium diphteriae
Azul de metileno
Wright-Giemsa
Resultados esperados
LBA, preparaciones de Tzanck, muestras Morfologa general de las estructuras Permite visualizar bacterias, levaduras,
con fondo celular complejo
celulares
parsitos e inclusiones virales
Aplicacin
Tincin o mtodo
Tabla 3.
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Microbiologa aplicada al paciente crtico
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Tcnica
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Auramina-rodamina
Blanco calcoflor
Examen directo de LCR, LBA y otros Las levaduras y mohos muestran una Tincin fluorescente que se fija a la pared
lquidos corporales para detectar estruc- fluorescencia blanquecina suave
celular de hongos y levaduras, pero no
turas fngicas y algunos quistes parasi
a bacterias o clulas inflamatorias; se
tarios
prefiere a la tinta china y a preparaciones
de KOH
Requiere el uso de microscopio de fluo
rescencia
Comentarios
Naranja de acridina
Resultados esperados
Es eficaz para diferenciar verdaderos mi- Tincin de fluorocromo fijada a los Requiere el uso de microscopio de fluo
croorganismos de artefactos, especialmen- ncleos de las bacterias, que muestran rescencia
te en hemocultivos
fluorescencia naranja sobre un fondo
oscuro; fluorescen tanto bacterias viables
como no viables
Aplicacin
Tincin o mtodo
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deteccin diferencial (agar MacConkey, agar CLED, agar XLD, agar VCAT o
VCN). Se utilizan para sembrar diferentes tipos de muestras contaminadas
(intraabdominales, heces, orina o exudados genitourinarios).
Es posible hacer una identificacin preliminar de muchas bacterias importantes en la clnica, basndose en unas pocas y sencillas caractersticas macroscpicas de las clulas apreciables en su disposicin en forma de colonias
sobre los medios de cultivos en que crecen y se aislan. La interpretacin de los
cultivos primarios, despus de 24-48 h de incubacin, requiere una evaluacin
de las colonias con una sistemtica bien estructurada.
Caractersticas macroscpicas de las colonias:
Despus de un examen visual del desarrollo en la superficie de las placas
de agar, se deben apreciar las principales caractersticas de las colonias: tamao
(en general, las bacterias gram-positivas producen colonias algo ms pequeas
que las gram-negativas), forma, grado de elevacin, borde, color, superficie,
densidad, consistencia y olor.
Reacciones en el medio de agar usadas para la identificacin de bacterias:
1. Tipo de hemlisis en el medio de agar sangre. La hemlisis es una reaccin
observada en el medio circundante o subyacente a la colonia; sirve de ayuda
para la identificacin presuntiva, particularmente, de los estreptococos, y
debe valorarse frontalmente y por transiluminacin.
a-hemlisis: eliminacin parcial de la sangre en torno a la colonia, originando una decoloracin verduzca en el medio (ej.: S. pneumoniae,
estreptococos del grupo viridans).
b-hemlisis: eliminacin completa de la sangre circundante o subyacente
a las colonias por lisis completa de los hemates (ej.: Streptococcus pyo
genes, Streptococcus agalactiae, Listeria monocytogenes).
2. Produccin de pigmentos en medio de agar: es una de las caractersticas
inherentes de cada microorganismo especfico y pueden estar confinados
a la propia colonia o colorear el medio: verde, a veces, con brillo metlico
(P.aeruginosa), rojo-rosado (Serratia marcescens), azul (Kluyvera spp.), prpura (Chromobacterium violaceum) o marrn negruzco (Prevotella melanino
genica).
Cambios en medios diferenciales: en los medios de cultivo diferenciales
se incluyen diversos colorantes, indicadores de pH y otros componentes meta-
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Tabla 4.
Prueba
Aplicaciones
Indol
Triptofanasa
ONPG
b-galactosidasa
Oxidasa
Catalasa
Catalasa
Solubilidad en bilis
Ureasa
Hipurato (rpido)
Plasmocoagulasa
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Gram y morfologa
Coco gram-positivo
No coco gram-positivo
Catalasa
Negativa
Positiva
Coagulasa
Negativa
ECN
Positiva
Staphylococcus aureus
Figura 1. Ejemplo de identificacin por algoritmo en cascada. ECN: estafilococos negativos para
la coagulasa.
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4.BIBLIOGRAFA
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2. Gobernado S, Lpez Hontangas JL, Crdoba J. Mtodos microbiolgicos en el diagnstico de
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