INDICE

INDICE............................................................................................................ 1
PRACTICA 1.................................................................................................... 2
OBJETIVO:.................................................................................................... 2
FUNDAMENTO TEORICO..............................................................................2
El almidn................................................................................................ 2
Fundamentos qumicos de las pruebas....................................................3
Prueba del Yodo....................................................................................... 3
Reaccin de Molisch................................................................................. 4
PARTE EXPERIMETAL.................................................................................... 5
MUESTRAS............................................................................................... 5
MATERIALES............................................................................................. 5
PROCEDIMIENTO...................................................................................... 5
EN CALIENTE............................................................................................ 5
EN FRIO.................................................................................................... 5
RESULTADOS............................................................................................ 6
FOTOS...................................................................................................... 6
CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES.......................................................8
BIBLIOGRAFIA.............................................................................................. 8

PRACTICA 1

ESTUDIO CINETICO DE LA ALFA-AMILASA

OBJETIVO:
Estudia la velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas, asi como lo
factores que influye y los mecanismos por los cuales transcurre.

FUNDAMENTO TEORICO
El almidn
El almidn es un polmero de elevado peso molecular formado por una
sucesin de molculas de -D-glucosa unidas por enlaces glucosdicos -1,4
y que se ramifica en determinados puntos de la cadena mediante enlaces 1,6. Estos enlaces dan origen a dos polmeros distintos, la amilosa y la
amilopectina que a su vez forman los granos de almidn.
Los granos de almidn estn formados por amilosa en su parte interior
y amilopectina en sus capas ms externas. La amilosa es un polmero
predominantemente lineal constituido por enlaces -1,4 que adoptan una
disposicin helicoidal, mientras que la amilopectina es un polmero muy
ramificado formado por un nmero mayor de unidades de glucosa.

Figura 1. AMILOSA: Polmero lineal de -D-glucosa unido por enlaces 1,4. Adopta una disposicin helicoidal.

Figura 2. AMILOPECTINA: Polmero muy ramificado de -D-glucosa. Las

ramificaciones se originan por la formacin de enlaces -(1,6).
El almidn es el principal polisacrido de reserva de los vegetales, se
encuentra, principalmente, en semillas, frutos, legumbres, tubrculos y
cereales. El almidn se sintetiza a partir de la glucosa generada en los
procesos de fotosntesis y se almacena en los amiloplastos. El contenido
relativo de amilosa y amilopectina, as como las caractersticas de los
granos, vara segn la fuente del almidn

Figura 3. Fuentes de almidn

En la naturaleza existe una amplia variedad de enzimas responsables de la
hidrlisis del almidn son los denominados enzimas amilolticos o
amilasas. Su accin da lugar a oligosacridos, maltosa y finalmente glucosa.
En realidad hay que distinguir entre dos clases de amilasas: alfa y beta (en
adelante y ).
La -amilasa es la que corta de dos en dos unidades de glucosa las cadenas
de almidn, empezando por el extremo no reductor. Su actividad se detiene
al encontrar un enlace 1-6. As pues, la -amilasa degrada totalmente la
amilosa a maltosa mientras que el producto de su accin sobre la
amilopectina es maltosa y dextrinas lmite.
Por otro lado, la -amilasa degrada el almidn de una forma mucho ms
desordenada: ataca enlaces 1-4 en zonas aleatorias de la cadena, incluso a
ambos lados de los enlaces 1-6. Dependiendo del tiempo de contacto se
obtiene como producto de esta reaccin un conjunto de oligosaridos
variados, en parte ramificados, denominados dextrinas, de peso molecular
variable. Si se prosigue la reaccin las cadenas rectas se acaban
convirtiendo en maltosa y maltotriosa.
Fundamentos qumicos de las pruebas.
Prueba del Yodo
Es una reaccin especfica del almidn, el reactivo de lugol se intercala por
la molcula de almidn y esto se detecta por la coloracin violeta que toma
la mezcla dandp positivo. Este polisacrido esta formado por molculas de
glucosa y es exclusivo de las clulas vegetales.
Realmente est formado por dos tipos de polmeros ambos de glucosa: la
amilosa que es la que realmente se tie con el yodo del lugol y la
amilopectina.
La coloracin producida por el Lugol se debe a que el yodo se introduce
entre las espiras de la molcula de almidn. No es por tanto, una verdadera
reaccin qumica, sino que se forma un compuesto de inclusin que
modifica las propiedades fsicas de esta molcula, apareciendo la coloracin
azul violeta.
El lugol o solucin de Lugol es una solucin de I2 (1%) en equilibrio con KI
(2%) en agua destilada. Fue nombrada en honor al fsico francs J. G. A.
Lugol. El Lugol colorea las micelas de almidn de color azul intenso casi
negro. El almidn es una mezcla (en diferentes proporciones segn las

especies) de los polisacridos amilosa (10-20%) y amilopectina (80-90%). El

almidn es coloreado de azul en presencia de Lugol, debido a una adsorcin
o fijacin del I3 sobre las unidades de glucosa de la amilosa, y ayuda a
mantener su estructura.
Al calentar hasta ebullicin, desaparece la estructura ternaria (incoloro) yrea
parece al enfriar (azul-violeta)

Reaccin de Molisch
La reaccin
de
Molisch es
una
reaccin
que
tie
cualquier carbohidrato presente en una disolucin; es llamada as en honor
del botnico austraco Hans Molisch.
Se utiliza como reactivo una disolucin de -naftol al 5% en etanol de 96.
En un tubo de ensayo a temperatura ambiente, se deposita la solucin
problema y un poco del reactivo de Molisch. A continuacin, se le
aade cido sulfrico e inmediatamente aparece un anillo violeta que
separa al cido sulfrico, debajo del anillo, de la solucin acuosa en caso
positivo.
Es una reaccin cualitativa, por lo que no permite saber la cantidad
de glcidos en la solucin original.
Se basa en la accin hidrolizante y deshidratante del cido sulfrico sobrelos
hidratos de carbono. En dicha reaccin el cido sulfrico cataliza lahidrlisis
de los enlaces glucosdicos de la muestra y la deshidratacin afurfural (en
las pentosas) o hidroximetilfurfural (en las hexosas).Estos furfurales se
condensan con el alfa naftol del reactivo de Molisch(reaccin de Molisch)
dando un producto coloreado
En la reaccin de Molish, el agregado de cido sulfrico concentrado a una
disolucin de azcar provoca la deshidratacin del glcido en la interfase,
para dar un anillo de furfural o hidroximetilfurfural que reacciona con naftol, para dar un producto de color prpura. sta es una prueba general
de hidratos de carbono.

PARTE EXPERIMETAL
MUESTRAS
Yuca
Verde
Papa
Arroz

MATERIALES.
Caja Petri
Tubo de Ensayo
Rayador
Cuchillo
Esptula
Estufa
Vaso de Precipitacin

PROCEDIMIENTO
EN CALIENTE
1. Primero se raya una pequea cantidad de una muestra o se tritura
segn sea el caso.
2. Luego en coloca la muestra en un vaso de precipitacin y se lo
disuelve con un poco de agua
3. Se lo calienta hasta que hierva
Prueba de Yodo
4. Se coloca una pequea cantidad en una caja Petri
5. Finalmente se coloca una gota de Yodo sobre la muestra
6. Observar cambios
Prueba de Reaccin de Molish
7. Se coloca una pequea cantidad en un tubo de ensayo
8. Finalmente se coloca una gota de alfa-naftol
9. Observar si se forma halo color violeta
EN FRIO
1. Primero se raya una pequea cantidad de una muestra o se tritura
segn sea el caso.
2. Luego en coloca la muestra en un vaso de precipitacin y se lo
disuelve con un poco de agua
3. Se mezcla hasta conseguir una solucin casi homognea
Prueba de Yodo
4. Se coloca una pequea cantidad en una caja Petri
5. Finalmente se coloca una gota de Yodo sobre la muestra
6. Observar cambios
Prueba de Reaccin de Molish
7. Se coloca una pequea cantidad en un tubo de ensayo
8. Finalmente se coloca una gota de alfa-naftol
9. Observar si se forma halo color violeta
RESULTADOS

PROCEDIMIE
NTO

MUEST
RA

REACTIV
O DE
MOLISH

LUGO
L

CALIENTE
Verde

Yuca

OBSERVACIN
Se observo que el color era
intenso el caso del Yodo,
pero en el caso del Reactivo
de Molish se formo un halo
pero no era muy marcado.
Con el Yodo se observo un

FRIO

color azul claro alrededor de

la muestra, mientras que con
el
Yodo
no
era
muy
pronunciado.
Se observ que si dio un
color violeta azulado lo que
Yuca
significa que hay presencia
+
+
de almidn. Este no era tan
intenso
El color en esta muestra era
mas intenso dando un violeta
oscuro. Por lo que podemos
decir que hay mayor % de
Arroz
+
+
almidon.
La formacin del halo en la
prueba
de
Molish
fue
inmediata.
El color fue mas intenso por
lo que el % de almidn es
Papa
+
+
mayor. En el centro se
concentro mas el color.
Tabla 1. Tabla de resultado de pruebas.

FOTOS
En caliente
Soluciones

Foto: Verde

Foto: Yuca

Prueba de Iodo

Foto: Verde

Foto: Yuca
Prueba de Molish

Foto: Verde
En frio

Foto: Yuca

CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES

Al realizar la prueba con el reactivo de Molish, observamos que todas

las muestras reaccionaron dando positivo. Por lo que podemos
concluir que todas las muestras contienen almidn, claro hay en
algunos caso en que el cambio de color fue mas intenso esto se dio
debido a que algunas estaban mas diluidas que otras. Entonces se
puede decir que el reactivo de Molish sirve para identificar si hay
presencia o no del carbohidrato. Pero en caliente no se pudo observar
mucho el halo por la alta concentracin de almidn.

La prueba de Lugol al ser un mtodo que se utiliza para identificar

polisacridos como el almidn y al ser positivo da una coloracin azulvioleta, vimos que todas nuestras muestras contienen este
polisacrido ya que todas dieron positivo.

La prueba de Molish es sensible al calor por lo que no es

recomendable hacerlo en caliente debido a que no se puede
distinguir mucho el halo. Por lo contrario en frio se fue ver con mayor
facilidad la presencia del halo en las muestras. En cambio para el
Yodo esto no fue un factor influyente.

BIBLIOGRAFIA

Reconocimiento de Glucidos.
http://payala.mayo.uson.mx/QOnline/Prueba_Fehling_y_Lugol.htm.
Fecha de Consulta: 20/10/2012

ANLISIS ESTRUCTURAL Y MODIFICACINFUNCIONAL DE LA GLUCOAMILASA

DE SACCHAROMYCES EREVISIAE VAR. DIASTATICUS
http://es.scribd.com/doc/62864013/3/Estructura-quimica-del-almidonEnzimas-amiloliticas. Fecha de Consulta: 20/10/2012

METODOS CUALITATIVOS PARA LA IDENTIFICACION DE

CARBOHIDRATOS.
http://webdelprofesor.ula.ve/farmacia/gmendez/manuales
%20PDF/EXPERIMENTO%204%20IDENT%20CARB%2006-05.pdf.
Fecha de Consulta: 20/10/2012

Reaccion de Molish.
http://es.wikipedia.org/wiki/Reacci%C3%B3n_de_Molisch. Fecha de
Consulta: 20/10/2012

Digestion Enzimatica del Almidon.

http://es.scribd.com/doc/3596226/DETERMINACION-ENZIMATICA-DELALMIDON. Fecha de Consulta: 20/10/2012