Prueba

Composicin

Tincin de
Gram

Agua esteril
Cristal violeta
Lugol
Alcohol-acetona
Safranina

Oxidasa

Catalasa

Indicadores

Reactivos de
lectura

-----------------------

------------------------

Discos con
N,N,N,N-tetrametil
-p-fenilendiamina

-----------------------

----------------------

Perxido de
hidrogeno 30%

-----------------------

-----------------------

Fundamento
La membrana de las bacterias contiene
pptidoglicano. Cuando se adiciona el cristal violeta y
lugol forman un complejo cristal violeta-yodo. La
diferencia que se observa en la resistencia a la
decoloracin, se debe a que la membrana externa de
las Gram negativas es soluble en solventes orgnicos,
como por ejemplo la mezcla de alcohol/acetona. La
capa de peptidoglicano que posee es demasiado
delgada como para poder retener el complejo de
cristal violeta-yodo que se form previamente, y por
lo tanto este complejo se escapa, perdindose la
coloracin azul-violcea. Pero por el contrario, las
Gram positivas, al poseer una pared celular ms
resistente
y
con
mayor
proporcin
de
peptidoglicanos, no son susceptibles a la accin del
solvente orgnico, sino que este acta deshidratando
los poros cerrndolos, lo que impide que pueda
escaparse el complejo cristal violeta/yodo, y
manteniendo la coloracin azul-violcea.
Se basa en la produccin bacteriana de una enzima
oxidasa intracelular, esta reaccin de oxidasa se debe
a un sistema de citocromo oxidasa que activa la
oxidacin del citocromo reducido por el oxigeno
molecular que a su vez, acta como un receptor de
electrones en la parte terminal del sistema de
transferencia de electrones.
Reaccin qumica: Los colorantes de p-fenilendiamina
son aminas aromticas primarias derivados, diamino
del benceno, el citocromo oxidasa no reacciona
directamente con el reactivo fenilendiamina pero
oxida al citocromo C que a su vez oxida al reactivo, la
fenilendiamina es metilada y cuantos mas grupos
metilados se introducen en el radical amino el color es
mas azul. Si se introducen tres grupos fenilos en lugar
del metilo el color es aun ms oscuro.
La catalasa actua como una enzima esencial de
defensa biolgica contra la toxisidad del oxigeno. La
catalasa es una enzima que descompone al perxido

Interpretacin

Gram positivas:
Moradas a azules
Gram negativas:
Rojas a rosas

Positivo: coloracin azul marino

Negativo: sin cambio de coloracin

Positivo: efervescencia burbujeo

Negativo: sin cambios

O/F
(oxidacion/fer
mentacion)

Gota
suspendida

KiA
(agar de
hierro de
Kinger)

TSI
(hierro triple
azucar)

Medio bsico de
Hugh Leifson
Peptona
NaCl
Fosfato de potasio
Hidratos de
carbono
Agar
Agua destilada

Agua esteril

Extracto de carne
Peptona
Glucosa
Citrato frrico
amnico
Lactosa
Cloruro sdico
Tiosulfato sdico
Extracto de
levadura
Estracto de carne
Polipeptona
Cloruro de sodio
lactosa
Glucosa
Sacarosa
Sulfato de hierro
Amonio
Tiosulfato de sodio
Agar

Azul de
bromotimol
Ph:
verde a 7,0
amarillo a 6,0
azul a 7,6

-----------------------

Rojo de fenol
Ph:
6,8 amarillo
8,4 rojo

Rojo de fenol
Ph:
6,8 amarillo
8,4 rojo

----------------------

--------------------------

----------------------

----------------------

de hidrgeno en oxgeno y agua

Se basa en la determinacin del metabolismo
oxidativo o fermentativo de un hidrato de carbono.
Son necesarios dos tubos del medio para la prueba. El
medio du un tipo se expone al aire y el otro se cubre
con aceite mineral o parafina lquido. Las bacterias
oxidativas producen acido solo en el tubo abierto
expuesto al oxigeno atmosfrico; los microorganismos
fermentadores producen cidos en ambos tubos; as
bacterias no sacaroliticas son inertes en este medio y
permanecen con un pH alcalino.
Algunas bacterias son mviles por presentar flagelo,
los flagelos son encontrados principalmente en las
formas bacilares y pueden presentarse en nmero y
posiciones variadas. La base de esta prueba es
determinar si la bacteria es mvil o inmvil.
En este medio se observa si la bacteria es capaz de
fermentar glucosa y lactosa, si es as los carbohidratos
forman cidos que hacen que vire el indicador del
medio, adems si tiene produccin de acido sulfrico;
el tiosulfato es un intermediario que reduce el sulfuro
a H2S en el metabolismo de la bacteria, el tiosulfato
remplaza al sulfato como fuente de azufre. El H 2S
reacciona con
el citrato de amonio ferrico,
produciendo un precipitado insoluble negro.
Tambin sirve para ver la produccin de gas, cualquier
gas que produzca la bacteria.
Medio empleado para la diferenciacin de la
fermentacin de glucosa, lactosa, sacarosa y la
produccin de cido sulfhdrico. El tiosulfato de sodio
es el sustrato necesario para la produccin de cido
sulfhdrico, el sulfato de hierro y amonio, es la fuente
de iones Fe3+ , los cuales se combinan con el cido
sulfhdrico y producen sulfuro de hierro, de color
negro. Rojo de fenol es el indicador de pH, el cloruro
de sodio mantiene el balance osmtico. Por
fermentacin de azcares, se producen cidos, que se

O / F
Amarillo/amarillo: fermentativo
facultativo
Amarillo/verde: oxidativo
Verde/amarillo: fermentador extricto
Azul/azul: no fermentador (usa
peptonas)
Positivo: Movimiento de un lado a otro
del campo
Negativo: sin movimiento o movimiento
gausuano
Gas:
Positivo: cuarteado o botado el agar
Negativo: sin cambios
H2S:
Positivo: coloracin negra
Negativo: sin cambio
Fermentacin de la sacarosa:
Pico /flauta:
Acido/acido fermentador
Acido/alcalino no fermentador
Alcalino/alcalino no sacarolitico
Positivo para fermentacin: rojo
Negativo: amarillo
Gas:
Positivo: cuarteado o botado el agar
Negativo: sin cambios
H2S:
Positivo: coloracin negra
Negativo: sin cambio

Urea (Stuart)

Urea
(Cristensen)

Citratos

Malonatos

Fosfato
monopotasico
Fosfato disodico
Extracto de
levadura
Urea
Agua desionizada
Peptona
NaCl
Fosfato
monopotasico
Glucosa
Urea
Agar
agua destilada
Sulfato de
magnesio
Fosfato
monobsico
Fosfato dipotasico
Citrato de sodio
NaCl
Agar
Agua desionizada
Estearato de
levadura
Sulfato de amonio
Fosfato di potsico
Fosfato
monopotasico
NaDl
Malonato de sodio
Glucosa

Rojo de fenol
Ph:
6,8 amarillo
8,4 rojo

----------------------

Rojo de fenol
Ph:
6,8 amarillo
8,4 rojo

----------------------

Azul de
bromotimol
Ph:
verde a 7,0
amarillo a 6,0
azul a 7,6

----------------------

Azul de
bromotimol
Ph:
verde a 7,0
amarillo a 6,0
azul a 7,6

----------------------

detectan por medio del indicador rojo de fenol, el cual

vira al color amarillo en medio cido. El tiosulfato de
sodio se reduce a sulfuro de hidrgeno el que
reacciona luego con una sal de hierro proporcionando
el tpico sulfuro de hierro de color negro
Determina la capacidad de un organismo de
desdoblar la urea formando dos molculas de
amoniaco por la accin de la enzima ureasa
produciendo un cambio de color rojo en el medio. La
hidrolisis de la urea es catalizada por la ureasa para
dar dos molculas de amoniaco. La ureasa es una
enzima microbiana vinculada con la descomposicin
de los compuestos orgnicos.
Determina la capacidad de un organismo de
desdoblar la urea formando dos molculas de
amoniaco por la accin de la enzima ureasa
produciendo un cambio de color rojo en el medio. La
hidrolisis de la urea es catalizada por la ureasa para
dar dos molculas de amoniaco. La ureasa es una
importante enzima microbiana vinculada con la
descomposicin de los compuestos orgnicos.

Se usa para determinar si el organismo es capaz de

utilizar el citrato como nica fuente de carbono y
compuesto amoniacales como nica fuente de
nitrgeno

El malonato es un inhibidor enzimtico. El cido

malnico se une a la enzima, ya que el cido
malnico y el cido succnico son estructuralmente
muy parecidos y ocupa los sitios activos; as, la enzima
no puede combinarse con su sustrato, y bloquea la
accin del acido succnico es necesario la activacin
de la enzima-sustrato para la activacin del sustrato,
para formar el cido fumrico. El cido succnico es el
causante de la inhibicin de la succnico

Positivo: rojo rosado intenso en el pico

de flauta
Negativo: amarillo

Positivo: rojo rosado intenso en el pico

de flauta
Negativo: amarillo

Medio sin inocular: color verde

Positivo: azul de Prusia oscuro
Negativo: sin cambios

Medio sin inocular: color verde

Positivo: azul de Prusia oscuro
Negativo: sin cambios

deshidrogenasa que interrumpe el ciclo de Krebs a

menos que el microorganismo pueda utilizar al
malonato como nica fuente de carbono.

Agua desionizada

MIO
(motilidad
indol ortinina)

Arginina (Ar)

Dextrosa
Estracto de
levadura
Peptona
Tripteina
Clorhidrato de
L-ornitina
Agar
Aceite mineral

Peptona
Extracto de carne
Fosfato de piridoxal
Glucosa

purpura de
bromocresol
Ph:
6,3 purpura
5,2 amarillo
6,8 purpura

reactivo de
Kovacs o de
Erlich

purpura de
bromocresol
Ph:
6,3 purpura

----------------------

cultivo semislido, altamente nutritivo debido a la

presencia de extracto de levadura, peptona y
triptena. Adems, la triptena aporta grandes
cantidades de triptofano, sustrato de la enzima
triptofanasa, para la realizacin de la prueba del indol.
La dextrosa es el hidrato de carbono fermentable, la
ornitina es el sustrato para la deteccin de la enzima
ornitina decarboxilasa, el prpura de bromocresol es
el indicador de pH, que en medio alcalino es de color
prpura y en medio cido es amarillo.
Por su composicin, es posible detectar 3 reacciones
en un mismo tubo: movilidad, presencia de ornitina
decarboxilasa e indol
La movilidad se demuestra por un enturbiamiento del
medio o por crecimiento que difunde mas all de la
lnea de inoculacin. La reaccin positiva a la ornitina
est dada por un color prpura del medio. Debido a la
fermentacin de la glucosa se reduce el pH
produciendo una condicin cida y originando que el
indicador de pH prpura de bromocresol vire al
amarillo.
La presencia de acidez, otorga condiciones ptimas
para la actividad de la enzima ornitina decarboxilasa,
la cual decarboxila la ornitina presente. Por
decarboxilacin, se alcaliniza el medio, con el
consecuente viraje del indicador hacia el color
prpura. El indol, es producido a partir del triptofano
por los microorganismos que contienen la enzima
triptofanasa. El desarrollo de un color rojo luego de
agregar unas gotas de reactivo de Kovacs o de Erlich,
indica un resultado positivo
La L-arginina sufre una descarboxilaciin para
producir agmatina. La agmantina se degrada por dos
vas, la accin de la enzima agmantasa rompe la
molcula en dos compuestos: putresina y urea. Si la

Movilidad:
-Resultado positivo: presencia de
turbidez o crecimiento mas all de la
lnea de siembra. Resultado negativo:
crecimiento solamente en la lnea de
siembra.
2-Ornitina decarboxilasa: -Resultado
positivo: color prpura.
Resultado negativo: color amarillo. A
veces se puede desarrollar un color
violceo en la superficie del medio.
3-Prueba del indol:
La prueba de indol se realiza una vez
que se ha determinado la movilidad y la
prueba de ornitina. Resultado positivo:
color rojo al agregar el reactivo
revelador.
Resultado negativo: el color del reactivo
revelador
permanece
incoloroamarillento

Positivo: color purpura turbio-amarillopurpura apagado

Negativo: sin cambios

Agua desionizada
Acaeite mineral

5,2 amarillo
6,8 purpura

Peptona de gelatina

LIA
(agar lisina)

SIM
(acido
sulfhidrico,
indol,
motilidad)

Extracto de
Glucosa
Levadura
Citrato de hierro y
Amonio
Tiosulfato de
sodio
Agar

Tripteina
Peptona
Sulfato de amonio y
hierro
Tiosulfato de sodio
Agar

Purpura de
bromocresol
Ph:
6,3 purpura
5,2 amarillo
6,8 purpura

-----------------------

----------------------

reactivo de
Kovacs o de
Erlich

enzima ureasa esta presente, la urea es catabolizada

formando dos molculas de amoniaco y CO 2.
En el medio de cultivo, la peptona y el extracto de
levadura aportan los nutrientes para el desarrollo
bacteriano. La glucosa es el hidrato de carbono
fermentable, y la lisina es el sustrato utilizado para
detectar la presencia de las enzimas decarboxilasa y
deaminasa. El citrato de hierro y amonio, y el
tiosulfato de sodio, son los indicadores de la
produccin de cido sulfhdrico. El purpura de
bromocresol, es el indicador de pH, el cual es de color
amarillo a pH igual o menor a 5.2, y de color violeta a
pH
igual
o
mayor
a
6.8.
Por decarboxilacin de la lisina, se produce la amina
cadaverina, que alcaliniza el medio y esto produce el
viraje del indicador al color violeta. La decarboxilacin
de la lisina, tiene lugar en medio cido, por lo que es
necesario que la glucosa sea previamente
fermentada.
Los microorganismos que no producen lisina
decarboxilasa, pero que son fermentadores de la
glucosa, producen un viraje de la totalidad del medio
de cultivo al amarillo, pero a las 24 hs de incubacin
se observa el pico de color violeta debido al consumo
de las peptonas, y el fondo amarillo.
La produccin de sulfuro de hidrgeno, se visualiza
por el ennegrecimiento del medio debido a la
formacin
de
sulfuro
de
hierro.
Las cepas de los gneros Proteus, Providencia y
algunas cepas de Morganella, desaminan la lisina,
esto produce un cido alfa-ceto-carbnico, el cual,
con la sal de hierro y bajo la influencia del oxgeno
forma un color rojizo en la superficie del medio.
El triptfano es un aminocido constituyente de
muchas peptonas, y particularmente de la triptena,
que puede ser oxidado por algunas bacterias para
formar indol.
En el proceso interviene un conjunto de enzimas
llamadas triptofanasa. El indol producido se combina
con el aldehido del reactivo de Kovac s o de Erlich,

Descarboxilacion de la lisina
Positivo: color purpura turbio-amarillopurpura apagado
Negativo: sin cambios
H2S:
Positivo: coloracin negra
Negativo: sin cambio

H2S:
Positivo: coloracin negra
Negativo: sin cambio
Movilidad:
-Resultado positivo: presencia de
turbidez o crecimiento mas all de la

Gelatina

Gelatina nutriente
Carbono activado
Agua corriente

Nitratos
(reduccin de
nitritos)

Peptona
extracto de carne
nitrato de potasio
agua destilada

Hidrlisis
del hipurato

Infusin de carne
de corazn
Casena
Peptona de
levadura
NaCl
Hipurato de sodio
Agua destilada

-----------------------

----------------------

para originar un compuesto de color rojo. Las cepas

mviles pueden apreciarse en este medio, por la
turbidez que producen alrededor de la puncin de
siembra, mientras que aquellas cepas productoras de
sulfhdrico se distinguen por la formacin de un
precipitado negro de sulfuro de hierro a partir del
tiosulfato siempre que el medio se mantenga a un pH
mayor a 7.2
La mayora de los polmeros son demasiado grandes
para ser transportados dentro de las clulas. Las
bacterias excretan enzimas extracelulares que
hidrolizan esos polmeros transportando al interior de
la clula en monmeros que les sirven para crecer.
La produccin de proteasas es evaluada por
incorporacin de una protena (gelatina o casena) en
un medio slido en placa. La placa se inunda con cido
que precipita la proteina no hidrolizada.
Algunas bacteris pueden usar nitratos como aceptor
final de e- en la respiracin. el nitrato puede ser
reducido a nitrito o en un paso ms a gases (xidos de
nitrgeno).

-----------------------

alfanalfilami
na y cido
sulfanlico
zinc

-----------------------

Ninhidrina
Cloruro
frrico

Las bacterias se inoculan en medios conteniendo

nitrato potsico. El nitrito procedente de la reduccin
de
clulas
puede
detectarse
aadiendo
alfanalfilamina y cido sulfanlico produciendose un
color rojo. Se puede saber si el nitrato puede haberse
reducido a ms que a nitritos produciendose gas. Si al
aadir zinc en polvo no hay color rojo es que no hay
nitrato porque se ha reducido a gas (desnitrificacin)
En el medio de prueba se usa una sal de hipurato que
forma benzoato de sodio y lisinato de sodio por
hidrolisis. Los productos finales del cido hipurico,
cido benzoico y lisina son insolubles en agua; sus
sales son solubles. La hipuricasa produce hidrolisis en
la unin peptidica del acido hiprico. La hidrlisis del
hipurato es detectada detectando cualquier producto
final, el acido benzoico en el medio agregando una
solucin de cloruro frrico acidificada ya que es

lnea de siembra. Resultado negativo:

crecimiento solamente en la lnea de
siembra.
Indol
Positivo; anillo color rojo en la
superficie
Negativo: sin cambio

Positivo hay licuefaccin

Negativo medio solido

Positivo al agregar alfanalfilamina y

cido sulfanlico
Positivo Rojo
Negativo: sin cambio
Al agregar zinc
Positivo: sin cambio
Negativo: color rojo

Positiva: Precipitado que perdure por

ms de 10 minutos
Negativo sin cambios o que el
precipitado desaparezca

sensible al mtodo y la lisina es detectada por el

mtodo de ninhidrina

MR-VP:
(Rojo de
metilo y
VogesProskauer)

Fermentacin
de
carbohidratos
generalmente

Polipeptona
Digerido
pancretico de
casena
Dextrosa
Fosfato de potasio
Agua destilada

Caldo bsico
Peptona..10g
carbohidrato al 1%
Extracto de carne1g

MR: Rojo de
fenol
-----------------------

Rojo de fenol
Ph:
6,8 amarillo
8,4 rojo

VP: KOH
alfa-naftol

----------------------

La glucosa puede ser metabolizada por los

microorganismos, a travs de distintas vas
metablicas. Segn la va utilizada, se originarn
productos finales cidos (cido lctico, cido actico,
cido frmico), o productos finales neutros (acetil
metil carbinol, acatoina).
MR: ES una prueba cualitativa basada en el uso de
indicador rojo de metilo que nos indica por que va
metablica se fermento la glucosa. La coloracin roja
nos indica que la glucosa es metabolizada va cidos
mixtos.
VP: Se basa en la deteccin de acetoina un producto
final neutro derivado de la glucosa. En la prueba el
primer reactivo de lectura agregado es el catalizador
.naftol que acta como un intensificador de color, lo
que aumenta la especificidad de la reaccin, el
.naftol se combina con el producto de la reaccin del
diacetilo y con el compuesto de tipo guanidina
presente en la peptona, el KOH el 40% ayuda a los
absorcin de CO2, estos dos reactivos ayuda a la
reaccin para que produzca el diacetilo que es una
sustancia reactante activa. La prueba de VP esta
basada en la reaccin de diacetilo y el ncleo de
guanidina aqu presente en la argunina.
Es necesario un grupo amino libre disponibleen la
molcula de guanidina proveniente de la arginina en
la peptona para el desarrollo de color. Cundo se
mezclan en proporciones correctas diacetilo peptona
y .naftol, se desarrolla de manera casi instantnea
una coloracin roja en la superficie del medio.
La fermentacin es un proceso metablico, las
bacterias que fermentan hidratos de carbono son por
lo general anaerobios facultativos. Por medio del
proceso de fermentacin de un hifrato de carbono es

MR:
Positivo:
Negativo: sin cambios
VP:
Positivo: anillo rojo en la superficie que
aparesca y persista en 10 minutos
Negativo: sin cambios o desaparece el
anillo en el transcurso de 10 minutos

Medio sin inocular: naranja rojizo

Positivo: amarillo

son:
salicina
manitol
maltosa.

NaCl....5g
Agua destilada..1L

Hidrlisis de
Bilis Esculina

Peptona de casena
Peptona de carne
Extracto de
levadura
Esculina
Oxgall (bilis)
NaCl
Citrato de hierro y
amonio
Citrato de sodio
Azida sdica
Agar
Agua deshionizada

Factor CAMP
(son las siglas
de los
descubridores
de dicho
factor)

Antibiograma

Coagulasa

Agar sangre:

Discos con:
Bacitracina
Vancomisina
Optoquina
Penicilina
Amikasina
Clorafenicol

Plasma de humano
o de conejo

-----------------------

----------------------

-----------------------

----------------------

Medio de cultivo:
Muller Hinton

-----------------------

degradada y descompuesto en dos molculas de

carbono triosas que son nuevamente degradadas. Los
productos finales varan con cada especie bacteriana,
del carbohidrato y del sistema enzimtico de la
especie.
Los acetales se hidrolizan con facilidad por la accin
de los cidos la base de la prueba de la esculina es la
hidrlisis en la ligadura de la esculina a esculetina,
por una -glucosidasa constitutiva la cual libera una
molcula de glucosa
La esculetina reacciona con una sal de hierro 3 para
formar un complejo fenolico de color castao oscuro
o negro. El citrato frrico y de amonio es incorporado
al medio de bilis y esculina de 0.05% como indicador
de hidrlisis de la esculina y produce la formacin de
esculetina, la hidrlisis se produce en 2 pasos:
a) Crecer en presencia de una concentracin
particular de bilis.
b) Producir esculinasa para hidrolizar la
esculina.
Una protena denominada factor K que interactua
con la -hemolisina, producida secretada por
Staphylococos aerus, produce aumento sinergico de la
hemolisis, y se ve una zona en forma de punta de
fleha , donde se observa una mayor hemolisis cerca
de la unin de las dos estrias de desarrollo.

----------------------

Observar la resistencia a los antibiticos de la cepas,

observando si hay o no crecimiento bacteriano al
rededor de los discos.

----------------------

Detectan ambas coagulasas la libre y la ligada siendo

la nica distincin entre ambas la antignica. La
coagulasa libre extra celular reacciona con una
sustancia libre en el plasma (factor del suero),
denominado tambin factor de reaccin de la
coagulasa (CRF), una sustancia termoestable similar a

Negativo: sin cambios o rojo

Positivo: Presipitado negro

Negativa: sin cambios

Positiva: punta de flecha

Negativo: no hay sinergismo

Sensible: halo de inhibicin de acuerdo

con el antibitico.
Resistente: sin halo o halo menor de
acuerdo al antibiotico.

Positivo: formacin de un coagulo

Negativo: sin cambios

Agar TCBS
(tiosulfato
citrato bilis
sacarosa)

Agar MC
(Mac Conkey)

Extracto de
Levadura
Sacarosa
Peptona de Casena
Cloruro de Sodio
Peptona de Carne
Tiosulfato de Sodio
Citrato de Sodio
Bilis disecada
Colato de Sodio
Citrato de Hierro
Agar Bacteriolgico

Peptona
Pluripeptona

Azul de Timol.
Azul de
Bromotimol. (Ph.
7,0 verde., 6,0
amarillo., 7,6 azul)

Rojo neutro

----------------------

----------------------

la trombina. El CFR es en activador, una molcula

derivada o modificada de la trombina. La coagulasa
libre extracelular reacciona con el CRF formando un
complejo. Este complejo acta de manera indirecta
para convertir el fibringeno en fibrina, durante la
coagulacin se liberan pptidos similares a partir del
fibringeno y del complejo coagulasa-CRF, la
diferencia principal es que el CRF que reacciona con
la coagulasa no requiere iones de calcio para formar el
coagulo y es inestable a la heparina.
El Agar TCBS, por las iniciales de Tiosulfato-CitratoBilis-Sacarosa, es preparado de acuerdo con la
frmula de Kobayashi y col. siendo una modificacin
del medio de Nakanishi. En el Agar TCBS crecen todas
las especies de Vibrio patgenas para el humano
excepto V. hollisae. Las muestras pueden ser de
materiales tanto clnicos como no clnicos. El Agar
TCBS es altamente selectivo para las especies de
Vibrio debido a sus componentes nutricionales y a la
alta concentracin de sales y es ampliamente utilizado
en placa para el primoaislamiento. Este medio junto
en el Agua Peptonada Alcalina es utilizado para el
aislamiento de V.cholerae y otras especies a partir de
muestras fecales.
En este mediio el extracto de levadura y las peptonas
proporcionan la fuente de nitrgeno, vitaminas y
aminocidos. El citrato de sodio, el tiosulfato de sodio
y la bilis actan como agentes inhibidores de
microorganismos Gram positivos y coliformes dando
alcalinidad al medio. La sacarosa es el carbohidrato
fermentable. El cloruro de sodio promueve el
crecimiento. El tiosulfato de sodio es la fuente de
sulfuro y el citrato de hierro es un indicador para
detectar la produccin de H2S. El azul de timol y de
bromotimol acta como indicadores de pH. El agar
bacteriolgico es agregado como agente
solidificante.
En el medio de cultivo, las peptonas, aportan los
nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano, la

Despus de 18 a 24 horas de incubacin,

la sacarosa es fermentada por los vibrios
que dan colonias de tamao mediano,
lisas, opacas, de color amarillo.
V.vulnifucus no fermenta la sacarosa
presentando una coloracin verde.

MicroorganismosColonias
Escherichia coli Rojas con halo turbio

lactosa es el hidrato de carbono fermentable, y la

mezcla de sales biliares y el cristal violeta son los
agentes selectivos que inhiben el desarrollo de gran
parte de la flora Gram positiva.
Por fermentacin de la lactosa, disminuye el pH
alrededor de la colonia. Esto produce un viraje del
color del indicador de pH (rojo neutro), la absorcin
en las colonias, y la precipitacin de las sales biliares.
Los microorganismos no fermentadores de lactosa
producen colonias incoloras.

Lactosa
Mezcla de sales
biliares
Cloruro de sodio
Agar
Rojo neutro
Cristal violeta

Klebsiella pneumoniae Rosadas mucosas

Salmonella typhimurium Incoloras, transparentes
Shigella flexneri Incoloras, transparentes
Proteus mirabilis Incoloras, transparentes
Enterococcus faecalis Diminutas, incoloras, opacas

Microorganismos

Agar VB
(Verde
brillante)

Agar SS
(SanmonelaShigella)

Plurepetona
Extracto de
levadura
Cloruro de sodio
Lactosa
Sacarosa
Rojo de fenol
Verde brillante
agar

Pluripeptona
extracto de carne
lactosa
mezcla de sales
biliares
citrato de sodio
agar
verde brillante
rojo neutro

Rojo de fenol

Rojo neutro

----------------------

----------------------

En el medio de cultivo, la pluripeptona y el extracto de

levadura, constituyen la fuente de nitrgeno,
vitaminas y minerales. La lactosa y la sacarosa son los
hidratos de carbono fermentables, el rojo fenol es el
indicador de pH, que vira al amarillo cuando hay
produccin de cido a partir de la fermentacin de
azcares, el cloruro de sodio mantiene el balance
osmtico, y el verde brillante acta como agente
selectivo

Es un medio de cultivo selectivo y diferencial.

La selectividad, esta dada por la sales biliares y el
verde brillante, que inhiben el desarrollo de bacterias
Gram positivas, de la mayora de los coliformes y el
desarrollo invasor del Proteus spp.
Es diferencial debido a la fermentacin de la lactosa, y
a la formacin de cido sulfhdrico a partir del
tiosulfato de sodio.
Los pocos microorganismos fermentadores de lactosa
capaces de desarrollar, acidifican el medio haciendo
virar al rojo el indicador de pH, obtenindose colonias
rosadas o rojas sobre un fondo rojizo.
Salmonella, Shigella y otros microorganismos no
fermentadores de lactosa, crecen bien en el medio de
cultivo, y producen colonias transparentes.

Caractersticas de
las colonias

Escherichia coli ATCC

25922

Amarillo-verdosas
sobre fondo
amarillento

Salmonella
enteritidis ATCC
13076

Rosas, blancas o
transparentes
sobre fondo rojo

Salmonella typhi

Crecimiento
inhibido

Salmonella
typhimurium ATCC
14028

Rosas, blancas o
transparentes
sobre fondo rojo

Shigella flexneri.
ATCC 12022

Crecimiento
inhibido

Staphylococcus
aureus ATCC 25923

Crecimiento
inhibido

Microorganismo Caractersticas
s
de las colonias

Salmonella Transparente
typhimurium s, centro
ATCC 14028
negro
Shigella
Incoloras
flexneri
Shigella sonnei Incoloras
Proteus
Transparente
mirabilis ATCC s, centro
43071
negro
Escherichia coli Rosadas a
ATCC 25922
rojas

La produccin de cido sulfhdrico se evidencia como

colonias con centro negro debido a la formacin de
sulfuro de hierro

Agar XLD
(Xilosa, lisina,
desoxicolato)

Xilosa
L-lisina
Lactosa
Sacarosa
NaCl
Extracto de
lavadura
Desoxicolato de
sodio
Tiosulfato de sodio
Citrato frrico
amonio

Rojo de fenol

----------------------

XLD Agar es un medio selectivo y de diferenciacin.

Contiene extracto de levadura como fuente de
nutrientes y vitaminas. Utiliza el desoxicolato de sodio
como agente selectivo y, por consiguiente, inhibe los
microorganismos gram positivos. La xilosa se
incorpora en el medio dado que la fermentan
prcticamente todos los entricos, excepto Shigella, y
esta propiedad hace posible la diferenciacin de dicha
especie. La lisina se incluye para permitir la
diferenciacin del grupo Salmonella de los organismos
no patgenos, dado que, sin lisina, Salmonella
fermentara rpidamente la xilosa y no se distinguira
de las especies no patgenas. Cuando la Salmonella
agota el suministro de xilosa, la lisina es atacada por la
enzima lisina descarboxilasa, lo que genera un cambio
a un pH alcalino que imita la reaccin de Shigella. Para
evitar el cambio similar en los organismos coliformes
positivos a la lisina, se aaden lactosa y sacarosa para
producir cido en exceso1.
Para aumentar la capacidad de diferenciacin de la
frmula, se incluye un sistema indicador de H2S,
formado por tiosulfato sdico y citrato frrico
amnico, para la visualizacin del cido sulfhdrico
producido, lo que origina la formacin de colonias con
centros de color negro. Los organismos no patgenos
no productores de H2S no descarboxilan la lisina; por
tanto, la reaccin cida producida por dichos
organismos evita el oscurecimiento de las colonias, lo
que sucede slo con pH alcalino o neutro

Klebsiella
Rosadas
pneumoniae cremosas y
ATCC 700603 mucosas

Cepas
Salmonella
Typhimurium

Salmonella
Abony

Shigella
flexneri

Shigella
sonnei

Enterococcus
faecalis
Escherichia
coli

Proteus
mirabilis

Resultados del
crecimiento
Crecimiento de
bueno a
excelente;
colonias rojas con
centros de color
negro
Crecimiento de
bueno a
excelente;
colonias rojas con
centros de color
negro
Crecimiento de
bueno a
excelente;
colonias rojas
Crecimiento de
bueno a
excelente;
colonias rojas
Inhibicin de
parcial a completa
Inhibicin de
parcial a
completa; colonias
de amarillas a rojo
amarillentas
Crecimiento;
colonias de color
rojo carmes con
centros negros,
proliferacin
inhibida

Microorganismos
Escherichia coli

Agar EMB
(Eosina asul

Peptona
Lactosa

Azulde metileno

----------------------

La diferenciacin entre organismos capaces de utilizar

la lactosa y/o sacarosa, y aquellos que son incapaces

Klebsiella
pneumoniae

Tipo de Colonia
Verdosas con brillo
metlico y centro
negro azulado
Mucosas, rosa
prpura, confluentes

de metileno)

Agar AST
(agar soya
trpticaseina)

Sacarosa
Fosfato dipotasico
Agar
eosina

Peptona de Casena
Peptona de Soya
Cloruro de Sodio
Agar Bacteriolgico

Agar AS
(agar sangre)

Infusin de musculo
de corazn
Peptona
Nacl
Agar
Sangre de carnero

Agar
cetrimida

Peptona de gelatina
Cloruro de
magnesio
Sulfato de potasio

-----------------------

----------------------

de hacerlo, est dada por los indicadores eosina y azul

de metileno; stos ejercen un efecto inhibitorio sobre
muchas bacterias Gram positivas. Muchas cepas de
Escherichia coli y Citrobacter spp. presentan un
caracterstico brillo metlico. Las cepas que utilizan la
lactosa poseen centro oscuro con periferia azulada o
rosada, mientras que las que no lo hacen son
incoloras. Este medio permite el crecimiento de
Candida spp. como colonias rosadas y puntiformes; la
siembra en profundidad permite el desarrollo de
clamidosporas en C. albicans. Enterococcus spp. crece
en este medio como colonias puntiformes y
transparentes, mientras que Acinetobacter spp. y
otras bacterias oxidativas pueden dar colonias de
color azul lavanda; esto puede ocurrir aunque las
cepas no sean capaces de acidificar a partir de lactosa
al 0.5% y ello se debe a la incorporacin de azul de
metileno a sus membranas. En este medio se obtiene
adems, un buen desarrollo de especies de
Salmonella y Shigella.
En este medio las peptonas proveen la fuente de
nitrgeno y minirales. El azcar de la Peptona de Soya
provee la fuente de carbohidratos. El Cloruro de Sodio
tiene su funcin en el balance osmtico y el Agar es
incorporado como agente solidificante.

-----------------------

----------------------

La infusin de msculo de corazn y la peptona,

otorgan al medio un alto valor nutritivo, que permite
el crecimiento de una gran variedad de
microorganismos, an de aquellos nutricionalmente
exigentes. El cloruro de sodio mantiene el balance
osmtico.
El agregado de sangre al medio de cultivo, en
concentracin final de 5-10 %, aporta nutrientes para
el crecimiento bacteriano, y permite detectar
hemlisis.

-----------------------

----------------------

La frmula de este medio est desarrollada para

favorecer la seleccin de P. aeruginosa y estimular la
formacin de pigmentos. Es ste un medio muy
semejante al King A, en el cual el cloruro de magnesio

Proteus mirabilis
Enterococcus
faecalis
Shigella flexneri
Salmonella
typhimurium

Incoloras
Incoloras, pequeas,
puntiformes
Incoloras
Incoloras

crecimiento

Hemolisis
Hemolisis
Hemolisis

Microorganismos

Crecimiento

Pseudomonas
aeruginosa

Bueno - excelente

Escherichia coli

Inhibido

Agar
cetrimida

y el sulfato de potasio promueven la formacin de

piocianina, pioverdina y piomelanina de P. aeruginosa.
La cetrimida es un detergente catinico que acta
como agente inhibidor, libera el nitrgeno y el fsforo
de las clulas de casi toda la flora acompaante,
aunque inhibe tambin algunas especies de
Pseudomonas.

Staphylococcus
aureus

Bibliografa:
Mac FADDIN; 2003; Pruebas bioqumicas para la identificacin de bacterias de inters biolgico ; tercera edicin; editorial MEDICA
PANAMERICANA: Montevideo, Uruguay; p 850.
KONEMAN; 2003; diagnostico microbiolgico quinta edicin, editorial MEDICA PANAMERICANA, Madrid, Espaa, p 1691
NOTA: LAS PRUEBAS BIOQUIMICAS TIENEN MUCHAS VARIANTES E INTERPRETACIONES ESPECIALES EN ALGUNOS CASOS, AQUI SOLO SE
MENCIONAN DE MANERA GENERAL LAS MA COMUNES.

Inhibido