Qu es la Citogentica?

Una parte de la Gentica

que se encarga del estudio
de los cromosomas
humanos.
Finalidad de identificar las
alteraciones cromosmicas
numricas y estructurales.

Clasificacin Operacional de la Cromatina:

EUCROMATINA: Transcripcionalmente activa
Fibras de 11nm y 30nm, incluso DNA
desnudo.
Genes estructurales, ribosmicos,
secuencias reguladoras , etc.)

HETEROCROMATINA: Transcripionalmente inactiva

Fibras de 30nm densamente
empaquetadas.
Centrmeros, telmeros, regiones
unin membrana nuclear.

EUCROMATINA:
Cromatina laxa, menos
condensada que vuelve al
estado disperso.

HETEROCROMATINA:
El 10% del material
cromosmico en la mayora
de las clulas permanece en
forma condensada durante la
interfase.
Esta cromatina condensada
se observa se observa en la
periferia del ncleo.

H. CONSTITUTIVA:
Permanece en estado condensado
en todas las clulas y en todo
momento, por lo tanto representa el
ADN permanentemente silencioso.
El ADN consta principalmente de
secuencias altamente repetitivas y al
parecer est desprovisto de genes
que codifican protenas.
H. FACULTATIVA:
Es una cromatina especficamente
inactivada durante ciertas fases de la
vida de un organismo.
Inactivacin del cromosoma X.

Cromatina Nuclear
La Heterocromatina Facultativa

EUCROMATINA

HETEROCROMATINA

DIFERENCIAS
GENICAS

MAYOR CANTIDAD DE
GENES ACTIVOS

NO PRESENTAN GENES

DIFERENCIAS
CITOLOGICAS

MENOR GRADO DE
EMPAQUETAMIENTO

MAYOR GRADO DE
EMPAQUETAMIENTO

ALOCICLIA

NO PRESENTA

SI PRESENTA (puede estar

ms o menos intensamente
teida dependiendo del CC.)

REPLICACION
del ADN

REPLICACION
TEMPRANA

REPLICACION TARDIA

El ADN en los
cromosomas
metafsicos debe
acortarse unas 10.000
veces por un sistema
empaquetamiento
muy eficiente.

Organizacin Molecular de los Cromosomas Humanos

Nucleosoma: El menor nivel
de organizacin de los
Cromosomas.
El empaquetamiento ordenado
del ADN eucariota depende de
Histonas.
A principios de 1970 se
descubri que el tratamiento
de la cromatina con Nucleasas
daban lugar a fragmentos de
200 pb de longitud.
1974: Roger Kornberg, de la
Univ. Harvard, sugiri que el
ADN y las histonas se organizaban en unidades repetitivas
llamadas nucleosomas.

Organizacin Molecular de los Cromosomas Humanos

EL NUCLEOSOMA: es la

subunidad fundamental de DNA e

histonas en los cromosomas en
interfase, o cromatina.
Un nucleosoma presenta alrededor
de 146 pb de DNA enroscados dos
veces alrededor de un octmero de
histonas.
El octmero de histonas forma un
cilindro de 11 nm de dimetro y 6
nm de altura.

Organizacin Molecular de los Cromosomas Humanos

. Las histonas son protenas con
una alta proporcin de carga
positiva (lisina y arginina), lo
que les permite unirse con
firmeza a las cargas negativas de
la doble cadena del DNA.
. Desde el punto de vista evolutivo
la conservacin de las histonas es
muy significativa.
. Hay una relacin espacial en
particular estrecha entre el DNA y
las histonas en las regiones ricas en
A+T de los surcos menores. All, la
doble hlice del DNA se dobla con
ms facilidad.

Organizacin Molecular de los Cromosomas Humanos

. Composicin Proteca:
1.- Histonas: H1 , H2A , H2b , H3 , H4
.- Las Histonas se encuentran en una relacin de peso con el DNA de 1/1
.- Las Histonas deben su basicidad al alto contenido de arginina y lisina (1020%) .
.- As: H3 y H4 : Muy ricas en arginina
H2A y H2B : Moderadamente ricas en lisina
.- H2A , H2B , H3 y H4 : protenas globulares
.- H1 adquiere formas de acuerdo a la especie
2.- Protenas no Histnicas:
2.1.- Protenas estructurales : HMG , LMG , Ubiquitinas
2.2.- Protenas enzimticas

Organizacin Molecular de los Cromosomas Humanos

Organizacin Molecular de los Cromosomas Humanos

Las partes ms hidrofbicas,
partes no cargadas de las
histonas, ocupan el centro del
nucleosoma y por lo tanto
promueven su agregacin en
un ncleo apretado.
La interaccin entre histonas
y ADN es principalmente
estructural y relativamente
independiente de la secuencia
de nucletidos.
.

Organizacin Molecular de los Cromosomas Humanos

Las microfotografas electrnicas demuestran que la
cromatina nuclear presenta
numerosos puntos pequeos
de unos 30 nm de dimetro
que representan a las Fibras
de 30 nm.
La estructura del filamento
de 30 nm incrementa la relacin de empaquetamiento del
ADN unas 6 veces ms.
Modelo de Solenoide explica
la forma de plegarse la fibra
de 10 nm para formar la fibra
de cromatina de 30 nm

El mantenimiento de los filamentos de 30 nm depende de la interaccin entre

molculas de H1 de los nucleosomas vecinos

Cromosomas Eucariticos
Los nucleosomas se pliegan sobre s mismos para formar una estructura
densamente empaquetada con forma de solenoide que tiene 30nm de
grosor.

Organizacin Molecular de los Cromosomas Humanos

El siguiente nivel de
empaquetamiento es el
Modelo propuesto por
Marsdem y Lammli.

Ocurre cuando los filamentos de

cromatina de 30nm se organizan en
una serie de asas amplias
superenrrolladas.
Se estima que cada asa contiene
entre 10 a 150 Kb de ADN.
Las asas de ADN pueden actuar
para dividir el genoma en
dominios que contengan un solo
gen o un pequeo conjunto de
genes enlazados expresados por un
mecanismo regulador comn

Cromosomas Eucariticos
La fibra de 30 nm constituida por los nucleosomas empaquetados se
pliega formando bucles sobre un armazn de protenas no histonas
dando lugar a la fibra de cromatina (300 nm).

Cromosomas Eucariticos
La fibra de cromatina sufre un
enrollamiento helicoidal para
formar la estructura que se
observa en metafase: la

cromtida (700 nm)

Un cromosoma presenta una

sola molcula de DNA muy
larga, que contiene una serie
de genes. Est plegado y
enrollado en una forma
compleja. El ordenamiento
espacial est asegurado por
los nucleosomas

En la cromatina de los
cromosomas en mitosis
no se produce la
transcripcin. La sntesis
de ARN se interrumpe
cuando se establece la
condensacin del
cromosoma.

..
.

Organizacin Molecular de los Cromosomas Humanos

Cromosoma metafsico (microscopio

electrnico de transmisin)
. Los cromosomas mitticos representan la etapa ltima del empaquetamiento de la cromatina.
. Un cromosoma mittico de 1 micra
de longitud tpicamente contiene
casi 1 cm de ADN.

Cromosoma Metafsico (microscopio electrnico de barrido)

. Los cromosomas se ven como estructuras separadas slo durante la mitosis. En la interfase no
pueden diferenciarse dentro de la cromatina. En los cromosomas metafsicos el empaquetamiento
del DNA es alrededor de 10,000 veces ms denso que en la interfase

Cromosomas Eucariticos
Los cromosomas tienen dos funciones biolgicas fundamentales:

Perpetuar el material hereditario durante el desarrollo de un individuo, a travs

de la mitosis celular
Redistribuir el material hereditario entre generaciones sucesivas, a travs de la
meiosis celular
Las funciones de los cromosomas dependen de tres clases de elementos del DNA:
Los centrmeros
Los telmeros
Los orgenes de replicacin

Cromosomas Humanos
ELEMENTOS BASICOS DEL CROMOSOMA
1. Centrmeros
2. Telmeros
3. Origenes de Replicacin

.- El centrmero y los Telmeros

contienen DNA con secuencias
repetitivas, conservadas evolutivamente porque son importantes
para la estabilidad del cromosoma.
.- En las bandas G claras el DNA
forma bucles en los que se ubican
los genes codificadores de
protenas.

Cromosomas Humanos

. Un modelo tridimensional de
un segmento de un cromosoma
en interfase muestra que en la
regin del centrmero la
heterocromatina constitutiva
(banda C) est plegada con gran
firmeza.
. En las bandas G clara la
eucromatina est empaquetada
en forma relativamente laxa, y en
las oscuras, de alguna forma est
plegada con ms fuerza.

PROBLEMA DE LA REPLICACIN EN EL
EXTREMO DE DNA LINEAL

Replicacin(5->3)

Remocin
de Primer

Rellenado de los gaps

Los cromosomas de los eucariotas son lineales.

Cada extremo est sellado mediante
una regin especial, EL TELOMERO..

En el extremo 5 una brecha

remanente que no puede ser
cerrado, por ausencia del primer .

El DNA slo se sintetiza en direccin 5 a 3 en la

hebra molde que va de 3 a 5 la sntesis es en forma
retrasada. Por este motivo a unos 8-12 bases en el
extremo de la hebra retrasada la DNA pol no puede
sintetizarlas por el cebador. Entonces en cada
divisin celular en los extremos telomricos se
perdern estos 8-12 nucletidos. Para compensar
est perdida en algunos organismos participa la
TELOMERASA.

Cromosomas Humanos
El DNA de los TELOMEROS
presenta secuencias en tndem
ricas en G:
Invertebrados: 5TTAGGG3
Levaduras: 5TGTGGG3
Protozoos: 5TTGGGG3.
Los extremos salientes de las
hebras G son importantes para
la proteccin de los telmeros
mediante la formacin de un
bucle de DNA de cadena doble
(dplex)

Cromosomas Humanos
TELOMEROS
Estructuras especializadas que
forman los extremos de los
cromosomas eucariotas
El ADN telomrico son regiones no
codificantes
Repetidos (TTAGGG)n en tandem:
-10Kb en clulas somticas
- 20Kb en clulas placenta

La longitud de las repeticiones est

relacionada con el envejecimiento y
.
dao
celular.
Un Telmero normal, no solo es
estable, sino que Ancla ese extremo
al armazn nuclear.

Cromosomas Humanos
ESTRUCTURA DE LOS
TELOMEROS:
Una de las cadenas de ADN tiene una
extensin mayor que la otra en 12pb
Se producen uniones tipo Hoogsteen
formando un bucle cerrado.
La cadena sobreextendida es rica en
G y va en direccin 5- 3 hacia el
extremo del Telmero (forma el extremo
3 del ADN cromosmico)

FORMACION DEL BUCLE del DNA de

Cadena Doble (bucle-t) en el Telmero de
mamferos:
Griffith y Col (1999) demostraron que la
cadena doble del DNA telomrico forma un
bucle-t para evitar de este modo el
problema de los extremos pegajosos.
La formacin del bucle est mediada por
las dos protenas relacionadas TRF1 y
TRF2 que se unen a las repeticiones de los
telmeros de los mamferos, y el bucle se
ancla mediante la insercin del extremo
saliente de la hebra G dentro de un
segmento proximal del dplex del DNA
telomrico.

Representacin esquemtica de
los telmeros putativo T-loop.
Estructura de las protenas de
unon especficas de telmeros.

Cromosomas Humanos

FUNCION DE LOS TELOMEROS

1. Mantenimiento de la estabilidad cromosmica formando estructuras
que evitan la fusin de cromosomas o la actuacin de mecanismos
degradativos, evitando as la muerte celular y la prdida de genes
importantes para la vida de la clula.
2. Su importancia en la mitosis. La longitud de los telmeros es uno de los
parmetros que determinan el nmero de divisiones de una clula y
por tanto la duracin de su vida.
3. Sirven como un reloj mittico.
4. Su importancia en la meiosis ya que facilitan el reconocimiento de
cromosomas homlogos. Intervienen en el apareamiento de los
cromosomas homlogos y el entrecruzamiento durante la profase en la
Meiosis I.
5. La activacin o desactivacin de la telomerasa influye en el desarrollo
y el envejecimiento de los tejidos de un organismo.
6. La telomerasa juega un importante papel en alteraciones fisiolgicas
como el desarrollo de carcinognesis o la infeccin por el VIH.

Cromosomas Humanos
TELOMERASA
Enzima ribonucleca
compleja mayor 300 Kd.

2 Subunidades:
Subunidad cataltica o Tert
(Telomerase reverse
transcriptase).
Una molcula de ARN o Terc
(Telomerase ARN component)
de alrededor de 500
nucletidos, poseen secuencias
(AAUCCC) compleementaria al
ADN extremo del Telmero.

Cromosomas Humanos
FUNCION DE LOS TELOMEROS

ACORTAMIENTO DE LOS TELOMEROS

Cuando una lnea celular no tiene una telomerasa activa, los

telmeros se van acortando de unos 50 a 200 pares de bases en cada
divisin. Si el acortamiento alcanza un nivel crtico se induce la
senescencia de las clulas de esa lnea celular..
Los telmeros se pueden considerar como estructuras dinmicas
que actan a modo de reloj celular. Su longitud est en relacin con
el tiempo de vida y depende de varios factores como la velocidad de
degradacin de los telmeros y la velocidad y el tiempo de actuacin
de la telomerasa en cada cromosoma.

Las secuencias del telmero presentan

alrededor de 250 a 1500 repeticiones ricas
en G (unos 9 Kb), que estn muy
conservadas entre las diferentes especies.

Los telmeros y la telomerasa son factores

centrales en la biologa del cncer, en las
clulas madre, en el envejecimiento y en
la disqueratosis congnita. La relacin
inicial entre la telomerasa y el cncer se
estableci cuando se observ que en la
mayora de los tumores humanos se sobreexpresaba la enzima, cosa que no ocurra
en los tejidos sanos y en los cultivos de
clulas normales.

Centrmero

Telmeros

CENTRMERO

Regiones especializadas de
cromatina
Descubierto fortuitamente en
1985, con sueros de pacientes
de escleroderma,
reaccionaban con protenas
centromricas: CENP:A,B y C
(Earnshaw & Rothfield, 1985)
CENP-A , descubierta como
variante de H3 encontrado
exclusivamente en el
centrmero. Homlogos en
todos los eucariotas: Funcin
conservada.
CENP-B:Pr- que se une
muchas veces a una
secuencia simple repetitiva en
el DNA centromrico(DNA alfa
satlite). Acta como dmero.

ESTRUCTURA SECUNDARIA DE CENP-A

EN EL NUCLEOSOMA

Cromosomas Humanos

CENTROMERO
Constriccin Primaria
El ADN alfoide es el
principal componente de
todos los centromeros de los
cromosomas humanos
ADN alfoide: Repeticiones
en tandem de 171 pb.
Caja de CENP-B:
secuencia de 17 pb que se
une especficamente al
CENP-B
Estn ntimamente
asociados a las Cromtides
hermanas y los cinetocros.

Cromosomas Humanos
Los centrmeros humanos son secuencias ricas en repeticiones de DNA,
conocido como alfa satlite, las cuales estn basados en monmeros de 171
pb organizados en tndem, con una longitud variable de 0,2 5 Mb.

PROTEINAS CENTROMERICAS
El ADN en la regin centromrica est asociaddo con protenas especficas.
Estas protenas han podido estudiarse gracias a los Acs contra ellas en
enfermos con Esclerodermia tipo CREST, lograndose aislar y purificar al
menos 6 protenas centromricas o CENPs

La estructura de los
centrmeros es compleja pero
al menos 3 componentes son
esenciales para un
centrmero funcional:
Una cantidad umbral de
ADN alfoide
La protena CENP-B que
se asocia al anterior; y
La CENP-C que es propia
del cinetocoro funcional.

La regin centromrica
comprende:
El centrmero propiamente
dicho o constriccin primaria, y
que esta asociada ntimamente a
las cromtides hermanas ; y
Los Cinetocoros que son
elementos cupuliformes que se
observan en la mitosis y en los
cuales se insertan los
microtbulos.

Cromosomas Humanos

CINETOCORO
Acta como sitio de
fijacin del cromosoma a
los microtbulos del huso
mittico.
Sitio donde residen
algunas protenas motoras.
Desempean un papel
clave en el movimiento de
los cromosomas durante la
mitosis.

EL CINETOCORO
Es un complejo proteico del cromosoma que captura y colabora con el
transporte de cromosomas
Se forma en el centrmero, presenta una capa interna y otra externa
incrustadas en una corona fibrosa
Las cromtides hermanas de un cromosoma en metafase se transportan
hacia cada polo unidas a microtbulos de los cinetocros.
Los microtbulosque se extienden desde el centrosoma al cinetocoro se
denominan microtubulos del cinetocoro y los microtubulos que conectan los
dos polos de la clula se llaman microtubulos polares

Diagrama representativo de un centrmero de mamferos

Cinetocoro.
Acta como sito de
fijacin de los cromosomas
al microtbulo del huso
mittico.

Dominio central
CENP-A, CENP-B

Dominio de apareamiento
INCEPs, CLIPs

Dominio cinetocorico
CENP-C, CENP-D,
CENP-E, Quinosina

En los mamferos es una placa

trilaminar de 0.3 m de
dimetro y de 0.1 m de
espesor. Una de sus caras est
estrechamente unida al DNA
centromrico, la otra mira
hacia uno de los polos del huso
divisional y los microtbulos
se insertan en ella por una de
sus extremidades.
Desempea un papel clave en
el movimiento de los
cromosomas durante la
mitosis.

Funcin de los cinetocoros

Atrapar
Unin de los extremos de los microtbulos a los cromosomas, generan
fuerza para mover a los cromosomas a lo largo de los microtbulos y
regulan la separacin de los cromosomas y su translocacin a los polos.

FUNCION
CINETOCORO
Anclaje a los microtbulos
del huso: aneuplodia
Verificacin de esos anclajes
Deteccin y correccin de
errores: checkpoint de mitosis
Generacin de fuerzas:
motores moleculares

Anclaje de los cromosomas a los

microtbulos del huso mittico

CAPTURA DE MICROTUBULOS (MTs)

Los microtbulos que localizan un cinetocoro se estabilizan, mientras
que aquellos que no lo encuentran se despolimeriza rpidamente.
Como los cromosomas presentan 2 cinetocoros asociados, cuando uno
de ellos se engancha a los MTs generado por uno de los polos celulares, el
cinetocoro de la cromatide hermana queda expuesta hacia el otro polo

Verificacin de los anclajes al huso

Esquema de las diferentes configuraciones de anclaje de los

cromosomas al huso mittico.

ORIGENES DE REPLICACION (OR)

Slo 1/10 parte son

usados para constituir los
Replicones o unidades de
replicacin del ADN.
Genoma Humano (46 Xs)
hay alrededor de 20,000
replicones con una
longitud promedio de 150
Kb de ADN cada uno, y con
una velocidad de la
horquilla de replicacin de
alrededor de 1 Kb por
minuto.
Los replicones slo actan
durante el momento
preciso del ciclo celular
(inicio de fase S).
Las bandas R se replican
antes que las bandas G y
stas antes que las bandas
C.
Todo segmento de ADN
estable de un organismo
debe poseer un OR.

OR en levaduras

Elementos caractersticos del cromosoma (metafsico)

Organizacin Molecular de los Cromosomas Humanos

TERRITORIOS CROMOSMICOS
Cmo lucen los cromosomas en el ncleo de una clula cuando no est
en divisin celular (e.g. neurona)?

Existen dos modelos:

Modelo del Territorio
Cromosmico (by Carl
Rabl,1885) El DNA de
cada cromosoma ocupa
un volumen definido en el
ncleo y sobrelapa con
sus vecinos
inmediatos(Fig.A).
Modelo de Espagueti:
la fibra de DNA de
mltiples cromosomas
serpentea a travs del
ncleo en una manera
aleatoria, son por lo tanto
se entremezclados y
enredados con cada otro
(Fig.B).

Los cromosomas
eucariticos estn
ordenados y confinados
a regiones concretas
dentro del ncleo
celular que se
denominan territorios
cromosmicos.
Esta organizacin
espacial puede tener
implicaciones en la
regulacin funcional y
la estabilidad del genoma.

TERRITORIOS CROMOSMICOS
Durante la interfase, los cromosomas existen como territorios cromosmicos
Los territorios cromosmicos estn definido como una porcin nuclear
tomado por ADN de un cromosoma determinado, el cual tiene un volumen de 2-3
m de dimetro.
El ADN que se encuentra en los territorios estn relativamente abiertos, lo que
permite que algunos factores de transcripcin funcionen. Los lmites de los
territorios cromosmicos no son fijos, de sta manera se puede observar una
sobreposicin entre territorios vecinos.

La organizacin jerrquica es importante para la regulacin

gentica.
La alteracin de sta organizacin cromosmica puede causar
enfermedad.

Las acetilaciones disminuyen la carga positiva de la histona y esto hace

que se liberan la estructura de la cromatina y la hacen pasible a ser
transcripta (activacin). Por el contrario la desacetilacion son
compactadoras (silenciadoras) de la actividad trancriptiva del ADN.

LOS FACTORES EPIGENETICOS:

ROLES DE LA EPIGENTICA

La epigentica participa en:

Desarrollo embrionario
Diferenciacin tisular
Imprinting gnico
Inactivacin del cromosoma X
Represin de DNA parsito (transposones)
Papel menor en la regulacin gnica (islas CpG
normalmente no metiladas), pero importante en
patologa .

MODIFICACIONES
ADN

HISTONAS

ACETILACION

FOSFORILACION

UBIQUITINACION

METILACION

METILACION

ADP RIBOSILACION

EL FUTURO DE LA EPIGENTICA

Esta investigacin tendr un gran

impacto en nuestra sociedad
postgenmica y mostrar que somos
ms que la suma de nuestros genes.