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Elementos Traza-D-Procedimiento Recomendado para La Determinación Del Aluminio en Muestras Biológicas y Otros Especímenes de Interés Clínico (2005)
Elementos Traza-D-Procedimiento Recomendado para La Determinación Del Aluminio en Muestras Biológicas y Otros Especímenes de Interés Clínico (2005)
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ndice
0. Introduccin
1. Objeto y campo de aplicacin
2. Revisin metodolgica
2.1. Espectrometra de absorcin molecular y de fluorescencia
2.2. Espectrometra de absorcin atmica: Llama, Electrotrmica
2.3. Otros mtodos
2.3.1. Espectrometra de emisin atmica con plasma
acoplado por induccin (ICP)
2.3.2. Espectrometra de emisin atmica de plasmaEspectrometra de masas (ICP-MS)
2.3.3. Fluorescencia de Rayos X
2.3.4. Anlisis por activacin neutrnica
3. Procedimientos analticos recomendados
3.1. Obtencin y almacenamiento de especimenes: suero,
orina, hueso y agua
3.2. Procedimiento de medida de la concentracin del aluminio en suero por espectrometra de absorcin atmica electrotrmica con correccin de fondo por efecto
Zeeman
3.3. Procedimiento de medida de la concentracin del aluminio en orina por espectrometra de absorcin atmica electrotrmica con correccin de fondo por efecto
Zeeman
3.4. Procedimiento de medida de la concentracin del aluminio en hueso por espectrometra de absorcin atmica electrotrmica con correccin de fondo por efecto
Zeeman
3.5. Procedimiento de medida de la concentracin del aluminio en agua de la red y de dilisis por espectrometra
de absorcin atmica electrotrmica con correccin de
fondo por efecto Zeeman
3.6. Control de calidad
3.6.1. Control interno
3.6.2. Programas de evaluacin externa de la calidad
4. Intervalos de referencia
5. Recomendaciones
6. Bibliografa
0 INTRODUCCIN
El aluminio, elemento ampliamente extendido en la corteza
terrestre, ocupa el tercer lugar por orden de abundancia.
Su contacto con la materia viva es permanente, todo el
ambiente que nos rodea es una fuente potencial de incorporacin del aluminio. Sin embargo nos encontramos con
el hecho aparentemente paradjico de que los contenidos
del aluminio en los fluidos biolgicos son muy bajos, del
orden de microgramos por litro, lo que hace evidente que
los organismos vivos disponen por un lado de unos sistemas activos que impiden su incorporacin al tiempo que
estn dotados de unos mecanismos que facilitan la eliminacin de las pequeas cantidades absorbidas. En el ser
humano no se conoce ninguna funcin esencial. Se estima
que un adulto normal contiene alrededor de 300 mg de aluminio (11,11 mmol) (1).
El aluminio en los sistemas biolgicos
El aluminio se encuentra en los sistemas biolgicos en el estado de oxidacin +3, y su ndice de coordinacin es 6.
El Al+3 se une al ATP por enlaces ms fuertes que el magnesio, dando lugar a un compuesto inactivo (2,3). Tambin
presenta una interferencia con el metabolismo del Fe+3. Se
acumula en el hueso (4) produciendo osteomalacia (5-7) y calcificaciones (8).
Los productos naturales aportan una cantidad que se estima
en un intervalo de 2 a 10 mg/da (0,07-0,37 mmol/da) (9),
pero los compuestos del aluminio se emplean en la industria
alimentaria en forma de aditivos, espesantes y colorantes. El
aluminio es tambin material integrante de la lnea de envasado de los contenedores alimentarios y culinarios. As mismo
el sulfato de aluminio se utiliza como floculante en el tratamiento de las aguas potables suministradas a las poblaciones,
lo que eleva su contenido hasta diez y quince veces. Todas
estas circunstancias son la causa de que el aluminio incorporado con la dieta sea sensiblemente mayor de lo esperable,
alrededor de 30 mg (1,1 mmol) al da.
De especial inters resulta el contenido de aluminio en los
compuestos destinados a la alimentacin parenteral, porque en
este caso por no existir ningn tipo de barrera fisiolgica, la
incorporacin a la circulacin sangunea es total.
As mismo deben tener bajas concentraciones de aluminio
las leches maternizadas y las aguas de bebida destinadas a la
poblacin infantil (10), ya que en esta etapa la mucosa intestinal tiene una mayor permeabilidad y tanto en este supuesto
como en el de la alimentacin parenteral, existe el riesgo de
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Procedimiento recomendado para la determinacin del aluminio en muestras biolgicas y otros especimenes de inters clnico
1. Administracin de un quelante del aluminio, la desferroxamina DFO (23), que permite elevar las concentraciones del
aluminio ultrafiltrable en la sangre permitiendo la recuperacin del mismo durante la dilisis.
2. Realizacin de un trasplante renal siempre que sea posible, porque en estos casos la instauracin de la funcin renal,
permite la eliminacin progresiva del aluminio (24).
Inters clnico en la medicin del aluminio
En el momento actual el laboratorio clnico realiza la medida
de la concentracin de este elemento en algunas situaciones
especiales como son:
1. Monitorizacin de los pacientes en tratamiento con dilisis.
2. Pacientes con deterioro de la funcin renal que reciben
terapia con hidrxidos de aluminio.
3. Seguimiento de la posible sobrecarga de aluminio en el
suero de aquellos pacientes con funcin renal deteriorada y
sometidos a terapia intravenosa o individuos laboralmente
expuestos.
En todos estos casos se trata de sobrecargas moderadas y
crnicas. Actualmente, slo en algunos pases menos desarrollados pueden producirse intoxicaciones agudas ya que tienen
concentraciones elevadas del aluminio en los lquidos de la
dilisis por las especiales caractersticas de sus aguas naturales (25, 26).
Las investigaciones sobre el aluminio son de un gran inters y hay profusin de trabajos en el estudio de este elemento
intentando esclarecer al mximo los mecanismos que rigen su
metabolismo (6,7,26).
Los especmenes empleados son: el suero, la orina, los
lquidos de la dilisis, los compuestos usados por va parenteral y enteral, as como los tejidos en el caso de estudios despus de la muerte o con modelos experimentales animales.
1. OBJETO
En este documento se revisan los procedimientos para la medida directa del contenido de aluminio en los materiales biolgicos, detallndose los procedimientos que presentan una mayor
fiabilidad para el laboratorio clnico (27).
2. REVISIN METODOLGICA
2.1. Espectrometra de absorcin molecular
ultravioleta-visible y de fluorescencia molecular.
La aplicacin de la Espectrometra de absorcin molecular
ultravioleta-visible y de fluorescencia se ha indicado para la
medida de la concentracin del aluminio en el agua, pero presenta unas limitaciones importantes. En el caso de la espectrometra de absorcin molecular ultravioleta-visible el inconveniente es fundamentalmente de sensibilidad, mientras que la
espectrometra de fluorescencia ofrece unos procedimientos
ms sensibles pero poco selectivos (28, 29). Experimentos con
el cromo y los fluorforos alternativos como el 2-hidroxi-1naftaldhedo-p-metoxibenzoil hidrazona (30), o con otros reactivos como el cromo azurol S, salicilidina-o-aminofenil, han
mostrado un considerable aumento de la sensibilidad. En mejoras posteriores de la tcnica se aadi un surfactante para incrementar la fluorescencia, 10 veces superior para el complejo alu-
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Procedimiento recomendado para la determinacin del aluminio en muestras biolgicas y otros especimenes de inters clnico
3. PROCEDIMIENTO ANALTICO
RECOMENDADO
Espectrometra de Absorcin atmica con Horno de
Grafito, plataforma estabilizadora de temperatura y
correccin Zeeman
Actualmente se puede afirmar que el mtodo ms adecuado
para el anlisis de aluminio en las muestras biolgicas y otros
especmenes de inters clnico es la Espectrometra de Absorcin Atmica Electrotrmica sistema de temperatura estabilizada y correccin de fondo por Efecto Zeeman.
Aspectos preanalticos
3.1. Obtencin y almacenamiento de especmenes
Los especmenes y los fluidos recogidos para la determinacin
de aluminio debern ser tratados desde la toma del espcimen
con todas las precauciones requeridas para evitar la contaminacin (mnimo contacto con el aire atmosfrico, empleo de
material tratado y chequeado con respecto al contenido en aluminio y manejo de los mismos en cmara limpia).
El almacenamiento de los especmenes a 4 C permite que
los sueros sean estables durante quince das; los tejidos y el
material seo congelados a 20 C son estables tres meses y
liofilizados un ao.
Material y Limpieza: Para la recogida y almacenamiento de
los especmenes se emplean tubos y jeringas de plstico, polietileno o polipropileno, y agujas de acero inoxidable. Las pipetas y los contenedores usados para preparar los reactivos y
almacenar los especmenes se lavan previamente con cido
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ntrico al 2% sumergido durante al menos 48 horas. Es esencial lavar repetidamente con agua tratada por smosis inversa
todo el material que se haya mantenido en la disolucin de
cido ntrico.
En cuanto al material de plstico se mantiene en todo
momento, antes y despus de la recogida de los especmenes,
tapado y almacenado en un sitio limpio cerrado y libre de contaminacin del polvo atmosfrico.
El material de vidrio ha de evitarse por los procesos de liberacin y adsorcin de aluminio (33,34).
a) Suero
b) Orina
c) Preparacin de patrones
c) Hueso
d) Caractersticas metrolgicas
a) Condiciones analticas
Las condiciones espectromtricas y del muestreador son anlogas a las empleadas para el suero.
Slo hay cambios en los tiempos de secado y la temperatura de mineralizacin aunque siempre debern ser optimizados
por cada operador (tabla II).
a) Condiciones analticas
Las condiciones para el espectrmetro con lmpara de aluminio de ctodo hueco incluyen: La longitud de onda es
Tabla I. Programa de temperatura del horno de grafito
Etapa
Temperatura C
Secado 1
Secado 2
Secado 3
Mineralizacin 1
Mineralizacin 2
Atomizacin
Limpieza
90
130
200
600
1.500
2.600
2.650
Tiempo /seg
Rampa
Final
5
10
5
1
10
0
1
5
10
5
20
15
2
2
Flujo Argn
(mL/min)
Lectura
300
300
300
300
300
0
300
No
No
No
No
No
S
No
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Procedimiento recomendado para la determinacin del aluminio en muestras biolgicas y otros especimenes de inters clnico
Temperatura C
Secado 1
Secado 2
Secado 3
Mineralizacin 1
Mineralizacin 2
Atomizacin
Limpieza
Tiempo /seg
Rampa
Final
90
130
200
600
1.450
2.600
2.650
5
5
2
1
2
0
1
Flujo Argn
(mL/min)
Lectura
300
300
300
300
300
0
300
No
No
No
No
No
S
No
5
5
2
20
15
2
2
b) Calibracin
La calibracin se realiza mediante adiciones estndar que, aunque laborioso, es el sistema que mejor consigue minimizar los
efectos matriz dado el elevado contenido en fosfatos de la disolucin procedente de la digestin sea (4).
Las adiciones se realizan a partir del patrn acuoso certificado de Aluminio
c) Preparacin de patrones
c) Caractersticas metrolgicas
a) Condiciones analticas
Temperatura C
90
130
200
600
1450
2600
2650
Tiempo /seg
Rampa
Final
5
5
2
1
2
0
1
5
5
2
20
15
2
2
Flujo Argn
(mL/min)
Lectura
300
300
300
300
300
0
300
No
No
No
No
No
S
No
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Tabla IV. Resolucin de la Comunidad Europea para la proteccin frente al aluminio de los pacientes sometidos
a la dilisis
Agua para diluciones
Agua de bebida
Lquido de Dilisis
Disolucin Hemofiltracin
Concentrado de dilisis
Suero
El Programa Internacional de Control de Calidad Worldwide Interlaboratory Aluminium Quality Control Department
of Trace Elements Biochemistry Jean Bernard Hospital. Poitiers (Francia).
QCT Biological Trace Elements Quality Assurance Programs (Australia)
METOS (Italia)
Foundation for Quality Assessment in Clinical Laboratories (Pases Bajos)
Guilford Trace Elements external Quality Control Assessment Scheme (TEQAS) (Reino Unido)
La resolucin de la Comisin Europea 86/C104/04 especifica una serie de concentraciones lmite para el control de la
exposicin al aluminio de los pacientes en la dilisis (Tabla
IV), y aunque estas recomendaciones ya suponen implcitamente unas necesidades de precisin y sensibilidad que deben
alcanzar los mtodos analticos, en la prctica las demandas
preventivas y las clnicas son mucho ms rigurosas.
Aspectos post-analticos
4. INTERVALOS DE REFERENCIA
Para las investigaciones en las que se incluyen los grupos de
referencia es necesario medir las concentraciones comprendidas entre 1 y 5 g/L (0,04 y 0,19 mol/L). Existe adems, un
consenso general respecto a los trabajos publicados en lo que
se refiere a los intervalos de referencia , y se admite que estos
datos estn en parte enmascarados por la contaminacin, por
lo que las concentraciones reales debern ser menores.
El aluminio en agua vara entre 5 y 10 g/L (0,2-0,4 mol/L)
en las aguas naturales y hasta 1.000 g/L (37 mol/L) en las
aguas tratadas.
Las concentraciones del aluminio en el suero publicados
para las diferentes poblaciones varan ampliamente segn los
diversos trabajos. Hay que tener en cuenta que adems de
influir los factores dependientes de los hbitos y la localizacin geogrfica de los diferentes grupos de la poblacin, existen tambin otros factores relacionados con el mtodo analtico utilizado tales como la sensibilidad y la precisin del
mismo y el control de la contaminacin en el proceso de la
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Procedimiento recomendado para la determinacin del aluminio en muestras biolgicas y otros especimenes de inters clnico
Distribucin de frecuencias
90
80
Individuo (%)
70
60
50
40
30
20
10
0
2,014,00
4,016,00
6,018,00
30
26
Individuos (%)
25
21,7
20
17,3
15
13
13
4,015,00
5,016,00
10
5
0
3,1
3,1
0
1,012,00
2,013,00
3,014,00
6,017,00
7,018,00
8,019,00
Al (
g/g.p.s.)
Figura 2 Distribucin de frecuencias del Aluminio en el hueso
de una poblacin de referencia
5. RECOMENDACIONES
El aluminio es un metal txico por causas iatrognicas que
afecta especialmente al grupo de poblacin que de una forma
rutinaria necesita el tratamiento de dilisis. El mtodo recomendado para la medida de la concentracin de aluminio en
los especimenes biolgicos es la espectrometra de absorcin
atmica electrotrmica, con correccin de fondo por efecto
Zeeman.
6. BIBLIOGRAFA
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