Examen en Placa de Un Paso para Rotavirus

(Heces)
Inserto
REF IRO-602
Espaol
Un examen rpido de un paso para la deteccin cualitativa de Rotavirus en heces humanas.
Solo para uso profesional de diagnstico in vitro.
USO INDICADO
El Examen en Placa de Un Paso de Rotavirus (Heces) es un inmunoensayo cromatogrfico
para la deteccin cualitativa rpida de Rotavirus en muestras humanas como ayuda en el
diagnstico de infecciones de rotavirus.
SUMARIO
El Rotavirus es el agente responsable mas comn por la gastroenteritis aguda, principalmente en nios
1
pequeos. Su descubrimiento en 1973 y su asociacin con la gastroenteritis infantil represent un
avance muy importante en el estudio de la gastroenteritis no causada por infeccin bacterial aguda. El
Rotavirus es transmitido va oro-fecal con un periodo de incubacin de 1-3 das. Sin embargo las
muestras colectadas realizadas durante el segundo y quinto da de la enfermedad son ideales para la
deteccin del antgeno, el rotavirus puede an ser encontrado mientras contine la diarrea. La
gastroenteritis rotaviral puede causar mortalidad en poblaciones de riesgo como las infantiles, de edad
avanzada y pacientes inmunocomprometidos.2 En climas temperados, las infecciones de rotavirus
ocurren mayormente en los meses de invierno. Se ha informado de las afecciones endmicas as como
las epidmicas que afectan a miles de personas.3 El 50% de las muestras, tomadas a nios
hospitalizados que sufran de enfermedades entricas agudas, resultaron positivas para rotavirus.4 Los
virus replican en el ncleo celular y tienden a ser huspedes de especies especficas produciendo un
efecto sicoptico caracterstico (CPE). Debido a que el rotavirus es extremadamente difcil de cultivar,
es inusual usar mtodos de aislamiento del virus para diagnosticar una infeccin. En cambio una
variedad de tcnicas se han desarrollado para la deteccin del virus en heces.
El Examen en Placa de Un Paso para Rotavirus (Heces) es un inmunoensayo cromatogrfico para la
deteccin cualitativa de rotavirus en muestras de heces humanas, dando resultados en 10 minutos.
La prueba utiliza anticuerpos especficos para rotavirus para selectivamente detectar rotavirus de
muestras de heces humanas.
PRINCIPIO
El Examen en Placa de Un Paso de Rotavirus (Heces) es un inmunoensayo de flujo lateral cualitativo
para la deteccin de Rotavirus en heces. La membrana es precubierta con un anticuerpo anti Rotavirus
en la banda de la regin de la prueba. Durante la prueba, el espcimen reacciona con partculas
cubiertas con anticuerpo anti-rotavirus. La mezcla migra hacia arriba en la membrana
cromatogrficamente por accin capilar para reaccionar con el anticuerpo de la prueba y genera una
lnea coloreada. La presencia de una lnea coloreada en la banda de la regin de la prueba indica un
resultado positivo mientras que su ausencia indica un resultado negativo. Para servir como un proceso
una lnea coloreada siempre aparecer en la banda de control, indicando que un volumen apropiado
del espcimen ha sido incluido y que la reaccin de la membrana ha ocurrido.
REACTIVOS
El examen contiene partculas recubiertas de anticuerpo de anti-rotavirus y anticuerpo de antirotavirus recubierto en la membrana.
PRECAUCIONES
Para Diagnstico profesional in vitro nicamente. No usar la prueba despus de la fecha de
expiracin.
La prueba debe permanecer en el sobre sellado hasta su uso.
No coma, beba o fume en el rea donde el espcimen o los kits son manipulados.
No utilizar la prueba si el sobre esta deteriorado.
Maneje los especimenes como si contuviesen agentes infecciosos. Observe las precauciones
establecidas contra cualquier dao microbiolgico durante la prueba y siga los
procedimientos estndares para un buen descarte de los especimenes.
Use vestimenta protectora como mandiles de laboratorios, guantes descartables, proteccin
para los ojos mientras los especimenes son examinados.
La prueba, una vez utilizado, debe desecharse de acuerdo con las regulaciones locales.
La humedad y temperatura pueden afectar los resultados adversamente.
ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD
Almacene como viene empacado en el sobre sellado ya sea a temperatura ambiente o refrigerada
(2-30C). El dispositivo de casette de la prueba es estable hasta su fecha de expiracin impreso en
el sobre sellado. El dispositivo o casette de la prueba debe permanecer en su sobre sellado hasta su
uso. NO CONGELAR. No utilizar la prueba despus de la fecha de expiracin.
COLECCIN Y PREPARACIN DE LA MUESTRA
Se mejora la deteccin viral colectando las muestras al comienzo de los sntomas. Se ha
informado que la mxima excrecin de rotavirus en las heces de pacientes con
gastroenteritis ocurre en los das 3-5 despus de los primeros sntomas. Si las muestras se
colectan mucho despus de los primeros sntomas de diarrea, la cantidad de antgeno pueda
que no sea suficiente para obtener una reaccin positiva o el antgeno detectado pudiera no
estar relacionado con el episodio diarreico.
Las muestras de heces deben ser colectadas en un recipiente a prueba de agua, limpio, seco
que no contenga detergentes, preservativos o medios de cultivo.
Los reactivos deben estar a temperatura ambiente antes de usarlos.
MATERIALES
Materiales Suministrados
Placas
Cuentagotas
Tubos colectores de espcimen con bufer de extraccin
Ficha tcnica

Materiales Requeridos no Suministrados

Colector para la coleccin de la muestra
Cronmetro
Centrfuga y pipeta para dispensar 80 L
DIRECCIONES PARA SU USO
Deje que la placa, la muestra, buffer y/o los controles alcancen una temperatura
ambiente estable (15-30C) antes de la prueba.
1. Para colectar muestras fecales:
Coleccione suficiente cantidad de heces (1-2mL o 1-2g) en un recipiente limpio y seco para
obtener suficientes partculas de virus. Los mejores resultados se obtienen si el examen se realiza
en las 6 horas siguientes a la coleccin de la muestra. Las muestras colectadas pueden ser
almacenadas por 3 das a temperatura de 2-8C si no han sido examinadas durante las 6 primeras
horas. Para almacenajes de largo tiempo, las muestras deben mantenerse a una temperatura menor
a -20C.
2. Para procesar muestras fecales:
Para Muestras Slidas:
Desenrosque la tapa del tubo colector de la muestra, luego al azar clave el aplicador dentro
de la muestra fecal en al menos 3 sitios diferentes para colectar aproximadamente 50 mg de
heces (equivalente a de guisante). No sacuda la muestra fecal.
Para Muestras Lquidas:
Sostenga el gotero verticalmente, aspire la muestra fecal, y luego transfiere 2 gotas
(aproximadamente 50 L) dentro del tubo colector de la muestra que contiene el buffer
de extraccin.
Ajuste la tapa del tubo colector de la muestra, luego agite el tubo vigorosamente para
mezclar la muestra con el buffer de extraccin.
3. Antes de abrir el sobre ste debe encontrarse a temperatura ambiente. Remueva la placa del
sobre laminado y selo tan pronto sea posible. Los mejores resultados se obtienen cuando
el examen se realiza inmediatamente despus de abrirse el sobre laminado.
4. Sostenga el tubo colector hacia arriba y rompa la punta del tubo colector de la muestra. Invierta
el tubo colector de la muestra y transfiera 2 gotas completas de la muestra extrada
(aproximadamente 80 L) al pozo de la muestra (S) de la placa del examen, luego empiece a
cronometrar. Evite atrapar burbujas en el pozo de la muestra (S). Observe la ilustracin de abajo.
5. Espere hasta que las lneas coloreadas aparezcan. Lea los resultados a los 10 minutos despus
de haber dispensado las gotas de la muestra. No lea resultados despus de 20 minutos.
Nota: Si la muestra no migra (presencia de partculas) centrifugue la muestra diluida que contiene el
vial del buffer de extraccin. Colecte 80 L del sper nadante y dispnselo en el pozo de la muestra
(S). Comience a cronometrar y contine desde el paso 5 hacia adelante de estas instrucciones.

INTERPRETACIN DE LOS RESULTADOS

(Consultar la figura anterior)
POSITIVO:* Dos lneas coloreadas aparecen. Una lnea debe estar en la banda de regin de
control (C) y otra lnea debe estar en la banda de la regin de la prueba (T).
*NOTA: La intensidad del color de la banda de la regin de la prueba (T) puede variar
dependiendo en la concentracin de la Rotavirus presente en el espcimen. Por lo tanto
cualquier tonalidad del color en la regin de la prueba (T) debe ser considerado positivo.
NEGATIVO: Una lnea coloreada aparece en la banda de control de la regin (C). Ningn
color aparente aparece en la banda de la regin de la prueba (T).
NO VLIDO: La lnea de control no aparece. Volumen insuficiente del espcimen o tcnicas
procesales incorrectas son las razones ms frecuentes para que el control de la lnea no
aparezca. Revise el procedimiento y repita la prueba con un nuevo dispositivo, si el problema
persiste, descontine el uso del kit inmediatamente y contacte a su distribuidor local.
CONTROL DE CALIDAD
Un proceso de control esta incluido en la prueba. Una lnea coloreada que aparece en la banda de la
regin de control (C) es considerada un procedimiento de control interno. Confirma el uso de volumen
suficiente de espcimen, y una adecuada reaccin de la membrana y tcnicas procesales correctas.
Estndares de control no son proporcionados con este kit, sin embargo se recomienda
controles positivos y negativos para ser usados con la prueba como una buena prctica de
laboratorio y para verificar un buen rendimiento de ella.

LIMITACIONES
1. El Examen en Placa de Un Paso de Rotavirus (Heces) es para uso diagnstico in vitro
nicamente. El examen debe ser usado para la deteccin de Rotavirus en muestras de heces
humanas nicamente. Ni el valor cuantitativo ni la proporcin del incremento en la
concentracin de rotavirus pueden ser determinadas por esta prueba cualitativa.
2. El Examen en Placa de Un Paso de Rotavirus (Heces) solo indica la presencia de rotavirus
en la muestra y no debe ser usada como el nico criterio para la confirmacin de que el
rotavirus sea el agente etiolgico de la diarrea.
3. Como todas las pruebas de diagnstico los resultados deben ser interpretados
conjuntamente con otra informacin clnica que est al alcance del mdico.
4. Si el resultado de la prueba resulta negativo y los sntomas clnicos persisten, exmenes adicionales
utilizando otros mtodos clnicos son recomendados. Un resultado negativo en ningn momento
excluye la posibilidad de infeccin de rotavirus con baja concentracin de partculas de virus.
VALORES ESPERADOS
El Examen en Placa de Un Paso de Rotavirus (Heces) ha sido comparado con el mtodo de
aglutinacin por Ltex, sealando una exactitud total de >99,0%.
RENDIMIENTO DE LAS CHARATERISTICAS
Sensibilidad Clnica, Especificidad y Exactitud
El rendimiento del Examen en Placa de Un Paso de Rotavirus (Heces) ha sido evaluado con
muestras clnicas colectadas de nios y adultos jvenes comparndolos con mtodos de
Aglutinacin por Ltex. Los resultados muestran que la sensibilidad relativa del Examen en
Placa de Un Paso de Rotavirus (Heces) es >99,9% y la especificidad relativa es 97,8%.
Examen en Placa de Un Paso de Rotavirus vs. Aglutinacin x Ltex
Mtodo
Aglutinacin x Ltex
Resultados Totales
Positivo
Negativo
Examen en Placa Resultados
de Un Paso de
178
Positivo
3
181
Rotavirus
0
Negativo
131
131
Resultados Totales
178
134
312
Sensibilidad Relativa: >99,9% (97,9% - 100,0%)* Especificacin Relativa: 97,8% (93,6% - 99,5%)*
Exactitud Relativa: 99,0% (97,2% - 99,8%)*
*95% Confidencia de Intervalos
Precisin
Intra-Ensayo
Las Intra-corridas de precisin han sido determinadas usando 10 rplicas de cuatro muestras:
una negativa, una baja positiva, una mediana positiva y una alta positiva. Las muestras fueron
correctamente identificadas >99% de las veces.
Inter-Ensayo
Entre-corridas la precisin fue determinada mediante 10 ensayos independientes en las mismas
cuatro muestras: una negativa, una baja positiva una mediana positiva y una alta positiva. Las
muestras fueron correctamente identificadas >99% de las veces.
Reaccin Cruzada
La reaccin cruzada fue estudiada con los siguientes organismos a 1,0 x 109 organismos/ml.
Los siguientes organismos dieron resultados negativos cuando fueron examinados con el
Examen en Placa de Un Paso para Rotavirus (Heces).
Staphylococcus aureus
Proteus mirabilis
Neisseria gonorrhea
Pseudomonas aeruginosa
Acinetobacter spp
Group B Streptococcus
Enterococcus faecalis
Salmonella choleraesius
Proteus vulgaris
Group C Streptococcus
Gardnerella vaginalis
Enterococcus faecium
Klebsiella pneumoniae
Acinetobacter calcoaceticus
Hemophilus influenzae
Branhamella catarrhalis
E.coli
Neisseria meningitidis
Candida albicans
Chlamydia trachomatis
BIBLIOGRAFIA
1. WILHELMI I, ROMAN E, SANCHEZ-FAUQUIER A. Viruses causing gastroenteritis.
Clin Microbiol Infect. April. 2003, vol.9:247-262
2. Cubitt, WD (1982) Rotavirus Infection: An Unexpected Hazard in Units Caring for the
Elderly. Geriatric Medicine Today 1: 33-38
3. Hung, T et al (1984) Waterborne outbreak of Rotavirus Diarrhea in Adults in China caused
by a Novel Rotavirus. Lancet, May 26;1(8387): 1139-1142
4. Cukor, G; Perron, DM; Hudson, R and Blacklow, NR (1984) Detection of Rotavirus in
Human Stools by Using Monoclonal Antibody. J. Clin. Microl. 19: 888-892
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N de referencia

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Schiffgraben 41
30175 Hannover, Germany

Nmero: 1150390301
Fecha Efectiva: 2007-05-28