Inmunologia

Fundamentos
de Inmunologa
Bsica y Clnica
Editores
Ivn Palomo G., Arturo Ferreira V., Cecilia Seplveda C.,
Mario Rosemblatt S., Ulises Vergara C.
DE
UNIVERSIDAD
EDITORIAL
TALCA
MCMXCI
UNIVERSIDAD DE
TALCA
EDITORIAL UNIVERSIDAD DE TALCA

COLECCIN E-BOOK
Serie de libros electrnicos
Fundamentos de Inmunologa
Bsica y Clnica
Editores
Vicerrectora Acadmica
COLECCIN E-BOOK
Serie de libros electrnicos
DE
UNIVERSIDAD
EDITORIAL
TALCA
MCMXCI
UNIVERSIDAD DE
TALCA
Registro de propiedad intelectual N 128.873

ISBN: 978-956-7059-86-7
Talca- Chile, julio de 2009
Edicin soporte papel ao 2002
Diseo Editorial:
Marcela Albornoz Dachelet
Correccin de textos:
Mara Cecilia Tapia Castro
Sin ttulo-2
5/26/06, 10:25 AM
Registro de propiedad intelectual N 128.873

ISBN: 956-7059-51-9

Talca - CHILE, 2002
Ilustraciones
BQ. Marcos Prez Cid
Diseo grfico
Marcela Albornoz Dachelet
Revisin de textos
Mara Cecilia Tapia Castro
La ilustracin de la portada muestra la interaccin entre una Clula Presentadora de Antgeno y un Linfocito T. Se
representan algunas de las molculas que participan: Receptor de clulas T (TCR), molcula del Complejo Principal de Histocompatibilidad (MHC), Pptido Antignico y Molculas de Adhesin Celular.
Diagramacin e impresin
Gutenberg-Talca
Impreso en Chile
Sin ttulo-2
5/26/06, 10:25 AM
Fundamentos
de
Inmunologa
Bsica y Clnica
Editores

DE
UNIVERSIDAD
EDITORIAL
TALCA
MCMXCI
Sin ttulo-2
5/26/06, 10:25 AM
Sin ttulo-2
5/26/06, 10:25 AM
UNIVERSIDAD DE TALCA
FUNDAMENTOS DE INMUNOLOGA
BSICA Y CLNICA
Editores
Prof. Dr. Ivn Palomo Gonzlez
Unidad de Inmunologa y Hematologa
Departamento de Bioqumica Clnica
e Inmunohematologa
Facultad de Ciencias de la Salud
Universidad de Talca
Prof. Dr. Arturo Ferreira Vigouroux
Programa Disciplinario de Inmunologa
Instituto de Ciencias Biomdicas
Facultad de Medicina
Universidad de Chile
Prof. Dra. Cecilia Seplveda Carvajal
Unidad de Inmunologa
Departamento de Medicina
Prof. Dr. Mario Rosemblatt Silber
Fundacin Ciencias para la Vida
Departamento de Biologa
Facultad de Ciencias
Prof. Dr. Ulises Vergara Castillo
Escuela de Postgrado, Facultad de Medicina y
Departamento de Medicina Preventiva,
Facultad de Ciencias Veterinarias,
Universidad de Chile.
Sin ttulo-2
5/26/06, 10:25 AM
AUTORES DE CAPTULOS
Dra. Ana Mara Agar Muoz
Clnica Alemana
Dra. Luz P. Blanco Palma

Laboratorio de Inmunobioqumica
Departamento de Bioqumica y Biologa
Molecular
Facultad de Ciencias Qumicas y
Farmacuticas
Prof. Dra. Edilia Andrews Garca

Departamento de Microbiologa
Facultad de Ciencias Biolgicas
Universidad de Concepcin
Prof. Dra. Eva Burger

Departamento de Inmunologa
Universidad de San Pablo, Brasil
Prof. Dra. Adriana Ardiles Sandoval

Policlnico de Medicina Integral
Servicio de Medicina
Hospital San Juan de Dios
Prof. Dr. Antonio Cabral

Departamento de Reumatologa
Instituto Nacional de Nutricin
Salvador Subiran, Mxico
BQ. Alejandra Arenas Celf

Seccin Histocompatibilidad
Instituto de Salud Pblica
Prof. Dr. Flavio Carrin Arriagada

Universidad de Los Andes
Dr. Miguel Barra Maldonado

Instituto de Inmunologa
Universidad Austral de Chile
Dr. Darwins Castillo Alvarez

Seccin Inmunodiagnstico
Prof. Dra. Mara Ins Becker Contreras

P. Universidad Catlica de Chile
Prof. Dr. Edgardo Carrasco Caldern

Departamento de Medicina Oriente
Instituto Nacional del Trax
Prof. Dr. Rosario Billetta Daquila

Programa disciplinario de Inmunologa
Prof. Dra. Mnica Cornejo De Luigi

Universidad de Valparaso
Prof. Dra. Mara Rosa Bono Merino

Sin ttulo-2
5/26/06, 10:25 AM
Prof. Dr. Alfredo De Ioannes Ilis

Prof. Dr. Ricardo Forastiero Valcarcel

Unidad de Hematologa
Universidad Favarolo
Buenos Aires, Argentina
Prof. Dra. Patricia Daz Amor

Departamento de Medicina Experimental
Prof. Dr. Enrique Gonzlez Villanueva

Laboratorio de Biologa Molecular
Instituto de Biologa y Biotecnologa
Dra. Susana Elgueta Miranda

Seccin Histocompatibilidad
Prof. Dr. Jorge Gonzlez Corts

Unidad de Parasitologa
Departamento de Tecnologa Mdica
Universidad de Antofagasta
Prof. Dr. Patricio Esquivel Snchez

Dra. Mara Antonieta Guzmn Melndez

Servicio de Medicina
Hospital Clnico
Prof. Dr. Heriberto Fernndez

Jaramillo
Instituto de Microbiologa Clnica
Prof. Dr. Gustavo Hoecker Salas

Unidad de Inmunogentica
Prof. Dr. Jorge A. Fernndez Vargas

Unidad de Virologa
Prof. Dra. Mnica Imarai Bahamonde

Facultad de Qumica y Biologa
Universidad de Santiago de Chile
Prof. Dr. Arturo Ferreira Vigouroux

Prof. Dr. Sergio Jacobelli Gabrielli

Departamento de Reumatologa e
Inmunologa Clnica
Prof. Dr. Hugo Folch Vilches

Prof. Dra. Cecilia Koenig Samohod

Departamento Biologa Celular y
Molecular
Sin ttulo-2
5/26/06, 10:25 AM
Dra. Mara Anglica Marinovich

Unidad de Reumatologa
Departamento de Medicina Interna
Hospital Clnico San Borja-Arriarn
Prof. Dr. Ivn Palomo Gonzlez

Departamento de Bioqumica Clnica e
Inmunohematologa
Prof. Dr. Benjamn Martnez

Rondanelli
Departamento de Patologa Oral
Facultad de Odontologa
Universidad Mayor
Prof. Dr. Jaime Pereira Garcs

Departamento de Hematologa y
Oncologa
Dr. Rodrigo Mora Sanhueza

Programa Doctorado en Ciencias
Biomdicas
Prof. Dra. Silvia Pierangeli

Departamento de Microbiologa e
Inmunologa
Morehouse School of Medicine
Atlanta, Georgia, USA.
Prof. Dra. Cristina Navarrete

Departamento de Histocompatibilidad e
Inmunogentica
The London Blood Transfusion Center
Londres, Inglaterra
Prof. Dr. Javier Puente Piccardo

Laboratorio de Inmunobioqumica
Departamento de Bioqumica y
Biologa Molecular
Facultad de Ciencias Qumicas y
Farmacuticas
Dr. Rodrigo Naves Pichuante

Instituto Milenio de Biologa
Fundamental y Aplicada
Prof. Dr. Arnoldo Quezada Lagos

Departamento de Pediatra
Dra. Ximena Norambuena Rodrguez

Servicio de Pediatra
Hospital Exequiel Gonzlez Corts
Dr. Santiago Rivero Daz

Departamento de Reumatologa e
Inmunologa Clnica
Prof. Dr. Jos M. Ojeda Fernndez

Unidad de Virologa
Prof. Dr. Mauricio Oqueteaux
Tacchini
Departamento de Hematologa y
Oncologa
Prof. Dr. Cristin Rodrguez Guiraldes

Sin ttulo-2
5/26/06, 10:25 AM
Prof. Dr. Mario Rosemblatt Silber

Fundacin Ciencias para la Vida
Prof. MgCs. Marcela Vsquez Rojas

Departamento de Bioqumica Clnica e
Inmunohematologa
Prof. Dr. Flavio Salazar-Onfray

Dra. Pilar Vega Covarrubias

Seccin Inmunidad Celular
Laboratorio CIDI
Prof. Dr. Ulises Vergara Castillo
Laboratorio de Inmunologa
Facultad de Ciencias Veterinarias y
Pecuarias
Prof. Dra. Cecilia Seplveda Carvajal

Departamento de Medicina
Prof. Dra. Juana Villegas Moraga

Departamento de Medicina Interna
Universidad de la Frontera
Prof. Dra. Mireya Silva Batista

Laboratorio Clnico Inmunolab
Tc. Qum.Valeska Simon Zegers
Prof. Dr. Luis Zaror Cornejo

Instituto de Microbiologa Clnica
Prof. Dr. Julio Sharfstein

Instituto de Biofsica Carlos Chagos
Filho. UFRJ
Laboratory of Molecular Immunology
CCS
Ro de Janeiro, Brasil
Prof. Dra. Marta Zelazko de

Cheistwer
Servicio de Inmunologa
Hospital Nacional de Pediatra
Juan P. Garrahan
Buenos Aires, Argentina
BQ. Carolina Valenzuela Barros

Seccin Inmunodiagnstico
Dr. Claudio Ziga Marti

Laboratorio de Inmunologa
Facultad de Ciencias Veterinarias y
Pecuarias
Prof. Dr. Claudio Vsquez Guzmn

Departamento de Ciencias Biolgicas
Sin ttulo-2
5/26/06, 10:25 AM
PATROCINIO
International Union of Immunology Societies (IUIS)
Asociacin Latinoamericana de Inmunologa (ALAI)
Sociedad Chilena de Inmunologa (SOCHIN)
Sociedad Chilena de Alergia e Inmunologa
Network for Research and Training in Parasitic Diseases
at the Southern Cone of Latin America, SIDA, Suecia
Facultad de Ciencias Qumicas y Farmacuticas
Facultad de Ciencias Veterinarias y Pecuarias
Universidad de Valparaso
Universidad de la Frontera
Universidad de Antofagasta
Facultad de Ciencias Mdicas
Universidad Mayor
Facultad de Odontologa
Universidad Favaloro (Argentina)
Instituto de Salud Pblica de Chile
AUSPICIO
International Union of Immunology Societies (IUIS)
Biomrieux S.A.
Equilab
Laboratorio Clnico Talca Ltda.
10
Sin ttulo-2
10
5/26/06, 10:25 AM
A nuestras queridas familias y a nuestros estimados alumnos
11
Sin ttulo-2
11
5/26/06, 10:25 AM
CONTENIDOS
Pgina
PREFACIO
31
PRLOGO
35
SECCIN I: GENERALIDADES SOBRE INMUNIDAD
37
Captulo 1
INTRODUCCIN A LA INMUNOLOGA: LAS BASES
BIOLGICAS DE LA INDIVIDUALIDAD
Prof. Dr. Gustavo Hoecker S.
39
Captulo 2
HISTORIA DE LA INMUNOLOGA
Prof. Dr. Ivn Palomo G. y Prof. Dr. Arturo Ferreira V.
1.
Introduccin
2.
Dos siglos de inmunologa
2.1.
Inmunidad
2.2.
Serologa
2.3.
Inmunoqumica
2.4.
Inmunobiologa
3.
Premios Nobel
45
Captulo 3
CLULAS Y RGANOS DEL SISTEMA INMUNE
Prof. Dr. Ivn Palomo G., Prof. Dr. Jaime Pereira G. y Prof. Dra. Cecilia Koenig S.
1.
Introduccin
2.
Clulas del sistema inmune
2.1.
Hematopoyesis
2.2.
Linfocitos
2.3.
Sistema fagoctico mononuclear
2.3.1. Monocitos
2.3.2. Macrfagos
2.3.3. Clulas dendrticas
2.4.
Granulocitos
2.4.1. Neutrfilos
2.4.2. Eosinfilos
2.4.3. Basfilos
3.
rganos linfoides
3.1
rganos linfoides primarios
3.1.1. Mdula sea
3.1.2. Timo
3.2.
rganos linfoides secundarios
3.2.1. Ganglios linfticos
3.2.2. Bazo
3.2.3. Tejido linfoide asociado a mucosa
3.2.4 Amgdalas
53
47
48
48
48
48
48
49
12
Sin ttulo-2
12
5/26/06, 10:25 AM
55
55
55
57
62
62
63
65
65
65
73
74
75
75
75
78
80
80
82
83
84
4.
Trnsito linfocitario
84
Captulo 4
INMUNIDAD INNATA
Prof. Dr. Ivn Palomo G., Prof. Dra. Adriana Ardiles S. y Prof. Dr. Ulises Vergara C.
1.
Introduccin
2.
Componentes de la inmunidad innata o natural
3.
Fase de reconocimiento en la respuesta inmune innata
4.
Fase efectora en la respuesta inmune innata
5.
Proyeccin clnica
6.
Filogenia de la respuesta inmune innata
87
SECCIN II: ESPECIFICIDAD DE LA RESPUESTA INMUNE
101
Captulo 5
ANTGENOS
Prof. Dra. Mara Ins Becker C. y Prof. Dr. Alfredo De Ioannes I.
1.
Introduccin
2.
Conceptos generales
2.1.
Antgeno
2.2.
Inmunogenicidad y antigenicidad
2.3.
Determinante antignico
2.4.
Haptenos
3.
Caractersticas del antgeno que lo hacen inmunognico
3.1
Tamao
3.2.
Presencia de grupos qumicos activos
3.3.
Conformacin espacial de los eptopos
3.4.
Movilidad atmica
4.
Naturaleza qumica de los antgenos
4.1.
Protenas
4.2.
Carbohidratos
4.3.
Lpidos
4.4.
cidos nucleicos
5.
Clasificacin de los antgenos segn las clulas inmunes involucradas en su reconocimiento
5.1.
Antgenos timo-dependientes
5.2.
Antgenos timo-independientes
6.
Clasificacin general de los antgenos segn su funcin
6.1.
Antgenos de trasplante
6.2.
Antgenos tumorales
6.3.
Autoantgenos
6.4.
Antgenos de diferenciacin
6.5.
Superantgenos
6.6.
Alergenos
89
90
93
94
98
99
103
105
105
105
106
106
108
108
109
109
110
110
110
110
111
112
113
113
113
113
113
113
113
113
114
114
114
Captulo 6
117
RECEPTOR DE LINFOCITOS B E INMUNOGLOBULINAS
Prof. Dr. Ivn Palomo G., Prof. Dra. Mara Ins Becker C., Prof. Dra. Silvia Pierangeli y Prof. Dr.
Ulises Vergara C.
1.
Introduccin
119
2.
Receptor de linfocitos B (BCR): Estructura y funcin
120
2.1.
Inmunoglobulina de membrana
121
2.2.
Complejo accesorio Ig/Ig
124
13
Sin ttulo-2
13
5/26/06, 10:25 AM
3.
3.1.
3.2.
4.
5.
5.1.
5.2.
5.3.
5.3.1.
5.3.2.
5.3.3.
5.4.
6.
6.1.
6.2.
7.
7.1.
7.1.1.
7.1.2.
7.2.
7.2.1.
7.2.2.
7.2.3.
7.2.4.
7.2.5.
7.2.6.
7.2.7.
7.3.
7.4.
7.5.
8.
9.
Linfocitos B y seales accesorias de coestimulacin

Antgenos T-dependientes y antgenos T-independientes
Co-Receptor CD21 (CR2)
Subpoblaciones linfocitarias B1 y B2
Estructura y funcin de inmunoglobulinas
Estructura general
Dominios de inmunoglobulinas y regiones hipervariables
Variaciones isotpicas, alotpicas e idiotpicas
Variaciones isotpicas
Variaciones alotpicas
Variaciones idiotpicas
Clases y subclases de inmunoglobulinas
Respuesta inmune humoral
Avidez
Afinidad
Bases genticas de la diversidad de inmunoglobulinas
Genes de inmunoglobulinas
Genes de cadenas pesadas
Genes de cadenas livianas
Reordenamiento gnico
Reordenamiento de cadenas pesadas
Reordenamiento de cadenas livianas
Reordenamiento impreciso del DNA
Diversificacin de la regin N
Exclusin allica
Exclusin isotpica
Cambio de clase de cadenas pesadas
Hipermutacin somtica
Control de la transcripcin de los genes de inmunoglobulinas
Estimacin numrica de la diversidad de anticuerpos
Edicin del receptor linfocitario
Biosntesis y ensamblaje de las inmunoglobulinas
Captulo 7
RECEPTOR DE LINFOCITOS T Y SEALES ACCESORIAS DE COESTIMULACIN
Prof. Dr. Ulises Vergara C. y Prof. Dr. Ivn Palomo G.
1.
Introduccin
2.
Estructura del receptor T
2.1.
TCR
2.2.
TCR
3.
Estructura y funcin del complejo CD3
4.
Receptor T y reconocimiento antignico
4.1
Linfocitos TCD4 , linfocitos TCD8 y restriccin MHC
4.2.
Clulas TNK
5.
Gentica molecular del receptor T
5.1.
Genes de cadenas TCR, TCR, TCR y TCR
5.1.1. Genes de cadenas TCR
5.2.
Reordenamiento gnico
6.
Linfocitos T y seales accesorias de coestimulacin
7.
Homeostasis y desarrollo post-tmico de linfocitos T
14
Sin ttulo-2
14
5/26/06, 10:25 AM
125
125
125
126
126
127
128
129
130
130
130
130
135
136
136
136
137
138
138
139
140
140
141
141
142
142
142
143
144
144
145
146
149
151
152
152
153
154
154
156
157
159
159
159
159
160
161
161
163
165
Captulo 8
167
COMPLEJO PRINCIPAL DE HISTOCOMPATIBILIDAD
Prof. Dr. Ulises Vergara C., Prof. Dr. Ivn Palomo G., Dr. Claudio Ziga M. y Prof. Dra. Cristina
Navarrete
1.
Introduccin
169
2.
Genes y molculas del Complejo Principal de Histocompatibilidad
170
2.1.
Genes del MHC
171
2.1.1. Genes de clase I
171
2.1.2. Genes de clase II
172
2.1.3. Genes de clase III
173
2.1.4. Otros genes del MHC
173
2.2.
Estructura y funcin de las molculas MHC
174
2.2.1. Estructura y funcin de las Molculas MHC de clase I
174
2.2.2. Estructura y funcin de las Molculas MHC de clase II
174
3.
El concepto de restriccin MHC
175
4.
Otras molculas de presentacin
176
4.1.
Molculas CD1
176
5.
Herencia de los genes HLA
176
6.
Complejo Principal de Histocompatibilidad y enfermedad
176
7.
Nomenclatura y tipificacin HLA
178
Captulo 9
PROCESAMIENTO, PRESENTACIN Y RECONOCIMIENTO ANTIGNICO
Prof. Dr. Ulises Vergara C., Dr. Claudio Ziga M., Prof. Dr. Ivn Palomo G., y Prof. Dra. Cristina
Navarrete
1.
Introduccin
2.
Linfocitos T y reconocimiento antignico
2.1.
Subpoblaciones linfocitarias T y reconocimiento peptdico
2.2.
Linfocitos T
2.3.
Clulas NK
2.4.
Clulas presentadoras de antgenos
3.
Trfico celular y procesamiento antignico
4.
Antgenos endgenos y exgenos
5.
Fragmentos peptdicos y molculas MHC
6.
Procesamiento y presentacin de antgenos endgenos
7.
Procesamiento y presentacin de antgenos exgenos
8.
Presentacin alternativa de pptidos
179
Captulo 10
ACTIVACIN DE LOS LINFOCITOS
Prof. Dr. Javier Puente P.
1.
Introduccin
2.
Activacin de los linfocitos T
2.1.
Relacin estructura-funcin del complejo TCR
2.2.
Secuencias de activacin en el TCR-CD3 y cadenas
2.3.
Protenas tirosina quinasas en la activacin de los LT
2.4.
Protenas adaptadoras en la activacin de los linfocitos
2.5.
Modelo general de activacin de los LT
2.6.
Las dos seales necesarias para la activacin de los LT
3.
Activacin de los linfocitos B
3.1.
Secuencias de activacin en el BCR y sub-unidades asociadas
3.2.
Modelo general de activacin de los LB
4.
Activacin de las clulas NK
191
15
Sin ttulo-2
15
5/26/06, 10:25 AM
181
181
182
182
182
183
184
184
184
185
187
189
194
195
195
196
196
198
198
201
202
202
202
205
4.1.
Modelo de activacin de las clulas NK
205
Captulo 11
CITOQUINAS
Dr. Rodrigo Naves P. y Prof. Dra. Mara Rosa Bono M.
1.
Introduccin
2.
Propiedades generales de las citoquinas
3.
Receptores de las citoquinas y mecanismos de transduccin de seales
3.1.
Receptores de citoquinas
3.2.
Transduccin de seales
4.
Principales actividades biolgicas de las citoquinas
4.1.
Inmunidad innata
4.1.1. Inmunidad antiviral
4.1.2. Citoquinas e inflamacin
4.2.
Citoquinas y respuesta inmune
4.2.1. Citoquinas y diferenciacin de clulas linfoides
4.2.2. Clulas Th1 y Th2
4.2.3. Activacin de linfocitos B
4.2.4. Respuesta inmune especfica mediada por clulas
4.3.
Citoquinas y hematopoyesis
4.3.1. Factores estimuladores de colonias
4.3.2. Otras citoquinas estimuladoras de la hematopoyesis
4.3.3. Citoquinas supresoras
5.
Quimioquinas
5.1.
Quimioquinas en la diferenciacin linfocitaria
5.2.
Quimioquinas en la recirculacin de los linfocitos a travs de los rganos linfoides
secundarios
5.3.
Quimioquinas en el homing de los linfocitos a sitios efectores perifricos
5.4.
Quimioquinas y enfermedades
5.5.
Quimioquinas y terapia
209
Captulo 12
RECEPTORES DE ADHESIN, HOMING Y ACTIVACIN DE LINFOCITOS
Dr. Jorge Rodrigo Mora S. y Prof. Dr. Mario Rosemblatt S.
1.
Introduccin
2.
Modelo general de adhesin leucocitaria
3.
Receptores de adhesin y sus ligandos
3.1.
Receptores de adhesin de la familia de las integrinas
3.2.
Receptores de adhesin de la superfamilia de las inmunoglobulinas (SFIg)
3.3.
Molculas de adhesin de la familia de las selectinas
4.
Interacciones linfocito-endotelio
4.1.
Trfico linfocitario a travs del endotelio inflamado
4.2.
Trfico linfocitario a travs del endotelio columnar (HEV)
4.3.
Trfico linfocitario hacia la piel
5.
Regulacin del posicionamiento (homing) de linfocitos
6.
Receptores de adhesin en la diferenciacin y activacin linfocitaria
6.1.
Receptores de adhesin y diferenciacin temprana en la mdula sea
6.2.
Receptores de adhesin y diferenciacin en el microambiente de los OLS
239
Captulo 13
ONTOGENIA Y DIFERENCIACIN DE CLULAS B Y T
Dr. Rodrigo Naves P. y Prof. Dr. Mario Rosemblatt S.
1.
Introduccin
261
16
234
235
235
237
241
242
244
245
246
248
248
250
252
253
253
257
257
258
263
16
Sin ttulo-2
211
211
219
219
223
223
223
224
224
225
225
226
228
228
229
230
231
232
232
232
5/26/06, 10:25 AM
2.
3.
3.1.
3.2.
4.
4.1.
4.2.
4.3.
Regulacin gnica de la diferenciacin linfocitaria

Diferenciacin y maduracin de linfocitos B
Etapa antgeno-independiente
Etapa antgeno-dependiente
Diferenciacin y maduracin de linfocitos T
Migracin de los precursores de linfocitos T
Diferenciacin
Seleccin tmica
264
266
266
267
269
269
269
271
Captulo 14
REGULACIN DE LA RESPUESTA INMUNE
Prof. Dr. Ulises Vergara C., Dr. Claudio Ziga M. y Prof. Dr. Ivn Palomo G.
1.
Introduccin
2.
Regulacin de la respuesta inespecfica
2.1.
Regulacin del sistema del complemento
2.2.
Regulacin de la accin de clulas NK
3.
Regulacin de la respuesta inmune especfica
3.1.
Mecanismos inmunolgicos y no inmunolgicos de regulacin
3.2.
Delecin y anergia clonal. Tolerancia inmunolgica
3.3.
Activacin de linfocitos T supresores
3.4.
Regulacin mediante linfocitos Th1 y Th2
3.5.
Regulacin idiotpica o red idiotipo-anti-idiotipo
3.6.
Regulacin o feedback por anticuerpos y complejos inmunes
3.7.
Regulacin por Prostaglandinas
3.7.1. Prostaglandina E2 (PGE2)
3.7.2. Prostaglandina 15-d PGJ2
Captulo 15
NEUROINMUNOLOGA
Prof. Dr. Hugo Folch V., Dr. Miguel Barra M. y Prof. Dr. Patricio Esquivel S.
1.
Introduccin
2.
Interacciones entre el sistema nervioso central, sistema endocrino y sistema inmune
2.1.
Inervacin de los rganos linfoides
2.2.
Existencia de un eje Sistema nervioso central-hipfisis-sistema inmune
2.3.
El SNC tiene conocimiento de la entrada de antgeno al organismo y responde a l
2.4.
El sistema inmune produce hormonas
2.5.
El sistema inmune tiene receptores para hormonas y neuropptidos
2.6.
Otras seales derivadas del sistema inmune tienen efecto en el sistema neuroendocrino
3.
Resultante de la interaccin del sistema nervioso, sistema endocrino y el sistema inmune:
evidencias en el organismo vivo que demuestran su efecto en la respuesta inmune
3.1.
Efecto del stress en la respuesta inmune
3.2.
Depresin e inmunidad
3.3.
Efecto de los factores sociales en la respuesta inmune
3.4.
Las drogas psicoactivas alteran el funcionamiento del sistema linfoide
3.5.
Las hormonas sexuales modulan la respuesta autoinmune
4.
Algunos casos en que el sistema inmune origina cambios o trastornos en el sistema nervioso
4.1.
Efecto de los anticuerpos a nivel del sistema nervioso
4.2.
Efecto de complejos antgeno-anticuerpo en el sistema nervioso central
4.3.
Rol patognico de linfocitos T, macrfagos y citoquinas en el tejido nervioso
17
Sin ttulo-2
17
5/26/06, 10:25 AM
275
277
277
277
277
278
279
280
281
282
283
284
286
286
286
289
291
292
293
293
294
294
295
295
297
297
297
297
298
298
298
298
298
298
Captulo 16
INMUNIDAD DE MUCOSAS
Prof. Dr. Ulises Vergara C. y Prof. Dr. Ivn Palomo G.
1.
Introduccin
2.
Sistema inmune de mucosas
2.1.
Organizacin estructural
2.2.
Transporte y presentacin de antgenos
3.
Funciones efectoras de la inmunidad de mucosas
3.1.
Respuesta inmune de anticuerpos
3.2.
Respuesta inmune celular
4.
Inmunizacin a travs de mucosas
4.1.
Uso de adyuvantes
5.
Tolerancia inducida a travs de mucosas
299
Captulo 17
INMUNOLOGA DE LA REPRODUCCIN
Prof. Dra. Mnica Imarai B. y Prof. Dra. Juana Villegas M.
1.
Introduccin
2.
El sistema inmune asociado a la mucosa reproductiva
2.1.
El sistema inmune asociado a la mucosa reproductiva de la hembra
2.2.
El sistema inmune asociado a la mucosa reproductiva del macho
3.
Induccin de la respuesta inmune en la mucosa reproductiva
3.1.
Induccin de la respuesta inmune en la mucosa reproductiva de la hembra
3.2.
Respuesta inmune a las infecciones en la mucosa reproductiva de la mujer
4.
El sistema inmune local en el embarazo
4.1.
La Interfase materno fetal
4.2.
Expresin de MHC en las clulas trofoblsticas
4.3.
Las clulas NK de la decidua
4.4.
Los linfocitos T de la decidua
4.5.
Citoquinas en la preez
5.
Factores inmunolgicos que afectan la fertilidad
5.1.
Aborto espontneo recurrente de causa inexplicada
5.2.
Anticuerpos antiespermticos
311
301
302
302
304
305
305
306
307
308
309
313
314
314
316
316
316
317
318
318
318
319
319
320
320
320
321
SECCIN III: MECANISMOS EFECTORES DE LA RESPUESTA INMUNE 325

Captulo 18
SISTEMA DEL COMPLEMENTO
Prof. Dr. Arturo Ferreira V. y Prof. Dr. Julio Scharfstein
1.
Introduccin
2.
Generalidades sobre la activacin y regulacin del Sistema del Complemento
2.1.
Generacin de enlaces covalentes por parte de C3b y C4b, al reaccionar con
estructuras de las superficies atacadas por el sistema
2.2.
Las C3 y C5 convertasas de las rutas clsica y alterna son funcionalmente homlogas
3.
Ruta clsica: algunos detalles moleculares
3.1.
Unin C1
3.2.
Activacin de C4 y C2
3.3.
Convertasa de C3
3.4.
Convertasa de C5
3.5.
Mecanismos que confinan la activacin del complemento a las membranas
blanco (target) o culpables
3.6.
Rutas de las lectinas
18
Sin ttulo-2
18
5/26/06, 10:25 AM
327
329
331
335
336
337
337
338
339
340
340
340
4.
4.1.
4.2.
5.
5.1.
5.2.
5.3.
5.4.
6.
7.
Ruta alterna: algunos detalles moleculares

Activacin de la ruta alterna
Papel de la properdina
Fase terminal: generacin del complejo destructor de membranas
Generacin de C5-8
Polimerizacin de C9
Efecto funcional de la insercin del MHC en las membranas
Perspectivas futuras del estudio de la fase final de la activacin del complemento
Algunos aspectos genticos del Complemento
Complemento y enfermedad
349
Captulo 19
INMUNIDAD MEDIADA POR CLULAS
Dra. Luz Blanco P. y Prof. Dr. Javier Puente P.
1.
Introduccin
2.
Citolisis mediada por linfocitos T
2.1.
Mecanismo membranoltico
2.2.
Mecanismo dependiente de la interaccin FasL-Fas
3.
Citolisis mediada por clula NK
3.1.
Citotoxicidad mediada por clulas NK
3.2.
Receptor FcRIIIA (CD16)
4.
Mtodos de estudio del proceso citoltico
5.
Hipersensibilidad retardada (HR)
351
352
355
356
358
358
360
361
362
Captulo 20
RESPUESTA INMUNE MEDIADA POR IgE
Prof. Dr. Arnoldo Quezada L. y Dr. Edgardo Carrasco C.
1.
Introduccin
2.
Caractersticas de la IgE
3.
Mastocitos y Basfilos
4.
Receptores para IgE y liberacin de mediadores
5.
Regulacin de la sntesis de IgE
6.
Rol biolgico de la respuesta mediada por IgE
7.
Aplicaciones biomdicas
365
SECCIN IV: INMUNOLOGA CLNICA
375
Captulo 21
HIPERSENSIBILIDAD
Prof. Dr. Arnoldo Quezada L. y Dra. Ximena Norambuena R.
1.
Introduccin
2.
Clasificacin de las reacciones de hipersensibilidad
3.
Hipersensibilidad inmediata mediada por IgE (tipo I)
4.
Hipersensibilidad citotxica (tipo II)
5.
Hipersensibilidad mediada por complejos inmunes (tipo III)
6.
Hipersensibilidad retardada mediada por clulas (tipo IV)
377
Captulo 22
ANAFILAXIS
Prof. Dra. Patricia Daz A.
1.
Introduccin
2.
Fisiopatologa
387
367
367
367
368
371
372
373
379
380
381
382
383
384
389
389
19
Sin ttulo-2
341
342
344
344
344
345
346
347
347
347
19
5/26/06, 10:25 AM
2.1.
2.2.
2.3.
2.4.
3.
3.1.
3.2.
3.3.
3.4.
3.5.
3.6.
3.7.
4.
4.1.
4.2.
4.3.
5.
6.
7.
8.
Mastocitos
Degranulacin de mastocitos y basfilos
Participacin de cascadas de la inflamacin en la reaccin anafilctica y anafilactodea
Alteraciones Funcionales
Causas de anafilaxis
Frmacos
Ltex
Picaduras de himenpteros
Alimentos
Anafilaxis inducida por inmunoterapia
Anafilaxis inducida por ejercicio
Anafilaxis idioptica
Causas de reacciones anafilactodeas
Aditivos
Medios de contraste
cido acetil saliclico (AAS) y anti-inflamatorios no esteroidales (AINE)
Reacciones anafilcticas y anafilactodeas en pabellones quirrgicos
Signos y sntomas
Laboratorio
Tratamiento
Captulo 23
AUTOINMUNIDAD
Dra. Ana Mara Agar M. y Dra. Mara Anglica Marinovic M.
1.
Introduccin
2.
Formas clnicas y caractersticas comunes
3.
HLA y enfermedades autoinmunes
4.
Patogenia de las enfermedades autoinmunes
5.
Autotolerancia
5.1.
Falla de la tolerancia central del linfocito T
5.2.
Falla de la tolerancia perifrica del linfocito T
5.3.
Falla de la tolerancia del linfocito B
6.
Citoquinas y enfermedades autoinmunes
7.
Nuevos tratamientos
399
Captulo 24
ENFERMEDADES REUMTICAS
Prof. Dr. Sergio Jacobelli G. y Prof. Dr. Santiago Rivero D.
1.
Introduccin
2.
Artritis Reumatodea
2.1.
Patogenia
2.1.1. Gentica
2.1.2. Infecciones
2.1.3. Autoinmunidad
2.2.
Clnica y tratamiento
3.
Lupus eritematoso sistmico
3.1.
Patogenia
3.1.1. Factores genticos
3.1.2. Factores ambientales
3.1.3. Disregulacin del sistema inmune
3.1.4. Inflamacin y dao celular/tisular
3.2.
Clnica y tratamiento
409
401
401
403
404
404
405
405
405
406
407
411
411
412
412
413
414
416
416
416
417
417
417
419
419
20
Sin ttulo-2
389
390
393
393
394
394
394
394
394
395
395
395
395
395
395
395
396
396
397
397
20
5/26/06, 10:25 AM
Captulo 25
SNDROME ANTIFOSFOLPIDO
Prof. Dr. Ivn Palomo G., Prof. Dr. Antonio Cabral, Prof. Dra. Silvia Pierangeli
y Prof. Dr. Ricardo Forastiero V.
1.
Introduccin
2.
Antgenos y anticuerpos
2.1.
Antgenos
2.2.
Anticuerpos
3.
Mecanismos de trombosis
3.1.
Biosntesis de eicosanoides e isoeicosanoides
3.2.
Sistema antitrombtico de la protena C
3.3.
Va del factor tisular
3.4.
Sistema fibrinoltico
3.5.
Anexinas y activacin celular
3.6.
Inmunidad celular y perfil de citoquinas
3.7.
Asociacin con factores genticos de riesgo trombtico
4.
Manifestaciones clnicas
4.1.
Manifestaciones vaso-oclusivas
4.2.
Manifestaciones hemocitopnicas
4.3.
Otras manifestaciones
5.
Laboratorio
5.1.
Anticardiolipina por ELISA
5.2.
Anticoagulante Lpico
5.3.
Pruebas de laboratorio ms especficas para el diagnstico de SAF
5.4.
Qu pruebas de laboratorio se deben usar en el diagnstico de SAF?
6.
Tratamiento
425
425
425
426
427
427
428
428
428
428
429
429
429
429
430
430
430
431
432
432
432
433
Captulo 26
CITOPENIAS INMUNES
Prof. Dr. Ivn Palomo G., Prof. Dr. Jaime Pereira G. y Prof. MgCs. Marcela Vsquez R.
1.
Introduccin
2.
Anemias hemolticas inmunes
2.1.
Sistemas antignicos de los glbulos rojos
2.2.
2.2.1. Anemias hemolticas aloinmunes
2.2.2. Anemias hemolticas autoinmunes
3.
Trombocitopenias inmunes
3.1.
Sistemas antignicos de las plaquetas
3.2.
3.2.1. Trombocitopenias aloinmunes
3.2.2. Trombocitopenias autoinmunes
4.
Neutropenias inmunes
4.1.
Sistemas antignicos de los neutrfilos
4.2.
4.2.1. Neutropenias aloinmunes
4.2.2. Neutropenias autoinmunes
437
Captulo 27
GAMMAPATAS MONOCLONALES
Prof. Dra. Mireya Silva B. y Prof. Dr. Mauricio Oqueteaux T.
1.
Introduccin
2.
Estudio inmunolgico de las gammapatas monoclonales
2.1.
Pesquisa de una protena monoclonal
459
21
439
439
439
441
442
443
445
446
447
449
451
453
453
454
454
455
461
462
462
21
Sin ttulo-2
423
5/26/06, 10:25 AM
2.2.
2.3.
2.4.
2.5.
2.6.
2.7.
2.8.
3.
3.1.
3.2.
4.
4.1.
4.2.
5.
5.1.
5.2.
5.3.
5.4.
5.5.
5.6.
5.7.
5.8.
5.9.
6.
7.
7.1.
7.2.
7.3.
7.4.
8.
Identificacin de una protena monoclonal

Cuantificacin de inmunoglobulinas
Viscosidad srica
Beta-2 microglobulina
Protena C reactiva
Interleuquina-6
Estudios inmunolgicos en orina
Gammapata monoclonal de significado incierto
Aspectos generales
Evolucin de las MGUS en el tiempo
Mieloma mltiple
Manifestaciones clnicas
Pronstico
Variedades infrecuentes de mieloma mltiple y otras gammapatas
Mieloma "indolente"
Leucemia de clulas plasmticas
Mieloma osteoesclertico
Plasmocitoma extramedular
Plasmocitoma seo solitario
Macroglobulinemia de Waldenstrm (MW)
Enfermedad de cadenas livianas
Amiloidosis primaria
Enfermedad por cadenas pesadas
Diagnstico diferencial entre MGUS y MM
Patogenia
Papel de la IL-6 y va de la ciclina D1
Genes supresores de tumores
Apoptosis de CPs
Papel del estroma en las discrasias de CPs
Tratamiento
Captulo 28
ENFERMEDADES ORALES DE ORIGEN INMUNOLGICO
Prof. Dr. Benjamn Martnez R.
1.
Introduccin
2.
Reacciones de hipersensibilidad orales
3.
Manifestaciones orales de inmunodeficiencias
3.1.
Candidiasis oral en infeccin por VIH
3.2.
Leucoplasia pilosa
3.3.
Sarcoma de Kaposi
4.
Enfermedades autoinmunes orales
4.1.
Sndrome de Sjgren
4.2.
lcera oral recurrente (aftas)
477
Captulo 29
OTRAS ENFERMEDADES INMUNOMEDIADAS
Prof. Dra.Cecilia Seplveda C.
1.
Introduccin
2.
Algunas enfermedades inmunomediadas
2.1.
2.2.
Artritis reumatoidea
2.3.
Enfermedades mediadas por anticuerpos
2.4.
Otras enfermedades
489
479
479
480
480
482
482
482
482
484
491
491
491
492
492
494
22
Sin ttulo-2
463
465
465
465
465
466
466
466
466
466
467
467
468
469
469
470
470
470
470
470
470
471
471
471
472
472
473
473
473
473
22
5/26/06, 10:25 AM
Captulo 30
INMUNODEFICIENCIAS PRIMARIAS
Prof. Dra. Mnica Cornejo De L. y Prof. Dra. Marta Zelazko de Ch.
1.
Introduccin
2.
Inmunodeficiencias primarias
2.1.
Aspectos genticos de las IDP
2.2.
Estudios de laboratorio inmunolgico para el diagnstico de IDP
2.3.
Caractersticas de las IDP
2.3.1. Defectos predominantemente de anticuerpos
2.3.2. Defectos combinados de clulas T y B
2.3.3. Inmunodeficiencias asociadas a otros defectos
2.3.4. Defectos congnitos de inmunidad natural
3.
Tratamiento de las inmunodeficiencias congnitas
495
Captulo 31
INMUNODEFICIENCIAS SECUNDARIAS
Dra. Mara Antonieta Guzmn M. y Prof. Dra. Cecilia Seplveda C.
1.
Introduccin
2.
Infeccin por VIH y SIDA
2.1.
Magnitud del problema
2.2.
Caractersticas del virus
2.3.
Progresin de la infeccin por VIH-1
2.4.
Ingreso al organismo
2.5.
Respuesta inmune anti-VIH
2.6.
Diagnstico de laboratorio
2.7.
Tratamiento
3.
Sistema inmune fetal y neonatal
3.1.
Inmunidad celular
3.2.
Inmunidad humoral
3.3.
Inmunidad innata
4.
Envejecimiento y sistema inmune
4.1.
Inmunidad celular
4.2.
Inmunidad humoral
5.
Inmunidad y nutricin
5.1.
Inmunidad celular
5.2.
Dficit de nutrientes especficos
6.
Inmunodeficiencia inducida por ciruga y trauma
7.
Inmunodeficiencia secundaria a enfermedades infecciosas
7.1.
Inmunodeficiencia secundaria a infecciones virales
7.2.
Inmunodeficiencia secundaria a infecciones bacterianas y fngicas
7.3.
Inmunodeficiencia secundaria a infecciones parasitarias
8.
Inmunodeficiencia secundaria a enfermedades infiltrativas y tumores
8.1.
Evasin de la respuesta inmune por tumores
8.2.
Defectos inmunolgicos en tumores
9.
Inmunodeficiencia secundaria a terapia inmunosupresora
9.1.
Mecanismos de accin
9.2.
Impacto de la inmunodeficiencia asociada a inmunosupresora
511
Captulo 32
INMUNIDAD FRENTE A BACTERIAS
Prof. Dra. Eva Burger, Prof. Dra. Edilia Andrews G. y Prof. Dr. Heriberto Fernndez J.
1.
Introduccin
23
Sin ttulo-2
23
5/26/06, 10:25 AM
497
499
499
500
501
501
503
507
508
509
513
513
514
514
517
517
518
530
530
519
519
519
519
520
520
521
521
522
522
522
523
523
524
525
525
525
526
526
526
529
531
533
2.
2.1.
2.2.
2.2.1.
2.2.2.
2.3.
2.3.1.
2.3.2.
2.3.3.
2.3.4.
3.
3.1.
3.2.
3.2.1.
3.2.2.
3.3.
3.3.1.
3.3.2.
3.3.3.
3.3.4.
3.3.5.
3.3.6.
4.
5.
5.1.
5.2.
5.2.1.
5.2.2.
5.2.3.
5.2.4.
Inmunidad frente a bacterias extracelulares

Caractersticas generales de las bacterias extracelulares
Mecanismos de inmunidad natural
Mecanismos comunes a bacterias extra e intracelulares
Inmunidad natural a bacterias extracelulares
Inmunidad adquirida a bacterias extracelulares
Neutralizacin de toxinas o enzimas bacterianas por anticuerpos
Efectos directos del sistema del complemento
Efecto conjunto de anticuerpo, complemento y lisozima
Opsonizacin y facilitacin de la fagocitosis
Inmunidad frente a bacterias intracelulares
Caractersticas generales de las bacterias intracelulares
Inmunidad natural a bacterias intracelulares
Clulas NK
Leucocitos polimorfonucleares neutrfilos
Inmunidad adquirida a bacterias intracelulares
Macrfagos activados
Linfocitos T
Efecto conjunto de linfocitos T CD4+ y CD8+
Linfocitos T-
Citoquinas
Granulomas
Anlisis comparativo del desarrollo de inmunidad en infecciones por bacterias
extracelulares e intracelulares
Estrategias de intervencin inmune en relacin a bacterias intracelulares
Tipos de vacunas para bacterias intracelulares en uso
Desarrollo de nuevas vacunas
Identificacin de antgenos protectores
Cepas vaccinales atenuadas y recombinantes
Vacunas de subunidades y empleo de adyuvantes
Vacunas DNA
Captulo 33
INMUNIDAD FRENTE A HONGOS
Prof. Dra. Eva Burger, Prof. Dr. Luiz Zaror C., y Prof. Dr. Heriberto Fernndez J.
1.
Introduccin
1.1.
Consideraciones histricas
1.2.
Caractersticas generales de algunos hongos oportunistas
1.3.
Caractersticas generales de algunos hongos patognicos
1.4.
Caractersticas generales de los dermatofitos
1.5.
Conceptos sobre inmunidad a hongos patognicos
2.
Inmunidad natural
2.1.
Factores hormonales
2.2.
Concentracin de hierro
2.3.
Sistema del complemento
2.4.
Clulas natural killer (NK)
2.5.
Leucocitos polimorfonucleares neutrfilos (PMN)
2.6.
Macrfagos
3.
Inmunidad humoral a hongos
3.1.
Papel de la inmunidad humoral
3.2.
Mecanismos protectores de la inmunidad humoral
4.
Inmunidad celular a hongos
4.1.
Macrfagos
24
Sin ttulo-2
24
5/26/06, 10:25 AM
533
533
534
534
535
536
536
536
536
536
537
537
537
537
538
538
538
538
539
539
539
540
540
540
541
541
541
541
541
542
545
547
547
547
548
548
549
549
549
549
550
550
550
550
551
551
551
552
552
4.2.
4.3.
4.4.
5.
5.1.
5.2.
Linfocitos T
Citoquinas
Granulomas
Mecanismos de inmunidad protectora
Mecanismo principal
Otros mecanismos
522
553
553
554
554
555
557
Captulo 34
RESPUESTA INMUNE FRENTE A VIRUS
Prof. Dr. Jos M. Ojeda F. y Prof. Dr. Jorge A. Fernndez V.
1.
Introduccin
2.
Infeccin viral
2.1.
Interaccin virus-husped
3.
Respuesta inmune en infecciones virales
3.1.
Inmunidad antiviral natural
3.1.1. Produccin de IFN tipo I y otras citoquinas
3.1.2. Clulas NK
3.1.3. Activacin del complemento y fagocitosis
3.2.
Inmunidad antiviral especfica
3.2.1. Inmunidad humoral
3.2.2. Inmunidad celular
3.3.
Evasin de la respuesta inmune por virus
3.3.1. Persistencia intracelular
3.3.2. Variacin antignica
3.3.3. Interaccin con componentes del sistema inmune
3.3.4. Interferencia con la presentacin antignica
3.3.5. Simulacin molecular
3.3.6. Inmunosupresin
559
560
560
560
561
561
561
561
562
562
562
564
564
564
565
565
566
566
567
Captulo 35
INMUNIDAD FRENTE A PARSITOS
Prof. Dr.Ulises Vergara C. y Prof. Dr. Jorge Gonzlez C.
1.
Introduccin
2.
Respuesta inmune frente a protozoos
2.1.
Desarrollo de inmunidad protectora
2.2.
Activacin de macrfagos infectados
2.3.
Activacin de linfocitos T CD8+
2.4.
Rol de los anticuerpos en el control de protozoos
3.
Respuesta inmune frente a nemtodos intestinales
3.1.
Aspectos generales de la respuesta inmune
3.1.1. Enterocitos
3.1.2. Inmunoglobulinas
3.1.3. Linfocitos
3.1.4. Clulas mieloides
3.2.
Respuesta Th2 y proteccin inmunolgica
3.2.1. Mecanismos efectores y resistencia a la infeccin
3.3.
Respuesta Th1 y susceptibilidad a la infeccin
4.
Respuesta inmune frente a tremtodos intestinales
4.1.
Inmunidad protectora frente a Schistosoma
4.1.1. Eosinfilos
4.1.2. Macrfagos
4.2.
Inmunidad en la rata
4.3.
Inmunidad en el ratn
4.4.
Interferencia con la inmunidad
569
570
572
574
575
575
576
577
577
577
578
578
578
579
579
580
581
582
582
583
583
584
25
Sin ttulo-2
25
5/26/06, 10:25 AM
Captulo 36
VACUNAS
Prof. Dr. Ulises Vergara C. y Prof. Dr. Rosario Billetta
1.
Introduccin
2.
Vacunas naturales o tradicionales
3.
Vacunas recombinantes
4.
Vacunas anti-idiotpicas
5.
Vacunas sintticas
6.
Vacunas de DNA
7.
Vacunas Genmicas
8.
Adyuvantes, inmunomoduladores e inmunogenicidad
587
Captulo 37
MECANISMOS DE INMUNIDAD ANTITUMORAL
Prof. Dr. Flavio Salazar O. y Prof. Dr. Javier Puente P.
1.
Introduccin
2.
Defensa inmunolgica contra el cncer
2.1.
La hiptesis de vigilancia inmunolgica antitumoral
2.2.
Componentes de la respuesta inmune antitumoral
2.2.1. Respuesta inmunolgica humoral
2.2.2. Respuesta inmunolgica celular
3.
Antgenos asociados a tumores
3.1.
Clasificacin de AAT reconocidos por LT
4.
Estrategias tumorales de evasin inmunolgica
4.1.
Disminucin de la expansin de las molculas MHC
4.2.
Factores inmunosupresores producidos por los tumores
5.
Terapia inmunolgica contra el cncer
5.1.
Anticuerpos monoclonales
5.2.
Terapia biolgica contra el cncer
5.2.1. Utilizacin de citoquinas
5.2.2. Terapia celular adoptiva
5.3.
Inmunizacin activa contra tumores
605
Captulo 38
MECANISMOS INMUNOLGICOS DEL RECHAZO DE ALOINJERTOS
Prof. Dra. Cecilia Seplveda C.
1.
Introduccin
2.
Rechazo de aloinjertos
2.1.
Presentacin directa de aloantgenos
2.2.
Presentacin indirecta de aloantgenos
2.3.
Clulas que participan en el rechazo
3.
Mecanismos efectores del rechazo
3.1
Rechazo hiperagudo
3.2.
Rechazo agudo
3.3.
Rechazo crnico
4.
Prevencin y tratamiento del rechazo
4.1
Inmunosupresin
4.2.
Seleccin de donantes
4.3.
Induccin de tolerancia
619
587
590
593
596
596
598
600
600
607
608
608
608
609
609
610
610
610
610
613
613
613
614
615
615
617
26
Sin ttulo-2
26
5/26/06, 10:25 AM
621
621
622
622
623
623
623
624
624
624
624
625
625
Captulo 39
INMUNOMODULADORES
Prof. Dra. Cecilia Seplveda C. y Dra. Mara Antonieta Guzmn M.
1.
Introduccin
2.
Principales Inmunomoduladores
2.1.
Antiproliferativos
2.2.
Antagonistas de las Inmunofilinas
2.3.
Glucocorticoides
2.4.
Agentes biolgicos
2.5.
Citoquinas
2.6.
Trasplante de mdula sea
2.7.
Clulas autlogas modificadas
2.8.
Isoprinosine
3.
Efectos Adversos de los Inmunomoduladores
SECCIN V: MTODOS INMUNOLGICOS Y DE BIOLOGA

MOLECULAR
635
640
641
641
641
641
641
642
642
643
643
643
643
644
644
645
645
646
647
647
647
648
648
648
648
648
648
648
648
649
650
650
27
27
629
629
629
630
631
631
632
633
633
633
633
637
Captulo 40
MTODOS INMUNOQUMICOS
Dr. Darwins Castillo A. y BQ. Carolina Valenzuela B.
1.
Introduccin
2.
Inmunoanlisis
2.1.
Inmunoanlisis con reactivos no marcados
2.1.1. Reaccin de precipitacin
2.1.1.1. Reaccin de precipitacin en medio lquido
a) Precipitacin en tubo
b) Floculacin
c) Turbidimetra
d) Nefelometra
e) Precipitacin de complejos inmunes solubles
2.1.1.2. Reaccin de precipitacin en gel
a) Inmunodifusin doble
b) Inmunodifusin radial
c) Inmunoelectroforesis
d) Inmunofijacin
e) Contrainmunoelectroforesis
f) Rocket inmunoelectroforesis
g) Inmunoelectroforesis cruzada o bidimensional de Laurell
2.1.2. Reaccin de aglutinacin
a) Aglutinacin directa
b) Aglutinacin indirecta
c) Aglutinacin pasiva
2.1.3. Reaccin con participacin del complemento
a) Fijacin del complemento
b) Actividad hemoltica del complemento
2.2.
Inmunoanlisis con reactivos marcados
2.2.1. Inmunoanlisis fluorescente
a) Microscopa inmunofluorescente
b) Inmunoanlisis de fluorescencia polarizada
c) Inmunoanlisis de fluorescencia unida a enzima
d) Citometra de flujo
Sin ttulo-2
627
5/26/06, 10:25 AM
2.2.2.
a)
b)
c)
2.2.3.
a)
b)
c)
2.2.4.
2.2.5.
Enzimainmunoanlisis (EIA)
EIA homogneo
EIA heterogneo
Electroinmunotransferencia o Western blot o Immunoblotting
Radioinmunoanlisis (RIA)
RIA en fase soluble
RIA en fase slida
Deteccin inmunorradiomtrica para antgeno
Quimiluminiscencia
Bioluminiscencia
650
650
651
651
652
652
652
652
652
652
Captulo 41
655
MTODOS DE ESTUDIO DE LA INMUNIDAD CELULAR
Prof. Dr. Jorge Gonzlez C. y Dra. Pilar Vega C.
1.
Introduccin
657
2.
Preparacin y aislamiento de diferentes poblaciones celulares
658
2.1.
Mtodos de purificacin tradicionales
658
2.2.
Separacin inmunomagntica
659
3.
Estudio de la respuesta inmune celular especfica
660
3.1.
Estudio de las subpoblaciones de linfocitos
660
3.2.
Estudio de las funciones de inmunidad celular especfica
662
3.3.
Estudio de la sntesis de citoquinas y sus receptores
670
3.4.
DNA microarrays
675
3.5.
Pruebas para evaluar reacciones de hipersensibilidad retardada (RHR)
676
3.6.
Estudios de la especificidad de clulas T
676
3.7.
Deteccin de clulas T supresoras
677
4.
Estudio de la inmunidad celular inespecfica
678
4.1.
Ensayos funcionales de neutrfilos
678
4.2.
Ensayos funcionales de eosinfilos
679
4.3.
Funciones de monocitos y macrfagos
679
5.
Evaluacin de laboratorios del paciente infectado con el virus de la inmunodeficiencia humana.
Un modelo del estudio de las deficiencias en la respuesta celular
682
5.1.
Estudio fenotpico de linfocitos
682
5.2.
Estudio de la respuesta proliferativa
683
5.3.
Estudio de la respuesta citotxica
683
5.4.
Evaluacin de los niveles de citoquinas y subpoblaciones de linfocitos T
684
Captulo 42
LABORATORIO DE HISTOCOMPATIBILIDAD Y TRASPLANTE DE RGANOS
Dra. Susana Elgueta M., BQ. Alejandra Arenas C. y Prof. Dra. Cristina Navarrete
1.
Introduccin
2.
Nomenclatura HLA
2.1.
Herencia
3.
Tipificacin HLA
3.1.
Tcnica serolgica
3.2.
Tcnica celular
3.3.
Tcnica molecular
4.
Anticuerpos HLA
4.1.
Anticuerpos reactivos con panel
4.2.
Crossmatch
5.
Requerimientos de histocompatibilidad para trasplante
6.
Otras aplicaciones de la tipificacin HLA
28
Sin ttulo-2
28
5/26/06, 10:25 AM
685
687
689
690
691
691
692
692
693
693
694
695
696
Captulo 43
CITOMETRA DE FLUJO: PRINCIPIOS BSICOS Y APLICACIONES
Tc. Qum. Valeska Simon Z. y Prof. Dra. Mara Rosa Bono
1.
Introduccin
2.
Principios generales
2.1.
Sistemas de fluidos
2.2.
Sistema ptico
2.3.
Sistema electrnico
2.4.
Reactivos para citometra de flujo
3.
Aplicaciones de la citometra de flujo
3.1.
Determinacin de poblaciones celulares
3.2.
Fenotipificacin de neoplasias hematolgicas
3.2.1. Fenotipificacin de leucemias
3.2.2. Fenotipificacin de linfomas
3.3.
Enfermedad de Hodgkin
3.4.
3.5.
Anlisis de DNA y ciclo celular
3.6.
Anlisis de enfermedad residual mnima
699
Captulo 44
ANTICUERPOS MONOCLONALES
Prof. Dra. Mara Ins Becker C. y Prof. Dr. Alfredo E. De Ioannes I.
1.
Introduccin
2.
Fundamentos del desarrollo de hibridomas
2.1.
Mielomas
2.2.
Fusin celular
2.3.
Medio de seleccin
3.
Etapas de la produccin de hibridomas murinos
3.1.
Inmunizacin
3.2.
Fusin
3.3.
Seleccin y crecimiento
3.4.
Subclonacin y congelacin
3.5.
Cultivo masivo
4.
Anticuerpos monoclonales versus anticuerpos policlonales
4.1.
Especificidad
4.2.
Avidez y afinidad
5.
Aplicaciones de los anticuerpos monoclonales
5.1.
Investigacin bsica
5.2.
Medicina
5.3.
Biotecnologa
6.
Otros tipos de hibridomas
6.1.
Heterohibridomas
6.2.
Hibridomas humanos
719
Captulo 45
MTODOS FUNDAMENTALES DE BIOLOGA MOLECULAR
Prof. Dr. Claudio Vsquez G. y Prof. Dr. Enrique Gonzlez V.
1.
Introduccin
2.
Bases de la Biologa Molecular
2.1.
El DNA es el material gentico
2.2.
Componentes del DNA
2.3.
Estructura del DNA
3.
Las nuevas tecnologas
737
29
Sin ttulo-2
29
5/26/06, 10:25 AM
701
701
702
703
703
704
705
705
708
708
710
713
713
714
715
722
722
722
723
723
724
724
725
726
727
727
727
727
729
729
729
730
731
731
731
732
739
739
740
740
741
741
3.1.
3.2.
3.3.
3.4.
3.5.
3.6.
3.7.
4.
4.1.
4.2.
4.3.
5.
5.1.
5.2.
5.3.
5.4.
Endonucleasas de restriccin
Clonamiento del DNA
Transferencia de Southern
Transformacin de clulas
Secuenciacin del DNA
Reaccin de la polimerasa en cadena
Animales transgnicos y knock out de genes
La expresin gnica en organismos eucariticos
Estructura de los genes eucariticos
El proceso de expresin gnica y sus etapas
La expresin diferencial de genes y su regulacin
Mtodos de anlisis de la expresin gnica
Hibridacin Northern
Reaccin de la polimerasa en cadena acoplada a la reaccin de la transcriptasa
reversa (RT-PCR)
Anlisis del perfil transcripcional mediante el mtodo de differential display de mRNAs.
Hibridacin sustractiva
753
753
755
Captulo 46
GRUPOS DE DIFERENCIACIN ANTIGNICA
Prof. Dr. Ivn Palomo G., Prof. Dr. Flavio Carrin A. y Prof. Dr. Cristin Rodrguez G.
1.
Introduccin
2.
Estructura de los antgenos de membrana
2.1.
Protenas de transmembrana tipo I
2.2.
Protenas de transmembrana tipo II
2.3.
Protenas de transmembrana tipo III
3.
Molculas CD asociadas a lneas celulares
3.1.
Molculas CD expresadas principalmente en "stem cell"
3.2.
Molculas CD expresadas principalmente en clulas B
3.3.
Molculas CD expresadas principalmente en clulas T
3.4.
Molculas CD expresadas principalmente en clulas NK
3.5.
Molculas CD expresadas principalmente en granulocitos
3.6.
Molculas CD expresadas principalmente en monocitos-macrfagos
3.7.
Molculas CD expresadas principalmente en plaquetas
4.
Familias de molculas CD
5.
Algunas aplicaciones de la nomenclatura CD en Inmunologa
757
GLOSARIO
785
NDICE ALFABTICO GENERAL DE MATERIAS
801
30
Sin ttulo-2
742
742
743
743
744
745
746
747
747
748
749
752
752
30
5/26/06, 10:25 AM
759
775
775
775
776
777
777
777
778
779
780
780
780
781
781
PREFACIO
Nuestras primeras palabras queremos que sean para dedicar un homenaje pstumo a Csar Milstein, quien junto a George Khler, en la dcada del setenta, desarrollaron la metodologa para obtener anticuerpos monoclonales. Tal importancia cientfica represent su aporte, que recibieron el Premio Nobel en 1984 (ver captulo 2). El
Dr. Milstein, naci el 8 de octubre de 1927 (Baha Blanca, Argentina) y falleci a
comienzos del presente ao. Despus de obtener el Doctorado en Qumica en la Universidad de Buenos Aires (1957), obtuvo el grado de PhD en la Universidad de
Cambridge, Inglaterra, institucin en la que trabajaba cuando recibi el mximo premio cientfico. Su conferencia (Nobel Lecture, 8 de diciembre, 1984) se titul From
the structure of antibodies to the diversification of the immune response. Dada la
importancia de esta herramienta en el estudio molecular de diversas macromolculas
y que su aplicacin se realiza tanto en ciencias bsicas como en clnica, dedicamos un
captulo del libro a la descripcin de los anticuerpos monoclonales (captulo 44).
Por otra parte, en las personas de Walter Gilbert, Francis Collins y J. Craig
Venter, queremos expresar nuestro reconocimiento a todos los cientficos que participaron en uno de los ms importantes avances de la biologa moderna, nos referimos a
la decodificacin del genoma humano. Mientras trabajbamos en la edicin de este
libro: Fundamentos de Inmunologa Bsica y Clnica, la noticia recorri el mundo, a
mediados de 2000, primero, y luego a comienzos de 2001. Alrededor de 50 aos despus que James Watson y Francis Crick publicaran en Nature (Abril de 1953) la estructura del DNA, dos grupos de investigadores (del Proyecto Genoma Humano y de
una compaa privada), publicaron, en febrero de 2001, en Nature y Science, respectivamente, la informacin sobre el genoma humano. Describieron que los humanos
tenemos alrededor de 30.000 genes, nmero significativamente menor de los, aproximadamente, 80.000 que se esperaba. Deseamos que el nuevo conocimiento que se
generar en los prximos aos, a partir de este significativo avance cientfico, sea
utilizado en la bsqueda de terapias para las casi cinco mil enfermedades genticas
conocidas y en el tratamiento del cncer.
Adicionalmente, queremos expresar en estas lneas nuestro reconocimiento a los
inmunlogos, ex-acadmicos de la Universidad de Chile, Dra. Olga Pizarro y Dr. Tulio
31
Sin ttulo-2
31
5/26/06, 10:25 AM
Pizzi, por sus contribuciones a la inmunologa, en el conocimiento de la inmunogentica

H2, y por su labor en la formacin de especialistas en Inmunologa Clnica y los aportes en el mbito de la Enfermedad de Chagas, respectivamente.
El libro Fundamentos de Inmunologa (Julio de 1998, 33 captulos) represent
un aporte significativo a la enseanza de la Inmunologa moderna en Chile. El respaldo del Comit Editorial de la Editorial de la Universidad de Talca, de los inmunlogos,
profesores de Inmunologa y de los alumnos de pre y postgrado nos compromete a
entregar un texto de calidad internacional y que pueda ser utilizado en Chile como
tambin en otros pases de lengua espaola.
Este texto cuenta con 46 captulos, estructurados en cinco secciones: En la seccin I, Generalidades sobre inmunidad, entre otros aspectos se incluye el captulo
Introduccin a la Inmunologa: las bases biolgicas de la individualidad celular,
escrito por el Dr. Gustavo Hoecker, destacado Inmunlogo y Premio Nacional de Ciencias; adems en la seccin hay un captulo dedicado a las clulas y rganos del sistema inmune. La seccin II, Especificidad de la respuesta inmune, trata sobre molculas del sistema inmune, como por ejemplo las inmunoglobulinas, los receptores de
clulas T, Complejo Principal de Histocompatibilidad y las citoquinas. La seccin III,
Mecanismos efectores de la respuesta inmune, principalmente est dedicada al sistema del complemento y a la citotoxicidad mediada por clulas. La seccin IV,
Inmunologa clnica, se refiere a las enfermedades que presentan un mecanismo
patognico de tipo inmune. Finalmente la seccin V, Mtodos inmunolgicos y de
biologa molecular, presenta los principios de los mtodos inmunoqumicos y de inmunidad celular, y de biologa molecular.
Salvo excepciones, los captulos estn escritos por dos o ms autores, lo que
garantiza una mayor calidad al contenido. Participan 64 inmunlogos; adems de
destacados inmunlogos chilenos participaron siete inmunlogos de universidades extranjeros (Estados Unidos, Inglaterra, Mxico, Brasil y Argentina), lo cual es una fortaleza que destacamos.
Por tratarse de un texto docente, con el propsito de facilitar la lectura, en los
captulos se han numerado los subttulos, y en cada uno de ellos se ha incluido, al
comienzo, un ndice de captulo y Resumen; y al final las Lecturas Sugeridas. Para
cerrar el libro se incluye un Glosario que comprende los trminos inmunolgicos ms
usados y un ndice alfabtico general de materias.
En los ltimos aos se han realizado importantes avances en el conocimiento del
Sistema Inmune y en las aplicaciones de la nueva informacin. Ello justifica que, actualmente, los Planes de Estudios de las carreras de la salud y biolgicas en general,
incluyan Inmunologa como asignatura independiente. Siendo este un libro docente,
est dirigido a alumnos de carreras que, en sus Planes de Estudios, tienen esta asignatura: Medicina, Odontologa, Medicina Veterinaria, Bioqumica, Qumica y Farma-
32
Sin ttulo-2
32
5/26/06, 10:25 AM
cia, Tecnologa Mdica, Biotecnologa y Licenciatura en Biologa, entre otras. Creemos que el libro tambin ser de gran utilidad para alumnos de postgrado y profesionales que se interesen en esta disciplina.
Si bien el texto est escrito en castellano, se usarn algunos trminos y siglas en
ingls por lo difundido de su uso, como por ejemplo LT helper, TCR, entre otros.
Agradecemos a las personas que colaboraron en la edicin del libro; a la correctora de textos, Profesora Mara Cecilia Tapia Castro, por el inters puesto en esta obra
como tambin por su excelente trabajo profesional; a la diseadora grfica Marcela
Albornoz D. y al BQ Marcos Prez C., quien realiz las figuras del libro; a la secretaria Hayde Alvarez A., nuestro reconocimiento por su destacada colaboracin en el
trabajo de preedicin.
Agradecemos a las instituciones que han respaldado nuestro trabajo con su patrocinio: la International Union of Immunology Societies (IUIS) en la persona de la
Prof. Dr. Genevieve Milon, Chairperson IUIS Education Committee; la Asociacin
Latinoamericana de Inmunologa (ALAI); la Sociedad Chilena de Inmunologa
(SOCHIN); y la Sociedad Chilena de Alergia e Inmunologa. Tambin agradecemos a
la Universidad Favaloro (Argentina), Universidad de Chile (Facultades de Medicina,
de Ciencias, de Ciencias Qumicas y Farmacuticas, de Ciencias Veterinarias y Pecuarias), Pontificia Universidad Catlica de Chile (Facultad de Ciencias Biolgicas),
Universidad Austral de Chile (Facultad de Medicina), Universidad de Valparaso (Facultad de Medicina), Universidad de Santiago de Chile (Facultad de Qumica y Biologa), Universidad de la Frontera (Facultad de Medicina), Universidad de Antofagasta
(Facultad de Ciencias de la Salud), Universidad de Talca (Facultad de Ciencias de la
Salud), Universidad Mayor (Facultad de Odontologa), Universidad de Los Andes (Facultad de Medicina) e Instituto de Salud Pblica de Chile.
Damos las gracias a la Universidad de Talca, en la persona de su Rector, Prof.
Dr. lvaro Rojas Marn, y a la Editorial de esta institucin en la persona del Vicerrector
de Extensin y Comunicaciones, Prof. Dr. Pedro Zamorano Prez, por el apoyo otorgado durante el desarrollo de esta obra.
Finalmente, expresamos nuestro deseo que este libro sea de utilidad e inters para
alumnos y profesionales que quieran conocer algo ms sobre las clulas, molculas y mecanismos del sistema inmune, tanto en situaciones de normalidad como en enfermedad.
Dr. Ivn Palomo Gonzlez
Dr. Arturo Ferreira Vigoroux
Dra. Cecilia Seplveda Carvajal
Dr. Mario Rosemblatt Silber
Dr. Ulises Vergara Castillo
Editores
33
Sin ttulo-2
33
5/26/06, 10:25 AM
34
Sin ttulo-2
34
5/26/06, 10:25 AM
PRLOGO
Al calor de las nuevas tecnologas de biologa celular y molecular, y de la reciente aparicin de la genmica, la protemica y la bioinformtica, la Inmunologa
moderna se desarrolla de forma vertiginosa. Se produce un volumen colosal de nuevos
conocimientos, algunos de los cuales echan por tierra nuestros dogmas ms repetidos, y los nuevos descubrimientos y conceptos sobre cmo opera el sistema inmune se
convierten rpidamente en productos aplicables en la prevencin y en el tratamiento
de las enfermedades, gracias a la Biotecnologa. Es este el contexto donde se mueve la
enseanza de la Inmunologa de estos tiempos, que debe combinar el estmulo al instinto de experimentacin y el alto rigor acadmico, con la idea de que es importante
convertir los conocimientos en objetos de impacto real para nuestras sociedades.
Con un extenso contenido formado por cinco secciones y cuarenta y seis captulos, Fundamentos de Inmunologa Bsica y Clnica, descolla por su cuidadosa elaboracin, resultado del trabajo de un grupo importante de inmunlogos. Las generalidades de la Inmunologa, los aspectos ms especficos de la respuesta inmune, la
Inmunologa Clnica y algunos de los mtodos ms empleados para la aplicacin de
estos conocimientos, o para su descubrimiento, forman parte de un texto que est llamado a jugar un rol importante en la docencia de esta ciencia.
Slo me queda felicitar a los autores de este excelente texto y conminar a sus
lectores a enfrentar con esfuerzo y dedicacin los nuevos retos que impone el desarrollo de la Inmunologa en Latinoamrica para experimentadores y clnicos, ms ahora
cuando tenemos el honor y el compromiso de organizar el Congreso Mundial de
Inmunologa del 2007, cuya sede fue recientemente concedida a Ro de Janeiro.
Jorge Victor Gavilondo Cowley, D.Sc.
Presidente de la Asociacin Latinoamericana de Inmunologa
(ALAI) 2000-2002
35
Sin ttulo-2
35
5/26/06, 10:25 AM
36
Sin ttulo-2
36
5/26/06, 10:25 AM
Fundamentos de Inmunologa Bsica y Clnica

Editorial Universidad de Talca, 2002
SECCIN
GENERALIDADES SOBRE INMUNIDAD
37
Sin ttulo-2
37
5/26/06, 10:25 AM
38
Sin ttulo-2
38
5/26/06, 10:25 AM

Captulo 1
INTRODUCCIN A LA INMUNOLOGA: LAS BASES
BIOLGICAS DE LA INDIVIDUALIDAD CELULAR
Gustavo Hoecker S.*
* Premio Nacional de Ciencias, 1989.
39
Sin ttulo-2
39
5/26/06, 10:25 AM
40
Sin ttulo-2
40
5/26/06, 10:25 AM
a las inmunoglobulinas de los animales inyectados.

Deseo sealar en un parntesis, que
Landsteiner era, y fue hasta su muerte, un
anatomopatlogo que hizo autopsias todos los das
desde las 6 a las 8 de la maana. De ah, suba a su
modesto laboratorio para leer, hacer experimentos,
pensar y describir sus resultados. Ambos, Ehrlich
y Landsteiner, fueron Premios Nobel y son el
origen de la inmunologa humoral clsica y sus
extensos descubrimientos acerca del origen y
causas de casi todas las enfermedades infecciosas,
y de las aplicaciones a la transfusin sangunea.
Landsteiner mismo fue el descubridor de la mayor
parte de los antgenos mayores de los glbulos
rojos humanos (ABO y Rh).
El continuo y rpido progreso de la
inmunologa demostr que unas clulas
insignificantes, pero muy abundantes en el
organismo (aproximadamente un dcimo del peso
total), los linfocitos, eran responsables de la
produccin de las inmunoglobulinas: los linfocitos
B. Esta era una clara indicacin de una extensa
heterogeneidad celular, inaparente a la inspeccin
microscpica. Exista, tambin, una inmunidad
celular.
La simple observacin permiti ver que al
comienzo de las infecciones y en los primeros
cinco das, los organismos se defendan de los
agentes infecciosos y parasitarios. Exista una
inmunidad natural. Los elementos celulares
centrales en esta inmunidad eran los macrfagos
y a nivel humoral, una serie de diferentes
substancias que eran activadas o existan
naturalmente en el suero (alexinas, substancia A,
complemento, etc.). Debemos a Metchnikoff, un
bilogo general, el descubrimiento de esta fraccin
celular fundamental de la inmunidad tanto natural
como inducida.
Establecida en los primeros 50 aos del siglo
pasado las bases de la inmunidad humoral y su
estructuracin gentica, se expandi una cantidad
enorme de investigaciones acerca de la
heterogeneidad de los linfocitos. Primero se
descubri que la respuesta humoral era el resultado
de la multiplicacin clonal de un escaso nmero
de linfocitos (Jerne, 1952) portadores de
receptores especficos para una porcin menor,
aproximadamente 10 a 12 aminocidos, de la
El avance sorprendente de la ciencia y la

tecnologa ha adquirido tal velocidad que, por una
parte, su ltimo fruto, la biologa molecular ha
conducido a identificar las molculas responsables
de la herencia como sus productos de traduccin,
las protenas, y se estn visualizando los caminos
complejos por los cuales discurren todas las
funciones vitales.
Los seres vivientes desde las bacterias hasta
los elefantes, incluido el hombre, se caracterizan
por una individualidad podra decirse total o sea
que no existen dos seres exactamente iguales. De
esto se infiere que otra caracterstica mayor de las
especies vivientes es la heterogeneidad. Esta
resulta de la recombinacin, tanto de los factores
hereditarios, los genes, como de los factores
ambientales que comparten los miembros de una
misma especie.
En el segundo captulo de este libro, que
detalla el desarrollo histrico de nuestra disciplina,
vern que el avance del conocimiento ha sido el
resultado de la prctica de la crianza de plantas y
de la observacin de las propiedades y
enfermedades en todos los seres vivos, algunos
de los cuales moran y otros se recuperaban y
sobrevivan. Se dedujo que la produccin y la
resistencia a las enfermedades, dependan de la
individualidad de cada miembro del grupo
biolgico, lo que llev a la seleccin artificial de
las especies domsticas. Independientemente de
sta, la seleccin natural, al azar, trabaja sobre
todos los seres vivientes.
La inmunologa en su estado presente, podra
decirse que empez en 1900 y ha crecido
paralelamente con el redescubrimiento y progreso
de la gentica. Los hechos fundamentales fueron
el descubrimiento en el suero de las inmunoglobulinas, que reaccionaban especficamente
con ciertas clulas, bacterias, hongos o parsitos
y sus productos de secrecin. El centro de este
progreso fue el desarrollo de la teora qumica de
los receptores y de sus agentes especficos que
debemos a Ehrlich en lo qumico, y a Carl
Landsteiner, primero, por su descubrimiento de los
grupos sanguneos humanos (1900) y segundo, por
su demostracin de la inmunogenicidad de
substancias qumicas artificiales que, ligadas a
protenas naturales, reaccionaban especficamente
41
Sin ttulo-2
41
5/26/06, 10:25 AM
ms dbiles - 20 o ms das. Peter Gorer en

Inglaterra e investigadores chilenos establecieron
que los genes mayores de histocompatibilidad
determinaban, un complejo de antgenos que se
heredaban estrechamente ligados (ver captulo 8)
y se expresaban en prcticamente todas las clulas
del organismo (Gorer et al, 1955; Hoecker et al,
1954 ) y que haba, por lo menos, dos clases
diferentes, 1 y 2, de este sistema que se expresaban
diferencialmente en los linfocitos de clase 1, en
los linfocitos citotxicos y los linfocitos B, y de
clase 2 en los linfocitos originados en el timo,
linfocitos T. Estas eran las clulas responsables
de la inmunidad adquirida. El sistema
inmunolgico, como todas las funciones vitales,
es de una eficacia, economa y adaptabilidad
increble frente a las variantes inmunognicas
ambientales.
Las investigaciones siguientes cuyos detalles
pueden verse en los diversos captulos de este libro,
analizan las interrelaciones celulares y humorales
de la respuesta inmune, en especial, los aspectos
moleculares de estos procesos. El estado actual
de la investigacin inmunolgica se centra en
especial en los caminos moleculares que siguen,
por una parte los factores inmunognicos y por
otra la respuesta inmune especfica y algunos
factores estructurales y metablicos que regulan
la respuesta inmune.
Scott & Rawson (Sc.Am., June, 2000 54- 64)
sealan que las clulas de nuestro cuerpo tienen
una sorprendente red de comunicaciones internas
y que comprender estos circuitos ayuda a los
cientficos a desarrollar nuevas terapias para
muchos y serios desrdenes.
La biologa molecular, en especial la gentica,
establecieron que la estimulacin especfica de los
genes nucleares se traducira en protenas
especficas en el citoplasma. stas eran con
frecuencia, enzimas hidrolticas y el citoplasma
pareca un saco de enzimas y otras molculas. Un
sistema as no permitira trasmitir las protenas
inducidas. Y es caracterstico de los seres vivientes
que los sistemas de comunicacin intracelular, a
diferencia de las comunicaciones extracelulares,
se transmiten sin ningn error. Cuando se
producen errores -mutaciones- las funciones
metablicas y orgnicas funcionan mal, o los seres
mutantes, mueren. De lo cual se deduce que en el
interior de las clulas existen caminos exactos
entre las molculas mensajeras vgr. un antgeno,
y los receptores especficos para ellas. A esta unin
se sigue un complejo grupo de seales moleculares
que llega hasta el ncleo. En ste, un gen especfico
se activa y su accin se traduce en la produccin
y secrecin de la protena que l determina.
Para que esto ocurra, los mensajeros cruzan
cada una de las estructuras celulares protegidas
macromolcula inmunognica, el eptopo. La

unin de ambos transmita una seal que llegaba
al ncleo. ste, a su vez, traduca la seal y sus
productos estimulaban a unos pocos clones de
linfocitos a multiplicarse y a diferenciarse. La
respuesta total puede ser la secrecin de
inmunoglobulinas especficas, la conversin del
linfocito neutro en un linfocito citotxico para los
agentes infectantes o uno de colaboracin y
estimulacin del complejo inmunitario.
El desarrollo de la inmunologa, como
dependiente de los genes y stos, a su vez, agentes
inmutables, salvo excepcionales y poco frecuentes
mutaciones, explicaban la individualidad como
resultado de las recombinaciones de los genes en
el curso de las generaciones, pero no exista una
explicacin para la inmensa cantidad de
inmunoglobulinas especficas. No haba una
interpretacin para esta extensa heterogeneidad
adaptativa del individuo que se manifestaba slo
en los linfocitos, y que tena una base gentica
desde que se trasmita a todos los miembros de un
mismo clon y a sus productos. El nico problema
comparable era el sistema nervioso. La clave
sigui al descubrimiento por Barbara McClintock
y Jacob y Monod (1958) de los genes saltarines,
o sea, de los fenmenos de recombinacin gentica
en clulas somticas.
Susumi Tonegawa en 1976 descubri que
los genes caractersticos de las inmunoglobulinas,
v por variable, j por unin (joint en ingls), y c
por constante (ver captulo 6) eran totalmente
uniformes en el embrin, inmunolgicamente
inmaduro y en cambio, en el adulto, inmunolgicamente maduro, eran extremadamente
heterogneos. De esto concluy que la heterogeneidad era el resultado de la recombinacin
somtica de los genes para las regiones v, j y c. A
esta heterogeneidad contribuye tambin una alta
tasa de mutaciones espontneas en este sistema.
Podramos decir que la inmunologa clsica
termina con el descubrimiento de las bases de la
especificidad de los trasplantes de tejidos. Era un
hecho conocido en los mamferos que slo los
autotrasplantes se establecen: los alotrasplantes
- entre individuos de la misma especie - son
siempre rechazados. Con mayor razn, los
trasplantes entre diferentes especies - los
heterotrasplantes, no prenden: o sea, que los
organismos reconocen lo propio y lo distinguen
de lo ajeno. Debemos a George Snell el
descubrimiento de las bases de este fenmeno: los
genes de histocompatibilidad y, en especial, una
familia de ellos, los genes mayores (MHC), HLA
y H.2 en el hombre y el ratn, respectivamente.
Las diferencias entre dador y receptor entre stos
provoca el rechazo del injerto en no ms de 10 a
12 das, los otros genes H, determinan rechazos
42
Sin ttulo-2
42
5/26/06, 10:25 AM
de la destruccin enzimtica por su unin con

molculas de algunos sistemas que no son
hidrolizables. Entre stos y muy importantes, son
los antgenos mayores de histocompatibilidad
(MHC). Se sabe que las molculas MHC de clase
1 pueden asociarse a receptores de superficie para
diversas hormonas -beta-adrenrgicas, insulina,
interleuquina -2, endorfinas y otras. Ligado a este
problema est el hecho que los linfocitos
citotxicos slo se activan si son portadores en la
superficie de antgenos de clase 1. Los antgenos
solubles a su vez, pueden penetrar al citoplasma
unidos a antgenos MHC de clase 2 de aqu
vuelven a la superficie celular donde las
inmunoglobulinas circulantes y el complemento
los eliminan a travs de los macrfagos.
Este no es solamente un caso especial para el
sistema inmunolgico sino que un proceso
continuo para todas las funciones celulares y puede
decirse que todos los sistemas estn interconectados incluido el sistema nervioso.
Como ltimo comentario, creo poder predecir
que en este siglo y en base a informacin
inmunogentica y tcnicas moleculares ya en uso,
cambiar substancialmente la farmacologa: se
fabricar vacunas de DNA o RNA, se inocular
genes para la produccin de anticuerpos y clulas
especficas, adecuadas para la mayor parte de las
enfermedades infecciosas, bacterianas,
parasitarias, virales y autoinmunes. Como
resultado, el hombre vivir unos cuantos aos ms
y aparecern otras enfermedades o disfunciones
todava no conocidas o estudiadas. Tendrn buena
tarea los jvenes inmunlogos clnicos.
LECTURAS SUGERIDAS
Hoecker, G., Counce Sh., Smith, P., The antigens
determined by the H-2 locus. A rhesus-like
system in the mouse, Proceedings of the National
Academy of Sciences, 1954; 40: 1040 - 1051.
Monod, J., Le hasard et la necessit. Essai sur
la philosophie naturelle de la biologie moderne,
Editions du Seuil, Paris, 1975.
Scott J. D., Pawson R., Cell communication: the
inside story, Scientific American, 2000, pp. 54 61.
43
Sin ttulo-2
43
5/26/06, 10:25 AM
44
Sin ttulo-2
44
5/26/06, 10:25 AM

Captulo 2
HISTORIA DE LA INMUNOLOGA
Ivn Palomo G. y Arturo Ferreira V.
1. Introduccin
2. Dos siglos de inmunologa
2.1. Inmunidad
2.2. Serologa
2.3. Inmunoqumica
2.4. Inmunobiologa
3. Premios Nobel
45
Sin ttulo-2
45
5/26/06, 10:25 AM
46
Sin ttulo-2
46
5/26/06, 10:25 AM
RESUMEN
La Inmunologa tiene una historia de aproximadamente 200 aos, los que se pueden separar
en dos perodos: 1796-1958 y 1959 a la fecha. Este ltimo perodo se ha caracterizado por importantes avances en el conocimiento del sistema inmune a nivel molecular.
Veintitrs cientficos han obtenido quince Premios Nobel por sus aportes en el campo de la
Inmunologa: Boehring, Koch, Erlich, Metchnikoff, Richet, Bordet, Lansteiner, Theiler, Bovet,
Burnet, Medawar, Edelman, Porter, Yalow, Benacerraf, Dousset, Snell, Jerne, Koller, Milstein,
Tonegawa, Doherty y Zinkernagel.
En este captulo se menciona los avances ms importantes en inmunidad, serologa,
inmunoqumica e inmunobiologa, realizados durante los dos siglos de historia de esta ciencia.
Metchnikoff que investig la fagocitosis, Koch que

hizo aportes fundamentales sobre hipersensibilidad y Landsteiner que demostr la existencia de
varios sistemas antignicos en los glbulos rojos
humanos.
Perodo 1959 a la fecha. Este perodo, se
inicia con los hallazgos sobre estructura de los
anticuerpos realizados en 1959 por Porter y
Edelman (Premio Nobel en 1972; ver punto 3).
Estas cuatro dcadas, llamado perodo de la
Inmunologa Molecular, se ha caracterizado por
la velocidad en la generacin de nuevo conocimiento y tecnologa. Durante estos aos se han
identificado las molculas que son propias del sistema inmune, y de los genes que las codifican.
Entre los descubrimientos ms relevantes de este
perodo se pueden citar, la obtencin de
anticuerpos monoclonales, el conocimiento de la
gentica de las inmunoglobulinas, la descripcin
de los genes del Complejo Principal de
Histocompatibilidad (MHC). Adems, en este perodo se realiz el aislamiento de las molculas y
genes de los receptores de clulas T, de citoquinas
y de molculas de adhesin celular.
Adicionalmente se han conocido importantes aspectos moleculares de la activacin linfocitaria.
Por otra parte, estos conocimientos de inmunologa
bsica han permitido importantes avances en el
conocimiento de la patogenia y tratamiento de diferentes enfermedades inmunes.
En este captulo slo se har una relacin
de los principales investigadores en inmunologa
indicando una breve descripcin de sus contribuciones.
1. INTRODUCCIN
El origen de la inmunologa se ha relacionado con el descubrimiento de la vacuna contra la
viruela, hace aproximadamente 200 aos (1796),
aporte realizado por Edward Jenner, un mdico
rural ingls. Jenner, observ que las personas que
contraan la vacuna (erupcin viral leve que
afectaba al ganado y que se transmita a las ordeadoras), quedaban protegidas contra la viruela.
Esta observacin le llev a transferir pus de una
lesin de vacuna de una ordeadora, al brazo de
un nio, al cual seis semanas ms tarde volvi a
inocular, pero esta vez con pus tomado de una
pstula de viruela y el nio no enferm.
En dos siglos de historia de la inmunologa
se han realizado importantes avances cientficos
en reas como la serologa, inmunidad celular,
inmunologa molecular e inmunogentica. Por otra
parte, se han postulado y demostrado mecanismos
inmunolgicos que explican la patogenia de enfermedades como las alergias, las inmunodeficiencias, las gammapatas monoclonales y
las enfermedades autoinmunes. Adems, se han
desarrollado reas como son la inmunofarmacologa, la inmunologa del cncer y la
inmunologa de trasplante.
Los doscientos aos de historia de la
inmunologa pueden ser divididos en dos perodos: 1796-1958 y 1959 a la fecha.
Perodo 1796-1958. Al menos treinta y cinco destacados investigadores hicieron contribuciones seminales en este perodo. En 1980, casi un
siglo despus que Jenner inmunizara contra la viruela, Louis Pasteur realiz importantes investigaciones en relacin a la atenuacin de vacunas.
Otros investigadores de este perodo fueron
47
Sin ttulo-2
47
5/26/06, 10:25 AM
KRAUSS, Rudolf. En 1987 observ que los

filtrados de cultivos bacterianos o los extractos de
bacterias lisadas, precipitaban con antisueros
bacterianos.
BORDET, Jules. Obtuvo el Premio Nobel en
1919 (ver punto 3).
VON WASSERMANN, August. En 1906
desarroll la prueba de fijacin del complemento
para el diagnstico de la sfilis.
COONS, Albert. En 1942 desarroll una tcnica de marcacin de los anticuerpos basada en la
unin covalente del isotiocianato de fluorescena.
COOMBS, Robin. En 1945 desarroll la
prueba de antiglobulinas.
OUCHTERLONY, rjan; OUDIN, Jacques
y ELECK, Stephen. Entre 1946 y 1948 desarrollaron pruebas de inmunodifusin.
GRABAR, Pierre y WILLIAMS, Curtis. En
1953 modificando la prueba de inmunodifusin
en gel, desarrollaron la tcnica de inmunoelectroforesis.
YALOW, Rosalyn. Obtuvo el Premio Nobel
en 1977 (ver punto 3).
2. DOS SIGLOS DE INMUNOLOGA

A continuacin se describen, brevemente, los
aportes realizados por alrededor de setenta cientficos durante los doscientos aos de historia de la
inmunologa. Han sido separados en cuatro reas
(inmunidad, serologa, inmunoqumica e
inmunobiologa) y ordenados cronolgicamente
en cada una de ellas.
En este punto los Premios Nobel slo sern
nombrados ya que su aporte se describe en el punto
3. Algunos de ellos son citados en ms de un rea.
2.1. Inmunidad
JENNER, Edward. En 1796 realiz la inmunizacin contra la viruela.
PASTEUR, Louis. En 1880 describi lo que
represent la primera vacuna atenuada. Observ
que los cultivos viejos del bacilo del clera, al ser
inoculados en aves no provocaban la enfermedad. Por otra parte, describi que la incubacin de
Bacillus anthracis a 42C, haca perder la virulencia del bacilo. Posteriormente, en 1885, desarroll una vacuna contra la rabia, atenuando el
virus causante de la enfermedad.
METCHNIKOFF, Elie. Obtuvo el Premio
Nobel en 1908 (ver punto 3).
NUTTALL, George. En 1888 demostr que
la sangre desfibrinada era bactericida por s misma y sugiri que en dicho fenmeno participara
una sustancia termolbil presente en el suero.
VON BEHRING, Emil. Obtuvo el Premio
EHRLICH Paul. Obtuvo el Premio Nobel en
1908 (ver punto 3).
WRIGTH, Almroth y DOUGLASS, Stewart.
En 1903 demostraron que ciertas sustancias presentes en el suero, que denominaron opsoninas,
favorecan la fagocitosis de bacterias.
RAMON, Gastn. En 1923 observ que al
tratar las toxinas con formaldehido, stas perdan
sus efectos nocivos y conservaban la actividad
antignica. Los toxoides resultantes comenzaron
a usarse como vacunas.
THEILER, Max. Obtuvo el Premio Nobel
ISAACS, Alick y LINDENMANN, Jean. En
1957 describieron el interfern.
2.3. Inmunoqumica
EHRLICH, Paul. Obtuvo el Premio Nobel en
1908 (ver punto 3).
OBERMAYER, Friedrich y PICK, Ernst. En
1906 observaron que la nitrificacin o yodacin de
las protenas, modifican su especificidad serolgica.
ARRHENIUS, Svante. En 1907 acu el trmino inmunoqumica. La primera contribucin
importante, en esta rama de la inmunologa, fue el
estudio de los haptenos.
LANDSTEINER, Karl. Obtuvo el Premio
MARRACK, John. En 1934 propuso un nuevo modelo de reaccin antgeno-anticuerpo, basado en la polivalencia, es decir la presencia de
varios sitios de combinacin, de cada uno de ellos.
HEIDELBERGER, Michael y KENDALL,
F.E. En 1935, disearon una tcnica de precipitacin cuantitativa que permiti expresar la cantidad de anticuerpos en mg de protena por ml, en
lugar de usar el mtodo de titulacin.
KABAT, Elvin y TISELIUS, Arne. En 1938
demostraron que los anticuerpos estn en la fraccin gamma-globulina del suero.
PORTER, Rodney y EDELMAN, Gerald.
Obtuvieron el Premio Nobel en 1972 (ver punto 3).
2.2. Serologa
2.4. Inmunobiologa
GRBER, Max y DURHAM, Herbert. En

1896 demostraron la reaccin de aglutinacin del
Vibrio cholerae y del bacilo de la tifoidea por
antisueros especficos.
WIDAL, Georges. En 1986 desarroll la
prueba de serodiagnstico para fiebre tifoidea.
KOCH, Robert. Obtuvo el Premio Nobel en

1905 (ver punto 3).
RICHET, Charles. Obtuvo el Premio Nobel
48
Sin ttulo-2
48
5/26/06, 10:25 AM
1901, Von Behring

Emil Von Behring (1854-1917) recibi el
primer Premio Nobel en Medicina. Estudi en el
Instituto Koch en Berln. Entre 1890 y 1892, junto a sus colaboradores, demostr que la inmunidad contra la difteria y el ttano se basaba en antitoxinas y demostr que la administracin pasiva
de sueros antitoxina diftrica y antitoxina tetnica,
respectivamente, podan curar estas enfermedades. Cre as una estrategia teraputica que sera
usada ms tarde en otras patologas.
LANDSTEINER, Karl. Obtuvo el Premio

VON PIRQUET, Clemens y SCHICK, Bela.
En 1905 estudiaron la Enfermedad del suero.
Pirquet realiz varios aportes sobre la alergia que
siguen siendo vlidos.
EHRLICH, Paul. Obtuvo el premio Nobel en
1908.
PRAUSNITZ, Carl y KSTNER, Heinz. En
1921 publicaron sus observaciones sobre la
reagina, una sustancia de tipo anticuerpo presente
en el suero y asociada con procesos alrgicos. Hoy
se acepta que la reagina corresponde a la IgE.
HAUROWITZ, Flix. En 1930 formul la
teora del molde o plantilla para la formacin de
anticuerpos.
BOVET, Daniel. Obtuvo el Premio Nobel en
1957 (ver punto 3).
BURNET, Macfarlane y MEDAWAR, Peter.
WITEBSKY, Ernest. En 1956 estableci los
criterios para demostrar la existencia de una enfermedad autoinmune.
SNELL, George; DAUSSET, Jean y
BENACERRAF, Baruj. Obtuvieron el Premio
MILSTEIN, Csar; KHLER, George y
JERNE, Nils. Obtuvieron el Premio Nobel en 1984
(ver punto 3).
TONEGAWA, Susumu. Obtuvo el Premio
DOHERTY, Peter y ZINKERNAGEL, Rolf.
JANEWAY, Charles; MEDZHITOV, Rusian
y PRESTON-HURLBURT, Paula. En 1997
(Nature, 388:394-397) comunicaron la existencia
en humanos de la protena Toll, homloga a la
descrita en Drosophila y que induce respuesta inmune natural y adquirida. Se trata de una protena
de transmembrana que presenta un dominio
extracelular rico en leucina y otro citoplasmtico
homlogo al que presenta el receptor de
interleuquina 1 (IL-1R). Ambas protenas
transducen seales a travs de NF-kB. Este hallazgo ha significado el primer ejemplo de una
conexin a nivel molecular entre el sistema inmune innato y adaptativo.
1905, Koch
Robert Koch (1843-1910), mdico que inicialmente investig sobre el Bacillus anthracis en
un pequeo pueblo de Alemania y luego trabaj
en el Instituto Koch en Berln. Hizo contribuciones en metodologa de cultivo y aislamiento
bacteriano, y public los famosos postulados de
Koch para probar la etiologa. Hizo aportes en
varias enfermedades pero fueron sus aportes en
relacin a tuberculosis: descripcin del
Micobacterium tuberculosis y la reaccin de
tuberculina (fenmeno de hipersensibilidad retardada), los que le hicieron merecedor del Premio
Nobel.
1908, Metchnikoff y Ehrlich
Elie Metchnikoff (1845-1916) naci en Rusia y estudi zoologa. En 1884, trabajando en un
laboratorio de biologa marina en Italia, realiz
las observaciones iniciales sobre clulas
fagocticas de estrella de mar, que le permitieron
desarrollar la teora de inmunidad celular
(fagocitosis; ver captulos 3 y 4). Despus sigui
investigando sobre fagocitosis en el Instituto
Pasteur en Pars.
Paul Ehrlich (1854-1916), naci en Alemania y estudi Medicina. Realiz aportes en las
reas de inmunidad, serologa e inmunobiologa.
Ehrlich desarroll varias tinciones citoqumicas
en tejidos; desarroll las tinciones ms usadas
en hematologa para teir las clulas sanguneas.
En 1891, siendo asistente de Koch, comenz a
realizar estudios inmunolgicos. En 1897 hace
su primera contribucin a la inmunologa describiendo un mtodo para estandarizar la preparacin de toxina y anti-toxina diftrica.
Ehrlich hizo contribuciones tericas sobre la
formacin de anticuerpos; postul la hiptesis
de las cadenas laterales. Tambin plante algunos mecanismos en la patogenia de hemlisis
inmune. Ms adelante hizo importantes aportes
en el tratamiento de tripanosomiasis y sfilis.
3. PREMIOS NOBEL
Entre 1901 y 1996 veintitrs cientficos han
obtenido el Premio Nobel por sus aportes a la
inmunologa y temas afines (tabla 2-1).
A continuacin se indican algunos antecedentes sobre los Premios Nobel otorgados a cientficos que han hecho aportes significativos en
Inmunologa:
49
Sin ttulo-2
49
5/26/06, 10:25 AM
Tabla 2-1. Premios Nobel por investigaciones en Inmunologa

Ao
Investigador
Aporte
1901
1905
1908
Emil von Behring

Robert Koch
Paul Ehrlich
Elie Metchnikoff
Charles Richet
Jules Bordet
Karl Landsteiner
Max Theiler
Daniel Bovet
Macfarlane Burnet y
Peter Medawar
Gerald Edelman y
Rodney Porter
Rosalyn Yalow
Baruj Benacerraf,
Jean Dausset y
George Snell
Niels Jerne
Teraputica con antisueros

Tuberculosis
Teoras sobre inmunidad
Fagocitosis
Mecanismo de la Anafilaxia
Accin bactericida del Complemento
Grupos sanguneos humanos
Vacuna contra la Fiebre amarilla
Antihistamnicos
Tolerancia inmunolgica
1913
1919
1930
1951
1957
1960
1972
1977
1980
1984
Estructura qumica de
las inmunoglobulinas
Radioinmunoanlisis
Inmunogentica e Histocompatibilidad
Teora selectiva
Red idiotipo/anti-idiotipo
Tecnologa del hibridoma
Georges Koller y
Csar Milstein
Susumu Tonegawa
Peter Doherty y
Rolf Zinkernagel
1987
1996
Gentica de las inmunoglobulinas

Restriccin gentica de la respuesta inmune
poliomielitis se poda producir en primates no

humanos y uno de los primeros en hacer la misma
observacin en sfilis. Por otra parte, contribuy
a entender las bases qumicas de las interacciones
antgeno-anticuerpo.
1913, Richet
Charles Richet (1850-1935). Naci en Pars,
Francia y estudi Medicina. Interesado en la fisiologa estudi el efecto del veneno de invertebrados
marinos sobre mamferos. Junto a Paul Portier describi la Anafilaxia (ver captulos 21 y 22). As
mostr que los mecanismos protectores de la inmunidad tambin podran causar enfermedad.
1951, Theiler
Max Theiler (1899-1972), naci en Sudfrica,
estudi Medicina en Inglaterra y luego viaj a Estados Unidos. Demostr que la Fiebre amarilla era
causada por un virus filtrable; luego obtuvo virus
atenuados y logr inmunizar contra esta infeccin. Sus estudios permitieron obtener la actual
vacuna contra la Fiebre amarilla.
1919, Bordet
Jules Bordet (1870-1960) fue un mdico nacido en Blgica. Siendo joven fue a estudiar con
Metchnikoff en el Instituto Pasteur en Pars. Hace
importantes contribuciones al entendimiento del
mecanismo bactericida mediado por complemento (ver captulo 18). En 1899 describe el fenmeno de hemlisis especfica. Luego, junto a Octave
Gengou, describe el fenmeno de fijacin de complemento y sus posibilidades diagnsticas.
1957, Bovet
.
Daniel Bovet (1907- ), fisilogo y farmaclogo. Trabaj con Emile Roux en el Instituto Pasteur
(Pars) en la respuesta del sistema nervioso autnomo a varios productos qumicos. Se interes en
sustancias que pudieran oponerse a la accin de la
histamina y desde all surgieron drogas
antihistamnicas para el tratamiento de alergias
(Asma y Fiebre del heno) (ver captulos 21 y 22).
1930, Landsteiner
Karl Landsteiner (1868-1943), mdico de
Viena. En 1901, estudiando anticuerpos
antieritrocitarios identific el sistema antignico
ABO en los glbulos rojos (ver captulos 4 y 26).
Posteriormente, en 1926, con Philip Levine describe el sistema MNP y en 1940 con Alexander
Wiener describe el sistema Rh. En otro orden,
Landsteiner fue el primero en demostrar que la
1960, Burnet y Medawar

Macfarlane Burnet (1899-1985), mdico australiano. Alrededor de 1950 Burnet junto con
proponer una teora sobre la formacin de
50
Sin ttulo-2
50
5/26/06, 10:25 AM
deteccin de diferentes antgenos en el orden de

los nanogramos o picogramos ( ver captulo 40).
anticuerpos (teora de la seleccin clonal), postul que la respuesta inmune se desarrolla tardamente durante la vida embrionaria e involucra un
sistema de reconocimiento de lo propio y lo extrao. En otras palabras plante que el autorreconocimiento (tolerancia a los antgenos propios)
sucede en la vida neonatal por contacto de las clulas formadoras de anticuerpos con nuevos
antgenos; cuando el feto sintetiza estas clulas
por primera vez.
Peter Medawar (1915-1987), inicialmente se
interes en la reparacin de tejidos y problemas
asociados a los trasplantes. Algunos aos despus
comprob la teora postulada por Burnet en experimentos realizados en ratones.
1980, Benacerraf, Dausset y Snell

Se les otorg el Premio Nobel a Benacerraf,
Dausset y Snell por sus trabajos en molculas
genticamente determinadas en la superficie celular y que regulan las reacciones inmunolgicas.
George Snell (1903-1996) a mediados de la
dcada del cuarenta desarroll cepas congnicas
de ratones, las que slo se diferencian en un locus
gnico. Junto con Peter Gorer, comprobaron que
los genes controlan la sntesis del antgeno II, denominado posteriormente H-2; hoy conocido
como Complejo Principal de Histocompatibilidad,
clase II (MHC-II) (ver captulo 8). Adems demostraron que de estos antgenos depende el xito o el fracaso de los injertos entre ratones
congnicos. En los experimentos que condujeron
a estos fundamentales hallazgos particip Gustavo Hoecker S, profesor e inmunlogo chileno, y
Premio Nacional de Ciencias 1989.
Jean Dausset (1916- ), francs, descubri que
los pacientes que reciben mltiples transfusiones
sanguneas producen isoanticuerpos contra los
leucocitos del dador. Dichos anticuerpos reaccionan con los antgenos de superficie de los
leucocitos del dador (HLA, human leukocyte
antigen) (ver captulo 8) o con el mismo antgeno
en los leucocitos de otras personas. Poco despus
se relacion la produccin de una respuesta inmune a los HLA con los rechazos de injertos (ver
captulo 38).
Baruj Benacerraf (1920- ) y colaboradores
demostraron que otros genes presentes en el locus
del Complejo Principal de Histocompatibilidad,
en la regin I, tambin participan en el control de
la respuesta inmune.
1972, Porter y Edelman

Rodney Porter (1917-1985) de la Universidad de Oxford y Gerald Edelman (1929- ) de la
Universidad Rockefeller. Recibieron el Premio
Nobel por sus trabajos en la estructura qumica de
los anticuerpos (inmunoglobulinas). Ambos trabajaron con la misma inmunoglobulina, hoy conocida como IgG, pero cada investigador la trat
con diferentes mtodos analticos.
Porter emple diferentes enzimas; en 1958,
a partir de la molcula IgG purificada, utilizando
papana obtuvo dos fragmentos Fab (fragmento
que une antgeno) iguales y un fragmento Fc (fragmento cristalizable) (ver captulo 6).
Edelman, a partir de IgG de Mieloma Mltiple (ver captulo 27) y utilizando urea (reductor),
obtuvo la separacin en cadenas pesadas (H) y livianas (L) (ver captulo 6). Tambin demostr que
diferentes anticuerpos de cerdos guinea tenan distinta movilidad electrofortica.
Luego Porter y colaboradores demostraron
que cada molcula de inmunoglobulina estaba formada por dos cadenas H y dos cadenas L.
Posteriormente Porter, Edelman y otros investigadores realizaron la primera secuenciacin
aminoacdica parcial de las cadenas de los
anticuerpos. En 1969 Edelman y colaboradores
realizaron la secuenciacin aminoacdica completa
de la molcula de inmunoglobulina, lo que ayud
a definir sus diferentes dominios funcionales.
1984, Milstein, Khler y Jerne

Csar Milstein (1927- ) y George Khler
(1946-1995) en la dcada del setenta desarrollaron la metodologa para obtener anticuerpos
monoclonales (ver captulo 44). Henry Kunkel y
colaboradores (1955) mostraron que los mielomas,
tumores de clulas plasmticas (ver captulo 27)
producan anticuerpos monoclonales; en 1962
Michael Potter mostr que dicho tumor poda ser
inducido en ratones y otros mostraron que podan
crecer indefinidamente en cultivo.
En 1974 Khler inici un postdoctorado en
el laboratorio de Milstein en Cambridge; ambos
emprendieron la tarea de inmortalizar clulas
formadoras de anticuerpo por fusin con clulas
de mieloma, con el propsito de estudiar las bases genticas de la diversidad de los anticuerpos.
Para ello usaron una lnea celular mutante de
mieloma deficiente en la enzima hipoxantina
1977, Yalow
A comienzos de la dcada del 50, Rosalyn
Yalow (1921- ) junto a su colaborador Solomon
Berson, estudiaron las causas de la resistencia a la
insulina en la diabetes. Demostraron la formacin
de anticuerpos anti-insulina; el complejo antgenoanticuerpo lo pudieron medir desarrollando un
mtodo inmunorradiomtrico de competencia en
que marcaban con un istopo el antgeno. Este
mtodo ha servido de base a las tcnicas de
radioinmunoanlisis actualmente usadas para la
51
Sin ttulo-2
51
5/26/06, 10:25 AM
vena otro segmento gnico adicional a V y J que

denominaron D (diversity, diversidad) (ver captulo 6). Los trabajos de Tonegawa han tenido
repercusin en el conocimiento de la variabilidad
gentica de los receptores de linfocitos T (TCR).
fosforibosiltransferasa; clulas que mueren en un

medio que contiene hipoxantina, aminoptirina y
timidina (medio HAT), pero las clulas hbridas
(hibridomas) sobreviven, pudiendo ser seleccionadas. stas sintetizan anticuerpos con una nica
especificidad (anticuerpos monoclonales) en forma indefinida. Los anticuerpos monoclonales han
sido una poderosa herramienta en el estudio
molecular de diversas macromolculas y su aplicacin se realiza tanto en ciencias bsicas como
en clnica.
Nils Jerne (1912-1994) realiz varias contribuciones a la inmunologa. Principalmente hizo
aportes tericos. En 1955 fue el primer cientfico
moderno que plante la teora selectiva para la
formacin de los anticuerpos, en la cual el antgeno
selecciona el anticuerpo a partir de un repertorio
preformado. En 1971 postula una hiptesis sobre
el desarrollo de especificidades del repertorio de
clulas T; dice que el principal estmulo para que
los linfocitos se dividan en el timo son los
antgenos MHC. En 1974 desarrolla la teora ms
importante; predijo que cada molcula de anticuerpo tiene una regin inmunognica especfica llamada marcador idiotpico, que estimulara la formacin de un segundo anticuerpo que reaccionara con ese marcador y as sucesivamente (red
idiotipo-anti-idiotipo), pudiendo representar uno
de los principales mecanismos reguladores de la
respuesta inmune (ver captulo 14).
1996, Doherty y Zinkernagel

A Peter Doherty (1940- ) y Rolf Zinkernagel
(1944- ) se les otorg el Premio Nobel por la demostracin de la restriccin MHC en el reconocimiento de antgenos virales sobre clulas infectadas, por parte de los linfocitos T citotxicos. En
la dcada del setenta Doherty y Zinkernagel realizaron experimentos en un sistema in vitro que
permita medir la capacidad de clulas efectoras
de destruir clulas blanco infectadas por virus;
utilizaron el virus de la coriomeningitis linfoctica
(LCMV) que infecta ratones. Cuando los dos tipos celulares (linfocito T citotxico y clula blanco) pertenecan a la misma cepa de ratn, la muerte
fue eficiente. En cambio cuando ambas clulas
pertenecan a ratones con diferente haplotipo
MHC, la destruccin de las clulas blanco generalmente no ocurre. Ellos concluyeron que la clula efectora deba reconocer dos seales sobre la
clula infectada, una derivada del virus y otra de
las molculas MHC presentes en la clula blanco
(ver captulo 9)
LECTURAS SUGERIDAS
1987, Tonegawa
Susumu Tonegawa (1939- ) recibi el Premio Nobel por sus trabajos en biologa molecular
de los genes de inmunoglobulinas, mostrando
cmo se genera la diversidad de las inmunoglobulinas.
En 1965 Dreyer y Bennett propusieron que
podra ser necesario menos DNA para codificar
las diferentes especificidades de las
inmunoglobulinas si mltiples genes para regiones variables (V) se combinaban con un nico gen
para regin constante (C) (ver captulo 6).
En 1976 Tonegawa y Hozumi confirmaron
la hiptesis de Dreyer y Bannett; demostraron que
en el DNA embrionario los segmentos gnicos V
y C estaban separados. Luego Tonegawa, Gilbert
y Maxam mostraron, en diferentes clulas, que
estos dos genes estaban an separados por DNA
no codificante (intron). Ms adelante, Tonegawa
y Philip Leder, encontraron que la secuencia
amininoacdica de la regin V de la cadena L tena ms aminocidos que los codificados por los
segmentos gnicos V. Tonegawa y colaboradores
pronto encontraron el segmento restante que llamaron J (joining, unin). Posteriormente
Tonegawa y Leroy Hood describieron que en el
caso de la regin variable de las cadenas H, inter-
Barret, J., Inmunologa mdica, Captulo 1, Quinta edicin, Ed. Interamericana, Mxico, 1990.
Hoecker, G., Los Complejos Mayores de
Histocompatibilidad, Universum, ao 9:61-72,
1994.
Silverstein, A., A history of Immunology,
Appendix B and appendix C, Ed. Academic Press
Inc., California, 1988.
Silverstein, A., The history of Inmunology en
Fundamental Immunology, Chapter 2, Ed. Paul
W., Leppincott-Raven, Publisher, 1999.
Stites, D. and Terr, A., Basic and Clinical
Inmunology, Chapter 1, Seventh edition, Ed.
Appleton & Lange, USA, 1991.
52
Sin ttulo-2
52
5/26/06, 10:25 AM

Captulo 3
CLULAS Y RGANOS DEL SISTEMA INMUNE
Ivn Palomo G., Jaime Pereira G. y Cecilia Koenig S.
1. Introduccin
2. Clulas del sistema inmune
2.1. Hematopoyesis
2.2. Linfocitos
2.3. Sistema fagoctico mononuclear
2.3.1. Monocitos
2.3.2. Macrfagos
2.4. Granulocitos
2.4.1. Neutrfilos
2.4.2. Eosinfilos
2.4.3. Basfilos
3. rganos linfoides
3.1 rganos linfoides primarios
3.1.1. Mdula sea
3.1.2. Timo
3.2. rganos linfoides secundarios
3.2.2. Bazo
3.2.3. Tejido linfoide asociado a
mucosa
4. Trnsito linfocitario
53
Sin ttulo-2
53
5/26/06, 10:25 AM
54
Sin ttulo-2
54
5/26/06, 10:25 AM
RESUMEN
Las clulas del sistema inmune que incluyen linfocitos, granulocitos y monocitosmacrfagos, se forman en la mdula sea a partir de clulas pluripotentes, a travs de un proceso
finamente regulado y en el que participan varias citoquinas.
Los linfocitos son las clulas que participan en la inmunidad adquirida o especfica. Las
clulas T participan en la inmunidad celular y las clulas B en la inmunidad humoral. Una tercera
subpoblacin de linfocitos, las clulas NK, participan en la inmunidad celular de tipo innata.
Las clulas del Sistema Fagoctico Mononuclear (monocitos, macrfagos y clulas
dendrticas) tienen como funcin fagocitar, actividad ms desarrollada en los macrfagos, que
son clulas tisulares derivadas de los monocitos circulantes.
Los granulocitos (neutrfilos, eosinfilos y basfilos) presentan particularidades
morfolgicas y funcionales. La principal funcin de los neutrfilos es su capacidad fagoctica.
En el captulo se explican los procesos de activacin, quimiotaxis, fagocitosis y bacteriolisis.
Los rganos linfoides se pueden clasificar en primarios (timo y mdula sea) y secundarios (bazo, ganglios linfticos y tejido linfoide asociado a mucosas). En el timo maduran los LT
y en la mdula sea los LB. En los rganos linfoides secundarios, los linfocitos toman contacto
con los antgenos y es en ellos donde se genera la respuesta inmune especfica (clulas efectoras
y de memoria). En estos rganos existen zonas ricas en clulas B, y otras en que, principalmente,
existen clulas T.
La capacidad de los linfocitos de recircular entre los rganos linfoides secundarios, vasos
linfticos, conducto torcico y vasos sanguneos le permiten tomar contacto con antgenos en
diferentes lugares del organismo.
la mdula sea, rgano en que ocurre la

hematopoyesis, proceso por el cual se forman, diferencian y maduran las clulas sanguneas.
1. INTRODUCCIN
El sistema inmune humano, y de los
vertebrados en general, consiste en varios rganos y diferentes tipos de clulas, que le permiten
al organismo distinguir lo propio y eliminar lo
extrao.
En este captulo se revisan los aspectos fundamentales de las clulas del Sistema Inmune, que
participan en la inmunidad especfica e
inespecfica (ver captulo 4), y los rganos que
componen este sistema, tanto los que participan
en la produccin y maduracin celular, como los
que sirven para encuentro de las clulas del sistema inmune con los antgenos.
2.1. Hematopoyesis
En el feto la hematopoyesis ocurre en el hgado y en el bazo. A partir del nacimiento se suspende este proceso en esos rganos y se incrementa
en la mdula sea, sitio donde haba comenzado
en los ltimos meses de gestacin. En la mdula
sea tres aspectos son importantes a considerar:
(a) la estructura anatmica (ver punto 3.2.1): disposicin tridimensional de vasos sanguneos y diferentes tipos celulares; (b) el estroma: incluye varios tipos celulares, (fibroblastos, adipocitos,
macrfagos, linfocitos y clulas endoteliales de
los sinusoides) y macromolculas de la matriz
extracelular (colgeno, fibronectina, laminina,
hemonectina, tenascina, trombospondina y
proteoglicanos).
En la mdula sea las clulas hemato-
2. CLULAS DEL SISTEMA INMUNE

Las clulas del sistema inmune incluyen
linfocitos y diferentes clulas fagocticas, organizadas en los tejidos linfoides. Las clulas del sistema inmune derivan de clulas pluripotentes de
55
Sin ttulo-2
55
5/26/06, 10:25 AM
eritroblstica se reconocen las etapas,

proeritroblasto, eritroblasto basfilo, eritroblasto
poliromatfilo, eritroblasto ortocromtico,
reticulocito y glbulo rojo. En la lnea linfoide, a
partir de la CFU-L, despus de un proceso de di-
poyticas se distribuyen en tres compartimientos

morfo-funcionales: (a) compartimiento de clulas
madres, (b) compartimiento mittico o de divisin
y (c) compartimiento de maduracin almacenamiento (figura 3-1).
Figura 3-1. Compartimientos celulares en la mdula sea. Se distinguen 3 compartimientos morfo-funcionales: de clulas
madres (stem cells), mittico y de maduracin almacenaje. En la figura, los dos ltimos compartimientos ejemplifican la serie
granultica, representndose el tamao relativo de los diferentes compartimientos.
Las clulas del compartimiento stem cell

(de clulas madres) corresponden a menos del 1%
de las clulas de la mdula. No son identificables
morfolgicamente, por lo que deben ser estudiadas en cultivos in vitro. La stem cell o clula
madre pluripotente, tambin denominada CFUML (Unidad formadora de colonias mieloides y
linfoides) tiene la capacidad de dividirse y
autoperpetuarse. Da origen a dos lneas celulares
principales, mieloide y linfoide (figura 3-2). En la
lnea mieloide, a partir de la CFU-GEMM
(granuloctica, eritroide, monoctica y
megacarioctica) se producen dos diferentes CFU
encomendadas, CFU-GM (granulocito,
monocito) y CFU-MegE (megacariocito,
eritroide); posteriormente se generan las CFU-G,
CFU-M, CFU-E, CFU-Meg. En el compartimiento
mittico, a partir de las CFU de las lneas celulares especficas antes mencionadas, se generan las
primeras clulas reconocibles morfolgicamente
de cada lnea celular: mieloblasto en el caso de
los granulocitos, que posteriormente madurar a
promielocito y luego a mielocito etapa en la cual
se diferencian las tres lneas especficas de los
granulocitos (neutrfilos, eosinfilos y basfilos);
las etapas posteriores de maduracin de los
granulocitos corresponden a juveniles, baciliformes y segmentados. Por su parte, la serie monoctica madura en las etapas de monoblasto y monocito. De la CFU-Meg, la lnea megacarioctica se
reconoce las etapas de megacarioblasto,
megacariocito y plaquetas; por su parte en la serie
ferenciacin y maduracin se originan los

linfocitos T y linfocitos B.
En el proceso de diferenciacin y maduracin de las diferentes lneas celulares, participan
varios factores de maduracin y citoquinas
secretadas por clulas del estroma (ver captulo
11). Existen factores que actan sobre progenitores de multilinaje: Kit ligand, GMCSF (CSF:
Factor estimulador de colonias), G-CSF,
interleuquina (IL)-3, IL-4, IL-6, IL-11, IL-12, Flt3 ligand, Factor inhibidor de leucemia (LIF),
Oncostatin (OSM). Algunos de estos factores participan tambin en la maduracin de algunas lneas celulares en particular. Entre los factores de
maduracin de los granulocitos y monocitos, se
reconocen a GM-CSF; G-CSF favorece la maduracin a neutrfilos, M-CSF a monocitos, IL-5 a
eosinfilos y Kit ligand a basfilos. Por su parte, el regulador fisiolgico de la maduracin
eritroide es la eritropoyetina (EPO) y de los
megacariocitos la trombopoyetina (TPO) tambin
denominada mpl-ligand. Kit ligand tambin
parece tener participacin en la maduracin
eritroide.
En la lnea linfoide B, que a diferencia de los
linfocitos T, maduran en la mdula sea, el factor
de maduracin es la IL-7.
Las clulas de las diferentes lneas hematopoyticas presentan receptores para los factores de
maduracin antes nombrados. En la tabla 3-1 se
resumen los principales factores maduracin
hematopoyticos y sus receptores.
56
Sin ttulo-2
56
5/26/06, 10:25 AM
Figura 3-2. Esquema de la Hematopoyesis. La clula madre pluripotencial autoperpetuable, da origen a una clula pluripotencial,
tambin denominada CFU-ML (Unidad formadora de colonias mieloides y linfoides), de la que se originan: a) el progenitor
mieloide (CFU-GEMM), a partir del cual por procesos de maduracin y diferenciacin se originan los granulocitos (neutrfilos,
eosinfilos y basfilos), monocitos, eritrocitos y plaquetas; y b) el progenitor linfoide (CFU-L), que despus de un proceso de
maduracin y diferenciacin, da origen a los linfocitos T y linfocitos B. Se muestra los puntos de accin de las citoquinas (IL-1, IL3, IL-6 e IL-7) y factores estimuladores de colonias (CSF) especficos, que participan como factores reguladores de la granulopoyesis
y linfopoyesis. EPO, eritropoyetina; TPO, trombopoyetina.
Tabla 3-1. Factores de maduracin hematopoyticos y sus receptores

Factor
Receptor
Eritropoyetina (EPO)
Kit ligand (KL)
Interleuquina-1, etc. (IL-1, etc.)
Factor estimulador de colonias de granulocitos (G-CSF)
Factor estimulador de colonias de granulocitosmacrfago (GM-CSF)
Factor estimulador de colonias de monocito-macrfago
(M-CSF, CSF-1)
Interfern (IFN) , ,
Trombopoyetina (TPO, mpl, ligand)
Factor inhibidor de leucemia (LIF)
Oncostatin M (OSM)
Factor de crecimiento transformante (TGF-)
Factor de crecimiento tipo insulina (IGF-1)
Flt-3 ligand (FL)
Flk-1 ligand
EPOR
Kit
IL-1 receptor
G-CSF receptor
G-CSF receptor
CSF-1R
IFN-, , receptor
mpl
LIF receptor
OSM receptor
EGF receptor
IGF-1R
Flt-3, STK
Flk-1
2.2. Linfocitos
Los linfocitos, junto con las clulas presentadoras
de antgeno (CPA) son la base celular de la respuesta inmune especfica. Actualmente los
linfocitos son uno de los tipos de clulas mejor

estudiadas. Dado que una parte importante del libro trata sobre la inmunidad especfica y, por lo
57
Sin ttulo-2
57
5/26/06, 10:25 AM
tanto, sobre la ontogenia y funcin de las diferentes subpoblaciones de linfocito, en este captulo el
tema ser tratado slo en sus aspectos generales.
Los denominados "linfocitos activados" corresponden a linfocitos asociados a una respuesta

inmune. Estos linfocitos estimulados antignicamente se caracterizan por presentar citoplasma
abundante, hiperbasfilo (azul intenso) y de bordes irregulares.
A la microcospa electrnica de barrido, los
linfocitos en reposo presentan una superficie lisa;
que se hace irregular (velluda) al estar activados.
Los linfocitos, al igual que otros leucocitos,
se pueden movilizar. Inicialmente se forma un
pseudpodo que rodea la clula y al contraerse
empuja el ncleo hacia delante quedando una cola
citoplasmtica llamada urpodo (ura: cola, podi:
pie), presentando la clula un aspecto de espejo
de mano o pera. La velocidad es de aproximadamente 20 m/minuto, la que aumenta cuando la
clula es estimulada. El urpodo, adems de permitir el movimiento facilita las interacciones con
otras clulas (linfocitos, macrfagos), etc.
Los linfocitos adems de presentar diferen-
Caractersticas generales
Los linfocitos constituyen aproximadamente
el 20-25% de los leucocitos circulantes en el adulto (tabla 3-2). Desde el punto de vista morfolgico, en frotis sanguneo teido con May
Grnwald-Giemsa se distinguen dos tipos: los
linfocitos pequeos (7-9 m) que presentan una
relacin ncleo/citoplasma alta y representan la
mayora, y los linfocitos grandes (11-20 m),
que presentan citoplasma ms abundante (figura
3-3). El ncleo generalmente es redondo u oval
y compuesto predominantemente de heterocromatina. Los nuclolos pueden no observarse con
tincin de May Grnwald-Giemsa. En los
linfocitos grandes puede observarse grnulos
citoplasmticos (linfocitos granulares grandes).
Tabla 3-2. Leucocitos normales en sangre perifrica del humano adulto normal
Tipo de clula
Leucocitos (totales)
Neutrfilos
Eosinfilos
Basfilos
Monocitos
Linfocitos
Nmero absoluto (/L)

4 - 10 x103
2 - 7 x103
0 - 0,4 x103
0,1 - 1 x103
0,2 - 0,8 x103
1,5 - 3,5 x103
60-65
0-4
<1
4-10
20-25
cias morfolgicas son un grupo heterogneo estructural y funcionalmente. Se dividen en tres grupos funcionales diferentes: los linfocitos T (LT)
que participan en la inmunidad adquirida de tipo
celular, los linfocitos B (LB) que participan en la
inmunidad adquirida de tipo humoral y las clulas NK ("Natural Killer") que no expresan marcadores de clulas T ni clulas B y que participan
en la inmunidad natural o innata.
Las clulas T y B, originadas a partir de la
CFU-L en la mdula sea (figura 3-2), experimentan un proceso de maduracin y diferenciacin en
el timo y mdula sea (tejido bolsa equivalente en
el humano). La mayor parte de los linfocitos que
se encuentran en la sangre, linfa, ganglio linftico
y timo son linfocitos T, en cambio un mayor porcentaje de los linfocitos presentes en la mdula
sea son linfocitos B; en el bazo y amgdalas el
porcentaje de ambas subpoblaciones es similar.
Figura 3-3. Esquema de estructura subcelular de un linfocito pequeo. En el frotis de sangre teido con May Grnwald
- Giemsa los linfocitos pequeos presentan un dimetro similar a los glbulos rojos (7-9 mm). A la microscopa electrnica
se observa nuclolo y un pequeo aparato de Golgi. Adems,
en su escaso citoplasma presenta algunos ribosomas y un pequeo retculo endoplsmico y escasos grnulos.
58
Sin ttulo-2
58
5/26/06, 10:25 AM
subpoblaciones de clulas T "helper": LTh1 y

LTh2. Los LTh1 secretan IL-2, IFN-, IL-3 y estimulan la inmunidad mediada por clulas; los
LTh2 secretan IL-4, IL-5, IL-6, IL-10 y favorecen la respuesta inmune humoral. Por su parte,
los linfocitos B se reconocen por la expresin en
su membrana de inmunoglobulinas IgM y en algunos casos IgD. Adems son CD19+, CD20+,
CD22+ y tambin expresan molculas MHC
clase II. Las clulas NK presentan los siguientes
marcadores: FcRIII (CD16), CD56 y CD57.
Las clulas plasmticas generalmente presentan forma ovalada. Corresponden a las clulas
efectoras de la lnea linfoide B (productoras de
inmunoglobulinas). El ncleo, con una distribucin radial de la heterocromatina, est ubicado
excntricamente y el citoplasma presenta una gran
cantidad de retculo endoplsmico rugoso que le
otorga la intensa basofilia que le caracteriza al ser
teidas estas clulas con May Grnwald - Giemsa.
A nivel perinuclear presenta un desarrollado aparato de Golgi (figura 3-4).
Diferenciacin de linfocitos
Los linfocitos se generan a partir de la CFUL de la mdula sea (ver punto 2.1) que presenta
desoxinucleotidil transferasa terminal (TdT) en el
ncleo y expresa CD34, C-Kit y HLA-DR (tipo
de molcula MHC clase II en humanos) en la membrana celular. La lnea linfoide B madura en la
propia mdula sea y la lnea linfoide T en el timo.
En ambos casos la maduracin implica una etapa
independiente de antgeno, que ocurre en la mdula sea (lnea B) y en el timo (lnea T), y una
etapa dependiente de antgeno que en ambas lneas celulares ocurre en los rganos linfoides secundarios (ver punto 3.2). La maduracin de las
clulas B se puede separar en dos estadios previos
al LB maduro: Pro-B en que las clulas son TdT+,
CD10+, CD19+, CD24+, CD34+, CD38+ y HLADr+ y Pre-B se caracterizan por ser TdT+, CD10+,
CD19+, CD20+, CD24+, CD38+ y cadenas
citoplasmticas + (de IgM; ver captulo 6). Las
clulas B maduras presentan el siguiente
Inmunofenotipo: CD19, CD20, CD21, CD22,
CD24, CD38, IgM, IgD (no siempre) y FcR.
Las etapas finales de diferenciacin de los
LB tienen lugar en periferia, en algn rgano
linfoide secundario (ver punto 3.2) y son antgeno
dependientes. En el punto siguiente se explica muy
brevemente el proceso de activacin linfocitaria
que ocurre como consecuencia de la interaccin,
en este caso, entre IgM o IgD de membrana de un
LB y el antgeno respectivo. Los LB vrgenes expresan en su membrana IgM y IgD y son CD10-,
CD23-, CD38- y CD77-; de tomar contacto con
el antgeno expresa CD23. Luego, como clula
precursora del centro germinal en los folculos
linfoides (ver punto 3.2) el fenotipo que le caracteriza es IgM+, e IgD+, CD10+, CD23-, CD38+ y
CD77- (figura 3-5). Posteriormente en la zona
oscura del centro germinal, las clulas
Figura 3-4. Esquema de la estructura subcelular de una

clula plasmtica. Las clulas plasmticas presentan un dimetro de 10-25 mm. Se ubican principalmente en los rganos
linfoides secundarios y muy raramente en sangre perifrica.
En el estudio hematolgico de rutina de los

linfocitos sanguneos slo se utiliza la tincin de
May-Grnwald-Giemsa, metodologa que no permite conocer la lnea celular de los linfocitos. En
caso de requerirse dicha informacin, como es el
caso de diagnstico diferencial de leucemias, se
puede recurrir a tinciones citoqumicas que identifican la presencia o ausencia de ciertas enzimas y
otras molculas en el citoplasma de los linfocitos.
Ms recientemente se utiliza citometra de flujo
para identificar las subpoblaciones de linfocitos
(ver captulo 43). Al respecto, el uso de
anticuerpos monoclonales conjugados con
fluorocromos permite identificar marcadores de
superficie designados con el sistema CD ("cluster designation") a modo de ejemplo se muestran algunos en la (tabla 3-3) (ver captulo 45).
De esta forma se reconoce como marcadores de
las clulas T al complejo CD3 y a las dos
subpoblaciones ms importantes de esta lnea celular se les identifica por ser CD4+ (LT "helper")
o CD8+ (LT citotxicos). Basndose en el patrn de secrecin de citoquinas, se reconocen dos
59
Sin ttulo-2
59
5/26/06, 10:25 AM
Tabla 3-3. Molculas CD asociadas a linfocitos

CD
Sinnimo
Expresin
clula
Funcin(es)
CD2
CD3
CD4
CD7
CD8
CD10
CD11b
LFA-2
CAM
Adhesin, transduccin de seales
CALLA
CR3 ()
CD16
FcRIII
LT, clulas NK
LT
LT "helper"
LT y timocitos
LT citotxicos
LT inmaduros
Granulocitos,
monocitos, NK
Granulocitos,
macrfagos, clulas NK
Clulas B
Pre-B y LB
LB
CD19
CD20
CD21
CD22
CD23
CD25
CD28
CD29
CD35
CD40
CD54
CD55
CD56
CD57
FcRIIa
Receptor de IL-2
baja afininidad
VLA ()
CR1
ICAM-1
DAF
LB maduros
LB activados
LT, LB, macrfagos
Activados
LT citotxicos
Amplia
Granulocitos, monocitos, eritrocitos LB
LB
Amplia
Amplia
NK, algunos LT
NK, algunos LT
Adhesin, transduccin de seales

CAM. Con CD18 forma Mac-1
Receptor de iC3b
Receptor de baja afinidad para IgG
Regulacin de activacin
Regulacin de activacin?
Receptor de C3d y virus de Epstein Barr
Ligando de CD23
CAM
Receptor de IgE de afinidad intermedia
Con cadena 70 KDa forma
receptor alta afinidad IL-2
CAM con CDw49a,b,c,d,e,f
Receptor de C3b
Une CD40-L. Activacin de LB.
CAM
Regulador del complemento
CD, "cluster designation"; CAM, molcula de adhesin celular; LB, linfocitos B; LT, linfocitos T; LFA,
antgeno asociado a funcin de linfocito; ICAM, molcula de adhesin intercelular; VLA, antgeno muy
tardo; DAF, "Decay Accelerating factor"; NK, clulas "Natural Killer".
subpoblaciones de clulas B, LB1 y LB2: Entre

otros aspectos la subpoblacin B1 presenta receptores BcR polirreactivos de baja afinidad y se encuentra mayoritariamente en el peritoneo y en el
bazo. La subpoblacin B2, constituye la mayor
parte del repertorio linfocitario B y se encuentra
fundamentalmente en los rganos linfoides secundarios y en la sangre (ver captulo 6).
La mayora de los linfocitos B1 se caracteriza por la expresin del marcador CD5
(glicoprotena monomrica de 67 kDa, propia de
linfocitos T) y aunque su funcin es todava un
misterio, se ha sugerido que la activacin de estas
clulas conduce a la produccin de anticuerpos que
(centroblastos) son IgM+, IgD- CD10+, CD23-,

CD38+ y CD77-; luego en la zona clara del mismo centro las clulas (centrocitos) presentan el
siguiente fenotipo; IgG+ o IgM+ o IgE+, CD10+,
CD23-, CD38+ y CD77-. Durante la etapa de precursor del centro germinal y centroblasto ocurre
el fenmeno de mutacin somtica y entre la etapa de centroblasto y de centrocito se produce el
fenmeno de cambio de clase (ver captulo 6).
La ltima etapa es en la que se generan clulas
plasmticas (IgG+ o IgA+ o IgE+, CD10-,
CD23-, CD38+ y CD77-) y clulas de memoria
(IgG+ o IgA+ o IgE+, CD10-, CD23-, CD38- y
CD77-). Por otra parte, se distinguen dos
60
Sin ttulo-2
60
5/26/06, 10:25 AM
Figura 3-5. Maduracin de los linfocitos B en el centro germinal de los folculos linfticos. Los LB vrgenes toman contacto
con el antgeno en la zona oscura del centro germinal (del folculo linfoide). En esta zona ocurre la expansin clonal y mutacin
somtica. Luego en la zona clara del centro germinal se produce el cambio de clase, y se generan clulas B de memoria (recirculan)
y clulas plasmticas (algunas migran a la mdula sea). CDF, clula dendrtica folicular.
proporcionan proteccin contra infecciones

bacterianas durante la vida fetal, mucho antes que
el repertorio linfocitario de .la respuesta inmune
adquirida sea completamente funcional. Adems,
en el repertorio adulto, los linfocitos B1 dan origen a clulas plasmticas que secretan IgM y a
una fraccin importante de clulas plasmticas
productoras de IgA en el intestino. De hecho, la
transferencia pasiva de linfocitos peritoneales B1
en ratones Scid (que sufren de una severa
inmunodeficiencia combinada), reconstituye la
produccin de IgA contra muchas bacterias intestinales. Por otro lado la transferencia pasiva de
clulas de hgado fetal o del omentum intestinal,
a ratones irradiados, rpidamente reconstituye la
subpoblacin B1, mientras la transferencia de de
precursores de mdula sea adulta reconstituye la
subpoblacin B2 pero no la B1.
En el repertorio linfocitario adulto, los
linfocitos B 1 son bastante frecuentes en la poblacin B que sufre neoplasias y en aqullos que reconocen una gran variedad de autoantgenos y reaccionan cruzadamente con antgenos bactarianos
como polisacridos y lipopolisacridos. El repertorio de receptores BcR es bastante ms limitado
en los linfocitos B1 que en los linfocitos B2, sus
reordenamientos gnicos VH son ms restringidos, y, como no expresan la enzima TdT (Terminal deoxinucleotidil Transferasa), carecen de regiones N en las uniones VDJ.
Por su parte, la maduracin de las clulas T

se puede separar tambin en dos estadios previos
al LT maduro: Pro-T que son TdT+, HLA-DR+,
CD1+, CD2+, CD5+, CD7+, C-kit+ y CD3
citoplasmtico +, y Pre-T que son TdT+, CD1+,
CD4+, CD5+, CD7+, CD8+, CD3 citoplasmtico
+ (ver captulo 7). Las clulas T maduras
presentan el siguiente inmunofenotipo: CD2+,
CD3+, CD4+ CD8+, CD7+, TCR+ (ver
captulo 7). Por otra parte, en base al diferente
patrn de secresin de citoquinas, se distinguen
dos subpoblaciones de clulas T helper (CD4+),
LTh1 y LTh2 (ver captulos 11 y 14).
Mayores antecedentes sobre la diferenciacin de
los linfocitos B y T, sern descritos en el captulo 13.
Reconocimiento antignico
Los LB y LT presentan receptores para
antgenos especficos, como son la IgM de membrana que forma parte del BCR (Receptor de clulas B) y el TCR (Receptor de clulas T), respectivamente (ver captulos 6 y 7).
Adems de presentar un receptor diferente,
las clulas B y clulas T reconocen el antgeno en
diferente forma; en el caso de los LB las IgM de
membrana reconocen el antgeno directamente, sin
intervencin de otra clula, en cambio en el caso
de los LT los TCR reconocen pptidos extraos
que son presentados por otra clula, unidos a mo-
61
Sin ttulo-2
61
5/26/06, 10:25 AM
lculas MHC, clase I si se trata de LTc y clase II

si es LTh. Estos pptidos se originan durante el
procesamiento del antgeno en clulas blanco
(cuando son presentados en molculas MHC clase I), y en las denominadas clulas presentadoras de antgeno (cuando son presentados en molculas MHC clase II). En el captulo 9 se explica en detalle el procesamiento de los antgenos a
travs de dos vas diferentes (endgena y
exgena) segn los pptidos sean presentados a
LTc o LTh. Adems se explica el concepto de
restriccin MHC.
Las clulas NK, que no expresan
inmunoglobulinas ni TCR, poseen dos tipos de
receptores: de activacin (KAR: "Killer
Activating Receptor") y de inhibicin (KIR:
"Killer Inhibition Receptor"). Los KAR reconocen patrones moleculares hidrocarbonados caractersticos de microorganismos y los KIR reconocen molculas MHC propias en otras clulas; si
stas son propias transducen seales de inhibicin de los mecanismos de citoxicidad (ver captulo 19).
Figura 3-6. Esquema de la seleccin clonal de las clulas B

y clulas T. Luego que un antgeno interacciona con la clula
T y/o B que posee el receptor que le es especfico, el linfocito
es activado, sufriendo una transformacin blstica. La activacin linfocitaria lleva a una proliferacin clonal y diferenciacin celular con produccin de clulas efectoras y de memoria, tanto en la lnea celular B como T.
Activacin de los linfocitos

La unin del antgeno con el receptor especfico de una clula T o B activa al linfocito mediante un delicado proceso bioqumico que implica transduccin de seales al interior de la
clula, generacin de segundos mensajeros (IP3,
DAG, Ca2+) y fosforilacin de protenas (ver captulo 10). Protenas fosforiladas, se unen a secuencias reguladoras de genes que participan en
la activacin de los linfocitos. Como consecuencia de la activacin, el linfocito sufre un proceso
denominado transformacin blstica que implica una serie de cambios estructurales y
bioqumicos que terminan en la formacin de una
clula grande, de citoplasma basfilo (por aumento de retculo endoplsmico), ncleo laxo, semejante a un linfoblasto. La activacin linfocitaria
produce una amplificacin clonal (etapa de proliferacin de clulas con la misma especificidad antignica), posteriormente ocurre una produccin de clulas efectoras, responsables de
la sntesis de anticuerpos (clulas plasmticas) y
de la inmunidad mediada por clulas (LT CD4+
y LT CD8+) y clulas de memoria (estas dos
ltimas como parte de la etapa de maduracin)
(figura 3-6).
2.3. Sistema fagoctico mononuclear

Dada su relacin ontognica, y sus caractersticas estructurales y funcionales, a los monocitos
y macrfagos se les agrupa en el denominado Sistema fagoctico mononuclear (SFM), antes llamado sistema retculo endotelial. Se describir
en este punto a las clulas dendrticas (DC,
Dendritic Cells) por su origen comn, aunque
no son principalmente fagocticas.
Estas clulas presentan un amplio espectro
de funciones: (a) remocin de clulas muertas,
senescentes, extraas, y alteradas; (b) regulacin
de la funcin de otras clulas; (c) procesamiento
y presentacin de antgenos; (d) participacin en
reacciones inflamatorias; (e) destruccin de
microorganismos y (f) destruccin de clulas
neoplsicas.
2.3.1. Monocitos
Los monocitos presentan un dimetro de 1215 m (figura 3-7) y representan un 4-10% de los
62
Sin ttulo-2
62
5/26/06, 10:25 AM
(testculo, ovario, tero, oviductos), hueso

(osteoclastos) e intestino. Tambin se encuentran
en la leche materna.
leucocitos sanguneos (tabla 3-2). En su citoplasma tienen grnulos azurfilos o primarios que
contienen hidrolasas cidas, que junto con los
mecanismos oxidativos, participan en la destruccin de las partculas fagocitadas; al respecto es
vlido lo descrito antes para los neutrfilos.
Receptores de fagocitos mononucleares

Los macrfagos y monocitos presentan una
gama importante de receptores: para regin Fc
inmunoglobulinas, complemento, lipoprotenas,
citoquinas y factores quimiotcticos, entre otras
molculas (tabla 3-4).
Las Molculas de Adhesin Celular (CAM)
participan en las uniones clula-clula y clulamatriz. En los monocitos y macrfagos, entre otras
molculas de adhesin se han descrito las molculas LFA1 (CD11a/CD18), Mac-1 (CD11b/
CD18) y p150,95 o CR1(CD11c/CD18) de la familia integrinas y las molculas CD2 e ICAM-1
(CD54) de la superfamilia de las inmunoglobulinas
(SFIg) (ver captulo 12).
2.3.2. Macrfagos
Los macrfagos pueden ser residentes (fijos
en tejidos) o libres. Entre los primeros destacan:
a) Macrfagos intestinales. Los macrfagos se
encuentran principalmente en la lmina propia del tracto gastrointestinal. Las reas
corticales ricas en linfocitos asociados a intestino (GAL) y las placas de Peyer contienen muy pocos macrfagos. Respecto a su
funcin podran participar en la presentacin
antignica, en la fagocitosis de bacterias y
clulas muertas.
b) Macrfagos del hgado. Las clulas de
Kupffer se ubican en las paredes
vasculares de los sinusoides hepticos.
Pueden fagocitar un espectro amplio de
clulas y partculas, entre ellos, liposomas,
bacterias, parsitos, virus, glbulos rojos
y plaquetas opsonizadas con IgG y/o complemento.
c) Macrfagos cerebrales. Estos macrfagos
son llamados clulas microgliales. La funcin
de estos macrfagos no es bien conocida,
posiblemente participan en la induccin de la
respuesta inmune y probablemente modulen
la funcin neuronal.
d) Macrfagos peritoneales. stos se encuentran entre los macrfagos de serosas; tienen
capacidad para destruir clulas neoplsicas y
bacterias. En casos de peritonitis o ascitis
Figura 3-7. Esquema de la estructura subcelular de

monocitos y macrfagos. Los monocitos son precursores sanguneos de los macrfagos tisulares. Ambos tipos de clulas
presentan un ncleo excntrico arrionado. En la indentacin
presentan el aparato de Golgi. Ambos poseen escasa cantidad
de retculo endoplsmico rugoso y las mitocondrias estn distribuidas en el citoplasma. Los macrfagos son de mayor tamao que los monocitos y presentan diferente forma y funciones segn el tejido en que estn ubicados. En los macrfagos
es posible observar microfilamentos, liposomas, gotas de grasa y vesculas endocticas conteniendo molculas solubles y
partculas de distintos tamaos que han sido internalizadas.
Despus de salir de la mdula sea los

monocitos circulan aproximadamente 8 horas; al
igual que los neutrfilos, en la sangre se reconocen dos compartimentos, circulante y marginal;
luego pasan a los tejidos donde se transforman en
macrfagos. En relacin a los monocitos los
macrfagos son de mayor tamao y presentan
mayor capacidad fagoctica y microbicida. Pueden permanecer vivos entre algunos meses y aos.
Se encuentran en varios rganos, destacando su
presencia en el hgado (clulas de Kupffer), riones, pulmones (macrfagos alveolares e
intersticiales), serosas (peritoneal y plural) bazo,
ganglios linfticos, cerebro, aparato reproductivo
63
Sin ttulo-2
63
5/26/06, 10:25 AM
Tabla 3-4. Receptores de macrfagos y monocitos

Receptores de Inmunoglobulinas
FcRI (CD64)
FcRII (CD32): A, B y C
FcRIII (CD16): A y B
FcRI
FcRI
FcRII (CD23): A y B
FcR
Receptores del Complemento
CR1 (CD35)
CR3 (CD11b/CD18)
Receptores de Citoquinas
TNF-R
IL-1R
M-CSFR
IFNR
Receptores de factores quimiotcticos
De pptidos formilados
De quimioquinas
De C5a
Receptor de lipopolisacrido (CD14)
Receptores de lipoprotenas
LDL-R
Receptor scavenger (de LDL modificada)
Receptores de hormonas
De Glucocorticoides
De Insulina
De Estrgenos
Otras hormonas
Receptor de transferrina
Receptor de lactoferrina
Receptor de fibronectina
ganos linfoides secundarios; all atrapan material

extrao: macrfagos de los sinusoides esplnicos
y de los senos medulares en los ganglios linfticos.
Los macrfagos tienen una vida vida media
mucho ms larga que los neutrfilos en los tejidos
(meses e incluso aos).
Una subpoblacin de los monocitos y
macrfagos, expresa en su superficie molculas
de clase II del Complejo Principal de
Histocompatibilidad (MHC), que participan en
la presentacin del antgeno a los linfocitos T
"helper" (LTh) (ver captulos 8 y 9). Por otra parte, sintetizan y secretan citoquinas como
Interfern (IFN) y , IL-1 y Factor de necrosis
tumoral (TNF).
maligna aumenta el nmero de macrfagos.

Macrfagos de rganos reproductivos. Los
testculos contienen un gran nmero de
macrfagos. Pueden participar en la fagocitosis de espermios moribundos no eyaculados y en la destruccin de microorganismos.
En los ovarios los macrfagos pueden participar en la fagocitosis de clulas degenerativas
del cuerpo lteo.
f) Macrfagos del hueso. Los osteoclastos se
encargan de la resorcin sea.
g) Macrfagos del tejido conjuntivo:
Histiocitos.
h) Macrfagos renales. Cluas mesangilales de
los glomrulos renales
e)
Los macrfagos libres estn situados en r-
64
Sin ttulo-2
64
5/26/06, 10:25 AM
receptor de manosa, quimioquina CCR5 (ver

captulo 11) y FcR, y no expresan la molcula
de adhesin ICAM-1 y molcula coestimuladora
B7. En el paso a DC maduras participan LPS
(Lipopolisacrido) de la pared bacteriana,
citoquinas como IL-1 y TNF. Las DC maduras expresan en su superficie altos niveles de
molculas MHC clase II, de molculas
coestimulatorias (CD40, CD86/B7-2 y B7-1),
de molculas de adhesin (ICAM-1 y LFA-3) y
de receptores para quimioquinas como CCR7
(ver captulo 11).
In vivo, factores, tanto de tipo infecciosos
como inflamatorios, influyen en estimular la maduracin y el movimiento de las DC hacia los tejidos linfoides secundarios.

Junto a los monocitos y macrfagos las DC
son clulas presentadoras de antgeno, pero este
ltimo tipo celular es el que presenta una mayor
capacidad, siendo muy eficiente en el inicio y modulacin de la respuesta inmune. Morfolgicamente se caracterizan porque del cuerpo celular
salen prolongaciones alargadas.
Durante su maduracin sufren una serie
de cambios inmunolgico-funcionales que les
permiten una mayor adaptacin a las circunstancias, as consiguen una mayor especializacin en sus funciones de activacin de
linfocitos T.
Se ha demostrado la existencia de distintas
lneas de DC, con diferentes estadios madurativos
y vas de migracin, lo que implica una distribucin anatmica diferente. A partir de la clula
pluripotencial CD34+ y en presencia de GM-CSF
y TNF se diferencia en: (a) CD1+, CD14-, de
las que se originan las clulas de Langerhans (DC
de la piel) y (b) CD1-, CD14+ que dan origen a
las DC mieloides.
Las clulas de Langerhans se trasladan hacia tejidos no vascularizados como la epidermis
en la piel, y las DC mieloides lo hacen hacia zonas vascularizadas, localizndose en los intersticios (DC intersticiales). Una vez que las clulas
de Langerhans han incorporado el antgeno en la
piel, migran por la linfa hacia los ganglios
linfticos donde lo presentan a las LT; las DC
intersticiales, por su parte, migran hacia el bazo a
travs de la sangre.
Segn su distribucin las DC se clasifican
en: (a) DC del tejido linfoide (DC
interdigitantes); existen en la mdula sea y timo
y se denominan de la zona marginal, cuando
estn presentes en bazo, (b) DC de los tejidos
slidos no linfoides (clulas de Langerhans,
cuando se localizan en la epidermis y clulas
intersticiales a las localizadas en el corazn y
riones) y (c) DC de fluidos a las que se encuentran en trnsito, tanto en los vasos linfticos
aferentes como en la sangre.
La maduracin de la DC es fundamental
en la iniciacin de la respuesta imune. Los estudios de maduracin in vitro de DC se realizan
a partir de monocitos obtenidos de sangre
perifrica e incubados en presencia de GM-CSF
e IL-4; se obtiene as una poblacin de DC
inmaduras, clulas que expresan en su superficie molculas MHC clase II en baja densidad,
2.4. Granulocitos
Como se indic antes, en la serie
granuloctica, a partir del estadio madurativo de
mielocito se reconocen tres lneas celulares diferentes: neutrfilos, eosinfilos y basfilos. En la
tabla 3-2 se muestra el porcentaje que cada lnea
celular ocupa entre los leucocitos en los adultos y
el nmero absoluto que representa.
2.4.1. Neutrfilos. En los adultos, los
neutrfilos maduros representan aproximadamente el 65% de los 4-10 x 103 glbulos blancos o leucocitos por microlitro de la sangre.
Los neutrfilos tienen un dimetro de 1015 m y un ncleo segmentado con 2-5 lbulos
(figura 3-8). En su citoplasma se han descrito
cuatro tipos de grnulos, los primarios o
azurfilos (lisosomas), secundarios (especficos), terciarios y vesculas secretoras (tabla 35). Los grnulos primarios, son escasos en los
estadios maduros, y contienen enzimas y protenas microbicidas (entre otras, peroxidasa,
lisozima, protenas catinicas) protenas
(elastasa, catepsina G y otras protenas) e
hidrolasas cidas (entre otras, N-acetilglucuronidasa y catepsinas B y D). Los grnulos
secundarios, son los ms numerosos en los
neutrfilos maduros; contienen lisosima,
colagenasa, fosfatasas alcalina, lactoferrina y
otras enzimas y protenas. Los grnulos terciarios contienen principalmente gelatinasa. Las
vesculas secretoras, al parecer formadas por
endocitosis, contienen algunas protenas
plasmticas.
65
Sin ttulo-2
65
5/26/06, 10:25 AM
Tabla 3-5. Contenido de los grnulos de los neutrfilos humanos

Grnulos Primarios Grnulos Secundarios
Grnulos Terciarios
CD11b (Mac-1)
CD11b (Mac-1)
Citocromo b558
Citocromo b558
Receptor de FMLP
Receptor de FMLP
Receptor de laminina Receptor de laminina
Receptor de uPA
CD15
CD66a
CD666
Subunidad de Protena G
Antgeno NB1
RAP1, RAP2
Receptor de Trombospondina
Receptor de TNF
Receptor de Vitronectina
Membrana
CD63
CD66c
CD68
Vesculas Secretoras
CD11b (Mac-1)
Citocromo b558
Receptor de FMLP
Receptor de uPA
Fosfatasa alcalina
CD10, CD13, CD45
CD16
DAF (CD55)
CR1 (CD35)
Matriz
Agentes microbicidas
Lisozima
Lisozima
Mieloperoxidasa
Colagenasa
Defensinas
Protenas catinicas
Protena bactericida
permeabilizante (BPI)
Lisozima
Proteasas Elastasa
Catepsina G
Proteinasa 3
Hidrolasas cidas N-Acetilglucuronidasa
Catepsinas B y D
-Glucuronidasa
-Glicerofosfatasa
-Galactosidasa
-Glucosaminidasa
-Fucosidasa
-Manosidasa
N-Acetil--glucosaminidasa
Otros
Sialidasa
Azurocidin
cido mucopolisacrido
Protena ligante de heparina
Factor inactivador de C5a
Sialisidasa
Pro-uPA
Pro-uPA/uPA
Apolactoferrina
Gelatinasa
Protenas plasmticas:
2-Microglobulina Acetiltransferasa Tetranectina,
Histaminasa
Albmina,
Heparinasa
Otras
Protena ligante de Vitamina B12
Inhibidor de protena Kinasa C
Otros
FMLP, pptido formil-metil-leu-phe; uPA, Activador del plasmingeno tipo uroquinasa.
66
Sin ttulo-2
66
5/26/06, 10:25 AM
factor, (DAF, CD55), Antgeno lencocitario comn (CD45) (Protena tirosina fosfatasa).
Una vez que los neutrfilos salen de la mdula sea, permanecen en circulacin aproximadamente 7 horas, para luego pasar al azar a los
tejidos, donde subsisten vivos 2-3 das. La produccin y destruccin diaria de neutrfilos es de
0,9x109/Kg de peso.
Para que los neutrfilos puedan cumplir su
funcin de fagocitar y destruir las partculas ingeridas deben movilizarse al foco infeccioso.
Figura 3-8. Esquema de la estructura subcelular de un
neutrfilo. Clula de 10-15 m. Debido al pH neutro de su
citoplasma y contenido granular, stos no se tien con la clsica tincin hematolgica de May Grnwald-Giemsa. Una caracterstica de los neutrfilos maduros es su ncleo segmentado.
El citoplasma contiene un pequeo aparato de Golgi y retculo
endoplsmico rugoso, y escasas mitocondrias y ribosomas. Los
neutrfilos presentan dos tipos de grnulos, primarios y secundarios; estos ltimos ms numerosos en neutrfilos maduros. Adems contienen numerosos y pequeos grnulos de
glicgeno.
Quimiotaxis
El movimiento de los neutrfilos al sitio de
infeccin es dirigido por un gradiente qumico
(quimiotaxis). Entre otros factores quimiotcticos
(tabla 3-6), para los que estos leucocitos poseen
receptores, destacan algunas protenas del complemento (C5a, C3a), pptidos formilados (Ej. Nformil-met-leu-phe, FMLP) y lpidos derivados de
las bacterias, factor plaquetario 4 (PF4),
metabolitos de la va de la lipoxigenasa del
metabolismo del cido araquidnico, especialmente el leucotrieno B4 (LTB4), y las llamadas
quimioquinas, entre ellas la IL-8. Varios de estos
factores han sido clonados y secuenciados. A modo
de ejemplo el receptor de C5a es una protena de
transmembrana de 30 kDa y presenta tres loops
extracelulares e intracelulares, siete dominios
transmembrana, el extremo carboxilo citoplasmtico y el extremo amino extracelular.
Algunas molculas expresadas en la membrana de los neutrfilos son: (a) molculas de adhesin (ver captulo 12), entre ellas LFA-1 (CD11a),
Mac-1 (CD11b), p150, 95 (CD11c), 2- integrina
(CD18), ICAM-3 (CD50), L-selectina (CD62b), (b)
receptores: FcRI (CD64), FcRII (CD32), FcRIII
(CD16), Receptor para C5a (CD68), receptor para
G-CSF (CD114), (c) ectoenzimas: aminopeptidasa
N (CD13, inactiva IL-8), endopeptidasa (CD10,
inactiva FMLP) y (d) otros: Decay accelerating
Tabla 3-6. Factores quimiotcticos para neutrfilos

Factor quimiotctico
Clsicos
Fuente
Pptidos formilados
Fragmento C5a
Leucotrieno B4 (LTB4)
Factor activador de plaquetas (PAF)
Bacterias
Activacin del Complemento
Metabolismo del cido araquidnico
Metabolismo de fosfatidilcolina
Quimioquinas C-X-C
Interleuquina 8 (IL-8)
Linfocitos T, monocitos, clulas

endoteliales, otras clulas.
Grnulos de plaquetas
Clulas endoteliales, monocitos,
otras clulas.
Clulas epiteliales
-tromboglobulina
gro-
ENA-78
Quimioquinas C-C
MIP-1
Monocitos
67
Sin ttulo-2
67
5/26/06, 10:25 AM
Los factores quimiotcticos actan a bajas

dosis (0,1-1mM). El efecto biolgico de los factores quimiotcticos es lograr una migracin dirigida de los neutrfilos. La respuesta leucocitaria
a los factores quimiotcticos es regulada positiva
o negativamente por varios estmulos fisiolgicos
y farmacolgicos. Varias citoquinas, como por
ejemplo, TNF e IFN favorecen la quimiotaxis.
En el caso del IFN participa aumentando la
hidrlisis de fosfatidilcolina por la fosfolipasa D.
La desensibilizacin celular al estmulo del factor
quimiotctico puede ocurrir por aumento de cAMP
o degradacin del factor quimiotctico.
Entre los receptores de opsoninas, se distinguen: (i) los receptores de fragmento Fc de IgG
(FcR) e IgA (FcR) unidos a un dmero de cadenas , los receptores del complemento y otros
receptores (de colectinas y de protenas
plasmticas). Los receptores de Fc son miembros
de la superfamilia de las inmunoglobulinas (ver
captulo 6), con 3 (FcRIA) o 2 (otros receptores
Fc) dominios tipo inmunoglobulina extracelulares, un dominio transmembrana y una corta cola
citoplasmtica; FcRIIIB, unido a glicofosfatidilinositol (GPI), es una excepcin. En la tabla
3-7 se muestra en diferentes FcR y el FcR indicado las clulas que los presentan:
Los receptores del complemento incluyen
CR1, una protena de transmembrana que une C3b,
y dos integrinas CD11b/CD18 y CD11c/CD18, llamadas tambin CR3 y CR4, respectivamente. Estos dos ltimos receptores unen iC3b, molcula
derivada de C3b y se une covalentemente a la superficie celular.
Otros receptores unen un grupo de molculas llamadas colectinas, entre ellas la protena que
une manosa (MBL), molcula que participa en la
activacin del sistema del complemento y la protena C reactiva (PCR) que se puede unir por ejemplo al carbohidrato C del Streptococcus
pneumoniae. Adems de receptores para las
colectinas tambin existe receptores para algunas
protenas plasmticas que se pueden unir a los
microorganismos, por ejemplo receptores para
fibringeno y fibronectina.
Receptores que participan en la fagocitosis

Una etapa inicial de la fagocitosis es el reconocimiento, por parte de la clula fagoctica, de la
partcula a ser fagocitada. Para ello las clulas
fagocticas poseen 2 grupos de receptores, capaces de reconocer: (a) ligandos propios de los organismos o clulas a fagocitar y (b) molculas que
se han unido a ellas y que favorecen la fagocitosis
(opsoninas).
Entre los receptores que unen molculas no
opsnicas y que se presentan fundamentalmente
los macrfagos, se encuentran: (i) los receptores
scavenger que unen varios ligandos, entre otros,
protenas modificadas, polianiones (incluye cidos nucleicos), fosfolpidos cidos (incluye
lipopolisacrido de bacterias Gram negativas y
cido lipoteicoico de bacterias Gram positivas y
(ii) el receptor de manosa, que une carbohidratos.
Tabla 3-7. Receptores de la regin Fc de IgG e IgA

Receptor
CD
Clulas
FcRI*
CD64
FcRIIA
CD32
FcRIIB
CD32
FcRIIIA
CD16
FcR
CD89
Monocitos, macrfagos,
Neutrfilos maduros tratados con IFN
Neutrfilos maduros, monocitos
Macrfagos, plaquetas
Monocitos, macrfagos
Linfocitos B, mastocitos
Macrfagos, clulas NK
Mastocitos
Granulocitos, monocitos
Macrfagos
* Tres locus gnicos; I, alta afinidad; II, afinidad intermedia; III, baja afinidad
68
Sin ttulo-2
68
5/26/06, 10:25 AM
DAG activa la protena kinasa C que fosforila

protenas que participan en los procesos de
degranulacin y secrecin. La fosfolipasa D
escinde fosfatidilcolina a cido fosfatdico y colina; su activacin se asocia a la unin de ligandos
a receptores del complemento.
Transduccin de seales en la fagocitosis

Se describir el mecanismo de transduccin
de seales asociados a la fagocitosis mediada por
FcR. Los receptores FcRI, FcIIA y FcIIIA
comparten la capacidad para activar la cascada de
tirosina kinasa. Los dominios ITAM (inmunetyrosine activation motifs) de la cadena de los
receptores FcR pueden ser fosforilados por
tirosina kinasa de la familia SyK. Esta etapa es
fundamental para la ingestin y polimerizacin de
actina. Paralelamente, la unin ligando-receptor
activa la fosfolipasa C la cual desdobla el fosfatidil
inositol-4,5-difosfato (PIP2) en inositol-1,4,5trifosfato (IP3) y diacilglicerol (DAG) (figura
3-9). El IP3 permite que se libere Ca2+ de los depsitos citoplasmticos, el que tiene dos acciones:
(a) desencadena el ordenamiento de los filamentos de actina y de la protena contrctil miosina,
responsables del movimiento de los neutrfilos
y (b) activa la fosfolipasa A2 que convierte los
fosfolpidos de membrana en cido araquidnico
a partir del cual se obtienen otros metabolitos. El
Adhesin de neutrfilos al endotelio

Para que los neutrfilos lleguen a los tejidos
infectados, junto recibir la seal quimiotctica, stos deben unirse al endotelio, luego rodar sobre
ste (rolling), sufrir un proceso de activacin
adicional y luego participar de un proceso de migracin transendotelial. En este proceso tienen
importante participacin algunas molculas de
adhesin celular (captulo 12), expresadas en forma constitutiva e inducida en la membrana de los
neutrfilos y clulas endoteliales.
Aproximadamente la mitad de los neutrfilos
circulantes forman parte del pool marginal, que
mantienen interaccin intermitente con el
endotelio. Las molculas de adhesin de la fami-
Figura 3-9. Activacin de los neutrfilos a travs de FcR. La unin de bacterias opsonizadas con IgG a FcR favorece la
fosforilacin de las cadenas del FcR por protena kinasa. Adems se activa la fosfolipasa C que desdobla el fosfatidil inositol 4,5-difosfato (PIP2) en inositol-1,4,5-trifosfato (IP3) y diacilglicerol (DAG). La figura muestra esquemticamente la participacin
de los segundos mensajeros (IP3, Ca2+ y DAG).
69
Sin ttulo-2
69
5/26/06, 10:25 AM
lia selectinas (L-selectinas, CD62L en leucocitos

y E-selectinas, CD62E en clulas endoteliales) y
sus ligandos, carbohidratos sialilados, son responsables del rolling de los neutrfilos sobre el
endotelio. La interaccin de los factores
quimiotcticos con sus respectivos receptores inicia el proceso de transduccin de seales en los
neutrfilos, lo que inicialmente se asocia con expresin de molculas de adhesin de la familia
integrinas, especialmente LFA-1 (CD11a-CD18)
que se une a su ligando de la superfamilia de las
inmunoglobulinas ICAM-1 (CD54) en las clulas endoteliales. Este ltimo tipo de interaccin
resulta en un marcado incremento de la adhesin
de los neutrfilos al endotelio y trmino del
rolling. Luego los neutrfilos migran entre las
clulas endoteliales al tejido.
con IgG (subclases 1 3) y/o fracciones del

complemento (C3b y/o C4b). Los neutrfilos al
igual que los monocitos y macrfagos, poseen
receptores para la regin Fc de IgG (FcR) y
para C3b y C4b (tabla 3-8). La unin de estas
opsoninas con el receptor respectivo, activa la
clula fagoctica, sta emite prolongaciones que
engloban al microorganismo. El fagosoma formado por la membrana plasmtica, posteriormente se fusiona con la membrana de los grnulos citoplasmticos que descargan su contenido enzimtico en el interior del fagosoma (figura 3-10). El DAG, a travs de la protena
kinasa C que fosforila protenas, gatilla la
degranulacin.
Fagocitosis
La endocitosis, proceso por el cual el material es introducido en la clula, puede tomar la
forma de una pinocitosis (bebiendo por clulas) y
fagocitosis (comiendo por clulas). La fagocitosis
es visible al microscopio ptico; la pinocitosis se
refiere a la ingestin de macromolculas. Ambos
procesos involucran invaginacin de la membrana celular y la formacin de vesculas o vacuolas
(fagosomas). La mayora de las clulas pueden
realizar pinocitosis, pero la fagocitosis es un proceso caracterstico de los neutrfilos, monocitos
y macrfagos, y, en mucho menor grado, de los
eosinfilos y basfilos.
La fagocitosis de los microorganismos se ve
favorecida si stos estn recubiertos (opsonizados)
Figura 3-10. Esquema de fagocitosis. Se muestra el proceso

de fagocitosis de bacterias opsonizadas. La unin de grnulos
primarios y especficos con el fagosoma forman la vacuola
digestiva. La degradacin bacteriana conduce a la formacin
de un cuerpo residual y a la expulsin (exocitosis) de componentes no degradables.
Tabla 3-8. Receptores para inmunoglobulinas y fracciones del complemento en los

granulocitos y monocitos/macrfagos.
FcRI
FcRII
FcRI
FcRII
FcRIII
C5aR
CR1
CR3
Neutrfilos
Eosinfilos
Basfilos
+
+
-
+?
-
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
Monocitos/
macrfagos
FcR, Receptor para IgE (I, alta afinidad; II, afinidad intermedia); Fc, Receptor para IgG (I, alta afinidad; II, afinidad intermedia; III, baja afinidad); C5aR, receptor de C5a; CR1, receptor de C3b; CR3,
receptor de iC3b.
70
Sin ttulo-2
70
5/26/06, 10:25 AM
Antes se indic el contenido de cada uno de los tres

tipos de grnulos de los neutrfilos (tabla 3-5). As
por ejemplo los grnulos azurfilos contienen
componentes antibacterianos; tambin contienen
elementos como elastasa que puede favorecer el
movimiento de los neutrfilos al hidrolizar algunos componentes de la matriz extracelular. Los
grnulos secundarios son liberados ms fcilmente
de los neutrfilos, conteniendo entre otras molculas, algunas que activan el sistema del complemento. Tambin contienen colagenasa, que al igual
que la elastasa puede favorecer el movimiento de
las clulas fagocticas. Por otra parte, la
apolactoferrina al unir hierro puede tener un efecto antimicrobiano, entre otras razones por privar
de este elemento a las bacterias. Por su parte, la
gelatinasa contenida en los grnulos terciarios
puede participar, junto a otros componentes, en la
modificacin de la matriz extracelular durante el
desplazamiento de los neutrfilos. En otro orden,
protenas de membrana de los grnulos terciarios
y de las vesculas secretoras, pueden aumentar su
expresin en la superficie celular, despus de la
activacin.
a) Mecanismos antimicrobianos dependientes

del oxgeno. Durante la fagocitosis, proceso dependiente de energa, se produce un aumento del
consumo de oxgeno, de la oxidacin de la glucosa y de la produccin de metabolitos del oxgeno,
fenmeno tambin denominado estallido respiratorio (figura 3-11). La generacin de estos ltimos se debe a la activacin de la NADPH oxidasa
que al oxidar el NADPH reduce el oxgeno
molecular a in superxido (O-2), el que se convierte en perxido de hidrgeno (H2O2). Los
metabolitos del oxgeno pueden actuar a travs de
un mecanismo dependiente o independiente de
mieloperoxidasa (MPO), enzima presente en alta
concentracin en los grnulos primarios, los que
son degranulados al interior del fagosoma (figura
3-11). La MPO, en presencia de un in haluro
como Cl- (o Br-), transforma el H2O2, generada por
mecanismos dependientes de oxgeno pero independiente de MPO, en cido hipocloroso (HOCl),
un potente oxidante y antimicrobiano,
(antibacteriano, antifngico, antiviral y
antimicoplasma). Los radicales superxido e
hidroxilo, por s solos tienen accin microbicida.
La oxidasa dependiente de NADPH, es un
complejo multienzimtico que incluye dos protenas de membrana (de dos tipos de grnulos: vesculas secretoras y grnulos secundarios) y tres
citoslicas, cuando la clula est en reposo (figura 3-12). El componente de membrana es un
heterodmero formado por una protena de 91 kDa
(gp91phox) y una protena de 22 kDa (p22phox).
Estas protenas, junto con flavin adenin
dinucletido (FAD) forman un flavocitocromo
denominado citocromo b558. Adicionalmente en la
membrana participa una protena de unin de
nucletidos de guanina denominada rap1. La
subunidad de 91 kDa presenta el sitio de unin
para el NADPH. Ambas subunidades presentan
grupos HEME. El componente citoplasmtico est
formado por tres protenas independientes:
p40phox, p74phox y p67 phox. Adems participa
otra protena de unin de nucletidos de guanina,
rac2; en reposo una GDP y cuando la clula es
activada une GTP.
Precozmente durante la activacin, las vesculas secretoras y posteriormente los grnulos
secundarios, se fusionan con la membrana
plasmtica, la cual durante la fagocitosis se
invagina y por tanto la membrana de los
fagosomas presentar las protenas de membrana de la NADPH oxidasa. Como consecuencia
de la activacin de los neutrfilos, proceso en
Mecanismos microbicidas
Una vez fagocitados los microorganismos,
stos son destruidos por mecanismos dependientes e independientes del oxgeno, tambin denominados mecanismos oxidativos y no oxidativos,
respectivamente (tabla 3-9).
Tabla 3-9. Mecanismos antimicrobianos de
los neutrfilos
Dependientes del oxgeno
Mediados por mieloperoxidasa
cido hipocloroso (HOCl)
Independientes de mieloperoxidasa
Perxido de hidrgeno (H2O2)
In superxido (O2-)
Otros?
Independientes del Oxgeno
pH cido
Lisozima
Lactoferrina
Defensinas
Protena bactericida permeabilizante (BPI)
Protenas catinicas de los grnulos
71
Sin ttulo-2
71
5/26/06, 10:25 AM
Figura 3-11. Mecanismos microbicidas oxidativos. Una oxidasa cataliza la reduccin de oxgeno a in superxido (O-2) a expensas del NADPH. El NADPH es regenerado a travs de la va de las hexosas. El O-2 es transformado en perxido de hidrgeno
(H2O2) y O2 por la superxido dismutasa (SOD). Reacciones posteriores que comprometen al H2O2 y al O-2, llevan a la formacin
de dos tipos de compuestos microbicidas: radicales libres altamente oxidantes (OH) o halgenos oxidados (por ejemplo: cido
hipocloroso, HOCl).
Figura 3-12. NADPH oxidasa. La oxidasa dependiente NADPH est formada por protenas de membrana (22 y 91 kDa), unidas
a flavin adenin dinucletido (FAD) y a protenas citoslicas (40, 47 y 67 kDa y Rac 2). Estas ltimas se translocan a la membrana
cuando el neutrfilo es activado.
que p47phox es fosforilada, las protenas

citoslicas son translocadas a la membrana
plasmtica, formndose y activndose el complejo NADPH oxidasa.
La enfermedad granulomatosa crnica es
una inmunodeficiencia primaria, caracterizada
por una mayor susceptibilidad a infecciones
bacterianas y fngicas. Es causada por mutaciones que producen una prdida o inactivacin
de una de las subunidades principales de la
NADPH oxidasa (p47phox, p67phox, p22phox

o p91phox).
b) Mecanismos antimicrobianos independientes del oxgeno. Estos mecanismos funcionan en ausencia de metabolitos del oxgeno, situacin que se presenta en un ambiente
anaerbico; sin embargo ambos tipos de mecanismos, oxidativos y no oxidativos, a menudo participan en forma sinrgica. En los meca-
72
Sin ttulo-2
72
5/26/06, 10:25 AM
nismos microbicidas independientes del oxgeno participan protenas y enzimas presentes

en los grnulos citoplasmticos de los fagocitos
(tabla 3-3). Entre otros componentes de estos
mecanismos destacan: (a) la lisozima, enzima
catinica que destruye el pptidoglican de la
pared celular, principalmente de las bacterias
Gram positivas; (b) la protena bactericida
permeabilizante (BPI), protena catinica que
permeabiliza la membrana bacteriana; (c) la
catepsina G, una serino proteasa con actividad
sobre bacterias Gram negativas y (d) las
defensinas, pptidos de 29-34 aminocidos, ricos en arginina y cistena, y que presentan actividad microbicida sobre bacterias Gram positivas, Gram negativas, hongos y algunos virus.
En la figura 3-13 se muestra un resumen
de los mecanismos microbicidas durante la
fagocitosis.
Una vez muertas las bacterias en el interior

de los fagolisosomas, son degradadas por
hidrolasas cidas, que por la generacin de cido lctico durante la gliclisis, encuentran su pH
ptimo para actuar.
2.4.2. Eosinfilos. Los eosinfilos son clulas de
aproximadamente 10 m de dimetro y cuyo ncleo es generalmente bilobulado (figura 3-14) y
su citoplasma anaranjado con tincin de
hematoxilina-eosina. Representan el 1-4% de los
leucocitos sanguneos (tabla 3-2); alrededor del
99% de los eosinfilos se encuentra en los tejidos
donde llegan luego de un breve paso de aproximadamente 30 minutos por la sangre, despus de
salir de la mdula sea.
Figura 3-14. Esquema de la estructura subcelular de los

eosinfilos. Los eosinfilos son leucocitos de aproximadamente 10 m de dimetro. Presentan un ncleo bilobulado con un
nuclolo medianamente grande. En el citoplasma se observan
ribosomas, mitocondria y pequea cantidad de retculo
endoplsmico rugoso. El aparato de Golgi es pequeo. Un
hecho caracterstico de los eosinfilos son sus grnulos esfricos u ovales.
Grnulos
Los eosinfilos presentan dos tipos de grnulos en su citoplasma: grnulos especficos de
eosinfilos y grnulos pequeos. Los grnulos
especficos, aproximadamente 20 por clula, en
su centro presentan la protena bsica mayor
(MBP) y algunas citoquinas; en la matriz contienen protena catinica eosinfila (ECP),
peroxidasa eosinfila (EPO), neurotoxina derivada de eosinfilos (EDN) y algunas citoquinas.
Los grnulos pequeos que almacenan
arilsulfatasa, se encuentran en los eosinfilos
maduros.
Figura 3-13. Fagocitosis y mecanismos microbicidas. (A)

Bacteria opsonisada con IgG y C3b se une a una clula
fagoctica a travs de los respectivos ligandos (FcR y CR1).
(B) Luego de emitir pseudpodos la bacteria es fagocitada,
los grnulos azurfilos y secundarios se acercan al fagosoma
en formacin, y se estructura la NADPH oxidasa. (C) En el
fagosoma se inicia el estallido respiratorio en el que a
partir de oxgeno molecular y con participacin de la
superxido disminutasa (SOD) se genera perxido de hidrgeno (H2O2) y por accin de la mieloperoxidasa (MPO)
de los grnulos azurfilos se genera cido hipocloroso
(HOCl). Adicionalmente participan otros componentes
bactericidas (lisozima y otras protenas) de los grnulos especficos. La enzima glucosa 6 fosfato deshidrogenasa
(G 6 PD) pertenece a la va de derivacin de la hexosa
monofosfato.
73
Sin ttulo-2
73
5/26/06, 10:25 AM
Otras molculas sintetizadas en los eosinfilos
Eosinfilos y patologas
Cuando los eosinfilos son estimulados

secretan algunos mediadores derivados de membrana: Leucotrieno C4 (LTC4), leucotrieno B4, 15HETE y PAF.
Los eosinfilos pueden sintetizar varias
citoquinas proinflamatorias; se ha descrito mRNA
para ellas: Interleuquinas (IL-1, IL-2, IL-3, IL-5,
IL-6, IL-10, IL-16) factores de crecimiento
(TGF, TGF, TNF, GM-CSF), Interferones
(IFN) y quimioquinas (IL-8, MIP-1 y
RANTES).
Hay varias situaciones patolgicas en que aumenta la cifra absoluta de eosinfilos en la sangre
(eosinoflia). Destacan: (a) las infecciosas parasitarias, particularmente por helmintos, en las cuales se ha observado que los eosinfilos pueden
tener una accin efectora (captulo 35) y (b) las
enfermedades alrgicas (captulos 21 y 22). Enfermedades mieloproliferativas, otras neoplasias
y algunos frmacos (Ej. Penicilina, Tetraciclina,
Nitrofurantoina) pueden asociarse con eosinfilos.
2.4.3 Basfilos. Los basfilos representan menos
del 1% de los leucocitos sanguneos (tabla 3-2).
Al igual que los otros granulocitos maduros presentan un dimetro aproximado de 10 m. En los
frotis sanguneos teidos con May-Grnwald
Giemsa, los grnulos citoplasmticos cidos que
se caracterizan por presentar un intenso color
azul violeta, casi cubren completamente el ncleo
bilobulado. La figura 3-15 muestra un esquema
de su estructura subcelular.
Receptores de membrana
Uno de los receptores ms importantes desde el punto de vista fisiopatolgico son los receptores de Fc de IgE de baja afinidad (FcRIII)
(tabla 3-8).
Acumulacin de eosinfilos en tejidos
La quimiotaxis, adhesin a clulas
endoteliales y matriz extracelular parece ser controlada por la respuesta inmune de clulas T y subsecuente liberacin de citoquinas. Las citoquinas
liberadas en procesos alrgicos son las que participan en respuestas inmunes tipo Th2 (IL-4, IL5), en cambio en la reaccin de hipersensibilidad
de tipo retardada (DTH) se encuentran citoquinas
asociadas a respuesta tipo Th1 (Ej. IL-2, IFN).
La liberacin de IL-5 por LTh2 sensibilizados luego de su estimulacin con antgeno especfico, se
puede asociar al desarrollo de eosinofilia durante
enfermedad alrgica.
Las citoquinas adems de participar en la diferenciacin de los eosinfilos a partir de los precursores, contribuyen a su acumulacin en el tejido inflamado. En esta ltima funcin participan
principalmente IL-3, IL-5, GM-CSF, PF4, LTB4,
IL-8 y RANTES.
En la adhesin a endolelio y migracin
transendotelial participan, al igual que para los
neutrfilos, las molculas de adhesin celular:
selectinas, integrinas y de la superfamilia de las
inmunoglobulinas (ver punto 2.2.1).
Algunas citoquinas (IL-3, IL-5 y GM-CSF)
prolongan la sobrevida de los eosinfilos en los
tejidos. Estas citoquinas tambin aumentan la capacidad citotxica de ellos.
Figura 3-15. Esquema de la estructura subcelular de un

basfilo. El ncleo es bilobulado y la cromatina presenta una
distribucin similar a los neutrfilos y eosinfilos. Presenta
un pequeo aparato del Golgi y retculo endoplasmtico; escaso nmero de ribosomas libres y mitocondrias.
Los basfilos son muy similares a los

mastocitos o clulas cebadas, en cuanto a la composicin de sus grnulos y a su funcin.
La diferenciacin a basfilos y mastocitos
desde clulas inmaduras (CD34+, c-kit-, FcRI-)
ocurre a travs de varias etapas en que estos y otros
marcadores de membrana se van modificando. Las
clulas cebadas maduras presentan el siguiente
fenotipo FcRI+ y c-kit+ y los basfilos son
FcRI+, c-kit-, CD23+. Adems al igual que los
eosinfilos son CD25+ y CD125+.
74
Sin ttulo-2
74
5/26/06, 10:25 AM
Concavalina A), algunas citoquinas (ej. IL-1, MIP1). El pptido formil-met-leu-phe slo estimula
la secrecin de los basfilos.
Ambos tipos celulares participan en las etapas iniciales del proceso inflamatorio, pero en las
etapas ms avanzadas de reparacin slo lo hacen
los mastocitos. As, inicialmente ambos secretan
mediadores inflamatorios: (Histamina, IL-4,
quimioquinas; basfilos: IL-13; mastocitos:
TNF, etc.), molculas que durante el proceso van
disminuyendo. Por su parte, las clulas cebadas
durante el desarrollo del proceso siguen liberando otros mediadores, ahora antiinflamatorios (IL10, TGF-, etc.) y ms adelante, molculas que
favorecen la reparacin tisular (proteinasas, factores de crecimiento y otras citoquinas).
Varios frmacos antialrgicos y antiinflamatorios inhiben la secrecin de mediadores desde
los basfilos y mastocitos; sus acciones son mltiples y variadas. Entre ellas se incluyen: Agonistas
de B 2 , antagonistas de H 1 , corticoides y
ciclosporina A, entre otros.
En la tabla 3-10 se indican las principales protenas de membrana de los basfilos y mastocitos. Ambos tipos de clulas presentan receptores de alta afinidad para IgE (FcRI), slo los basfilos presentan
integrinas y solamente los mastocitos presentan c-kit.
Tabla 3-10. Protenas de membrana de

basfilos y clulas cebadas
Marcador
FcRI
FcRII
Integrina CD11a/18
Integrina CD11b/18
Integrina CD11c/18
IL-2R (CD25)
C-Kit (CD117)
IL-3R (CD123)
IL-3/5/GMR
Bsofilo
Mastocitos
+
+
-
+
+
+
+
+
+
+
+
3. RGANOS LINFOIDES
En las primeras etapas de maduracin participa el factor de stem cell o c-kit ligand. En
la maduracin de clulas cebadas participan
citoquinas como IL-3, IL-6. En cultivos celulares
se han descrito las CFU de basfilo y eosinfilos
(CFU- baso/eo).
En la diferenciacin de basfilos la principal
citoquina que participa es IL-3; tambin participan GM-CSF, IL-4 e IL-5. Esta ltima promueve
adems la diferenciacin de eosinfilos. El TGF, en presencia de IL-3 suprime la diferenciacin
de eosinfilos y favorece la diferenciacin de
basfilos.
Varias molculas mediadoras de inflamacin
son liberadas desde ambos tipos celulares por mecanismos mediados por unin de IgE u otros mecanismos. Ambas clulas contienen histamina,
PAF, condroitinsulfato, LTB4, LTC4, IL-4 e IL-13.
Slo en los mastocitos, xido ntrico (NO),
prostaglandinas D2 (PGD2), PGF2, tromboxano A2,
triptasa, carboxipeptidasa A, IL-5, IL-6, IL-8, IL10, TNF, TGF-, IFN. Slo en los basfilos,
MIP-1.
Varios factores pueden activar la secrecin
de mediadores de inflamacin por parte de
basfilos y clulas cebadoras. Entre ellos, la unin
de una molcula de IgE (o IgG) y su respectivo
antgeno (alergeno) a los FcRI (o FcRII),
anafilotoxinas (C3a y C5a), lectinas (ej.
Desde un punto de vista inmunolgico, los

rganos y tejidos linfoides, se pueden clasificar
en primarios y secundarios (figura 3-16). Ms recientemente se han descrito los tejidos linfoides
terciarios; parte de ellos son descritos aqu como
tejido asociado a mucosas (punto 3.2.3) y se incluye adems en este concepto el tejido linfoide
asociado a piel (ver captulo 16).
3.1. rganos linfoides primarios
En los rganos linfoides primarios, timo y
mdula sea en el hombre, las clulas linfoides
experimentan un proceso de proliferacin y diferenciacin a clulas T y clulas B, respectivamente. Este proceso no requiere presencia de antgenos
extraos (antgeno independiente). All los
linfocitos adquieren el repertorio de receptores
antignicos especficos (LT: TCR y LB: IgM e
IgD) y aprenden a distinguir entre lo propio y lo
extrao.
3.1.1. Mdula sea
En la mdula sea, a partir de la segunda
mitad del embarazo y en el resto de la vida, ocurre la diferenciacin y maduracin de los glbulos rojos, glbulos blancos y plaquetas
75
Sin ttulo-2
75
5/26/06, 10:25 AM
Figura 3-16. rganos linfoides. Se muestran los rganos linfoides primarios, (Mdula sea y Timo) secundarios (Bazo, Ganglios
linfticos: cervicales, axilares mesentricos e inguinales), tejido asociado a mucosa (GALT: intestinal; BALT: bronquial) y amgdalas (palatinas, farngea y linguales). Adems se indica el lugar de drenaje de los linfocitos desde el conducto torcico a la sangre
(vena subclavia izquierda).
(Hematopoyesis, ver punto 2.1). Entre los

leucocitos, tiene especial inters en este caso la
maduracin de los linfocitos B.
En el hombre y otros mamferos, la mdula
sea es el tejido equivalente a la bolsa de
Fabricio, rgano en el que se diferencian los
linfocitos B en las aves; el origen de "B" se refiere a bolsa. La bolsa de Fabricio es un rgano
linfoepitelial, que corresponde a un trozo de intestino modificado, localizado cerca de la cloaca; los folculos estn en la corteza y mdula de
la bolsa.
La mdula sea se encuentra en la cavidad
medular de los huesos largos (principalmente en
las epfisis) y en los espacios existentes entre las
trabculas de los huesos esponjosos.
Histologa. La mdula sea est formada por dos
importantes compartimientos: vascular y
hematopoytico (figura 3-17).
Figura 3-17. Estructura general de la mdula sea. Se destaca el compartimiento vascular (arterias, venas y sinusoides)
y del compartimiento hematopoytico.
76
Sin ttulo-2
76
5/26/06, 10:25 AM
gracin transitorios (<4 m de dimetro) que se

forman en las clulas endoteliales de los
sinusoides.
El Compartimiento hematopoytico est
formado por los islotes de clulas hematopoyticas
de las diferentes lneas celulares (serie
granuloctica, serie monoctica, serie eritroblstica,
serie megacarioctica y serie linfoide), en sus distintos estadios madurativos. En clulas se ubican
entre los sinusoides, y entre stos y la cortical del
hueso.
Adems de las clulas hematopoyticas en
la mdula sea tambin existen otras clulas que
forman parte de denominado estroma medular.
Entre ellas destacan: macrfagos, clulas
reticulares y algunas clulas adiposas (figura 318). Estas clulas participan activamente en la regulacin de la hematopoyesis secretando
citoquinas y factores de maduracin.
Adicionalmente los macrfagos fagocitan ncleos
expulsados por los eritroblastos ortocromticos al
madurar a reticulocitos, clulas alteradas y clulas muertas.
Los vasos sanguneos del compartimiento

vascular forman un esqueleto estructural en la
mdula sea. La sangre que ingresa a la mdula
sea lo hace por las arterias nutricias que perforan la difisis a travs de los agujeros nutricios.
Estas arterias entran en la cavidad medular y dan
origen a la arteria longitudinal central, desde la
cual se generan pequeos vasos que irrigan tanto
la mdula como el hueso cortical. Las ramas dirigidas a la mdula descargan su sangre a capilares los cuales vacan en una extensa red de
sinusoides. Los sinusoides (45 a 80 m de dimetro) estn compuestos por
clulas
endoteliales, una lmina basal y una capa externa de clulas reticulares; estas ltimas cubren
aproximadamente el 50% de la superficie
endotelial. Estos sinusoides drenan en una vena
longitudinal central, que a su vez descarga su
contenido en venas que salen del hueso por el
conducto nutricio.
El pasaje transendotelial de clulas maduras,
desde el comportamiento hematopoytico a la sangre ocurre directamente a travs de poros de mi-
Figura 3-18. Estructura histolgica de la mdula sea. La mdula sea est formada por vasos sanguneos, sinusoides, clulas
del estroma y clulas hematopoyticas. Los distintos tipos de clulas se desarrollan en islotes hematopoyticos ubicados a diferente distancia de la pared de los sinusoides, segn el linaje celular.
77
Sin ttulo-2
77
5/26/06, 10:25 AM
llegan, en estado inmaduro, desde la mdula sea.

En el humano, el timo comienza a originarse
hacia el final de la sexta semana de gestacin. Para
el nacimiento el timo est totalmente desarrollado.
El timo es un rgano de naturaleza
linfoepitelial que se ubica en el mediastino anterosuperior, sobre los grandes vasos del corazn (figura 3-16). Su tamao y grado de desarrollo varan con la edad del individuo, alcanzando su mximo desarrollo (40 a 50 gramos), cerca de la pubertad, despus de la cual empieza a involucionar,
proceso que contina hasta avanzada edad.
La hematopoyesis implica un complejo proceso de maduracin y diferenciacin celular. A

partir de una clula pluripotencial se originan los
diferentes tipos de leucocitos (neutrfilos,
linfocitos, monocitos, eosinfilos y basfilos), glbulos rojos y plaquetas. En dicho proceso participan varias citoquinas (ver punto 2.1). Por otra parte, las molculas de adhesin celular (ver captulo
12) presentes en las clulas hematopoyticas y del
estroma, y la matriz extracelular tienen fundamental participacin en el proceso de maduracin y
focalizacin en la mdula sea. En el caso particular de los linfocitos, las clulas B maduran en la
propia mdula sea. En la figura 3-19 se muestra
esquemticamente este proceso.
Histologa. Es el nico rgano linfoide lobulado;

est formado por dos lbulos, derecho e izquierdo
Figura 3-19. Maduracin de clulas B en la mdula sea. Esquemticamente se muestra la secuencia de maduracin de las
clulas B a partir de una clula madre (stem cell); durante este proceso depende de clulas de estroma (clulas reticulares, entre
otras). Otro aspecto importante es que muchas clulas no reordenan correctamente los segmentos gnicos VDJ o VJ (ver captulo
6) y sufren apoptosis por lo que son fagocitadas por los macrfagos medulares. Las clulas B vrgenes (este proceso no ha
requerido de contacto con antgeno) pasan a la sangre a travs de los sinusoides y luego a los rganos linfoides secundarios donde
pueden tomar contacto con el antgeno para el cual presentan especificidad. Se indican los principales marcadores en diferentes
etapas de maduracin. , cadena pesada mu (IgM); k, cadena liviana de Ig; TdT, desoxinucleotidil transferasa terminal.
Respecto a las clulas T, si bien stas maduran en el timo, desde la mdula sea emigran clulas encomendadas a madurar como linfocitos T.
Usando citometra de flujo (ver captulo 43), en mdula sea, se ha detectado una subpoblacin que
coexpresa CD34 (marcador de Stem Cells), CD2,
CD7 y CD3 citoplasmtico (marcadores de lnea
T). Sin embargo, tambin se propone la existencia
de un progenitor comn para ambos linajes celulares, B y T. Otros hallazgos indican que CD44 podra participar en el "homing" de las clulas linfoides
que llegan al timo a madurar como clulas T.
unidos por tejido conectivo. Ambos lbulos estn rodeados por una cpsula de tejido conectivo;
sta emite numerosos tabiques al interior de los
lbulos subdividindolos en miles de lobulillos de
0,5-2 mm. Cada lbulo posee una zona perifrica
y ms rica en clulas, denominada corteza y la
mdula. Los tabiques llegan hasta el lmite
corticomedular (figura 3-20).
El estroma laxo, compuesto por clulas
reticulares epiteliales entreteje la corteza y la mdula. En el retculo se encuentran linfocitos,
macrfagos y clulas dendrticas interdigitantes.
3.1.2. Timo
Las Clulas reticulares epiteliales tienen un aspecto variable. Presentan prolongaciones en forma de estrella, que interaccionan entre s. En la
periferia de la corteza y alrededor de los vasos sanguneos, estas clulas conforman una capa continua de clulas planas.
La principal funcin del timo es participar en

la maduracin y diferenciacin de los linfocitos T a
partir de la proliferacin y diferenciacin de linfocitos
troncales inmunolgicamente no competentes que
78
Sin ttulo-2
78
5/26/06, 10:25 AM
Figura 3-20. Estructura histolgica del timo. En cada lbulo del timo se pueden describir 2 regiones: corteza y mdula. En
ambas zonas, corteza y mdula tmica, existen clulas linfoides, reticulares epiteliales y macrfagos. En la corteza ocurren los
procesos de seleccin positiva y negativa de las clulas linfoides T (ver texto) en el que participan las clulas reticulares
epiteliales corticales. Las clulas linfoides a medida que maduran migran a la mdula tmica desde donde emigran a la sangre. A
medida que maduran las clulas linfoides expresan diferentes marcadores de superficie.
llas que dejan las clulas retculo epiteliales. Las

clulas linfoides son mucho ms abundantes en la
corteza que en la mdula. En la corteza subcapsular
externa son clulas grandes ( 15 m); corresponden a linfoblastos (clulas linfoides inmaduras).
En el resto de la corteza y mdula son ms pequeos.
Despus de la pubertad, cuando el timo comienza a involucionar, pierde peso y aumenta progresivamente la proporcin de adipocitos (clulas grasas); sin embargo durante toda la vida persisten restos de parnquima. En el adulto una vez
que se ha formado un pool de clulas T
perifricas, aparentemente no es necesario la produccin de grandes cantidades de linfocitos T.
Respecto a los Vasos sanguneos, el timo
es irrigado por sangre que fluye a travs de arterias que ingresan por la cpsula, formando
arteriolas en los tabiques. Aqu se forman las
vnulas interlobulares las cuales se vacan en la
vena tmica eferente. Los capilares presentan un
endotelio rodeado de una gruesa lmina basal.
La corteza slo es irrigada por capilares, stos
participan de la llamada barrera hematotmica,
que protegera a las clulas linfoides en maduracin en la corteza tmica, contra sustancias
antignicas circulantes.
En la mdula existen ms clulas reticulares

epiteliales que en la corteza, conformando en la
primera los corpsculos de Hassall.
Las clulas reticulares epiteliales expresan en
su superficie molculas MHC de clase I y de clase II, las que al interaccionar con las clulas
linfoides son fundamentales en el proceso de maduracin de estos ltimos. Esto es especialmente
significativo en la corteza capsular.
Los Macrfagos se encuentran en cantidad moderada en la corteza, pero son ms abundantes en
la mdula. Tambin expresan molculas MHC de
clase I y II.
Las Clulas dendrticas interdigitantes se encuentran en abundante cantidad en el lmite
crticomedular y en la mdula, se ubican entre el
retculo que conforman las clulas retculo
epiteliales. Al igual que estas ltimas presentan
largas prolongaciones citoplasmticas a travs de
las cuales toman contacto con los linfocitos. Al
igual que las clulas reticulares epiteliales expresan en su membrana molculas MHC clase I y II,
y participan en la maduracin de los linfocitos.
Las Clulas linfoides se localizan entre las ma-
79
Sin ttulo-2
79
5/26/06, 10:25 AM
Fisiologa. En el timo ocurre la maduracin de

los linfocitos T, clulas que participan de la inmunidad celular e indirectamente en la inmunidad
humoral.
Clulas linfoides inmaduras llegan, desde la
mdula sea (durante la gestacin: del saco
vitelino, bazo e hgado) a la regin subcapsular
de la corteza tmica donde se diferencian a clulas
T inmaduras (timocitos). En el proceso de maduracin, desde clulas doble negativas (CD4-, CD8) y CD3- y TCR- a clulas T CD4+ (LTh) o CD8+
(LTc) y CD3+ y TCR+, las clulas linfoides se
movilizan desde la corteza a la mdula tmica.
Durante este recorrido interaccionan con clulas
reticulares epiteliales y clulas dendrticas
interdigitantes, las cuales expresan en su membrana molculas de MHC clase I y II.
En el proceso de maduracin ocurren los procesos de seleccin, positiva y negativa (ver captulo 13). En la primera, los linfocitos que a travs de
su TCR reconocen las molculas MHC propias son
seleccionados positivamente (pueden continuar el
proceso de maduracin); los otros sufren apoptosis.
Las clulas que pasan la primera etapa son sometidas a la llamada seleccin negativa, durante la cual
son eliminadas (apoptosis) las que, a travs de su
TCR, reconocen con alta afinidad antgenos propios en las molculas MHC de clase I o II de las
clulas reticulares epiteliales o clulas dendrticas
interdigitantes. Durante el proceso de maduracin
tmica sobrevive alrededor del 5% de las clulas
linfoides que proliferaron en la corteza tmica.
Las clulas T maduras, (LTc y LTh), abandonan la mdula tmica a travs de las venas que
drenan al timo.
La falta de desarrollo congnita de timo se
denomina Sndrome de DiGeorge. Estas personas
no pueden producir linfocitos T, desarrollando una
inmunodeficiencia grave (ver captulo 30).
asociado a mucosas (MALT). Los rganos secundarios, son los tejidos donde los linfocitos vrgenes (B y T) interactan con los antgenos y con
otras clulas del sistema inmune; es aqu donde se
inicia la respuesta inmune. En estos tejidos existe
un microambiente linfoide altamente organizado,
donde las clulas B y T toman contacto con el
antgeno y como consecuencia de ello se activan
y proliferan (expansin clonal), desarrollndose
dos subpoblaciones, clulas efectoras y clulas de
memoria.
Los ganglios linfticos son pequeos rganos linfoides ovales y encapsulados, de 1-3 cm de
dimetro. A diferencia de otros rganos linfoides,
estn interpuestos en el trayecto de los vasos
linfticos, actuando como filtros a travs de los
cuales pasa la linfa en su camino hacia la sangre;
entre otros elementos filtran bacterias, otros
microorganismos y otras sustancias extraas.
Los ganglios linfticos se encuentran en nmero variable en ciertas zonas del cuerpo, pero
son ms abundantes en las regiones axilar, cervical, inguinal, en las cavidades corporales (Ej.
Mesenterio) y a lo largo de los vasos mayores (figura 3-16).
Histologa. Los elementos de sostn del ganglio
linftico son: (i) cpsula: rodea al ganglio y est
compuesta de tejido conectivo, (ii) trabculas: son
prolongaciones de la cpsula hacia el interior del
parnquima ganglionar, especficamente de la corteza y (iii) tejido reticular: red tridimensional formada por clulas y fibras reticulares, suspendidas
de la cpsula y trabculas, que forma la estructura
del rgano. En uno de los bordes donde la cpsula
es ms gruesa se distingue el hilio.
El parnquima del ganglio se divide en dos
regiones: corteza y mdula (figura 3-21). La corteza, es la zona ms externa y separada en compartimientos por las trabculas. Se distinguen las
cortezas externa y profunda (o paracorteza). La
corteza externa alberga los denominados folculos
(o ndulos) linfoides primarios que son agregados esfricos de LB (vrgenes y de memoria). Estos ndulos pueden presentar un centro
germinativo, denominndose as folculos
linfoides secundarios. Estos ltimos se forman
cuando se desarrolla una respuesta inmune; en el
centro germinal se encuentran LB llamados
centroblastos. Aqu se generaran los LB de me-
3.2. rganos linfoides secundarios

Los diferentes tejidos linfoides secundarios
presentan especificidades asociadas a sus funciones, sin embargo tienen algunas caractersticas estructurales comunes: (a) presentan mecanismos
para transportar los antgenos al microambiente
linfoide; (b) tienen adaptaciones vasculares especializadas para atraer linfocitos, desde la sangre,
especialmente vrgenes; y (c) presentan regiones
donde principalmente existen LT o LB, llamadas
zona T y zona B, respectivamente.
Los rganos linfoides secundarios incluyen
los ganglios linfticos, el bazo y el tejido linfoide
80
Sin ttulo-2
80
5/26/06, 10:25 AM
Figura 3-21. Estructura histolgica de un ganglio linftico. El ganglio posee elementos de sostn (cpsula, trabculas y tejido
reticular). Su parnquima se divide en corteza y mdula; en la corteza existe tejido linfoide organizado como folculos y en la
mdula existen cordones de tejido linfoide separados por senos medulares. Vasos linfticos aferentes y eferentes entran y salen de
los ganglios, respectivamente.
el endotelio y migracin transendotelial participan molculas de adhesin, en forma similar a lo

descrito para los neutrfilos (ver punto 2.4.1.). Los
LB que ingresan migran a la corteza y la mayora
de los LT, permanecen en la corteza profunda.
moria y clulas plasmticas (clulas efectoras de

las clulas B). La regin perifrica de los folculos
secundarios se denomina zona del manto o calota,
formada por linfocitos que estn emigrando del
centro germinal.
La corteza externa es una zona dependiente
de mdula sea o zona B. En la corteza profunda
(paracorteza) no existen folculos y est poblada
principalmente de clulas T. (zona dependiente de
timo, zona T) Las clulas presentadoras de
antgeno emigran hacia esta zona para presentar
los antgenos en molculas MHC clase II a los LTh.
Si stas se activan, ocurrir una expansin clonal
y aumentar la anchura de la paracorteza. Las clulas T recin formadas emigran hacia los senos
medulares, dejan el ganglio y van a la zona de
actividad antignica. Las vnulas de endotelio
columnar (HEV) estn localizadas en esta regin;
a travs de este tipo de epitelio los linfocitos de la
circulacin general ingresan al parnquima
ganglionar. En la interaccin de los linfocitos con
La mdula corresponde a la parte ms interna del

ganglio. Consiste en los llamados cordones
medulares constituidos por linfocitos, clulas
plasmticas y macrfagos. Estos cordones estn ubicados alrededor de los senos medulares, los que convergen a la regin del hilio donde desembocan en
los vasos linfticos eferentes. Los linfocitos de los
cordones estn en proceso de emigrar desde la corteza para entrar en los senos medulares y as va
linfticos eferentes alcanzar el conducto torcico, y
luego la circulacin general (ver punto 4).
Los vasos que llegan al ganglio se llaman
vasos linfticos aferentes y se introducen en l
por varios puntos de la superficie convexa y vacian
la linfa en el seno subcapsular. Este seno se conti-
81
Sin ttulo-2
81
5/26/06, 10:25 AM
na con los senos corticales o paratrabeculares

(paralelos a las trabculas) los que descargan la
linfa en los senos medulares que a su vez drenan
la linfa en los vasos linfticos eferentes. stos
abandonan el ganglio por el hilio; ambos vasos
linfticos, aferentes y eferentes poseen vlvulas.
Tambin entran y salen a travs del hilio (zona
cncava del ganglio), los vasos sanguneos (arteria y vena) y nervios. Otros tejidos linfoides como
las amgdalas, el bazo y el timo tienen slo vasos
linfticos eferentes.
teza profunda y otros reclutados desde la corteza

externa pueden endocitar el antgeno, procesarlo
y presentarlo a los LTh. Por su parte, los LT CD4+
facilitan la respuesta inmune humoral, particularmente en el caso de los llamados antgenos timo
dependientes (ver captulo 5). As en la paracorteza
se generan pequeos focos de diferenciacin y
maduracin de LB a clulas plasmticas las que
secretarn anticuerpos (IgM, IgG) que llegan a la
sangre va linfa eferente. Posteriormente algunos
LTh y LB migran a los folculos primarios de la
corteza externa amplificando la respuesta inmune. All se generan linfoblastos, llamados en este
caso centroblastos. Por un proceso de maduracin
y seleccin por afinidad van siendo seleccionados los que presentan mayor afinidad por el
antgeno. Tambin ocurre aqu el fenmeno denominado cambio de clase (ver captulo 6).
Fisiologa. Entre las funciones de los ganglios

linfticos, est el filtrar la linfa que ingresa va vasos linfticos aferentes, as los macrfagos pueden
fagocitar alrededor del 90% de los antgenos que
ingresan a los ganglios. Esto causa un proceso inflamatorio con aumento de volumen del ganglio.
Adems de la fagocitosis del antgeno en los
ganglios linfticos los linfocitos B y/o T toman
contacto con los antgenos. Una respuesta inmune primaria (primer contacto con el antgeno especfico) la respuesta se inicia con activacin de
LTh vrgenes, ubicados en la corteza profunda;
aproximadamente 48 horas despus de la activacin se transforman en linfoblastos los que sufren
mitosis generndose a los 5 das un clon de LTh
efectores y de memoria. Si el agente infeccioso es
intracelular (Ej. Virus) se activan los LTc que reconocen los antgenos expresados en molculas
MHC de clase I (ver captulos 8 y 9).
Al mismo tiempo que se activa la respuesta
inmune celular los escasos LB existentes en la cor-
3.2.2 Bazo
El bazo es el rgano linfoide de mayor tamao del cuerpo (aproximadamente 150 g en adultos); est situado en el peritoneo, en la regin superior izquierda del abdomen.
El bazo est rodeado por una cpsula de tejido conectivo desde la cual parten trabculas hacia
el parnquima del rgano (figura 3-22). Por el hilio
entran la arteria esplnica y nervios, y salen por
la vena esplnica y vasos linfticos. La estructura
del rgano est dada por una red tridimensional
de fibras y clulas reticulares, conectadas a la cpsula y trabculas (similar a los ganglios linfticos).
Figura 3-22 Estructura histolgica del bazo. Una cpsula de tejido conectivo rodea al bazo; de sta se originan trabculas hacia
el parnquima. La pulpa blanca est compuesta principalmente por linfocitos. La pulpa roja la componen sinusoides venosos,
clulas y fibras reticulares, eritrocitos, macrfagos, linfocitos y granulocitos.
82
Sin ttulo-2
82
5/26/06, 10:25 AM
La arteria esplnica se ramifica en las arterias trabeculares, las que al presentar un dimetro
de 0,2 mm dejan las trabculas y son rodeados
por linfocitos denominndose a stos vaina
linftica periarterial y al vaso, arteria central.
Luego sta pierde la vaina linftica y se subdivide en varias arterias penicilares, que entran la llamada pulpa roja (ver ms adelante). El extremo
de las arterias penicilares corresponden a capilares arteriales terminales que descargan la sangre
en los senos esplnicos. stos drenan en las venas
pequeas de la pulpa, las que van aumentando de
calibre, llegando a formar la vena esplnica, que
drena en la vena cava.
El parnquima esplnico o pulpa esplnica,
se divide en pulpa blanca y pulpa roja. La pulpa
blanca est compuesta por tejido linfoide, principalmente linfocitos, estrechamente asociados a
la arteria central, a cuyo alrededor forman la vaina linftica periarterial. En sta existen principalmente clulas T (aproximadamente 70% de CD4+
y 30% de CD8+). Las clulas B estn organizadas
en folculos, generalmente incorporados en la vaina linftica periarterial. Los folculos primarios
contienen clulas B no estimuladas y los folculos
secundarios son sitios de activacin y proliferacin de clulas B, y contienen centro germinal.
La pulpa blanca est rodeada por una delgada zona
marginal que la separa de la pulpa roja, que contiene clulas B, clulas helper, macrfagos y
clulas dendrticas interdigitantes (clulas presentadoras de antgeno).
En la zona marginal tambin se encuentran
los senos marginales; aqu es donde las clulas y
antgenos transportados por la sangre tienen acceso al parnquima del bazo. As puede ocurrir:
(i) contacto entre los antgenos y las clulas presentadoras de antgeno; (ii) los macrfagos pueden fagocitar microorganismos y clulas
senescentes; (iii) clulas T y B de la sangre pueden ingresar a la pulpa blanca; y (iv) los LTh,
reconocen antgenos presentados en molculas
MHC clase II por las clulas dentrticas
interdigitantes; esto dar lugar a activacin y proliferacin clonal en la pulpa blanca (folculo secundario).
A modo de resumen, los linfocitos se forman
en la pulpa blanca, las clulas B de memoria y clulas plasmticas en los folculos linfticos y las
subpoblaciones de clulas T en las vainas linfticas
periarteriales. Los LB y LT recin formados entran
en los senos marginales y emigran hacia el sitio
inflamatorio, o forman parte de la reserva
recirculante de linfocitos. La mayora de las clulas plasmticas emigran a la mdula sea para sintetizar y secretar anticuerpos en los senos medulares;
slo algunas se quedan en la zona marginal para
hacer lo propio en los senos marginales.
La pulpa roja est compuesta de sinusoides
venosos separados por cordones parenquimatosos,
que consisten en mallas de clulas reticulares y
fibras reticulares, en la que existen abundantes
eritrocitos, macrfagos, linfocitos, clulas
plasmticas y granulocitos. Estos macrfagos son
responsables de retirar de la circulacin los glbulos rojos y plaquetas, senescentes y alterados.
Desde el punto de vista inmune, el bazo presenta una funcin similar a los ganglios linfticos,
la diferencia fundamental radica en que el bazo es
el ms importante sitio de respuesta inmune a
antgenos circulantes y los ganglios linfticos participan en la respuesta inmune a antgenos presentes en la linfa. El concepto de respuesta inmune se refiere a la respuesta inmune innata y especfica, tanto celular (fagocitosis, activacin de clulas T) como humoral (activacin de clulas B
con la consiguiente sntesis de anticuerpos).
3.2.3 Tejido linfoide asociado a mucosa
En muchas regiones del cuerpo, el tejido
linfoide no est encapsulado como en los ganglios
linfticos y el bazo. Se trata de tejido linfoide difuso sin organizacin especial, que no se separa
con precisin del tejido conectivo vecino, pero que
presenta folculos linfoides aislados. A estos tejidos se le denomina tejido linfoide asociado a
mucosa (MALT), las localizaciones ms caractersticas son las asociadas a la mucosa intestinal
(GALT, gut) y respiratoria (BALT, broncus)
(figura 3-16); tambin existe en la mucosa
urogenital (ver captulo 16). Adems de linfocitos,
clulas que se encuentran en mayor porcentaje,
tambin se hallan linfoblastos, clulas plasmticas
y macrfagos. Los folculos de los MALT son similares a los existentes en el bazo y los ganglios
linfticos; las regiones centrales son ricas en clulas B, igual que los centros germinales.
GALT. Todo el tracto gastrointestinal contiene
MALT. Sin embargo, el intestino delgado, principalmente el leon, adems de folculos linfoides
aislados, contiene conglomerados linfoides denominados placas de Peyer. stas presentan un folculo formado por clulas B, rodeado por una
regin ms laxa de clulas T y macrfagos que
83
Sin ttulo-2
83
5/26/06, 10:25 AM
actan como CPA. Las placas de Peyer no cuentan con vasos linfticos aferentes, pero s presentan vasos linfticos eferentes que drenan en los
ganglios linfticos mesentricos. Los linfocitos
llegan a las placas a travs de pequeas arteriolas
que son drenadas por HEV. Si bien el leon est
revestido por epitelio cilndrico simple, las zonas
adyacentes a los folculos linfoides de las placas
estn cubiertas por clulas de tipo escamoso (pequeas y anchas) llamadas clulas M, a travs de
las cuales los antgenos luminales penetran por
pinocitocis y fagocitosis. (figura 3-23)
La IgA es la clase de anticuerpo que ms activa y

eficientemente puede ser secretada a travs del
epitelio. Ello le significa una importante participacin en la defensa contra patgenos a nivel de
las vas respiratorias y del tracto intestinal. En el
intestino la produccin de IgA se inicia por el ingreso de los antgenos a las placas de Peyer, donde clulas T de regiones interfoliculares y clulas
B foliculares, son estimuladas. Algunos de los
linfocitos B se diferencian a clulas productoras
de IgA y migran a la lmina propia, ubicada bajo
el epitelio de mucosa. Las citoquinas ms importantes en el cambio de clase a isotipo IgA son el
factor de crecimiento transformante B (TGF-B) e
IL-5 (ver captulo 6). Algunas clulas B activadas
migran a los centros germinales de las placas de
Peyer, donde ocurren proliferacin de los LT y
mutaciones somticas de los genes de Ig, lo que
conduce a una mayor afinidad de los anticuerpos.
Los linfocitos productores de IgA pueden permanecer en la lmina propia o pueden migrar a otras
mucosas u rganos linfoides.
3.2.4 Amgdalas
Las amgdalas son agregados encapsulados,
de manera incompleta, de folculos linfoides. Existen 3 tipos de amgdalas: (a) palatinas: bilaterales,
localizadas en los lmites de la cavidad oral y la
faringe; (b) farngea: nica, ubicada en el techo de
la faringe nasal y (c) linguales: varias, se encuentran en superficie dorsal del tercio posterior de la
lengua (figura 13-16). Por su estratgica localizacin, las amgdalas estn directamente expuestas a
tomar contacto con antgenos inhalados e ingeridos. El parnquima de los diferentes tipos de amgdalas es similar, est conformado por folculos
linfoides ricos en clulas B, los que pueden presentar centros germinales. Reaccionan a los antgenos
formando linfocitos y estableciendo una reaccin
inflamatoria. La superficie de las amgdalas est
recubierta por epitelio, diferente en cada caso.
Figura 3-23. Participacin de las clulas M en la incorporacin de antgenos hasta las placas de Peyer. Las clulas
M, expuestas hacia el lumen intestinal, permiten el ingreso de
antgenos por pinocitosis y fagocitosis. De esta forma los
antgenos pueden tomar contacto con los linfocitos y
macrfagos de las placas de Peyer.
BALT. El tejido linfoide asociado la mucosa de

bronquios es, estructuralmente, similar a las placas de Peyer, presenta folculos ricos en clulas
B, y sectores en que existen LT y CPA. El BALT
se encuentra en los bronquios de todos los lbulos
pulmonares; se ubica principalmente en las bifurcaciones de los bronquios y bronquiolos. Al igual
que en el GALT en la zona adyacente a los
folculos linfoides el epitelio cilndrico es reemplazado por clulas M descritas en el GALT. Tampoco presentan vasos linfticos aferentes, pero s
eferentes y est ricamente vascularizado.
4. TRNSITO LINFOCITARIO
Una parte de los linfocitos formados en la
mdula sea pasa al timo, donde se diferencia a
clulas T y otra parte se diferencia a clulas B en la
propia mdula sea. Luego de adquirir en los rganos linfoides primarios, los receptores que los
caracterizan como linfocitos T (helper y
84
Sin ttulo-2
84
5/26/06, 10:25 AM
citotxicos) y linfocitos B, las clulas linfoides vrgenes pasan a travs de la circulacin general a los
tejidos linfoides secundarios. El paso desde la sangre por las HEV se ve favorecido por molculas de
adhesin (ver captulo 12); molculas que presentan ciertas diferencias dependiendo del tipo de linfocito (virgen o de memoria) y del tejido de destino
(ganglio linftico, placas de Peyer, GUT o piel).
All toman contacto con los antgenos para los cuales presentan especificidad. En los rganos linfoides
secundarios se ubican en zonas especficas, as los
folculos linfoides son ricos en LB y la paracorteza
(de los ganglios linfticos) es rica en LT. Aqu en
los rganos linfoides secundarios se generan los
linfocitos de memoria (T y B) y efectores (linfocitos
T citotxico y clulas plasmticas Los linfocitos
salen de los ganglios linfticos a travs de los vasos linfticos eferentes, para llegar nuevamente a
la circulacin a travs del conducto torcico y conducto linftico derecho (figura 3-24).
En condiciones normales, los linfocitos estn recirculando permanentemente, lo cual proporciona una vigilancia inmunolgica ms eficiente, al permitir la presencia de todo el repertorio de
linfocitos antgeno-especficos, en diferentes partes del organismo.
LECTURAS SUGERIDAS
Austyn, J. and Wood, K., Principles of cellular
and molecular immunology, Chapter 1, Oxford
University Press, New York, 1993.
Babior, B., NADPH oxidase: An update, Blood,
93(5):1464-1476, 1999.
Bokoch, G., Chemoattractant signaling and leucocyte activation, Blood 86(5):1649-1660, 1995.
Degos, L; Linch, C.; Lwenberg, B., Textbook of
Malignant Haematology, Chapters 3, 4, Martin
Dunitz, 1999.
Gartner, L. y Hiatt, J., Traducido por Sapia, S.,
Histologa, texto y atlas, Captulos 10 y 12,
Interamericana, 1997.
Geneser, F., Histologa: sobre bases moleculares,
Captulos 10, 11 y 16, Editorial Panamericana,
2001.
Figura 3-24. Recirculacin de los linfocitos. Una vez que las clulas T y B salen de los rganos linfoides primarios como
linfocitos maduros, pasan a travs de la circulacin general a los tejidos linfoides secundarios. Desde los ganglios linfticos, salen
a travs de los vasos linfticos eferentes y vuelven a la circulacin general, fundamentalmente, por el conducto torcico.
85
Sin ttulo-2
85
5/26/06, 10:25 AM
Hampton, M.; Kettle, A.; Winterbown, C., Inside

the neutrophil phagosome: oxidants,
mieloperoxidase, and bacterial killing, Blood,
92(9): 3007 - 3017, 1998.
Lee, R.; Foerter, J.; Lukeng, J.; Pareskevas, F.;
Greer, J.; Rodgers, G., Editors, Wintrobe's clinical hematology, Chapters 8, 13, 14, 15, 16, 17,
18, 19, 20, Lippincott Willians E. Wilkins, Philadelphia, 1998.
Palomo, I. y Pereira, J., Fundamentos
inmunolgicos en Fisiopatologa de las
citopenias inmunes, Editorial Universidad de
Talca, Talca, 1995.
Paul, W., Editor, Fundamental Inmunology (Four
Edition), Chapters 14, 30, Lippincott-Raven Publishers, Philadelphia, 1999.
Pereira, J., Produccin, cintica y funcin de los
granulocitos en Fisiologa de la sangre
(Mezzano, D. y Pereira, J., Editores), captulo 7,
Editorial Universitaria, P. Universidad Catlica de
Chile, Santiago, Chile, 1993.
Stiene-Martin, A.; Lotspeich-Steininger, Ch.;
Koepke, J., Clinical Hematology: Principles,
procedures and correlations, Second edition,
Chapter 23, 1998.
86
Sin ttulo-2
86
5/26/06, 10:25 AM

Captulo 4
INMUNIDAD INNATA
Ivn Palomo G., Adriana Ardiles S. y Ulises Vergara C.
1. Introduccin
2. Componentes de la inmunidad
innata o natural
3. Fase de reconocimiento en la
respuesta inmune innata
4. Fase efectora en la respuesta
inmune innata
5. Proyeccin clnica
6. Filogenia de la respuesta
inmune innata
87
Sin ttulo-2
87
5/26/06, 10:25 AM
88
Sin ttulo-2
88
5/26/06, 10:25 AM
RESUMEN
La inmunidad innata es la primera lnea de defensa contra la infeccin. Posee mecanismos
de reconocimiento de diversidad limitada codificadas en la lnea germinal. No posee memoria.
Est constituido por diversos tipos celulares y molculas solubles que juegan un rol en el reconocimiento de microorganismos y tambin en la fase efectora de la respuesta innata.
Filogenticamente es el mecanismo de defensa ms antiguo y se ha conservado a lo largo de la
evolucin. Acta rpidamente para eliminar al antgeno a travs de mecanismos microbicidas y
respuesta inflamatoria. Por ser sus mecanismos efectores tan potentes y con capacidad de producir dao tisular del husped estn finamente regulados por diversos mecanismos de control. La
respuesta innata tiene la capacidad de alertar y dirigir la respuesta inmune adquirida orientndola
hacia una respuesta celular o humoral especfica.
da por un conjunto de diversos tipos celulares y

factores solubles encargados de la resistencia del
husped ante agentes infecciosos con los cuales
nunca ste ha tenido contacto. A diferencia de la
inmunidad especfica, la inmunidad innata es de accin inmediata, no requiere exposicin previa al
antgeno y no se modifica con exposiciones repetidas al agente infeccioso. Su rapidez de activacin
y, por lo tanto, rapidez de la respuesta efectora a la
infeccin, colocan a la inmunidad innata en una situacin privilegiada para eliminar a los agentes infecciosos. Sin embargo, no debemos olvidar que
en el curso de la evolucin estos microorganismos
han desarrollado diversas estrategias para evadir,
distraer, suprimir o manipular en su propio beneficio, los diversos mecanismos efectores de la respuesta inmune. Por otra parte, los huspedes han
desarrollado mecanismos defensivos cada vez ms
selectivos y especficos. Esto ha significado mejorar, diversificar y amplificar mediante mecanismos
de recombinacin gnica, el repertorio de receptores linfocitarios aumentando as la probabilidad que
un linfocito individual y nico reconozca antgenos
del microorganismo. Estos cambios evolutivos han
permitido el surgimiento de la inmunidad adquirida, optimizando la defensa inmunolgica de los
hospederos y por lo tanto su sobrevida en un ambiente siempre cambiante y de gran complejidad.
Existe una interaccin bidireccional entre
estos dos sistemas: el sistema inmune innato
funciona como una alerta para el sistema inmune
especfico y puede determinar el tipo de respuesta
1. INTRODUCCIN
El sistema inmune es parte de los mecanismos biolgicos destinados a mantener la integridad estructural y funcional de los individuos y,
est genticamente programado para la neutralizacin y eliminacin tanto de agentes infecciosos, clulas y molculas extraas, como detritus y
productos moleculares de clulas propias envejecidas, transformadas o tumorales.
Los componentes celulares y moleculares del
sistema inmune se han separado tradicionalmente
en componentes naturales o innatos y componentes adquiridos o especficos que han desarrollado
estrategias, mecanismos y receptores distintos para
el reconocimiento inmunolgico. As, mientras la
inmunidad especfica se basa en el tamao y la
diversidad del repertorio linfocitario T (1018) y B
(1014) y requiere la activacin y expansin clonal
de linfocitos T y B nicos y especficos para el
desarrollo de una respuesta inmune eficiente; el
sistema innato utiliza unos pocos cientos de receptores de expresin constitutiva y no clonal en
las clulas de la inmunidad natural y, cuya especificidad est dirigida a molculas o patrones
moleculares altamente conservados en grandes
grupos de agentes infecciosos (PAMPs= Pathogen
Associated Molecular Patterns).
La inmunidad innata es filogenticamente ms
antigua que la adquirida, se ha conservado a lo largo de la escala evolutiva y constituye la primera
lnea de defensa contra la infeccin. Est constitui-
89
Sin ttulo-2
89
5/26/06, 10:25 AM
(tabla 4-1), se puede citar la integridad de la piel y

de las mucosas del tracto respiratorio, digestivo y
urogenital. Al estar las clulas epiteliales firmemente adheridas, constituyen una barrera muy importante en la resistencia del husped a la infeccin. Cada sistema posee caractersticas particulares de acuerdo con su anatoma y fisiologa. As
por ejemplo, en el aparato respiratorio, el flujo de
aire o de fluidos a lo largo del epitelio, unido al
movimiento ciliar ejerce una funcin de barrido
de microorganismos que se hayan adherido al
mucus impidiendo de esta manera la adhesin a
las clulas epiteliales.
En la inmunidad innata participan linfocitos
con caractersticas especiales que los hacen ms
afines con sta que con la inmunidad adquirida.
Estos linfocitos tienen un receptor para antgeno
de diversidad limitada. Son los linfocitos T
intraepiteliales y los linfocitos B-1. Los primeros
producen citoquinas, activan fagocitos y causan
la muerte de las clulas infectadas; y los segundos, producen anticuerpos naturales clase IgM.
Constituyen un mecanismo preformado para enfrentar microorganismos que sobrepasan las barreras epiteliales.
Los mastocitos son otro tipo celular que participa en la inmunidad innata. Se ubican en las
proximidades de pequeos vasos sanguneos y
posee mediadores de la inflamacin preformados
como histamina, serotonina, factor quimiotctico
para eosinfilos, factor quimiotctico para
neutrfilos, heparina, quimasa, peroxidasa, etc.
Tambin tienen la capacidad de secretar mediadores lipdicos de neoformacin tales como las
prostaglandinas, tromboxano y leucotrienos y
mediadores proteicos de neoformacin como las
citoquinas. El lipopolisacrido puede inducir directamente la liberacin de productos de los
mastocitos e indirectamente, a travs de la activacin del sistema del complemento. Los
mastocitos, por estas caractersticas, pueden iniciar y orquestar la respuesta inflamatoria en los
sitios de infeccin.
Otros tipos de clulas que intervienen en la
inmunidad innata son los polimorfonucleares
(PMN) neutrfilos, eosinfilos, los monocitos y
las clulas natural killer (NK). Todas estas clulas tienen la propiedad de circular y migrar. Ello
les permite ejercer una vigilancia eficiente y una
rpida llegada a los lugares de infeccin. Estas
clulas se originan en la stem cell de la mdula
sea, la que se diferencia a un precursor mieloide
(que genera los granulocitos, monocitos y
adquirida, ya sea humoral o celular. Por otra parte,

el sistema inmune especfico utiliza los mecanismos efectores de la inmunidad innata para eliminar
a los microorganismos haciendo ms eficiente el
proceso de fagocitosis y amplificando la respuesta
inflamatoria mediante la activacin del complemento por la va clsica (figura 4-1). Del balance entre
la efectividad de los mecanismos inespecficos para
eliminar la infeccin y de la carga del agente
infectante va a depender la evolucin de la infeccin. Si sta persiste por ms tiempo, el influjo de
monocitos y macrfagos al sitio de infeccin va a
llevar al procesamiento y presentacin de antgenos
del agente infeccioso al sistema inmune especfico, con su consecuente activacin (figura 4-2).
Despus de un tiempo relativamente corto de 3 a 5
das, los anticuerpos producidos por la progenie de
los clones de linfocitos B activados van a producir
una opsonizacin adicional del agente infeccioso.
La fijacin de anticuerpos en la superficie bacteriana
por s sola puede no tener un efecto nocivo para la
sobrevida bacteriana, sin embargo, a travs de la
activacin de la va clsica de complemento y de la
fagocitosis se acelera la eliminacin de dicho agente. A su vez, los linfocitos T (LT) secretan citoquinas
que activan a los monocitos y macrfagos, permitindoles eliminar organismos ingeridos que resisten la destruccin por parte de clulas no activadas.
As, los mecanismos inespecficos que iniciaron la
reaccin inmune vienen ahora a completar su efecto, bajo la direccin y activacin de la inmunidad
especfica (figuras 4-1 y 4-2).
2. COMPONENTES DE LA INMUNIDAD
INNATA
Los componentes del sistema inmune innato
son un grupo heterogneo de clulas y factores
solubles (tabla 4-1). Estos componentes se ubican
en posibles puntos de entrada de los agentes infecciosos desde el medio ambiente; en la circulacin, donde pueden hacer una labor de vigilancia
y, en los tejidos donde finalmente se llevar a cabo
la respuesta efectora si es que el agente infeccioso
ha logrado sobrepasar estas primeras barreras.
Estos mecanismos son de tipo fsico; estn
preformados o mantenidos bajo control por el
husped. Deben ser activados rpidamente en respuesta a la infeccin, pero debido a su alta potencia e inespecificidad, pueden producir dao tisular,
por lo tanto, su activacin debe ser regulada.
Con respecto a los componentes celulares
90
Sin ttulo-2
90
5/26/06, 10:25 AM
Figura 4-1. El sistema inmune. El sistema inmune est compuesto de dos ramas principales: inmunidad innata y adquirida. La
confrontacin del sistema inmune innato con patgenos lleva a su rpida activacin y capacita al sistema inmune especfico para
responder apropiadamente. Existen interconexiones entre los mediadores solubles y celulares de ambos sistemas, que interactan
aumentando la eficacia de la respuesta. Modificado de Ploegh, HL., Science 1998; 280:248.
91
Sin ttulo-2
91
5/26/06, 10:25 AM
acetlglucosamina en la pared celular bacteriana;

hidrolasas neutras y cidas, que degradan
macromolculas microbianas, y protenas
catinicas que destruyen bacterias gram negativas. Los grnulos secundarios contienen lisozima,
lactoferrina, que tiene la capacidad de que el fierro requerido para el crecimiento microbiano lo
que produce bacteriostasis y colagenasa que digiere macromolculas bacterianas.
Los monocitos son los precursores circulantes de los macrfagos tisulares. Se encuentran en
gran nmero en tejido conectivo, pulmn
(macrfagos alveolares e intersticiales), hgado
(clulas de Kpfer), bazo (macrfagos esplnicos),
cerebro (clulas de la microgla).
Las clulas NK o linfocitos granulares grandes presentan actividad citotxica directa y
citotoxidad dependiente de anticuerpos y participan en defensa contra clulas infectadas por virus
precozmente durante la infeccin (ver captulo 19).
No expresan receptores de linfocitos T. Poseen
receptores de activacin KAR (Killer Activating
Receptor) que reconocen patrones moleculares
o PAMPs hidrocarbonados propios de los agentes
infecciosos y activan la citotoxicidad directa. Receptores Fc reconocen anticuerpos especficos
unidos a la membrana de los agentes infecciosos
y activan la citotoxicidad dependiente de
anticuerpos. Las clulas NK poseen adems receptores de inhibicin KIR Killer Inhibition Receptor que reconocen molculas codificadas por
el Complejo Principal de Histocompatibilidad
(MHC) y transducen seales de inhibicin de la
citotoxicidad contra clulas propias que expresan
estas molculas MHC.
Adems de ser una barrera fsica, la piel y
Figura 4-2. Interacciones entre inmunidad innata y adquirida. Los anticuerpos producidos por los linfocitos B, al unirse a los microorganismos actan como agentes opsonizantes.
Las citoquinas liberadas por las clulas T activan las clulas
fagocticas para destruir el material que stos han endocitado.
A su vez, los macrfagos y monocitos pueden presentar el
antgeno a las clulas T y causar su activacin.
macrfagos) y a un precursor linfoide del cual

derivan las clulas NK (ver captulo 3).
Los polimorfonucleares son el tipo celular
ms numeroso a nivel circulante. Son de corta vida
y se producen en gran nmero en la respuesta
inflamatoria. Estas clulas deben migrar al sitio
de infeccin abandonando el torrente sanguneo
en respuesta a seales moleculares. Los PMN poseen grnulos primarios y secundarios. Los grnulos primarios contienen mieloperoxidasa, que
potencia la actividad microbicida del perxido de
hidrgeno; lisozima, que hidroliza uniones
glicosdicas entre cido acetilmurmico y
Tabla 4-1. Componentes de la inmunidad innata

Celulares
Solubles
Clulas epiteliales de la piel y mucosas

Linfocitos T intraepiteliales
Linfocitos B-1
Mastocito
Polimorfonucleares neutrfilos
Monocitos
Macrfagos
Clulas Natural Killer
Defensinas, lisozima y otras

Sistema del complemento
Colectinas
Pentraxinas
Factores de coagulacin
Citoquinas:
TNF, IL-1, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12, IFN
Quimioquinas:
IL-8, MC, MIP
92
Sin ttulo-2
92
5/26/06, 10:25 AM
mucosas poseen sustancias como cidos grasos

(piel), enzimas como lisozima (presente en saliva, sudor, lgrimas) y pptidos antibacterianos
como defensinas con accin microbicida o
inhibidora del crecimiento bacteriano.
A nivel digestivo, participan la lisozima de
la saliva, el pH cido del estmago, las criptidinas
(pptidos antibacterianos generados en las criptas
del intestino delgado), y la flora normal que compite por nutrientes con microorganismos patgenos
y tambin elabora sustancias antibacterianas tales
como las colicinas, que previenen la colonizacin
por otro tipo de bacterias dentro del intestino.
Adems de los Componentes solubles mencionados en relacin con las barreras epiteliales y
mucosas, en la inmunidad innata hay otros componentes de este tipo, que participan en la fase de
reconocimiento y en la fase efectora (tabla 4-1). A
continuacin se describen brevemente:
El complemento es un sistema de protenas
plasmticas que interactan entre s de una manera
regulada. Es un mecanismo efector de la inmunidad
humoral inespecfica y tiene un rol amplificador de
la respuesta inflamatoria. Los precursores de este
sistema deben ser activados secuencialmente por
reacciones bioqumicas a travs de dos vas principales: clsica y alterna, que comparten una secuencia terminal comn. La va clsica se activa por
inmunocomplejos de IgG o IgM y la va alterna se
activa por lipopolisacridos de pared bacteriana,
polisacridos y agregados de inmunoglobulinas. La
va de las lectinas de la activacin del complemento
es gatillada por la unin de polisacridos microbianos
a lectinas circulante (ver captulo 18).
Las colectinas son una familia de protenas
caracterizadas por la presencia de un dominio
colgenosmil y un dominio lectina. Juegan un
rol en la inmunidad innata al actuar como receptores de patrones de reconocimiento y pueden activar al complemento va unin de C1q.
Las pentraxinas son una familia de protenas
del plasma que contienen cinco unidades globulares. La protena C reactiva es el miembro ms importante de esta familia: (a) es un reactante de fase
aguda que se sintetiza a nivel heptico, (b) su ligando es polisacrido bacteriano, (c) reconoce tambin
constituyentes fosfolipdicos de clulas daadas, (d)
funciona como opsonina y (e) puede activar el complemento por va clsica, por su unin a C1q.
El sistema de la coagulacin adems de participar en la hemostasia y contribuir a evitar localmente la diseminacin de la infeccin, est estrechamente unido a la injuria tisular y al proceso in-
flamatorio secundario a la infeccin. Interviene en

la fase de reparacin tisular y en consecuencia en
la recuperacin de la integridad de los tejidos. El
sistema de la coagulacin, junto a las otras cascadas plasmticas enzimticamente gatilladas, como
el sistema de las quininas, el sistema de la fibrinolisis
y el sistema del complemento, son mediadores de
la inflamacin. Estos sistemas se interrelacionan por
lo que la activacin de uno de ellos puede producir la activacin de los otros. La puesta en marcha
de la accin de los mediadores plasmticos de la
inflamacin junto con la activacin de los mediadores celulares, contribuye a la eliminacin del
agente infeccioso a travs de la respuesta
inflamatoria local. Las citoquinas son una familia
de protenas que participan tanto en la inmunidad
innata como en la inmunidad adquirida (ver captulo 11). Ellas son producidas por diversos tipos
celulares. Comunican clulas del sistema inmune
entre s. Ejercen acciones locales y a distancia sobre diferentes tipos celulares. Las citoquinas que
participan en la inmunidad innata son generadas
por macrfagos activados en sitios de infeccin.
Hay citoquinas de alarma o proinflamatorias
como interleuquina 1 (IL-1), factor de necrosis
tumoral (TNF) e interleuquina 6 (IL-6), las cuales
inducen en la etapa precoz de la infeccin una repuesta inflamatoria local dirigida a contenerla y,
eventualmente, inducen una respuesta sistmica
o de fase aguda. Otras citoquinas tienen funcin
quimiotctica para leucocitos como interleuquina
8 (IL-8). La interleuquina 12 (IL-12) activa clulas NK y estimula a los macrfagos, la
interleuquina 10 (IL-10) inhibe a los macrfagos
y los interferones (IFN) y tienen actividad
antiviral.
3. FASE DE RECONOCIMIENTO EN LA
RESPUESTA INMUNE INNATA
La diferencia esencial entre los sistemas
inmunolgicos innato y adquirido es el modo a travs del cual reconocen a los microorganismos. El
sistema inmune innato emplea protenas codificadas
en la lnea germinal. Reconoce estructuras compartidas por diferentes tipos de microorganismos (patrones moleculares). Estas protenas pueden ser receptores de superficie celular o sustancias solubles
de diversidad limitada.
Las principales molculas solubles de reconocimiento de la inmunidad innata, en general, reconocen estructuras carbohidrato (tabla 4-2). Las prin-
93
Sin ttulo-2
93
5/26/06, 10:25 AM
Subsecuentemente la activacin del macrfago es el

resultado de seales gatilladas por la subunidad Tolllike-4. La activacin de los macrfagos se evidencia a travs de la estimulacin de sntesis de protenas que van a favorecer la funcin microbicida
(oxidasas, xido ntrico sintetasa), la trombosis (factor tisular), la remodelacin tisular (proteasas, factores de crecimiento, factores angiognicos), inflamacin local y respuesta de fase aguda (IL-1, IL-6 y
TNF), activacin de otros tipos celulares (IL-12) y
cipales son Protena C reactiva, Protena amiloide

srico, mannose binding protein (MBP),
lipopolysaccharide binding protein (LBP), CD14
soluble y C3. Es importante destacar que algunos de
estos receptores solubles tienen la capacidad de activar complemento y de esa manera pueden favorecer
la fagocitosis, amplificar la respuesta inflamatoria y
lisar a microorganismos. Otros son profagocticos.
Claramente se puede ver que la funcin de reconocimiento est unida a funciones efectoras.
Tabla 4-2. Inmunidad innata: molculas solubles de reconocimiento

Sntesis
heptica
PCR
PAS
MBP
LBP
sCD14
C3
+
+
+
+
Ubicacin
Ligando:
srica
Polisacridos
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
Ligando:
Protena
matriz
extracelular
Activacin
complemento
Profagoctica
+
+
+
+
+
+
+
+
+
PCR, Protena C reactiva; PAS, Protena amiloide A; MBP, Mannose binding protein;
LBP, Lipopolysaccharide binding protein; sCD14, CD14 soluble.
estimulacin de la respuesta especfica a travs de

presentacin antignica y de la expresin de molculas coestimuladoras. Entre otros receptores celulares de reconocimiento que presentan los
polimorfonucleares neutrfilos se encuentran el receptor para el pptido bacteriano que contiene residuos N-formil metionil y el receptor para fragmento
de complemento como CR3, que puede directamente reconocer bacterias para fagocitosis.
Los principales receptores celulares de reconocimiento de la inmunidad innata (tabla 4-3) se ubican en la
membrana celular de polimorfonucleares neutrfilos,
monocitos y macrfagos, dotndolos as de la capacidad de vigilancia de microorganismos que puedan
haber ingresado al husped habiendo sobrepasado
la barrera inicial del sistema de defensa inespecfico. Reconocen glicoprotenas y lipopolisacridos
bacterianos comunes a muchos patgenos y que no
estn presentes en clulas de mamferos. Son los receptores de patrones de reconocimiento. Adems, los
receptores solubles y celulares de reconocimiento
pueden actuar en conjunto para llevar a cabo su funcin. De este modo el sistema sensor de
lipopolisacrido (LPS) del macrfago est constituido por tres componentes: una protena plasmtica
de unin a LPS que es LBP, un receptor de superficie celular para LPS que es CD14 y un receptor
transductor de seales llamado receptor Toll-like4. LPS circulante es inicialmente unido a LBP y
luego es entregado a CD14 sobre la superficie del
macrfago donde la LBP es liberada.
4. FASE EFECTORA EN LA RESPUESTA

INMUNE INNATA
La unin ligando-receptor induce respuestas celulares que estimulan la inflamacin y la accin
microbicida. Entre los sistemas mediadores de
la inflamacin juega un rol preponderante el sistema de las cascadas plasmticas enzimticamente gatilladas: sistema de la coagulacin, sistema de las quininas, sistemas de la fibrinolisis y
sistema del complemento (figura 4-3). Estos siste-
94
Sin ttulo-2
94
5/26/06, 10:25 AM
Tabla 4-3. Inmunidad innata: receptores celulares de reconocimiento

Ubicacin
Ligando
Funcin
Receptor de manosa
Macrfago tisular
Glicoprotenas
microbianas
Fagocitosis
Receptores scavenger
Macrfago tisular
Pared celular de
bacterias y hongos
Fagocitosis
Receptor CD14/Toll-like
Monocitos y macrfagos
LPS
Activacin de macrfagos
Receptor CR3
Monocitos, macrfagos
y PMN neutrfilos
iC3b, LPS
Fagocitosis, adhesin
Receptor pptido Nformilmetionil
PMN neutrfilos,
macrfagos
Protenas bacterianas
Activacin neutrfilos
y macrfagos
LPS, Lipopolysaccharide (lipopolisacrido) ; PMN, polimorfonucleares.
opsonina y favorece la fagocitosis por neutrfilos

y macrfagos. La activacin del sistema de las
quininas libera bradiquinina, que aumenta la permeabilidad vascular y tambin provoca dolor. Adems, el quiningeno, de alto peso molecular, es
un cofactor en la activacin del factor Hageman.
La calicreina por s misma, al ser un activador de
este factor, permite la amplificacin autocataltica
del estmulo inicial. Los neutrfilos y macrfagos
activados matan microorganismos por medio de
enzimas lisosomales, intermediarios reactivos del
oxgeno y xido ntrico, o sea tambin en relacin
con estos receptores de superficie celular se puede ver la unin entre funcin de reconocimiento y
funciones efectoras.
mas estn interrelacionados y juegan un papel amplificador de la respuesta inflamatoria. El factor

Hageman o factor XII es fundamental; su activacin (por superficies cargadas negativamente,
como colgeno, membranas basales, expuestos
durante la injuria tisular) inicia la cascada de la
coagulacin, del sistema de las quininas y de la
fibrinolisis. La plasmina activa al sistema del complemento; factores derivados de ste participan en
la inflamacin aguda, como C3a y C5a, que actan sobre el mastocito produciendo su
degranulacin y liberando histamina, lo que produce aumento de la permeabilidad vascular y
vasodilatacin. C5a favorece la adhesin,
quimiotaxis y activacin de leucocitos. C3b es una
Figura 4-3. Sistemas mediadores del plasma en la inflamacin. Protenas de los sistemas de la coagulacin, de la fibrinolisis, de
las cininas y del complemento interaccionan, participando como mediadores qumicos de la inflamacin. CAPM, ciningeno de
alto peso molecular; AP, activador del plasmingeno; PDF, productos de degradacin de la fibrina.
95
Sin ttulo-2
95
5/26/06, 10:25 AM
Con respecto a mediadores de la inflamacin

de origen celular los productos derivados del metabolismo del cido araquidnico son fundamentales (figura 4-4). Luego de su liberacin desde
fosfolpidos de membranas a travs de la activacin de fosfolipasa A2, el cido araquidnico es
metabolizado a travs de dos vas, la va de la
cicloxigenasa y la va de la lipoxigenasa. En la
va de la cicloxigenasa se obtienen secuencialmente, entre otros metabolitos, los endoperxidos prostaglandinas G2 y H2, tromboxano A2
(agregante plaquetario y vasoconstrictor),
prostaciclina o prostaglandina I2 (antiagregante
plaquetario y vasodilatador) y las prostaglandinas
E2, F2 y D2 (vasodilatadores). El tromboxano A2
se sintetiza, fundamentalmente, en las plaquetas y
la prostaciclina en las clulas endoteliales. En la
va de la lipoxigenasa se genera el cido
hidroperoxieicosatetraenoico (HETE), un potente
agente quimiotctico para los neutrfilos. El HETE
puede originar el leucotrieno A4, a partir del cual se
generan los leucotrienos B4 (factor quimiotctico)
y leucotrienos C4, D4 y E4, que aumentan la permeabilidad vascular. El trmino leucotrieno se debe
a que presentan una cadena conjugada trinica y
que se aislaron originalmente en los leucocitos.
bios vasculares de aumento de flujo y de permeabilidad, producidos por los mediadores qumicos de
la inflamacin y el reclutamiento de leucocitos hacia los sitios de infeccin con la formacin subsecuente del infiltrado inflamatorio. Este reclutamiento es estimulado por citoquinas y mediado
por molculas de adhesin. Estas molculas son
glicoprotenas unidas a la membrana celular que
permiten a la clula interactuar con otra (ver captulo 12). La migracin de los leucocitos se realiza
a travs del endotelio de la vnula postcapilar. Productos bacterianos como lipopolisacridos e IL-1
y TNF secretados por macrfagos estimulan a las
clulas endoteliales para expresar secuencialmente
selectinas e integrinas que median la adhesin preferencial de diferentes tipos de leucocitos. Las
selectinas intervienen en la unin inicial, laxa del
leucocito con la clula endotelial y las integrinas
median la unin estable entre aquellas clulas. Esta
unin es previa a la migracin del leucocito a travs de los espacios intercelulares endoteliales. Los
quimioatractantes activan la adhesividad de las
integrinas y dirigen la migracin de los leucocitos
de acuerdo al gradiente de concentracin de factores quimiotcticos hasta llegar al foco de infeccin (figura 4-5).
Figura 4-4. Metabolitos del cido araquidnico. Una vez

desesterificado por la fosfolipasa A2, el cido araquidnico
es metabolizado a travs de las vas de la cicloxigenasa y de la
lipoxigenasa. PGG2 y PGH2, endoperxidos; PGI2,
prostaciclina; PGE2, PGF2a y PGD2, prostaglandinas; HPETE,
cido hidroxieicotetranoico; LTA4-LTE4, leucotrienos.
Figura 4-5. Migracin de leucocitos en inflamacin. Varias

familias de molculas de adhesin controlan la migracin de
leucocitos durante la inflamacin; las selectinas facilitan el
rodamiento (rolling), las quimioquinas dan las seales que
convierten la interaccin de baja afinidad mediada por
selectinas en una interaccin de alta afinidad mediadas por
integrinas previa a la extravasacin de leucocitos.
La respuesta inflamatoria local se evidencia

semiolgicamente por los cinco signos clsicos:
aumento de volumen, eritema, aumento de temperatura local, dolor e impotencia funcional. Dichos signos son la expresin clnica de los cam-
Los neutrfilos inician el englobamiento a

travs de la proyeccin de pseudpodos alrededor del microorganismo, y luego fusionan los polos distales de aquellos, para formar el fagosoma.
96
Sin ttulo-2
96
5/26/06, 10:25 AM
Los grnulos citoplasmticos de los leucocitos

polimorfonucleares se fusionan a la base del
fagosoma y descargan su contenido dentro de l.
Estos grnulos, como se dijo anteriormente, contienen enzimas y otras sustancias bactericidas o
bacteriostticas. Cuando los fagocitos son activados por estmulos particulados o solubles, la va
glicoltica y el shunt hexosamonofosfato, son estimulados para producir nicotinamida adenina
dinucletido fosfato reducido (NADPH). NADPH
es un sustrato para la enzima NADPH oxidasa,
que es activada. Esta activacin reduce el oxgeno molecular a anin superxido, que es convertido a H2O2, el cual por medio de la accin de la
mieloperoxidasa, tambin presente en fagocitos,
forma OCl-, potente citotxico (ver captulo 3).
Otra va incluye la produccin de xido ntrico.
Los neutrfilos activados expresan una enzima
inducible llamada xido ntrico sintetasa que genera xido ntrico a partir del aminocido arginina
y oxgeno molecular; en presencia de otras especies reactivas de oxgeno dentro de la vacuola
fagoctica el xido ntrico se convierte en otros
productos altamente txicos para microorganismos. Hay un aumento del consumo de oxgeno
por el neutrfilo llamado estallido respiratorio que
se produce inmediatamente despus de la
fagocitosis. Estas vas oxidativas proporcionan
algunos de los efectos antimicrobianos preponderantes de los neutrfilos. La generacin de radicales libres es regulada cuidadosamente para evitar
dao tisular por el sistema del glutatin, catalasa,
superxidodismutasa, etc.
La respuesta de fase aguda se caracteriza por
un conjunto de cambios que afectan al sistema nervioso, endocrinolgico y hematolgico. Tambin
se presentan alteraciones del metabolismo y de la
nutricin. Pero, sin duda, lo ms llamativo es la
respuesta febril y la sntesis de protenas de fase
aguda. Estos cambios reemplazan a los mecanismos homeostticos normales por nuevos equilibrios y prioridades los que presumiblemente contribuyen a mejorar la respuesta adquirida. La mayor parte de estos cambios se presentan dentro de
las etapas iniciales de la infeccin y son mediados
por IL-1, TNF e IL-6. La sntesis de estas
citoquinas es inducida por lipopolisacridos
bacterianos que estimulan al macrfago. La respuesta de fase aguda se caracteriza por la presencia de fiebre, somnolencia, anorexia; aumento de
ACTH, cortisol y catecolaminas y disminucin de
Insulin like growth factor 1 (IGF-1); aumento
de la cantidad de neutrfilos inmaduros circulan-
tes, anemia de enfermedades crnicas y

trombocitosis; balance nitrogenado negativo, prdida de masa muscular, disminucin de la
gluconeognesis, aumento de la lipolisis del tejido adiposo y caquexia; disminucin del zinc y del
fierro sanguneos; y aumento de la sntesis heptica de protenas de fase aguda.
En general, las protenas de fase aguda tienen funciones destinadas a favorecer la eliminacin de agentes infecciosos, limitar el dao tisular,
favorecer la reparacin y por lo tanto restablecer
la homeostasis (tabla 4-4). Hay protenas de fase
aguda cuyos niveles sricos aumentan significativamente y se conoce su evolucin durante el
curso de la infeccin. La variacin de estos
parmetros tiene utilidad clnica para el seguimiento de las infecciones. Las protenas de fase aguda
cuyos niveles tienen mayor modificacin son: Protena C reactiva y protena amiloide srico. Tambin aumenta MBL (Mannose Binding Lectin).
La Protena C reactiva inicia su aumento srico
entre seis u ocho horas de iniciado el proceso, alcanzando el mximo nivel a los dos o tres das. La
Protena C reactiva y MBL actan como opsoninas
y activan complemento, por lo tanto el husped
puede disponer rpidamente de dos protenas con
propiedades funcionales que facilitan la fagocitosis
y amplifican la respuesta inflamatoria. La concentracin srica de otras protenas disminuye durante
la respuesta de fase aguda; estas protenas no son
requeridas para la defensa del husped.
La respuesta de fase aguda disminuye al eliminarse la infeccin, por la inhibicin de
citoquinas mediada por glucocorticoides y por
citoquinas reguladoras, como IL-10, que inhibe
a los macrfagos activados. IL-10 est
involucrada en el control homeosttico de la inmunidad innata.
En relacin con la evolucin temporal de la
respuesta inmune innata y adquirida, los mecanismos innatos actan inmediatamente ya que se produce el reconocimiento por efectores preformados
inespecficos (0-4 horas). Los mecanismos de inmunidad innata son seguidos horas despus por
respuestas inducidas precoces (4-96 horas) que
pueden ser activados por la infeccin pero no dan
inmunidad protectora. Estas etapas precoces ayudan a mantener la infeccin bajo control mientras
los linfocitos especficos para el antgeno y que
pertenecen al sistema inmune especfico son activados (ms de 96 horas). Las citoquinas y molculas coestimuladoras producidas durante estas
etapas precoces tienen un importante rol en dar
97
Sin ttulo-2
97
5/26/06, 10:25 AM
Tabla 4-4. Protenas de fase aguda

Reactantes positivos
Reactantes negativos
Albmina
Transferrina
Transtiretina
IGF-1
Factor XII
Feto protena
Complemento:
C3, C4, C9, Factor B, MBL,
Inhibidor de C1, C4b-bp.
Coagulacin y fibrinolisis:
Fibringeno, Plasmingeno,
Activador tisular de plasmingeno,
Uroquinasa, Protena S, Vitronectina,
Inhibidor I del activador de plasmingeno.
Antiproteasas:
Inhibidor 1 proteasa, 1 Antiquimotripsina,
Inhibidor de la tripsina pancretica.
Protenas de transporte:
Cruloplasmina, Haptoglobina, Hemopexina.
Otras:
Protena C reactiva, Amiloide A srico,
1-Glicoprotena cida, Fibronectina,
Ferritina, Angiotensingeno, LPS-bp.
MBL: Mannose binding lectin; C4b-bp: C4b binding protein; LPS-bp: Lipopolysaccharide binding
protein; IGF-1: Insulin like growth factor 1.
se asocian con mayor frecuencia a pacientes que

presentan deficiencias de este sistema. Estos pacientes presentan infecciones muy graves y recurrentes especialmente bacterianas o por hongos a
pesar de tener un sistema inmune adquirido intacto.
Es as como pacientes con alteraciones de
barrera cutnea como los grandes quemados presentan infecciones muy graves y pacientes con deficiencias cuantitativas o cualitativas de
polimorfonucleares neutrfilos presentan infecciones recurrentes principalmente bacterianas (ver
captulo 30). Las deficiencias cualitativas pueden
ser primarias (deficiencias de grnulos azurfilos
y especficos, deficiencias de adhesin
leucocitaria, deficiencias de generacin de
metabolitos intermediarios del oxgeno, etc.) o
pueden ser adquiridos (deficiencias de quimiotaxis
y fagocitosis que se observan en Diabetes Mellitus
e Insuficiencia Renal crnica).
Las deficiencias cuantitativas tambin pueden ser primarias o adquiridas. Neutropenias menores a 500 clulas/L, conllevan un serio riesgo
de infeccin por hongos o bacterias cuyo pronstico va a depender de la rapidez de la cada de los
neutrfilos, de la reserva medular, de la duracin
forma a la respuesta inmune especfica y puede

determinar que una respuesta sea mediada por LT
o LB.
En la inmunidad innata, microorganismos que
son reconocidos e ingeridos por macrfagos, activan macrfagos o clulas presentadoras de
antgenos (CPA) para secretar citoquinas y expresar molculas coestimuladoras como B7-1 y B72 que en conjunto con el antgeno estimulan al LT
especfico. Microorganismos extracelulares que
son reconocidos a nivel srico pueden activar complemento; la protena C3d liberada durante esta
activacin como producto de clivaje de C3 se une
a CR2 de LB especfico para ese antgeno y que
ha recibido, al reconocer al microorganismo, su
primera seal de activacin. CR2 es un receptor
para C3d que est presente en LB maduros. La
unin de C3d a CR2 da la segunda seal de activacin para LB y de este modo se inicia la respuesta inmune humoral especfica.
5. PROYECCIN CLNICA
La importancia de la inmunidad innata queda de manifiesto al pensar en las patologas que
98
Sin ttulo-2
98
5/26/06, 10:25 AM
y de la causa de la neutropenia. Entre las

neutropenias adquiridas, las ms importantes son
las autoinmunes y las secundarias a drogas
citotxicas.
Pacientes con deficiencias del sistema de
complemento se presentan con diferentes cuadros
clnicos segn las fracciones del complemento
que estn deficitarias (ver captulos 18 y 30). Aquellos con deficiencias de C1, C2 y C4 presentan
asociacin a patologas autoinmunes como Lupus
Eritematoso Sistmico y discoide con mayor frecuencia que la poblacin general. Aquellos con
dficit de C3, Factor H, Factor I, Properdina presentan susceptibilidad a infecciones pigenas. Por
ltimo los pacientes con dficit de los componentes finales del sistema del complemento (Complejo
de ataque a la membrana) y con dficit de los componentes de la va alterna son ms susceptibles a
infecciones fulminantes por Neisserias.
Existen dficit inmunes fisiolgicos que contribuyen a una mayor susceptibilidad a infecciones en pacientes peditricos. En el perodo de recin nacido la inmadurez del sistema inmune inespecfico contribuye a este hecho. Se puede evidenciar tambin la importancia de la inmunidad
innata al revisar la maduracin de los componentes de sta durante la etapa postnatal y en los primeros aos de vida y su relacin con la inmunidad adquirida. La respuesta inmune especfica a
la mayora de los antgenos depende de complejas interacciones entre macrfagos, LT y LB. Pero
la expresin completa de mecanismos de defensa
del husped requiere la maduracin de otras lneas celulares y componentes sricos relacionados con la fase efectora de la inmunidad. Esto incluye complemento, fagocitos, mastocitos,
basfilos, etc., que son componentes de la inmunidad innata. En el recin nacido los niveles de
complemento son bajos en comparacin con los
del adulto, y los fagocitos presentan una inmadurez fisiolgica. Hay una produccin defectuosa y
una migracin disminuida de polimorfonucleares
al foco infeccioso. Hay una capacidad disminuida
de la stem cell para responder a las demandas
de la infeccin. Adems, la produccin de factor
estimulador de colonias de granulocitos y
monocitos (GM-CSF) por monocitos est disminuida. Tambin se ha invocado dficit funcionales intrnsecos de los PMN del recin nacido. Estos pueden presentar defectos en adherencia, agregacin, migracin, fagocitosis y funciones
microbicidas. Esto se ha asociado con dficit de
maduracin que se expresa en alteracin de la
transduccin de seales, disminucin en la expresin de receptores en la superficie celular, alteracin de la estructura del citoesqueleto y disminucin en la produccin de intermediarios
reactivos del oxgeno. En los recin nacidos tambin se ha descrito deficiencia de regulacin de
expresin de molculas de adhesin (selectinas e
integrinas) en PMN lo que podra explicar la falla
relativa de estas clulas para formar el infiltrado
inflamatorio.
Los monocitos en el recin nacido son semejantes a los de los adultos en cantidad, capacidad
fagoctica, capacidad microbicida, perfil enzimtico
y propiedades migratorias al azar. Son
funcionalmente deficientes en relacin con la activacin de LT y en presentacin antignica de
aloantgenos y antgenos virales. Los monocitos del
recin nacido presentan menor capacidad de produccin de IL-6 y TNF. Este hecho conlleva menor
reactividad inflamatoria y menor respuesta febril
en esta etapa de la vida. La adhesin de los
monocitos est disminuida lo que incide en el reclutamiento de estas clulas al foco de infeccin.
La actividad de las clulas NK en los recin
nacidos est disminuida con respecto al adulto.
Responden menos a seales de activacin
exgenas.
Durante el perodo de lactante hay una maduracin de los fagocitos y un aumento progresivo de las concentraciones de complemento.
6. FILOGENIA DE LA RESPUESTA INMUNE INNATA

Los mecanismos de la inmunidad innata estn presentes en todos los organismos en diferente forma. La defensa del husped en invertebrados es mediada por clulas y molculas que se
parecen a los mecanismos efectores de la inmunidad innata de los organismos superiores.
Los invertebrados, por ejemplo,
equinodermos, anlidos y artrpodos, poseen barreras defensivas fsico qumicas, procesos de coagulacin y cicatrizacin de heridas. La fagocitosis
est presente en todos los invertebrados. Los
equinodermos y artrpodos adems poseen factores humorales defensivos naturales o inducibles y
un sistema ltico anlogo al complemento. En algunos invertebrados como esponjas, celenterados,
anlidos, artrpodos, tunicados y equinodermos
hay reacciones de reconocimiento de injertos
alognicos, limitadas y de corta duracin. Los
99
Sin ttulo-2
99
5/26/06, 10:25 AM
mecanismos especficos y especializados propios

de la inmunidad adquirida se encuentran slo en
vertebrados. No obstante lo anterior, existen semejanzas entre reconocimiento de patgenos, vas
de seales y mecanismos efectores de inmunidad
innata en animales inferiores y mamferos lo que
apunta a un ancestro comn de estas defensas.
Recientemente, la inmunidad innata ha logrado despertar mayor inters en investigacin ya que
la permanencia de sus mecanismos en especies
ms evolucionadas que cuentan con el sistema de
inmunidad adquirida, avala su eficacia en la primera lnea de defensa, y conjuntamente con eliminar la infeccin, es capaz de estimular y orientar la respuesta inmune especfica.
Janeway, C.A.; Travers, P.; Walport, M.; Capra,

J.D., Immunobiology. The immune system in
health and disease, Fourth edition, Current
Biology Publications, Elsevier Science Ltd./
Garland Publishing, London, 1999.
LECTURAS SUGERIDAS
Ploegh, H.L., Viral strategies of immune

evasion, Science; 280 (10):248-253, 1998.
Jurlow, E., Ed. Inflamacin y reparacin tisular,

Mediterrneo, Santiago, 1996.
Kopp, E.B.; Medzilitov, R., The Toll-receptor
family and control of innate immunity, Current
Opinion in Immunology; 11:13-18, 1999.
Mackay, I.; Rosen, F.S.; Delves, P.J.; Roitt, I.M.,
The immune system, New Engl J Med; 343
(1):37-49, 2000.
Abbas, A.K.; Lichtman, A.H.; Pober, J.S., Cellular

and molecular immunology, Fourth edition, W
B Saunders Company, Philadelphia, 2000.
Rabb, H;, Bonventre, J.V., Leukocyte Adhesion

Molecules in Transplantation, Am J Med. 1999;
107:157-165.
Cotran, R.S.; Kumar V.; Robbins, S.L., Pathologic

basis of disease, Fifth Edition, W B Saunders
Company, Philadelphia, 1994.
Yang K.D.; Hill, H.R., Immune responses to

infectious diseases: an evolutionary perspective,
Pediatr Infect Dis J.; 15 (4):355-364, 1996.
Fearon, D.T.; Locksley, R.M., The Instructive

Role of Innate Immunity in the Acquired Immune
Response, Science; 272 (15):50-54, 1996.
Gabay, C.; Kushner, I., Acute-phase proteins and
other systemic responses to inflammation, New
Engl J Med.; 340 (6):448-454, 1999.
Galli, S.J.; Maurer, M.; Lantz, C.S., Mast cells
as sentinels of innate immunity, Current Opinion
in Immunology; 11:53-59, 1999.
Hoffmann, J.A.; Kafatos F.C., Janeway C.A.,
Ezekowitz R.A.B., Phylogenetic perspectives in
innate immunity, Science; 284 (may 21):13131318, 1999.
Holt, P.G., Postnatal maturation of immune
competence during infancy and childhood,
Pediatr Allergy Immunol.; 6:59-70, 1995.
Holland, S.M.; Gallin, J.I., Evaluation of the
patient with recurrent bacterial infections, Annu
Rev Med.; 49:185-199, 1998.
100
Sin ttulo-2
100
5/26/06, 10:25 AM

SECCIN
II
ESPECIFICIDAD DE LA
RESPUESTA INMUNE
101
Sin ttulo-2
101
5/26/06, 10:25 AM
102
Sin ttulo-2
102
5/26/06, 10:25 AM

Captulo 5
ANTGENOS
Mara Ins Becker C. y Alfredo De Ioannes I.
1. Introduccin
2. Conceptos generales
2.1. Antgeno
2.2. Inmunogenicidad y antigenicidad
2.3. Determinante antignico
2.4. Haptenos
3. Caractersticas del antgeno que lo
hacen inmunognico
3.1. Tamao
3.2. Presencia de grupos qumicos activos
3.3. Conformacin espacial de
los eptopos
3.4. Movilidad atmica
4. Naturaleza qumica de los antgenos
4.1. Protenas
4.2. Carbohidratos
4.3. Lpidos
4.4. cidos nucleicos
5. Clasificacin de los antgenos segn
las clulas inmunes involucradas en
la respuesta
5.1. Antgenos timo-dependientes
5.2. Antgenos timo-independientes
6. Clasificacin general de los antgenos segn su funcin
6.1. Antgenos de trasplante
6.2. Antgenos tumorales
6.3. Autoantgenos
6.4. Antgenos de diferenciacin
6.5. Superantgenos
6.6. Alergenos
103
Sin ttulo-2
103
5/26/06, 10:25 AM
104
Sin ttulo-2
104
5/26/06, 10:25 AM
RESUMEN
Los antgenos son compuestos de diversa naturaleza qumica provenientes del medio o
generados por el propio organismo- que son capaces de inducir una respuesta inmunolgica en
los vertebrados, propiedad denominada inmunogenicidad. La interaccin del antgeno con los
productos de la respuesta inmune y especialmente, con los anticuerpos propiedad denominada
antigenicidad- ha permitido conocer la estructura y funcin de numerosos antgenos, demostrndose que los productos de la respuesta inmune interactan con regiones especficas del antgeno,
denominadas eptopos, los cuales pueden corresponder a una secuencia aminoacdica determinada (eptopos lineales) o a un arreglo espacial de la cadena polipeptdica (eptopos
conformacionales).
Aunque la capacidad inmunognica de un antgeno depende de su naturaleza qumica intrnseca (tamao, forma, movilidad atmica, presencia de grupos qumicos activos y residuos
aromticos) tambin est relacionada con la capacidad de respuesta del organismo y, en este
sentido, son determinantes sus caractersticas genticas y su historial inmunolgico.
conceptos de vitalidad y patogenicidad eran perfectamente disociables de la inmunogenicidad, lo

que determin que la inmunologa se
independizara de la microbiologa. Fue en esta
poca cuando Landsteiner, padre de la
inmunoqumica, acu el concepto de determinante antignico o eptopo y defini serolgicamente
los grupos sanguneos humanos.
1. INTRODUCCIN
Los conceptos de antgeno e inmungeno son
tan antiguos como la inmunologa. Inicialmente
se asoci el concepto de vitalidad y patogenicidad
a la capacidad de inducir una respuesta inmune
protectora: los inmunlogos del siglo pasado se
resistan a pensar que algo inerte e inocuo esencialmente intil- pudiera despertar una respuesta
inmune. Esa lnea de pensamiento asociaba a la
microbiologa como una disciplina secundaria, limitando el desarrollo de vacunas para la profilaxis
de enfermedades graves que afectaban a la humanidad. Con el tiempo, la patogenicidad como requisito de la inmunogenicidad, cedi el paso al
uso de cepas bacterianas atenuadas, o, simplemente se utilizaron microorganismos con reaccin cruzada para inducir una proteccin efectiva, siendo
el caso ms notable el desarrollo de la vacuna para
la viruela por Jener. La demostracin por parte de
Ehrlich y Von Behring que microorganismos muertos por fijacin con formaldehdo o por calentamiento eran inmunognicos, fue un nuevo paso
para acercarse a la esencia del reconocimiento
inmunolgico.
A principios de este siglo, se pudo inducir
inmunidad protectiva con fracciones de
microorganismos, los toxoides, que son exotoxinas
bacterianas inactivadas, demostrndose que los
2. CONCEPTOS GENERALES
2.1. Antgeno
La definicin de antgeno deriva de la esencia misma del sistema inmune: su capacidad para
reconocer en forma especfica, en una molcula,
caractersticas que no son constituyentes normales del organismo, mediante la activacin de
linfocitos B o T.
Los antgenos pueden ser compuestos de diversa naturaleza qumica provenientes del medio,
que se encuentran presentes en microorganismos,
plantas, alimentos, frmacos y cosmticos, etc.
Los antgenos tambin pueden ser compuestos que
se generan en el organismo como resultado del
metabolismo en el caso de la detoxificacin de
drogas, como resultado de una transformacin
neoplsica (antgenos tumorales) o como manifestacin de enfermedades autoinmunes
105
Sin ttulo-2
105
5/26/06, 10:25 AM
(autoantgenos).
cuerpo, tambin pueden ser aplicados a la relacin del antgeno con receptores especficos
de las clulas T. Sin embargo, a los fragmentos peptdicos presentados clsicamente por los
MHC a los Receptores de clulas T (TCR), se
han agregado lpidos y glicolpidos presentes
en micobacterias que son presentados por
CD1.
En resumen, gran parte del conocimiento disponible sobre la estructura y funcin de numerosos antgenos se debe a que ha sido posible desarrollar anticuerpos especficos contra ellos; esto
ha permitido estudiar las regiones del antgeno con
las cuales dichos anticuerpos interactan y tambin ha hecho posible comprender las condiciones y mecanismos fisicoqumicos que gobiernan
esta interaccin.
2.2. Inmunogenicidad y antigenicidad

Dos propiedades de un antgeno son
inmunogenicidad y antigenicidad.
Cuando un antgeno induce una respuesta del
sistema inmune se dice que es inmunognico, propiedad que est ntimamente relacionada con la
capacidad de estimular linfocitos T en el caso de
las protenas y con la actividad mitognica de los
polisacridos en las clulas B. Aunque la capacidad inmunognica de una molcula depende de
varios factores intrnsecos relacionados con su
estructura qumica, esta propiedad es la sumatoria
de una serie de influencias que reflejan tanto el
historial inmunolgico del animal como los atributos genticos de que ste dispone para reconocerlo como tal. Es decir: el repertorio de clulas
B, la actividad de clulas T helper y clulas T
supresoras, la red idiotipo-anti-idiotipo y el Complejo Principal de Histocompatibilidad (MHC)
(ver captulo 8).
Recientemente, se ha postulado que las molculas, para ser inmunognicas adems de ser
capaces de ser reconocidas por los receptores
especficos, deberan generar seales de peligro para el sistema inmune por medio de receptores de la respuesta innata, como son los de la
familia Toll, descritos inicialmente en
Drosophilia melanogaster, que reconocen estructuras ms generales presentes en compuestos bacterianos como son el LPS por el receptor
TLR4, pptido glicanos, lipoprotenas
bacterianas y lipoarabino-mananos de
micobacterias por el receptor TLR2. El DNA
bacteriano con motif CpG es reconocido por
TLR9. La estimulacin de estos receptores finalmente converge en la activacin del factor
NFkB, que induce la expresin de genes defensivos y pro-inflamatorios en clulas claves de
la respuesta innata. Por esta razn, la incorporacin de bacterias o productos de ellas en los
adyuvantes para aumentar la inmunogenicidad
de protenas, tiene como fundamento la
estimulacin de clulas accesorias del sistema
inmune.
El trmino antigenicidad se refiere a la
capacidad de interaccin de un antgeno con
los productos de una respuesta inmune, ya sea
con anticuerpos o con clulas T. Aunque muchos de los conceptos definidos aqu han surgido del estudio de la reaccin antgeno-anti-
2.3. Determinante antignico

El lugar de reconocimiento especfico de los
anticuerpos en el antgeno se denomina determinante antignico o eptopo. En general, los
eptopos presentes en protenas y macromolculas corresponden a zonas flexibles que poseen grupos qumicos ricos en posibilidades de
interaccin con el sitio activo de los anticuerpos.
Como se ver ms adelante, la presencia de grupos aromticos y de regiones con alta movilidad
atmica es determinante en la interaccin
antgeno-anticuerpo.
Los antgenos proteicos pueden contener uno
o ms determinantes antignicos diferentes -a menos que la protena tenga subunidades o segmentos repetidos- y, en teora, cada uno de ellos puede interactuar con un anticuerpo.
La observacin que los anticuerpos producidos contra una protena nativa a menudo no reaccionan con la protena desnaturalizada, llev a definir dos clases de determinantes antignicos: los
de tipo lineal o secuencial y los de tipo
conformacional o discontinuo, como lo ilustra
la figura 5-1, utilizando la protena lisozima como
modelo.
Los determinantes lineales, derivan de la estructura primaria de la protena; corresponden a
eptopos formados por aminocidos adyacentes en
la secuencia polipeptdica, y se calcula que el tamao necesario de un eptopo para unir un anticuerpo especfico es de unos seis aminocidos de
longitud. Estos eptopos se localizan en la superficie o en una regin extendida de la molcula. Si
los determinantes lineales se encuentran al inte-
106
Sin ttulo-2
106
5/26/06, 10:25 AM
Figura 5-1. Estructura antignica de la lisozima de huevo de pollo. La lisozima es una pequea protena globular cuya estructura primaria consiste en una cadena polipeptdica de 129 aminocidos unida por cuatro puentes disulfuro. Estudios cristalogrficos
apoyados con antisueros convencionales de cabra y conejo y anticuerpos monoclonales murinos, han permitido definir en su
estructura antignica 8 pptidos principales denominados de la siguiente forma: N-C; LII, pIb; una regin continua entre los
aminocidos 34 y 54 dentro de pIb; pptido 8; regin del loop (asa) entre los residuos 60 a 83; loop II y loop III. Para
determinar la importancia de diferentes aminocidos en la unin de los anticuerpos, se han realizado estudios con anticuerpos
dirigidos contra la regin del loop (la ms inmunognica, junto con el pptido N-C) utilizando lisozima obtenida de huevos de
diferentes aves, pptidos derivados de la protena nativa y pptidos sintticos en que algunos aminocidos han sido modificados.
Los resultados demuestran claramente que no todos los aminocidos de esta regin contribuyen a la antigenicidad de este pptido,
siendo la arginina que se encuentran en la posicin 68, el requerimiento principal para la unin de los anticuerpos. Se ha demostrado que la antigenicidad de esta molcula depende de su estructura conformacional intacta, puesto que existe muy poca reaccin
cruzada entre lisozima nativa y desnaturada.
rior de la protena, es necesario desnaturalizarla

para hacer accesibles los anticuerpos.
Los determinantes conformacionales corresponden a eptopos derivados del arreglo espacial
o plegamiento de la cadena peptdica; es decir, dependen de la estructura secundaria y terciaria de
la protena, siendo en ciertos casos estabilizados
por puentes disulfuro.
Con ayuda de los anticuerpos monoclonales
(ver captulo 44) -una de cuyas propiedades ms
poderosas es que se unen a un slo eptopo del
antgeno- se ha logrado conocer la estructura
antignica completa de algunas protenas globulares, que han sido utilizadas como antgenos
modelo. Entre ellas se encuentran la mioglobina,
la lisozima, el citocromo c y la albmina del suero. Los estudios con estas protenas han permitido definir los siguientes conceptos sobre la estructura antignica de las protenas: (a) prcticamente
toda la superficie de una protena puede ser
inmunognica y antignica a la vez y puede incluir mltiples determinantes antignicos a menudo sobrepuestos. (b) muchos sitios antignicos
presentan un arreglo tridimensional de residuos
de aminocidos que requieren la conformacin
nativa de la protena, para su integridad antignica.
c) en un antgeno dado, los determinantes potencialmente inmunognicos varan de una especie a
otra y dependen tanto de las diferencias estructurales entre el antgeno y las protenas propias del
107
Sin ttulo-2
107
5/26/06, 10:25 AM
husped como de los mecanismos que regulan las

interacciones entre las diferentes subpoblaciones
celulares que desarrollan la respuesta inmune.
De tal modo, se puede decir que en algunas
protenas los eptopos estn suficientemente separados como para unir anticuerpos especficos
sin interferirse; pero, algunas molculas tienen
eptopos sobrepuestos y, a menudo, la unin del
primer anticuerpo puede interferir estricamente
con la unin de otro anticuerpo. Adems hay casos de eptopos que se exponen a raz de un cambio conformacional producido por la unin de un
anticuerpo a otro eptopo de la molcula. Finalmente, se pueden producir neoeptopos como resultado, por ejemplo, del tratamiento de una protena con proteasas.
Cabe destacar que el conjunto de anticuerpos
que predominan despus de una inmunizacin con
una protena nativa, no es igual al repertorio potencial total del animal. Ciertas secuencias y a
veces residuos individuales sobre la superficie de
la protena, pueden identificarse como
inmunodominantes: son aquellos a los cuales se
dirige la mayor parte de la respuesta inmune. Esto
puede deberse a propiedades estructurales especiales intrnsecas de esa regin y a factores
genticos propios del animal.
El elemento estructural del determinante
antignico que se proyecta distalmente desde la
masa central del antgeno y, que aporta mayor cantidad de energa libre para la interaccin con el
anticuerpo, se denomina grupo inmunodominante y determina la especificidad del anticuerpo. Este concepto surgi de los estudios para
determinar las fuerzas responsables de la estabilidad de la unin antgeno-anticuerpo. Dado que
ellas afectan la especificidad de la unin, se puede afirmar lo siguiente: Los anticuerpos reaccionan ms efectivamente con antgenos que estimulan su formacin que con otros. Dentro de este
contexto, se les designa como antgenos
homlogos. Sin embargo, ocasionalmente, como
resultado de una reaccin cruzada, algunos
anticuerpos reaccionan con mayor afinidad con un
antgeno heterlogo (antgeno diferente al que
gener el anticuerpo) que con uno homlogo; es
el caso de los anticuerpos denominados
heteroclticos.
masa molecular inferior a 5 kDa (alergenos, drogas, mono u oligosacridos y oligopptidos) slo
pueden actuar como inmungenos al ser acopladas qumicamente a macromolculas de
inmunogenicidad probada, que funcionan como
transportadoras; son los denominados haptenos.
La base del concepto de la ntima relacin de
la respuesta inmune a un antgeno con su estructura qumica, fue planteada por Landsteiner a principios del siglo XX. Este investigador acopl varios haptenos a diferentes protenas transportadoras y demostr que los anticuerpos producidos
contra estas protenas conjugadas artificialmente,
exhiban reacciones especficas con los grupos
introducidos (figura 5-2). Debido a que tambin
se formaban anticuerpos contra la protena transportadora, para evidenciar la antigenicidad del
hapteno, fue preciso emplear antgenos de prueba, en los que el mismo hapteno estaba acoplado
a una protena no relacionada.
Cuando se desarrollan anticuerpos
policlonales o monoclonales contra un hapteno,
se observa que, en gran parte de ellos, el reconocimiento del hapteno depende total o parcialmente de nuevas estructuras, generadas por el tipo
de enlace qumico aportado por el agente
acoplante. Este hecho tiene gran trascendencia:
si los anticuerpos estn destinados a reconocer
el hapteno en solucin como en el caso de un
RIA o un ELISA de competencia (ver captulo
40), la nica forma para que esto ocurra ser modificando el hapteno con el mismo compuesto
utilizado para acoplarlo a la protena transportadora.
En conclusin, los haptenos no inducen la
produccin de anticuerpos pero s son capaces de
reaccionar especficamente con ellos, ofreciendo
al inmunlogo un modelo excepcional para investigar los mecanismos de la reaccin antgeno-anticuerpo, ya que la estructura de por lo menos uno
de los reactivos, el hapteno, es conocida.
3. CARACTERSTICAS DEL ANTGENO

QUE LO HACEN INMUNOGNICO
Como se ha mencionado, existen varios factores que influyen en la inmunogenicidad de una
protena. Algunos son de carcter intrnseco y tienen que ver con su propia naturaleza qumica, lo
que determina su hidrofilicidad y su flexibilidad.
En cambio, otros factores son extrnsecos y estn
relacionados con la capacidad de respuesta del ani-
2.4. Haptenos
No todas las molculas son inmunognicas;
por ejemplo, numerosas substancias pequeas de
108
Sin ttulo-2
108
5/26/06, 10:25 AM
Figura 5-2. Efecto sobre la reaccin antgeno-anticuerpo de la posicin y naturaleza de grupos haptnicos substituidos en
una protena transportadora. Landsteiner desarroll antisueros de conejo especficos contra globulina de suero de caballo
substituida con haptenos como sulfonato de m-aminobenceno (A) y p-azotoluidina (B). Luego estudi, mediante reacciones de
precipitacin, el efecto que producan sobre la especificidad de la reaccin antgeno-anticuerpo, modificaciones de la posicin y
naturaleza de los grupos haptnicos substituidos en globulina de pollo. La intensidad de la reaccin observada (cantidad de
precipitado) se seala en una escala arbitraria que va desde 0 a dos cruces (++). La reaccin con el hapteno homlogo se destaca
en negrita.
3.1. Tamao
mal y con la dosis de antgeno: concentraciones

muy pequeas no producen estimulacin de la respuesta inmune y concentraciones muy elevadas
pueden inhibirla.
En la ltima dcada, con el desarrollo de
la tecnologa de pptidos sintticos, se ha identificado las propiedades de una molcula que
inciden directamente en su inmunogenicidad.
As, construyendo pptidos de un mismo
aminocido, pptidos que combinan las diferentes propiedades de los aminocidos, pptidos
lineales y ramificados, elaborados exclusivamente con la forma D o L de los aminocidos o
con mezclas de ambos, ha quedado en evidencia que, para la produccin de anticuerpos es
determinante la ramificacin y arreglo espacial
del pptido, la naturaleza levogira (L) de los
aminocidos y la presencia de aminocidos con
ncleos aromticos.
Se sabe que las protenas de masa molecular

superior a 10 kDa son inmunognicas. Sin embargo, algunas protenas de menor masa, inoculadas con un coadyuvante apropiado, inducen la produccin de anticuerpos; tambin ocurre lo inverso es decir existen protenas de elevada masa
molecular que no son buenos inmungenos; es el
caso de las histonas, las protaminas y la gelatina.
Su falta de inmunogenicidad se explica en parte
porque carecen de grupos qumicos activos.
3.2. Presencia de grupos qumicos activos
Ha quedado en evidencia que la inmunogenicidad de las protenas depende de la presencia de ciertos grupos qumicos activos, especialmente los de carcter polar.
109
Sin ttulo-2
109
5/26/06, 10:25 AM
La presencia en la superficie de las protenas

de aminocidos con residuos aromticos o con grupos cargados positivos (Lisina) o negativos
(Glutmico y Asprtico) contribuye a aumentar su
antigenicidad.
Otro
aminocido
frecuentemente
involucrado es Tirosina y un buen ejemplo de la
importancia de este aminocido es la protena
Nicrosina presente en invertebrados. El estudio
cristalogrfico de Nicrosina no revela en condiciones normales la presencia de una tirosina expuesta en la superficie; pero la sntesis de la protena recombinante, en la que se introduce un
cambio en el residuo de tirosina no expuesto,
conduce a la prdida de un eptopo. Un anlisis
de cristales de Nicrosina que incluyen el Fab de
un anticuerpo monoclonal contra ella, muestra
claramente que, a consecuencia de la interaccin
antgeno-anticuerpo, se produce un cambio
conformacional en la protena: la Tirosina emerge
a la superficie y participa activamente en la
interaccin. Este ejemplo, pone de manifiesto la
notable dinmica de la reaccin antgeno-anticuerpo y la importancia de la movilidad atmica
en la definicin de un eptopo.
4. NATURALEZA QUMICA DE LOS

ANTGENOS
En general las protenas son las molculas
ms inmunognicas y, en orden decreciente, les
siguen los carbohidratos, los lpidos y los cidos
nucleicos.
4.1. Protenas
Las protenas son antgenos timo dependientes, es decir, en su reconocimiento participan
linfocitos T y B. Debido a su gran complejidad
estructural, puesto que adems de estructura
primaria, secundaria y terciaria, poseen mltiples
eptopos, lo que las hace a la vez antignicas e
inmunognicas. La agregacin y la presencia de
formas polimricas aumentan la inmunogenicidad
de las protenas.
Para conocer la estructura antignica de algunas protenas, se ha usado la cristalografa y,
sin duda, la herramienta ms utilizada actualmente son los anticuerpos monoclonales, que han permitido realizar mapeos epitpicos precisos de numerosas protenas modelo -como Lisosima,
Mioglobina y Albmina- y tambin de protenas
utilizadas en la formulacin de vacunas para humanos, por ejemplo, el antgeno de superficie del
virus de la Hepatitis B y las protenas de la cubierta del virus del SIDA.
El anlisis antignico de protenas virales tiene gran relevancia, puesto que mediante sntesis
peptdica, se cree que podran construirse vacunas compuestas de aquellos pptidos que producen anticuerpos capaces de neutralizar la
infectividad viral. Esta idea ha sido abordada
experimentalemente con varios modelos, entre
ellos se ha utilizado dos antgenos de superficie
del virus de la influenza, denominados
Hemaglutinina (HA) y Neuraminidasa (NA).
Tambin este concepto se ha aplicado en el anlisis de antgenos de patgenos como Plasmodium
falciparum (agente causal de la malaria) y de
Tripanosoma cruzi (agente causal de la Enfermedad de Chagas) que poseen mecanismos que les
permiten evadir la respuesta inmune del hospedero; sin embargo, a la fecha no se tienen resultados
plenamente satisfactorios.
Otro ejemplo de antgeno proteico es el sistema antignico Rh de los glbulos rojos. El sistema Rh es uno de los sistemas sanguneos ms
polimrficos, ya que a la fecha se han descrito 47
antgenos diferentes, siendo comunes slo cinco,
3.3. Conformacin espacial de los eptopos

La palabra eptopo presupone que las regiones antignicas corresponden a prominencias sobre la superficie de la molcula, lo cual es vlido
en muchos casos; pero tambin se ha descrito que
pueden ser hondonadas de la superficie y que el
sitio de unin del anticuerpo se introduce en la
cavidad epitpica.
3.4. Movilidad atmica
Dado que el repertorio de receptores del sistema inmune humoral es finito y se genera durante el desarrollo embrionario de los
vertebrados, antes de la exposicin con los
antgenos, la posibilidad de que una estructura
antignica se una a algn receptor depende de su
capacidad de interactuar con cierta afinidad con
un receptor preexistente. Por lo tanto, la flexibilidad de las estructuras antignicas contribuye a
su antigenicidad ya que les permite adaptarse a
receptores preexistentes. Este fenmeno tambin
se observa en las regiones hipervariables de los
anticuerpos, que tambin presentan alta movilidad molecular.
110
Sin ttulo-2
110
5/26/06, 10:25 AM
que se denominan: D, C, c, E y e (ver captulo

26). El antgeno ms importante de este sistema
es el antgeno proteico D, ya que su tipificacin
determina que la sangre del paciente sea clasificada como Rh positiva (presencia del antgeno D)
o negativa (ausencia del antgeno D). La protena
D est compuesta por 417 aminocidos, tiene una
masa molecular en torno a 30 kDa y no es
glicosilada. Presenta 12 dominios transmembrana
ricos en aminocidos hidrofbicos. La diferencia
entre los antgenos D, difiere de C/c y E/e se basa
en cambio de aminocidos. El paso de eritrocitos
fetales a la circulacin materna puede inducir
anticuerpos anti Rh (D+) en la madre cuando sta
carece de estos antgenos (ver captulo 26).
en trasplantes y en otros procesos patolgicos (ver

captulo 26).
El sistema ABO fue descrito a principio de
este siglo por Landsteiner, quien descubri que el
suero de dadores humanos normales aglutinaba a
los eritrocitos de otros dadores. Al analizar el patrn de reacciones, defini los principales
antgenos de este sistema como A, B y O, que corresponden a determinantes antignicos de naturaleza oligosacrida. Los antgenos del sistema
ABO se heredan en forma autosmica, siendo los
genes A y B codominantes entre s y dominantes
sobre O.
El sistema ABO se caracteriza por su ubicuidad, puesto que los antgenos estn presentes
en alta densidad sobre la superficie de los
eritrocitos y clulas epiteliales y tambin se reconocen en numerosas secreciones como la saliva,
leche, y mucosa gstrica, entre otras. Los antgenos
del sistema ABO se caracterizan tambin porque
en un individuo existe la presencia natural de
anticuerpos IgM contra el producto de el o los
alelos que l no posee. La formacin de estos
anticuerpos se explica en parte, por la ubicuidad
de este tipo de oligosacridos, ya que tambin se
encuentran antgenos muy similares en la pared
de numerosas bacterias, algunas de las cuales se
localizan en la flora normal del intestino. Por otra
parte, tambin se postula que se formaran como
consecuencia del paso de eritrocitos maternos a la
circulacin fetal en el momento del parto.
El conocimiento de la estructura qumica de
los antgenos ABO se facilit enormemente por el
hecho que los determinantes antignicos corresponden a oligosacridos, que pueden ser preparados mediante sntesis qumica. Por lo tanto, fue
posible utilizarlos en estudios de inhibicin de la
aglutinacin de eritrocitos por haptenos. Posteriormente, se realiz un avance enorme con el advenimiento de los anticuerpos monoclonales, puesto que permitieron realizar una fina diseccin de
los diferentes tipos de cadenas oligosacridas presentes en cada grupo.
Desde el punto de vista bioqumico, los
antgenos del sistema ABO estn constituidos por
cadenas de oligosacridas, formadas por azcares
unidos por enlaces a (1-2 1-4) b (1-3), producto
de la accin de glicosiltransferasas -del tipo
fucosil, N-acetil y galactosil transferasas- que actan sobre un substrato tetrasacrido denominado
paraglobsido. Este posee una galactosa como
residuo terminal, unida por enlace b (1-3) o b (14), segn se trate de un tetrasacrido tipo I (en
4.2. Carbohidratos
Los determinantes antignicos de numerosas
substancias de inters biolgico, corresponden a
carbohidratos que se encuentran en glicolpidos y
glicoprotenas. Buenos ejemplos son el lipopolisacrido (LPS) de las bacterias Gram-negativas
y el sistema de antgenos de grupo sanguneo en
humanos, como el sistema ABO.
LPS
La diversidad antignica entre las especies
de bacterias Gram negativas, reside en las diferencias estructurales de los componentes del LPS,
antiguamente denominado endotoxina, porque
estaba unido a la clula y tena carcter
termoestable. El LPS es el principal blanco de la
respuesta inmune humoral contra este tipo de
patgenos.
La estructura qumica del LPS puede dividirse en tres regiones: el polisacrido O-especfico, que tambin acta como sitio receptor para
algunos bacterifagos y confiere la especificidad
serolgica; el polisacrido central, que contiene
cido 2-ceto-3-desoxioctnico (KDO) y heptosa,
que son compuestos exclusivos de bacterias; y,
finamente, el lpido A (regin III) donde reside la
toxicidad.
Sistema ABO
En humanos, se conocen actualmente 19 sistemas de grupos sanguneos, que suman ms de
200 antgenos. Sin embargo, dos de ellos el sistema ABO y el sistema Rh, son los de mayor importancia clnica desde el punto de vista transfusional,
111
Sin ttulo-2
111
5/26/06, 10:25 AM
antgenos secretados) o tipo 2 (sobre eritrocitos),

respectivamente. Posteriormente, sobre la
galactosa terminal acta una fucolsiltransferasa denominada H, que le adiciona una fucosa por enlace a (1-2). De esta forma, se completa una cadena
denominada antgeno H, que est presente en la
membrana plasmtica de todos los eritrocitos, anclada va una protena integral de membrana denominada Banda 3 (figura 5-3).
La especificidad antignica en los individuos
del grupo A, est dada por la adicin de Nacetilgalactosamina a la substancia H y, en los
individuos del grupo B, por la adicin de galactosa,
azcares que constituyen el grupo
inmunodominante de los determinantes
antignicos A y B, respectivamente. Los individuos del grupo O slo poseen el antgeno H.
Es importante destacar que dentro de cada

grupo existen variaciones: son los subgrupos de A
y B, que reflejan diferencias cuantitativas, segn
el nmero de eptopos presentes en la superficie
del eritrocito y cualitativas, segn el largo y ramificacin de las cadenas oligosacridas.
4.3. Lpidos
Los lpidos son, en general, poco inmunognicos, fundamentalmente por su poca
solubilidad en agua; sin embargo, al unirse a protenas, algunos pueden generar eptopos. En el
caso de lpidos compuestos, como los lipopolisacridos de las bacterias Gram negativas, la fraccin lipdica participa activamente en la
mitogenicidad de estas substancias.
Figura 5-3. Estructura de los antgenos ABO de grupo sanguneo humano. Los antgenos ABO tienen estructura de tipo
carbohidrato y estn presentes en numerosos tejidos, siendo sintetizados bajo el control de varios genes que codifican para
glicosiltransferasas. Se pueden expresar de diferentes formas: como oligosacridos en la orina, como glicoprotenas en las secreciones
y fluidos corporales y como glicolpidos en las membranas de numerosas clulas. El compuesto bsico inicial desde el cual crecen
las cadenas oligosacridas que conforman los antgenos ABO, es un compuesto de tipo cermido (formado por una molcula de
glucosa y galactosa) que est anclado a un glicolpido. Sobre el paraglobsido acta una transferasa que agrega una fucosa (Fuc)
en el azcar terminal, formndose de esta forma el producto denominado substancia H, que posteriormente es convertida en
substancia A o B por la apropiada adicin de una molcula de N-acetilgalactosamina (Galnac) o galactosa (Gal) respectivamente.
(Glu), glucosa.
112
Sin ttulo-2
112
5/26/06, 10:25 AM
4.4. cidos nucleicos
independientes. Entre las propiedades que presentan estos antgenos podemos mencionar las siguientes: (a) Son molculas de gran tamao con
eptopos repetidos, lo que les permite interactuar
con mltiples receptores de la superficie, dando
como resultado una reaccin de alta avidez que
induce el coronamiento (capping) de los mismos, (b) Son mitognicos, es decir, inducen proliferacin de los linfocitos B y (c) Pueden activar la
va alternativa del complemento.
Los cidos nucleicos son poco inmunognicos ya que para inducir anticuerpos requieren
ser conjugados a protenas inmunognicas. Sin
embargo, en varias patologas de tipo autoinmune
-en que componentes normales del organismo pasan a ser autoantgenos- es frecuente observar la
presencia de anticuerpos anti-DNA, actividad que
ayuda al diagnstico de las enfermedades. De hecho, existen anticuerpos que reconocen diferentes formas de DNA como el denominado tipo Z,
entre otros.
6. CLASIFICACIN GENERAL DE LOS

ANTGENOS SEGN SU FUNCIN
5. CLASIFICACIN DE LOS ANTGENOS

SEGN LAS CLULAS INMUNES INVOLUCRADAS EN SU RECONOCIMIENTO
6.1. Antgenos de trasplante

El trasplante de tejido incompatible y la maternidad multpara van acompaados de la induccin de altos ttulos de anticuerpos que reconocen
a los antgenos de histocompatibilidad, especialmente de Clase I. Esto se debe al alto polimorfismo
gentico de la cadena pesada de estas molculas
en la especie humana y en los animales superiores. Estos antisueros naturales, han sido una herramienta fundamental para entender las reglas que
gobiernan la histocompatibilidad y prolongar la
sobrevida de los trasplantes. Los antgenos o molculas MHC de clase II son menos potentes
en la induccin de anticuerpos y en la actualidad
se usan tcnicas de biologa molecular para su
tipificacin.
5.1. Antgenos timo-dependientes

Abundante evidencia experimental muestra
que la produccin de anticuerpos por las clulas
B contra numerosos antgenos y especialmente
para los de naturaleza proteica requiere de la ayuda de clulas T, de ah que se los denomine
antgenos timo-dependientes. En la dcada de
los 60, dos grupos de investigadores, Miller y
Mitchell en Australia y Claman en Denver, demostraron que animales deficientes en clulas T, por
timectoma neonatal eran incapaces de producir
anticuerpos contra antgenos proteicos; sin embargo, cuando se reconstituan con clulas tmicas,
esta capacidad se restauraba. Estudios posteriores revelaron que la capacidad de ayuda de las
clulas T corresponde a una subpoblacin de
linfocitos T denominada T helper ( LT CD4+).
Los antgenos timo-dependientes provocan
respuestas primarias caracterizadas por la sntesis
de anticuerpos de la clase IgM, pero en exposiciones posteriores al antgeno maduran hacia IgG
(suero) o IgA (secreciones) y clulas de memoria,
a diferencia de las respuestas a los antgenos timoindependientes, que slo estimulan la produccin
de anticuerpos de la clase IgM y muy pocas clulas de memoria.
6.2. Antgenos tumorales

Se han descrito numerosos anticuerpos
monoclonales que son reactivos con antgenos que
se expresan exclusivamente o, en mayor cantidad
en clulas tumorales, por lo tanto son utilizados
en diagnstico clnico de humanos como marcadores de la presencia de clulas neoplsicas. Entre estos antgenos, se encuentran marcadores de
melanoma, carcinoma colo-rectal, neuroblastoma,
antgeno prosttico y antgenos de leucemias
linfticas, entre otros.
6.3. Autoantgenos
5.2. Antgenos timo-independientes

Existen procesos patolgicos en que el sistema inmunolgico reconoce como antgenos componentes propios; son las denominadas enfermedades autoinmunes. Si bien pueden afectar cualquier rgano de un individuo, las ms frecuentes
Algunos antgenos, como los polisacridos

y lipopolisacridos de bacterias, son capaces de
activar linfocitos B sin la ayuda de linfocitos T
helper; son los denominados antgenos timo-
113
Sin ttulo-2
113
5/26/06, 10:25 AM
incluyen: la substancia blanca del cerebro y la espina dorsal (Esclerosis mltiple); los
revestimientos de las articulaciones (Artritis
reumatoide); las clulas secretoras de la insulina
(Diabetes mellitus juvenil). Otras enfermedades
autoinmunitarias destruyen las conexiones entre
nervios y msculos (miastenia gravis), producen
ampollas en la piel (Pnfigo vulgar) o destruyen
los riones y otros rganos (Lupus eritematoso
sistmico) (ver captulo 23).
bia, el Sag se encuentra incluido en la partcula infecciosa como una protena que encapsula el material nuclear. En el caso de algunos retrovirus, como
el que produce tumores mamarios en algunas cepas endogmicas de ratn, se produce expresin de
Sags despus de la infeccin e integracin del DNA
proviral en el genoma del hospedero.
6.6. Alergenos
Los alergenos son antgenos capaces de provocar reacciones de hipersensibilidad de tipo inmediato (minutos despus de su exposicin) o retardado (das despus del desafo antignico) (ver
captulos 21 y 22). Desde el punto de vista
bioqumico, los alergenos incluyen polisacridos,
protenas y haptenos de origen sinttico y naturales. En este ltimo caso se incluye la sustancia
exudada por el Litre, compuesto que pertenece a
la familia de los urushioles, que incluyen especies
como el Poyson ivy, Poyson oack y Laca Japnica,
entre otros, que provocan severas alergias en humanos susceptibles.
El Litre es un rbol de la familia
Anacardiaceae que causa una severa dermatitis de
contacto en campistas, guardabosques, scouts, etc,
que transitan por la zona central de Chile. Como
resultado del metabolismo secundario de la planta, se produce un compuesto identificado como 3
pentadecyl-10-en catecol, que es el responsable
de la alergia. Esta pequea molcula es un clsico hapteno, es decir, slo causa la alergia cuando
se une a protenas de la piel del husped. A pesar
de su potencia, no se ha descrito al alergeno del
litre como un inductor de anticuerpos. La reaccin alrgica es de tipo retardado, es decir los sntomas se comienzan a observar despus de 24 horas de exposicin al hapteno en un individuo ya
sensibilizado y participan en ella clulas T CD8+.
Las lesiones que provoca este alergeno son
exudativas y presentan infiltracin de macrfagos
y monocitos.
Aunque este tipo de compuestos se conoce
desde principios de este siglo, los mecanismos celulares y moleculares que conducen a esta alergia
son poco conocidos. Se sabe que la cadena
aliftica es fundamental para la inmunogenicidad,
porque solubiliza el alergeno en las membranas
celulares; por otra parte, el anillo cateclico permite la reaccin electroflica con grupos amino
de las protenas de la piel, modificndolas (vase
figura 5-4).
6.4. Antgenos de diferenciacin

El trmino antgeno de diferenciacin surge del uso de los anticuerpos como herramienta
para identificar molculas que se localizan en determinados tipos celulares o tejidos. Sin embargo, este trmino es ambiguo, porque se refiere tanto a los antgenos especficos de estado como los
antgenos especficos de tejido.
Un antgeno que se reconoce exclusivamente durante una etapa del desarrollo embrionario
de un organismo, pero que posteriormente no es
reconocido en clulas terminalmente diferenciadas corresponde a un antgeno especfico de estado; mientras que un antgeno reconocido en cierto tipo celular diferenciado, que sirve como marcador para distinguirlo de otro, es propiamente un
antgeno especfico de tejido. En esta ltima
categora se pueden incluir aquellos antgenos que
reconocen en tipos celulares embrionarios, son los
denominados marcadores de linaje celular.
6.5. Superantgenos
Se definen como superantgenos (Sags) numerosas protenas de microorganismos bacterianos
(estafilococos, estreptococos, micobacterias, y
micoplasmas, entre otras) y virales (del tipo
rabdovirus y retrovirus), que se unen a molculas
MHC clase II y que estimulan las clulas T predominantemente va unin directa al dominio Vb del
receptor de la clula T, fuera de la regin de unin
al antgeno (ver captulo 7). Se les denomina Sags
debido a que el nmero de clulas T involucradas
en la respuesta inmune es mucho mayor que el de
las clulas especficas a antgenos proteicos convencionales.
Los superantgenos de microorganismos estn presentes en diferentes formas. En el caso de
las bacterias, generalmente son protenas
secretadas como por ejemplo las enterotoxinas
estafiloccicas; mientras que en el virus de la ra-
114
Sin ttulo-2
114
5/26/06, 10:25 AM
LECTURAS SUGERIDAS
Aderem, A., Ulevitch, R.J., Toll-like receptors in
the induction of the innate immune response,
Nature, 17, 782-787, 2000.
Barlow, D.J., Edwards, M.S., Thornton J.M.,
Continuous and discontinuous protein antigenic
determinants, Nature, 322: 747 748, 1986.
Figura 5-4. Estructura del compuesto activo del litre; 3pentadecil (10-enil) catecol.
Benjamin C., Berzofsky JA., East IJ., Gurd, FRN.,

Hannum, C., Leach SJ., Margoliash E., Michael
JG., Miller A., Prager EM., Reichlin M., Sercarz
EE., Smith-Gill SJ., Todd PE., Wilson AC. The
antigenic structure of proteins: A reapraisal, Ann.
Rev. Immunol, 2: 67 101, 1984.
De esta forma, los pptidos modificados por

el Litre emergen a la superficie de las clulas epidrmicas unidas a molculas MHC de clase I y
clase II, los cuales inician y desencadenan la reaccin alrgica.
Debido a que los ratones de cepas utilizadas
en experimentacin tambin son sensibles al litre,
han sido un modelo muy valioso en el estudio de
los componentes celulares involucrados en la alergia provocada por este compuesto. La eliminacin selectiva de subpoblaciones de linfocitos T
con anticuerpo monoclonales especficos para cada
una de ellas (anti-CD4+ anti-CD8+), ha mostrado que los linfocitos T CD4+ regulan esta respuesta
en ratones y que los linfocitos T CD8+ son los
efectores. Nuestro grupo de investigacin tambin ha encontrado evidencia de que la cadena
aliftica se metaboliza intracelularmente, lo que
sugiere que el producto final del litre que modifica las protenas propias no sera el mismo que produce la planta.
Recientemente, se ha demostrado que los
urushioles inhiben la respiracin mitocondrial a
nivel del Complejo III. Este fenmeno es especfico, porque requiere la presencia de la estructura
cateclica y de la cadena aliftica, ya que
pentadecil fenol y 3 metil catecol no ejercen una
inhibicin significativa en la respiracin. El
alergeno del poison ivy, que posee tres veces ms
insaturaciones en la cadena aliftica, es el inhibidor
ms potente de la respiracin y el ms alergnico
en humanos. Estudios recientes en que se analiza
la unin de Litreol marcado con 3H en la cadena
aliftica a protenas mitocondriales, muestran la
aparicin de protenas marcadas especficamente
de una masa molecular relativa en torno a 30 kDa,
que se encuentran distribuidas en la membrana
mitocondrial interna.
Berzofsky, J. A., Berkower, I.J., Immunogenicity

and antigen structure en Fundamental
Immunology, Editor: W. Paul, 4 Edicin, Raven
Press, New York, pp. 651 700, 1999.
Davies, D.R., Padlan, E.A., Antibody-antigen
complexes, Ann. Rev. Biochem, 59: 439 473,
1990.
Janeway, C.A., Travers, P., Walpot, M., Capra,
J.D., Immuno Biology. The immune system in
health and disease. CB Current Biology
Publications Elsevier Science Ltd/Garland
Publishing, 1999.
Landsteiner, K., Van der Scheer J., Serologcal
studies on azoproteins. Antigens containing azo
components with aliphatic side chains, J. Exp.
Med., 59: 751 768, 1934.
Laver, W.G., Gillian, M.A., Immune recognition
of protein antigens
en
Current
Communications in Molecular Biology, Cold
Spring Harbor Laboratory, New York, 1985.
Lpez C.B., Kalergis A.M., Becker M. I.,
Garbarino J.A., De Ioannes A.E., Contact Dermatitis to the Urushiol Related Compound 3pentadecyl (10 enyl) catechol is Mediated by
CD8+ Cells and Regulated by CD4+ Cells in
Mice, J., Allergy and Immunology 117: 194-201,
1998.
115
Sin ttulo-2
115
5/26/06, 10:25 AM
Moody, D.B., Ulrichs,T., Muhlecker, W., Young,

D.C., Gurcha, S.S., Grant, E., Rosat J.P., Brenner,
M.B., Costello, C.E., Besra, G.S., Porcelli, S.A.,
CD1c-mediated T-cell recognition of isoprenoid
glycolipids in Mycobacterium tuberculosis
infection, Nature, 404,884 888, 2000.
Palomo G., I., Pereira G., J., Fisiopatologa de
las citopenias inmunes. Editorial Universidad
de Talca,1995, Talca - Chile.
Tainer, J.A., Getzoff, E.D., Paterson, Y., Olson,
A.J., Lerner, R.A., The atomic mobility
component of protein antigeniciicity, Ann. Rev.
Immunol, 3: 501- 535, 1985.
116
Sin ttulo-2
116
5/26/06, 10:25 AM

Captulo 6
RECEPTOR DE LINFOCITOS B
E INMUNOGLOBULINAS
Ivn Palomo G., Mara Ins Becker C., Silvia Pierangeli y Ulises Vergara C.
1. Introduccin
2. Receptor de linfocitos B (BCR): Estructura y funcin
2.1. Inmunoglobulina de membrana
2.2. Complejo Ig/Ig
3. Linfocitos B y seales accesorias de
coestimulacin
3.1. Antgenos T-dependientes y antgenos
T-independientes
3.2. Co-Receptor CD21
4. Subpoblaciones linfocitarias B1 y B2
5. Estructura y funcin de inmunoglobulinas
5.1. Estructura general
5.2.Dominios de inmunoglobulinas y regiones hipervariables
5.3.Variaciones isotpicas, alotpicas e
idiotpicas
5.3.1. Variaciones isotpicas
5.3.2. Variaciones alotpicas
5.3.3. Variaciones idiotpicas
5.4. Clases y subclases de inmunoglobulinas
6. Respuesta inmune humoral
6.1. Avidez
6.2. Afinidad
7. Bases genticas de la diversidad de inmunoglobulinas

7.1. Genes de inmunoglobulinas
7.1.1. Genes de cadenas pesadas
7.1.2. Genes de cadenas livianas
7.2. Reordenamiento gnico
7.2.1. Reordenamiento de cadenas pesadas
7.2.2. Reordenamiento de cadenas livianas
7.2.3. Reordenamiento impreciso del DNA
7.2.4. Diversificacin de la regin N
7.2.5. Exclusin allica
7.2.6. Exclusin isotpica
7.2.7. Cambio de clase de cadenas pesadas
7.3. Hipermutacin somtica
7.4. Control de la transcripcin de los genes
de inmunoglobulinas
7.5. Estimacin numrica de la diversidad
de anticuerpos
8. Edicin del receptor linfocitario
9. Biosntesis y ensamblaje de las inmunoglobulinas
117
Sin ttulo-2
117
5/26/06, 10:25 AM
118
Sin ttulo-2
118
5/26/06, 10:25 AM
RESUMEN
La inmunidad especfica humoral se asocia a linfocitos B y anticuerpos. Los aspectos ms
importantes que revisa este captulo son: la estructura y funcin del Receptor de clulas B
(BCR) y de inmunoglobulinas, y las bases genticas de la diversidad de estas ltimas.
El BCR es un complejo glicoproteico hetero-oligomrico transmembrana, que incluye dos
subunidades: una inmunoglobulina de membrana (IgM o IgD) responsable del reconocimiento
especfico del antgeno y el complejo accesorio Ig-/Ig-, conservado en todos los linfocitos B
y responsable de la transduccin de seales de activacin. Dependiendo de la naturaleza qumica
del antgeno, la activacin de los linfocitos B, requerir seales accesorias de coestimulacin,
proporcionadas por el correceptor CD21 (CR2) y por linfocitos T helper.
Las inmunoglobulinas (Igs) son una familia de glicoprotenas estructuralmente relacionadas, presentes en la membrana de linfocitos B y en el suero y fluidos titulares La unidad estructural bsica de las inmunoglobulinas est dada por un monmero glicoproteico formado por
cuatro cadenas polipeptdicas - dos cadenas pesadas (H) y dos cadenas livianas (L) idnticas:
IgG (2, 2 2), IgM (2, 2 2), Ig (2, 2 2), IgD (2, 2 2) e IgD (2, 2 2).
Entre las regiones funcionales ms importantes de la estructura de las Igs destacan la regin de
unin con el antgeno (Fab), ubicada en el extremo amino y el fragmento Fc que participa en
funciones efectoras tales como: activacin del sistema del complemento, activacin de clulas
fagocticas, citotoxicidad dependiente de anticuerpos (ADCC), inmunidad de mucosas, inmunidad neonatal, hipersensibilidad inmediata y regulacin de la respuesta inmune.
Cada cadena, H y L, presenta slo un dominio variable. Las cadenas H presentan 3 4
dominios constantes y las cadenas L solamente un dominio constante.
La variabilidad idiotpica de las Igs se genera somticamente en la mdula sea (en
humano), durante un proceso de diferenciacin que es independiente del antgeno y que permite
que cada linfocito B est provisto de un BCR nico. El repertorio de estos receptores y por tanto
de Igs secretadas, es generado al azar durante un proceso regulado de reordenanamiento o
recombinacin de segmentos gnicos V(D)J. En humanos, los genes para codificar las cadenas
H, y , se encuentran en el cromosoma 14, 2 y 22, respectivamente. La variabilidad puede
aumentar por otros mecanismos que sern descritos en el captulo.
1. INTRODUCCIN
ne puede reconocer una gran variedad de antgenos

distintos, slo aquellos clones linfocitarios con
la especificidad apropiada para un eptopo del
antgeno particular, sern expandidos por divisin celular.
El receptor de un linfocito B (BCR) es un
complejo glicoproteico transmembrana que incluye una inmunoglobulina (Ig) de membrana propia de cada linfocito y responsable del reconocimiento especfico del antgeno. Cuando un individuo es expuesto a un antgeno extrao, slo aquellos linfocitos cuyo BCR es capaz de reconocer
un eptopo antignico, sern activados y expandidos para diferenciarse en linfocitos B de memoria o en clulas plasmticas productoras de
anticuerpos. Las clulas plasmticas producen
El desarrollo de una respuesta inmune humoral requiere la seleccin, activacin y expansin clonal de linfocitos B individuales provistos
de un receptor antgeno-especfico (BCR: "B cell
receptor") anclado en su membrana plasmtica.
Esta habilidad de un individuo para responder virtualmente a cualquier antgeno, depende de la capacidad del sistema inmune para generar un repertorio muy grande de linfocitos, cada uno de los
cuales expresa un receptor especfico para un
eptopo antignico particular. Por otra parte, la
naturaleza clonal del reconocimiento antignico,
constituye un elemento esencial de la respuesta
inmune, puesto que an cuando el sistema inmu-
119
Sin ttulo-2
119
5/26/06, 10:25 AM
generalmente slo un tipo de anticuerpo y ste

siempre corresponde a la forma secretada o soluble de la Ig de membrana del linfocito B del cual
deriva la clula plasmtica. La forma de membrana de una Ig es un componente estructural y funcional del receptor BCR; su forma soluble o
secretada constituye en cambio un anticuerpo, que
conserva la especificidad por el antgeno y es
adems responsable de la funcin efectora de la
respuesta inmune humoral: neutralizacin del
antgeno, reclutamiento y activacin de fagocitos,
activacin del sistema del complemento, reclutamiento y activacin de clulas NK, macrfagos y
otras clulas capaces de realizar citotoxicidad
dependiente de anticuerpos.
La expresin de un receptor BCR responsable de la iniciacin de una respuesta inmune contra diversos agentes infecciosos y otros antgenos,
es uno de los eventos cruciales en el desarrollo de
los linfocitos B. Durante este proceso, receptores
antgeno-especficos nicos, son expresados por
linfocitos individuales despus del reordenamiento
regulado de segmentos gnicos para cadenas livianas y pesadas de una inmunoglobulina. La naturaleza azarosa del reordenamiento gnico, acoplado a la mayor complejidad que se consigue
con el apareamiento de cadenas pesadas y livianas crea una increble diversidad en el repertorio
linfocitario B. Aunque tal diversidad permite el
reconocimiento de un gran nmero de protenas
extraas, la independencia antignica del
reordenamiento gnico inevitablemente conduce
a la generacin de linfocitos B autorreactivos. Para
evitar la autoinmunidad inducida por la eventual
activacin de estas clulas autorreactivas, el sistema inmune debe poner en marcha mecanismos
que le permitan inducir tolerancia a antgenos propios. Entre estos mecanismos se encuentran la eliminacin por apoptosis de las clulas
autorreactivas (delecin clonal), la inhibicin de
su actividad (anergia clonal), o la edicin de su
receptor mediante un reordenamiento secundario
de segmentos gnicos para cadenas livianas, lo que
conduce a modificar la especificidad del BCR
autorreactivo.
Linfocitos B apropiadamente activados proliferan y luego diferencian en clulas plasmticas
o en clulas B de memoria. Durante este proceso
de diferenciacin los linfocitos B expresan estrategias nicas que llevan a diversificar aun ms el
repertorio de receptores BCR: (i) hipermutacin
somtica que conduce a un aumento de la afinidad del receptor por su eptopo antignico, (ii)
recombinacin o reordenamiento gnico, que conduce al switching isotpico o cambio de clase de

la inmunoglobulina del BCR en linfocitos B de
memoria, y (iii) reordenamientos gnicos secundarios, que conducen a la edicin del receptor.
En el presente captulo se describe la estructura
y funcin del receptor linfocitario B (BCR), las caractersticas estructurales y funcionales de las distintas clases de inmunoglobulina y los mecanismos
genticos que explican su diversidad y heterogeneidad: recombinacin V(D)J, hipermutacin,
reordenamiento de clase y edicin del receptor.
2. RECEPTOR DE LINFOCITOS B (BCR):

ESTRUCTURA Y FUNCIN
El receptor de los linfocitos B (BCR) es generado somticamente durante la diferenciacin
linfocitaria, lo cual permite que cada clula B est
provista de un receptor nico que no est codificado en el DNA germinal y no est predestinado
a reconocer un antgeno extrao particular.
El repertorio linfocitario es generado al azar
y, los linfocitos B cuyo receptor es capaz de reconocer un eptopo antignico particular sern seleccionados para su proliferacin y expansin
clonal. La interaccin BCR-antgeno inicia la
transduccin de seales bioqumicas que conducen a la activacin, proliferacin y diferenciacin
linfocitaria; adems gatillan la internalizacin
endoctica del complejo y el procesamiento y presentacin de fragmentos antignicos a linfocitos
T-antgeno especficos, en aquellos casos en que
el desarrollo de respuesta inmune requiere de colaboracin de linfocitos T "helper" (LTh).
El BCR es un complejo glicoproteico heterooligomrico transmembrana, que incluye dos
subunidades, estructural y funcionalmente distintas y no covalentemente unidas entre s (figura 61). La primera subunidad corresponde a una
inmunoglobulina (Ig) de membrana, que acta
como receptor clonotpico propio de cada linfocito y responsable del reconocimiento especfico
del antgeno. La segunda subunidad, denominada
complejo accesorio Ig-/Ig-, es invariante o
(conservado) en todos los linfocitos B y, responsable del transporte y expresin del receptor
clonotpico en la membrana y de la transduccin
de seales de activacin, luego de la interaccin
BCR-antgeno.
120
Sin ttulo-2
120
5/26/06, 10:25 AM
Figura 6-1. Estructura del receptor linfocitario BCR y del correceptor CD21. El receptor de un linfocito B (BCR) est
constituido por una Ig de membrana, responsable del reconocimiento especfico del antgeno y por un complejo accesorio Ig-/Ig, responsable del transporte y expresin del receptor BCR en la membrana y de la transduccin de seales de activacin, luego de
la interaccin BCR-antgeno. La proliferacin y diferenciacin de los linfocitos B, requiere adems de seales accesorias de
coestimulacin proporcionadas por el correceptor CD21. Mientras el receptor BCR reconoce al antgeno, el correceptor reconoce
C3d, que se ha unido al antgeno luego de la proteolisis enzimtica parcial de C3 por activacin del sistema del complemento
durante el reconocimiento innato del antgeno. CD21 reconoce C3d y CD19 transduce luego las seales accesorias de coestimulacin.
As como la capacidad para unir antgeno

reside, fundamentalmente, en la especificidad y
afinidad de los sitios de combinacin aminoterminales de una Ig, su eventual capacidad para
activar mecanismos efectores de respuesta inmune, reside en la regin constante carboxiterminal
de las cadenas pesadas.
En la Ig de membrana, la regin constante
carboxiterminal de sus cadenas pesadas incluye
una regin hidrofbica transmembrana de 25
aminocidos, que no est presente en la Ig de secrecin y es responsable del anclaje obligado de
la Ig a la membrana plasmtica de linfocitos B.
La regin carboxiterminal de las cadenas pesadas
incluye adems un dominio citoplasmtico, cuya
longitud vara entre los distintos isotipos de Ig de
membrana (3 residuos aminoacdicos en IgM y
28 residuos en IgG). El anclaje a la membrana
2.1. Inmunoglobulina de membrana

Todas las inmunoglobulinas, tanto de membrana como de secrecin, tienen una estructura
bsica general constituida por 4 cadenas
polipeptdicas: 2 cadenas pesadas (H, "heavy")
idnticas entre s y 2 cadenas livianas (L, "light"),
tambin idnticas entre s. Las cadenas pesadas y
livianas se asocian de modo tal que forman una
estructura simtrica compuesta por dos
heterodmeros H/L idnticos y unidos
covalentemente entre s por uno o ms puentes
disulfuro (figura 6-2). De esta manera, en la estructura tetramrica bsica de una Ig, la interaccin
entre las regiones variables aminoterminales de
las cadenas H y L, forman dos sitios idnticos de
combinacin para el antgeno. La estructura de las
Ig se describe en el punto 5 de este captulo.
121
Sin ttulo-2
121
5/26/06, 10:25 AM
Figura 6-2. Los anticuerpos estn constituidos por cuatro cadenas polipeptdicas, dos cadenas pesadas (H) y dos cadenas
livianas (L) unidas por enlaces disulfuro (S-S) e interacciones no covalentes. Los dominios variables de 110 aminocidos de
cadenas pesadas y livianas forman el sitio de unin para el antgeno. Los dominios constantes (CH1 a CH3) determinan las
funciones efectoras de un anticuerpo. Las cadenas pesadas de IgM e IgE, contienen un dominio constante adicional (CH4), que no
existe en los otros isotipos inmunoglobulnicos.
minan la existencia de 5 clases de cadena pesada,

denominadas , , , y . De esta manera, la
asociacin de una misma regin variable a distintas regiones constantes pesadas, conduce a la produccin de distintas clases o isotipos de Ig (IgM,
IgD, IgG, IgA e IgE, respectivamente) que difieren en su capacidad para reclutar y activar distintos mecanismos efectores de respuesta inmune
humoral.
En su etapa final de maduracin y previo al
encuentro con el antgeno, los linfocitos B vrgenes expresan simultneamente en su membrana
receptores BCR que contienen IgM y receptores
BCR que contienen IgD, ambos con idntica especificidad y afinidad por el eptopo antignico
pero con distinta regin constante en sus cadenas
pesadas. Luego del primer encuentro con el
antgeno, los linfocitos B vrgenes proliferan aumentando el nmero de linfocitos eptopo-especficos para el antgeno, los cuales se diferencian
impide que los dominios carboxiterminales de las

cadenas pesadas estn disponibles para reclutar
y activar mecanismos efectores de respuesta inmune. Por lo tanto, una Ig de membrana es una
molcula bivalente y monofuncional: tiene capacidad para unir especficamente el antgeno (mediante 2 sitios de combinacin idnticos), pero
carece de funcin efectora.
Los anticuerpos o Ig de secrecin, que estn
presentes en el plasma y otros fluidos de un individuo, son en cambio molculas bifuncionales:
conservan la capacidad de unir el mismo antgeno,
pero adems los extremos libres carboxiterminales
de sus cadenas pesadas tienen la capacidad de
reclutar y activar mecanismos efectores destinados a la eliminacin del antgeno (fagocitosis, sistema del complemento y citotoxicidad dependiente
de anticuerpos).
Variaciones estructurales en la regin constante carboxiterminal de la cadena pesada, deter-
122
Sin ttulo-2
122
5/26/06, 10:25 AM
luego en clulas plasmticas (con la habilidad de

sintetizar y secretar altos niveles de lo que ser el
repertorio primario de anticuerpos IgM), y en distintos linfocitos B de memoria que difieren en la
clase de Ig de membrana que expresan como parte de su receptor BCR (figura 6-3).
Los linfocitos B de memoria, an cuando conservan las cadenas livianas y las regiones variables de las cadenas pesadas de su receptor
clonotpico (y por lo tanto, mantienen la especificidad por el mismo antgeno), han sufrido durante
su diferenciacin antgeno-dependiente: (i) un pro-
Figura 6-3. Diferenciacin de clulas plasmticas y de linfocitos B de memoria. Luego de la expansin clonal de linfocitos B
vrgenes (gatillada por su encuentro con el antgeno), los linfocitos se diferenciarn en clulas plasmticas responsables de la
sntesis del repertorio primario de anticuerpos IgM, o en linfocitos B de memoria en los que se produce "switching" isotpico hacia
IgG, IgA o IgE, y mutacin somtica que conduce a un aumento de afinidad por el mismo antgeno. Un encuentro posterior de
cada linfocito B de memoria con el antgeno, gatillar la generacin de clulas plasmticas que sintetizarn los respectivos anticuerpos
de clase IgG, IgA o IgE.
123
Sin ttulo-2
123
5/26/06, 10:25 AM
ceso de hipermutacin somtica, que conduce a

una mayor afinidad por el antgeno, y (ii) un proceso de recombinacin gnica, que conduce a un
cambio de la regin constante pesada expresada
en los linfocitos B vrgenes originales, por una
regin constante distinta (, ) en los linfocitos
B de memoria.
Durante la diferenciacin antgeno-independiente de linfocitos B (que ocurre en los rganos
linfoides primarios), opera un mecanismo de filtro o de seleccin del receptor, que ha evolucionado para seleccionar slo aquellos linfocitos cuyo
BCR ser ms til en el desarrollo de una respuestas inmune en la periferia (ver captulo 13). Durante la diferenciacin antgeno-dependiente (que
ocurre en los centros germinales de los rganos
linfoides perifricos), opera un mecanismo de seleccin que ha evolucionado para seleccionar
aquellos linfocitos B de memoria que presentan
mayor afinidad por el antgeno y que simultneamente han realizado el switching isotpico o
cambio de clase de la cadena pesada, para expresar IgG, IgA o IgE como parte de su receptor BCR
(figura 6-3). En un siguiente encuentro con el
antgeno, los linfocitos B de memoria se diferenciarn en clulas plasmticas que secretarn la
misma clase de inmunoglobulina expresada como
parte del receptor BCR del linfocito B de memoria del cual derivan.
secundarios, luego del reconocimiento e interaccin especfica BCR-antgeno.

Ig- e Ig- son protenas de 30 a 45 kDa (variaciones en el peso molecular obedece al grado
de glicosilacin de cada molcula), cuyo dominio
transmembrana contiene grupos polares que pueden interactuar con grupos similares de la regin
transmembrana de la Ig del BCR. Las molculas
Ig- e Ig- presentan adems, dominios
extracelulares y dominios citoplasmticos similares a los de las protenas del complejo CD3 del
receptor TCR de linfocitos T, y que funcionan de
manera tambin similar en la transduccin de seales de activacin luego del encuentro con un
antgeno que contiene eptopos reconocibles por
el receptor linfocitario. La valencia, grado de agregacin, concentracin local y persistencia del
antgeno parecen tener una importante influencia
en la generacin de las seales intracelulares que
conducirn a la tolerancia por antgenos propios
o la iniciacin de una respuesta humoral contra
antgenos extraos.
La unin del antgeno a la inmunoglobulina
del receptor BCR, conduce a la fosforilacin de
los dominios citoplasmticos de Ig- (61
aminocidos) y de Ig- (48 aminocidos) que contienen secuencias de 26 aminocidos ricas en
tirosina (ITAM: "Immunoreceptor Tyrosine-based
Activation Motifs") y al reclutamiento y activacin de diversas tirosina quinasas.
La evidencia experimental en ratones, sugiere que los individuos deficientes en la expresin
de Ig- muestran un desarrollo linfocitario B completamente bloqueado, en un estado equivalente al de CD44-/low CD25+ del desarrollo linfocitario
T. Los reordenamientos V H hacia D HJ H estn
marcadamente reducidos, mientras los reordenamientos DH a JH ocurren normalmente (V, D, J
se explica en punto 7 de este captulo). De esta
manera Ig- parece involucrado en la iniciacin
del reordenamiento VH hacia DHJH, antes de funcionar como parte de la subunidad de transduccin
de seales en el receptor pre-BCR. Un ratn
mutante que carece de la mayor parte del dominio
citoplasmtico de Ig-, exhibe slo un trastorno
moderado en el desarrollo B temprano, aun cuando est casi completamente bloqueada la aparicin de linfocitos B perifricos. Todo lo anterior
indica que se requiere un heterodmero Ig- /Ig-
intacto para el desarrollo y mantencin de
linfocitos B maduros en la periferia.
Por ltimo, el modelo ms ampliamente aceptado sobre la organizacin del receptor de
2.2. Complejo accesorio Ig-/Ig-

En los linfocitos B, las inmunoglobulinas recientemente sintetizadas son transportadas a la
superficie celular slo cuando estn no
covalentemente asociadas con las protenas accesorias Ig- (CD79a) e Ig- (CD79b), que se encuentran como heterodmeros covalentemente
unidos mediante puentes disulfuro. Los complejos BCR parcialmente ensamblados, en los que
falta cualquiera de sus componentes polipeptdicos
(cadenas H, L, Ig- o Ig-) son retenidos en el
retculo con la participacin de diversas
chaperoninas (protenas que ayudan a que los procesos intracelulares ocurran adecuadamente). Adems de su participacin en el ensamblaje y transporte del BCR, las cadenas Ig- e Ig- desempean un rol fundamental en la transduccin de seales de activacin en los primeros estados de diferenciacin de los linfocitos B en los rganos
linfoides primarios (hgado fetal, mdula sea o
bolsa de Fabricio), y en la diferenciacin de
linfocitos B perifricos en los rganos linfoides
124
Sin ttulo-2
124
5/26/06, 10:25 AM
linfocitos B, sugiere que el BCR es un complejo

proteico en el que la Ig de membrana est unida a
dos heterodmero Ig- /Ig-, uno a cada lado de
la molcula (figura 6-1). Sin embargo, estudios
recientes sugieren que en el complejo Ig-Ig- /Ig, la molcula de Ig est asociada a un nico
heterodmero Ig- /Ig- y que, en la superficie
celular, distintos BCR se asocian luego en
oligmeros, en microdominios, regiones o rafts
lipdicos ricos en colesterol y esfingolpidos.
gado al cromosoma X, representan un claro ejemplo de la importancia de las seales accesorias de

coestimulacin en la funcin de los linfocitos B
(ver captulo 30). En los pacientes con este sndrome (muy susceptibles a las infecciones
pigenas), los niveles sricos de anticuerpos IgG,
IgA e IgE son muy bajos y en circulacin slo
expresan IgM, debido a que son incapaces de realizar "switching" isotpico, maduracin de afinidad y generacin de linfocitos B de memoria. Paradjicamente el sndrome de hiper-IgM ligado al
cromosoma-X es ms un defecto de los linfocitos
T que de linfocitos B, ya que es consecuencia de
una deficiente expresin de CD40L en LTh.
En la respuesta a antgenos T-dependientes,
la interaccin BCR-antgeno y la transduccin de
seales a travs del complejo Ig- /Ig- conduce
rpidamente a: (i) entrada de los linfocitos en el
ciclo celular, (ii) rescate de la apoptosis, (iii) aumento en la expresin de molculas MHC de clase II y de las molculas coestimuladoras CD80 y
CD86, y (iv) aumento de la expresin de receptores para citoquinas liberadas por linfocitos T. Sin
embargo, en ausencia de las seales accesorias
de coestimulacin, el reconocimiento antignico
y la transduccin de seales a travs de complejo Ig-/Ig- inevitablemente terminan en anergia
o en apoptosis de los linfocitos B antgeno-especficos.
Los antgenos T-independientes (entre los que
se encuentran polisacridos y protenas
polimricas de origen bacteriano), no inducen la
formacin de centros germinales y son, por lo tanto, incapaces de inducir la generacin de linfocitos
B de memoria. Estos antgenos inducen generalmente anticuerpos IgM de baja afinidad, debido
a que son incapaces de inducir la hipermutacin
que conduce a la produccin de anticuerpos de
alta afinidad y porque el "switching" isotpico est
severamente limitado en ausencia de las citoquinas
producidas por LTh.
3. Linfocitos B y seales accesorias de

coestimulacin
La activacin de linfocitos B requiere la
unin del antgeno a la Ig de membrana del receptor BCR. Sin embargo, la valencia, grado de
agregacin, concentracin local y persistencia del
antgeno, parecen tener una importante influencia en la generacin de seales intracelulares que
conducirn a la tolerancia por antgenos propios
o la iniciacin de una respuesta contra antgenos
extraos. Por otro lado, dependiendo de la naturaleza qumica del antgeno, la entrada en el ciclo celular y la proliferacin y diferenciacin de
los linfocitos B, requerir seales accesorias de
coestimulacin, proporcionadas por el correceptor CD21 (CR2) y por LTh antgeno-especficos, que expresan molculas coestimuladoras
de membrana (CD40L, CD28) y liberan diversas citoquinas (IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IFN-,
TGF-). Estas seales accesorias de coestimulacin son indispensables para la induccin
del "switching" isotpico y la hipermutacin que
conducen a la sntesis de anticuerpos con diversas funciones efectoras y mayor afinidad por el
antgeno.
3.1. Antgenos T-dependientes y Antgenos Tindependientes
La activacin de linfocitos B puede ser T-dependiente o T-independiente, dependiendo de si
requiere o no de seales accesorias de
coestimulacin proporcionada por LTh. Esta segunda seal de coestimulacin puede ser proporcionada a travs de CD40 que interacta con su
ligando CD40L (CD154) expresado en la membrana de linfocitos T activados y por B7.1 (CD80)
y B7.2 (CD86) que se expresan en linfocitos B
activados e interactan con su ligando CD28,
constitutivamente expresado en linfocitos T. Individuos que sufren el sndrome de hiper-IgM li-
3.2. Correceptor CD21 (CR2)

As como los linfocitos T expresan las molculas CD4 o CD8 que actan como correceptores
linfocitarios de activacin celular, los linfocitos B
expresan en su membrana el correceptor CD21
que funciona en coordinacin con el receptor BCR,
para gatillar la proliferacin y diferenciacin de
linfocitos B antgeno-especficos (figura 6-1).
Mientras el receptor BCR reconoce al antgeno,
el correceptor CD21 reconoce C3d que est
125
Sin ttulo-2
125
5/26/06, 10:25 AM
bacterianas durante la vida fetal, mucho antes que

el repertorio linfocitario de la respuesta inmune
adquirida sea completamente funcional. Adems,
en el repertorio adulto, los linfocitos B1 dan origen a clulas plasmticas que secretan IgM y a
una fraccin importante de clulas plasmticas
productoras de IgA en el intestino. De hecho, la
transferencia pasiva de linfocitos peritoneales B1
en ratones Scid (presentan una severa
inmunodeficiencia combinada), reconstituye la
produccin de IgA contra muchas bacterias intestinales. Por otro lado la transferencia pasiva de
clulas de hgado fetal o del omentum intestinal,
a ratones irradiados, rpidamente reconstituye la
subpoblacin B1, mientras la transferencia de precursores de mdula sea adulta reconstituye la
subpoblacin B2 pero no la B1.
En el repertorio linfocitario adulto, los
linfocitos B1 son bastante frecuentes en la poblacin B que sufre neoplasias y en aquellos que reconocen una gran variedad de autoantgenos y reaccionan cruzadamente con antgenos bacterianos
como polisacridos y lipopolisacridos. El repertorio de receptores BCR es bastante ms limitado
en los linfocitos B1 que en los linfocitos B2, sus
reordenamientos gnicos VH son ms restringidos, y, como no expresan la enzima TdT
(Deoxinucleotidil Transferasa Terminal), carecen
de regiones N en las uniones VDJ.
covalentemente unido al antgeno y ha sido generado por digestin parcial de C3 durante la activacin del sistema del complemento inducida por
el reconocimiento innato del antgeno. De esta
manera, el receptor CD21 permite integrar el reconocimiento innato de antgenos bacterianos por
el sistema del complemento, con la respuesta inmune humoral a travs de la activacin y diferenciacin de linfocitos B. La molcula CD21 se expresa tambin en clulas dendrticas foliculares y
es responsable de la retencin prolongada del
antgeno en el tiempo y la mantencin de los
linfocitos B de memoria.
El correceptor CD21 (tambin conocido
como CR2 o receptor para complemento tipo 2)
se expresa en la membrana de los linfocitos B
como un complejo proteico que incluye 3 protenas distintas: CD21, CD19. y CD81 (tambin denominado TAPA-1). En el complejo CD21/CD19/
CD81, el correceptor CD21 acta como subunidad
que une C3d y asocia el reconocimiento del
antgeno por el sistema del complemento, a la activacin de linfocito B a travs de la transduccin
de seales bioqumicas gatilladas por CD19.
4. Subpoblaciones linfocitarias B1 y B2
En el repertorio linfocitario B (estimado en
1014 linfocitos B distintos), se distinguen al menos dos subpoblaciones celulares denominadas B1
y B2, que presentan caractersticas estructurales y
funcionales distintas, tienen distinta distribucin
anatmica y se generan a distintas edades durante
la ontogenia de los LB. La subpoblacin
linfocitaria B1 se desarrolla durante la vida fetal/
neonatal, presenta receptores BCR polirreactivos
de baja afinidad, se asocia a la produccin de
anticuerpos naturales T-independientes y se encuentra mayoritariamente en el peritoneo, la cavidad peritoneal y en el bazo. La subpoblacin
linfocitaria B2 se genera a partir de clulas
progenitoras de la mdula sea adulta, constituye
la mayor parte del repertorio linfocitario B, su
activacin es T-dependiente y se encuentra fundamentalmente en los rganos linfoides secundarios y en el torrente sanguneo.
La mayora de los linfocitos B1 se caracteriza por la expresin del marcador CD5
(glicoprotena monomrica de 67 kDa, propia de
linfocitos T) y aunque su funcin es todava un
misterio, se ha sugerido que la activacin de estas
clulas conduce a la produccin de anticuerpos
que proporcionan proteccin contra infecciones
5. ESTRUCTURA Y FUNCIN DE INMUNOGLOBULINAS

Las inmunoglobulinas son una familia de
glicoprotenas estructuralmente relacionadas, presentes en la membrana de linfocitos B y en el
suero y fluidos titulares de todos los vertebrados,
con excepcin de los ciclostomos. Sus genes se
expresan exclusivamente en los linfocitos B y, en
respuesta a la exposicin a un antgeno, se secretan
como anticuerpos que actan como mediadores
de la inmunidad humoral especfica. Aunque todos los anticuerpos tienen una estructura
monomrica bsica similar, se agrupan en clases
estructural y funcionalmente distintas.
En la ltima dcada, los esfuerzos de numerosos inmunlogos se han centrado tanto en el
anlisis de la estructura de los anticuerpos, como
en la comprensin de los mecanismos genticos
que dan cuenta de su sntesis y del potencial prcticamente ilimitado del repertorio linfocitario.
126
Sin ttulo-2
126
5/26/06, 10:25 AM
dad, ubicada entre los dominios CH1 y CH2. La

longitud de la regin bisagra vara de 10 a 60
aminocidos en los distintos isotipos de Ig y su
flexibilidad es determinante en la orientacin espacial de los paratopos y en la eficiencia de la
unin antgeno-anticuerpo.
Las cadenas livianas de la Ig, tienen un peso
molecular en torno a 25 kDa; no contienen
carbohidratos y estn constituidas por aproximadamente 220 aminocidos, separados en un dominio variable (VL) aminoterminal y un dominio
constante (CL) carboxiterminal. Variaciones estructurales en el dominio constante carboxiterminal,
permiten distinguir dos tipos de cadena liviana:
kappa (k) y lambda (). En una Ig, las cadenas
livianas son siempre idnticas entre s; por lo tanto, un monmero inmunoglobulnico slo puede
tener cadenas de tipo kappa o de tipo lambda,
pero nunca de ambas.
Utilizando enzimas proteolticas como
papana y pepsina, se ha logrado degradar
monmeros de Ig y establecer que el reconocimiento del antgeno y la funcin efectora de la
respuesta inmune, residen en fragmentos definidos y distintos de la molcula. La papana ataca
selectivamente cada cadena pesada justo en el sitio aminoterminal del enlace disulfuro intracadena
pesada, liberando tres grandes fragmentos: un fragmento Fc y dos fragmentos idnticos de aproximadamente 45 kDa, denominados Fab (fragmento de unin con el antgeno) que contienen la cadena liviana completa (VL y CL) y los dominios
VH y CH1 de la cadena pesada (figura 6-4). Los
fragmentos monovalentes Fab, pueden unirse
especficamente al antgeno pero no lo precipitan,
puesto que presentan un nico sitio de combinacin con el antgeno. El tercer fragmento, denominado Fc (fragmento cristalizable) de aproximadamente 50 kDa, contiene el segmento
carboxiterminal de la cadena pesada, es responsable de la funcin efectora de un anticuerpo y,
presenta una gran facilidad para cristalizar en soluciones amortiguadoras neutras.
5.1. Estructura general

La unidad estructural bsica de las
inmunoglobulinas est dada por un monmero
glicoproteico formado por cuatro cadenas
polipeptdicas -dos cadenas livianas (L) idnticas
y dos cadenas pesadas (H) tambin idnticascovalentemente unidas por puentes disulfuro y
estabilizadas por uniones no covalentes, como
puentes de hidrgeno, fuerzas de Van der Waals e
interacciones electrostticas. Al asociarse una cadena pesada con una liviana, sus extremos
aminoterminales forman un paratopo o sitio de
unin para el antgeno; existen por lo tanto, dos
sitios de combinacin por monmero de Ig (figura 6-2). Esto significa que una Ig es una molcula bivalente, que puede interactuar simultneamente con dos eptopos idnticos. Sin embargo, algunos anticuerpos se secretan como multmeros
inmunoglobulnicos, en los cuales monmeros Ig
se asocian covalentemente entre s mediante una
cadena peptdica adicional, denominada cadena
J. En estos casos, anticuerpos multimricos como
IgM e IgA, presentan una valencia mayor (proporcional al nmero de sitios de unin para el
antgeno) y pueden estar presentes en las
secreciones, gracias a su capacidad de unirse a un
receptor poli-Ig existente en la cara basolateral
de clulas epiteliales del tracto respiratorio,
gastrointestinal y genitourinario.
Las cadenas pesadas tienen un peso
molecular que flucta entre 55 y 77 kDa. Estn
constituidas por aproximadamente 450 550
aminocidos y contienen 3 a 15% de carbohidratos,
que resultan esenciales para mantener la estructura del monmero inmunoglobulnico y favorecer
la activacin del sistema del complemento y la
unin a receptores Fc. Cada cadena pesada est
formada por segmentos o dominios de 110
aminocidos, que incluyen un dominio variable
(VH) aminoterminal que forma parte del paratopo
y tres o cuatro dominios constantes (C H )
carboxiterminales, que determinan la funcin
efectora de un anticuerpo.
Diferencias estructurales en la regin
carboxiterminal, permiten reconocer, en un mismo individuo, cinco clases o isotipos de cadenas
pesadas, que se designan con letras griegas:
gamma () presente en la IgG, mu () en la IgM,
alfa () en la IgA, delta () en la IgD y psilon ()
en la IgE.
La cadena pesada contiene adems una regin bisagra, rica en prolina y de gran flexibili-
El fragmento Fc de un anticuerpo, participa

en funciones efectoras tales como: activacin del
sistema del complemento, activacin de clulas
fagocticas, citotoxicidad dependiente de
anticuerpos (ADCC), inmunidad de mucosas, inmunidad neonatal, hipersensibilidad inmediata
y regulacin de la respuesta inmune. Distintos tipos celulares (monocitos, clulas NK, macrfagos,
clulas cebadas y granulocitos, entre otras) pre-
127
Sin ttulo-2
127
5/26/06, 10:25 AM
5.2. Dominios de inmunoglobulinas y regiones

hipervariables
sentan en su membrana plasmtica receptores Fc

(FcR) isotipo-especficos para el fragmento Fc de
distintas clases de anticuerpos (FcR, FcR,
FcR). Estos receptores Fc, presentan un dominio
citoplasmtico implicado en la transduccin de
seales de activacin tales que, la naturaleza de la
respuesta efectora depender del isotipo de Ig
unida al FcR y del tipo de clula que expresa el
receptor.
El tratamiento de un anticuerpo con
pepsina, genera un fragmento bivalente F(ab)2,
que contiene dos fragmentos Fab covalentemente unidos entre s y pequeos fragmentos
peptdicos derivados de la degradacin de la
regin carboxiterminal Fc, de las cadenas pesadas (figura 6-4).
La secuenciacin completa de una molcula de

inmunoglobulina, permiti definir los sitios de unin
al antgeno y localizar las regiones responsables de
las actividades biolgicas secundarias o efectoras de
los anticuerpos. Se descubri as que las cadenas
pesadas y livianas de los Igs estn estructuradas en
regiones o dominios homlogos y globulares, de
aproximadamente 110 aminocidos, que forman un
asa o loop caracterstico, unido por puentes
disulfuro intracatenarios (figuras 6-1 y 6-2).
La homologa aminoacdica entre los distintos dominios de la molcula, sugiere que las
inmunoglobulinas se habran originado a partir de
un gen ancestral comn, que codificaba para un
polipptido de 110 aminocidos y de funcin desconocida. En el curso de la evolucin este gen
habra sufrido sucesivas duplicaciones y mutacio-
Figura 6-4. Fragmentos obtenidos por accin de papana y pepsina, sobre la molcula de inmunoglobulina. La papana
separa la Ig en dos fragmentos monovalentes Fab que conservan la capacidad de unir especficamente el antgeno y, un fragmento
Fc, responsable de la funcin efectora de un anticuerpo. La pepsina en cambio, escinde la molcula en un fragmento bivalente
F(ab)2, con dos sitios de combinacin para el antgeno y, en mltiples pptidos de bajo peso molecular derivados de la degradacin
del fragmento Fc.
128
Sin ttulo-2
128
5/26/06, 10:25 AM
nes, que generaron las distintas clases y subclases

de inmunoglobulinas.
La comparacin de la secuencia aminoacdica
de cadenas pesadas y livianas de diferentes Igs,
revela la existencia de una gran variabilidad en el
extremo aminoterminal, que constituye precisamente el dominio variable (VH y VL) de cada cadena. En el extremo carboxiloterminal de las cadenas pesadas y livianas en cambio, los distintos
dominios presentan una muy escasa variacin
constituyendo los dominios constantes (CH o CL)
de cada cadena. En las cadenas pesadas , y
existen tres dominios constantes (CH1, CH2 y CH3),
mientras en las cadenas pesadas y , existen
cuatro dominios constantes (CH1, CH2, CH3 y CH4).
En las cadenas livianas existe slo un dominio
constante CL (figuras 6-1 y 6-2).
Cada dominio de la molcula de inmunoglobulina tiene la forma de un cilindro compuesto
por dos hojas: una contiene tres hebras de cadenas
polipeptdicas y la otra cuatro. En cada hoja, las
hebras adyacentes son antiparalelas y forman una
estructura secundaria tipo beta u hoja plegada.
Ambas hojas estn alineadas en forma casi paralela y tienen enlaces disulfuro intracadenas entre dos
cistenas altamente conservadas, cada una perteneciente a una de las hlices de cada lmina (figura 65). Las protenas que presentan una estructura similar, se clasifican en el grupo denominado
superfamilia de las inmunoglobulinas.
De los 110 aminocidos de la regin variable de las cadenas H y L, slo participan en el
sitio de unin con el antgeno alrededor de 30 residuos de cada cadena, situados en las regiones de
mayor variabilidad aminoacdica, denominadas re-
giones hipervariables o regiones determinantes

de complementariedad (CDR: "ComplementaryDeterminig-Region"). Los CDRs que son tres segmentos cortos de 10 aminocidos (denominados
CDR1, CDR2 y CDR3), no contiguos en la secuencia primaria de cadenas pesadas y livianas.
En ambos tipos de cadenas H y L las regiones
hipervariables se localizan en las posiciones 2535, 50-60 y 90-100 de la cadena polipeptdica.
Adyacente a los CDR existen segmentos de
aminocidos de menor variabilidad, conocidos
como regiones marco, regiones de entramado o
regiones flanqueantes FR1, FR2, FR3 y FR4 (FR:
"Framework-Regions"), situadas en las posiciones 1-30, 35-50, 60-90 y 98-110, respectivamente. Estas regiones FR proporcionan un marco estructural para la yuxtaposicin de los CDR y conformacin del paratopo y, eventualmente, pueden
estar involucradas en el contacto con el antgeno,
especialmente cuando se trata de haptenos, donde
uno o ms CDRs puede estar fuera de la regin de
contacto con el antgeno.
Las regiones variables de las cadenas pesadas y livianas pueden dividirse en subgrupos, segn la secuencia aminoacdica de las regiones de
entramado. El nmero de subgrupos depende de
cada especie. En humanos, existen cuatro
subgrupos para cadenas kappa, seis para cadenas
lambda y tres para cadenas pesadas.
5.3. Variaciones isotpicas, alotpicas e
idiotpicas
El sistema inmune es capaz de generar un
repertorio linfocitario B estimado entre 1014 y 1016
Figura 6-5. Dominio constante y variable de una cadena liviana. Los dominios tienen una estructura beta mantenida por
puentes disulfuro. En el extremo de la regin variable, las regiones hipervariables forman parte del sitio de unin al antgeno. Este
sitio se completa con las regiones hipervariables presentes en la cadena pesada.
129
Sin ttulo-2
129
5/26/06, 10:25 AM
As, en humanos se han descrito cinco grupos distintos de marcadores alotpicos denominados Gm, Am, Mm (que se expresan en los dominios constantes de las cadenas pesadas , y ,
respectivamente), Km que se expresa en el dominio constante de las cadenas livianas kappa y Hv
que se expresa en el dominio variable de las cadenas pesadas y debe por lo tanto ser considerado
como marcador idiotpico. Variaciones en la regin constante de las cadenas pesadas de IgG han
permitido distinguir al menos 24 variantes distintas (3 de las cuales han sido asociadas con IgG1,
1 asociada con IgG2, 13 asociadas con IgG3 y 7
variantes que no han sido asociadas a una subclase
particular).
clulas distintas y capaces de originar un repertorio de anticuerpos de igual diversidad. Las funciones biolgicas de este repertorio de anticuerpos estarn fundamentalmente determinadas
por variaciones en la especificidad y afinidad de
sus paratopos y por diferencias estructurales en
la regin carboxiterminal (Fc), de sus cadenas
pesadas.
El estudio de las variaciones estructurales y/
o funcionales de cadenas pesadas y livianas, ha
permitido identificar en los anticuerpos 3 tipos
distintos de variaciones, denominadas: (i) variaciones isotpicas expresadas en los dominios constantes de cadenas pesadas o livianas de todos los
individuos de una especie, (ii) variaciones
alotpicas expresadas en los dominios constantes
de cadenas pesadas o livianas de algunos, pero no
todos los individuos de una misma especie, y (iii)
variaciones idiotpicas, expresadas en las regiones variables o en los paratopos de distintos
anticuerpos.
5.3.3. Variaciones idiotpicas

La utilizacin de inmunoglobulinas como
antgeno, ha permitido definir determinantes
antignicos especficos, denominados
idiotopos, asociados a las regiones o dominios
variables de cada Ig. El conjunto de idiotopos
de una inmunoglobulina, particularmente aqullos asociados al sitio de combinancin o
paratopo, definen el llamado idiotipo de esa
Ig o anticuerpo particular. Los idiotipos son
generalmente propios o especficos de
anticuerpos derivados de un clon linfocitario
B particular (idiotipos privados) o pueden ser
compartidos por varios clones linfocitarios
(idiotipos pblicos).
5.3.1. Variaciones isotpicas

Definen variaciones estructurales en la regin constante de cadenas livianas o pesadas de
una inmunoglobulina. As, diferencias aminoacdicas en el dominio constante, de cadenas livianas que expresan la misma regin variable VL ,
determinan la existencia de dos tipos o isotipos de
cadenas livianas, denominados kappa () y lambda
().
Diferencias estructurales en la regin constante de cadenas pesadas que expresan la misma regin variable VH, determinan la existencia de 5 clases o isotipos de cadenas pesadas
(denominadas , , , y ) que conducen a la
existencia de 5 clases o isotipos de inmunoglobulinas que difieren en su funcin efectora
y se denominan IgM, IgD, IgG, IgA e IgE, respectivamente
5.4. Clases y subclases de inmunoglobulinas

En mamferos superiores, especficamente
en humanos, se reconocen clases y subclases
de inmunoglobulinas que difieren en tamao,
carga, composicin aminoacdica y contenido
de carbohidratos de sus cadenas pesadas.
Electroforticamente, presentan un espectro de
migracin, que va desde la fraccin gamma a la
alfa del suero normal. Las fracciones en que
migran ms frecuentemente son: IgG en la fraccin gamma, IgA en gamma-beta, e IgM e IgD en
beta.
La tabla 6-1, presenta las caractersticas
fisicoqumicas de las Igs humanas y la tabla 6-2
muestra sus caractersticas biolgicas.
5.3.2. Variaciones alotpicas

Definen variaciones estructurales en las regiones constantes de las cadenas pesadas o livianas de una clase de Ig, entre diferentes individuos
de una misma especie. Estas variaciones se heredan en forma estrictamente mendeliana y no ligada al sexo. Los isotipos se expresan en todos los
individuos de una especie, mientras los alotipos
se expresan slo en algunos individuos de la especie.
130
Sin ttulo-2
130
5/26/06, 10:25 AM
Tabla 6-1. Caractersticas fisicoqumicas de las inmunoglobulinas humanas

Caracterstica
Clase de Inmunoglobulina
IgM
IgA
IgD
IgG
Cadenas H
IgE
1, 2, 3, 4
1, 2
1, 2
150
970
160 - 400
184
188
1-2
2-3
12
7 - 11
9 - 13
12
19
7 - 18
Valencia
10
2-4
Cadena J
No
S,
polimrica
No
No
Subclases de cadenas H
Cadenas L
Peso molecular (kDa)
Nmero de monmeros
Carbohidratos (%)
H, pesada; L, liviana; S, coeficiente de sedimentacin.

Inmunoglobulina G. La IgG representa el
70-75% del repertorio total de inmunoglobulinas,
siendo en su mayor parte de la subclase IgG1. Es
una glicoprotena monomrica que posee dos cadenas pesadas g y dos cadenas livianas ( o )
(figura 6-2). Su peso molecular es de aproximadamente 150 kDa y est glicosilada en un 2 a 3%.
Existen cuatro subclases (IgG1 a IgG4) originadas
por pequeas diferencias en la regin constante
de la cadena pesada, particularmente a nivel de la
regin bisagra. Son los anticuerpos predominantes en la sangre, linfa y fluidos peritoneal y cerebroespinal. En cuanto a su comportamiento trmico, las IgG reaccionan mejor a 37C.
Los anticuerpos de clase IgG predominan en
la respuesta inmune secundaria y tienen una vida
media de aproximadamente 21 das. Entre sus propiedades biolgicas destaca que todas las subclases
(con excepcin de IgG 2 ), pueden unirse al
sincitiotrofoblasto placentario a travs de los dominios CH1 y CH2; son por lo tanto, capaces de
atravesar la placenta y responsables de la proteccin del recin nacido en los primeros meses de
vida. La IgG es tambin importante en la induccin de fagocitosis (opsonizacin) dado que sus
dominios CH1 y CH2 pueden unirse a receptores
(FcR) presentes en la superficie celular de
monocitos, macrfagos y neutrfilos. Todas las
subclases de IgG (excepto IgG4 que lo hace muy
dbilmente), unen el primer componente (C1q),
del sistema complemento y pueden por lo tanto,
activar complemento a travs del dominio CH2.
Tabla 6-2. Caractersticas biolgicas de las inmunoglobulinas humanas

Caracterstica
IgG
Porcentaje del total de Ig
en la sangre
Clase de Inmunoglobulina
IgM
IgA
IgD
70 -75
10
15 - 20
800 - 1600
50 - 200
140 - 400
0,3 - 40
0,01 - 0,1
Fija complemento
No
No
Atraviesa la placenta
No
No
No
No
Unin a macrfagos y
neutrfilos
No
No
No
No
Unin a clulas cebadas y

basfilos
No
No
No
No
Unin a plaquetas
No
No
No
No
Concentracin en el suero
(mg/ml)
131
Sin ttulo-2
IgE
131
5/26/06, 10:25 AM
Inmunoglobulina M. La IgM tiene un peso

molecular de aproximadamente 970 kDa y representa el 10% del repertorio total de anticuerpos.
Es una inmunoglobulina o anticuerpo polimrico
con 10 12 sitios de unin para el antgeno (dados por 5 6 monmeros inmunoglobulnicos) y
est glicosilada en un 12%. La estructura bsica
del monmero IgM est dada por dos cadenas pesadas m y dos cadenas livianas o .
Las cadenas m poseen cuatro dominios constantes (figura 6-6). Las subunidades se unen a travs de enlaces disulfuro entre los dominios C3.
La polimerizacin de la molcula se ve favorecida por la existencia de la cadena J (joining o de
unin), de aproximadamente 15-20 kDa, que se
une a nivel de los penltimos residuos de cistena
de cadenas , entre la primera y la ltima unidades monomrica del polmero. El 80% de la IgM
se encuentra en el espacio intravascular.
La IgM es la inmunoglobulina predominan-
te en la respuesta inmune primaria y tiene una vida

media de 5 das. Es la Ig ms eficiente en la fijacin de complemento, en las reacciones de lisis
celular y en la potenciacin de las reacciones de
fagocitosis. Es una inmunoglobulina que reacciona bien a temperaturas inferiores a 37C.
Inmunoglobulina A. La IgA representa de 10 a
5% del total de inmunoglobulinas corporales. Puede ser monomrica (160 kDa) o dimrica (385
kDa); la forma dimrica existente en las
secreciones, se denomina IgA secretora (IgAs);
Los anticuerpos IgA polimricos presentan, al
igual que las IgM polimricas, la cadena J y el
llamado componente secretor (glicoprotena de
70 kDa), que constituye un remanente del receptor poli-Ig (poli-IgR) sintetizada por las clulas
epiteliales (figura 6-7). La cadena J se une al dominio CH3 y el componente secretor al dominio
CH2 del dmero IgA.
Figura 6-6. Estructura de la Inmunoglobulina M. Las cinco unidades estructurales bsicas se unen por puentes disulfuro. Las
cadenas m poseen cuatro dominios constantes. Una cadena J inicia el ensamblaje del pentmero.
132
Sin ttulo-2
132
5/26/06, 10:25 AM
Figura 6-7. Inmunoglobulina A monomrica, dimrica y de secrecin. Las IgA monomrica y dimrica corresponden a formas
sricas; la dimrica tiene una cadena J. La IgA secretora, adems de la cadena J, presenta un componente secretor.
de las lectinas, impide la adherencia de bacterias

a la superficie de la mucosa intestinal y su porcin Fc se une al receptor fagoctico Fc-R
(CD89).
Existen dos subclases de IgA (IgA1 e IgA2)
que presentan pequeas diferencias en las regiones constantes de las cadenas alfa. No se han observado diferencias en la actividad biolgica.
La IgA es la principal inmunoglobulina presente en leche, saliva, lgrimas, y secreciones respiratorias y digestivas. Las clulas epiteliales sintetizan el poli-IgR en el retculo endoplsmico, y
luego de pasar por el complejo Golgi ser expuesto, como receptor para las IgA e IgM polimricas,
en la superficie basolateral de la clula epitelial.
La unin
no covalente, del extremo
carboxiterminal del anticuerpo al receptor es dependiente de la cadena J. El complejo IgA-poliIgR (o IgM-poli-IgR) ingresa por endocitosis a la
clula epitelial y es luego transportado a la superficie apical o luminal del epitelio (transcitosis)
donde el receptor ser parcialmente digerido, dejando un fragmento o componente secretor
covalentemente unido al anticuerpo secretado. El
componente secretor protege a IgA e IgM, de la
accin de las enzimas proteolticas presentes en
las secreciones (figura 6-8).
Entre las propiedades de la IgA destacan las
siguientes: neutraliza los virus, activa el sistema
del complemento por la ruta alterna y por la ruta
Inmunoglobulina D. La IgD tiene un peso

molecular de aproximadamente 185 kDa, est
glicosilada en un 9 a 14% y tiene una vida media
de 2 a 3 das. Existe controversia sobre su funcin; sin embargo, se piensa que por encontrarse
presente en cantidades importantes sobre la membrana de los linfocitos B circulantes, podra estar
involucrada en la activacin de dichas clulas
como receptor de antgeno. Representa menos del
1% del total de las inmunoglobulinas y la mayor
parte se encuentra en el espacio intravascular (figura 6-9).
133
Sin ttulo-2
133
5/26/06, 10:25 AM
Figura 6-8. Proceso de secrecin de la IgA. La IgA plasmtica dimrica se une al receptor poli-Ig expuesto en la superficie
basolateral de la clula epitelial e ingresa a la clula como complejo poli-Ig-IgA, por endocitosis. Posteriormente, hacia el lado
luminal de la clula, el receptor poli-Ig, es parcialmente digerido, dejando un fragmento o componente secretor, covalentemente
unido a la IgA dimrica secretada.
Figura 6-9. Estructura de las inmunoglobulinas E y D. La IgD y la IgE son inmunoglobulinas monomricas de aproximadamente 185 y 190 kDa, respectivamente. Las cadenas e poseen cuatro dominios constantes.
Inmunoglobulina E. La IgE es una glicoprotena de aproximadamente 190 kDa, que se

encuentra glicosilada en un 12% y tiene una vida
media de 2 a 3 das. Las cadenas e presentan cuatro dominios constantes (figura 6-9). La IgE representa menos del 1% del total de las
inmunoglobulinas y el 50% de ella se encuentra en el espacio intravascular. La regin Fc de

la IgE se une con facilidad a receptores especficos de alta afinidad (receptores FcRI),
constitutivamente expresados en la membrana
de clulas cebadas, basfilos y eosinfilos, de
134
Sin ttulo-2
134
5/26/06, 10:25 AM
esta manera estas clulas adquieren receptores

antgeno-especficos. La unin de antgenos
(alergenos) a las IgE unidas a mastocitos y
basfilos, gatilla no slo la degranulacin celular y la liberacin (exocitosis) de mediadores de inflamacin (histamina, serotonina,
triptasa), sino tambin la sntesis de citoquinas
(IL-4, IL-5, IL-6, TNF) y de mediadores derivados del cido araquidnico (leucotrieno C4,
prostaglandina D2). La liberacin de estos mediadores de hipersensibilidad inmediata en reacciones alrgicas como asma, fiebre del heno
y urticaria, induce rpidamente edema de la
mucosa bronquial, secrecin de mucus, contraccin de la musculatura lisa y, subsecuentemente, infiltrado leucocitario en el sitio
de inflamacin.
Un FcR de baja afinidad y rol biolgico hasta ahora desconocido (FcRII) se expresa
constitutivamente en linfocitos B (receptor
FcRIIA) o en respuesta a IL-4, en monocitos y
eosinfilos (receptor FcRIIB o CD23).
6. RESPUESTA INMUNE HUMORAL

Los anticuerpos producidos por las clulas
plasmticas -que representan el estado final de diferenciacin de los linfocitos B- son mediadores de la
respuesta inmune humoral y por lo tanto, responsables de la neutralizacin y eliminacin de diversos
antgenos, gatillando una variedad de reacciones
inmunolgicas. Una de las caractersticas esenciales
de esta respuesta es su carcter especfico y heterogneo; es decir, se sintetizan anticuerpos de distinta clase, avidez y afinidad, capaces de interactuar con
eptopos antignicos segn un claro patrn temporal.
En un individuo que por primera vez toma contacto con un antgeno, se distinguen cuatro fases en
la respuesta primaria de produccin de anticuerpos
(figura 6-10): (i) Fase de latencia, en la que no se
detectan anticuerpos, (ii) Fase logartmica, en la cual
el ttulo del anticuerpo se eleva en forma exponencial,
(iii) Fase de meseta, en cual el ttulo de anticuerpos
se estabiliza, y (iv) Fase de descenso, en cual la concentracin de anticuerpos disminuye por eliminacin
o catabolismo.
Figura 6-10. Respuesta inmune humoral. La figura superior presenta las etapas de una respuesta inmune humoral, expresadas
como ttulo de anticuerpos: Fase de latencia, logartmica, de meseta y de decadencia. La figura inferior muestra diferencias entre
las respuestas inmune humoral primaria y secundaria, particularmente respecto a la clase de inmunoglobulinas y al ttulo de los
anticuerpos. Se destaca que en la respuesta primaria, se pesquisa primero IgM en bajo ttulo y en la respuesta secundaria predomina la sntesis de IgG, en un ttulo significativamente superior (ver cambio de clase).
135
Sin ttulo-2
135
5/26/06, 10:25 AM
Aunque estas fases de la curva de produccin de anticuerpos se presentan siempre en la respuesta primaria, en los posteriores contactos con
el antgeno (respuesta secundaria, terciaria, etc.),
pueden distinguirse los siguientes aspectos (figura 6-10): (i) Evolucin cronolgica, fase de
latencia ms corta y fases de meseta y de descenso ms largas, (ii) Ttulo de anticuerpos, en la fase
de meseta mucho mayor concentracin de
anticuerpos, (iii) Clase de anticuerpos, en la respuesta primaria para los antgenos timo-dependientes, se sintetizan y secretan fundamentalmente anticuerpos de isotipo IgM, de gran avidez, en
cambio en la respuesta secundaria se encuentran
casi exclusivamente anticuerpos de isotipo IgG, y
(iv) Afinidad de los anticuerpos, generalmente
mucho mayor en la respuesta secundaria o posterior. Este fenmeno se denomina maduracin de
la afinidad y es consecuencia de la hipermutacin
somtica en los genes recombinados del anticuerpo y de una expansin selectiva de los clones de
alta afinidad.
el antgeno y el anticuerpo. Operacionalmente, esto

significa que mientras mayor es la afinidad de la
interaccin, es ms difcil separar los componentes del complejo antgeno-anticuerpo.
Dado que las interacciones antes mencionadas no son covalentes, la unin antgeno-anticuerpo se puede representar por la constante de asociacin o afinidad Ka, (que se expresa en M-1). Se
obtiene asumiendo que esta reaccin obedece rigurosamente a la ley de accin de masas, como
sigue:
Ka
Ag + Ac
AgAc
Kd
[ Ag ] x [ Ac ]
La Ka se puede medir por varias tcnicas,

tales como: dilisis en equilibrio, radioinmunoensayo y precipitacin con sulfato de amonio
de complejos antgeno-anticuerpo.
El trmino avidez se refiere a la fuerza con

que un anticuerpo se une a un antgeno multivalente y, por lo tanto, tiene relacin con la afinidad y con la valencia del antgeno y del anticuerpo. Si tanto el antgeno como el anticuerpo tienen
carcter multivalente, la fuerza de unin entre ellos
es mayor que la suma de las afinidades.
Debido a que la avidez de un anticuerpo es
una funcin de los mtodos utilizados para medirla (precipitacin con sulfato de amonio o con
suero anti-Ig o, seroneutralizacin de fagos o bacterias, entre otros), slo puede expresarse en unidades arbitrarias.
7. BASES GENTICAS DE LA DIVERSIDAD DE LAS INMUNOGLOBULINAS

En los vertebrados superiores el tamao y diversidad del repertorio linfocitario, aumenta la probabilidad que un linfocito individual encuentre un
antgeno que se una a su receptor de superficie y
gatille la proliferacin y diferenciacin celular a
travs de un proceso de seleccin clonal de
linfocitos.
El receptor de un linfocito B (BCR) es generado somticamente en el rgano linfoide primario, durante un proceso de diferenciacin
antgeno independiente que permite que cada
linfocito B est provisto de un receptor nico,
cuyas cadenas pesadas y livianas no estn codificadas en el DNA germinal y no est predestinado a reconocer un antgeno extrao particular.
El repertorio de receptores linfocitarios B
es generado al azar durante un proceso regulado de reordenamiento o recombinacin de segmentos gnicos V(D)J (como ocurre en humanos), por conversin gnica (como ocurre en
pollos y conejos) o por mutacin somtica
(como ocurre en ovejas). Adems durante la
recombinacin V(D)J, puede introducirse una
6.2. Afinidad
El trmino afinidad de un anticuerpo, es
una expresin termodinmica de la fuerza de la
interaccin entre un eptopo del antgeno y el sitio
de combinacin de un anticuerpo; por lo tanto, es
una medida de la compatibilidad estereoqumica
entre ambas molculas y puede aplicarse a
interacciones que involucran determinantes simples (como los haptenos).
La afinidad resulta de la suma de las fuerzas
de repulsin y atraccin (puentes de hidrgeno,
interacciones de Van der Waals, interacciones
electrostticas e interacciones hidrofbicas) entre
136
136
[ AgAc ]*
* Concentracin Molar
6.1. Avidez
Sin ttulo-2
Ka =
5/26/06, 10:25 AM
mayor diversidad por: (i) corte impreciso de los

segmentos gnicos que se recombinan, (ii)
agregado de nucletidos al azar, en los sitios
de corte y unin de los distintos segmentos
gnicos y, (iii) combinacin al azar de distintas
cadenas pesadas y livianas. A estos mecanismos
de generacin de diversidad en el rgano
linfoide primario, se agregarn luego, en los
rganos linfoides secundarios, mecanismos
antgeno-dependientes como: (i) la hipermutacin de las regiones hipervariables (CDRs) de
cadenas pesadas y livianas, (ii) el switching
isotpico o cambio de clase de las cadenas pesadas y (iii) la edicin del receptor a travs de
reordenamientos secundarios V en las cadenas
livianas.
7.1. Genes de inmunoglobulinas

En el DNA germinal de los vertebrados superiores no existen genes que codifiquen la sntesis de cadenas pesadas y livianas de una
inmunoglobulina; al contrario estos genes deben
ser creados o ensamblados a partir de copias mltiples de pequeos segmentos gnicos, en un proceso de recombinacin sitio-especfico, catalizado
por un complejo enzimtico denominado
recombinasa (figuras 6-11 y 6-12).
Los segmentos gnicos que codifican las distintas regiones o dominios de cadenas pesadas y
livianas de una inmunoglobulina, se encuentran
agrupados en tres grupos o familias gnicas distintas: (i) una nica familia gnica H, que incluye
Figura 6-11. Generacin del gen activo de la cadena pesada. El gen activo para una cadena H surge de cuatro genes (V, D, J y
C) de la lnea germinal. Mediante recombinacin somtica se unen a una de las secuencias V, D y J, formando la regin variable.
Los genes para regin constante (nueve en el ser humano) estn situados ro abajo (hacia 3'). Uno de los genes constantes se une a
los segmentos ya recombinados que codifican la regin variable. El montaje final de las secuencias se realiza durante el procesamiento del RNA.
Figura 6-12. Recombinacin de segmentos gnicos y generacin de RNA mensajero para cadenas livianas. En la clula
precursora de un linfocito B, los distintos segmentos gnicos se encuentran en configuracin germinal y deben recombinarse para
generar un gen que codifique la cadena liviana de una inmunoglobulina.
137
Sin ttulo-2
137
5/26/06, 10:25 AM
denas pesadas ocupa 1250 kilobases (kb), en el

brazo largo del cromosoma 14, y consiste de 123
a 129 segmentos gnicos variables VH, 27 segmentos gnicos DH, 9 segmentos gnicos JH y 11
minigenes constantes CH. Los segmentos gnicos
variables ocupan una posicin muy cercana al
telmero cromosmico y entre ellos se distinguen
41 seudogenes y slo 82 a 86 segmentos funcionales que se clasifican en 7 familias o subgrupos
cuyos miembros presentan ms de 70% de
homologa. Los minigenes constantes ocupan una
posicin ms centromrica en el cromosoma 14
humano. Se han descrito adems, fuera del
cromosoma 14 humano, 35 segmentos gnicos
hurfanos y no funcionales que no contribuyen a
la sntesis de cadenas pesadas: 9 segmentos VH y
10 segmentos DH en el cromosoma 15; 16 segmentos VH en el cromosoma 16 y un segmento VH
en el cromosoma 9.
Los seudogenes o segmentos gnicos no funcionales, aunque no contribuyan directamente a
la diversidad de las cadenas, pueden constituir un
importante reservorio de diversidad, puesto que
pueden utilizarse en la recombinacin desigual
(conversin gnica) con segmentos gnicos funcionales y generar as nuevos segmentos gnicos
funcionales.
genes CH (constantes), genes VH (variables), genes

JH (unin) y genes DH (diversidad) de las cadenas
pesadas; (ii) dos familias gnicas livianas distintas (kappa y lambda) que incluyen genes CL (constantes), genes VL (variables) y genes JL (unin).
En humanos, los segmentos gnicos que codifican las cadenas pesadas se encuentran en el
cromosoma 14 y los de cadenas livianas y en
los cromosomas 2 y 22, respectivamente. En el
ratn, en cambio, los genes para cadenas pesadas
se ubican en el cromosoma 12, y los genes para
cadenas livianas y , se ubican en los
cromosomas 6 y 16, respectivamente.
7.1.1. Genes de cadenas pesadas
La regin variable de una cadena pesada
(VH, de aproximadamente 110 aminocidos), se
genera a partir de tres segmentos gnicos distintos: un segmento gnico variable VH, de 285
pares de bases, que codifica los primeros 95
aminocidos y dos segmentos gnicos distintos
(de diversidad DH y de unin JH) que codifican
los ltimos 13 aminocidos del dominio variable. Cada segmento gnico VH contiene adems en su extremo 5, una pequea secuencia
nucleotdica de 60 a 90 pares de bases, que codifican una secuencia aminoacdica lder o seal aminoterminal hidrofbica de 20 a 30
aminocidos, que permite la sntesis de la cadena liviana en ribosomas asociados al retculo
endoplsmico celular. Iniciada la sntesis de la
cadena liviana, la secuencia lder o seal es luego, rpidamente removida del extremo amino
de la protena (figura 6-11).
El sitio de ensamblaje de los segmentos
V(D)J codifica la tercera regin hipervariable
(CDR3), de la cadena pesada, mientras las dos
primeras regiones hipervariables (CDR1 y CDR2),
estn codificadas dentro del segmento gnico VH.
La regin constante de la cadena pesada est
codificada por un segmento gnico o minigen
constante CH que contiene 3 4 exones (CH1, CH2,
CH3, CH4: que codifican la regin constante de las
cadenas pesadas de los anticuerpos) y exones ms
pequeos que codifican la regin transmembrana
y el dominio citoplasmtico de la cadenas pesadas de Ig del receptor linfocitario BCR (figura 61). Los minigenes de cadenas pesadas de diferentes isotipos (C, C, C, C y C), estn ordenadas en series (en tndem), en un orden que es caracterstico de cada especie.
En humanos, el repertorio genmico de ca-
7.1.2. Genes de cadenas livianas

La regin o dominio variable de una cadena
liviana (V L de aproximadamente 110 aminocidos), se genera a partir de dos segmentos
gnicos distintos: un segmento gnico variable VL,
de 285 pares de bases, que codifica los primeros
95 aminocidos y, un segmento gnico de unin
JL, de 39 pares de bases que codifica los ltimos
13 aminocidos del dominio variable liviano
(aminocidos 96 al 108 en direccin aminocarboxilo). Cada segmento gnico VL contiene
adems en el extremo 5, una pequea secuencia
nucleotdica de 60 a 90 pares de bases, que codifica una secuencia aminoacdica lder o seal
hidrofbica, ubicada en el extremo amino de la
cadena liviana (figura 6-12).
El dominio constante de la cadena liviana
est codificado por un segmento o minigen constante (CL) que contiene un nico exn de aproximadamente 330 pares de bases, puesto que las
cadenas livianas no contienen dominios
transmembrana y citoplasmtico (figura 6-1).
138
Sin ttulo-2
138
5/26/06, 10:25 AM
a) Genes de cadena kappa
sadas y luego los segmentos gnicos que codifican las cadenas livianas.
La recombinacin es iniciada por un complejo enzimtico o recombinasa, que reconoce y
corta de manera especfica, una secuencia seal
de recombinacin (RSS: "Recombination Signal
Sequence") que flanquea o es adyacente a cada
uno de los segmentos gnicos V(D)J que deben
reordenarse. Cada secuencia RSS consta de un
heptmero conservado (5CACAGTG) y un
nonmero
tambin
conservado
(5
ACAAAAACC), separados entre s por un
espaciador no conservado de 12 23 pares de
bases (figura 6-13). Los espaciadores definen dos
tipos distintos de secuencias de recombinacin (denominadas 12-RSS y 23-RSS) y, el reordenamiento se realiza de manera tal que una
recombinacin eficiente slo ocurre cuando un
segmento gnico que contiene el espaciador 12RSS, se reordena con un segmento gnico distinto que contiene el espaciador 23-RSS. Esta restriccin del reordenamiento gnico, se conoce
como la regla 12/23 y determina qu segmentos podrn recombinarse entre s, dependiendo
de la posicin de las secuencias 12-RSS o 23RSS, en el extremo 5 o 3 de cada segmento
gnico (figura 6-14). La secuencia RSS se encuentra en el extremo 3 de cada segmento variable V,
en el extremo 5 de cada segmento de unin J y en
ambos extremos, 5 y 3, de los segmentos gnicos
de diversidad D.
El proceso de recombinacin o reordenamiento gnico es altamente complejo e implica la
participacin de una maquinaria enzimtica
(recombinasa) que incluye componentes de expresin exclusivamente linfocitaria y componentes
que forman parte de la maquinaria de reparacin
del DNA celular.
El reordenamiento V(D)J es iniciado por los
productos de expresin linfoide-especfica de los
genes RAG-1 y RAG-2 (RAG: "Recombination
Activating Gene") que reconocen y cortan las secuencias RSS, adyacentes a cada segmento gnico
que ser recombinado. Las secuencias RSS son
primero reconocidas por la maquinaria de
recombinacin y luego aproximadas en estrecha
yuxtaposicin o sinapsis para cortar de manera
precisa el DNA, en el lmite entre el heptmero
de cada secuencia RSS y el segmento gnico
codificante. Protenas de alta movilidad de los grupos 1 y 2 (HMG1/2) parecen desempear un rol
auxiliar en estos eventos tempranos de la
recombinacin gnica. El corte o dao en el DNA
En humanos el repertorio genmico para cadenas livianas kappa (), ocupa 1820 kb en el brazo corto del cromosoma 2 y consiste de 76 segmentos variables V (agrupados en 7 familias distintas, y cuyos
miembros muestran ms de 70% de homologa), 5
segmentos gnicos de unin J y un nico gen constante C. Los segmentos variables V, estn separados en dos grupos o clusters: uno distal conteniendo 36 genes en 400 kb (ms centromrico y en posicin 5, ms lejos del gen constante C) y, otro ms
proximal conteniendo 40 segmentos gnicos en 600
kb (en posicin ms telomrica y en posicin 3, ms
cercano al gen constante C).
Se ha descrito adems un haplotipo raro que
contiene slo el cluster proximal con 40 segmentos gnicos V distribuidos en 7 familias, de los
cuales 18-20 son segmentos funcionales. En este
haplotipo se han identificado y secuenciado, adems, 28 segmentos gnicos V adicionales y hurfanos, distribuidos en distintos cromosomas: 3
ubicados en el brazo corto del cromosoma 2, (pero
fuera del locus mayor IgL), 13 segmentos en el
brazo largo del cromosoma 2, 6 segmentos en el
cromosoma 22, 1 en el cromosoma 1, 1 en el
cromosoma 15 y 4 fuera del cromosoma 2.
b) Genes de cadenas lambda
En humanos el repertorio genmico de cadenas livianas lambda (), ocupa 1050 kb en el brazo largo del cromosoma 22 y contiene: 70-71 segmentos variables V, que ocupan 900 kb (dependiendo del haplotipo), 7 a 11 segmentos constantes (C) en posicin ms telomrica y, adems,
cada segmento gnico constante est precedido
por un nico segmento gnico J. Los segmentos
gnicos V ocupan una posicin ms centromrica
y entre ellos se distinguen 14 seudogenes y 56-57
segmentos V funcionales, agrupados en 11 familias distintas. Se han descrito adems dos segmentos gnicos hurfanos ubicados en el
cromosoma 8 humano y dos segmentos V y dos
segmentos constantes C, en el cromosoma 22,
por fuera del locus mayor de cadenas livianas
lambda.
El reordenamiento gnico se realiza de manera
definida y ordenada, recombinando primero los
segmentos gnicos que codifican las cadenas pe-
139
Sin ttulo-2
139
5/26/06, 10:25 AM
agregar nucletidos en los extremos libres de los

segmentos gnicos codificantes, incrementando
notablemente la diversidad generada durante este
proceso de reordenamiento o recombinacin
gnica.
7.2.1. Reordenamiento de cadenas pesadas
El reordenamiento de segmentos gnicos en
el locus para cadenas pesadas, se realiza en un
orden preciso e implica la eliminacin o delecin,
de todos los segmentos que separan a aqullos
que deben recombinarse. Primero se reordena un
segmento gnico de diversidad D, con un segmento de unin J, eliminando toda la secuencia
nucleotdica que los separa, pero manteniendo
todos los segmentos gnicos que estn en posicin y direccin 5 del segmento D y en posicin
y direccin 3 del segmento J que se recombina.
Luego, uno de los segmentos gnicos variables
V, se recombina con el complejo DJ ya
reordenado, eliminando los segmentos que los
separan y conservando aqullos que estn en
posicin y direccin 5 de V y en direccin 3 del
complejo DJ.
El DNA ya reordenado, es ahora utilizado
como molde para la sntesis de una RNA o
transcrito primario que incluir, tantos los segmentos gnicos V(D)J recombinados, como los
genes constantes C y C, ubicados en direccin
3 de los segmentos J. El transcrito primario es
luego procesado de manera tal que: (i) se eliminan por "splicing" los segmentos J que separan
V(D)J de CC y los segmentos gnicos V, situados en direccin 5 del complejo V(D)J
reordenado. Se eliminar adems C o bien C,
para generar por splicing alternativo, dos RNA
mensajeros distintos: uno que contiene V(D)JC y codificar una cadena pesada de tipo mu y
otro que contendr V(D)J-C y codificar la sntesis de una cadena pesada delta; (ii) se agrega
un capuchn de 7-metil guanosina en el extremo
5 del RNA, y (iii) se agrega una cola de poli-A
(de 150 a 200 adeninas), en el extremo 3 de
V(D)J-C y en el extremo 3de V(D)J-C, para
generar mRNA funcionales, que sern transportados desde el ncleo al citoplasma celular proB, para la sntesis de las respectivas cadenas
pesadas H y/o H.
Figura 6-13. Recombinacin de segmentos gnicos V(D)J.

La recombinacin de segmentos gnicos es iniciada por un
complejo enzimtico (recombinasa) que reconoce y corta de
manera especfica una secuencia seal de recombinacion (RSS)
que flanquea los segmentos gnicos que deben reordenarse.
Cada secuencia RSS consta de un heptmero conservado (5
CACAGTG) y un nonmero tambien conservado (5
ACAAAAACC), separados entre s por un espaciador no conservado de 12 23 pares de bases. El reordenamiento se realiza de manera tal que una recombinancin eficiente slo ocurre cuando un segmento que contiene el espaciador 12-RSS,
se reordena con un segmento gnico distinto que contiene el
espaciador 23-RSS (regla 12/23).
es ahora detectado por la maquinaria celular de

reparacin del DNA, que incluye una protena
quinasa DNA dependiente (DNA-PK ), reclutada
en sitio del dao a travs de su interaccin con el
heterodmero regulador Ku70/Ku80, que reconoce los extremos cortados del DNA. La quinasa
DNA-PK es una protena de 450 kDa, codificada
por el gen XRCC7 y perteneciente a la familia de
las fosfatidil inositol (PI) quinasas. Forma tambin parte de la maquinaria de reparacin el producto del gen XRCC4 que se une a la DNA-PK y
acta como una ligasa IV para unir los extremos
cortados del DNA codificante, en los eventos finales de reparacin del DNA. Previo a la reparacin final del DNA, una exonuclesa puede remover nucletidos al azar y la enzima TdT puede
7.2.2. Reordenamiento de cadenas livianas

El reordenamiento de segmentos gnicos
140
Sin ttulo-2
140
5/26/06, 10:25 AM
de cadenas livianas kappa o lambda se realiza

de manera similar al reordenamiento de cadenas pesadas. Primero se reordenan al azar segmentos gnicos V y J, con deleccin del DNA
que separa los segmentos que se recombinan y
mantencin de los segmentos gnicos que estn
en direccin 5 del segmento V y en direccin
3 del segmento J que se recombina. El complejo VJ reordenado, se recombina ahora con un
gen constante C, eliminando todo el DNA que
los separa. Si los segmentos J y C estn asociados en un mismo grupo o cluster, el reordenamiento de un J determinado implicar la
recombinacin, del gen C asociado a ese segmento gnico J.
Reordenado el DNA, se sintetiza ahora un
transcrito primario que ser procesado para generar el RNA mensajero que codifica la sntesis de
una cadena liviana kappa o lambda.
segmento, presenta cierto grado de imprecisin

que contribuye a aumentar la diversidad del repertorio linfocitario. Esto significa que en
linfocitos que utilizan los mismos segmentos
gnicos para generar las cadenas y livianas de su
receptor BCR, el corte impreciso del DNA conducir a variaciones aminoacdicas codificadas por
diferencias en el nmero de nucletidos en la regin de unin de los segmentos gnicos
recombinados (figura 6-14).
El reordenamiento impreciso tambin puede
llevar a reordenamientos no funcionales que estn fuera del marco de lectura, de modo que el
DNA no pueda transcribirse
7.2.4. Diversificacin de la regin N
Linfocitos que utilizan los mismos segmentos gnicos V(D)J para generar las cadenas pesadas y livianas de su receptor, pueden presentar un
BCR con claras diferencias aminoacdicas como
consecuencia de la remocin o agregado de
nucletidos en la regin de unin de esos segmentos V(D)J. El agregado aleatorio de nucletidos
7.2.3. Reordenamiento impreciso del DNA

El reordenamiento de segmentos gnicos y
el corte de las secuencias RSS adyacentes a cada
Figura 6-14. Reordenamiento impreciso del DNA. El punto de corte nucleotdico durante la recombinacin entre segmentos V
y J, puede variar en un margen de varios nucletidos, dando lugar a diferentes secuencias nucleotdicas en el gen activo de la
cadena kappa. El aminocido 96 podra estar codificado por los codones TGG (triptfano), CGG (arginina) y CCG (prolina).
141
Sin ttulo-2
141
5/26/06, 10:25 AM
7.2.6. Exclusin isotpica
que no estn codificados en el DNA germinal es

catalizado por la enzima TdTy conduce a la generacin de la llamada regin N (N: "New
nucleotides") que, en algunos casos, puede incluir
hasta 20 nuevos nucletidos, en la regin de unin
de los segmentos gnicos reordenados.
Durante la reparacin del DNA en la regin
de unin de los segmentos gnicos, pueden tambin transferirse nucletidos desde la hebra no
codificante, a la hebra codificante del DNA, generando las denominadas secuencias nucleotdicas P.
El agregado de nucletidos en la regin de
unin de los segmentos gnicos V(D)J que se
recombinan, puede llevar a reordenamientos no
funcionales que estn fuera del marco de lectura,
generando codones sin sentido o de trmino, en
dos de cada tres reordenamientos.
7.2.5.
El reordenamiento de los genes que codifican inmunoglobulinas es desde luego complejo,

pero es tambin altamente ordenado: primero se
reordenan los segmentos gnicos que codifican
cadenas pesadas y luego, la familia de segmentos
kappa se reordena antes que aqullos que codifican la cadena liviana lambda.
El reordenamiento productivo (paterno o materno) de una cadena liviana kappa implica por lo
tanto exclusin allica materna o paterna del locus
kappa y simultneamente exclusin de los
cromosomas que contienen los segmentos gnicos
que codifican la expresin del isotipo liviano
lambda (exclusin isotpica).
La generacin de genes funcionales que codifiquen la expresin de cadenas pesadas y livianas de una inmunoglobulina depende del fenmeno ensayo-error durante el reordenamiento de segmentos gnicos y depende de diversos elementos
reguladores positivos ("enhancers") y negativos
("supressors"), ubicados entre los segmentos
gnicos que deben reordenarse.
Exclusin allica
El receptor linfocitario BCR, est constituido

por dos cadenas pesadas idnticas y dos cadenas livianas tambin idnticas, implicando que cada linfocito B slo puede expresar el locus paterno o materno, para la sntesis de una cadena pesada o para la
sntesis de una cadena liviana kappa o lambda. La
sntesis de una cadena pesada , como resultado del
reordenamiento exitoso de segmentos gnicos V(D)J
en el alelo de uno de los cromosomas homlogos
(materno o paterno), inhibe o excluye irreversiblemente el reordenamiento gnico en el alelo del otro
cromosoma (exclusin allica).
El reordenamiento gnico en un cromosoma
puede no traducirse en la sntesis de la respectiva
cadena polipeptdica debido a que: (i) durante el
reordenamiento de segmentos gnicos V(D)J se
produce delecin o generacin de codones de trmino de lectura, (ii) el reordenamiento es exitoso
pero no se generan mRNA funcionales, debido a
un procesamiento inadecuado del transcrito primario, y (iii) el reordenamiento gnico es incompleto, puesto que se recombinan algunos segmentos (DH-JH o VH-DH) pero no todos aqullos necesarios para generar un adecuado transcrito primario.
Si la recombinacin V(D)J en un cromosoma
materno o paterno genera un reordenamiento no
productivo, el segundo cromosoma (paterno o
materno, respectivamente) ser reordenado; incluso cabe la posibilidad de corregir combinaciones
aberrantes en un cromosoma recurriendo a un segundo reordenamiento (reordenamiento secundario) sobre el mismo cromosoma.
7.2.7. Cambio de clase de cadenas pesadas

Una estrategia adicional para la diversificacin del repertorio de anticuerpos de un individuo
es, durante la generacin de linfocitos B de memoria, el cambio de clase de la regin constante
de la cadena pesada.
Los linfocitos B vrgenes clonalmente expandidos luego del encuentro con su antgeno especfico sufrirn una diferenciacin que incluye un
proceso de recombinacin gnica que conduce a
un cambio de la regin constante m expresada en
el linfocito virgen original, por una regin constante distinta (, ) en la cadena pesada del
receptor clonotpico del linfocito B de memoria. De esta manera la asociacin de una misma
regin variable (que mantiene la especificidad
por el antgeno), a distintas regiones constantes
pesadas conduce a un cambio en la funcin
efectora de los anticuerpos, que difieren as en
su capacidad para reclutar y activar distintos
mecanismos efectores de la respuesta inmune
humoral (figura 6-15).
La recombinacin gnica de cambio de clase
es gatillada por seales accesorias de coestimulacin linfocitaria (dependientes fundamentalmente de CD40/CD40L y citoquinas) e implica el reconocimiento de secuencias nucleotdicas Ss
142
Sin ttulo-2
142
5/26/06, 10:25 AM
Figura 6-15. Cambio de clase de cadenas pesadas. Cuando un linfocito sintetiza cadenas mu o delta, el gen de las cadenas
pesadas presenta la ordenacin ilustrada en la parte superior de la figura. Las secuencias S intervienen en un proceso de recombinacin
que une la secuencia VDJ a una de los otros genes para la regin constante. Decidida la clase, el DNA se transcribe y el RNA se
procesa, formndose un mRNA especfico para la regin gamma-3, psilon o alfa, segn el ejemplo de la figura.
(Switching sequences) de 1 a 10 kb localizadas

en el extremo 5 de cada segmento o gen constante pesado (excepto en el extremo 5 del gen ).
En general las secuencias de switching tienen la forma (GAGCT)n GGGGT, donde el primer elemento est repetido en tndem de 1 a 7
veces y luego la secuencia completa est repetida
hasta 150 veces en una regin de DNA que ocupa
de 1 a 10 kb y est ubicada entre 1 a 4 kb hacia
arriba del extremo 5 del gen constante. El
reordenamiento implica adems la participacin
de una recombinasa de "switching" que no es sitio-especfica porque la regin Ss puede variar
enormemente en longitud y los cortes en el DNA
no necesariamente ocurren dentro de la regin de
cambio de clase.
Aunque los componentes de la recombinasa
de switching no han sido claramente definidos,
se ha logrado establecer que no incluye los productos de los genes RAG-1 y RAG-2 y que contiene componentes de la maquinaria de reparacin
del DNA celular y un complejo proteico denominado SWAP (Switching Activation Protein) en
el que se han identificado cuatro protenas:
nucleoplasmina, poli-ADP-ribosa polimerasa,
nucleolina y la protena SWAP-70.
El cambio de clase de cadenas pesadas es regulado de manera tal que diferentes citoquinas,
producidas fundamentalmente por linfocitos T
CD4+, promueven el cambio hacia un isotipo
particular de inmunoglobulina.. En humanos por
ejemplo, la interleuquina-4 (IL-4) promueve el
"switching" IgE, mientras que "Transforming
Growth Factor " beta (TGF-) e IL-5 promueven

el cambio hacia IgA. En ratones, el interfern
gamma (IFN-) induce un cambio selectivo hacia
IgG2a, que activa el sistema del complemento y
promueve la fagocitosis de agentes infecciosos
opsonizados por estos anticuerpos.
Por otra parte, dependiendo del sitio de entrada y la distribucin del antgeno en el organismo, puede inducirse una respuesta inmune caracterizada por la sntesis de distintas clase de
anticuerpos. As un antgeno que ingresa a la circulacin sangunea o linftica inducir la sntesis
de distintos isotipos, mientras aquellos que ingresan por va oral o respiratoria activan preferentemente inmunidad de mucosas caracterizada por
la secrecin de IgA. En algunos individuos existe
adems una clara predisposicin gentica (atopia)
a desarrollar alergias como resultado de la sntesis y secrecin de IL-4 e IL-5 que estimulan la
produccin de IgE y la diferenciacin especfica
de eosinfilos, respectivamente.
En el hombre, el ordenamiento de genes para
las regiones constantes de las cadenas pesadas en
direccin 5' a 3' en el cromosoma 14 es el siguiente: mu, delta, gamma (1-4), psilon y alfa (1-2).
En el ratn, el cromosoma 12 presenta el orden:
mu, delta, gamma-3, gamma-1, gamma-2b,
gamma-2a, psilon y alfa (figura 6-16)
7.3. Hipermutacin somtica
El proceso de recombinacin V(D)J genera
un repertorio primario de inmunoglobulinas el que,
143
Sin ttulo-2
143
5/26/06, 10:25 AM
luego del encuentro con el antgeno en los rganos linfoides secundarios, ser enormemente
diversificado en los centros germinales, a travs
de un proceso de mutacin puntual en sus regiones hipervariables o CDRs. El microambiente particular de los centros germinales, no slo favorece la expansin clonal de los linfocitos antgenoespecficos sino que tambin favorece el
"switching" isotpico y la modificacin paratpica
de cadenas pesadas y livianas. Aquellos linfocitos
en los cuales el proceso de hipermutacin genera
un receptor de mayor afinidad por el antgeno,
sern selectivamente seleccionados para continuar
su maduracin en linfocitos B de memoria.
El nivel de mutacin en las regiones
hipervariables de una inmunoglobulina, se ha estimado en 10-3 pares de bases por generacin, lo
cual es seis rdenes de magnitud ms alto que una
mutacin espontnea. Aunque la mayora de estas
mutaciones son cambios puntuales, se ha logrado
establecer que las deleciones representan entre 47% de las mutaciones, mientras las duplicaciones
representan casi el 1% de las modificaciones en
las regiones hipervariables.
Las mutaciones parecen estar de alguna manera asociadas al proceso de transcripcin y confinadas a un dominio de hipermutacin ("HYM
domain") que se extiende 2000 pares de bases (2
kb) hacia abajo, en direccin 5- 3 desde el promotor asociado a cada segmento V que se ha
recombinado. Por otro lado, la hipermutacin no
parece ser un proceso al azar puesto que las transiciones son ms frecuentes que las transversiones
y los nucletidos que contienen Adenina son ms
frecuentemente utilizados que aqullos que contienen Timina.
La figura 6-3 muestra esquemticamente la
diferenciacin celular del linfocito B en presencia del antgeno: activacin, proliferacin celular
y cambio de clase.
Los promotores se ubican inmediatamente

hacia el extremo 5' del segmento V que se va a
transcribir. Su funcin consiste en garantizar transcripciones exactas y especficas, determinando
dnde inicia la transcripcin la ARN-polimerasa
II. La organizacin bsica de todos los promotores de inmunoglobulinas presenta dos secuencias
ricas en adenina (A) y timina (T). Una de ellas
est restringida slo a tejido linfoide y tiene un
elemento temtico (motif) de 8 nucletidos,
ATTTGCAT o la secuencia inversa. La otra secuencia, no es restringida ya que tambin se encuentra en otros linajes celulares, es la denominada TATA box. Mutaciones de estas secuencias
reducen drsticamente la transcripcin de los genes
de Igs.
Los "enhancers" son secuencias de DNA cuya
funcin principal es aumentar la tasa de transcripcin de los genes recombinados. A diferencia de
los promotores, pueden actuar cuando estn ubicados a distancia, ya sea ro arriba (hacia el extremo 5') o ro abajo (hacia el extremo 3'). Se han
identificado en ratones y seres humanos, para locus
de cadenas pesadas y livianas, demostrndose que
algunos han sido muy conservados durante la evolucin; es el caso de los denominados ENHI H, y
ENH3H y ENHi k. Por ejemplo en el ratn, se cree
que una consecuencia de la recombinacin VDJ
es acercar al promotor ubicado hacia 5' de un gen
V al "enhancer" localizado hacia 3 de los segmentos JH, permitiendo un inicio ms eficiente
de la transcripcin.
Se han identificado factores nucleares que son
activados por estmulos externos, y que se unen a
"enhancer" de cadenas pesadas y livianas. Es el
caso del factor llamado NF-B; reconoce un
motif de 10 pares de bases llamado B que es
crucial en la actividad de ENHi , puesto que mutaciones de B la eliminan. Las interacciones de
estos factores proteicos entre s, y con secuencias
de DNA reguladoras, son crticos en la
estimulacin de la transcripcin de genes especficos de inmunoglobulina en linfocitos B.
7.4. Control de la transcripcin de los genes

de inmunoglobulinas
La regulacin de la transcripcin de los genes
de Igs, es uno de los modelos mejor estudiados
para entender la transcripcin de genes que se expresan de manera tejido-especfica y dependientes del estado de desarrollo. El mapeo de los genes
de Igs, revela que cada uno contiene mltiples
elementos regulatorios, promotores y estimuladores ("enhancers"), que son especialmente activos
en linfocitos B.
7.5. Estimacin numrica de la diversidad de

anticuerpos
Diversos mecanismos genticos contribuyen
a la diversidad de los anticuerpos: (i) mltiples
genes V en la lnea germinal, (ii) recombinacin
de los genes VJ en las cadenas livianas y VDJ en
las cadenas pesadas, (iii) imprecisin en la
recombinacin, (iv) diversidad de regin N, (v)
144
Sin ttulo-2
144
5/26/06, 10:25 AM
mutacin somtica, y (vi) combinacin de las cadenas H y L.

El aporte estimado de los mecanismos ms
clsicos a la generacin de la diversidad de los
anticuerpos en el ratn, se resume en la tabla
6-3.
La formacin de un gen activo en la regin
variable de la cadena pesada puede generar un
nmero muy grande de posibilidades genticas.
En el hombre hay 80 genes V en la lnea germinal
y 6 genes J activos. Si se estima que los genes D
se componen de 50 miembros, la recombinacin
somtica VDJ puede generar, aproximadamente, unas 24.000 combinaciones genticas diferentes (80x6x50). Si este nmero se multiplica por
un factor de 100 debido a la flexibilidad
recombinatoria, se obtiene un total de 2.400.000
cadenas diferentes.
En las cadenas livianas de tipo kappa, la unin
de uno de los cientos de genes para regin variables (ms de 150) a uno de los cinco genes J, puede producir hasta 750 genes V activos diferentes
(150x5). Por el mecanismo de flexibilidad
combinatoria, el nmero potencial de recombinaciones VJ puede aumentar unas 10 veces la diversidad, llegando a ser de 7.500 cadenas L diferentes (150x5x10).
Si se considera la potencialidad para generar diversidad que poseen las cadenas H y L, resulta un total posible de 18.000 millones de
anticuerpos (2.400.000 posibles cadenas H x
7.500 posibles cadenas L), generados a partir de
slo aproximadamente 300 segmentos gnicos
distintos, localizados en la lnea germinal.

Los linfocitos B perifricos no expresan simultneamente todo el repertorio. Las clulas B
maduras localizadas principalmente en los
folculos linfoides primarios y secundarios, presentan una vida media de slo algunas semanas,
si no unen antgeno, mueren. Diariamente, la
mdula sea libera a circulacin ms de 5 x 107
linfocitos B, de tal forma que se va renovando el
pool de especificidades.
8. Edicin del receptor linfocitario

La naturaleza aleatoria del reordenamiento
gnico, acoplada a la mayor complejidad proporcionada por la combinacin de distintas cadenas
pesadas y livianas, crea una enorme diversidad
en el repertorio de anticuerpos que, aunque permite el reconocimiento de agentes infecciosos
puede eventualmente contener receptores
autorreactivos. Para evitar una eventual respuesta autoinmune el sistema inmune debe poner en
marcha mecanismos que le permitan inducir tolerancia a antgenos propios: (i) la eliminacin
por apoptosis de las clulas autorreactivas
(delecin clonal), (ii) la inhibicin de su actividad (anergia clonal), y (iii) la edicin o modificacin antgeno-dependiente del receptor
linfocitario BCR, mediante un reordenamiento
secundario de segmentos gnicos, particularmente aqullos que codifican cadenas livianas.
Aparentemente el fenmeno de edicin del re-
Tabla 6-3. Estimacin de la diversidad de anticuerpos en ratn, considerando

algunos de los mecanismos genticos involucrados
Cadenas H
Cadenas L
Cadenas L
Segmentos V
250 - 1000
250
Segmentos J
Segmentos D
12
10.000 - 40.000
1000
Mecanismo
Genes de la lnea germinal
Recombinacin somtica
VxJxD
Asociacin de cadenas H L
H x kappa
1 - 4 x 107
H x lambda
5 - 10 x 104
109 - 1011
Potencial total de diversidad del repertorio
145
Sin ttulo-2
145
5/26/06, 10:25 AM
ceptor linfocitario B, no slo puede ocurrir a nivel

central en el rgano linfoide primario, sino tambin en los rganos linfoides secundarios e implica
la reexpresin de las protenas RAG-1 y RAG-2.
LECTURAS SUGERIDAS
Abbas, A.K.; Lichtman, A.H.; Pober, J.S., Cellular and Molecular Immunology, Fourth Edition,
W.B. Sanders Company, USA, Captulos 3, 9 y
14, 2000.
9. Biosntesis y ensamblaje de las inmunoglobulinas
Bishop, G.A., Hostager, B.S., B lymphocyte activation by contact-mediated interactions with T

lymphocytes. Curr. Opin. Immunol. 13: 278-285,
2001.
Al igual que la mayora de las protenas de

secrecin y de membrana, las cadenas pesadas y
livianas de las inmunoglobulinas son sintetizadas
en ribosomas unidos a la membrana del retculo
endoplsmico rugoso (RER), donde los pptidos
lderes son escindidos cotranslacionalmente.
La asociacin covalente va puentes disulfuro
de cadenas H y L tambin se produce en el RER,
donde adems se agregan a los residuos de
asparragina oligosacridos ricos en manosa. Luego las Igs nacientes se dirigen a las cisternas del
aparato de Golgi, donde los carbohidratos ricos
en manosa se convierten en sus formas maduras
(tipo O-unido y tipo N-unido ) incorporando cadenas laterales de azcares. Finalmente, las molculas de inmunoglobulinas son transportadas a
la membrana plasmtica ancladas en vesculas y
son secretadas por un fenmeno de pinocitosis inversa (figura 6-16).
Otros pptidos que se unen a la estructura
bsica de las inmunoglobulinas son regulados coordinadamente, como en el caso de las cadenas J
(IgA e IgM).
Davies, D.R., Matzger, H., Structural basis of

antibody function, Ann. Rev. Immunol., 1: 87 117, 1983.
Durandy, A., Honjo, T., Human genetic-defects
in class-swith recombinatio (hyper-IgM
sndromes), Curr. Opin. Immunol. 13: 543-548,
2001.
Fagarasan, S., Honjo, T., T-independent Immune
Response: New Aspects of B Cell Biology,
Science 290: 89-92, 2000.
Fearon, D.T., Carroll, M.C., Regulation of B
Lymphocytes Response to Foreign and Self-antigens by the CD19/CD21 Complex, Annu. Rev.
Immunol. 18: 393-422, 2001.
Fugmann, S.D.; Lee, A.I.; Shickett, P.E.; Villey,
I.J.; Schatz, D.G., The RAG Proteins and V(D)J
Recombination: Complexes, Ends and Transposition, Annu. Rev. Immunol. 18: 495-527, 2000.
Grawunder, U., Harfst, E., How to make ends
meet in V(D)J recombination, Curr. Opin.
Immunol., 13: 186-194, 2001.
Hayakawa, K., Ard, R.R., Development and
function of B-1 cells, Curr. Opin. Immunol. 12:
346-353, 2000.
Jacobs, H., Bross, L., Towards an understanding
of somatic hypermutation, Curr. Opin. Immunol.
13: 208-218, 2001.
Figura 6-16. Biosntesis y ensamblaje de las

inmunoglobulinas. Las cadenas H y L de las inmunoglobulinas
son sintetizadas y ensambladas va puentes disulfuro en el RER,
donde adems se agregan oligosacridos ricos en manosa, que
posteriormente maduran en el aparato de Golgi incorporando
otros azcares. Las inmunoglobulinas son transportadas a la
membrana plasmtica ancladas a la membrana de vesculas y
secretadas por pinocitosis inversa.
Kurosaki, T., Functional dissection of BCR signalling pathways, Curr. Opin. Immunol. 12. 276281, 2000.
146
Sin ttulo-2
146
5/26/06, 10:25 AM
Lefranc, M.P., Locus Map and Genomic Repertoire of Human Ig Genes, Immunologist 8: 8087, 2000.
Martn, F., Kearney, J.F., B1 cells: similarities and
differences with other B cell subsets, Curr. Opin.
Immunol. 13: 195-201, 2001.
Matsuuchi, L., Gold., M.R., New views of
BCR structure and organization, Curr. Opin.
Immunol. 13: 270-277, 2001.
Moshous, P. et al., Artemis, a Novel DNA
Double-Strand-Break Repair/V(D)J Recombination Protein, Is Mutated in Human Severe Combined Immune Deficiency, Cell 105: 177-186,
2001.
Mostov, K.E., Transepithelial transport of immunoglobulins, Ann. Rev. Immunol. 12: 63-84, 1994.
Paul, W., Fundamental Immunology, Fourth
Edition, Raven Press, USA, Captulos 3, 4, 5, 6 y
7, 1999.
Roos, A., et al., Human IgA activates the
Complement System Via the Mannan-Binding
Lectin Pathway, J. Immunol. 167: 2861-2868,
2001.
Schamel, W.W.A., Reth, M., Monomeric and oligomeric complexes of the B cell antigen receptor, Immun. 13: 5-14, 2000.
Van Parijs, L., Abbas, A.K., Homeostasis and
Self-Tolerance in the Immune System: Turning
Lymphocytes Off, Science 280: 243-248, 1998.
Wagner S.D., Neuberger M.S., Somatic
hypermutation of immunoglobulin genes, Ann.
Rev. Immunol. 14: 441 - 457, 1996.
147
Sin ttulo-2
147
5/26/06, 10:25 AM
148
Sin ttulo-2
148
5/26/06, 10:25 AM

Captulo 7
RECEPTOR DE LINFOCITOS T Y SEALES
ACCESORIAS DE COESTIMULACIN
Ulises Vergara C. e Ivn Palomo G.
1. Introduccin
2. Estructura del receptor T
2.1. TCR
2.2. TCR
3. Estructura y funcin del complejo
CD3
4. Receptor T y reconocimiento
antignico.
4.1. Linfocitos TCD4, linfocitos
TCD8 y restriccin MHC
4.2. Clulas TNK (Linfocitos
TNK1.1 o NKT).
5. Gentica molecular del receptor T

5.1. Genes de cadenas TCR, TCR,
TCR y TCR
6. Linfocitos T y seales accesorias de
coestimulacin
7. Homeostasis linfocitaria y desarrollo post-tmico de linfocitos T
149
Sin ttulo-2
149
5/26/06, 10:25 AM
150
Sin ttulo-2
150
5/26/06, 10:25 AM
RESUMEN
As como los linfocitos B reconocen el antgeno a travs de receptores BCR, los linfocitos
T lo hacen a travs de receptores TCR. stos son heterodmeros o que reconocen pptidos
antignicos unidos a molculas MHC (de clase I o II) o antgenos glicolipdicos unidos a molculas CD1. Los receptores T se expresan asociados al complejo CD3, que entre otras funciones,
participa en la transduccin de seales de activacin de la clula, una vez que el TCR ha reconocido el antgeno.
El captulo se refiere adems al fenmeno de restriccin MHC. Por otra parte, se describe la
subpoblacin de linfocitos T, denominada clulas TNK, las cuales pueden ser CD4+, CD8+, o
CD4- y CD8-, y presentan marcadores de clulas NK.
En humanos los segmentos gnicos que codifican para las cadenas TCR y TCR se encuentran en el cromosoma 14 y los de las cadenas TCR y TCR en el cromosoma 7. El captulo
revisa en detalle los mecanismos de variabilidad gentica del TCR, los que son similares a los
descritos para BCR. La diversidad del repertorio linfocitario T se ha estimado ms elevada (1018)
que la del repertorio linfocitario B (1014). Los segmentos gnicos que codifican para las cadenas
TCR se reordenan primero que los segmentos gnicos para cadenas TCR; en las clulas B se
reordenan primero los segmentos gnicos de cadenas pesadas y luego aquellos de las cadenas
livianas. Al igual que en el reordenamiento gnico de las inmunoglobulinas, en el reordenamiento
de segmentos gnicos de cadenas del TCR tambin existen los fenmenos de exclusin allica
y exclusin isotpica (T versus T).
Las clulas T, adems del TCR y de las molculas CD4 o CD8, expresan otros receptores de
membrana que resultan importantes en la transduccin de seales accesorias de coestimulacin,,
en la estabilidad de la interaccin linfocito T-clula presentadora de antgeno, o en el reclutamiento, recirculacin y homing linfocitario. Entre estos receptores se encuentran: CD28, CD40L,
CD2, LFA-1 y CD45.
lpidos, cidos nucleicos, haptenos), el repertorio

de receptores linfocitarios T reconoce fundamentalmente protenas antignicas en forma de fragmentos peptdicos unidos a molculas de presentacin MHC ("Major Histocompatibility
Complex") o antgenos glicolipdicos unidos a molculas de presentacin CD1, expresadas en la
membrana de clulas presentadoras de antgeno
(ver captulo 9).
En el repertorio linfocitario B (estimado en
1014 linfocitos B distintos) se distinguen al menos
dos subpoblaciones celulares, denominadas B1 y
B2, que presentan caractersticas estructurales y
funcionales distintas y se generan a diferentes edades durante la ontogenia linfocitaria. La
subpoblacin B1 se desarrolla durante la vida fetal/neonatal, presenta receptores polirreactivos de
baja afinidad, se asocia a la produccin de
anticuerpos naturales T-independientes y se encuentra mayoritariamente en las cavidades
1. INTRODUCCIN
El desarrollo de una respuesta inmune humoral mediada por anticuerpos, se asocia primariamente a los linfocitos B y requiere el reconocimiento antignico por el receptor (BCR) de
linfocitos B especficos. El desarrollo de una respuesta inmune celular en cambio, se asocia a
linfocitos T y requiere el reconocimiento
antignico por el receptor (TCR ,"T cell receptor") de linfocitos T especficos.
Los mecanismos efectores humoral y celular
de respuesta inmune resultan entonces de la seleccin, activacin y expansin clonal de dos poblaciones linfocitarias distintas, que utilizan mecanismos y receptores distintos de reconocimiento antignico. As, mientras el repertorio
linfocitario B puede reconocer directamente
antgenos solubles o de membrana de muy diversa naturaleza qumica (protenas, carbohidratos,
151
Sin ttulo-2
151
5/26/06, 10:25 AM
peritoneal y pleural. La subpoblacin linfocitaria

B2 que se genera a partir de clulas progenitoras
de la mdula sea adulta, constituye la mayor parte del repertorio linfocitario B, su activacin es
linfocito T-dependiente y se encuentra, fundamentalmente, en los rganos linfoides secundarios y
en el torrente sanguneo.
En el repertorio linfocitario T (estimado en
1018 linfocitos T distintos) se distinguen tambin
dos subpoblaciones celulares, denominadas
linfocitos T y linfocitos T, que presentan TCR
con caractersticas estructural y funcionalmente
distintas. Entre los linfocitos T se distinguen
adems 3 subpoblaciones celulares distintas denominadas linfocitos T CD4+, linfocitos T CD8+
y linfocitos TNK. Los linfocitos TNK (denominados tambin clulas NKT: "natural killer T
cells"), corresponden a una subpoblacin
linfocitaria T, que presenta marcadores o receptores propios de clulas NK (natural killer).
reconocern un complejo formado por un fragmento

peptdico alojado en el bolsillo de presentacin de
una molcula MHC, o un antgeno glicolipdico
unido a una molcula CD1. La mayora de los
linfocitos T no reconocen el antgeno en la forma de un complejo MHC-pptido, aunque molculas MHC-Ib no clsicas (como CD1, H-2M3 y
Q de ratn) pueden presentar ciertos antgenos a
esta subpoblacin de LT. Adems algunos linfocitos
T pueden reconocer directamente al antgeno, de
la misma manera como hacen los linfocitos B.
Linfocitos T y T recombinan su DNA y
expresan su receptor clonotpico, en momentos distintos durante la ontogenia linfocitaria tmica. As,
linfocitos T emergen tempranamente desde el timo
y expresan un receptor denominado TCR1 que se
genera antes que el receptor TCR2, cuya expresin
est limitada a los linfocitos T, que maduran ms
tardamente en el rgano linfoide primario. Aunque
el timo es el principal sitio anatmico de desarrollo
linfocitario T, se ha descrito en el intestino la existencia de una lnea celular T distinta, generada
extratmicamente a partir de precursores celulares
presentes en la lmina propia intestinal.
2. ESTRUCTURA DEL RECEPTOR T

En el receptor de un linfocito B se distinguen
dos subunidades, estructural y funcionalmente distintas: el receptor clonotpico representado por una
inmunoglobulina de membrana (responsable del
reconocimiento antignico) y el complejo accesorio Ig/Ig, responsable del transporte y expresin del BCR en la membrana y de la transduccin
de seales de activacin cuando el receptor
clonotpico une especficamente un antgeno.
De manera similar, en el receptor de un linfocito T se describen tambin dos subunidades estructural y funcionalmente distintas: el receptor
clonotpico T o T (responsable del reconocimiento especfico del antgeno) y el complejo accesorio CD3, responsable del transporte y expresin del TCR en la membrana y de la transduccin
de seales de activacin cuando el receptor
clonotpico T une especficamente su antgeno.
El receptor clonotpico TCR es un
heterodmero o formado por dos cadenas
glicoproteicas de 40 a 60 kDa, covalentemente unidas entre s por puentes disulfuro. Como ocurre en
los linfocitos B, este receptor tiene una distribucin clonal, indicando que clones linfocitarios con
distinta especificidad antignica expresarn distintos TCR. De la misma manera, la regin variable
de los componentes clonotpicos del receptor TCR
presenta, como en las inmunoglobulinas, tres regiones CDR que en el caso de los linfocitos T,
2.1. TCR
El 90 a 95% de los clones presentes en el
repertorio linfocitario expresan copias mltiples
de un receptor T, constituido por las glicoprotenas y covalentemente unidas entre s por
enlaces disulfuro (figura 7-1) y no covalentemente
unidas al complejo accesorio CD3 (figura 7-2) (ver
punto 3).
La cadena es una glicoprotena acdica de
40-50 kDa y la cadena es una glicoprotena bsica o neutra de 40-45 kDa. Ambas cadenas tienen
similitud estructural con las cadenas pesadas y livianas de las inmunoglobulinas, presentando una
regin o dominio variable aminoterminal de 102119 aminocidos (V y V) y un dominio constante carboxiterminal de 138 a 170 aminocidos (C
y C, respectivamente). Tal como ocurre con los
linfocitos B, la diversidad y especificidad del TCR
estn dadas fundamentalmente por las regiones
hipervariables o determinantes de complementariedad CDR1, CDR2 y CDR3 de los dominios
V y V, que se asocian y configuran de manera
tal que se forma un nico paratopo T, que presenta por el antgeno una afinidad entre 10-5 y 10-7 M,
en los distintos clones linfocitarios T.
En la regin constante carboxiterminal de las
cadenas T y T (o T y T), se distinguen 4 domi-
152
Sin ttulo-2
152
5/26/06, 10:25 AM
Figura 7-1. Estructura esquemtica del receptor linfocitario T. El receptor TCR est formado por dos cadenas polipeptdicas
covalentemente unidas entre s por puentes disulfuro. Los receptores TCR2 presentan cadenas y, los TCR1 cadenas y . En
cada una de las cadenas y (o /), existe un dominio variable aminoterminal y un dominio constante carboxiterminal, de
manera similar a lo que ocurre en las cadenas pesadas y livianas del receptor linfocitario B (BCR).
nios estructural y funcionalmente distintos: a) un

dominio constante extracelular hacia el extremo
aminoterminal y que forma un loop semejante a
los dominios constantes de inmunoglobulinas; b)
una regin bisagra inmediatamente por fuera de la

membrana plasmtica linfocitaria y que contiene
el enlace disulfuro que une el heterodmero del
receptor clonotpico T; c) un dominio
hidrofbico transmembrana de 20 a 25 aminocidos
y que incluye residuos polares conservados como
arginina y lisina, que permiten la unin no covalente
con residuos de cido glutmico y cido asprtico
negativamente cargados del complejo accesorio
CD3; d) un dominio citoplasmtico carboxiterminal, de 5 a 12 aminocidos.
2.2. TCR
Entre los linfocitos T pueden distinguirse diferentes subpoblaciones celulares que se desarrollan
en momentos distintos de la ontogenia linfocitaria;
expresan distintos dominios variables y tienen
distinta distribucin tisular perifrica. En ratones por
ejemplo, los linfocitos T que se encuentran en la
piel, se desarrollan neonatalmente y expresan regiones variables distintas de los linfocitos T que se
encuentran en vagina, tero y lengua, que se diferencian ms tardamente en el timo.
Figura 7.2. Complejo CD3. El complejo CD3 est constituido por cinco protenas transmembrana denominadas , , , y
(o ). El complejo CD3 est funcionalmente asociado
con la expresin del TCR en la membrana y con la transduccin
de seales de activacin, luego del reconocimiento antignico.
153
Sin ttulo-2
153
5/26/06, 10:25 AM
Los linfocitos T constituyen entre 5 a 10%

del repertorio linfocitario T en sangre perifrica,
bazo y ganglios linfticos de humanos, ratones y
aves; pero pueden representar hasta el 50% de los
linfocitos intraepiteliales en piel y mucosas intestinal y gnitourinaria murina. En ovejas, los
linfocitos T pueden representar hasta el 30%
de los linfocitos T perifricos.
Las cadenas (45-55 kDa) y (40-50 kDa) de
receptor clonotpico T, son glicoprotenas de membrana con estructura similar a las cadenas y del
receptor T. Ambas presentan un dominio variable
aminoterminal y un dominio constante carboxiterminal
que incluye una regin bisagra, un dominio
transmembrana, y una corta cola citoplasmtica. Las
distintas regiones y presentan caractersticas similares a las descritas para las cadenas polipptdicas
del receptor T (figura 7-1).
tintos, dos de los cuales corresponden a los

heterodmeros y . En aproximadamente el
90% de los linfocitos T, el tercer dmero corresponde al homodmero y slo el 10 % de los
linfocitos T perifricos expresan el heterodmero
. Los dominios transmembrana de cada una de
las protenas del complejo CD3 contienen residuos
aminoacdicos negativamente cargados, que se
asocian no covalentemente con residuos
transmembra positivamente cargados de los receptores clonotpicos T o T.
4. RECEPTOR T Y RECONOCIMIENTO
ANTIGNICO
Los linfocitos T MHC-restringidos, expresan receptores clonotpicos que slo reconocen
fragmentos peptdicos presentados por molculas
MHC de clase I o de clase II, en la superficie de
las clulas presentadoras profesionales y otras clulas (figura 7-4). Los linfocitos T CD1-restringidos, expresan en cambio receptores clonotpicos
que slo reconocen antgenos glicolipdicos, asociados a molculas de presentacin CD1, expresadas en la membrana de clulas presentadoras
profesionales (clulas dendrticas, macrfagos y
linfocitos B).
Linfocitos T cittoxicos T reconocen
antgenos MHC clase I-restringidos y son primariamente responsables de la eliminacin de clulas infectadas con virus o bacterias intracelulares.
Para la mayora de las clulas, los antgenos MHC
clase I-restringidos, derivan de protenas sintetizadas en el citoplasma de la misma clula, exis-
3. ESTRUCTURA Y FUNCIN DEL COMPLEJO CD3

Los receptores clonotpicos T y T se expresan asociados de manera no covalente, al complejo accesorio CD3, que representa la subunidad
responsable del transporte y expresin del TCR
en la membrana y de la transduccin de seales
de activacin, luego del reconocimiento antignico
por el receptor clonotpico T.
El complejo CD3 est constituido por cinco
protenas denominadas , , , y de 25, 20, 20,
16 y 22 kDa, respectivamente (figuras 7-3 y 7-4).
Las protenas del complejo CD3 se asocian entre
s de manera tal que se forman tres dmeros dis-
Figura 7-3. Relacin estructural TCR-CD3. La asociacin entre TCR y del CD3 es no covalente. Se produce una interaccin
electrosttica entre aminocidos transmembrana con carga positiva del TCR, con aminocidos negativamente cargados del complejo CD3. Existen enlaces disulfuro entre las cadenas (o ) del receptor T, y entre los homo o heterodmeros formados por las
cadenas y .
154
Sin ttulo-2
154
5/26/06, 10:25 AM
tiendo un acceso limitado de antgenos exgenos

a esta va endgena de procesamiento y presentacin antignica. Sin embargo, existe una
subpoblacin de clulas presentadoras (particularmente clulas dendrticas) que pueden capturar
antgenos exgenos tejido especficos en la periferia y presentarlos, asociados a molculas MHC
de clase I, a linfocitos T citotxicos en los ganglios
linfticos, mediante un mecanismo de presentacin cruzada (cross-priming). Adems, en infecciones con Mycobacterium tuberculosis, se
activan tambin linfocitos citotxicos T CD1restringidos que reconocen glicolpidos
bacterianos y linfocitos citotxicos T que reconocen ligandos fosforilados.
Las clulas dendrticas son clulas de origen
medular que estn normalmente presentes en un
estado inmaduro en epitelios y tejidos perifricos.
Estas clulas dendrticas son capaces de una efectiva fagocitosis de clulas apoptticas y de
endocitosis y macropinocitosis de antgenos solubles, pero no expresan molculas MHC y ligandos
coestimuladores, en los niveles requeridos para la
activacin de linfocitos T. Esta forma de incorporacin antignica por clulas inmaduras, resulta
en un mayor y mejor cross-priming de antgenos
exgenos en el contexto de molculas MHC de
clase I por clulas dendrticas maduras, lo que re-
Figura 7-4. TCR y reconocimiento antignico MHC-clase II-restringido. El receptor linfocitario T, reconoce el
complejo molecular MHC-fragmento peptdico. La molcula
CD4 acta como co-receptor reconociendo una regin conservada, en cadena de la molcula MHC de clase II.
Figura 7-5. Migracin de clulas dendrticas y linfocitos T. Clulas dendrticas inmaduras capturan antgenos en los tejidos
perifricos y migran a los tejidos linfoides convirtindose en clulas maduras que expresan altos niveles de molculas MHC y
ligandos coestimuladores para los linfocitos T. Los linfocitos se movilizan desde el torrente sanguneo a los rganos linfoides
secundarios y luego de su activacin y expansin clonal se diferencian en linfocitos T efectores y linfocitos T de memoria central
( TMC) y linfocitos de memoria efectores (TEM).
155
Sin ttulo-2
155
5/26/06, 10:25 AM
sulta fundamental, tanto para el desarrollo de una

respuesta inmune dependiente de linfocitos T
citotxicos, como para la induccin de tolerancia
a lo propio.
En respuesta a un estmulo inflamatorio (generalmente proporcionado por citoquinas
proinflamatorias o productos bacterianos), las
clulas dendrticas inmaduras capturan material
antignico en la periferia (microorganismos, clulas apoptticas y detritus celulares) e inician su
diferenciacin en clulas maduras que pierden sus
receptores para quimioquinas inflamatorias y aumentan la expresin de receptores para
quimioquinas de tejidos linfoides. Las clulas
dendrticas en maduracin se movilizan hacia los
rganos linfoides secundarios donde culminan su
diferenciacin expresando altos niveles de molculas MHC y ligandos coestimuladores que las
convierten en clulas maduras extraordinariamente
eficientes en la presentacin de antgenos a
linfocitos T vrgenes (figura 7-5). Mediante la secrecin de distintos patrones de citoquinas, las
clulas dendrticas maduras inducen y regulan la
respuesta inmune promoviendo la activacin y
diferenciacin de linfocitos T, la expansin clonal
de linfocitos B, la produccin de anticuerpos y la
estimulacin de la actividad citotxica de clulas
NK y la produccin de IFN-.
Los linfocitos T vrgenes se movilizan desde el torrente circulatorio a las regiones T de los
rganos linfoides secundarios, en busca de
antgenos presentados por clulas dendrticas.
Como consecuencia de su estimulacin, los
linfocitos T proliferan por expansin clonal y se
diferencian en clulas efectoras que expresan receptores que les permiten luego migrar a las reas
de linfocitos B del rgano linfoide secundario o
hacia los sitios de inflamacin en los tejidos
perifricos. An cuando la mayora de los
linfocitos T efectores son de corta vida media,
unos pocos sobreviven durante varios aos como
linfocitos T de memoria que pueden separarse en
dos subpoblaciones de acuerdo a sus habilidades
migratorias: (i) las llamadas clulas efectoras de
memoria (TEM), migran a los tejidos perifricos y
(ii) las denominadas clulas T de memoria central
(TCM), permanecen en circulacin. Esta ltima
subpoblacin expresa receptores de homing similares a los de linfocitos T vrgenes que les permite migrar preferentemente a los rganos
linfoides secundarios donde, luego de una reestimulacin con el antgeno, inducirn el desarrollo de una respuesta inmune secundaria y la
generacin de nuevos linfocitos T de memoria.

Se ha sugerido que la expresin de CCR7,
un receptor para las quimioquinas MIP
("Macrophage Inflammatory Protein") y SLC
("Secondary Lymphoid Chemokine") controla el
"homing" a rganos linfoides secundarios y permite separar los linfocitos de memoria T efectores
(CCR7-) que tienen funcin efectora inmediata y
representan la primera lnea de defensa inmune
especfica, de los linfocitos de memoria centrales
CCR7+ que carecen de funcin efectora inmediata pero patrullan los rganos perifricos y constituyen la lnea defensiva de reserva. Los linfocitos
T efectores CCR7- producen citoquinas efectoras
como IFN-, IL-4, IL-5 o expresan perforina
(linfocitos T citotxicos).
4.1. Linfocitos T CD4, Linfocitos T CD8 y restriccin MHC
Linfocitos T parecen reconocer slo fragmentos peptdicos presentados en asociacin con
molculas MHC o fragmentos glicolipdicos presentados en asociacin con molculas CD1, en la
superficie de clulas presentadoras profesionales.
Este fenmeno se explica como resultado del proceso de educacin tmica que permite que durante la diferenciacin en este rgano linfoide primario, precursores linfocitarios T sean positivamente seleccionados en funcin de su capacidad
para reconocer antgenos asociados a molculas
de presentacin antignica en la membrana de
clulas del epitelio tmico.
La mayora de los linfocitos perifricos T,
son linfocitos MHC restringidos que expresan el
correceptor CD4 o el correceptor CD8, y han sido
positivamente seleccionados en funcin de su capacidad para reconocer slo fragmentos peptdicos
asociados a molculas MHC de clase I (linfocitos
T CD8+) o fragmentos peptdicos asociados a
molculas MHC de clase II (linfocitos T CD4+)
(figura 7-6).
El correceptor CD4 es una glicoprotena
transmembrana de 55 kDa que se expresa en aproximadamente el 65% de los linfocitos perifricos T;
reconoce una regin conservada (2) de la molcula MHC de clase II y transduce seales accesorias de coestimulacin linfocitaria T.
El correceptor CD8 es un heterodmero o
un heterodmero , de 78 kDa, que se expresa
en aproximadamente el 35% de los linfocitos T
de sangre y tejido linfoide perifrico, reconoce una
regin conservada (3) de la molcula MHC de
156
Sin ttulo-2
156
5/26/06, 10:25 AM
T restringidos por molculas MHC de clase Ib

y linfocitos T y T restringidos por molculas
CD1 que reconocen ligandos bacterianos altamente conservados.
Durante mucho tiempo se pens que los
linfocitos T slo reconocan fragmentos peptdicos
presentados por molculas MHC de clase I o de
clase II. Sin embargo, el descubrimiento de las
molculas CD1 que presentan ligandos
glicolipdicos, ha permitido la identificacin de
subpoblaciones linfocitarias T CD1-restringidas: TCD4+, TCD8+, TCD4-, CD8- (TDN o doble negativos) y de linfocitos T NK1.1 (clulas
TNK o NKT), que constituyen poblaciones celulares heterogneas presentes en diferentes tejidos.
Las molculas CD1 se expresan predominantemente en clulas presentadoras profesionales e
incluyen 4 molculas distintas en humanos (CD1a,
CD1b, CD1c y CD1d) y slo una en ratones
(CD1d). Las molculas son similares a las molculas MHC de clase I, estn no covalentemente
unidas a la 2-microglobulina, pero su bolsillo de
presentacin antignica es ms estrecho y ms
profundo que el de las molculas MHC y une su
ligando glicolipdico mediante interacciones
hidrofbicas.
Las molculas CD1a, b y c (grupo I) se expresan en timocitos corticales y clulas
dendrticas, mientras las molculas CD1d (grupo II) se encuentran principalmente en clulas
epiteliales, timocitos corticales, hepatocitos y
clulas presentadoras de antgeno profesionales (clulas dendrticas, macrfagos y linfocitos
B). Glicolpidos como fosfatidil inositol
mansido (PIM), lipoarabino manan (LAM),
cido miclico y hexosil-1-fosfo-isoprenoide,
son presentados a linfocitos T, por molculas CD1 del grupo I (tabla 7-1). Tanto en humanos como en ratn, se ha descrito que las molculas CD1d presentan -galactosil ceramida
existente en esponjas marinas.
Figura 7-6. Estructura del receptor de la clula T, complejo CD3 e interaccin con el complejo MHC-pptido.
clase I y transduce seales accesorias de

coestimulacin linfocitaria T, luego de su
interaccin con la molcula MHC de clase I.
Los linfocitos T CD4+ expresan funciones
de colaboracin o helper por medio de
citoquinas que activan macrfagos y/o linfocitos
B, mientras los linfocitos T CD8+ actan primariamente como clulas citotxicas que destruyen
las clulas infectadas.
Los linfocitos T CD4+ MHC de clase II-restringidos desempean un rol muy importante en
la inmunidad protectora contra bacterias y
protozoos, mientras los linfocitos T CD8+ MHC
de clase I-restringidos resultan fundamentales en
la respuesta inmune contra infecciones virales.
Sin embargo, la respuesta inmune contra bacterias intracelulares involucra la participacin no
slo de linfocitos T CD4+ MHC-II restringidos,
sino tambin de diversas subpoblaciones
linfocitarias entre las que se encuentran clulas T
CD8+ MHC-I restringidos, linfocitos T que
reconocen fosfoligandos en ausencia de clulas
presentadoras de antgeno y finalmente, linfocitos
4.2. Clulas TNK

Las clulas TNK (linfocitos T NK1.1 o
NKT) corresponden a una subpoblacin
heterognea de linfocitos T, que presentan marcadores propios de las clulas NK o natural killer
e incluye clulas TNK CD4+, clulas TNK/CD8+
y clulas TNK DN (CD4- CD8-) que presentan
distinta distribucin tisular (timo, hgado, bazo,
ganglios linfticos y mdula sea). El marcador
NK1.1 corresponde a NKRP1C o CD161.
157
Sin ttulo-2
157
5/26/06, 10:25 AM
Tabla 7-1. Antgenos lipdicos presentados por molculas CD1 humanas

Antgeno
Linfocitos T
Molcula CD1
Glicolpidos bacterianos
Lpidos no definidos
Lipoarabinomanan (LAM)
Glucosa monomicolato
Fosfatidil inositol (PI)
Hesoxil 1- fosfoisoprenoide
T
T
T
T
T
CD1a
CD1b
CD1b
CD1b
CD1c
Glicolpidos autlogos
Lpidos no definidos
Ganglisidos cerebrales
Lpidos no definidos
Lpidos no definidos
T
T
T y T
TNK
CD1a
CD1b
CD1c
CD1d
Otras molculas
A-Galactosil Ceramida
TNK
CD1d
La diversidad de su receptor T es bastante restringida y limitada a la expresin de unas

pocas cadenas TCR (V8-2, V7, V2 y
V14J281 en el ratn y de sus equivalentes
V11 y V24JQ en humanos), que resultan
CD1d restringidas. La proporcin de clulas TNK
vara en diferentes tejidos y representan
subpoblaciones funcionalmente distintas en el
hgado (30-50%), mdula sea (20-30%) y timo
(10-20%), y son menos frecuentes en rganos
como bazo (3%), ganglios linfticos (0,3%), sangre perifrica (4%) y pulmn (7%).
Las clulas TNK CD4+ y TNK DN parecen
ser de origen tmico, puesto que no se desarrollan
en ratones atmicos o en ratones neonatalmente
timectomizados. Las clulas TNK CD8+ en cambio, parecen tener un origen extratmico, puesto
que se encuentran normalmente en la periferia en
ratones timectomizados neonatalmente.
Las clulas TNK constituyen una
subpoblacin linfocitaria heterognea en la que
es posible encontrar clulas CD1-restringidas y
clulas MHC-restringidas (estas ltimas expresan
TCR de mayor diversidad), que tienen la capacidad de secretar diferentes citoquinas (IL-4, IFN, TNF), dependiendo del microambiente tisular.
La produccin de altos niveles de IL-4 e IFN-,
sugieren un rol regulador en el desarrollo de las
respuestas Th1 y Th2 dependientes. El desarrollo
de una respuesta Th2 sera estimulada a travs de
la secrecin de IL-4. El desarrollo de una respuesta

Th1 sera inhibida mediante la secrecin de IL-4,
IL-10 y TGF-. Las clulas TNK tambin producen altos niveles de quimioquinas, tales como
MIP- y MIP-, lo que concuerda con su capacidad para reclutar monocitos, clulas dendrticas
mieloides y linfocitos T convencionales, e iniciar una respuesta inmune adquirida. Finalmente
la actividad efectora citotxica de las clulas TNK,
es mediada por perforina y granzimas.
Se desconoce la influencia de molculas coestimuladoras y otros receptores asociados a las
clulas T NK y aunque es claro que el receptor
TCR de clulas TNK responde a molculas CD1d,
el ligando natural de CD1d es todava desconocido. La mayora de las clulas TNK reconoce molculas CD1d asociadas a un ligando hidrofbico,
probablemente glicolipdico y de naturaleza desconocida. Sin embargo, se ha sugerido que podra
ser glicofosfatidil inositol (GPI) y/o fosfatidil
inosito mansido (PIM). La molcula -galactosil
ceramida derivada de esponjas marinas se une a
molculas CD1d, estimula linfocitos TNK CD4+
y TNK DN y parece imitar al ligando natural de
CD1d en humanos y ratones.
Las clulas TNK tienen tambin la habilidad
de responder no slo a ligandos especficos derivados de agentes patgenos sino tambin a
ligandos lipdicos autlogos derivados de clulas
tumorales y parecen desempear un rol impor-
158
Sin ttulo-2
158
5/26/06, 10:25 AM
tante en la regulacin de la respuesta inmune a

clulas tumorales y agentes patgenos y en la mantencin de la tolerancia a lo propio.
cadena TCR) y, un segmento gnico C

(codifica la regin constante TCR).
Familia TCR: incluye segmentos gnicos

V, D, J y C.
5. GENTICA MOLECULAR DEL RECEPTOR T
Familia TCR: incluye segmentos gnicos V,

J y C.
El TCR es generado a partir de la

recombinacin somtica de segmentos gnicos,
durante un proceso de diferenciacin que permite que cada linfocito T o T est provisto de
copias mltiples de un receptor clonotpico nico
que no est codificado en el DNA germinal de la
clula precursora.
La organizacin genmica de los TCR es similar a la organizacin de las inmunoglobulinas y
contiene tanto segmentos gnicos V(D)J que codifican la regin variable, como segmentos gnicos
C, que codifican la regin constante de cada cadena del receptor clonotpico. De esta manera el
repertorio de linfocitos T (estimado en 10 18
linfocitos T distintos), es generado tambin al azar
por reordenamiento gnico V(D)J y, la variabilidad TCR, generada por la recombinacin de distintos segmentos gnicos, ser tambin enormemente diversificada por: (i) corte impreciso de
los segmentos gnicos que se recombinan, (ii)
agregado de nucletidos al azar en los sitios de
corte y unin de los distintos segmentos gnicos,
(iii) combinacin al azar de cadenas TCR y
TCR (o TCR y TCR), y (iv) edicin del receptor T o T.
Familia gnica TCR: incluye segmentos V,

D, J y C.
En humanos, los segmentos gnicos que codifican las cadenas TCR y TCR, se encuentran
en el cromosoma 14 (en regin alejada del locus
para cadenas pesadas de Inmunoglobulinas (Ig),
mientras los segmentos gnicos de cadenas TCR
y TCR, se encuentran en el cromosoma 7. En ratones, los segmentos gnicos que codifican las cadenas TCR y TCR, se encuentran en el
cromosoma 14, mientras los segmentos gnicos
que codifica las cadenas TCR y TCR, se encuentran en los cromosomas murinos 6 y 13, respectivamente.
El repertorio genmico de cadenas TCR
ocupa 1000 kilobases en el brazo largo del
cromosoma 14 humano e incluye 54 segmentos
gnicos variables V en posicin centromrica,
61 segmentos gnicos de unin J y, un nico segmento constante C, en posicin ms telomrica.
Como ocurre en el repertorio genmico de las
inmunoglobulinas, cada segmento TCR variable,
est precedido de una secuencia lder o seal (L),
en posicin 5(figura 7-7).
Los segmentos gnicos VJ, situados en posicin 5, se encuentran separados de C, por una
regin genmica que contiene los segmentos
gnicos de la cadena TCR.
El potencial de este repertorio genmico consiste de 41 a 47 segmentos funcionales V (que
pertenecen a 35-37 subgrupos o subfamilias) y 50
segmentos funcionales J. Entre los segmentos variables se encuentran adems 5 segmentos designados TCRV/V que pueden reordenarse con J
o con D y pueden, por lo tanto, utilizarse en la
generacin de genes TCR o TCR.
5.1. Genes de cadenas TCR, TCR, TCR y

TCR
En el DNA germinal de un vertebrado, no
existen genes que codifiquen la sntesis de los componentes polipeptdicos del receptor clonotpico
TCR. Al contrario, estos genes deben ser generados o ensamblados, por una recombinasa sitio-especfica que reordena segmentos gnicos V(D)J,
distintos de aqullos utilizados para ensamblar los
genes que codifican las cadenas pesadas y livianas del receptor de linfocitos B (ver captulo 6).
Los segmentos gnicos que codifican las distintas regiones o dominios de las cadenas TCR,
TCR, TCR o TCR, se encuentran agrupados
en cuatro grupos o familias gnicas distintas:

En humanos, el repertorio genmico de cadenas TCR ocupa 620 kb en el brazo largo del
Familia TCR: incluye segmentos gnicos

V y J (codifican la regin variable de la
159
Sin ttulo-2
159
5/26/06, 10:25 AM
Figura 7-7. Distribucin de los segmentos gnicos TCR y TCR. En el cromosoma 14 humano y 14 murino, se encuentran el
locus que contiene los segmento gnicos V y C asociado a segmentos J y D. Los segmentos V y J, localizados en
posicin 5, estn separados de C por el locus TCR.
cromosoma 7 y consiste de 62-65 segmentos

gnicos variables V y de segmentos D, J y C
que se encuentran separados en dos grupos
(clusters) distintos. El primer grupo, situado en
posicin 5, contiene un segmento D1, seis segmentos J1 (J11 a J16) y un segmento C1. El
segundo grupo, situado en posicin 3 con respecto al primero, incluye un segmento D2, ocho segmentos J2 y un nico segmento C2.
Los segmentos V se encuentran en posicin
ms telomrica, pero existe un segmento gnico
V30, en orientacin invertida con respecto a la
transcripcin, localizado en posicin 3, ms
centromrico que el segundo "cluster"
D2J2C2. El repertorio genmico potencial
consiste de 39-46 segmentos V funcionales, que
pertenecen a 23 subgrupos o subfamilias. Cada
segmento J codifica 3-5 aminocidos, mientras
los segmentos, segmentos D, codifican de 15 a
17 residuos aminoacdicos. Cada segmento varia-
ble precedido de un exn lder (L) o seal (figura

7-8).
Se han descrito adems, 6 segmentos V
hurfanos, localizados en el brazo corto del
cromosoma 9 humano.
El locus TCR humano ocupa 165 kb en el brazo
corto del cromosoma 7 y consiste de 12-15 segmentos gnicos variables V, en posicin ms
centromrica y dos "clusters" de segmentos CJ.
El primer grupo contiene tres segmentos J1 y un
nico segmento C1. El segundo grupo, situado
en posicin ms telomrica, contiene dos segmentos J2 y un segmento a C2. El repertorio potencial incluye 4-6 segmentos V que se agrupan en
dos subfamilias y los dos "clusters" DJC (figura 7-9).
160
Sin ttulo-2
160
5/26/06, 10:25 AM
Figura 7-8. Distribucin de segmentos gnicos TCR. En los cromosomas 7 humano y 6 murino, se encuentran distribuidos los
segmentos V y los dos conjuntos C con sus respectivos segmentos gnicos J y D.
se agregan, finalmente, los 5 segmentos TCRV/

V (mencionados en 5.1.1.), que pueden comportarse como funcionales o como seudogenes.

En humanos el locus TCR ocupa una regin
de 60 kb localizada dentro del locus TCR y contiene un cluster formado por un segmento gnico
V (V3), tres segmentos D, cuatro segmentos
JD y un nico gen C (figura 7-7).
El locus TCR contiene adems un segmento gnico V (V3), localizado hacia abajo en posicin 3 del gen C y, un segmento gnico variable V1, localizado 360 kb hacia arriba en direccin 5, entre los segmentos V. Todos los segmentos gnicos TCR/D son funcionales y a ellos

Al igual como ocurre en las clulas B
inmaduras, respecto a las inmunoglobulinas, en
las clulas T precursoras los segmentos gnicos
V(D)J y C que codifican las cadenas TCR, se encuentran en una configuracin germinal no funcional y deben reordenarse por recombinacin sitio-especfica, para generar la enorme diversidad
Figura 7.9. Familia de segmentos gnicos TCR murino y humano.
161
Sin ttulo-2
161
5/26/06, 10:25 AM
del repertorio linfocitario T, durante un proceso

regulado de maduracin y educacin tmica.
La recombinacin de segmentos gnicos
V(D)J, es fundamental en el desarrollo del sistema inmune de los vertebrados e implica la participacin de una recombinasa que reconoce y corta
secuencias especficas de recombinacin (12-RSS
y 23-RSS) (figura 7-10) y de una compleja maquinaria de reparacin del DNA que incluye una
protena quinasa DNA-dependiente (DNA-PK),
las protenas Ku/Ku80 y Artemisa, la DNA ligasa
IV (ver captulo 6), y diversas otras protenas
como Xrcc, histona H2AX y el complejo Mre11/
rad50/Nbs1. Deben adems existir diversos factores de remodelacin de la cromatina, que limitan el acceso a las secuencias de recombinacin
RSS de modo tal que las regiones genmicas que
contienen los segmentos V(D)J y C, de Ig o TCR,
slo estn disponibles en ciertos tipos celulares y
en ciertos estados de desarrollo, segn el
microambiente tisular.
El orden en el reordenamiento, es similar a
como ocurre con las inmunoglobulinas y tambin
implica el cumplimiento de la regla 12/23 y la
eliminacin o deleccin de todos los segmentos
que separan a aqullos que deben recombinarse
(ver captulo 6). As, en las cadenas TCR y
TCR, primero se reordena un segmento gnico
de diversidad D, con un segmento de unin J, eliminando toda la secuencia nucleotdica que los
separa. Luego uno de los segmentos variables V,
se recombina con el complejo DJ ya reordenado,
eliminando los segmentos gnicos que los separa.

Sin embargo, dada la existencia de "clusters" DJC,
la seleccin de un determinado segmento D obliga a la recombinacin con los segmentos J y C,
incluidos en el mismo "cluster".
El DNA ya reordenado, ser luego utilizado
como molde para la sntesis de un transcrito primario, el que una vez procesado dar origen al
correspondiente mRNA que codifica la cadena
TCR (figura 7-11).
La maquinaria de recombinacin de segmentos gnicos es siempre la misma, tanto en linfocitos
B como linfocitos T. Sin embargo, slo las Ig se
reordenan en linfocitos B, y slo cadenas TCR se
reordenan en los linfocitos T. Adems en cada una
de estas lneas celulares existe un orden preciso
de reordenamiento de modo tal que las cadenas
pesadas se reordenan siempre antes que las cadenas livianas del BCR y las cadenas TCR se
reordenan siempre antes que las cadenas TCR
en los linfocitos T.
La diversidad potencial de los TCR se estima
mayor que en las inmunoglobulinas y ello obedece, fundamentalmente a una mayor diversificacin
de las regiones N (generada por agregado de
nucletidos al azar) y P (generada por transferencia de nucletidos desde la hebra no codificante del
DNA. Adems, a diferencia de lo que ocurre con
las inmunoglobulinas, los genes de TCR ya
reordenados no sufren hipermutaciones en sus
CDRs, que conduzcan a cambios en la funcin o
afinidad del receptor, durante la respuesta inmune.
Figura 7-10. Secuencia seal de recombinacin (RSS) y segmentos gnicos V(D)J. (A) Heptmero, espaciador y nonmero de
las secuencias RSS. (B) Los diversos reordenamientos de los segmentos gnicos V(D)J que generan los genes que codifican las
cadenas TCR, TCR, TCR y TCR. Las secuencias 12-RSS se muestran con tringulos abiertos y las secuencias 23-RSS con
tringulos cerrados.
162
Sin ttulo-2
162
5/26/06, 10:25 AM
Figura 7-11. Reordenamiento gnico y transcripcin de la cadena TCR. El proceso se inicia con el reordenamiento de un
segmento gnico D y un segmento J. Luego, el complejo D-J ya reordenado, se recombina con un segmento V. Posteriormente, el transcrito primario ser procesado para generar el mRNA que codifica la cadena TCR.
Finalmente, slo uno de los dos loci de cada

una de las cadenas TCR, TCR, TCR o
TCRD que existen en el DNA germinal, ser
funcionalmente reordenado y expresado en un
linfocito T maduro. De esta manera, al igual
que en los genes de inmunoglobulinas, el fenmeno de exclusin allica impide que se
reordenen ambos alelos de un mismo gen. As
por ejemplo, slo cuando del reordenamiento
de segmentos gnicos en uno de los
cromosomas homlogos, se obtiene un gen
TCR no funcional (que no puede ser transcrito
o el transcrito no puede ser traducido) se inicia
el reordenamiento de segmentos en el otro
cromosoma homlogo. Si de ambos alelos se
obtienen genes no funcionales, se induce
apoptosis de la clula T en diferenciacin. El
fenmeno de exclusin isotpica que ocurre entre las cadenas livianas y de las
inmunoglobulinas, es tambin vlido para los

genes TCR, puesto que un reordenamiento
TCR excluye todo reordenamiento TCR y
viceversa.
6. LINFOCITOS T Y SEALES ACCESORIAS DE COESTIMULACIN

Los linfocitos T, aparte del receptor TCR y de
los correceptores CD4 y/o CD8, expresan otros
receptores de membrana que, aunque no reconocen antgenos, resultan fundamentales en la
transduccin de seales accesorias de activacin celular (molculas accesorias), en la estabilizacin de la interaccin linfocitoT-clula
presentadora de antgeno (CPA), o en el reclutamiento, recirculacin y homing linfocitario (molculas de adhesin) (figura 7-12).
163
Sin ttulo-2
163
5/26/06, 10:25 AM
Figura 7-12. Activacin de linfocitos T y seales accesorias de coestimulacin. Adems del receptor TCR, del complejo CD3
y de los correceptores CD4 o CD8, los linfocitos T expresan otros receptores de membrana (CD2, CD28, LFA-1, CD40L, etc.),
que resultan fundamentales en la transduccin de seales accesorias de coestimulacin, en la estabilizacin de la interaccin
linfocito T-clula presentadora o en el reclutamiento, recirculacin y homing linfocitario.
En ausencia de seales accesorias de

coestimulacin, el reconocimiento antignico y la
transduccin de seales a travs del complejo
TCR-CD3, no conduce a activacin celular. Al
contrario, seales aisladas transducidas por TCRCD3, conducen a anergia celular y/o apoptosis.
Las seales adicionales requeridas para la activacin de linfocitos T, son fundamentalmente proporcionadas por molculas coestimuladoras expresadas en la membrana de clulas vecinas o de clulas presentadoras de antgeno y por mediadores
solubles como citoquinas.
Entre las molculas accesorias expresadas en
la superficie de linfocitos T y que unen molculas coestimuladoras, se encuentran:
CD40L (CD154), que se expresa en linfocitos

T activados y une su ligando CD40 (constitutivo en la CPA).
CD2 (LFA-2), que une su ligando LFA-3
(CD58 en humanos) CD48 en ratn.
LFA-1 ("Leukocyte Function Associated
Antigen-1") que une su ligando ICAM
("Intercellular Adhesin Molecule-1" o
CD54).
CD45, una tirosn fosfatasa que une su ligando CD22. La isoforma CD45RA se expresa
en linfocitos T en reposo y CD45RO en
linfocitos T activados.
Adems, molculas como ICOS ("Inducible

costimulator", similar a CD28 pero no une CD80
o CD86), citoquinas (IL-1, IL-2 , IL-4, IL-6, IL12, TNF) y diversas molculas de adhesin
(integrinas 1 y 2, selectinas), tambin proporcionan seales secundarias o terciarias que facilitan o promueven la activacin y/o diferenciacin
CD8 y CD4, que se unen a molculas MHC

de clase I y II, respectivamente,
CD28 que une sus ligandos B7.1 (CD80) y
B7.2 (CD86), expresados en clulas presentadoras de antgeno (CPA) activadas.
164
Sin ttulo-2
164
5/26/06, 10:25 AM
de distintas subpoblaciones de linfocitos T.

Sin embargo, no todas las seales proporcionadas por citoquinas o molculas de superficie,
proporcionan estmulos coactivadores. As por
ejemplo, IL-10 y TGF- ("transforming growth
factor-"), a menudo inhiben diversas poblaciones linfocitarias T, B y NK. De manera similar,
la unin a CTLA-4 (CD152, una molcula
homloga a CD28 y que se expresa en la superficie de linfocitos T activados), a sus ligandos CD80
o CD86, tambin proporciona seales de inhibicin linfocitaria.
El efecto de las seales accesorias de
coestimulacon va a depender de diversos factores; entre stos se encuentran: el nmero de complejos MHC-pptido que inician las seales de
transduccin, la afinidad, avidez y duracin de esa
interaccin y el nivel de molculas
coestimuladoras que amplifican las seales iniciales de activacin.
Clulas dendrticas y linfocitos B, expresan
constitutivamente molculas MHC, CD40,
ICAM-1, LFA-3 y son bastante eficientes en la
captura y procesamiento de antgeno. Sin embargo, slo una vez activadas (y como consecuencia
de la expresin de altos niveles de las molculas
coestimuladoras CD80 y CD86 y de molculas de
presentacin MHC), se convertirn en potentes
clulas estimuladoras de linfocitos T. La maduracin de la clula presentadora de antgeno, aumenta notablemente los niveles de CD80 y CD86,
que se coexpresan en microdominios de membrana junto a molculas MHC, lo que favorece la
efectividad de las seales transducidas por TCR/
CD3 y CD28. La unin de CD28 a CD80 o CD86
gatilla la activacin de linfocitos T, la expresin
de CD40L que potencia la activacin y la sntesis
de IL-2 y sus receptores (IL-2R), todo lo cual conduce a la proliferacin y diferenciacin linfocitaria
(figura 7-12). En una fase posterior, las molculas
CD80 y CD86 las puede modular la diferenciacin Th1/Th2 e inhibir la respuesta celular T, ya
sea directamente mediante la unin a su ligando
CLA-4 (expresado en la fase final de activacin
de los linfocitos) o indirectamente promoviendo
la generacin de clulas T reguladoras.
distintos clones linfocitarios estn bajo control

homeosttico. Por lo tanto, nuevos linfocitos que
son continuamente generados en los rganos
linfoides primarios y secundarios (linfocitos vrgenes y linfocitos activados/linfocitos memoria,
respectivamente) deben competir con los linfocitos
residentes en los distintos rganos y tejidos y mantener la diversidad del repertorio linfocitario.
Luego del encuentro con el antgeno, los
linfocitos T vrgenes se convertirn en clulas T
efectoras o en clulas T de memoria, que se distinguirn de los linfocitos vrgenes en funcin del
patrn de molculas de adhesin y de receptores
para citoquinas que expresan en su membrana.
Como la homeostasis de linfocitos vrgenes y de
memoria se regula independientemente, nuevos
linfocitos T de memoria reemplazarn slo a otros
linfocitos T de memoria; de esta manera el nmero de linfocitos vrgenes y de memoria permanecer relativamente constante y equivalente en la
periferia.
En los ltimos aos se ha establecido que an
en ausencia de antgeno, la sobrevida post-tmica
de los clones linfocitarios T, es un proceso activo
y requiere la interaccin continua de linfocitos vrgenes perifricos con molculas MHC para las
cuales los linfocitos fueron positivamente seleccionados en el timo. En ratones por ejemplo,
linfocitos T CD8 MHC de clase I (H-2Db)-restringidos sobrevivirn sin proliferar si se transfieren
pasivamente a ratones de haplotipo H-2Db, pero
no sobrevivirn si se transfieren a ratones de
haplotipo H-2Dk que expresan molculas MHC de
clase I distintas. Si la transferencia es hacia ratones que expresan bajos niveles de molculas H2Db de clase I, sobrevivir slo una pequea fraccin de los linfocitos T CD8 adoptivamente transferidos y esta fraccin ser proporcional al nivel
de expresin de estas molculas MHC de clase I
en el individuo receptor.
Aunque el antgeno no parece ser un
prerrequisito para la sobrevida de los linfocitos
de memoria, el tamao de un clon linfocitario
antgeno-especfico puede disminuir en ausencia
del antgeno, simplemente por mecanismos
homeostticos. Se ha sugerido, por lo tanto, que
la vida media de los linfocitos memoria est determinada por la frecuencia con que los linfocitos
se encuentran con el antgeno y del espacio disponible para su sobrevida en el repertorio linfocitario
T. As, la memoria inmunolgica contra un
antgeno que se encuentra una nica vez, ser relativamente corta, mientras que el encuentro fre-
7. HOMEOSTASIS Y DESARROLLO POSTTMICO DE LINFOCITOS T

Una de las caractersticas del sistema inmune es que el nmero total y la distribucin de los
165
Sin ttulo-2
165
5/26/06, 10:25 AM
cuente con un antgeno ser suficiente para mantener o aumentar el tamao clonal de los linfocitos
T antgeno-especficos, generando una memoria
inmunolgica casi indefinida, debido a la generacin continua de nuevas clulas de memoria.
El compartimiento linfocitario T puede ser
mantenido o reemplazado por nuevas clulas que
emergen desde el rgano linfoide primario o bien
por repoblamiento a partir de la expansin
perifrica de clones linfocitario T maduros, sobre
todo cuando la actividad tmica disminuye como
consecuencia de la edad.
Lanzavecchia A. and Sallusto F., Dynamics of T

lymphocyte Responses: Intermediates, Effectors
and Memory Cells, Science 290: 92-97, 2000.
Lefranc, M.P., Locus maps and genomic repertoire of the human T-cell receptor genes, Immunologist 8: 72-80, 2000.
MacDonald H.R., Radke F., Wilson A., T cell fate
specification and / lineage commitment,
Curr. Opin. Immunol. 13: 219-224, 2001.
LECTURAS SUGERIDAS
Martin F. and Kearney J.F., B1 cells: similarities

and differences with other B cell subsets. Curr.
Opin. Immunol. 13: 195-201, 2001.
Burdin, N. and Kronenberg M., CD-1 mediated

immune response to glycolipids, Curr. Opin.
Immunol. 11: 326-331, 1999.
Matsuuchi L. and Gold M.R., New views of BCR

structure and organization, Curr. Opin. Immunol.
13: 270-277, 2001.
Fagarasan S. and T. Honjo. T-Independent Immune Response: New Aspects of Cell Biology,
Science 290: 89-92, 2000.
Nemazee, D., Receptor selection in B and T Lymphocytes, Annu. Rev. Immunol. 18: 19-51, 2000.
Ravecht J.V. and Lanier L.L., Immune Inhibitory
Receptors, Science 290: 84-89, 2000.
Freitas A.A. and Rocha B., Population Biology

of Lymphocytes: The flight for survival, Annu.
Rev. Immunol 18: 83-111, 2000.
Saito, H. et al., Role of gut cryopatches in early

extrathymic maturation of intestinal intraepithelial
T cells, J. Immunol. 164: 3616- 3626, 2000.
Fugmann S.D. et al., The RAG Proteins and

V(D)J Recombination: Complexes, Ends and
Trasposition, Annu. Rev. Immunol. 18: 495-527,
2000.
Sallusto, F. et al., Two subsets of memory T lymphocytes with distinct homing potential and effector functions, Nature 401: 708-712, 1999.
Gellert, M., V(D)J Recombination: RAG Proteins, Repair Factors, and Regulation, Annu. Rev.
Biochem, 71: 101-132, 2002.
Schaible, U.E., Kaufmann, S.H.E. CD1 and CD1restricted T cells in infection with intracellular
bacteria, Trends Microbiol. 8: 419-425, 2000.
Godfrey, D.I., et al., NKT cells: facts, functions

and fallacies, Immunol. Today 21: 573-583, 2000.
Von Adrian, U.H, Mackay, C.R. T-cell function

and migration, NEJM. 343: 1020-1034, 2000.
Grauwunder U. and Harfst E., How to make ends

meet in V(D)J recombination, Curr. Opin.
Immunol. 13: 186-194, 2001.
Wilson, S.B., Byrne, M.C. Gene expression in

NKT cells: defining a functionally distinct CD1drestricted T cell subset. Curr. Opin. Immunol. 13.
555-561.
Hayday A.C., Cells: A Right Time and a Right

Place for a Conserved Third Way of Protection,
Annu. Rev. Immunol. 18: 975-1026, 2000.
Kronenberg M., Naidenko O., Koning F., Right
on target: Novel approaches for the direct visualization of CD1-specific Tcell responses, Proc.
Nat. Acad. Sci. USA 98: 2950-2952, 2001.
166
Sin ttulo-2
166
5/26/06, 10:25 AM

Captulo 8
COMPLEJO PRINCIPAL DE
HISTOCOMPATIBILIDAD
Ulises Vergara C., Ivn Palomo G., Claudio Ziga M. y Cristina Navarrete
1. Introduccin
2. Genes y molculas del Complejo
Principal de Histocompatibilidad
2.1. Genes del MHC
2.1.2. Genes de clase II
2.2. Estructura y funcin de las
molculas MHC
2.2.1. E s t r u c t u r a y f u n c i n d e
las molculas MHC clase I
2.2.2. E s t r u c t u r a y f u n c i n d e
las molculas MHC clase II
3. El concepto de restriccin MHC
4. Otras molculas de presentacin
4.1. Molculas CD1
5. Herencia de los genes HLA
6. Complejo Principal de Histocompatibilidad y enfermedad
7. Nomenclatura y tipificacin HLA
167
Sin ttulo-2
167
5/26/06, 10:25 AM
168
Sin ttulo-2
168
5/26/06, 10:25 AM
RESUMEN
El Complejo Principal de Histocompatibilidad (MHC) es un complejo gnico altamente
polimrfico que controla la expresin de molculas que desempean un rol fundamental en las
interacciones celulares que inducen y regulan la respuesta inmune a travs del procesamiento y
presentacin de antgenos a los linfocitos T.
Los genes de clase I del MHC (en el hombre llamado HLA) controlan la expresin de los
antgenos de histocompatibilidad clsicos HLA-A,-B,-C y no clsicos HLA-E, -F, G y MIC, y
su funcin principal es la de presentar pptidos antignicos a los linfocitos T citotxicos
CD8+, linfocitos T y a clulas NK.
Los genes de clase II (HLA-DR,-DQ y -DP en el hombre) corresponden a los antiguos
genes de respuesta inmune (genes Ir) y codifican la expresin de molculas que presentan pptidos
a linfocitos T CD4+ (linfocitos T "helper").
Los genes de clase III codifican la expresin de los factores de complemento C4, Bf y C2.
El complejo incluye adems genes que codifican la expresin de molculas importantes en el
procesamiento antignico como por ejemplo tapasina, LMP2, LMP7, TAP1, TAP2, DM y DO y
molculas involucradas en la respuesta inflamatoria (TNF, TNF, Linfotoxinas, hsp70).
conducir al desarrollo de inmunodeficiencia (ver

captulos 30 y 31) o autoinmunidad (ver captulo
23), respectivamente.
El MHC est constituido por un conjunto de
genes que controlan la expresin de molculas que
desempean un rol fundamental en el procesamiento y presentacin de antgenos a los linfocitos
T y en la regulacin de las interacciones celulares
que caracterizan la respuesta inmune. Este
complejo gnico parece estar presente en todos
los vertebrados y en algunos invertebrados, lo que
revela un origen temprano en la evolucin de las
distintas especies.
El MHC es un sistema polignico que
contiene muchos genes estructural y funcionalmente relacionados y altamente polimrficos,
puesto que en la poblacin existen mltiples alelos
para cada gen. Los distintos genes del complejo
estn adems estrechamente ligados y tienden a
heredarse como una unidad, como un complejo
supergnico o haplotipo, entendindose como tal
a una combinacin particular de genes en un
complejo gnico o en un cromosoma. En la
poblacin de individuos de la especie existir
tericamente entonces, tantos haplotipos MHC
como diferentes combinaciones de alelos de los
distintos genes del complejo.
El Complejo Principal de Histocompatibili-
1. INTRODUCCIN
La defensa inmunolgica contra diversos
agentes infecciosos depende de la habilidad del
sistema inmune para reconocer antgenos del
agente patgeno y poner en marcha un conjunto
de mecanismos que incluyen la activacin del
complemento y la activacin, tanto de clulas
fagocticas como de distintas clulas inmunocompetentes. El desarrollo de una respuesta inmune
efectiva implica entonces una compleja serie de
eventos que conducen a activacin celular y la
generacin de clulas efectoras que secretan
anticuerpos y clulas citotxicas (ver captulo 10),
que destruirn al agente infeccioso, o a la clula
infectada en el caso de patgenos intracelulares.
En general, tanto la respuesta contra
antgenos extraos (inmunidad) como la tolerancia
a antgenos propios, estn sujetas a un coordinado
y complejo mecanismo de regulacin que incluye
inmunoglobulinas (ver captulo 6), receptores de
clulas T (TCR) (ver captulo 7) receptores de
clulas NK (ver captulo 10), citoquinas (ver
captulo 11) y molculas codificadas por el
denominado Complejo Principal de Histocompatibilidad (MHC, "Major Histocompatibility
Complex"). Una falla en estos mecanismos de
regulacin de la inmunidad o la tolerancia puede
169
Sin ttulo-2
169
5/26/06, 10:25 AM
dad fue originalmente descrito por Peter Gorer en

el ratn (1936), como un locus de grupos
sanguneos que controlaba la expresin de diversos
antgenos en los glbulos rojos. Gorer defini,
inicialmente, cuatro antgenos eritrocitarios,
denominados antgenos I, II, III y IV, y ms tarde
demostr que el denominado antgeno II se
expresaba tambin en diversos tejidos y jugaba
un rol decisivo en la susceptibilidad o resistencia
al trasplante de tumores y en la aceptacin o
rechazo del trasplante de tejidos entre distintas
cepas consanguneas o endogmicas de ratn.
Trasplantes entre cepas genticamente idnticas
(cepas isognicas o singnicas) son aceptados,
mientras los trasplantes entre cepas genticamente
distintas (cepas alognicas) que presentan alelos
distintos de uno o ms genes son rpida y
fuertemente rechazados. Slo en las cepas que
rechazaban el trasplante, era posible detectar
anticuerpos que reaccionaban con el antgeno-II,
proporcionando evidencia acerca de la naturaleza
inmunolgica de la resistencia al trasplante de
tumores y del rechazo al trasplante de tejidos.
Ms tarde, en 1948, George Snell design a
los genes y antgenos, responsables de la
compatibilidad tisular, como genes y antgenos de
histocompatibilidad, respectivamente. As el locus y antgeno-II de grupo sanguneo, se
designaron como locus y antgeno de
histocompatibilidad-2 (o locus y antgeno H-2,
respectivamente). Muy pronto se demostr que el
locus H-2 era en realidad un conjunto de genes,
estrechamente ligados que controlaban la
expresin de diversos antgenos de
histocompatibilidad. Como estos antgenos
inducan el ms rpido y el ms fuerte rechazo al
trasplante de tejidos, el conjunto gnico fue
definitivamente designado como Complejo Principal de Histocompatibilidad-2 o Complejo H-2
del ratn.
El MHC humano, HLA (Human Leukocyte
Antigen), fue descrito en la dcada del 50 por
Dausset y van Rood, a partir de anticuerpos
leucoaglutinantes encontrados en el suero de
pacientes politransfundidos y de madres
multparas, que reaccionaban con los leucocitos
presentes en los productos sanguneos
transfundidos lo que dio el nombre al sistema.
Los antgenos de histocompatibilidad fueron
durante muchos aos reconocidos como el mayor
obstculo al trasplante de tejidos entre distintos
individuos de la misma especie. Sin embargo,
pareca claro que esta no era la funcin o el
significado biolgico de las molculas codificadas

por el Complejo Principal de Histocompatibilidad,
puesto que el trasplante de tejidos es un fenmeno
artificial, que no ocurre espontneamente en la
naturaleza. As, en las dcadas del 60 y del 70, se
demostr que la capacidad para desarrollar una
respuesta inmune contra diversos antgenos naturales y sintticos, estaba bajo el control de genes
MHC (genes de respuesta inmune o genes Ir).
Finalmente, se demostr que la funcin biolgica
real de estas molculas era la de actuar como
presentadoras de antgenos (incluido aloantgenos)
a los linfocitos T. Asimismo se demostr que estos
antgenos altamente polimrficos al ser
expresados en la membrana participaban en el
fenmeno de rechazo al trasplante de tejidos
mediante un mecanismo de reconocimiento directo
e indirecto (figura 8-1). En el caso de reconocimiento directo estos antgenos son reconocidos
directamente por las clulas T del receptor y
reconocimiento indirecto, cuando la presentacin
de pptidos antignicos derivados de estas
molculas ocurre por las clulas presentadoras
autlogas. Este ltimo mecanismo es el que est
involucrado en el reconocimiento de cualquier otro
antgeno ya sea derivado de protenas virales, bacteria u otra molcula polimrfica.
2. GENES Y MOLCULAS DEL COMPLEJO PRINCIPAL DE HISTOCOMPATIBILIDAD

Anlisis inmunogenticos, funcionales y ms
recientemente estudios de biologa molecular, han
permitido identificar ms de 200 genes en el locus MHC. stos se han separado en tres familias
o clases distintas: genes de clase I, de clase II y de
clase III. En el complejo HLA estos genes ocupan
una extensin de alrededor de 4 millones de pares
de bases, en el brazo corto del cromosoma 6
humano. En el ratn el complejo H-2 ocupa una
extensin de alrededor de 3 millones de pares de
bases, en el cromosoma 17 murino.
Los genes de clase I y de clase II codifican la
expresin de protenas integrales de membrana que
participan en la discriminacin entre lo propio y
lo ajeno, al actuar como elementos de restriccin
en la presentacin de antgenos a linfocitos T. Los
genes de clase III, en cambio, codifican la
expresin de protenas plasmticas que tienen una
funcin completamente distinta, puesto que
forman parte de la cascada de activacin del
170
Sin ttulo-2
170
5/26/06, 10:25 AM
Figura 8-1. Mecanismos de presentacin directa e indirecta de molculas MHC del injerto por parte de clulas T del
receptor.
I (Ia: HLA-A, -B y C en el humano y H-2 K, D y

L en el ratn) se expresan en la mayora de las
clulas nucleadas del organismo y son los que han
sido tradicionalmente reconocidos como el mayor
obstculo al trasplante de tejidos entre individuos
de la misma especie. La participacin de estas
molculas en el rechazo de tejidos es slo un efecto
secundario de su rol fisiolgico como elemento
de restriccin en la presentacin antignica a
linfocitos T CD8+. Estos linfocitos (T citotxicos
o T supresores), son incapaces de reconocer el
antgeno en su conformacin natural y slo lo
reconocen en la superficie de una clula
presentadora de antgeno, en asociacin con una
molcula MHC de clase I.
Estos genes presentan un alto grado de
polimorfismo, es decir en la poblacin se describe
un elevado nmero de variantes allicas para cada
uno de estos locus. Por ejemplo en el ratn, en el
locus K se han descrito ms de 100 alelos,
considerando las cepas de laboratorio y
poblaciones silvestres. En los humanos se han
descrito, hasta ahora, 209 alelos HLA-A, 414
sistema del complemento.

En el complejo existen varios genes de clase
I y de clase II, cada uno de los cuales presenta
mltiples alelos (y por tanto elevado
polimorfismo), que codifican la expresin de
diferentes molculas de clase I o de clase II y por
lo tanto con distintas capacidades para presentar
fragmentos peptdicos a linfocitos T especficos.
Esta forma de organizacin del MHC confiere a
los distintos individuos una enorme capacidad para
presentar y responder a una gran variedad de
antgenos distintos, ya que los diferentes alelos de
cada gen son codominantes, es decir los productos
moleculares de cada alelo se expresan y funcionan
de manera independiente en la superficie celular.
2.1. Genes del MHC
Los genes de clase I controlan la expresin
de los antgenos clsicos y no clsicos. Los
antgenos clsicos de histocompatibilidad de clase
171
Sin ttulo-2
171
5/26/06, 10:25 AM
alelos del gen B y 101 del gen C .

Cada gen de clase I codifica la cadena pesada
o cadena alfa del heterodmero glicoproteico y
est formado por 7 exones: el exn 1 codifica para
el pptido seal, los exones 2, 3 y 4 para los
dominios 1 a 3 de la cadena (ver punto 2.2.1),
el exon 5 para el dominio transmembrana y los
exones 6 y 7 para la regin citoplasmtica.
Los genes de clase I no clsicos (Ib) incluyen
HLA-E, -F, -G y MIC en el humano y H2-Q, -T y
-M en el ratn. stos son menos polimrficos, se
expresan en forma ms restrigida a travs de las
diversas clulas y tejidos y tienen una funcin
diferente. La mayora de ellos participan en la
interaccin con receptores de clulas NK. Adems
estn los genes relacionados con la cadena pesada
de clase I (MIC) A, B, C y D de los cuales slo A
y B se expresan. Los genes MIC codifican para
molculas reconocidas por linfocitos T en
situaciones de stress.
2.1.2 Genes de clase II

Los genes de clase II corresponden, a los
antiguamente denominados como genes de
respuesta inmune (genes Ir) del Complejo Principal de Histocompatibilidad y controlan la
expresin de molculas de clase II, involucradas
en la presentacin de fragmentos peptdicos a los
linfocitos T CD4+.
En el Complejo HLA humano los genes de
clase II se ubican en las regiones HLA-DP, -DQ y
-DR del complejo. En el ratn los genes de Clase
II se ubican en las regiones I-A e I-E del sistema
H-2 murino (figura 8-2).
Los genes de clase II estn formados por 4
exones: el exon 1 codifica para el pptido seal, los
exones 2 y 3 codifican para los dominios 1 y 2 y el
exon 4 codifica para las regiones transmembrana y
citoplasmtica.
Cada regin contiene por lo menos dos genes:
Figura 8-2. Organizacin Gentica del Complejo Principal de Histocompatibilidad en humanos (Complejo HLA) y en el
ratn (Complejo H-2). Tanto en humanos como en el ratn los genes de clase I incluyen a los genes clsicos altamente polimrficos
(genes de clase Ia), como genes oligomrficos o monomrficos (genes de clase Ib). En humano los genes de clase II se ubican en
las regiones DP, DQ y DR y en el ratn corresponden a los genes de las regiones IA e IE que codifican la cadena alfa (genes A) y
genes que codifican la cadena beta (genes B) de la molcula de clase II. Los genes clase III codifican para algunos componentes
del sistema del complemento y otras protenas.
172
Sin ttulo-2
172
5/26/06, 10:25 AM
uno que codifica la cadena alfa (gen A) y otro que

codifica la cadena beta (gen B) de la molcula de clase
II, y el heterodmero se forma siempre a partir de
cadenas y codificadas por genes de la misma
regin. En la regin DR, por lo menos hay descritos 4
genes B funcionales (B1 y B3 B4 B5'), por lo
tanto en esta regin se pueden originar 2 molculas
DR diferentes dependiendo del haplotipo. Los genes
de clase II tambin, presentan un alto grado de
polimorfismo, al igual que los genes Ia. Sin embargo
en el caso de estos genes solamente el DQA y DPA
son polimrficos; el DRA es relativamente
monomrfico y hasta el momento se han descrito slo
dos variantes. Esto en contraste a los 273 alelos DRB1,
21 DQA, 45 DQB, 19 DPA y 93 DPB. Por lo tanto el
nmero de molculas de clase II distintas que puede
codificar una regin de clase II, depende del nmero
de combinaciones - que puedan formarse a partir
de los distintos genes funcionales A y B de la regin.
En un individuo heterozigoto, con un haplotipo distinto
en cada cromosoma homlogo, el nmero de
combinaciones es an mayor, dado que no slo pueden
codificarse molculas de clase II a partir de genes A y
B que estn en posicin cis (genes en el mismo
cromosoma), sino tambin a partir de genes A y B en
posicin trans (genes en cromosomas homlogos
distintos) (figura 8-3). Sin embargo la mayora de las
molculas expresadas estn codificadas en cis ya que
las molculas codificadas en trans no son estables.
una funcin completamente distinta a las

molculas de clase I y de clase II, puesto que
codifican la expresin de molculas como C2, C4
y factor B (Bf) que forman parte de la cascada de
activacin del sistema del complemento (ver
captulo 18) (figura 8.2).
Tanto en el Complejo HLA como en el
Complejo H-2, la regin de los genes de Clase III
contiene: el gen que codifica la expresin del
segundo factor del complemento (C2), dos genes
(C4A y C4B) que codifican la expresin de dos
formas del cuarto factor del complemento (C4),
el gen que codifica el factor B (Bf) de la ruta alterna
del sistema del complemento, los genes CYP-21A
y CYP-21B que codifican la expresin de la 21
hidroxilasa (21-OH), enzima involucrada en la
sntesis de esteroides.
Entre los genes de clase III estn tambin los
que codifican para el Factor de Necrosis Tumoral
alfa (TNF-), Linfotoxina A, B y C y aquellos que
codifican la expresin de protenas de shock trmico
de 70 kDa (hsp 70) (figura 8-2). Estas molculas
estn relacionadas con fenmenos inflamatorios y
algunos autores han planteado la posibilidad de
clasificar esta regin como genes clase IV.
En la regin de los genes clase II se ubican
una serie de genes que codifican para molculas
involucradas en el procesamiento antignico por
las molculas de clase I tales como, tapasina (tps),
LMP2 y LMP7, TAP1 y TAP2 y aquellas
involucradas en la seleccin y presentacin de
pptidos antignicos a las molculas de clase II
incluidos DMA y DMB y DOA y DOB.
No todos los genes ligados en el Complejo Principal de Histocompatibilidad pueden clasificarse
como genes de clase I, II III. En esta categora se
encuentran: (a) los genes LMP-2 y LMP-7 que
codifican subunidades de la maquinaria
citoplasmtica de degradacin o procesamiento de
protenas (Proteasoma), (b) los genes TAP-1 y TAP2 que codifican las subunidades de un transportador
peptdico ATP dependiente (TAP, "Transporter
Associated with Antigen Processing"), (c) el gen
que codifica para la protena Tapasina, chaperona
involucrada en la formacin del complejo molcula
MHC-pptido, en el interior del retculo
endoplsmico (d) los genes DMA y DMB que
codifican la expresin de las subunidades del
heterodmero o molcula DM, involucrada en la
unin de fragmentos peptdicos a las molculas de

Los genes de clase III tambin codifican la
expresin de protenas plasmticas que cumplen
Figura 8-3. Asociacin de cadenas del mismo cromosoma

(apareamiento cis) y de cromosomas opuestos (apareamiento
trans). Un individuo heterocigoto para los genes DRA1 y DRB1
puede codificar para 2 cadenas y 2 cadenas diferentes por lo
que puede formar cuatro cadenas DR diferentes.
173
Sin ttulo-2
173
5/26/06, 10:25 AM
La cadena contiene aproximadamente 330

aminocidos y su conformacin en la membrana
es tal que presenta distintas regiones o dominios
claramente definidos: 3 dominios extramembrana
denominados 1, 2 y 3, de alrededor de 90
aminocidos cada uno; una regin hidrofbica
transmembrana de alrededor de 25 aminocidos
de anclaje en la membrana y, una cola o segmento
citoplasmtico de 30 aminocidos (figura 8-4).
Los dominios 1 y 2 conforman la ranura o
bolsillo de unin para la presentacin de
fragmentos peptdicos, de 8-9 aminocidos, a
clulas T CD8+. El dominio 3 presenta una
regin de unin no covalente a la 2m y un sitio
o regin no polimrfica o monomrfica para
interaccin con la molcula CD8, co-receptor
linfocitario.
Tanto el dominio 3, como la 2m
presentan una secuencia aminoacdica y una
conformacin similar a los dominios constantes
de las molculas de inmunoglobulinas (ver
captulo 6). Por lo tanto las molculas de clase
I se clasifican dentro del gran grupo de protenas
de la superfamilia de las inmunoglobulinas. La
mayor parte del polimorfismo de las molculas
de clase I est localizado en los dominios alfa 1
y alfa 2.
Los productos de los genes clsicos de clase
I (HLA-A, -B y -C) interactan con el receptor de
las clulas T y con el receptor KIR (killer/immunoglobulin like receptor) presente en las clulas T
y NK, respectivamente. Por otra parte, HLA-E
interacta con los receptores tipo lectina presente
en las clulas NK. Los productos de los genes MIC
que no estn unidos a la 2m, no participan en la
presentacin de antgenos a los linfocitos T ,
pero s son reconocidos por linfocitos T
intraepiteliales.
clase II. Todas estas molculas estn involucradas

en el procesamiento antignico y sus genes mapean
en la regin de los genes clase II.
2.2. Estructura y funcin de las molculas MHC
2.2.1. Estructura y funcin de las molculas
clase I
Las molculas MHC de clase Ia se expresan
en todas las clulas nucleadas en niveles de 104 a
105 molculas por clula, particularmente en clulas
linfoides. Una menor expresin de estas molculas
MHC de clase I se observa en clulas germinales y
glbulos rojos.
Las molculas MHC de clase Ia y Ib son
glicoprotenas integrales de la membrana plasmtica
y se expresan como un heterodmero constituido
por una cadena pesada o cadena de 45 kDa
(codificada por los genes MHC de clase I) y una
cadena liviana de 12 kDa, la Beta-2 microglobulina
(2m) no codificada por el MHC, sino por un gen
situado en el cromosoma 15 en humanos y en el
cromosoma 2 en el ratn (figura 8-4).
Las molculas clase Ia (B, C, A en el humano
y K, D, L en el ratn) se caracterizan por expresarse
en prcticamente todas las clulas nucleadas,
tambin en los glbulos rojos y plaquetas; su
funcin se asocia a la presentacin de pptidos
antignicos principalmente de origen endgeno a
los linfocitos T CD8+.
La cadenas y de la molcula de clase I
estn no covalentemente unidas y slo la cadena
alfa se encuentra anclada a la membrana
plasmtica celular.
2.2.2. Estrcuctura y funcin de las molculas

clase II
A diferencia de las molculas MHC de
clase I, que se expresan en virtualmente todas
las clulas nucleadas, las molculas MHC de
clase II tienen una distribucin ms restringida
expresndose en forma constitutiva en clulas
como linfocitos B, monocitos, macrfagos,
clulas de Langerhans, clulas dendrticas y, en
general en clulas presentadoras de antgeno
(CPA). Clulas endoteliales, epiteliales y
estromales no expresan molculas MHC de
clase II en forma constitutiva, pero pueden
Figura 8-4. Esquema de las molculas MHC de clase I. La

molcula MHC de clase I es un heterodmero glicoproteico
formado por una cadena pesada de 45 kDa codificada por el
complejo MHC y una cadena liviana de 12 kDa, 2m,
codificada en el cromosoma 15 humano y en el cromosoma 2
murino. El bolsillo o sitio de unin de fragmentos peptdicos
se conforma de los dominios 1 y 2 de la cadena .
174
Sin ttulo-2
174
5/26/06, 10:25 AM
Los dominios 3 y 3 de las molculas de

clase II, lo mismo que el dominio 3 y la 2m
de las molculas de clase I, tienen una secuencia
aminoacdica y una conformacin similar a los
dominios constantes de las molculas de
inmunoglobulinas y se clasifican entonces
dentro de la misma superfamilia de las
inmunoglobulinas.
hacerlo bajo el estmulo de citoquinas como

interfern gamma (IFN), lo que puede tener
importantes consecuencias en la respuesta
inmune normal y/o en el desarrollo de
autoinmunidad. Los linfocitos T son claramente
negativos para molculas MHC de clase II, pero
tambin pueden expresarlas como resultado de
la activacin celular.
Las molculas MHC de clase II tambin son
glicoprotenas integrales de la membrana celular
y estn constituidas por dos cadenas polipeptdicas,
y , no covalentemente asociadas y codificadas
por genes de clase II del complejo.
Tanto en la cadena (32-34 kDa), como en la
cadena (28 -32 kDa) del heterodmero de clase II,
se distinguen claramente: dos dominios
extracelulares de 90 aminocidos, 1 y 2 y 1 y
2, respectivamente; una regin o dominio
hidrofbico transmembrana de alrededor de 25
aminocidos para anclaje en la membrana celular y,
una pequea cola citoplasmtica de longitud variable en las distintas molculas MHC de clase II
(figura 8-5). La ranura o bolsillo peptdico de
presentacin antignica est conformado por los
dominios 1 y 1 y, normalmente, presenta a los
linfocitos T CD4+ fragmentos peptdicos de 13 a 15
aminocidos. El polimorfismo de esta molcula est
localizado principalmente en los dominios alfa 1 y
alfa 2 de las molculas y est concentrado en tres
regiones hipervariables que son las que hacen
contacto directo con el ppetido antignico y/o el
receptor de clulas T.
3. EL CONCEPTO DE RESTRICCIN MHC

Un linfocito T, especfico para un
fragmento peptdico presentado en el contexto
de una molcula MHC particular, slo
reconocer este complejo molcula MHCpptido y no reconocer el mismo pptido
presentado en el contexto de una molcula
MHC de la misma clase (I o II), pero distinta.
El genotipo o la molcula MHC restringe
entonces la especificidad del linfocito T, el
que no reconoce a la molcula MHC o al
fragmento peptdico, sino slo al complejo
MHC-pptido especfico.
El origen del fenmeno de restriccin
MHC se encuentra en el proceso de
diferenciacin o "educacin tmica", puesto
que en el timo se produce la seleccin positiva
de linfocitos T, en funcin de su capacidad para
reconocer fragmentos peptcos en el contexto
de molculas MHC propias. Sin embargo, un
linfocito T citotxico especfico para un
fragmento peptdico presentado en el contexto
de una molcula MHC de clase I propia, puede
reconocer o reaccionar cruzadamente con un
fragmento peptdico extrao, presentado en el
contexto de una molcula MHC de clase I
extraa o contra un pptido propio presentado
en el contexto de una molcula de clase I
extraa o alognica. De esta manera puede
entonces explicarse, al menos en parte, el
rechazo al trasplante de tejidos, puesto que
antgenos propios o extraos (alognicos) estn
siendo presentados en el contexto de molculas
MHC extraas en la superficie de clulas
extraas o alognicas, presentes en el tejido del
donante. Un fenmeno similar puede explicar
la denominada reaccin del trasplante o injerto
contra el husped (GvH, "graft-versus-host"),
en la que linfocitos T citotxicos presentes en
el tejido trasplantado (linfocitos alognicos)
reaccionan contra tejidos o clulas del receptor.
Figura 8-5. Esquema de las molculas MHC de clase II. La

molcula de clase II es un heterodmero glicoproteico
constituido por una cadena de 32-34 kDa y una cadena de
28-34 kDa. Ambas cadenas estn codificadas por genes MHC
de clase II y estn asociadas no covalentemente. El bolsillo o
sitio de unin de fragmentos peptdicos se conforma de los
dominios 1 y 1 y de las cadenas y respectivamente.
175
Sin ttulo-2
175
5/26/06, 10:25 AM
de mecanismos complementarios para establecer

una respuesta inmune adecuada en la infeccin con
bacterias intracelulares y abre la posibilidad del
uso de antgenos glicolipdicos en posibles
vacunas, por ejemplo contra la tuberculosis.
4. OTRAS MOLCULAS DE PRESENTACIN

4.1. Molculas CD1
Las molculas CD1 son glicoprotenas
transmembrana constituidas por una cadena alfa
de 43-49 kDa asociada no covalentemente a una
2m. Lo anterior indica una semejanza estructural
con las molculas MHC clase I, con las cuales
comparten una limitada pero significativa
homologa de secuencia (20%). Estas molculas
son codificadas por genes fuera del MHC
(cromosoma 1 humano y 3 murino) y tienen un
bajo polimorfismo. Su transporte intracelular es
TAP o Ii independiente, molculas importantes en
el movimiento de las molculas clase I y II,
respectivamente. Aunque existe evidencia de que
estas molculas estn presentes en, al menos, todos
los mamferos, la mejor caracterizacin se ha
hecho en humano y ratn. Los miembros de la familia CD1 se dividen en dos grupos, sobre la base
de sus secuencias aminoacdicas. El grupo I
comprende slo molculas descritas en humano:
CD1a, CD1b y CD1c; al parecer no habra
protenas grupo I en el ratn. El grupo II incluye a
CD1d en el humano, y CD1d.1 y CD1d.2 en el
ratn.
Las molculas CD1 son fundamentalmente
expresadas en timocitos inmaduros y clulas
presentadoras de antgeno, incluyendo clulas
dendrticas, macrfagos activados por citoquinas
y linfocitos B. Esto es un indicio de la participacin
de estas molculas en la presentacin antignica,
pero a diferencia de las molculas convencionales,
ellas participan en la presentacin de lpidos y
glicolpidos a linfocitos CD4+, CD8+ y dobles
negativos (DN). Glicolpidos de micobacterias,
como mansidos de fosfoinositol (PIM),
lipoarabinomananos (LAM), cido miclico y
hexosil-1-fosfoisoprenoide (hPIP) se presentan en
el contexto de molculas CD1, grupo I.
Las molculas CD1d (del grupo II)
interactan con las recientemente descritas NKT
cells. Las celulas NKT representan una
subpoblacin linfocitaria que expresa receptores
T (TCR) y NK (CD161). Estas clulas utilizan
una cadena invariante del TCR alfa (Va14Ja281
en el ratn y Va24JaQ en el humano). A pesar que
se sabe que estas clulas participan en la regulacion
de la respuesta inmune, los mecanismos precisos
no estn an bien definidos.
Las molculas CD1 forman parte, al parecer,
5. HERENCIA DE LOS GENES HLA

Los genes HLA se heredan en forma
codominante, por tanto los alelos de ambos locus
son expresados, as dos set de molculas HLA o
haplotipos pueden ser pesquisados en las clulas,
uno heredado del padre y otro de la madre.
Existe un 25% de posibilidades que 2 hijos
compartan ambos haplotipos (HLA idnticos), un
25% de posibilidades que no compartan ningn
haplotipo y un 50% de posibilidades que
compartan un haplotipo (figura 8-6).
Figura 8-6. Herencia de haplotipos HLA. En la figura, (a) y

(b) representan los dos haplotipos maternos, y (c) y (d)
representan lo haplotipos paternos. Al heredar uno de los
haplotipos de cada padre, pueden obtenerse los haplotipos (ac),
(ad), (bc) y (bd). Existe un 25% de posibilidades que dos hijos
dean HLA idnticos (ejemplo (ac) y (ac), un 25% de
posibilidades que sean totalmente HLA no idnticos (ejemplo
(ac) y (bd) y 50% de posibilidades que ellos sean HLA semiidnticos.
6. COMPLEJO PRINCIPAL DE HISTOCOMPATIBILIDAD Y ENFERMEDAD

Durante muchos aos se ha sabido que la
resistencia o susceptibilidad a contraer diversas
enfermedades est en muchos casos determinada
por factores genticos y, en los ltimos aos se han
identificado diversos marcadores genticos que son
idnticos o estn estrechamente ligados a los genes
que confieren resistencia o susceptibilidad a la
enfermedad. El anlisis de tales marcadores permite
no slo identificar a los individuos que estn en
riesgo de contraer o desarrollar una cierta
enfermedad, sino tambin estudiar o determinar la
patognesis de la enfermedad.
176
Sin ttulo-2
176
5/26/06, 10:25 AM
Ciertos genes o haplotipos del MHC parecen

estar asociados con la susceptibilidad o
resistencia a desarrollar algunas enfermedades.
Sin embargo, los exactos mecanismos
responsables de estas asociaciones son variados
y en general nos estn claramente definidos. Se
postula que esta asociacin puede ser debida a la
semejanza entre pptidos propios y pptidos
derivados de patgenos como por ejemplo Klebsiella, lo que llevara al desarrollo de una
respuesta autoinmne. Este sera el mecanismo que
explicara la asociacin entre HLA-B27 y
ArtritisAnquilosante (AS). Otra posibilidad es
que la asociacin se deba a la presentacin
preferencial de ciertos pptidos derivados de
patgenos u otros antgenos como es el caso de
la enfermedad celiaca (EC) y el Prpura
aloinmune neonatal (PAN). En el caso de la EC
los alelos HLA-DQ2 y DQ5 presentan pptidos
derivados del gluten a los linfocitos T y stos
estn directamente involucrados en la patologa

de la EC. En el caso de PAN los pptidos son
derivados del aloantgeno HPA1a que son
presentados por el alelo HLA-DRB3*0101 y que
lleva a la produccin de anticuerpos patgenos
en contra de este aloantgeno, resultando en grave
trombocitopenia en el recin nacido. Finalmente
es posible que esta asociacin sea con un gen an
no identificado que se encuentra en desequilibrio
de unin con algunos de los genes de HLA como
es el caso de Hemocromatosis Hereditaria (HH)
y HLA-A3. Hoy se sabe que HH ocurre como
resultado de mutaciones en el gen HFE
localizado telomrico de HLA-A. La asociacin
con HLA-A3 se debe al desequilibrio de unin
con ese alelo en un haplotipo ancestral en el cual
se origin la mutacin inicial. En este caso se
habla de enfermedades ligadas al HLA.
En la tabla 8-1 se muestran algunos ejemplos
de asociaciones entre HLA y enfermedades.
Tabla 8-1. Enfermedades asociadas y ligadas al sistema HLA

Enfermedades asociadas a HLA
Corioretinopata de Birdshot
Enfermedad de Behet's
Espondilitis anquilosante
Malaria
HLA-A29
HLA- B51
HLA-B27
HLA-B53
Diabetes Mellitus insulino dependiente
HLA-DQ8
Aminocidos 70-74 codificados por gen DRBI

(QKRAA or QRRAA)
Narcolepsia
Enfermedad celiaca
Deficiencia selectiva de IgA
HLA-DQBI*0602/DQAI*0102
HLA-DQBI*0201/DQAI*0501
HLA-DRBI*0301/-DQBI*02
Desarrollo de anticuerpos HPA-Ia PAN

No respuesta de anticuerpos con vacunas
para VHB
HLA-DRB3*0101
HLA-B44-DR7-DQ2 (en Caucsicos)
HLA-B8-DR-DQ2 (en Caucsicos)
HLA-B564-DR4-DQ4 (en Japoneses)
Remocin de HCV circulante
HLA-DRBI*11-DQB1*0301
Enfermedades ligadas a HLA

Hemocromatosis
Deficiencia de 21 OH
(HLA-A3) gen HFE C282Y y H63D

(HLA-B27) gen 21 OH
PAN, Prpura aloinmune neonatal; VHB, Virus de Hepatitis B; (), Alelo asociado
177
Sin ttulo-2
177
5/26/06, 10:25 AM
El riesgo relativo a desarrollar una enfermedad se

calcula a partir de la frecuencia del alelo o
haplotipo en la poblacin enferma y su frecuencia
en la poblacin control sana. As, en una tabla de
2 x 2, el nmero de individuos enfermos y sanos
que presentan o carecen de un determinado alelo
o haplotipo HLA es:
Campbell, R., and Trowsdale, J., A map of the

human Major Histocompatibility Complex,
Inmunol. Today. 18: 43-45, 1997.
Gruen, J., and Weissman, S., Evolving views of
the Major Histocompatibility Complex, Blood 11:
4252-4246, 1997.
Jackson, M.R. and Peterson, P.A., Assembly and
intracellular transport of MHC class I molecules,
Ann. Rev. Cell Biology 9: 207-233, 1993.
Alelo HLA
+ A/D
Riesgo relativo = B/C
Enfermos A B
Sanos
C D
Kirberg, J., Berns, A. and von Boehmer, H., Peripheral T cell survival requires continual ligation
of the T cel receptor to Major Histocompatibility
complex-encoded molecules, J. Exp. Med. 8:
1269-1275, 1997.
As, por ejemplo, la Espondilitis anquilosante

presenta un riesgo relativo de 87.4 y Enfermedad
Celiaca 10.8.
Matsuda, J. and Kronenberg, M., Presentation of

self and microbial lipids by CD1 molecules, Curr.
Opin. Inmunol. 13: 19-25, 2001.
7. NOMENCLATURA Y TIPIFICACIN HLA
Schaible, U. and Kaufmann, H., CD1 and CD1restricted Tcells in infections with intracellular
bacteria, Trends Microbiol. 9: 419-425, 2000.
Las molculas MHC clase I y II son muy

polimrficas. En humanos (HLA) actualmente se
les identifica con una nueva nomenclatura que
incluye el locus (Ej. A, de clase I), seguido de un
asterisco (*) y 3 4 dgitos en que los dos primeros
corresponden a la especificidad serolgica y los
dos segundos al nmero de la variante. Ejemplo:
HLA-A*0203 .
La tipificacin HLA, requerida entre otras
situaciones, para trasplantes y determinacin de
riesgo de enfermedad, se estudia a travs de
pruebas serolgicas (microlinfocitotoxicidad),
mtodos celulares y de biologa molecular (ver
captulo 42).
Sette, A. and Sidney, J., HLA supertypes and

supermotifs: a funcional perspective on HLA polymorphism, Curr. Opin. Inmunol. 10: 478-482,
1998.
Steven, G.E., Marsh., Julia G. Bodmer ., Ekkehard
D. Albert et al., Nomenclature for factors of the
HLA system, European journal of immunogenetics. 28:377-424. 2000.
LECTURAS SUGERIDAS
Bahram, S., and Spies, T., The MIC gene family, Res. Immunol. 147:328-334, 1996.
Barber, L.D., and Parham, P., Peptide binding to
major histocompatibility complex molecules,
Ann. Rev. Cell Biology 9:163-206, 1993.
Braud, V., Alland, D., And Mc Michael A. Functions of non classical MHC and non-MHCencodedclas I molecules, Curr. Opin. Inmunol.
11: 100-108, 1999.
178
Sin ttulo-2
178
5/26/06, 10:25 AM

Captulo 9
PROCESAMIENTO, PRESENTACIN Y
RECONOCIMIENTO ANTIGNICO
Ulises Vergara C., Claudio Ziga M., Ivn Palomo G. y Cristina Navarrete
1. Introduccin
2. Linfocitos T y reconocimiento de
antgenos
2.1. Subpoblaciones linfocitarias T y
reconocimiento peptdico
2.2. Linfocitos T
2.3. Clulas NK
2.4. Clulas presentadoras de antgenos
3. Trfico celular y procesamiento
antignico
4. Antgenos endgenos y exgenos
5. Fragmentos peptdicos y molculas
MHC
6. Procesamiento y presentacin de
antgenos endgenos
7. Procesamiento y presentacin de
antgenos exgenos
8. Presentacin alternativa de pptidos
179
Sin ttulo-2
179
5/26/06, 10:25 AM
180
Sin ttulo-2
180
5/26/06, 10:25 AM
RESUMEN
Los linfocitos T reconocen fundamentalmente antgenos proteicos, en forma de fragmentos
peptdicos presentados en asociacin con una molcula del Complejo Principal de
Histocompatibilidad (MHC) en la membrana de una clula presentadora de antgenos (CPA). As
la presentacin antignica en el contexto de una molcula MHC y el reconocimiento del complejo molcula MHC-pptido por el receptor T, proporciona al sistema inmune de un mecanismo de
control o deteccin de protenas anormales en clulas transformadas o tumorales y de protenas
extraas en clulas infectadas por virus, bacterias o parsitos.
Las evidencias experimentales sugieren que el procesamiento antignico y la unin de fragmentos peptdicos a molculas MHC parece depender tanto del origen del antgeno, como del
trfico antignico a travs de distintos compartimientos celulares. As, los antgenos intracelulares
o endgenos son procesados o degradados por la maquinaria multicataltica citoplasmtica
(Proteasoma) y los fragmentos peptdicos all generados son luego translocados al retculo
endoplsmico, con la participacin de un transportador ATP-dependiente (TAP). En el retculo,
los pptidos endgenos sern unidos a una molcula MHC clase I y slo el complejo correctamente ensamblado ser transportado y expresado en la superficie celular, para su presentacin a
linfocitos T CD8+. Los antgenos extracelulares sern en cambio, internalizados por la clula
presentadora y procesados en un compartimiento acdico celular (endolisosoma o fagolisosoma).
Los fragmentos peptdicos aqu generados son luego asociados a una molcula MHC clase II y
slo el complejo correctamente ensamblado, se expresar en la membrana celular para la presentacin del fragmento peptdico a linfocitos T CD4+.
eptopos conformacionales o discontinuos en

antgenos de naturaleza qumica tan variada como
protenas, hidratos de carbono, lpidos y cidos
nucleicos. Los linfocitos T en cambio, reconocen
fundamentalmente determinantes continuos o de
secuencia en antgenos proteicos y, slo en forma
de pequeos fragmentos peptdicos presentados en
asociacin con una molcula del Sistema o Complejo Principal de Histocompatibilidad, en la superficie de una CPA. Dada la elevada homologa
tanto estructural como funcional, entre el receptor antignico de los linfocitos B (BCR) y el receptor de los linfocitos T (TCR), no exista hasta
ahora una explicacin satisfactoria que diera cuenta de esta capacidad limitada o restringida de los
linfocitos T para reconocer fundamentalmente
eptopos o determinantes antignicos de naturaleza
proteica. Sin embargo, todo parece indicar que esta
restriccin estaba determinada por las molculas
MHC, que slo son capaces de unir o presentar fragmentos peptdicos. Pero con el reconocimiento de
las molculas CD1, que son capaces de presentar
antgenos lipdicos o glicolipdicos a los linfocitos
1. INTRODUCCIN
El sistema inmune es parte de los mecanismos biolgicos destinados a mantener la integridad estructural y funcional de los individuos y est
genticamente programado para defendernos de
la agresin de agentes infecciosos, clulas y molculas extraas.
El sistema inmune est constitudo por clulas con capacidad para reconocer y neutralizar o
eliminar molculas extraas (linfocitos B,
linfocitos T y clulas NK) y por clulas accesorias que cumplen una importante funcin en el procesamiento y presentacin de antgenos
(monocitos, macrfagos, clulas dendrticas, clulas interdigitantes, etc.).
2. LINFOCITOS T Y RECONOCIMIENTO
ANTIGNICO
Los linfocitos B pueden reconocer eptopos
estructurales, continuos o de secuencia y/o
181
Sin ttulo-2
181
5/26/06, 10:25 AM
T CD4+, CD8+ y DN, sta visin limitada ha cambiado y al parecer el receptor T es capaz de reconocer antgenos de diversa naturaleza qumica, aunque presentadas por molculas diferentes a las clsicas MHC. De todas maneras, adems de estos
mecanismos complementarios, la presentacin
antignica en el contexto de molculas del MHC y
la deteccin o reconocimiento del complejo molcula MHC-pptido por el receptor de un linfocito
T, proporciona al sistema inmune de un mecanismo de control o deteccin de la expresin de protenas anormales en clulas transformadas o
tumorales y de protenas extraas en clulas infectadas por virus, bacterias o parsitos.
tesis y secrecin de interleuquina 2 (IL-2),

interleuquina 12 (IL-12), interferon gamma (IFN)
y factor de necrosis tumoral (TNF). Los
linfocitos T helper 2 (Th2) en cambio, regulan la
respuesta inmune humoral mediada por anticuerpos
y se caracterizan por la sntesis y secrecin de
interleuquina 4 (IL-4), interleuquina 5 (IL-5),
interleuquina 6 (IL-6) e interleuquina 10 (IL-10).
El reconocimiento especfico y restringido
por las molculas del MHC est mediado fundamentalmente por linfocitos T que poseen el receptor (TCR).
2.1. Subpoblaciones linfocitarias T y reconocimiento peptdico
Los linfocitos T se encuentran predominantemente en tejidos epiteliales, tienen una diversidad

restringida y forman parte de las respuestas innatas a patgenos intracelulares y a tumores. Estos
linfocitos no requien de las molculas clsicas
presentadoras de antgenos ni tampoco utilizan las
vas clsicas de reconocimiento antignico utilizado por los linfocitos T . Sin embargo, esta
subpoblacin de linfocitos T si reconocen los
antgenos no clsicos de clase I, MICA y MICB
que se expresan principalmente en clulas
tumorales de origen epitelial que han sido sometidas a stress. El reconocimiento especfico de estas molculas est mediado por el receptor NK
(NKG2D) expresado en estos linfocitos. Los
linfocitos T tambin reconocen antgenos no
peptdicos (lpidos) tales como isopentenyl
pirofosfatasa (IPP) derivados de M. tuberculosis.
El reconocimiento de estos antgenos es mediado por la presencia de CD1 y en la mayora de
los casos requiere de la capacitacin y transporte de antgeno a un compartimiento intracelular
acdico en la CPA similar al procesamiento de
pptidos restringido por las molculas de MHC
clase II (ver punto 7). Sin embargo, el sistema de
transporte TAP1/TAP2 o las molculas DM no
son requeridas ya sea para la expresin de CD1
o para la funcin presentadora de estas molculas (captulo 8).
2.2 Linfocitos T
Los linfocitos T (TCR) tanto como

citotxicos (LTc) y linfocitos T supresores (LTs)
reconocen fragmentos peptdicos asociados o presentados por molculas MHC clase I, mientras los
linfocitos T "helper" (LTh), reconocen fragmentos
peptdicos asociados a molculas MHC clase II.
Esta especificidad en el reconocimiento de pptidos
asociados a una clase particular de molcula MHC
est determinado por las molculas CD4 y CD8,
que actan como co-receptor linfocitario para el
reconocimiento de la molcula MHC. As, la molcula CD8 slo se une con la molcula de clase I,
reconociendo una regin monomrfica situada en
el dominio -3 de esta molcula MHC. La molcula CD4 en cambio, slo se une con la molcula
MHC clase II, reconociendo una regin
monomrfica situada en el dominio -2.
El reconocimiento antignico asociado a molculas MHC clase I resulta en la destruccin
citotxica de la clula presentadora o clula blanco, mientras el reconocimiento de antgenos en el
contexto de molculas MHC clase II conduce a la
activacin y proliferacin de distintas
subpoblaciones de clulas T "helper", con sntesis
y secrecin de una combinacin particular de
citoquinas que promueven una amplificacin de
la respuesta inmune humoral o celular, al activar
linfocitos B y/o macrfagos, y diversas clulas
inflamatorias.
La respuesta inmune humoral y celular son reguladas por subpoblaciones distintas de clulas T
"helper". As, los linfocitos T helper 1 (Th1) participan en la regulacin de la respuesta inmune celular (reacciones inflamatorias, de hipersensibilidad
retardada y citotxicas) y se caracterizan por la sn-
2.3 Clulas NK
Las clulas NK estn directamente involucradas en
la respuesta inmune en contra de virus, parsitos,
bacterias intracelulares y tumores. Tambin contribuyen directamente a la eliminacin de clulas
alognicas y, mediante la secrecin de citoquinas,
participan en la regulacin de otras funciones
182
Sin ttulo-2
182
5/26/06, 10:25 AM
inmunolgicas, como la produccin de anticuerpos

y la hematopoyesis. Las clulas NK presentan en su
membrana una gran variedad de receptores. Los receptores como CD2, CD69 y CD16 funcionan en
forma independiente de la expresin de molculas
de MHC, mientras que otros si dependen de la expresin de las molculas clsicas y no clsicas de
MHC clase I. En este ltimo grupo se encuentran
los receptores del tipo C lectin-like (NKC) por ejemplo CD94/NKG2D y los "Ig like receptors" (LRC),
por ejemplo KIRs (ver captulo 10). Los receptores
de la familia NKC estn localizados en el cromosoma
12 mientras que los LRC en el cromosoma 19. Tanto
los NKC como los LRC incluyen receptores de inhibicin y activacin de las clulas NK, que tienen
como ligandos molculas MHC de clase I clsicas y
no clsicas (tabla 1). Estos receptores son altamente
polimrficos y su variacin est dada no slo por
mutaciones en los distintos genes, sino tambin por
su expresin diferencial en distintos individuos, vale
decir no todos los individuos expresan el mismo
nmero de receptores.
reconocer pptidos antignicos, est en gran parte

determinada por las caractersticas de las clulas
presentadoras de antgeno: monocitos,
macrfagos, clulas dendrticas, clulas
interdigitantes, linfocitos B. etc. De stas, las
clulas dendrticas (CD), son sin duda las ms
importantes debido a su capacidad para activar
linfocitos T "naive". Las CD forman parte de un
grupo heterogneo de clulas que se encuentran
en los rganos linfoides secundarios y en la
periferia, en distintos estadios de diferenciacin y
maduracin. En los tejidos perifricos, las CD
inmaduras tienen un grado moderado de sntesis
y expresin de molculas MHC de clase II y una
gran capacidad fagoctica. Luego de su
reclutamiento y activacin, ya sea por citoquinas
u otros estmulos capaces de sealar la presencia
de patgenos o de dao tisular, se produce un
aumento pasajero en la sntesis de molculas MHC
de clase II, seguido de una disminucin de la
capacidad fagoctica, luego de la captura o
incorporacin de antgenos. Estas CD inmaduras,
migran luego a los rganos linfoides secundarios,
donde completan su proceso de maduracin para
el adecuado procesamiento y presentacin de
antgenos a linfocitos T.
Utilizando marcadores de membrana de la
serie mieloide (CD11c y CD33) se ha podido
identificar, en sangre perifrica, 2 subpoblaciones
de clulas dendrticas de origen mieloide y una
subpoblacin CD11-, de origen linfoide o
plasmocitoide. Las CD de origen mieloide son ms
propensas a secretar IL-12 (una citoquina
inductora de respuesta Th1), mientras que las CD
de origen linfoide secretan IL-10, que promueve
una respuesta de tipo TH2. La subpoblacin
mieloide tiene la capacidad de inducir respuestas
proliferativas contra diversos antgenos y
aloantgenos mientras que la subpoblacin linfoide
tiene una funcin limitada como clula presentadora de antgeno, pero parece tambien involucrada en la induccin de tolerancia.
La presentacin de fragmentos antignicos
asociados a molculas MHC ha llevado a los
inmunlogos a preguntarse dnde y cmo se
realiza el procesamiento antignico en la clula
presentadora y cmo y dnde se realiza la
asociacin de los fragmentos peptdicos a las
molculas MHC clase I o clase II. Existe alguna
relacin entre el procesamiento y presentacin de
antgenos y la sntesis, transporte y expresin de
las molculas MHC en la membrana de la clula
presentadora?.
2.4 Clulas presentadoras de antgeno

La posibilidad que linfocitos T puedan
Tabla 9-1. Interaccin entre molculas MHC

clase I y los receptores activadores e
inhibidores de las clulas NK.
Ligandos
Receptores activadores
HLA-E
CD94/NKG2C
(DAP 12)
MIC
NKG2D
(DAP 10)
HLA-C
KIR2DS
(DAP 12)
HLA-B
KIR3DS
(DAP 12)
HLA-G
KIR2DL4
Ligandos
Receptores inhibidores
HLA-E
CD94/ NKG2A/
HLA-C
KIR2DL
HLA-B
KIR3DL
HLA
ILT2/4
183
Sin ttulo-2
183
5/26/06, 10:25 AM
la CPA o de la clula blanco de la respuesta

inmune. Estas protenas son generalmente
sintetizadas en ribosomas libres en el citoplasma
o pueden corresponder a protenas derivadas de
virus, bacterias o parsitos intracelulares; pero,
para todas ellas, sus fragmentos peptdicos se
generan mediante protelisis citoplasmtica. Los
fragmentos antignicos deben ser luego
translocados o transportados al retculo
endoplsmico, donde se encuentran las molculas
MHC clase I sintetizadas en ribosomas asociados
al retculo.
Los antgenos proteicos exgenos corresponden a protenas extracelulares internalizadas
mediante la unin a un receptor especfico de la
superficie celular o en fase fluda mediante
vesculas membranosas en procesos de fagocitosis, pinocitosis o endocitosis. Las protenas
as internalizadas sern procesadas en un compartimiento acdico celular (fagolisosoma o
endolisosoma) y los fragmentos peptdicos all
generados sern luego asociados a una molcula
MHC clase II para su transporte y expresin en
la superficie celular.
3. TRFICO CELULAR Y PROCESAMIENTO ANTIGNICO

La evidencia experimental hasta ahora
acumulada sugiere que el procesamiento antignico
y la unin de pptidos a molculas MHC parece
depender tanto del origen del antgeno como del
trfico antignico a travs de distintos
compartimientos celulares. As, los antgenos
intracelulares y extracelulares constituyen desafos
distintos para el sistema inmune puesto que los
fragmentos peptdicos derivados de antgenos
intracelulares o endgenos son normalmente unidos
a molculas MHC clase I y presentados a linfocitos
T CD8+, mientras los antgenos extracelulares o
exgenos se unen a molculas MHC clase II y son
normalmente presentados a linfocitos T CD4+. La
asociacin de fragmentos peptdicos a molculas
MHC clase I o clase II es entonces funcin de la
ruta de introduccin del antgeno a la clula y de su
susceptibilidad al procesamiento o degradacin en
distintos compartimientos celulares.
El aislamiento e identificacin de lneas
celulares con defectos en el procesamiento y
presentacin de antgenos, ha constitudo un avance
significativo en el conocimiento de la biologa de
la respuesta celular T y del ensamblaje y transporte
de las molculas MHC. As, la lnea celular RMAS derivada de clulas mutagenizadas de linfoma H2b de ratn transformadas por virus de Rauscher y
la lnea linfoblastoide humana LBL 721.174,
expresan bajos niveles de molculas MHC en la
superficie celular, an cuando sintetizan niveles
normales de la cadena alfa de la molcula clase I y
de beta-2 microglobulina (2m). La incubacin de
estas lneas celulares con pptidos virales capaces
de unirse especficamente a las molculas MHC
clase I, conduce a la expresin del complejo MHCpptido en la superficie celular y a su destruccin
citotxica si se les cocultiva con linfocitos T CD8+
citotxicos especficos para ese complejo MHCpptido. Estos fenmenos no ocurren si las lneas
celulares se infectan con el virus original, sugiriendo
un defecto en el procesamiento y presentacin de
antgenos y una relacin con el ensamblaje de las
molculas MHC.
5. FRAGMENTOS PEPTDICOS Y MOLCULAS MHC

La evidencia experimental indica que las
molculas MHC clase I unen preferentemente,
pptidos de 8 a 9 aminocidos generados en el
citoplasma celular. Las molculas MHC clase II en
cambio, unen preferentemente pptidos de 13 a 15
aminocidos, generados en un compartimiento
acdico celular (compartimiento endoctico MIIC).
Esta diferencia en la longitud de los fragmentos
peptdicos que pueden asociarse a molculas clase
I o clase II parece depender de la estructura y
conformacin del bolsillo de unin de la molcula
MHC: el bolsillo es cerrado en las molculas de
clase I y abierto en las molculas clase II. De esta
manera las molculas clase II puede unir pptidos
de mayor longitud que las molculas clase I.
Cuando se purifican molculas MHC por
inmunoprecipitacin de extractos celulares con
anticuerpos monoclonales especficos para
molculas clase I o clase II, se encuentra que ellas
coprecipitan con los fragmentos peptdicos alojados
en su bolsillo de unin. La secuenciacin de los
fragmentos peptdicos, eludos o aislados del
complejo MHC-pptido por denaturacin cida,
demuestra la existencia de 2 a 3 residuos
4. ANTGENOS ENDGENOS Y EXGENOS

Antgenos proteicos endgenos son todas
aquellas protenas residentes en el citoplasma de
184
Sin ttulo-2
184
5/26/06, 10:25 AM
conservados de anclaje a la molcula MHC.

En los pptidos de 8 a 9 aminocidos que se
unen a las molculas MHC clase I, los residuos de
anclaje se encuentran normalmente en los extremos
amino y carboxilo del fragmento peptdico y slo
pueden ser ocupados por un aminocido especfico
o por residuos aminoacdicos que contienen cadenas
laterales similares o estrechamente relacionadas. El
extremo carboxiterminal es con frecuencia un
aminocido con cadena lateral aliftica (como
isoleucina, leucina o valina) o cargada positiva o
negativamente.
Pptidos distintos pueden entonces asociarse a
la misma molcula MHC, siempre y cuando los
residuos de anclaje tengan la naturaleza y la posicin
que corresponde para una adecuada y estable
asociacin a esa molcula. Sin embargo, cada
complejo MHC-pptido ser reconocido por un
linfocito T distinto y especfico para ese complejo.
a esta estructura se le denomina inmunoproteasoma.

LMP-2 y LMP-7 ("low molecular mass protein")
codifican en la regin de los genes de clase II del
Complejo Principal de Histocompatibilidad.
Figura 9-1. Procesamiento de antgenos endgenos.

Antgenos endgenos son degradados por el Proteasoma
citoplasmtico, generando fragmentos peptdicos de 8 a 9
aminocidos que sern translocados al retculo endoplsmico
por el transportador TAP. En el retculo endoplasmtico la
molcula MHC clase I ser ensamblada a partir de la cadena
de clase I, la 2m y un fragmento peptdico especfico. En el
ensamblaje participan chaperoninas como calnexina y protenas
de shock trmico (hsp 60 y hsp 70).
6. PROCESAMIENTO DE ANTGENOS
ENDGENOS
Los antecedentes hasta ahora disponibles
sugieren que los antgenos endgenos son
degradados o procesados en el citoplasma celular,
generando fragmentos peptdicos de 8 a 9
aminocidos por accin de un complejo
multicataltico de 700 kDa, denominado
Proteasoma, Macropana o MCP ("multicatalytic
proteinase"), que es responsable de la degradacin
de la mayora de las protenas en el citoplasma y el
ncleo celular (figura 9-1). Esta estructura cilndrica
est formada por 4 anillos heptamricos de
subunidades alfa y beta ( alfa7beta7beta7alfa7 ), a
este cuerpo central se le puede adicionar una
subunidad reguladora denominada 19S, que
corresponde a un complejo ATPasa, generando el
proteasoma 26S, responsable del procesamiento de
la mayoria de las protenas citoplasmticas, unidas
a una proteina seal llamada ubiquitina. Este
proteosoma genera pptidos con un rango entre 5
30 aminocidos, y alrededor de un 15% de ellos
cae dentro del rango de 9-10 aminocidos, que
poseen la longitud apropiada para unirse a las
molculas MHC clase I. Bajo la influencia del
interfern gamma, tres subunidades beta,
denominadas X, Y y Z en el house-keeping
proteasoma son reemplazadas por las subunidades
homlogas LMP-7, LMP-2 y MECL-1,
respectivamente y tambin se induce la unin de
otra subunidad reguladora denominada 11S o PA28,
Al parecer los cambios anteriores no tienen

consecuencias drsticas en la generacin de
pptidos, pero si se inducen algunas diferencias
cualitativas, preferentemente en la regin
carboxiterminal de los pptidos generados. Las
protenas LMP tienen alguna homologa con sernproteasas, y an cuando no existe evidencia directa
y convincente que muestre su actividad
enzimtica, se supone que ellas se incorporan al
proteasoma alterando sus propiedades catalticas
de endopeptidasa, de manera tal de aumentar la
generacin de algunos fragmentos peptdicos.
Estudios realizados utilizando lneas celulares
mutantes incapaces de generar fragmentos
peptdicos, demuestran que la presentacin
antignica puede restaurarse an en ausencia de
las subunidades codificadas por los genes LMP
del sistema principal de histocompatibilidad,
indicando que no existe un requerimiento absoluto
de estas protenas en la generacin de pptidos.
Sin embargo, esto no descarta la posibilidad que
las molculas LMP incrementen la eficacia del
complejo enzimtico, generando ms frecuen-
185
Sin ttulo-2
185
5/26/06, 10:25 AM
temente fragmentos peptdicos escindidos despus

de aminocidos bsicos, cidos o hidrofbicos.
Estudios realizados con inhibidores
especficos del proteasoma han revelado que frente
a su inactivacin se inducen o se hacen evidentes
mecanismos proteolticos compensatorios de la
prdida de actividad del proteasoma, que pueden
corresponder a complejos proteicos semejantes o
a sistemas de endo y exopeptidasas.
El sitio preciso donde los pptidos generados
en el citoplasma se unen a las molculas MHC es
el retculo endoplsmico. El tratamiento de clulas
con Brefeldina A (metabolito de hongos que
bloquea el transporte de protenas desde el retculo
endoplsmico al Golgi) o con la protena E19
derivada de citomegalovirus (que retiene
molculas MHC clase I en el retculo), bloquean
o interfieren la presentacin antignica.
Los fragmentos peptdicos generados por el
complejo multienzimtico deben ser translocados
desde el citoplasma al retculo donde se unirn a
las molculas MHC clase I, para su transporte a la
superficie celular a travs de la va exoctica (figura
9-2). La evidencia experimental sugiere la
participacin de transportadores dependientes de
ATP y codificados por los genes TAP-1 y TAP-2
localizados en las proximidades de los genes de
clase II del MHC. Las protenas TAP-1 y TAP-2
se asociaran formando un heterodmero
transportador en la membrana del retculo
endoplsmico.
La transfeccin del gen TAP-2 en la lnea
celular RMA-S y de los genes TAP-1 y TAP-2 en
la lnea LBL 721.174 restablece la expresin de
las molculas MHC clase I y la adecuada
presentacin de antgenos.
La molcula MHC clase I est constituda por
una glicoprotena integral de membrana (cadena
pesada de 45 kDa) que est asociada no
covalentemente con una subunidad soluble de 12
kDa, la -2 microglobulina, (2m) que no est
codificada por genes MHC y se encuentra
normalmente libre en el plasma y fludos tisulares
(ver captulo 8). La cadena pesada alfa contiene 3
dominios extracelulares, dos de los cuales (-1 y
-2) forman la regin o bolsillo de unin para el
fragmento peptdico. El tercer dominio (-3),
contiene una regin para el reconocimiento o
interaccin con el co-receptor CD8 del linfocito T
citotxico, y una regin para la unin no covalente
con 2m.
Tanto la cadena como la 2m de la
molcula MHC clase I se sintetizan en ribosomas
Figura 9-2. Trfico antignico y presentacin de pptidos

endgenos. En el contexto de MHC de clase I. En el retculo
endoplsmico la molcula MHC clase II correctamente
ensamblada a partir de la cadena , 2m y un fragmento
peptdico, es transportado al Golgi y desde aqu presentado a
un LT CD8+, en el contexto de una molcula MHC clase I.
LMP, Low molecular mass protein; TAP, Transporter associated with Antigen Processing.
asociados al retculo endoplsmico y pueden por

lo tanto ensamblarse en el lumen del retculo. Sin
embargo, la evidencia experimental sugiere que
la unin de un fragmento peptdico es un prerequisito necesario para la conformacin y
ensamblaje estable de la molcula clase I y, en la
mayora de los casos, slo el complejo trimolecular
estable (pptido-cadena -2m) abandona el
retculo endoplsmico para completar su
glicosilacin en el Golgi y luego viajar a la
superficie celular por la va exoctica. Las
molculas MHC clase I, libres o mal ensambladas
seran retenidas por protenas residentes en el
retculo endoplsmico (como la protena p88 o
calnexina), previniendo su degradacin y
mantenindolas en una conformacin compatible
con el ensamblaje adecuado. La calnexina parece
funcionar como molcula chaperona o
chaperonina, para el plegamiento o conformacin
estable de diversas protenas, incluyendo los TCR
y las inmunoglobulinas. Si clulas de Drosophila melanogaster (que carecen de molculas
MHC, 2m y TAP), se transfectan con los genes
186
Sin ttulo-2
186
5/26/06, 10:25 AM
para molculas MHC clase I y de 2m, se

encuentra que estas clulas son capaces de expresar
en su superficie, el complejo MHC-2m o
molculas MHC libres. Si adems de los genes
MHC y 2m, las clulas se transfectan tambin
con el gen para calnexina, las molculas MHC
son retenidas en el retculo mediante asociacin
con calnexina y por lo tanto, no se expresan en la
superficie celular.
Las chaperoninas cumplen un rol fundamental en la estabilidad de diversas protenas,
impidiendo su agregacin y favoreciendo un
adecuado plegamiento, ensamblaje y retencin en
diversos compartimientos celulares. La interaccin
de las molculas MHC con chaperoninas
residentes en el retculo endoplsmico asegura que
distintas molculas MHC unan fragmentos
pptidicos en el compartimiento celular adecuado.
Por otro lado, chaperoninas citoslicas de la familia de las protenas de shock trmico de 60 kDa
(hsp 60) y de 70 kDa (hsp 70), el heterodmero
transportador TAP, calnexina y tapasina aseguran
el transporte y asociacin de los pptidos
adecuados a las molculas MHC de clase I (figura
9-2). Tapasina es una protena transmembrana de
48 kDa, con una seal de retencin en el retculo
endoplsmico. Esta chaperona se une a la molcula
MHC clase I y sirve de nexo para asociarse al
complejo TAP. Habitualmente 4 complejos MHC
I-Tapasina se unen a un transportador TAP, de
manera de concentrar el nmero de molculas
MHC vacas en el lugar de entrada de los pptidos.
Esta molcula, aparte de actuar como chaperona
en el ensamblaje y retencin de las MHC I,
probablemente tambin participa como editora de
pptidos, con una funcin semejante a lo que
realiza la protena DM en relacin a las molculas
MHC clase II. Se supone adems la existencia de
un transportador, distinto de TAP, pero dependiente
tambin de ATP, encargado del reflujo retrgado
de fragmentos peptdicos desde el retculo al
citosol, para mantener un bajo nivel de pptidos
en el retculo endoplsmico y favorecer la unin a
las molculas MHC, de los fragmentos peptdicos
que presentan mayor afinidad. La glicosilacin de
fragmentos peptdicos en el retculo o su
asociacin con una molcula MHC clase I, evitara
el reflujo retrgado de pptidos al citosol.
Ahora bien, an cuando el heterodmero TAP
transporta preferentemente fragmentos peptdicos
de 8 a 10 aminocidos, ello no impide que pptidos
de hasta 30 aminocidos puedan ser eficientemente
transportados desde el citosol al retculo
endoplsmico. Al parecer ms que el tamao del

pptido lo que importa para un transporte
adecuado desde el citosol, es la naturaleza del
extremo carboxiterminal del fragmento peptdico.
As en humanos, el heterodmero TAP es
permisivo para el transporte de pptidos con
cualquier extremo carboxi-terminal, excepto si este
contiene prolina y probablemente glicina,
existiendo molculas MHC que unen
preferentemente pptidos con extremos polares y
otras que unen preferentemente pptidos con
extremos carboxi-terminal hidrofbicos. En
ratones en cambio, TAP parece restringido a
fragmentos peptdicos con extremo carboxi-terminal hidrofbico.
En resumen, una molcula MHC clase I
madura y correctamente ensamblada consiste de
3 subunidades: la cadena MHC, la 2m y el
fragmento peptdico alojado en el bolsillo de unin
formado por los dominios -1 y -2 de la molcula
MHC. La unin del pptido adecuado induce
pequeos cambios conformacionales en la
molcula MHC, lo que permite la disociacin de
las protenas chaperonas. Este complejo
trimolecular es fundamental no slo para el
correcto ensamblaje de la molcula MHC de clase
I, sino tambin para su glicosilacin en el Golgi,
transporte efectivo por la va exoctica y expresin
en la superficie celular. As clulas que carecen
de 2m o del transportador TAP, acumulan en el
retculo cadenas MHC o complejos MHC-2m,
respectivamente.
7. PROCESAMIENTO DE ANTGENOS
EXGENOS
Antgenos proteicos exgenos internalizados
mediante interaccin ligando-receptor o en fase fluda
mediante vesculas membranosas (en procesos de
fagocitosis, pinocitosis o endocitosis), sern
procesados en un compartimiento acdico celular
(fagolisosoma endolisosoma) y los fragmentos
peptdicos all generados, sern luego asociados a
una molcula MHC clase II para su transporte y
presentacin en la superficie celular (figura 9-3).
Las molculas MHC clase II son heterodmeros
glicoproteicos constituidos por una cadena alfa de
33 kDa y una cadena beta de 28 kDa, sintetizadas
en ribosomas asociados al retculo endoplsmico
y ensambladas en el lumen del mismo (ver captulo
8). Al igual que las molculas de clase I, el
ensamblaje de las molculas MHC clase II requiere
187
Sin ttulo-2
187
5/26/06, 10:25 AM
ocurre completamente en el retculo endoplsmico,

mientras el ensamblaje de las molculas clase II
se realiza en 2 etapas: (a) la primera ocurre en el
retculo endoplsmico e implica la participacin
de calnexina para la asociacin de las cadenas
MHC alfa y beta entre si y con la invariante Ii. (b)
La segunda etapa del ensamblaje de la molcula
de clase II ocurre en el compartimiento acdico
celular e implica la participacin de un
heterodmero proteico denominado molcula DM
(molcula asociada a la regin D, de clase II en el
HLA humano), que favorece tanto la digestin
parcial y remocin de la cadena invariante Ii del
bolsillo de la molcula de clase II, como la
asociacin de un fragmento peptdico exgeno a
esta molcula MHC.
La protena Calnexina retendr en el retculo
endoplsmico las cadena y de las molculas
clase II, si no se logra un correcto ensamblaje del
complejo trimolecular (--Ii). El bajo pH del
compartimiento endoctico es fundamental para el
procesamiento antignico y el ensamblaje final de
las molculas clase II. As, drogas lisosomotrpicas (primaquina, cloroquina, monosina,
cloruro de amonio) que elevan el pH del
compartimiento endoctico, inhibirn la
presentacin antignica en el contexto de
molculas MHC clase II.
La cadena invariante Ii es una glicoprotena
de membrana, no polimrfica, codificada en el
cromosoma 5 humano y en el cromosoma 18
murino. Presenta 4 formas de distinto peso molecular (31, 33, 41 y 43 kDa) generadas por una
combinacin de procesamiento alternativo del
transcrito primario y el uso de distintos sitios de
iniciacin de la sntesis proteica. Todas estas formas
de la cadena invariante Ii poseen un extremo o
dominio carboxiterminal, de 20 aminocidos, que
se une y bloquea el bolsillo peptdico de clase II
impidiendo as la asociacin de pptidos endgenos.
Adems, en la cola citoplasmtica aminoterminal
presentan una secuencia seal de 30 aminocidos
que dirige el transporte a la va endoctica, del
complejo MHC clase II-Ii, correctamente
ensamblado en el retculo endoplsmico. En
ausencia de la cadena invariante Ii, las molculas
MHC clase II pueden eventualmente unir pptidos
endgenos en el retculo endoplsmico, pero su
transporte y expresin en la superficie celular se
har a travs de la va exoctica, como ocurre con
la presentacin antignica en el contexto de
molculas MHC clase I.
La cadena invariante, una vez sintetizada en
Figura 9-3. Procesamiento de antgenos exgenos y

presentacin en el contexto de molcula MHC clase II. En
el retculo endoplsmico las molculas MHC de clase II son
ensambladas a partir de las cadenas a y b, y la cadena invariante
Ii. La asociacin de la cadena Ii bloquea el bolsillo peptdico
de la molcula de clase II, adems asegura su transporte a travs
de la va endoctica al compartimiento acdico celular. Aqu se
realiza el procesamiento de los antgenos exgenos y se realiza
adems la digestin parcial de la cadena Ii, dejando el pptido
CLIP alojado en el bolsillo antes citado. La molcula DM que
es transportada por la va endoctica en forma independiente,
participa en el desplazamiento de CLIP y en la unin de un
fragmento peptdico exgeno al bolsillo MHC de clase II. El
complejo MHC clase II pptico es luego transportado a la
superficie celular para su presentacin a un LT CD4+.
la interaccin con diversas chaperoninas, entre las

que se destaca la denominada cadena invariante
gamma o cadena invariante Ii. La protena
Calnexina y chaperoninas de las familias de
protena de shock trmico hsp 70 y hsp 90
favorecen el ensamblaje de las cadena y de la
molcula clase II, pero el rol ms importante en
este proceso lo desempea la cadena invariante Ii.
La cadena invariante Ii no slo favorece el
ensamblaje del heterodmero -, sino que
tambin impide que pptidos endgenos puedan
unirse al bolsillo de las molculas clase II y desva
o dirige el transporte del complejo trimolecular
(alfa-beta-Ii) hacia la va endoctica celular donde
estn siendo generados los pptidos exgenos.
El ensamblaje de las molculas MHC clase I
188
Sin ttulo-2
188
5/26/06, 10:25 AM
el retculo endoplsmico, forma homotrmeros que

se ensamblarn con 3 heterodmeros - de clase
II. De esta manera, el ensamblaje adecuado de la
molcula de clase II en el retculo endoplsmico,
implica en realidad la formacin de un nonmero
proteico contitudo por 3 trmeros (--Ii). El
nonmero es entonces dirigido al complejo de Golgi
y desde aqu el extremo amino terminal de la cadena
invariante Ii desviar o dirigir el transporte del
complejo al compartimiento acdico o endoctico
celular, denominado MIIC (MHC class II Compartment). El bajo pH y la accin de cisten proteasas
(principalmente las catepsinas S y L del
compartimiento endoctico), no slo favorecen la
degradacin o procesamiento de los antgenos
exgenos, sino tambin la digestin parcial del
extremo carboxilo de la cadena invariante Ii. Se
genera as un fragmento peptdico, que incluye los
residuos aminoacdicos 81 al 104 de Ii, denominado
CLIP ("Class II-associated invariant-chain peptide"), que permanecer unido al bolsillo del
heterodmero de clase II. El heterodmero proteico
DM, anteriormente mencionado, estara involucrado en la liberacin del pptido CLIP del bolsillo
de las molculas MHC de clase II y en la edicin
de los fragmentos peptdicos que se unirn a la
mollula MHC. En ausencia del heterodmero DM,
molculas de clase II conteniendo el pptido CLIP
se expresarn en la superficie celular.
La molcula DM humana (denominada
molcula M en el ratn) est codificada por genes
de la regin de clase II del Complejo Principal de
Histocompatibilidad (genes HLA-DMA y HLADMB en humanos y, genes Ma, Mb1 y Mb2 en
ratn). Su sntesis se realiza en ribosomas
asociados al retculo endoplsmico, pero su
ensamblaje y transporte final al compartimiento
endoctico celular, se realizara en forma
independiente del complejo molcula MHC clase
II-cadena invariante Ii.
Los pptidos derivados de protenas
endgenas son altamente promiscuos y por lo tanto
capaces de ser presentados por una gran variedad
de molculas MHC de clase II. De este modo las
molculas de clase II pueden unirse a un rango
ms amplio de pptidos en el compartimiento
endoctico, que las molculas MHC de clase I, en
el retculo endoplsmico rugoso. Es en el
compartimiento endoctico donde se encuentra la
molcula DM, que acta editor peptdico,
favoreciendo la presentacin de pptidos de mayor
afinidad y estabilidad. Las molculas DM parecen
funcionar: (a) removiendo el pptido CLIP (Class
II associated Ii peptide) del bolsillo peptdico de

las molculas de clase II y (b) estabilizando los
heterodmeros MHC de clase II vacos o sin
pptido. Esta estabilizacin previene la agregacin
y subsecuente degradacin que sufren estos
heterodmeros MHC, en ausencia del fragmento
peptdico. De este modo las molculas DM juegan
un rol crucial en la presentacin de antgenos
exgenos.
8. PRESENTACIN ALTERNATIVA DE
PPTIDOS
Pptidos endgenos pueden tambin
presentarse en el contexto de molculas MHC
clase II. Esto puede explicarse por: (a) pptidos
endgenos compiten con la cadena invariante Ii
por el bolsillo de unin del heterodmero de clase
I, (b) pptidos endgenos, generados en el
citoplasma, pueden translocarse al compartimiento
acdico celular, para su asociacin con molculas
de clase II, (c) protenas endgenas que han sido
secretadas o que se expresan en la membrana
celular, pueden ser internalizadas y luego
procesadas en el compartimiento acdico celular
y (d) autofagia de componentes celulares a partir
del retculo endoplsmico y su transporte, por va
endoctica, al compartimiento acdico celular.
De manera alternativa, pptidos exgenos
pueden presentarse asociados a molculas clase I.
Este fenmeno ocurre cuando fragmentos pptidicos
o protenas exgenas escapan del compartimiento
endoctico DIC y luego de su degradacin por la
maquinaria citoslica de procesamiento antignico,
son translocados al retculo endoplsmico para su
asociacin a molculas MHC clase I. Algunas
bacterias intracelulares secretan lisinas de membrana
que favoreceran el escape de antgenos o fragmentos
peptdicos exgenos desde el compartimiento
endoctico al citoplasma de la clula presentadora
de antgeno.
LECTURAS SUGERIDAS
Amigorena, S.; Webster P., Drake, J.; Newcomb,
J.; Cresswell, P. and Mellman I., Invariant chain
cleavage and peptide loading in MHC class II
vesicles. J. Exp. Med. 181:1729-1741, 1995.
189
Sin ttulo-2
189
5/26/06, 10:25 AM
Brocke, P., Garbi, N., Momburg, F. and

Hammerling G. J. HLA-DM, HLA-DO and
tapasin: functional similarities and differences,
Rammensee, H.G., Chemistry of peptides associated with MHC class I and class II molecules,
Curr. Opin. Immunol. 7:85-96, 1995.
Reisse Sousa, C., Dendritic cell as sensors of infections, Immunity 14:495-498, 2001
Cresswell P., Assembly, transport and function

of MHC class II molecules, Ann. Rev. Immunol.
12:259-293, 1994.
Sadavisan, B.; Lehner, P.; Ortmann, B.; Spies, T.

and Cresswell, P., Roles for calreticulin and a
novel glycoprotein, tapasin, in the interaction of
MHC class I molecules with TAP, Inmunity.
5:103-114, 1996.
Denzin, L. K. and Cresswell, P., HLA-DM induces CLIP dissociation from MHC class II alpha-beta dimers and facilitates peptide loading,
Cell 82:155-165, 1995.
Settle, A.; Southwood, S.; Miller, J. and Appella,

E., Binding of major histocompatibility complex
class II to the invariant chain derived peptide,
CLIP, is regulated by allelic polymorphism in class
II, J. Exp. Med. 181:677-683, 1995.
Fing, S. P.; Arp, B. and Pious, D., HLA-DMA

and DMB genes are both required for MHC class
II/peptide complex formation in antigen-presenting cells, Nature 368:554-558, 1994.
Germain, R.N., MHC-dependent antigen processing and peptide presentation: Providing ligands
for T lymphocyte activation, Cell 76:287-299,
1994.
Watts, C., Antigen processing in the endocytic

pathway, Curr. Opin. Immunol. 13: 26-31, 2001.
Williams, D.B. and Watts, T.H., Molecular
chaperones in antigen presentation, Curr. Opin.
Immunol. 7:77-84, 1995.
Hitbold, E.M. and Roche, P.A., Trafficking of

MHC-cxlass II molecules in the late secretory
pathway, Curr. Opin. Immunol. 14: 30-35, 2002.
Yewdell, J. and Bennink, J., Cut and Trim: generating MHC class I-peptide ligands, Curr. Opin.
Immunol. 13:13-18, 2001.
Howard, J.C., Supoly and transport of peptides

presented by class I molecules, Current Opinion
Immunol 7:69-76, 1995.
Lennon-Dumnil, A.M.; Bakke, A.H.; WolffBryanty, P.; Ploegh, H.L. and Lagaudrieri-Gesbert,
C., A closer look at proteolysis and MHC-class
II-restricted antigen presentation, Curr. Opin.
Immunol. 14: 15-21, 2002.
Malcherek, G.; Gnau, V.; Jung, J.; Rammensee,
H. G. and Melms, A. Supermotifs enable natural
invariant-chain derived peptides to interact with
many major histocompatibility complex-class II
molecules, J. Exp. Med. 181:527-536, 1995.
Matsuda, J.L. and Kronenberg, M., Presentation
of of self and microbial lipids by CD1 molecules,
Morris, P.; Shaman, J.; Attaya, M.; Amaya, M.;
Goodman, S.; Bergman, C.; Monaco, J.J. and
Mellins, E., An essential role for HLA-DM in
antigen presentation by class II major histocompatibility molecules, Nature 368:551-554, 1994.
190
Sin ttulo-2
190
5/26/06, 10:25 AM

Captulo 10
ACTIVACIN DE LOS LINFOCITOS
Javier Puente P.
1. Introduccin
2. Activacin de los linfocitos T
2.1. Relacin estructura-funcin del
complejo TCR
2.2. Secuencias de activacin en el
TCR-CD3 y cadenas
2.3. Protenas tirosina quinasas en
la activacin de los LT
2.4. Protenas adaptadoras en la activacin de los linfocitos
2.5. Modelo general de activacin de
los LT
3. Activacin de los linfocitos B
3.1. Secuencias de activacin en el
BCR y sub-unidades asociadas
3.2. Modelo general de activacin de
los LB
4. Activacin de las clulas NK
4.1. Modelo de activacin de las clulas NK
191
Sin ttulo-2
191
5/26/06, 10:25 AM
192
Sin ttulo-2
192
5/26/06, 10:25 AM
RESUMEN
El reconocimiento de los antgenos por parte de los receptores especficos de los linfocitos
B y T, BCR y TCR respectivamente, es el evento que inicia la etapa de activacin. El TCR (),
une especficamente al antgeno peptdico procesado ligado a las molculas de MHC (clase I o
II). El heterodmero de localizacin mayoritariamente extracelular, est asociado en forma no
covalente a un complejo de protenas de membrana denominado CD3- cuyos componentes
estn localizados mayoritariamente en el extremo citoplasmtico. Participan en la unin adems
los co-receptores CD4 o CD8, que se unen a determinantes no polimrficos de los MHC clase II
y clase I respectivamente. Una de las principales caractersticas estructurales de los componentes
del complejo CD3- es la presencia de secuencias aminoacdicas que contienen residuos de
tirosina (ITAM) que pueden ser fosforilados por PTK. Esta accin de las PTK ocurre slo bajo
las condiciones de la interaccin TCR, y estructuras asociadas, con el antgeno. Las secuencias
ITAM estn presentes en todas las sub-unidades del complejo CD3- y estando fosforiladas
pueden interactuar con otras secuencias aminoacdicas del tipo SH2 presentes en diversas PTK
citoplasmticas como Zap-70, lo que permite una masiva fosforilacin de protenas adaptadoras
citoslicas y de membrana y de enzimas. Las enzimas fosforiladas se activan y en estas condiciones fosforilan a otros sustratos celulares propagando la seal, proceso que se encarga de asociar
el fenmeno de membrana con el citosol y el ncleo celular generando los cambios caractersticos en la expresin gnica. Una de las protenas activadas por fosforilacin es la fosfolipasa C1
o C2 que permite la generacin de los segundos mensajeros IP3, Ca2+, DAG y la posterior activacin de determinadas PK-C; estos primeros eventos son fundamentales para la respuesta
proliferativa y efectora del respectivo LT. Otra interaccin importante ocurre entre CD28 (LT) :
B7.1, B7.2 (CPA); esta interaccin aporta una segunda seal prcticamente obligatoria para una
ptima activacin de los LT.
El BCR, estructuralmente una Ig de membrana de localizacin principalmente en el extremo extracelular, se encuentra asociado a sub-unidades (Ig, Ig) que poseen secuencias ITAM.
La interaccin del antgeno con el BCR y estructuras asociadas, que tambin poseen este tipo de
secuencias permite el traspaso de la seal hacia el interior celular. Para ello como en el caso del
TCR, el LB posee PTK unidas a membrana y citoslicas como la p72syk que pueden interactuar
con los dominios ITAM fosforilados a travs de las secuencias SH2 y otro tipo de quinasas como
la PI-3 quinasa que puede interactuar con las secuencias del tipo SH2 y SH3. Participan tambin
protenas adaptadoras citoslicas que permiten agrupar una gran diversidad de protenas y enzimas
en la superficie celular. Una de las enzimas activadas por fosforilacin unida a una protena
adaptadora, es la FL-C que cataliza la hidrlisis del PIP2, la generacin de los segundos mensajeros y la activacin de la PK-C y calcineurina en forma similar a los LT. Estos eventos iniciales
permiten la activacin de otras seales que actan a nivel del ncleo celular promoviendo los
cambios en la expresin gentica tpicos de este tipo de linfocitos.
La activacin de las clulas NK, tanto la ADCC como la citotoxicidad natural, ocurre a
travs de la interaccin de receptores como FcIIIR (CD16) con la fraccin Fc de inmunoglobulinas
o de los receptores NCR con sus ligandos, resulta tambin en una propagacin de la seal a travs
de dominios ITAM fosforilados. En las clulas NK se han descrito tambin PTK de la familia src
y syk y protenas adaptadoras de membrana y citoslicas. La activacin de los receptores CD16
y NCR, ambos asociados a sub-unidades de tipo y DAP12 presentan fosforilacin de secuencias ITAM y la generacin de los mismos segundos mensajeros ya sealados. La descripcin de
un gran conjunto de receptores de inhibicin, de la familia de las inmunoglobulinas (KIR) y
lectinas (CD94-NKG2A) que reconocen segmentos conservados de los complejos MHC-I, representan uno de los aspectos fundamentales del control de su funcionalidad.
193
Sin ttulo-2
193
5/26/06, 10:25 AM
1.
como tanto el BCR y TCR en conjunto con sus

molculas asociadas, que no poseen actividad
enzimtica transmiten una seal hacia el interior celular; cmo diversas enzimas protena
quinasas, bajo las determinadas condiciones de
la interaccin del antgeno con su receptor, son
capaces de interaccionar con los extremos
citoslicos de las sub-unidades de las molculas asociadas y activarse fosforilando una serie
de sustratos de membrana e intracelulares, especialmente enzimas y protenas adaptadoras,
que finalmente van a permitir la comunicacin
con el ncleo celular.
Los linfocitos B y T tienen receptores
oligomricos antignicos que reconocen fundamentalmente distintas formas de los antgenos. Los
LB para proteccin de patgenos extracelulares;
sus receptores tpicamente reconocen formas nativas o desnaturadas de protenas y carbohidratos
ya sea solubles, particuladas o unidas a clulas.
En contraste los LT protegen contra patgenos
intracelulares, el TCR reconoce pptidos
antignicos proteolticamente procesados (8-15
residuos) unidos a molculas del Complejo Principal de Histocompatibilidad (MHC) de la clula
presentadora de antgenos (CPA). Sin embargo,
la transduccin de seales que resulta de la
interaccin de cada receptor con su antgeno son
muy similares.
Las clulas NK, pertenecientes a la respuesta inmunolgica innata, pueden tambin reconocer ligandos. Por ejemplo el receptor CD16
(RFcIII) de las clulas NK une al fragmento Fc
de inmunoglobulina G, y de esta forma las clulas
se activan utilizando mecanismos bioqumicos similares a los de los LB y LT.
Los tres grandes sistemas de integracin de
los organismos pluricelulares complejos son los
sistemas: endocrino, nervioso e inmunolgico,
cada uno de ellos responde a una variedad de seales o mensajes caractersticos. Sin embargo,
los mecanismos bioqumico-moleculares
involucrados son universales; en este caso los receptores de membrana (BCR y TCR), al
interaccionar con el antgeno y el receptor CD16
de las clulas NK al interactuar con su ligando,
activan vas mediadas por protena quinasas,
quinasas de lpidos, protenas adaptadoras de
membrana y citoslicas permitiendo la hidrlisis
del fosfolpido de membrana fosfatidil-inositol
(PIP2) a travs de una isoenzima de la fosfolipasa
C y la generacin de los segundos mensajeros,
inositol-trisfosfato (IP3), diacilglicerol (DAG) y
INTRODUCCIN
Los linfocitos B y T, pertenecientes a la respuesta inmunolgica especfica, tienen la capacidad de reconocer y discriminar, entre una vasta
diversidad de estructuras, a aquellas que son
agentes extraos para el organismo vertebrado,
especialmente de carcter infeccioso. Para llevar a cabo estas funciones poseen receptores altamente especficos en su superficie para el reconocimiento de los antgenos: el receptor de
antgenos de los linfocitos B (BCR) y el receptor de antgenos de los linfocitos T (TCR). Cada
precursor linfocitario reordena exclusivamente
sus genes nicos para estos receptores y los
linfocitos maduros permanecen en estado
quiescente en la ausencia de antgeno. El contacto del antgeno especfico con estos linfocitos
induce en stas clulas un estado denominado
activacin, que implica su expansin en nmero, y en el caso de los LB la produccin de
anticuerpos y de los LT la adquisicin de funciones efectoras tales como citotoxicidad y secrecin de mediadores de la respuesta inmune
denominadas citoquinas.
Adems del receptor especfico, intervienen
otras molculas de superficie denominadas co-receptores, molculas de adhesin, receptores de molculas co-estimuladoras; participando no solamente en la estabilizacin de la interaccin
antgeno-receptor, sino tambin en la generacin
de las seales bioqumicas caractersticas del proceso de activacin o de inhibicin de los linfocitos.
La especificidad de esta respuesta est influida
tambin por la localizacin de los mediadores participantes en zonas lipdicas especficas de la membrana plasmtica.
Aun cuando entonces, la respuesta a un
antgeno es comnmente denominada activacin, este trmino refleja toda la complejidad
del proceso, que abarca desde la generacin de
las primeras seales bioqumicas, transduccin
de seales y la produccin de segundos mensajeros, hasta cambios en la expresin gentica y
la morfologa y funcionalidad de los linfocitos.
En el presente captulo se analizarn aquellos
aspectos estructurales de los receptores y dems molculas accesorias involucradas en el
contacto con el antgeno respectivo y cmo esta
situacin inicia la serie de eventos bioqumicos
que se encargan de la inter-comunicacin entre
un fenmeno de membrana con el citosol y ncleo celular. Para ello es indispensable aclarar
194
Sin ttulo-2
194
5/26/06, 10:25 AM
Ca2+. Estos son tambin segundos mensajeros de

la accin de hormonas y de factores de crecimiento (sistema endocrino) y neurotrasmisores (sistema nervioso).
estimuladoras como CD28 (CTLA-4), ICOS,

CD40L, 4-1BB, OX40; muchas de stas son inducidas post-contacto con la CPA y molculas de
adhesin como CD2, CD5 y LFA-1 (figura 10-2).
Este evento de unin entonces le permite, durante
el desarrollo de las clulas T, entrar a seleccin
positiva o bien a apoptosis, entrar al ciclo celular,
producir citoquinas o adquirir una funcin efectora
citoltica. Por lo tanto, todas las responsabilidades de las clulas T estn radicadas en su TCR y
en las estructuras accesorias. La interaccin estable entre el TCR y el antgeno presentado ha sido
denominada tambin sinapsis inmunolgica, que
implica tanto la interaccin como la propagacin
de una seal hacia el interior de la clula.
2. ACTIVACIN DE LOS LINFOCITOS T

2.1. Relacin estructura-funcin del complejo TCR. El inmuno-receptor TCR es un
oligmero complejo compuesto de los productos de seis genes (figura 10-1) (ver captulo 7),
todos ellos requeridos para una eficiente expresin en la membrana plasmtica. Las cadenas
y forman la sub-unidad de unin al ligando,
responsable del reconocimiento de un pptido
antignico unido a molculas de los complejos
mayores de histocompatibilidad clase I o clase
II de la clula presentadora, propagndose una
respuesta que implica una interaccin cooperativa entre el TCR, el complejo CD3 y las sub-unidades (que pueden existir como dmeros o
heterodmeros). Tanto el receptor como diversas
protenas que participan en la activacin de los
LT, se encuentran ubicadas en zonas lipdicas
especficas de la membrana plasmtica (ZLE),
denominadas tambin GEM (micro-dominios
enriquecidos en glico-lpidos), cuya composicin
bioqumica es diferente a la del resto de la membrana. Estos dominios estn enriquecidos en
colesterol y esfingolpidos y pueden ser experimentalmente visualizados en la clula y purificados para su estudio in vitro.
Figura 10-2. Representacin esquemtica de algunas de las

interacciones moleculares que ocurren durante el reconocimiento antignico en la interfase de un LT y una CPA. En
este caso es un LT CD4, en el que las molculas CD40L y
CTLA-4 son inducidas por el contacto con la CPA, las restantes molculas de superficie del LT son constitutivas.
Figura 10-1. Estructura de los receptores de los linfocitos T, B y NK. TCR, BCR, FcIIIR (CD16), NKp46 (NCR) y de los
receptores de inhibicin CD94/NKG2A y KIR2DL4 y de sus sub-unidades. El nmero de las sub-unidades y sus asociaciones
puede variar de acuerdo a la funcin celular. Las lneas interconectoras representan puentes dislfuro. Los rectngulos negros
representan secuencias ITAM (motivos o secuencias de activacin basados en tirosina del inmuno-receptor) y los rectngulos
achurados, secuencias ITIM (motivos o secuencias de inhibicin basados en tirosina del inmuno-receptor).
195
Sin ttulo-2
195
5/26/06, 10:25 AM
Tabla 10-1. Secuencias ITAM
2.2. Secuencias de activacin en el TCR-CD3 y

cadenas . Como se puede apreciar de la figura
10-1, las sub-unidades y , responsables de la
unin al antgeno, tienen una estructura
mayoritariamente extra-citoplasmtica, lo que
avala muy bin la funcin de unin. Sin embargo,
ya a nivel estructural es posible descartarles una
funcin importante en cuanto a la transduccin de
la seal, encontrndose por lo tanto ambas funciones en forma separada. La funcin de
transduccin de seales la cumplen el complejo
CD3 y las sub-unidades , que tienen una parte
importante de su estructura en la zona
citoplasmtica, especialmente las sub-unidades .
La relevancia de CD3 y cadenas ha quedado de
manifiesto al usar mutantes que carecen de algunas de estas sub-unidades con la consecuente alteracin en la activacin de los LT. Analizando
ms detalladamente ahora la estructura primaria
del complejo CD3-, se pudo determinar que poseen secuencias de consenso en todas las sub-unidades, encontrndose incluso repetidas en las subunidades . Estas secuencias de consenso que incluyen dos tirosinas son: YXX(L/I)X(7-8)YXX(L/
I), del cdigo de aminocidos de una letra, siendo
X cualquier aminocido. Estas secuencias (tabla
10-1), se encuentran en muchas otras protenas con
caractersticas similares a las descritas, no soportan mutaciones y constituyen en la actualidad un
conocimiento clave para el entendimiento de la
activacin de los linfocitos. La nomenclatura para
definirlas se basa en que constituyen una secuencia o motivo de activacin de reconocimiento del
antgeno, secuencia que posee residuos de tirosina
y leucina (o isoleucina) en posiciones caractersticas. En la actualidad se conocen estas secuencias como ITAM (motivo de activacin basado en
tirosinas del inmuno-receptor). Un primer hecho
relevante de los ITAM, es que son fosforilados
los residuos de tirosina a consecuencia de la unin
del antgeno especfico al TCR, situacin que temporalmente ocurre en el orden de unos pocos segundos (5 a 30 s); mutantes en tirosina son inactivos. En segundo lugar ni el TCR ni ninguna de las
sub-unidades hasta ahora analizadas posee una
actividad fosforilante en tirosina, tpica de las
enzimas protenas tirosina quinasas (PTK) por lo
que deben actuar PTKs celulares especficas, siendo el proceso de la fosforilacin un evento determinante en la secuencia de activacin, pues adems de las sub-unidades descritas, se fosforilan,
ro abajo, una serie de otras protenas celulares,
especialmente en residuos de tirosina.
h1
YNE LNLGRR E EYDVL
hCD3
hCD3
hCD3
YQP LKDR EDDQY S HL

YE P 1 RKGQRDLY S GL
YQP L RDRDDAQY S HL
mIg
mIg
Y E G L N L D D C S MY E D I
YEGLNYDQTATYED I
2.3. Protenas tirosina quinasas en la activacin

de los LT. Hasta ahora se han descrito tres familias diferentes de protenas tirosina kinasas (Src,
Syk y Tec) en la activacin de los LT. Las PTK no
forman parte del receptor TCR ni de sus sub-unidades asociadas. Dos de las ms importantes PTKs
asociadas a este receptor pertenecen a la familia
de protenas src. La oncoprotena viral v- src fue
la primera PTK descrita; identificndose posteriormente una amplia variedad de enzimas en todo
tipo de organismos que comparten un alto grado
de similitud estructural con esta oncoprotena, incluyendo dominios estructurales y regulatorios.
Estructuralmente las PTK de la familia src consisten de uno o ms sitios de acilacin en el extremo amino-terminal, requeridos para su localizacin en la membrana plasmtica en la zona lipdica
especfica; un dominio nico (que define a cada
uno de sus miembros) una homologa src SH3,
dominio que tiene una alta afinidad por secuencias aminoacdicas ricas en prolina; una homologa
src SH2, dominio con una alta afinidad por secuencias aminoacdicas que contengan tirosinas
fosforiladas; un dominio cataltico, responsable de
la actividad enzimtica fosforilante y una secuencia regulatoria en el extremo carboxilo terminal
(figura 10-3a). Las PTK de la familia src que en
forma ms consistente aparecen interviniendo en
el proceso de activacin de los LT son: la denominada fyn, de 59 kDa, (p59 fyn) posee dos
isoenzimas una presente en el sistema inmune y
otra en cerebro y la de 56 kDa (p56lck) que se expresa exclusivamente en el sistema inmune (figura 10-3a).
Uno de los hechos ms importantes en la participacin de la p56lck fue la demostracin de su
unin no covalente a los dominios citoplasmticos
de los co-receptores de membrana CD4 o CD8.
Esta directa interaccin obviamente sugiere un importante papel de esta enzima en la transduccin
de seales mediada por el TCR y numerosas evi-
196
Sin ttulo-2
196
5/26/06, 10:25 AM
cia el plegamiento de la protena lo que le impide

su accin cataltica. Para mantener esta situacin,
existen por un lado una PTK, la Csk, que se encarga de mantener siempre fosforilado ese sitio
regulador y una fosfoprotena fosfatasa especfica para residuos de tirosina fosforilados, la CD45.
Esta enzima provoca la hidrlisis de ese residuo
de fosfotirosina y la transforma en una PTK activa. La enzima CD45 se encuentra ampliamente
distribuida en el sistema inmune.
La PTK p59fyn tambin puede encontrarse
asociada directamente al TCR-CD3-, especficamente se la ha encontrado asociada en forma no
covalente a las sub-unidades y componentes
del CD3. Presenta tambin un rpido y transiente
aumento en su actividad en respuesta a la
estimulacin del TCR y clulas mutantes en esta
quinasa presentan una significativa reduccin en
el proceso de activacin y proliferacin celular lo
que sugiere un importante papel de esta enzima
en la transduccin de seales en el linfocito.
El descubrimiento de otras PTK fuertemente asociadas al TCR slo de clulas T estimuladas, abri la posibilidad de la existencia de una
asociacin rpida y transiente de protenas de la
membrana con protenas citoslicas. La PTK asociada a la sub-unidad , result ser una protena
de 70 kDa, por lo que fue denominada ZAP-70
(protena asociada a la sub-unidad zeta de 70 kDa).
Tambin se le ha encontrado asociada a sub-unidades CD3 y se encuentra expresada exclusivamente en clulas T y clulas NK. Nuevamente sus
propiedades se explican muy bien por su estructura, es una enzima citoslica, que presenta dos
homologas SH2 hacia el extremo amino-terminal de la protena y un dominio cataltico con actividad de tirosina quinasa (figura 10-3a). La enzima ZAP-70 es altamente homloga a la PTK
syk de 72 kDa muy abundante en los linfocitos B
y clulas mieloides, enzima que puede asociarse
al BCR postulndose la funcin de nexo entre los
procesos de membrana y citoslico/nucleares en
ese tipo de linfocitos. Tanto Zap-70 como syk pertenecen a la familia de PTK syk. La Zap-70 es
expresada a lo largo de todo el desarrollo de los
linfocitos T, en cambio la syk aparece ligada ms
al desarrollo temprano de los linfocitos, siendo su
expresin mucho menor en los linfocitos T maduros. Ambas PTK tienen, a travs de sus dominios
SH2, una alta afinidad por las secuencias ITAM
fosforiladas. Ms recientemente se ha incorporado una nueva familia de PTK: Tec, cuyos principales representantes son Tec, Ikt y Txk; si bien se
Figura 10-3. Dominios estructurales de protenas que participan en transduccin de seales en los linfocitos. A) Dominios estructurales de dos familias de PTK que participan en
la activacin de los linfocitos T y B. Desde el extremo amino
hacia el C terminal: U, dominio nico; M, modificacin por
cido mirstico; SH3 y SH2 homologas src 3 y 2, respectivamente; K, dominio quinsico; R, dominio regulado; Y, residuo
de tirosina. Los sitios con residuos de tirosina fosforilables del
N al C terminal pueden ser hasta tres: Y en sitio inter-dominios (SH2 y K) fosforilada, permite asociacin a otras protenas; Y fosforilada en sitio cataltico (K) estimula su actividad
e Y fosforilada en el sitio regulador R, bloquea su actividad.
B) Dominios estructurales de protenas adaptadoras de membrana y citoslicas: LAT, Grb2 y SLP-76; TM, dominio transmembrana; PY, dominio fosforilado en tirosina; PPPP, dominio rico en prolina.
dencias experimentales as lo confirman: clulas

T en respuesta al antgeno especfico responden
con un rpido y transiente aumento en la actividad de esta enzima; ratones mutantes en esta enzima, presentan un profundo defecto en el desarrollo de las clulas T, estudios in vitro con la
lnea celular T Jurkat mutante en esta PTK demuestran que prcticamente no se produce el proceso de activacin en respuesta a los estmulos
correspondientes. Otra caracterstica extraordinariamente interesante de la p56lck tambin reside en
su estructura. Como se puede apreciar de la figura
10-3a, la enzima posee una homologa SH2 y un
extremo regulador C-terminal en que un residuo
de tirosina puede encontrarse fosforilado y de hecho esa situacin es la observada en el estado de
reposo no estimulado. De esta forma se encuentra
en la misma estructura proteica la posibilidad de
interaccin entre una secuencia SH2 y una secuencia que posee una tirosina fosforilable; el hecho
de encontrarse fosforilada trae como consecuen-
197
Sin ttulo-2
197
5/26/06, 10:25 AM
ha informado un cierto grado de redundancia en

su funcionalidad utilizando ratones transgnicos,
su principal funcin en la activacin es la
fosforilacin de la FL-C y por lo tanto en el control de los niveles de Ca2+.
la activacin y maduracin. Especialmente relevantes son las mutaciones en las cisteinas que sufren palmitoilacin, en este caso LAT no puede
ubicarse en la ZLE; an cuando no se altera su
capacidad de unirse a la membrana, pierde su propiedad de ser fosforilada y de participar como un
regulador en la transduccin de seales iniciada
por el TCR. Ratones carentes del gen LAT, LAT-/, sufren una completa alteracin en la maduracin
de los timocitos. La protena adaptadora SLP-76
(protena fosforilable de los leucocitos y que posee dominios SH2, es una protena citoslica 76
kDa), especfica de las clulas del sistema
hematopoytico; se encuentra en los linfocitos T,
clulas NK, monocitos y megacariocitos, pero no
en los linfocitos B. De acuerdo a su estructura
posee dominios ricos en prolina, P-Y y SH2, lo
que le permite una amplia capacidad de interaccin
con otras protenas. Una vez fosforilada se puede
unir a las protenas adaptadoras vav, Gads y a la
PTK Ikt de la familia Tec. Al igual que en el caso
de LAT, ratones mutantes en SLP-76 por
recombinacin homloga, provocan una completa ausencia de LT en la periferia, el resultado es
mas severo que la carencia de otras protenas
adaptadoras o de cualquiera de las PTK antes
mencionadas, poniendo en evidencia la importancia de esta protena adaptadora en los linfocitos T.
Como se ha podido apreciar, hasta este punto se han descrito protenas participantes en el proceso de activacin de los linfocitos que de una u
otra manera estn ubicadas en la membrana
plasmtica, ya sea como protenas integrales de
sta o bien asociadas a las sub-unidades o coreceptores. Las preguntas que surgen entonces son
cmo se comunican estas estructuras con el
citosol y con el ncleo celular?, Si bien existen
enzimas protena quinasas, cmo stas
interaccionan con sus sustratos citoslicos?, Qu
evento les indica a los sustratos proteicos
citoslicos que se asocien en un momento determinado a la membrana y eventualmente se modifiquen por fosforilacin?. El siguiente modelo de
activacin de los LT permitir responder algunas
de estas interrogantes.
2.4. Protenas adaptadoras en la activacin de

los linfocitos. El conocimiento de otro conjunto
de protenas, denominadas protenas adaptadoras,
en la activacin de los linfocitos ha permitido una
comprensin mayor de este fenmeno. Las protenas adaptadoras se caracterizan por carecer de
actividad cataltica, al menos hasta ahora conocida, y por tener la propiedad de dirigir interacciones
especficas protena-protena y protena-lpido. Se
ha demostrado la participacin coordinada de este
tipo de protenas en conjunto con los dems eventos bioqumicos del proceso de activacin de los
linfocitos. Algunos de las protenas adaptadoras
ms relevantes para los LT aparecen en la figura
10-3b; se pueden apreciar algunos de los dominios estructurales que median las interacciones
moleculares, adems de los dominios SH2 y SH3
ya sealados, aparecen otros como PY (sitio
fosforilable en tirosina) y PPPP (sitio rico en
prolina). Las protenas adaptadoras pueden ser ya
sea de membrana o citoslicas, dos de las ms representativas de cada una de stas son las protenas LAT y SLP-76. La protena adaptadora de
membrana LAT, descrita inicialmente en clulas
Jurkat y luego en linfocitos T, clulas NK plaquetas
y monocitos, pero no en los linfocitos B, representa el nexo de activacin de los linfocitos T entre los eventos mediados por el TCR y las PTK
iniciales, permitiendo explicar como una gran variedad de protenas y enzimas se pueden asociar a
la membrana plasmtica. LAT es una protena de
membrana, posee un sitio transmembrana que le
permite esta localizacin; posee adems dos residuos de cisteina cercanos al sitio transmembrana.
Estos residuos pueden ser modificados por
palmitoilacin lo que le permite a LAT, bajo esas
condiciones, ubicarse especficamente en el rea
de las ZLE. Como posee adems residuos de
tirosina fosforilables (P-Y), una vez fosforilados
estos sitios pueden interactuar con protenas que
posean segmentos SH2 y reclutarlas a la membrana plasmtica. Esto ocurre con las enzimas
fosfolipasa C (FL-C 1), fosfatidil-inositol-3quinasa (PI3-quinasa) y las protenas adaptadoras
Grb2, Gads y SLP-76, entre otras. Tanto clulas
mutantes en LAT, ya sea en tirosina, cistena, o
deficientes en su expresin, sufren trastornos en
2.5 Modelo general de activacin de los LT.

Manteniendo presente a la activacin de los
linfocitos como un proceso altamente complejo,
podemos con los elementos proteicos estructurales y enzimticos sealados visualizar un modelo
simple de la activacin de los LT como el de la
figura 10-4 (a, b). La figura 10-4a indica la situa-
198
Sin ttulo-2
198
5/26/06, 10:25 AM
cin basal, previa a la interaccin con el antgeno.

Indudablemente la especificidad de la respuesta
est dada por el reconocimiento por parte del TCR
del pptido antignico presentado por el MHC de
la clula presentadora. Producida esta situacin
(Figura 10-4b), quedan los co-receptores CD4 o
CD8 dependiendo del tipo de LT, topogrficamente
en posicin de interactuar con la misma molcula
de MHC pero en una regin diferente a la de unin
al TCR. Es decir CD4 o CD8 tambin pueden unirse al MHC, a un segmento no polimrfico, pero
ese evento ocurre solamente en esta altamente restringida condicin. Bajo estas condiciones la
p56lck, unida al co-receptor puede quedar ahora
muy prxima a los diversos ITAM de las sub-unidades CD3-, producindose la fosforilacin masiva de estas secuencias. De este modo las molculas co-receptoras, CD4/CD8, hacen a los
pptidos antignicos unidos a las molculas de
MHC, activadores mucho ms eficientes de las
clulas T comparados a los ligandos que se unen
directamente al TCR. Esta funcin de fosforilacin
tambin la pueden efectuar la PTK p59 fyn ,
postulndose en este caso una activacin de la
enzima
mediada
por
los
cambios
conformacionales siguientes a la interaccin del
TCR con el antgeno. Una vez generados ITAM
fosforilados, puede entrar ahora en accin una PTK
como la ZAP-70, pues se satisfacen los requerimientos para una interaccin efectiva, es decir la
presencia de homologas SH2 (ZAP-70) y de secuencias fosforiladas en tirosina (ITAM de las subunidades CD3). Estando ahora unida, puede a su
vez ser fosforilada por las PTK de membrana ya
mencionadas y de esta forma activarse y fosforilar
otros sustratos celulares propagando la respuesta
o bien por el hecho de estar fosforilada crear nuevos sitios de reclutamiento de protenas que posean secuencias SH2. Enzimas como la ZAP-70
pueden actuar de una manera pivotal, dependiendo del estado del linfocito; en reposo, ubicada en
el citosol; en estado activado, ligada a la membrana permitiendo, en conjunto con otras enzimas
activadas, el traspaso de la informacin hacia el
interior celular.
La localizacin de mltiples protenas en la
zona lipdica especfica durante la activacin de
los linfocitos aparece como un requerimiento
crucial. La presencia masiva en esta zona, durante la activacin, de la protena adaptadora LAT,
permite que sea fosforilada por Zap-70, lo que a
su vez permite la asociacin con diversas protenas adaptadoras y con enzimas explicando de paso
Figura 10-4. Mecanismo bsico de activacin de los LT. a)

Tipos celulares participantes: LT que posee el complejo TCRCD3-, co-receptores CD4 o CD8, CD45 y enzimas protena
quinasas PTK intracelulares. La CPA, que posee la molcula
de MHC (clase I o II) y el pptido antignico. b) Interaccin
entre el pptido antignico presentado y el TCR que inicia la
serie de eventos de asociacin, activacin y fosforilacin en
que participan mltiples protenas celulares como PTK, PKC, fosfo-protena fosfatasas, protenas que poseen ITAM, protenas adaptadoras, que culmina con la generacin de segundos mensajeros y traspaso de la informacin al ncleo celular.
El color azul de la membrana indica la zona lipdica especfica
(ZLE). Los rectngulos negros de las sub-unidades del TCR
corresponden a los segmentos ITAM, figura 10-4 a y b, los
crculos plomos adyacentes a las secuencias ITAM y tambin
encontrados en otras protenas, corresponden a la fosforilacin
de esos segmentos (figura 10-4b); en el caso de las enzimas y
protenas paritcipantes, los cuadrados verdes corresponden a
dominios SH3, y los valos amarillos a dominios SH2.
la acumulacin de stas a nivel de la membrana

plasmtica de los LT. Entre las protenas asociadas estn las isoenzimas de la fosfolipasa C (FLC) del tipo 1 o 2, la PI3-quinasa y la protena
adaptadora Grb2 que inicia la va de activacin de
ras. El desdoblamiento del PIP 2 (fosfatidilinositol[4,5]bisfosfato), formando los productos
IP3 (inositol[1,4,5]trisfosfato) y DAG (diacil-gli-
199
Sin ttulo-2
199
5/26/06, 10:25 AM
macin e inhibiendo por lo tanto el proceso de

activacin de los LT. Este es uno de los pocos ejemplos directos que muestran la conexin entre la
membrana y el ncleo celular.
La participacin de la protena ras, que se
sabe inicia una va importante en la activacin de
los LT, es insensible a la accin de CsA. La protena ras (21 kDa) es una de las tpicas protenas
que unen nucletidos de guanina, GDP en el estado inactivo y GTP en el estado activo. La
estimulacin del TCR induce una marcada y rpida activacin de ras que se manifiesta por su estado de unin a GTP. Esta activacin se inicia a
travs de la interaccin de Grb2 con LAT
fosforilado, Grb2 puede interactuar con otras protenas adaptadoras y con protenas intercambiadoras de guanina (Sos) que permiten la unin
de GTP a ras. Ras-GTP activa a la Raf-quinasa
con la cual se inicia la activacin secuencial de
la cascada de las MAP-quinasas, va tambin fundamental en la activacin de los LT. La protena
adaptadora SLP-76 es tambin fosforilada por
Zap-70, puede interactuar con otras protenas
como la PTK Ikt y con Gads. La Ikt en esa posicin activa a la FL-C por fosforilacin y Gads,
actuando como puente, le permite interactuar con
LAT. Como se puede apreciar entonces estas protenas, LAT y SLP-76, actan como andamios
temporales que pueden reclutar una gran cantidad de protenas en la superficie celular permitindoles activarse a travs de la interaccin protena-protena o a travs de la fosforilacin y de
esta forma engranar toda la maquinaria
bioqumica requerida en la transduccin de seales.
Como resultado del proceso anterior, se activan diferentes vas: catalizadas por diversas familias de PTK, isoenzimas de PK-C, MAPkinasas, calcineurina; lo que trae como consecuencia: a) cambios en el citoesqueleto, polimerizacin
de actina y la reorientacin del MTOC hacia la
zona de contacto inter-celular; b) la activacin de
diversos factores transcripcionales que permiten
la sntesis de citoquinas, protenas citotxicas,
entre otras, necesarias para la funcionalidad de los
LT CD4 y CD8.
La transduccin de seales es un proceso rpido, su trmino en este caso se encuentra asociado a la activacin de mecanismos de desfosforilacin efectuadas por fosfatasas especficas
(fosfotirosina fosfatasas). Nuevamente aqu se ha
descrito un papel importante de CD45, esta enzima puede aparecer, en determinados perodos, in-
cerol) por parte de la FL-C es un hecho ampliamente descrito en la literatura, este tipo de enzimas
puede ser activado ya sea por protenas de tipo G,
la isoenzima FL-C; o por fosforilacin en residuos de tirosina, como es el caso de las isoenzimas
FL-C. En el proceso de activacin de los LT se
ha observado hasta ahora, la participacin solamente de isoenzimas del tipo C. Un anlisis muy
somero de la estructura de estas ltimas, nos revela adems de la existencia de secuencias que
pueden ser fosforiladas, la existencia de secuencias tipo SH2, que le permiten por lo tanto
interactuar con secuencias fosforiladas (en este
caso de LAT), y de esta manera formar parte de la
va de activacin. La FL-C1 en estas condiciones es activada por fosforilacin a travs de la PTK
Ikt. La FL-C1 cataliza la hidrlisis del fosfolpido
de membrana PIP2 generando los segundos mensajeros IP3 y DAG. Estos segundos mensajeros,
inducidos a partir del TCR, son los responsables
del muy rpido y persistente aumento en el Ca2+
citoslico y de la activacin de la enzima pivotal
protena quinasa C de la cual existen ms de una
docena de isoenzimas, siendo las ms importantes en los LT justamente las dependientes de Ca2+
y DAG (isoenzimas y ). Las PK-C activadas
pueden actuar fosforilando, en serina/treonina, una
serie de sustratos proteicos propagando de este
modo la seal. La enzima PI 3-quinasa, tambin
se asocia a LAT fosforilado, y genera a partir del
del PIP 2 el producto PIP 3 (fosfatidilinositol[3,4,5]trisfosfato) que es un activador de la PKC, reforzando el papel de estas isoenzimas. El
aumento del Ca2+ intracelular y activacin de la
PK-C son eventos claves en la respuesta tanto de
los linfocitos T y B. La elevacin del Ca 2+
intracelular adems de activar directamente a
enzimas, conduce a la interaccin de este metal
bivalente con la protena moduladora dependiente de calcio, denominada calmodulina; el complejo calmodulina calcio produce por interaccin
protena:protena la activacin de diversas
enzimas, entre stas la calcineurina, una
fosfoprotena-fosfatasa (serina/treonina) que
desfosforila al factor de activacin de la transcripcin (NFAT) citoslico, que bajo estas condiciones ingresa al ncleo y participa en la expresin
del gen para IL-2, citoquina vital en el proceso de
activacin de los LT. Esta va es inhibida por el
frmaco ciclosporina A (CsA), frmaco que se une
a protenas citoslicas (ciclofilinas), siendo este
complejo el inhibidor de la fosfatasa calcineurina,
impidiendo de esta manera el traspaso de la infor-
200
Sin ttulo-2
200
5/26/06, 10:25 AM
cluida o excluida de las zonas lipdicas especficas; pudiendo actuar como agente desfosforilante
que va finalizando el proceso de activacin. De
acuerdo a lo anterior, CD45 participara inicialmente desfosforilando el sitio regulador de la p56lck
y posteriormente sera excluida de las ZLE. Existen muchas familias de fosfatasas, una de stas
denominada SHP (fosfatasa que contiene dominios SH2), de la cual hay una gran variedad: SHP1, 2, etc. Este tipo de enzimas tiene la importante
propiedad de reconocer a las PTK activadas a medida que aumenta su grado de auto-fosforilacin,
y por ende de activacin, pueden unirse a stas a
travs de los dominios SH2, desfosforilando a la
PTK y por lo tanto volvindola al nivel basal. Este
tipo de mecanismos es uno de los principales frenos de la activacin de los linfocitos.
mAbs anti-TCR y simultneamente con mAbs

anti-CD28, produce una estimulacin de la proliferacin celular debido, fundamentalmente, a
la sntesis y secrecin de IL-2; producindose
tambin la sntesis y secrecin de otras numerosas citoquinas. Otro aspecto relevante en la
estimulacin de CD28 es su potenciacin en la
generacin de las zonas lipdicas especficas, lo
que resultara en una mayor concentracin de las
protenas participantes en la activacin de los
linfocitos. La importancia de B7 como coestimulador ha quedado adems de manifiesto en
numerosos sistemas experimentales in vivo, un
ejemplo demostrado por varios grupos lo constituye el trasplante de clulas tumorales no
inmunognicas, que se transforma en
inmunognicas al transfectarlas con el gen de B7.
Si bien el mecanismo de accin mediado por
CD28 no es del todo conocido, implica la
fosforilacin de su dominio citoplasmtico en la
secuencia YXXM, por quinasas de la familia src
activadas por la interaccin del TCR con el
antgeno. Esta secuencia bajo estas condiciones
puede asociarse con diversas enzimas como la
PI3-quinasa, ras y la activacin de la va de las
MAP-quinasas.
La glicoprotena CTLA-4 es altamente
homloga a CD28, ambas se unen a los mismos
ligandos, pero CTLA-4 presenta algunas diferencias: a) une a los ligandos CD80 y CD86 con
mucho mayor afinidad que CD28, aproximadamente 10 veces mayor, b) transmite una seal de
inhibicin al interior celular. La regulacin de la
expresin de CTLA-4 es un asunto crucial para
ejercer sus efectos supresores, los LT en reposo
no lo expresan y slo comienza a aparecer una
vez que stos se han activado. El extremo
citoplasmtico de esta glicoprotena, contiene la
secuencia YXXM que puede ser fosforilada por
las quinasas de la familia src; una vez fosforilado
puede interactuar especficamente con
fosfoprotena fosfatasas como la SHP-2, la cual
bajo estas condiciones se activa y cataliza la
desfosforilacin de las quinasas (src, syk, tec) y
fosfoprotenas (LAT, SLP-76) requeridas para la
transduccin de seales de los LT. Al interactuar
por lo tanto el TCR y CTLA-4, ocurrira el comienzo de la activacin celular de los LT, se
fosforila CTLA-4, estimulando la reaccin de
desfosforilacin (por su asociacin a fosfatasas)
y la terminacin de la respuesta. Actualmente,
existe un amplio estudio de la utilizacin
farmacolgica de este efecto, utilizando prote-
2.6. Las dos seales necesarias para la activacin de los LT. Como los LT CD4 controlan la
activacin de los LB, macrfagos y, en algunos
casos la activacin de los LT CD8, su propia activacin por parte del antgeno, puede representar
uno de los eventos ms importantes en la iniciacin de la inmunidad adquirida. Desde hace ya
varias dcadas atrs, se saba que la estimulacin
antgeno especfica no era suficiente para llevar a
cabo la expansin clonal de los LT. Posteriormente se demostr la presencia de una interaccin coestimuladora antgeno-independiente encargada
de aportar la necesaria segunda seal. Esta segunda seal, por lo tanto, no es dependiente del TCR
y se ha denominado seal co-estimuladora pues,
siendo esencial, no induce por s misma respuesta
alguna en los LT. La interaccin del TCR con el
antgeno solamente, sin las seales coestimuladoras accesorias puede llevar a la muerte
del linfocito o a anergia, un estado en el que la
clula no puede ser activada, aun cuando reciba
todas las seales requeridas. Por lo tanto entonces
el encuentro con el antgeno puede conducir a dos
respuestas bien diferentes: proliferacin y adquisicin de funciones efectoras o inactivacin y
muerte celular.
Entre las molculas responsables de ejercer
esta co-estimulacin aportadas por la CPA, se encuentran entre muchas otras, la protena B7 (B7.1,
B7.2 o CD80, CD86) (figura 10-2), siendo CD28
el receptor en los LT. La molcula de CD28 tiene una MM de 44 kDa, es un homodmero expresado en la mayora de los LT, virtualmente en
todos los LT CD4 y aproximadamente en el 50%
de los LT CD8. La estimulacin de los LT con
201
Sin ttulo-2
201
5/26/06, 10:25 AM
nas anlogas a CTLA-4, que compitan con B7

de la CPA, como frmacos inmunosupresores.
El proceso de activacin de los LT, incluyendo al TCR, co-receptores molculas de adhesin
y receptores de co-estimulacin; abarca un primer
evento constituido por la fosforilacin de proteinas
en residuos de tirosina y la generacin de los segundos mensajeros IP3, Ca2+ y DAG. Esto constituye el traspaso de una seal o la transduccin de
seales desde el exterior al interior celular y que
inicia a las vas bioqumicas ya sealadas, culminando con los tpicos cambios en la expresin
gentica y cambios morfolgicos y funcionales.
El bloqueo de cualquiera de estas vas ya sea por
inhibidores especficos o mutaciones que las
inactiven, provoca una significativa disminucin
a anulacin de la respuesta. Por otra parte, agentes que imiten los efectos de los segundos mensajeros como son los steres de forbol (estimuladores
de la PK-C) e ionforos de calcio (que favorecen
el ingreso de Ca2+ al interior celular), reproducen
muchos de los efectos ro abajo, iniciados por el
antgeno en contacto con el TCR. Adems, existen evidencias aportadas por la patologa
inmunolgica, en muchos casos de inmunodeficiencias combinadas severas (SCID) se ha observado que el factor deficitario corresponde a una
de las protenas o enzimas de las vas bioqumicas
sealadas; el caso ms conocido es la deficiencia
de la enzima Zap-70.
Finalmente, dada la importancia de las PTK
en diversos procesos tanto normales como patolgicos, existe en la actualidad una rama importante de la farmacologa dedicada a la interrupcin de la transduccin de seales a travs de esta
va, diseando inhibidores especficos de estas
PTK que puedan ser utilizados como frmacos.
En el caso del sistema inmune, las PTK que intervienen en el proceso de activacin se expresan en
forma prcticamente exclusiva en los linfocitos,
lo que permitira bloquear selectivamente su accin actuando como inmunosupresores.
resultado ser muy similar al de los LT, y como

veremos ms adelante, al de las clulas NK. El
BCR al igual que el TCR, cumple muchas funciones, permite la expansin proliferativa y diferenciacin de las clulas preB en clulas B maduras
y sirve tambin como receptor para internar
antgenos y presentarlos a los LT CD4 ayudadores.
Estructuralmente el BCR est compuesto de una
molcula de Ig asociada no covalentemente con
dos molculas accesorias Ig- (CD79a) e Ig-
(CD79b), las que se encuentran como
heterodmeros unidos por puentes dislfuro (figura
10-1 y 10-5a). Las inmunoglobulinas de membrana difieren de las secretadas en cuanto a que se
encuentran integradas a la membrana plasmtica,
con dominios extracelular, trans-membrana y
citoplasmtico; este ltimo puede ser muy corto,
tan slo de unos pocos aminocidos (en general
de 3 a 35/40 residuos). Aunque es factible la expresin de todos los tipos de inmunoglobulinas
como parte del BCR, son solamente mIgM y mIgD
los que se encuentran con mayor frecuencia
(aproximadamente 90%) sobre la superficie del
linfocito. En el caso de la mIgM, las sub-unidades Ig e Ig, poseen 61 y 48 residuos de
aminocidos citoplasmticos respectivamente. El
anlisis de la estructura primaria de estas sub-unidades permiti apreciar que cada una de stas poseen una copia de los dominios ITAM, abriendo
la posibilidad de la participacin de PTK ya sea
de membrana o solubles en la transmisin de la
seal bioqumica al interior celular. Mutaciones
en ambas tirosinas de los ITAM resultan en la total inactivacin de los LB. Adems del receptor,
participan en la interaccin co-receptores, CD19/
CD21, molculas de adhesin y molculas de superficie celular que pueden tambin participar en
la transduccin de seales (CD40). Se encuentran
tambin en la superficie de las clulas B, molculas que promueven la inhibicin, como CD22 y
FcRIIB1. Los co-receptores como CD19/CD21
en los LB, son de particular inters en el contexto
de la transduccin de seales mediada por el receptor antignico, puesto que contribuyen directamente a la formacin del complejo entre el receptor y el antgeno, aumentando por lo tanto la
sensibilidad de la interaccin (figura 10-5a).
3. ACTIVACIN DE LOS LINFOCITOS B

3.1. Secuencias de activacin en el BCR y subunidades asociadas. An cuando la informacin
sobre el mecanismo de activacin de los linfocitos
B est aun lejos de ser completa; el conocimiento
creciente de la estructura del receptor de antgenos
de las clulas B (BCR) y de sus sub-unidades asociadas ha ido dando paso a un mecanismo que ha
3.2. Modelo general de activacin de los LB. A

continuacin se analizar cmo la unin de un ligando especfico (antgeno) al receptor BCR, desencadena una compleja serie de eventos
bioqumicos que permitirn el desarrollo de la res-
202
Sin ttulo-2
202
5/26/06, 10:25 AM
El modelo de la activacin de los LB por lo

tanto es anlogo al de activacin a travs del TCR;
la interaccin con el antgeno favorece la activacin de PTK de la familia src, como p53/56lyn, la
que a travs de cambios conformacionales permiten la aproximacin de la PTK a los dominios
ITAM, fosforilndolos (figura 10-5b). Este hecho
entonces puede permitir el reclutamiento masivo
de la p72syk citoslica, y otras PTK, a travs ahora de la interaccin de los dominios SH2 con los
ITAM fosforilados en tirosina. Durante este proceso todas las PTK son fosforiladas y en general
en este estado se encuentran activadas y adems y
muy importante van generando sitios de
interaccin con otras enzimas que posean dominios SH2 permitiendo el traspaso de la seal. La
descripcin del papel de protenas adaptadoras
citoslicas ha sido sustancial en el mecanismo de
activacin de los LB. Una de stas denominada
BLNK/SLP-65 es una protena que posee secuencias SH2, secuencias ricas en prolina y secuencias fosforilables en tirosina, por lo cual puede
interactuar simultneamente con diversas protenas participantes en la activacin. Una vez
fosforilada BLNK/SLP-65 por la PTK syk, puede
en estas condiciones asociarse con esta quinasa, y
con otras protenas como Grb2, y FL-C1. Por lo
anterior BLNK/SLP-65 se encuentra fuertemente
asociada a la membrana inmediatamente de producida la interaccin con el antgeno, favoreciendo de esta forma la va de ras MAP-quinasas a
travs de Grb2 y la activacin por fosforilacin
de la FL-C1 y 2. Recordemos que estas
isoenzimas catalizan la hidrlisis de PIP2 y la generacin de los segundos mensajeros IP3, DAG y
Ca2+.
El papel de los co-receptores es tambin relevante, pues se encargan de estabilizar una
interaccin entre el receptor y el antgeno que puede ser muy dbil; en el caso de los LB es tambin
un hecho claro que estos mecanismos permiten la
amplificacin de la seal recibida por el BCR. El
principal co-receptor es un complejo molecular
formado por CD19 y CD21 (receptor 2 del complemento, CR2). El co-receptor CD21 une un producto proteoltico del complemento (C3d) y de esta
forma participa en conjunto con el BCR en el reconocimiento del antgeno. Adems el CD19 se
puede encontrar constitutivamente asociado al
BCR y es tambin fosforilado en su dominio intracitoplasmtico por la p53/56lyn post-contacto del
BCR con el antgeno. El co-receptor CD19 una
vez fosforilado puede reclutar a enzimas como la
Figura 10-5. Mecanismo bsico de activacin de los LB. a)

Estructura del BCR y sub-unidades asociadas (Ig-, Ig-), coreceptores CD19, CD21, CD22 y enzimas, principalmente PTK
intracelulares. b) Interaccin del BCR y estructuras asociadas
con el antgeno (unido a un producto proteoltico del complemento) que inicia los eventos de asociacin y de fosforilacin
de las secuencias ITAM y tambin de otras protenas, la activacin de protena quinasas, generacin de segundos mensajeros y traspaso de la informacin al ncleo celular. El PIP3
producido por la PI3-quinasa, permite la unin de la PTK Btk
a la membrana.
puesta funcional de los LB. Es ya un hecho establecido la participacin de diversas PTK de la familia src, como p55blk, p56lck, p53/56lyn, y p59fyn,
que tienen la posibilidad de encontrarse unidas a
la membrana plasmtica o con el BCR de LB no
estimulados (figura 10-5a). Estudios de unin in
vitro, sugieren que las src-quinasas pueden
interactuar con los receptores en reposo principalmente con la cadena Ig, a travs de una asociacin con el extremo amino-terminal de la quinasa.
Otra PTK de importancia en la transduccin de
seales de los LB es la p72 syk; esta enzima
citoplasmtica, altamente homloga a la Zap-70,
tiene tambin aqu una funcin similar. Nuevamente entonces, ni el receptor ni las sub-unidades asociadas poseen actividad enzimtica alguna, encontrndose separados los mdulos de
unin al ligando de los mdulos de transduccin
de la seal.
203
Sin ttulo-2
203
5/26/06, 10:25 AM
a los LB. El CD22 est constitutivamente asociado al BCR, por lo que su funcin est asociada a
la unin del BCR con el antgeno. En cambio
FcRIIB, slo ejerce su accin inhibitoria a travs
de la interaccin con antgenos asociados a IgG.
Lo interesante de estas protenas de membrana es
que en sus dominios intra-citoplasmticos poseen
dominios compuestos de secuencias conservadas
de aminocidos denominadas ITIM (motivos o
secuencias de inhibicin basados en tirosina del
inmuno-receptor) que consisten de dos pares de
YXXL separados por 26 aminocidos. Estos residuos de tirosina pueden ser fosforilados a travs
de la PTK lyn, la misma encargada de la activacin de los LB; es decir, la misma seal de activacin puede conducir a la regulacin negativa y de
esta forma modular la respuesta. Una vez
fosforilados los ITIM pueden asociarse con
fosfatasas: SHP-1, (fosfotirosina fosfatasas que
posee dominios SH2) o con la fosfatasa de lpidos
SHIP (inositol-polifosfato-5-fosfatasa que posee
dominios SH2). El co-receptor CD22, al igual que
los receptores de inhibicin de las clulas NK que
se analizarn ms adelante, se asocia con SHP-1
que se encarga de desfosforilar a las enzimas y
otras protenas fosforiladas en tirosina, inhibiendo
la formacin de IP3 y el proceso de activacin en
general. El receptor FcRIIB se asocia con SHIP,
cuyo efecto es regular los niveles del PIP3 de la
membrana, dando como producto (PI[3,4]P2) que
no tiene efecto regulador, impidiendo la asociacin de las protenas con dominios PH a la membrana, inhibiendo por lo tanto la funcionalidad de
los LB. El principal representante de este tipo de
molculas es la PTK Btk. El papel de CD22 es
complejo pues, independientemente, puede
interactuar con ligandos derivados del cido silico
presentes en algunas glicoprotenas, y en este caso
particular puede actuar como activador de los LB.
Son numerosas las evidencias que validan
este modelo, especialmente evidencias genticas.
Algunos tipos celulares B no poseen p72syk, observndose fosforilacin de las sub-unidades de
membrana solamente y ausencia de respuesta biolgica funcional; la eliminacin del gen para esta
enzima (knock-out del gen) provoca tambin la
eliminacin de la respuesta funcional. La
transfeccin de syk (modificacin gentica que
permite la incorporacin de syk al genoma celular) a estas clulas restaura la respuesta.
Inhibidores de PTK inhiben tambin totalmente
la funcionalidad y el tratamiento de LB con
frmacos que activen a la PK-C y eleven los nive-
PI3-kinasa, las PTK lyn y fyn y a la protena

adaptadora vav. Cada una de estas molculas tiene una activa participacin en los eventos
bioqumicos de la activacin de los LB. La PI3quinasa genera como producto, el PIP3, molcula
que puede interactuar con los sitios PH (homologa
tipo Plekstrin) que presentan protenas como la
PTK, Btk (tirosina quinasa de Bruton) y las FLC. Las secuencias PH son dominios de aproximadamente 120 aminocidos que reconocen al
PIP3 de la membrana; este reconocimiento especfico les permite a estas protenas asociarse a la
membrana plasmtica donde deben ejercer sus
funciones. La participacin de la PI3-quinasa aparece como muy importante en los LB, la enzima
est compuesta de dos sub-unidades una de 110
kDa, sub-unidad cataltica, y una sub-unidad
reguladora de 85 kDa que posee dominios SH2 y
ricos en prolina. Esta enzima que aparece fuertemente unida a la membrana post- activacin, posee en su sub-unidad reguladora regiones ricas en
prolina que son afines a los dominios SH3 de las
src PTK y regiones SH2, es decir tiene dos maneras de interactuar con elementos del BCR y activarse (Figura 9-5b). La protena adaptadora vav,
que es un factor intercambiador de nucletidos de
guanina, puede activar una vez fosforilada a la
familia de las GTPasas Rho, Rac-1, RhoA y Cdc42
que inician una de las vas de activacin de las
MAP-quinasas JNK y p38. La estimulacin de las
Rho GTPasas regula tambin la polimerizacin de
la actina necesaria para la ptima movilizacin de
Ca2+. Los co-receptores de las clulas T pueden
llegar a la proximidad del TCR a travs de la
interaccin con la misma molcula de MHC, un
mecanismo fisiolgico similar puede visualizarse
aqu, pues el entrecruzamiento en la superficie del
BCR con CD19/CD21, puede lograrse por la
unin a complejos inmunes que contengan tanto
el antgeno y los fragmentos proteolticos del complemento que se unan a CD21. El desdoblamiento por lo tanto del PIP2, la consecuente elevacin
del Ca 2+ intracelular y la activacin de las
isoenzimas de la PK-C y de la calcineurina son
parte de los mecanismos ms importantes en la
induccin de cambios en la expresin gentica en
los LB. Existen claros antecedentes sobre el agrupamiento de muchas de estas protenas y enzimas
en zonas lipdicas especficas, por lo cual este proceso tambin operara en la activacin de los LB.
Otras protenas de membrana de importancia en la transduccin de seales en los LB son
CD22 y FcRIIB; ambos regulan negativamente
204
Sin ttulo-2
204
5/26/06, 10:25 AM
lula blanco, provocan la activacin o inhibicin

de su funcin. En un captulo posterior se analizarn en detalle los mecanismos que explican la
citotoxicidad, haciendo ahora slo referencia a que
sta puede ser de dos tipos: 1) citotoxicidad natural, lisa a clulas especialmente tumorales y transformadas por virus y 2) citotoxicidad dependiente de anticuerpos (ADCC) a travs del receptor
CD16 que reconoce a las clulas blanco recubiertas
por anticuerpos del tipo IgG.
les intracelulares de Ca2+, reproduce en gran medida los efectos mediados por el antgeno especfico. La deficiencia gentica de CD19, CD19-/-,
provoca una disminucin de la respuesta humoral
y la deficiencia gentica de SHP-1, presenta una
estimulacin de la respuesta. La deficiencia de
lyn, provoca una compleja alteracin pues altera
tanto los procesos de activacin como de inhibicin. La alteracin gentica de Btk provoca la patologa agamaglobulinemia ligada al cromosoma
X humano y una inmunodeficiencia ligada al
cromosoma X en el ratn. En general la alteracin de cualquiera de las vas sealadas va a perturbar la funcionalidad de los LB, poniendo en
evidencia la importancia de su funcionamiento
integral.
4.1. Modelo de activacin de las clulas NK. La

activacin de las clulas NK ms conocida hasta
ahora, es la que ocurre a travs de la interaccin
de CD16 con clulas blanco recubiertas con IgG.
Como se puede apreciar de la Figura 10-1, el receptor CD16 est asociado a sub-unidades; stas
pueden ser de tipo , o bien componentes del complejo CD3. Se han descrito componentes del complejo CD3 asociados a este receptor, lo que viene
a representar una cierta analoga con el receptor
de las clulas T (TCR). Considerando adems que
estas sub-unidades poseen dominios ITAM susceptibles de ser fosforiladas, el mecanismo de activacin implica tambin un alto grado de
fosforilacin de protenas similar al de los LT. Se
han descrito en las clulas NK enzimas tales como:
PTK de la familia src, syk; FL-C de tipo 1, 2; la
va de ras y MAP-quinasas y la presencia de protenas adaptadoras como LAT, SLP-76, ya descritas, por lo que se desprende un modelo de activacin celular muy similar a los ya sealados para
los linfocitos B y T. Una vez que el receptor CD16
reconoce a las clulas blanco, a travs del fragmento Fc de IgG, se inicia la maquinaria
bioqumica de activacin de las clulas NK. La
cascada de fosforilacin implica la generacin
posterior de los mismos segundos mensajeros IP3,
DAG y Ca2+ (figura 10-6).
La descripcin de receptores de inhibicin
en las clulas NK ha sido uno de los ms importantes aportes de los ltimos aos a la comprensin del mecanismo de accin de la citotoxicidad
de stas clulas. Estos receptores, que reconocen
a las molculas de MHC-I, especficamente a algunas secuencias proticas conservadas de estos
complejos, son bsicamente de dos tipos o familias diferentes: a) los denominados KIR (killer
cell inmunoglobulin-like receptors), y los LIR
humanos (leukocyte immunoglobulin-like
receptors) que son receptores como su nombre
lo dice de estructura extracitoplasmtica similar a
las inmunoglobulinas; b) protenas del tipo de las
4. ACTIVACIN DE LAS CLULAS NK

Las clulas NK (natural killer o agresoras naturales) son una tercera poblacin de linfocitos,
diferentes a los linfocitos B y T, pertenecientes al
sistema inmune innato. Son una sub-poblacin
celular altamente heterognea que se ha caracterizado en base a su funcin, fenotipo y morfologa:
a) funcin, pueden lisar en forma espontnea una
amplia variedad de clulas (denominadas en general clulas blanco), tales como clulas tumorales,
clulas transformadas por virus e infectadas por
bacterias o parsitos; secretan adems un conjunto determinado de citoquinas, especialmente IFN. b) Fenotipo, expresan mayoritariamente el
fenotipo TCR -, BCR -, CD3 -, CD16 +, CD56 +;
CD16, uno de los marcadores ms representativos, es el receptor de baja afinidad que reconoce a
la fraccin Fc de IgG, por lo que se denomina tambin FcIIIR (figura 10-1). c) Morfologa, corresponden a linfocitos granulares grandes. Una de las
caractersticas ms conocidas de las clulas NK
es la eficiencia de su accin citoltica ejercida sobre clulas blanco que carecen parcial o completamente de la expresin de molculas MHC-I, es
decir no dependeran de la expresin de este complejo; sin embargo, como se podr apreciar mas
adelante, este concepto est comenzando a cambiar. La heterogeneidad de las clulas NK se manifiesta en que las sub-poblaciones pueden expresar diferentes molculas de activacin y de inhibicin de su funcionalidad; es decir, molculas
que al interaccionar por ejemplo in vitro, con
anticuerpos monoclonales o a travs de sus
ligandos naturales especficos presentes en la c-
205
Sin ttulo-2
205
5/26/06, 10:25 AM
lectinas, como CD94-NKG2 humano y Ly-49

murino. Mientras los KIR y Ly49 pueden reconocer e interactuar con mltiples MHC-I del tipo clsico (A,B,C), los receptores CD94-NKG2 lo hacen con MHC-I no clsicos (HLA-E). Estos receptores poseen en sus dominios intracitoplasmticos secuencias de inhibicin del tipo
ITIM, ya descritas para otros receptores. Al
interactuar la clula NK con la clula blanco, si la
clula NK posee receptores de inhibicin que reconocen a su ligando respectivo en la clula blanco, se fosforilan los resduos de tirosina de estas
secuencias de inhibicin a travs de las PTK de la
familia src; una vez fosforilados los ITIM pueden
asociarse con fosfoprotena fosfatasas SHP-1,
SHP-2 que se encargan de desfosforilar a las protenas quinasas activadas e inhibir el proceso general de fosforilacin caracterstico de la activacin celular, inhibiendo por lo tanto la
funcionalidad de las clulas NK. Es decir, el proceso de activacin de las clulas NK, al igual que
el de los linfocitos T y B, implica activacin de
quinasas y fosforilacin de protenas. El proceso
de inhibicin mediado por los receptores recin
descritos, si bien requieren PTK para la
fosforilacin de las secuencias ITIM, activan a
fosfatasas que frenan el proceso de activacin. La
figura 10-1 muestra dos ejemplos de receptores
de inhibicin.
Una complejidad adicional la representa la
existencia de receptores del tipo de los de inhibicin recin descritos, pero que carecen del sitio
ITIM, y se comportan por lo tanto como receptores de activacin de las clulas NK al interactuar
con las molculas de MHC-I. Uno de ellos el
CD94-NKG2C, tiene asociada la sub-unidad denominada DAP12 (tambien llamada KARAP), que
contiene una secuencia de activacin ITAM. De
este modo, las molculas MHC-I pueden ser reconocidas por tres diferentes grupos de
inmunoreceptores: TCR, que reconoce al antgeno
presentado por stas moleculas; CD8, co-receptor que reconoce a secuencias de aminocidos
conservadas de las molculas MHC-I y los receptores recin descritos, que tambin reconocen secuencias de estas molculas que pueden inhibir o
activar la respuesta funcional de las clulas NK.
Estos ltimos receptores presentan adems una
distribucin clonal en las clulas NK, que explica la heterogeneidad de stas clulas.
Por lo que se ha analizado hasta ahora, se
desprende un importante papel de los complejos
MHC-I en la respuesta de las clulas NK. Recien-
temente se han descrito una de las ms importantes familias de receptores de activacin que vienen a responder muy satisfactoriamente al requerimiento principal de las clulas NK, es decir actuar sobre clulas deficientes o que carecen por
completo de los complejos MHC-I. Estos receptores que estn implicados en la citotoxicidad natural se han denominado justamente receptores
de la citotoxicidad natural (NCR) y son : NKp46
(Figura 9-1), NKp44 y NKp30; su estructura externa es de la familia de las inmunoglobulinas y
en su extremo citoplasmtico se encuentran asociados a subunidades del tipo de CD3 y DAP12,
ambas poseen secuencias ITAM. Los NCR NKp46
y NKp30 se encuentran presentes exclusivamente
en las clulas NK humanas, son los nicos con
esta caracterstica y por lo tanto son tambin los
nicos marcadores representativos de este tipo de
clulas. El receptor NKp44 se expresa en respuesta
a IL-2 y est tambin presente en los LT. Si bien
no se les conoce con precisin sus ligandos respectivos, se sabe que pueden actuar especialmente sobre clulas tumorales, transformadas por virus e incluso tambin sobre clulas autlogas normales, siendo su principal elemento regulador, la
presencia o ausencia de los receptores de inhibicin.
Por lo tanto, las clulas NK poseen un repertorio de receptores de activacin y un repertorio
de receptores de inhibicin; ahora, se ha observado que al enfrentarse a una clula blanco que posea ligandos para ambos tipos de receptores, prima la inhibicin. Si se pierde esta propiedad
inhibitoria, principalmente por la menor o nula
expresin de los complejos MHC-I, por parte de
la clula blanco y est adems presente el receptor de activacin adecuado, en las clulas NK,
ocurrir la lisis de la clula blanco. Los receptores de inhibicin tambin han sido descritos en
los LT, por lo que representan uno de los principales factores de control de la activacin de los
linfocitos.
La descripcin de receptores de inhibicin
en las clulas NK ha sido uno de los ms importantes aportes de los ltimos aos. Estos receptores, que reconocen a las molculas MHC-I,
especficamente algunas secuencias conservadas
de estos complejos, son bsicamente de dos tipos
o familias diferentes: a) los denominados KIR
(killer cell inmunoglobulin-like receptors), y los
LIR humanos (leukocyte immunoglobulin-like
receptors) que son receptores como su nombre
lo dice de estructura extracitoplasmtica similar a
206
Sin ttulo-2
206
5/26/06, 10:25 AM
Figura 10-6. Mecanismo bsico de activacin de las clulas NK. Tipos celulares participantes en el mecanismo Citotoxicidad
dependiente de anticuerpos (ADCC): clulas NK que poseen el receptor CD16 y sub-unidades y ; las enzimas protena quinasas
PTK intracelulares, protenas adaptadoras y otras son las que aparecen descritas en las figuras 10-4 y 10-5. La clula blanco en este
caso, es reconocida por un anticuerpo (IgG), que acta como puente entre esta clula y la clula NK.
las inmunoglobulinas. b) Heterodmeros como

CD94-NKG2 humano y el homodmero Ly-49
murino, que son lectinas del tipo C. Mientras los
KIR y Ly49 pueden interactuar con mltiples
MHC-I clsicos (A,B,C), los heterodmeros CD94NKG2 lo hacen con MHC-I no clsicos (HLA-E).
Estos receptores poseen en sus dominios intracitoplasmticos secuencias ITIM. Los residuos de
tirosina de estas secuencias pueden ser fosforiladas
al interactuar el receptor con su ligando, a travs
de las PTK de la familia src, o bien por el inicio
de una reaccin de activacin de los linfocitos a
travs de un receptor de activacin, en ambos
casos una vez fosforilados los ITIM pueden asociarse con fosfoprotena fosfatasas SHP-1, SHP2 que se encargan de desfosforilar a las protenas
activadas e inhibir el proceso, inhibiendo por lo
tanto la funcionalidad de las clulas NK. La figura 10-1 muestra dos ejemplos de receptores de inhibicin. Algunos receptores de inhibicin tienen
truncado el sitio ITIM, y se comportan como re-
ceptores de activacin, uno de ellos el CD94NKG2C, tiene asociada la molcula DAP12 (tambin llamada KARAP), que contiene una secuencia ITAM. De este modo, las molculas MHC-I
pueden ser reconocidas por tres diferentes grupos
de inmunorreceptores: TCR, CD8 y los receptores recin descritos, que pueden inhibir o activar
la respuesta. Estos ltimos receptores presentan
adems una distribucin clonal en las clulas NK.
Recientemente se han descrito una de las ms
importantes familias de receptores de activacin
que vienen a responder muy satisfactoriamente al
requerimiento principal de las clulas NK, es decir actuar sobre clulas que son deficientes o que
carecen por completo de los complejos MHC-I.
Estos receptores que estn implicados en la
citotoxicidad natural se han denominado justamente receptores de la citotoxicidad natural (NCR)
y son : NKp46 (figura 10-1), NKp44 y NKp30; su
estructura externa es de la familia de las
inmunoglobulinas y en su extremo citoplasmtico
207
Sin ttulo-2
207
5/26/06, 10:25 AM
se encuentran asociados a subunidades del tipo de

CD3 y DAP12, ambas poseen secuencias ITAM.
Los NCR NKp46 y NKp30 se encuentran presentes exclusivamente en las clulas NK humanas,
son los nicos con esta caracterstica y por lo tanto son tambin los nicos marcadores representativos de este tipo de clulas. El receptor NKp44
se expresa en respuesta a IL-2 y est tambin presente en los LT. Los NCR al ser activados por
anticuerpos monoclonales presentan un aumento
en la concentracin intracelular de calcio, aumento de la citotoxicidad y de la secrecin de
citoquinas. Si bien no se les conoce con precisin
sus ligandos respectivos, se sabe que pueden actuar sobre clulas tumorales y tambin sobre clulas autlogas normales, siendo su principal elemento regulador, la presencia o ausencia de receptores de inhibicin. Por lo tanto, las clulas NK
poseen un repertorio de receptores de activacin
y un repertorio de receptores de inhibicin; al enfrentarse con una clula blanco que posea ligandos
para ambos tipos de receptores, prima la inhibicin; si se pierde esta propiedad, principalmente
por menor o nula expresin de los complejos
MHC-I y est adems presente el receptor de activacin adecuado, ocurrir la lisis de la clula blanco. Los receptores de inhibicin tambin se han
descrito en los LT, por lo que representan uno de
los principales factores de control de la activacin
de los linfocitos.
LECTURAS SUGERIDAS
Dustin M, Chan, A., Signaling takes shape in the
immune system. Cell, 103, 283-294, 2000.
Janes, P., Ley, S., Magee, A. & Kabouridis, P.S.,
The role of lipid rafts in T cell antigen receptor
(TCR) signaling. Semin. Immunol. 12, 23-34,
2000.
Kane, L. P., Lin J. & Weiss, A., Signal
transduction by the TCR for antigen. Curr. Opin.
Immunol. 12, 242-249, 2000.
Kelly, M., & Chan, A., Regulation of B cell
function by linker proteins. Curr. Opin. Immunol.
12, 267-275, 2000.
Lanier, L., NK cell receptors. Annu. Rev.
Immunol. 16, 359-393, 1998.
208
Sin ttulo-2
208
5/26/06, 10:25 AM

Captulo 11
CITOQUINAS
Rodrigo Naves P. y Mara Rosa Bono M.
1. Introduccin
2. Propiedades generales de las
citoquinas
3. Receptores de las citoquinas y
mecanismos de transduccin de
seales
3.1. Receptores de citoquinas
3.2. Transduccin de seales
4. Principales actividades biolgicas
de las citoquinas
4.1. Inmunidad innata
4.2. Citoquinas y respuesta inmune
4.2.1. Citoquinas y diferenciacin
de clulas linfoides
4.2.4. Respuesta inmune especfica
mediada por clulas
4.3. Citoquinas y hematopoyesis

4.3.2. Otras citoquinas estimuladoras de la hematopoyesis
5. Quimioquinas
5.1. Quimioquinas en la diferenciacin linfocitaria
5.2. Quimioquinas en la recirculacin
de los linfocitos a travs de los
rganos linfoides secundarios
5.3. Quimioquinas en el "homing" de
los linfocitos a sitios efectores
perifricos
5.4. Quimioquinas y enfermedades
5.5. Quimioquinas y terapia
209
Sin ttulo-2
209
5/26/06, 10:25 AM
210
Sin ttulo-2
210
5/26/06, 10:25 AM
RESUMEN
En este captulo se describen algunas de las funciones de las citoquinas relacionadas con la
respuesta inmune, en conjunto con las caractersticas propias de cada citoquina. La larga lista de
citoquinas y quimioquinas que se mencionan representa slo a aquellas ms estudiadas. Las
posibilidades que existen hoy en da para identificar y aislar nuevos tipos celulares como son las
clulas T de memoria u otras, combinadas con las tcnicas de biologa molecular y el anlisis de
un gran nmero de genes homlogos, ha llevado a definir nuevas citoquinas que de otra manera
sera imposible detectar. Por lo tanto es imposible pretender, hoy en da, tener una visin acabada
de las citoquinas y sus funciones. La produccin de ratones knock out y transgnicos para las
citoquinas, sus receptores y las molculas implicadas especficamente en la transduccin de
seales de las citoquinas es prometedora para el entendimiento de las funciones de las citoquinas.
Sin embargo las propiedades intrnsecas de las citoquinas, tales como el pleiotropismo y su
redundancia, la compleja red de interacciones clula-citoquina que producen, hace difcil pensar
que se lograr en un futuro cercano entender la regulacin a nivel de los organismos vivos.
Las citoquinas han sido implicadas en numerosas patologas las cuales a menudo se
encuentran relacionadas no slo con la respuesta inmune sino con otros sistemas tales como, el
sistema nervioso central o el sistema endocrino. Muchas de las citoquinas enumeradas tienen
potencial uso clnico. Sin embargo, a pesar de la enorme cantidad de trabajos que se han realizado
con las citoquinas, de la explosin de conocimientos de los ltimos aos, y de las importantes
funciones que ellas regulan, su uso en clnica humana actualmente ha sido autorizado slo para
un nmero muy reducido de citoquinas.
quimioquinas las que en total suman actualmente

tantas como el resto de las citoquinas. Las
quimioquinas sern tratadas en forma separada en
este captulo debido a que poseen propiedades
particulares y a la importancia que han ido
adquiriendo. Hoy en da existe una gran cantidad
de conocimientos acerca de los mecanismos de
accin de las citoquinas, sin embargo, sus
acciones in vivo no son bien comprendidas debido
a la complejidad de las numerosas interacciones
celulares en las que ellas participan.
En la tabla 11-1 se muestra una cronografa
del descubrimiento de las citoquinas.
1. INTRODUCCIN
Las citoquinas son protenas solubles
producidas en forma transitoria por efecto de un
estmulo. stas representan el lenguaje universal
de las clulas, y gracias a ellas las clulas
reconocen lo que est ocurriendo a su alrededor y
establecen en consecuencia una respuesta. Las
citoquinas participan, entre otros, en la
proliferacin y diferenciacin celular, la
hematopoyesis, la actividad microbicida, la
reaccin inflamatoria, la respuesta inmune
especfica y no especfica, y en procesos
relacionados con el desarrollo de los organismos
vivos. Las citoquinas regulan la respuesta
inmune induciendo o inhibiendo la produccin
de otras citoquinas y sus respectivos receptores
as como activando mecanismos de transduccin
de seales en clulas blanco o sobre ellas mismas.
El nmero de citoquinas descubiertas ha ido en
continuo aumento en los ltimos aos, as como
los conocimientos en cuanto a los mecanismos
regulatorios de stas. Un conjunto particular de
citoquinas corresponde a la familia de las
2. PROPIEDADES GENERALES DE LAS

CITOQUINAS
La mayor parte de las citoquinas han sido
caracterizadas en cuanto a peso molecular,
secuencia de DNA y aminocidos, e incluso los
genes que codifican para ellas han sido localizados
a nivel de cromosomas tanto en humanos como
en ratn. Los receptores de las citoquinas y sus
211
Sin ttulo-2
211
5/26/06, 10:25 AM
Tabla 11-1. Descubrimiento de las citoquinas
1957
Descubrimiento de la primera citoquina, IFN-.
1960-1970
Descripcin de sobrenadantes con diferentes actividades biolgicas.
1966
Se descubri la primera linfoquina, MIF, factor producido por los linfocitos

que Inhibe la migracin de los macrfagos in vitro
1969
Definicin de linfoquinas y monoquinas.

Terminologa inexacta.
1974
Se acu el trmino de citoquina.
1979
Definicin de interleuquinas, IL-1 e IL-2.
Principios de 1980
Purificacin de citoquinas por mtodos bioqumicos
1981
Se utiliz por primera vez una citoquina en clnica humana, IFN-.
Mediados de 1980
Clonamiento mediante tcnicas de biologa molecular de las citoquinas.
1985
Se utiliz IL-2 en clnica humana.
1989
Clonamiento de MIF
1990
Se clonaron los receptores para varias citoquinas
1993
Mecanismos de transduccin de seal de las citoquinas.

Caracterizacin de PTK y STAT asociadas a las respuestas de las
distintas citoquinas.
mecanismos de accin molecular han sido tambin

ampliamente estudiados en los ltimos aos. En
la mayor parte de las investigaciones se utiliza la
citoquina recombinante la que, en general, muestra
las mismas funciones que las citoquinas
producidas en forma natural.
Las principales caractersticas de las
citoquinas se muestran en la tabla 11-2.
Cuando se descubrieron las citoquinas se
pens que ellas estaban relacionadas nicamente
con la comunicacin entre los leucocitos y de all
que se les dio el nombre de interleuquinas para
lo cual se utiliz la abreviatura IL seguida de un
nmero (por ejemplo IL-1, IL-2, etc.). Pero luego
se demostr que la funcin biolgica de estos
factores solubles afectaba a clulas de otros
orgenes. Fue entonces que se acu el trmino
ms general de citoquinas. Sin embargo, no todas
las citoquinas son denominadas segn esta
terminologa y en muchos casos se utiliza ms bien
una abreviatura relacionada con la funcin de la
molcula (por ejemplo, TNF significa factor de
necrosis tumoral en ingls, primera funcin
asociada a esta citoquina). Adems existe una
categora especial de citoquinas, las quimioquinas, las cuales tienen propiedades quimiotcticas hacia diferentes tipos celulares, y poseen
caractersticas especiales que las distinguen de las
citoquinas. Por esta razn, y por la relevancia que
ellas tienen actualmente, sern discutidas en una
seccin separada.
Las citoquinas son factores proteicos
solubles, producidos transitoriamente frente a un
estmulo. La produccin de citoquinas es
controlada a nivel transcripcional y existe un
segundo nivel de control dado por la inestabilidad
de los mRNA. La accin de las citoquinas es local, pudiendo en algunos casos, ejercer su funcin
sobre la misma clula productora de la citoquina
(actividad autocrina) o sobre clulas vecinas
(actividad paracrina). En algunos casos pueden
tener actividad endocrina cuando son producidas
en grandes cantidades y pasan a la circulacin.
En general, las citoquinas se encuentran en
estado de monmeros, pero en algunos casos la
forma activa est conformada por dmeros o
trmeros de la misma molcula. Esta caracterstica
de las citoquinas es importante, ya que se piensa
212
Sin ttulo-2
212
5/26/06, 10:25 AM
213
Sin ttulo-2
213
5/26/06, 10:25 AM
Tamao
17-18 kDa
14-17 kDa
14-30 kDa
15-19 kDa
Citoquina
IL-1IL-1-
IL-2
IL-3
IL-4
Linfocitos Th2 CD4+, algunas T

CD8+, mastocitos, estroma de
mdula sea.
Linfocitos T
Linfocitos T
Monocitos/macrfagos,
clulas de Langerhans,
dendrticas, linfocitos T, B, NK,
LGL, endoteliales,
msculo, fibroblastos, epitelio
tmico, astrocitos, microglia,
glioma, keratinocitos.
Fuente
Linfocitos T
Linfocitos B
Progenitores
hematopoyticos:
Linfocitos B
Monocitos
NK
Linfocitos B
Linfocitos T
Hipotlamo
Hgado
Msculo
Timocito
Endotelial
Clula Blanco
Cambio de clase de Ig a
IgE, aumento MHC-II.
Proliferacin y diferenciacin.
Proliferacin y diferenciacin.
Proliferacin
Activacin
Proliferacin, produccin de
citoquinas
Proliferacin, activacin
Proliferacin, sntesis de
anticuerpos
Coestimulador
Activacin, inflamacin,
coagulacin
Fiebre
Protenas fase aguda
Catabolismo
Efecto sobre cada

clula blanco
Tabla 11-2. Caractersticas de las citoquinas
Proliferacin de clulas T
activadas con PHA, en presencia
de anti-IL-2 o anti-IL-2R.
Estimulacin de colonias
eritroides, granuloides y
mieloides en mdula sea.
Proliferacin de lneas celulares

humanas TF-1, MO7e o AML193.
Proliferacin de linfocitos T
activados, de lneas celulares
dependientes de IL-2 o de
linfocitos B coestimulados con
anti-IgM.
Activacin de timocitos o lneas

celulares T.
Induccin de PGE2 en
fibroblastos.
Bioensayo
214
Sin ttulo-2
214
5/26/06, 10:25 AM
20-28 kDa
6-8 kDa
30-40 kDa
17-40 kDa
IL-8
IL-9
IL-10
22-29 kDa
IL-6
IL-7
40-50 kDa
IL-5
Th0 y Th2 murinas, linfocitos T

CD4+ y CD8+ humanos, linfocitos
B Ly-1+ murinos, monocitos,
Linfocitos Th2 activados por IL-2,

linfoma de Hodgkin's.
Monocitos, linfocitos,
granulocitos, fibroblastos,
endoteliales, epiteliales,
keratinocitos, hepatocitos.
Clulas del estroma de mdula

sea, timo o bazo. Fibroblastos.
Linfocitos T y B, macrfagos,
estroma de mdula sea,
fibroblastos, keratinocitos,
astrocitos, endoteliales.
Linfocitos Th2 CD4+, mastocitos

y eosinfilos.
Proliferacin, diferenciacin y
activacin
En ratn, coestimulador de
proliferacin de linfocitos B
activados. Aumenta la sntesis
de IgA en linfocitos B maduros.
Estimula la expresin de
molculas de adhesin.
Proliferacin
Quimiotaxis y activacin
Macrfagos
Proliferacin de lneas T
linfoblastoides humanas
estimuladas con PHA e IL-4.
Quimiotaxis o activacin de
neutrfilos
Proliferacin de precursores de
linfocitos B.
Proliferacin de lnea celular B9.

Aumento de la secrecin de Ig
en lneas B linfoblastoides.
Diferenciacin de eosinfilos.
Proliferacin de TF-1.
de CD23, IgM o MHC-II en

clulas B obtenidas de
amgdalas.
Proliferacin de MO7. Aumento
Inhibe la produccin de citoquinas. Inhibicin de la sntesis de IFNInhibe expresin de

por clones Th1 activados con
MHC-II.
mitgenos o antgeno o por
Linfocitos T
Proliferacin
Mastocitos
Proliferacin
Precursores eritroides Proliferacin
Leucocitos
Progenitores de
Proliferacin y diferenciacin
linfocitos B.
Linfocitos T maduros Proliferacin y diferenciacin
Timocitos
Coestimulador
Linfocitos B maduros Proliferacin
Hgado
Protenas fase aguda
Linfocitos B
Eosinfilos
Mastocitos
Macrfagos
Endoteliales
Inhibicin de activacin.
215
Sin ttulo-2
215
5/26/06, 10:25 AM
IL-14
60 kDa
17 kDa
IL-13
Linfocitos T y
tumores de clulas B.
Linfocitos T
activados
Heterodimero Macrfagos, linfocitos B y

formado por
lneas celulares B
2 cadenas de linfoblastoides.
35 y 40 kDa.
IL-12
Fibroblastos estimulados con IL-1,

lneas celulares de estroma de
mdula sea.
23 kDa
IL-11
macrfagos, keratinocitos.
Promueve la proliferacin
en combinacin con anti-Ig
o anti-CD40. Estimula la secrecin
de IgM, IgE e IgG4. Aumenta la
expresin de CD23. Prolonga la
sobrevida.
Aumenta la expresin de MHC-II
y CD23.
Induce produccin de IFN-

Coestimulador de la proliferacin.
Induce produccin de IFN-
Aumenta la actividad NK y ADCC.
Estimula la proliferacin y
diferenciacin.
Proliferacin
Inhibicin de adipognesis.
Proliferacin
Proliferacin y activacin
Proliferacin
Proliferacin
Linfocitos B activados Estimula la proliferacin.

Inhibe la sntesis de Ig.
Monocitos
Linfocitos B
LTh1
NK
Linfocitos T
Progenitores
hematopoyticos
multipotencial,
progenitores de
megacariocitos y
macrfagos.
Plasmocitomas.
Pre-adipocitos
Linfocitos B
Timocitos
Mastocitos
Proliferacin de linfocitos B
activados con
Staphyloccus aureus.
Proliferacin de clulas B
humanas co-estimuladas con
anti-IgM o anti-CD40
Estimulacin de la produccin
de IFN- por clulas de bazo.
Proliferacin de plasmocitomas
murinos dependientes de IL-6,
tal como T1165.
clulas mononucleares de sangre

perisfrica activadas.
Proliferacin de lnea celular
mastoctica MC/9 murina
216
Sin ttulo-2
216
5/26/06, 10:25 AM
45-90 kDa
22 kDa
GMCSF
M-CSF
15 kDa
IL-17
21 kDa
16-17 kDa
IL-16
G-CSF
14-15 kDa
IL-15
Mltiple incluyendo linfocitos,

monocitos, fibroblastos, clulas
epiteliales, clulas endoteliales,
mioblastos y osteoblastos.
Macrfagos, fibroblastos, clulas

endoteliales, estroma de mdula
sea.
Linfocitos T, macrfagos,
fibroblastos y clulas endoteliales
LT activador
Linfocitos T
Monocitos y clulas epiteliales.

El mRNA es encontrado en una
amplia variedad de tipos celulares.
Progenitores de
macrfagos y
macrofgos
Precursores de
neutrfilos.
Progenitores
hematopoyticos
Cl. Endoteliales
Progenitores
hematopoyticos
Granulocitos
Monocitos
Endoteliales
Eritrocitos
Megacariocitos
Linfocitos T
Estroma de mdula
sea, clulas
endoteliales y
fibroblstos
Monocitos
Eosinfilos activados
Linfocitos T CD4+
LAK
Linfocitos T
Factor de sobrevida, proliferacin,

diferenciacin
y activacin.
Proliferacin, diferenciacin y
activacin.
Estimular la proliferacin, en
sinergia con IL-3
Proliferacin y migracin.
Diferenciacin y activacin
Diferenciacin y activacin
Proliferacin
Proliferacin
Proliferacin
Proliferacin
Proliferacin y sobrevida
Induce produccin de IL-6, IL-8, GCSF y PGE2
Quimiotaxis. Aumento expresin de

IL-2R y MHC-II.
Quimiotaxis
Quimiotaxis
Proliferacin de CTL.
Generacin de linfocitos T
citotxicos especficos.
Estimulacin de la proliferacin.
Formacin de colonias en agar

blando a partir de mdula sea.
Formacin de colonias en agar

blando a partir de mdula sea.
No existe un bioensayo
especfico.
La formacin de colonias en
agar blando con lneas celulares
provee una estimacin de la
actividad.
Quimiotaxis de linfocitos T
CD4+.
Proliferacin de linfocitos T
activados.
217
Sin ttulo-2
217
5/26/06, 10:25 AM
52 kDa
TNF-
20-26 kDa
IFN-
20-25 kDa
16-27 kDa
IFN-
IFN-
28-36 kDa
SCF
(kit
ligand)
Monocitos y macrfagos
activados, muchos otros tipos
celulares incluyendo linfocitos T,
B y fibroblastos
Linfocitos T y NK
Fibroblastos y clulas epiteliales
Linfocitos, monocitos y
macrfagos
Estroma de mdula sea, hgado,

cerebro, rin, pulmn, placenta,
fibroblastos, oocitos, testculos.
Mltiples tipos
celulares
Linfocitos T y B,
macrfagos y NK.
Endoteliales
Fibroblastos
Mltiples tipos
celulares
Mltiples tipos
celulares
Mltiples tipos
celulares
Mastocitos
Progenitores
hematopoyticos
Gnadas
Precursores mieloides
y linfoides
Mediador de respuestas
inflamatorias e inmunes. Regula la
proliferacin y diferenciacin.
Citotxico para clulas tumorales.
Activacin, proliferacin y
diferenciacin
Proliferacin
Proliferacin
Resistencia a virus, inhibicin de la
proliferacin, aumento de MHC-I y
MHC-II.
Resistencia a virus Inhibicin de la

proliferacin
Aumento de MHC-I
Resistencia a virus Inhibicin de la

proliferacin
Aumento de MHC-I
Desarrollo
Desarrollo
Proliferacin
Desarrollo
Citotoxicidad en la lnea celular

de ratn.L929.
Inhibicin del efecto citoptico

de EMCV, VSV o SFV en lneas
celulares epiteliales o en la lnea
celular L929 de ratn.
Inhibicin de la proliferacin en
DAUDI.

DAUDI.

DAUDI.
Acta en sinergia con factores

estimuladores de colonias en
ensayos realizados en agar
blando a partir de clulas de la
mdula sea.
218
Sin ttulo-2
218
5/26/06, 10:25 AM
8 kDa
MIP-1
8-18 kDa
25 kDa
MCP-1
TGF-
MIP-1a 7.8 kDa
Clulas ectodrmicas, monocitos,

rin, glndulas duodenales
6 kD
EGF
Plaquetas y la mayor parte de las

clulas nucleadas
Monocitos, linfocitos T
fibroblastos, clulas endoteliales,
msculo liso y keratinocitos.
Linfocitos T, B y macrfagos
Linfocitos T y B, clulas de
Langerhan, neutrfilos y
macrfagos
Linfocitos T y B activados
TNF- 25 kDa
(Linfoto
xina)
Estimula proliferacin
Mediador de respuestas
inflamatorias e inmunes. Regula la
proliferacin y diferenciacin.
Citotxico para clulas tumorales.
Mltiples tipos
celulares
Monocitos
Basfilos
Leucocitos
Clulas mieloides
Inhibicin de la proliferacin
Quimiotaxis y activacin
Activacin
Quimiotaxis
Estimulacin de la proliferacin
Linfocitos B, T, NK y Quimiotaxis
eosinfilos
Clulas troncales
Inhibicin de la proliferacin
Clulas epiteliales
Mltiples tipos
celulares
Inhibicin del crecimiento de la

lnea celular MV-1-Lu.
Quimiotaxis para monocitos o

basfilos.
Antagoniza los efectos de MIP1a. Aumenta la formacin de

colonias hematopoyticas junto
con GM-CSF.
Quimiotaxis para eosinfilos
Proliferacin de la lnea de
carcinoma A431
Citotoxicidad en la lnea celular

de ratn L929.
que la forma activa u oligomrica de las citoquinas

induce la oligomerizacin del receptor, es decir,
pone en contacto o aproxima las diferentes
subunidades que conforman el receptor funcional.
Este reordenamiento en la membrana celular produce la activacin de protenas que se encuentran
en forma latente en el citoplasma, desencadenando
una cascada de reacciones que lleva a los efectos
que se les conoce a las citoquinas.
Las citoquinas son pleiotrpicas y
redundantes lo que quiere decir que una citoquina
puede ejercer una actividad funcional sobre varios
tipos celulares y que una determinada funcin puede
ser realizada por diferentes citoquinas,
respectivamente. Las citoquinas en general son
producidas por una gran variedad de clulas, como
es el caso de la IL-1 la cual es producida por todas
las clulas nucleadas. Por otra parte, los linfocitos T
y los macrfagos son las clulas que producen la
mayor diversidad de citoquinas, aunque casi
cualquier clula es capaz de producir citoquinas ante
determinados estmulos.
La produccin de una citoquina desencadena
variadas reacciones. Induce la secrecin de al
menos otra citoquina, puede suprimir la actividad
de otras citoquinas o bien puede inducir una
cascada de citoquinas. La cantidad de citoquina
producida tiene relacin con la actividad biolgica
de ella misma. A menudo, las citoquinas actan
en sinergia o en forma antagnica. Por otra parte,
una citoquina puede inducir la expresin de su
propio receptor en la clula que la est secretando
o en clulas vecinas, o bien puede inducir la
expresin de un receptor para otra citoquina. Las
propiedades de las citoquinas demuestran que
existe una red de interacciones celulares muy
compleja y dificil de estudiar en los organismos
vivos. Por esta razn, y a pesar de tener una enorme
cantidad de conocimientos acerca de una citoquina
particular, su utilizacin teraputica es hoy en da
muy limitada.
extracelular enviada por el ligando hacia el interior de la clula. La tabla 11-3 muestra las
caractersticas de los receptores para las pricipales
citoquinas, as como las tirosinas kinasas que se
activan por efecto de la unin del ligando al receptor, y los estimuladores y activadores de la
transcripcin asociados a esta reaccin.
Los receptores para las citoquinas son
protenas de transmembrana altamente especficos,
siendo en su mayor parte, especficos para una
especie (figura 11-1). Es sorprendente el hecho
de que jams se haya podido demostrar que una
citoquina determinada sea capaz de inhibir la unin
de otra citoquina a su receptor. La especificidad
de especie que se le atribuye a las citoquinas podra
explicarse a nivel de unin a su receptor.
La interaccin entre la citoquina y su receptor es de gran afinidad, con constantes de
disociacin cercanas a 10-11 M/L. Las clulas
pueden presentar en su superficie receptores para
varias citoquinas siendo su nmero muy bajo, entre 100 a 1.000 receptores por clula. Sin embargo
se necesita que slo una fraccin de los receptores
sea ocupada para ejercer una mxima actividad
biolgica. El receptor funcional de una citoquina
est, generalmente, formado por la subunidad que
une la citoquina y una o ms subunidades
diferentes ms bien relacionadas con la
transduccin de la seal. Los receptores de las
citoquinas han sido clasificados en familias de
acuerdo a homologas estructurales, a la presencia
de ciertos dominios conservados, o a homologas
funcionales. A estas superfamilias pertenecen
tambin protenas que no son, necesariamente,
receptores para citoquinas:
Familia de receptores hematopoyticos. La familia ms numerosa es la de los receptores
hematopoyticos o receptores de tipo I, que
contienen en su secuencia primaria de aminocidos
el motivo WSXWS en la regin extracelular
adems de 2 dominios extracelulares con cisteinas
conservadas. Esta familia incluye las cadenas y
de IL-2R, IL-4R, las cadenas y de IL-3R, las
cadenas y de IL-5R, IL-6R, gp130, IL-9R,
IL-12R, G-CSFR (Granulocyte Colony Stimulating Factor Receptor), GM-CSFR (Granulocyte/Macrophage Colony Stimulating Factor Receptor), CNTFR, LIFR, EpoR (Erythropoietin
Receptor), PRLR (Prolactin Receptor) y GHR
(Growth Hormone Receptor). La sealizacin
a travs de este tipo de receptores no est bien
definida aunque se han descrito la fosforilacin
3. RECEPTORES DE LAS CITOQUINAS Y

MECANISMOS DE TRANSDUCCIN DE
SEALES
3.1. Receptores de citoquinas
La comprensin del mecanismo de accin de
las citoquinas ha avanzado gracias al conocimiento
que se ha adquirido de los receptores de stas, los
cuales son responsables de transmitir la seal
219
Sin ttulo-2
219
5/26/06, 10:25 AM
Tabla 11-3. Receptores, tirosinas kinasa y protenas STATs activadas por las citoquinas
Citoquina Receptor
JAKs acopladas a los

diferentes receptores
STATs implicadas
en la transduccin
de la seal
Il-1-
IL-1-b
2 receptores
Tipo I: 80 kDa (CDw121a)
Tipo II: 60 kDa (CDw121b)
IL-2
Complejo formado de 3 cadenas.

Cadena-: 55 kDa (CD25, Tac)
Cadena-: 75 kDa (CD122)
Cadena-: 64 kDa (conocida como c)
JAK1, JAK3
STAT3, STATX
IL-3

Cadena-: 60-70 kDa CD123)
Cadena-: 110-140 kDa (KH97 en humanos,
AIC2A o AIC2B en ratn)
JAK2
STAT5
IL-4
Complejo formado de al menos 2 cadenas.

JAK1, JAK3
IL4-STAT
IL-5

JAK2
STAT5
IL-6

Cadena-: 130 kDa (gp130)
JAK1, JAK2, TYK2
STAT1 (IL-6), STAT3
IL-7
Complejo formado de al menos 2 cadenas.

IL-9
Una sola cadena de 64 kDa

Es probable que est asociada a la cadena-g
de 64 kD de IL-2R conocida como c.
JAK1, JAK2, TYK2
STAT1, STATX
IL-10
Una sola cadena de 90-110 kDa.
TYK2, JAK1
STAT1, STAT3
IL-11
Una sola cadena de 90-151 kDa.
IL-12
Una sola cadena de 180 kDa.

TYK2, JAK2
Probablemente esta cadena est asociada a una
componente relacionada a gp130.
IL-13
Desconocido an, pero probablemente comparta

alguna componente con IL-4R.
IL-14
Receptor formado por una sola cadena. Peso

molecular desconocido.
IL-15

Cadena-: desconocida, pero no es Tac.
JAK1,JAK3
STAT4, STAT3
220
Sin ttulo-2
220
5/26/06, 10:25 AM
IL-16
Desconocido an.
GM-CSF

Cadena-: 80 kDa (CDw116)
JAK2
STAT5
G-CSF

El receptor humano tiene homologa con la
cadena gp130 del IL-6R.
JAK1
STAT3
M-CSF
Una sola cadena de 150-165 kDa (CD115).

El receptor es idntico al proto-oncogen c-fms.
Receptor tiene actividad tirosina kinasa.
STAT1, STATX
SCF
(c-kit
ligand)
Formado de 1 cadena de 145-150 kDa (CD117).

Conocido como c-kit.
El receptor est estructuralmente relacionado al
proto-oncogen c-fms
IFN-/
IFN-/R de 102 kDa que liga

IFN- e IFN-.
JAK1, TYK2
STAT1, STAT1,
STAT2
IFN-
Complejo formado de 2 cadenas

IFN-gR de 90 kDa (CDw119)
Cadena accesoria llamada AF-1 o
cadena- de IFN-R.
JAK2, JAK1
STAT1, STAT1,
STAT3
TNF-
Existen 2 receptores
Tipo I de 55 kDa (CD120a)
Tipo II de 75 kDa (CD120b)
Ambos receptores ligan TNF- y TNF-.
TNF-
LT
Mismo receptor que para TNF-.

Tipo I de 55 kDa (CD120)
Tipo II de 75 kDa (CD120)
Ambos receptores ligan TNF- y TNF-.
EGF

JAK1
STAT1, STAT3
TGF-
Existen 3 receptores
Tipo I, 53-68 kDa
Tipo II, 65 kDa
Tipo III, 250-350 kDa
Tipo I y II tienen actividad tirosina kinasa
en tirosinas y activacin de varias protenas

celulares en respuesta a las citoquinas. Estos
receptores no tienen actividad tirosina kinasa
intrnseca por lo tanto se deben asociar directa o
indirectamente con otras protenas tirosina kinasas,
las Janus kinasas (JAK), las cuales activan
protenas citoplasmticas estimuladoras y
activadoras de la transcripcin llamadas STATs

(STAT1, STAT2, etc). Una vez que se produce la
fosforilacin de una o ms STATs, stas pueden
formar dmeros u oligmeros para enseguida
translocarse al ncleo de la clula y activar directa
o indirectamente la transcripcin. Otros substratos
incluyen PI-3K, Raf-1 y src kinasas.
221
Sin ttulo-2
221
5/26/06, 10:25 AM
Figura 11-1. Receptores de citoquinas. Estos receptores son protenas de transmembrana altamente especficos. (A) Se representa
esquemticamente algunos receptores de citoquinas, indicando en cada caso los diferentes tipos de dominios que presentan. (B)
Estos receptores a menudo se asocian con una segunda protena que les confiere funcionalidad. En algunos casos esta segunda
protena es compartida por varios receptores.
tor) y c-kit, tambin denominado SCFR (Stem

Cell Growth Factor Receptor).
Familia de los receptores del tipo interfern.

Una familia propia de los receptores de las
citoquinas es la familia de los receptores del tipo
interfern (IFN) o de tipo II, entre los cuales se
cuentan IFN/R, IFN-R e IL-10R. La
transduccin de la seal por estos receptores involucra la fosforilacin y activacin de la familia
de las kinasas JAK al igual que los de la familia
de tipo I. Estos mecanismos han sido descritos con
bastante precisin para los interferones, no as para
IL-10.
Familia con actividad tirosina kinasa

intrnseca. La familia de los receptores con
actividad tirosina kinasa intrnseca la constituye
EGFR (Epidermal Growth Factor Receptor),
PDGFR, c-kit, M-CSFR y FGFR. El mecanismo
de transduccin de seal para estos receptores involucra la oligomerizacin inducida por la unin
de la citoquina. Esta oligomerizacin produce
autofosforilacin del receptor, lo que a su vez lleva
a la unin de otras protenas que contienen
dominios SH-2 (dominios src homlogos que se
unen a tirosina fosforilada) y que estn
involucradas en la cascada de seales.
Superfamilia de las inmunoglobulinas. Otra familia de receptores es aquella que contiene

dominios extracelulares del tipo de las
inmunoglobulinas, a la cual pertenecen adems
varias protenas que tienen un rol fundamental en
la respuesta inmune y que no son receptores para
citoquinas. Esta familia es caracterizada por una
unidad estructural de alrededor de 100
aminocidos con un puente dislfuro que le
confiere un plegamiento caracterstico de los
dominios de las inmunoglobulinas. Los receptores
de las citoquinas pueden contener uno o ms de
estos dominios. Entre los receptores para las
citoquinas que pertenecen a esta familia se
encuentran IL-1R, IL-6R, FGFR (Fibroblast
Growth Factor Receptor), PDGFR (Platelet
Derived Growth Factor Receptor), M-CSFR
(Macrophage Colony Stimulating Factor Recep-
Receptores tipo TNF. Una ltima familia de

receptores la constituyen los receptores del tipo
TNF (Tumor Necrosis Factor), entre los cuales
se cuentan NGFR (Nerve Growth Factor Receptor), TNFR-I (p55), TNFR-II (p75). Otras
protenas como Fas y CD40 (la protena Fas juega
un rol en la induccin de la apoptosis y CD40
est involucrado en la activacin de los linfocitos
B mediante contacto directo con el linfocito T)
pertenecen a esta familia de receptores. Los
miembros de esta familia se caracterizan por la
presencia de tres o cuatro motivos (dominios) de
alrededor de 40 aminocidos con predominancia
222
Sin ttulo-2
222
5/26/06, 10:25 AM
de cistenas en la parte extracelular de la molcula.

Los mecanismos de transduccin de seales de esta
familia llevan a la activacin de la expresin gnica
o a la apoptosis. Estos dos mecanismos son
mediados por adaptadores moleculares.
Tal como se ha mencionado, en numerosos
casos los receptores de las citoquinas estn
formados por dos o tres subunidades, una de las
cuales tiene por funcin unir la citoquina y las otras
subunidades estn encargadas de transmitir la seal
hacia el interior de la clula. El receptor funcional
y de alta afinidad lo constituye el complejo
formado por las diferentes subunidades. En
algunos casos la subunidad transductora de la seal
puede ser compartida por los receptores de varias
citoquinas como es el caso de la cadena del receptor de IL-2 que se une al receptor de IL-4, IL7, IL-9 e IL-15. Otro ejemplo es la cadena de
GM-CSF que se une al receptor de IL-3 e IL-5, y
la subunidad gp130 que es compartida por IL6R, CNTFR, LIFR (Leukaemia Inhibitory Factor Receptor) y OSMR (Oncostatin M Receptor). Si consideramos adems que la subunidad
que comparten estos diferentes receptores es la
protena transductora de la seal, esto permitira
explicar por qu diferentes citoquinas son capaces
de ejercer una misma funcin, es decir la
"redundancia" de las citoquinas.
ser discutida ms adelante separadamente ya que

tiene caractersticas especiales que la distinguen
de todas las citoquinas ya mencionadas.
Los mecanismos de transduccin de seales
de los receptores de tipo I y II han sido
extensivamente estudiados y se ha demostrado que
involucran las JAK kinasas y las protenas STATs.
Se ha demostrado directamente que la unin de
una citoquina a su receptor induce la transcripcin
de genes especficos a travs de la activacin de
las STATs. En la tabla 10-3 se muestran las kinasas
y las STATs activadas por cada citoquina. Se
observa que citoquinas que comparten la
subunidad transductora de la seal, como es el caso
de la IL-2, IL-4, IL-7, IL-9 e IL-15 para la cadena
, esto lleva a que se activen en todos estos casos
las mismas JAKs kinasas (JAK-1 y JAK-3), sin
embargo existen diferencias en cuanto a las STATs
que son activadas en cada caso. Al parecer son las
STATs las que le dan la especificidad a las
citoquinas. En este mismo sentido cabe notar que
casi nicamente los ratones knock out para las
subunidades comunes a varias citoquinas, las JAK
kinasas o bien las STATs son indispensables
haciendo la mutacin letal.
4. PRINCIPALES ACTIVIDADES BIOLGICAS DE LAS CITOQUINAS
3.2. Transduccin de seales

Las citoquinas participan principalmente en
la respuesta inmune innata y la reaccin
inflamatoria, en la respuesta inmune especfica
o adquirida y en la hematopoyesis. Estas
actividades se manifiestan en la proliferacin y
diferenciacin celular, la induccin de la sntesis
de protenas o de mRNA, su participacin en la
activacin celular, su papel como factores
quimiotcticos y tambin su participacin en
fenmenos como la apoptosis.
Por otra parte, ltimamente se han

descubierto formas solubles de muchos de los
receptores de las citoquinas. Existen varias
hiptesis respecto a la funcin de estos receptores
solubles. Primero, los receptores solubles seran
producidos por ruptura enzimtica con lo cual
impediran que la citoquina pudiese efectuar su
accin sobre la clula blanco. Tambin los
receptores solubles podran encontrarse en el
espacio extracelular y como tal competiran por
la citoquina disponible actuando entonces como
factores de regulacin negativo. Sin embargo, los
receptores solubles que se encontraran en el
espacio extracelular podran tener como funcin
estabilizar la citoquina en el lugar, en cuyo caso
estaran ms bien teniendo un efecto positivo sobre
la accin de sta. Una ltima hiptesis discutida
en la literatura es que los receptores solubles se
podran ligar a protenas de la superficie de una
clula que normalmente no tiene receptor para la
citoquina y de esta manera hacerla sensible a sta.
La familia de receptores de las quimioquinas

Un organismo puede ser infectado por
numerosos tipos de patgenos, para lo cual se
requieren diferentes medios para su eliminacin,
adems de diversos mecanismos efectores. Las
clulas implicadas en la inmunidad innata o natural son capaces de desarrollar diferentes funciones
y de discriminar en funcin del patgeno qu tipo
de funcin efectora debe ser activada.
Por el contrario, las clulas de la inmunidad
especfica, los linfocitos, no presentan esta
223
Sin ttulo-2
223
5/26/06, 10:25 AM
especializacin sino despus de la etapa de

activacin. Los linfocitos vrgenes son, en este
sentido, clulas pluripotentes, que pueden
diferenciarse hacia distintos linajes dependiendo
de las seales que provengan del medio ambiente.
Estas seales son inducidas por el patgeno sobre
las clulas efectoras de la inmunidad natural. Cada
tipo de clula efectora una vez activada producir
diferentes citoquinas dependiendo de la naturaleza
del patgeno. Estas citoquinas producidas
tempranamente en la infeccin, determinan
finalmente el tipo de respuesta del sistema inmune
especfico. Por lo tanto la inmunidad innata y
especfica estn integradas en la respuesta inmune.
Dentro de la respuesta inmune innata
consideraremos el efecto de las citoquinas en
forma separada en la respuesta a patgenos de
origen viral, recordando que la respuesta
establecida y la produccin de citoquinas tendrn
consecuencias en la respuesta inmune especfica
as como en la hematopoyesis. Este ltimo tpico,
ser tratado separadamente aunque est
directamente involucrado en la respuesta inmune
en su totalidad.
enzimas, entre las cuales la 2'-5'oligoadenil

sintetasa es la mejor estudiada. Esta accin de los
interferones es paracrina, es decir, su accin se
lleva a cabo en las clulas vecinas que no han sido
infectadas. Este efecto es conocido como la
induccin del estado antiviral en el cual la
proliferacin celular es inhibida. Los interferones
de tipo I aumentan la expresin de las molculas
de histocompatibilidad de clase I (MHC clase I) e
inhiben la expresin de las molculas MHC clase
II. Ya que los linfocitos citotxicos (LTc)
reconocen los antgenos en funcin de las
molculas MHC clase I, la accin de este tipo de
interfern favorece el desarrollo de una respuesta
inmune especfica celular de tipo Th1.
La inflamacin es una respuesta fisiolgica
normal al dao, ya sea mecnico o infeccioso. En
las primeras etapas se encuentra localizada, pero
luego puede desarrollarse una respuesta sistmica.
Las principales alteraciones observadas son:
coagulacin, exudacin plasmtica, activacin del
sistema del complemento, diapedesis y migracin
leucocitaria, activacin de clulas mononucleares
y polimorfonucleares y produccin de mediadores
solubles, entre ellos citoquinas.
Todos los procesos inflamatorios, ya sean de
origen inmune u otro, llevan consigo la activacin
de macrfagos residentes y la infiltracin de
leucocitos desde la sangre. La activacin induce
cambios en las clulas entre los cuales se incluyen
la produccin de citoquinas. Determinadas
citoquinas originan directa o indirectamente la
cascada de eventos que genera otros mediadores
esenciales en la respuesta inflamatoria.
De las numerosas citoquinas presentes en el
sitio de la inflamacin, dos de ellas, IL-1 y TNF (Tumor Necrosis Factor-), juegan un papel
fundamental. Algunas de sus acciones sobre
diversos tipos celulares son: la produccin de
mediadores lipdicos, enzimas proteolticas y
radicales libres, todos elementos involucrados en
el dao observado. IL-1 y TNF- ejercen su
actividad citotxica sobre tejidos como el
endotelio vascular, el cartlago, los huesos,
msculos y las clulas de los islotes de Langerhans. Otras citoquinas, tales como el IFN-, IL-3
o GM-CSF, que pueden ser producidas por otras
clulas presentes o atraidas al sitio de la
inflamacin, las cuales actan amplificando la
respuesta inflamatoria y aumentando la produccin

Existen dos tipos de respuestas a la infeccin
por un virus. En primer lugar se estimula la
produccin de interferones de tipo I, es decir INF o IFN-, los cuales tienen como funcin inhibir
la replicacin viral. Por otra parte, la infeccin viral
provoca la activacin de las clulas NK las cuales
son capaces de matar una amplia variedad de
clulas infectadas por virus. Los IFNs de tipo I
aumentan adems la actividad ltica de las clulas
NK, las cuales pueden matar en forma ms eficaz
Existen al menos 20 genes para interferones
de tipo los cuales estn localizados en una misma
regin en el cromosoma 21 en humanos. Las
preparaciones naturales de IFN- comprenden una
mezcla de stos. Los macrfagos son las mejores
clulas productoras de IFN- y por esto se lo llama
interfern leucocitario. El IFN- consiste de un
nico producto gnico, localizado en la misma
region cromosmica del IFN-. Estos dos tipos
de interferones presentan muy poca homologa
estructural, sin embargo se unen al mismo receptor celular.
Los interferones inducen diversos efectos
sobre las clulas. Primero, inhiben la replicacin
del RNA o DNA viral mediante la sntesis de varias
224
Sin ttulo-2
224
5/26/06, 10:25 AM
de IL-1 y TNF- por los macrfagos.

Las citoquinas producidas en el sitio de la
inflamacin participan directamente en el
reclutamiento de leucocitos en el foco
inflamatorio. Este efecto es mediado por la
produccin de quimioquinas, tales como IL-8 y
MCP-1 (Monocyte Chemoattractant Protein).
Adems, en clulas endoteliales, IL-1, TNF-+e
IFN-, inducen la expresin de molculas de
adhesin tales como ICAM-1 (Intercellular Adhesion Molecule 1) y VCAM (Vascular Cell
Adhesion Molecule) participando de esta manera
directamente en la adherencia de clulas
sanguneas. Por otra parte, IL-1, TNF- e IL-8
alteran la permeabilidad vascular y permiten una
extravasacin de protenas plasmticas.
La IL-6, muy abundante en los procesos
inflamatorios, induce la produccin de las
protenas de fase aguda en los hepatocitos y la
respuesta febril junto a IL-1 y TNF-. Lo mismo
ocurre con IL-11 y LIF. La reaccin inflamatoria
es inhibida por varias citoquinas antinflamatorias,
entre las cuales se encuentran TGF- (Transforming Growth Factor beta), IL-4 e IL-10 que inhiben
la produccin de IL-1 y de TNF-. Los
glucocorticoides tienen igualmente esta capacidad
y son producidos por una cascada de eventos
iniciada por IL-1, TNF- e IL-6 a travs del
sistema o eje neuro-endocrino. La nocin de red
de citoquinas se ilustra perfectamente con la
participacin de estos mediadores en la reaccin
inflamatoria.
Las prostaglandinas inducidas por IL-1 y
TNF- causan muchos de los efectos observados
en la inflamacin. Diversos tipos celulares pueden
producir prostaglandinas (siendo PGE-2 la ms
importante) en respuesta a IL-1 y TNF-. Otro
mediador lipdico que se produce en la inflamacin
es el factor activador de plaquetas (PAF) que junto
con las prostaglandinas aumentan la permeabilidad
vascular inducida por IL-1.
La produccin de radicales libres,
principalmente xido ntrico (NO), es altamente
eficiente en la eliminacin de microorganismos.
Sin embargo, el estrs oxidativo provocado por
los radicales libres, daa numerosas clulas. La
produccin de NO es inducida fuertemente a
travs de IL-1 y TNF- en clulas endoteliales,
monocitos/macrfagos y fibroblastos.
En resumen, IL-1 y TNF- tienen tanto
efectos beneficiosos como dainos para el
organismo. Entre estos ltimos tenemos las
lesiones vasculares, la degradacin del cartlago,
ostelisis, protelisis y citotoxicidad sobre clulas

de los islotes de Langerhans. Tambin ejercen
un fuerte efecto en el sistema nervioso central,
induciendo fiebre, somnolencia y la produccin
de glucocorticoides.
4.2. Citoquinas y respuesta inmune
Las citoquinas regulan una gran variedad de
respuestas inmunes, estimulando o inhibiendo el
crecimiento y la diferenciacin de las clulas que
componen el sistema inmune. Las citoquinas
seleccionan el tipo de respuesta inmune y tambin
los mecanismos efectores. Las respuestas inmunes
mediadas por clulas involucran la activacin de
macrfagos, linfocitos T "helper" (CD4+) y
linfocitos T citotxicos (CD8+). Los linfocitos T,
B y los macrfagos responden a la estimulacin
antignica produciendo una variedad de citoquinas
las cuales pueden estimular o inhibir clulas
efectoras de la respuesta inmune. Los linfocitos B
se activan y producen inmunoglobulinas
dependiendo de las seales que reciben de las
clulas Th. Los linfocitos B pueden producir
distintas clases de inmunoglobulinas con
diferentes afinidades dependiendo de las
citoquinas que ellos encuentren. La activacin de
los linfocitos T y B lleva al desarrollo de la memoria inmunolgica T y B, lo que le da al sistema
inmune la capacidad de responder de manera ms
rpida y eficaz frente a un estmulo posterior. Se
establece as una red de complejas interacciones
que determina la respuesta global frente a un
estmulo.
4.2.1. Citoquinas y diferenciacin de clulas
linfoides
En un estado temprano del desarrollo en el
timo, algunas citoquinas entre las cuales se
incluyen SCF (Stem Cell Factor), IL-1, IL-2,
IL-3, IL-4, IL-6, IL-7 y TNF-, pueden jugar un
papel importante en la diferenciacin de los
linfocitos T. Las clulas que conforman el estroma
tmico interactan con los timocitos en los
diferentes estados de desarrollo y regulan la
produccin de citoquinas de todo el sistema. La
combinacin de SCF, IL-3, IL-6 e IL-7 mantienen
el crecimiento de las clulas troncales
hematopoyticas provenientes de la mdula sea.
Los precursores tmicos linfoides expresan el receptor para SCF (CD117), y la expresin de
CD117 se correlaciona negativamente con la
225
Sin ttulo-2
225
5/26/06, 10:25 AM
iniciacin del reordenamiento de la cadena del

TCR. La respuesta proliferativa temprana de los
timocitos a SCF se ve aumentada por la presencia
de IL-7, citoquina que es producida por las clulas
que conforman el estroma. IL-1 e IL-7, as como
TNF-, estn involucradas en la maduracin de
los precursores tempranos de los timocitos CD3CD4-CD8- hacia el estado de clulas pro-T que
luego pueden dar origen a linfocitos T
funcionalmente competentes. IL-2 induce el receptor de alta afinidad para IL-2 en forma
autocrina en los timocitos y regula la fase
proliferativa temprana permitiendo el pasaje de la
fase G1 a la fase S del ciclo celular. IL-2 participa
adems en la posterior diferenciacin de las
clulas T. El estudio de los receptores para las
citoquinas en los timocitos, demostr que los
receptores para IL-1, IL-2 e IL-4 estn regulados
en el desarrollo y que su expresin est coordinada
con la produccin de IL-1 por las clulas
estromales y la produccin de IL-2 e IL-4 por los
timocitos.
Finalmente, las citoquinas influencian
tambin el reordenamiento del receptor de los
linfocitos T (TCR).
secrecin de citoquinas por estas clulas accesorias

depende de la naturaleza del antgeno, de la va de
introduccin del antgeno as como de la
concentracin del antgeno. IL-12, IFN- e IL-4
juegan un papel crtico en la diferenciacin hacia
una u otra subpoblacin de linfocito Th. Hasta hace
poco se pensaba que los macrfagos, las clulas T
NK1.1+ y los mastocitos eran los responsables de
la produccin temprana de estas citoquinas. Sin
embargo, eosinfilos, neutrfilos, clulas
epiteliales, clulas dendrticas y keranocitos
producen y pueden guardar grandes cantidades de
stas y otras citoquinas en funcin del estmulo
que ellas reciben.
No se conocen an marcadores de superficie
especficos de Th1 o Th2, aunque la molcula
CD30 es un buen candidato para las clulas Th2.
Las clulas Th1 y Th2 tienen diferentes
requerimientos para la proliferacin y activacin.
Las clulas Th1 usan IL-2 como factor de
crecimiento autocrino y casi no responden a IL-4.
Las clulas Th2 usan IL-4 como factor de
crecimiento autocrino pero tambin proliferan en
respuesta a IL-2. Las clulas Th2 pueden ser
activadas en ausencia de CPA por anticuerpos
dirigidos contra TCR/CD3, pero necesitan IL-1
como coestmulo para proliferar. La IL-1 regula
positivamente la produccin de IL-4, as como la
expresin del IL-2R. Se desconoce si aumenta la
expresin del IL-4R. Aparentemente IL-4 aumenta
la expresin del IL-1R. Se puede concluir de esto
ltimo que IL-1 e IL-4 son interdependientes. Las
clulas Th1 no requieren IL-1 como coestmulo
para su proliferacin y no expresan el receptor para
esta citoquina.
Las clulas Th1 y Th2 regulan mutuamente
su actividad a travs de la produccin de citoquinas
inhibitorias de la proliferacin de una u otra
subpoblacin. IFN- e IL-4 son antagnicas en el
desarrollo de clulas Th2 o Th1, respectivamente.
Es as como, IFN- inhibe la proliferacin de Th2,
mientras que IL-10 inhibe la proliferacin de Th1
mediante la inhibicin de la produccin de IFN-.
Esta regulacin puede ocurrir tambin a nivel de
las clulas efectoras activadas por estas
subpoblaciones. Por ejemplo, en la produccin de
diferentes isotipos de inmunoglobulinas, IL-4 induce la produccin de IgE, mientras que IFN-
induce la produccin de IgG2a. De manera general Th1 regula negativamente la produccin de
anticuerpos inducida por las clulas Th2 en las
clulas B.

Polarizacin de las clulas T "helper"
Los linfocitos T maduros producen citoquinas
en respuesta a una estimulacin antignica. La
produccin de citoquinas por los linfocitos T
activados depende de las seales que recibe del
microambiente constituido por las clulas
presentadoras de antgeno (CPA) y clulas
accesorias de la respuesta inmune. En ratn y
humanos, estudios realizados con clones de
clulas Th (CD4+) han demostrado la existencia
de al menos 2 subpoblaciones de clulas Th: Th1
y Th2. Estas subpoblaciones difieren en el espectro
de citoquinas que ellas secretan una vez que son
activadas: Los linfocitos LTh1 secretan IL-2, IFN, TNF- y los Th2 secretan IL-4, IL-5, IL-10. Se
ha demostrado adems que las clulas T CD8+ y
algunas clulas T tienen patrones de secrecin
de citoquinas similares a Th1 y Th2, aunque no
secretan IL-2.
La polarizacin de los linfocitos T se debe a
una secrecin temprana de citoquinas por clulas
que participan probablemente en la inmunidad
natural, como son macrfagos, clulas NK y en
algunos casos incluso clulas epiteliales. La
226
Sin ttulo-2
226
5/26/06, 10:25 AM
realizados en clulas activadas o en determinadas

patologas. Algunas respuestas inmunes parecen
ser dominadas por una u otra subpoblacin,
resultados inferidos a partir del espectro de
citoquinas que se produce en una patologa particular. Por ejemplo, la inmunizacin con un
antgeno en adjuvante de Freund completo, lleva
a respuestas de tipo DTH (hipersensibilidad de tipo
retardada) e involucran IFN- y anticuerpos, pero
no del tipo IgE. El mismo antgeno adsorbido en
almina provoca la produccin de IgE y poca
DTH. La infeccin de ratones con ciertos tipos de
parsitos (Helmnticos) produce gran cantidad de
IgE, eosinofilia y una reducida cantidad de IL-2 e
IFN-. Por lo tanto se produce una respuesta
selectiva de tipo Th2. La infeccin con bacterias
activa una respuesta dominante de tipo Th1, con
altos niveles de IgG2a.
Diferentes cepas de ratones pueden activar
selectivamente una u otra respuesta contra un
mismo antgeno. Ratones Balb/c infectados con
Leischmania mayor, producen una enfermedad
fatal la cual est dominada por altos niveles de
IL-4. Este efecto se puede revertir si se les inyecta
anticuerpos anti-IL-4 o transfiriendo clulas Th1.
Sin embargo, C57Bl/6 produce una respuesta de
tipo Th1 y elimina la infeccin. En general, agentes
infecciosos intracelulares expanden clulas Th1,
mientras que antgenos exgenos expanden
respuestas de tipo Th2. No se sabe cules son los
factores que activan una respuesta de tipo Th1 o
Th2, pero estos hechos involucran adems
componentes genticos.
Otro rol funcional asignado a las clulas Th1
y Th2 es su participacin en el cambio de clase
de inmunoglobulinas secretada por los linfocitos
B. Esto ltimo es importante, ya que el cambio de
isotipo lleva a un cambio en la funcin efectora
del anticuerpo producido, sin cambiar su
especificidad por el antgeno. Las clulas Th1
regulan pricipalmente la produccin de IgG2a por
los linfocitos B, mientras que las clulas Th2
regulan la produccin de IgE. Ambos tipos de
clulas Th son capaces de regular la produccin
de IgM y de IgG3. Los linfocitos Th1 son clulas
pobremente ayudadoras para los linfocitos B. Esto
en parte debido a la produccin de IFN- que
inhibe la estimulacin producida por IL-4, en particular para la produccin de IgE. Estas clulas
presentan tambin actividad citotxica contra los
linfocitos B presentadores de antgeno, de all que
aparezcan como clulas supresoras de un
determinado isotipo de inmunoglobulina.
Precursores de las clulas Th1 y Th2

Las clulas Th1 y Th2 derivan de una
poblacin Th0, capaz de secretar ambos patrones
de citoquinas. Th0 puede representar un progenitor no comprometido con la capacidad de
diferenciarse hacia una u otra poblacin
dependiendo de las seales que reciba del
microambiente. Es posible postular que existen
clulas T precomprometidas capaces de secretar
ambos patrones de citoquinas, antes de
desarrollarse en una clula comprometida hacia
un determinado linaje T. Si esto fuera cierto, la
activacin policlonal de clulas T debera llevar a
la produccin del conjunto completo de citoquinas,
pero en realidad slo se encuentran grandes
cantidades de IL-2. Esto implica que la clula T
virgen, solamente es capaz de producir IL-2. En
otros estudios en los cuales se activan las clulas
T con formol miristato (PMA) y ionforo de Ca,
se demostr la produccin de IL-2 e IL-4. La
identidad de Th0 no est an establecida.
Funcin de las clulas Th1 y Th2 in vivo
La activacin de las clulas Th por
interaccin con un ligando, lleva a la clula Th en
reposo a diferenciarse hacia algn subgrupo
funcional caracterizado por el espectro de
citoquinas que secretan. Las clulas Th1 secretan
IL-2 e IFN- y activan los macrfagos y
reacciones de hipersensibilidad retardada. Las
clulas Th2 producen IL-4, IL-5 e IL-10, las cuales
son importantes para la produccin de IgE, y
suprimen la inmunidad mediada por clulas. Se
ha postulado una tercera subpoblacin de linfocitos
Th, Th3, la cual secretara principalmente TGF. En este ltimo tiempo parece haberse
encontrado finalmente las clulas T supresoras
postuladas hace muchos aos, actualmente
llamadas clulas T reguladoras. Esta
subpoblacin tiene la caracterstica de coexpresar
CD4 y CD25 en forma endgena, y de secretar
principalmente IL-10, una citoquina
reconocidamente inhibitoria. Se mencionan aqu
por su importancia aunque la caracterizacin es
an muy reciente. Las citoquinas que produce
cada subpoblacin actan como factores de
crecimiento autocrino.
No se sabe an con certeza si estas
poblaciones se desarrollan in vivo. Actualmente
existen evidencias indirectas de estas
subpoblaciones ya que estos estudios han sido
227
Sin ttulo-2
227
5/26/06, 10:25 AM
la produccin de anticuerpos, slo que el resultado

est reflejando diferentes condiciones
experimentales.
La funcin ms especfica de las citoquinas
sobre los linfocitos B es su participacin en el
cambio de isotipo de la inmunoglobulina
secretada. Los ejemplos ms claros de esta funcin
de las citoquinas son IL-4, la cual es absolutamente
necesaria para la produccin de IgE e IFN- que
est implicado en la produccin de IgG2a. TGF-
en conjunto con IL-5 participan en el cambio de
isotipo a IgA.
La afinidad de las inmunoglobulinas
secretadas por los linfocitos B depende tambin
de las citoquinas presentes en el sitio donde se est
llevando a cabo la reaccin.
Subpoblaciones de linfocitos Th humanos

Los estudios realizados in vitro con clones
de linfocitos T activados, no han permitido
demostrar la existencia de patrones de secrecin
bien definidos. Los linfocitos Th humanos se
parecen ms a los linfocitos Th0 murinos. Clones
de clulas T derivados de dadores reactivos a
alergenos o inmunizados con toxina tetnica, han
demostrado la presencia de clones especficos para
alergenos selectivamente enriquecidos en clulas
capaces de producir IL-4. La inmunizacin con
toxina tetnica produce preferencialmente IL-2 e
IFN-. Esto demuestra que la inmunizacin in vivo
activa selectivamente subpoblaciones similares a
las encontradas en el ratn. No ha sido posible
actualmente diferenciar estas respuestas in vitro
pero los estudios realizados in vivo permiten
postular la existencia de estas subpoblaciones
celulares en humanos.
4.2.4. Respuesta inmune especfica mediada

por clulas
Los linfocitos T CD4+ y CD8+ activados
secretan un grupo de citoquinas que sirven para
activar clulas efectoras de la respuesta inmune
no especfica o natural. Estas citoquinas
comprenden el interfern inmune o IFN-, TNF o linfotoxina, IL-10, IL-5 e IL-12. Todas estas
citoquinas producen la activacin de numerosos
tipos celulares entre los cuales los principales son
macrfagos, clulas NK, linfocitos T y B, clulas
endoteliales, neutrfilos y eosinfilos.
El IFN- es producido por los linfocitos T
CD4+ del tipo Th1, T CD8+ y clulas NK. La
produccin de IFN- es producida como
consecuencia inmediata de la activacin de la
respuesta inmune especfica y es estimulada por
IL-2 e IL-12. IFN- es el ms potente activador
de los macrfagos para matar microorganismos
fagocitados. Tambin activa macrfagos para
matar clulas tumorales.
El IFN- acta a nivel de la fase de
reconocimiento en la respuesta inmune, mediante
la estimulacin de la sntesis de molculas MHC
de clase I y la induccin de la sntesis de molculas
MHC de clase II en numerosos tipos celulares que
normalmente no las expresan. Por lo tanto, el IFN es capaz de activar tanto clulas T CD4+ como
T CD8+. Como ya se seal, el IFN- promueve
la diferenciacin de los linfocitos T CD4+ hacia
el fenotipo Th1 e inhibe la proliferacin de clulas
Th2. La maduracin de los linfocitos T CD8+ hacia
LTc requiere de la presencia de IFN-. Como se
vio anteriormente, el IFN- acta sobre los
linfocitos B estimulando el cambio de isotipo de

Los linfocitos B en reposo pueden ser
activados de manera independiente o dependiente
de los linfocitos T. En cualquiera de los casos, la
presencia de determinadas citoquinas es
indispensable. Las citoquinas tienen dos funciones
principales en las respuestas mediadas por
inmunoglobulinas: participan en las fases
proliferativas y de diferenciacin de los linfocitos
B y promueven selectivamente el cambio de clase
de las inmunoglobulinas (switch isotpico).
Numerosas citoquinas pueden estimular la
proliferacin de los linfocitos B. De las citoquinas
producidas por los linfocitos Th, IL-2, IL-4 e IL-5
participan en la proliferacin y adems pueden
actuar en sinergia para llevar a cabo este efecto.
La IL-6, que es producida por varios tipos celulares
participa en la proliferacin de los linfocitos B ya
diferenciados productores de anticuerpos
(plasmocitos). IL-1, IL-10 y TNF estimulan su
crecimiento in vitro. La redundancia de las
citoquinas involucradas en la proliferacin de los
linfocitos B explica en parte por qu al bloquear
la produccin de una determinada citoquina, esto
no tiene efecto en la produccin de anticuerpos.
Las citoquinas participan directamente en la
secrecin de anticuerpos en respuesta a un
antgeno. En el ratn ha sido demostrado que IL4 e IL-5 participan en esta funcin. En humanos
se ha podido demostrar que IL-2 e IL-6 aumentan
la produccin de anticuerpos. Probablemente todas
estas citoquinas participan en ambos sistemas en
228
Sin ttulo-2
228
5/26/06, 10:25 AM
las inmunoglobulinas hacia IgG2a e Ig3, al mismo

tiempo que inhibe el cambio a IgG1 e IgE. El IFN estimula la actividad citotxica de las clulas
NK y activa los neutrfilos, aunque de manera
menos eficaz que TNF- o LT. El IFN- puede
sinergizar la actividad de estas ltimas citoquinas.
El IFN- estimula la sntesis de numerosas
otras protenas, entre otras, molculas de adhesin
en clulas endoteliales vasculares, lo que facilita
la extravasacin de linfocitos T CD4+. Todas estas
acciones del IFN- conllevan a respuestas del tipo
Th1 y estimulan la reaccin inflamatoria.
) es una citoquina que
La linfotoxina (TNF-
tiene un cierto grado de homologa con TNF-,
pero a diferencia de TNF-, es sintetizada
exclusivamente por linfocitos T. La linfotoxina se
une al mismo receptor que TNF-, regulando en
consecuencia los mismos tipos de reacciones.
TNF- es un potente activador de los neutrfilos,
y por lo tanto se encuentra implicada en la reaccin
inflamatoria, y contribuye adems a la lisis
mediada por LTc de las clulas blanco. La
linfotoxina, al igual que el IFN-, activa las clulas
endoteliales aumentando la adhesin de leucocitos
y la produccin de citoquinas.
La IL-10 es una citoquina que tiene ms bien
efectos inhibitorios sobre la respuesta inmune. Esta
es producida por las clulas Th2 y varios otros tipos
celulares. Las actividades ms importantes de la IL10 son la inhibicin de las funciones accesorias del
macrfago y la produccin de citoquinas por ste.
Estos efectos llevan a una inhibicin de la reaccin
inflamatoria mediada por linfocitos T y a la
estimulacin de los linfocitos B. Un hecho
sorprendente es que el virus Epstein-Barr posee en
su genoma un gen homlogo a IL-10, lo cual podra
significar que este virus adquiri este gen con el
objeto de evadir la respuesta inmune.
La IL-5 es una citoquina producida por
linfocitos Th2 y mastocitos activados. Su principal
accin es la de estimular la proliferacin y
diferenciacin de eosinfilos de tal manera que ellos
sean capaces de eliminar clulas infectadas con un
determinado parsito. La IL-5 acta en sinergia con
IL-2 e IL-4 para estimular el crecimiento y la
diferenciacin de los linfocitos B.
La IL-12 tiene gran importancia en la
respuesta inmune por las numerosas actividades
biolgicas en las cuales participa. El efecto global de la IL-12 est en la respuesta inmune mediada
por clulas, debido a los efectos que tiene sobre
las clulas NK y los linfocitos T. La IL-12 es el
ms potente estimulador de las clulas NK,
induciendo adems la produccin de IFN- por

estas clulas. Para llevar a cabo estos efectos, la
IL-12 puede actuar adems en sinergia con IL-2
produciendo las denominadas clulas LAK (Lymphokine Activated Killer Cells). La diferenciacin
de las clulas Th1 es dependiente de la presencia
de IL-12, la cual inhibe la proliferacin de clulas
de tipo Th2. Finalmente, la IL-12 estimula la
diferenciacin de linfocitos T CD8+ a clulas T
citotxicas.
4.3. Citoquinas y hematopoyesis
Las clulas de la sangre que ayudan a
mantener la funcionalidad del organismo, tienen
una vida media limitada. Por lo tanto, estas clulas
terminales deben ser reemplazadas. La produccin
de las clulas sanguneas es un proceso dinmico
finamente regulado a nivel celular e intracelular.
La regulacin involucra por una parte las clulas
de la sangre y clulas accesorias, y por otra parte,
las clulas que responden a la accin de las
citoquinas. Entre las clulas accesorias, las cuales
producen diferentes citoquinas, estn linfocitos,
monocitos, macrfagos, granulocitos, clulas NK,
fibroblastos, clulas endoteliales, adipocitos,
miocitos y clulas del estroma en general. Las
clulas sobre las cuales van a actuar las citoquinas
dependern de la presencia en su superficie del
receptor adecuado para la citoquina producida por
la clula accesoria.
Actualmente se conocen ms de 40
citoquinas, que tienen efecto sobre la
hematopoyesis. Estas citoquinas tienen efectos
estimulantes o supresores. Muchas de las
citoquinas tienen actividad pleiotrpica, ms que
efectos especficos. A su vez, las citoquinas pueden
ejercer un efecto directo o indirecto en la
hematopoyesis.
Entre las acciones directas tenemos los
efectos sobre las clulas troncales (stem cells)
y progenitoras de las clulas de la sangre. Las
clulas troncales son clulas multipotenciales con
capacidad de autorregenerarse. Dentro del
compartimiento troncal existe una jerarqua. Las
clulas ms inmaduras tienen ms capacidad de
autorrenovarse y una mayor capacidad de
proliferacin mientras que las clulas ms maduras
tienen una capacidad limitada de autorrenovarse
y son menos proliferativas, pero con mayor
capacidad para diferenciarse.
Las clulas progenitoras hematopoyticas
pueden detectarse en ensayos de proliferacin en
229
Sin ttulo-2
229
5/26/06, 10:26 AM
medio semislido, por su capacidad formadora de

colonias. Las clulas troncales se diferencian en
una variedad de clulas, entre las cuales tenemos
las CFU-GEMM (unidades formadoras de
colonias granuloides, eritroides, mieloides y
mielomonocticas) y clulas con un linaje ms
restringido tales como CFU-GM (colonias mixtas
granuloctica monoctica), CFU-G (granuloctica),
CFU-M (monoctica), BFU-E (eritroides
tempranas), CFU-E (eritroides ms maduras) y
BFU-MK (megacariocticas) (ver captulo 3). Este
tipo de ensayo ha permitido definir solamente los
progenitores mieloides. Los progenitores de las
clulas linfoides han sido definidos mediante
marcadores de superficie principalmente.
Las clulas troncales y progenitoras son muy
escasas en la sangre, con frecuencias menores que
1/10.000; por lo tanto ha sido dficil demostrar un
efecto directo de las citoquinas sobre estas clulas.
Esto ha implicado tener que enriquecer o purificar
una determinada poblacin para un estudio posterior. Estas mismas tcnicas se han aplicado en los
trasplantes de mdula sea donde las clulas
troncales juegan un papel fundamental.
Durante la ontogenia las clulas troncales se
encuentran primero en el saco vitelino, luego en
el hgado fetal, ms tarde en el bazo fetal y
finalmente en la mdula sea. Al nacimiento, la
sangre que se encuentra en el cordn umbilical y
la placenta tiene una alta concentracin de clulas
troncales. En el caso de los trasplantes de mdula
sea, el nmero de clulas troncales que se
trasplantan es muy importante, por lo tanto gracias
a estos conocimientos se ha podido desarrollar la
tecnologa adecuada para realizar trasplantes
alognicos en casos de compatibilidad HLA,
utilizando como fuente de clulas troncales la
sangre de cordn umbilical. Debido al nmero de
clulas troncales, este tipo de trasplante ha sido
posible slo en nios.
En adultos, la mayor fuente de clulas
troncales es la mdula sea y sta es la fuente usada
de rutina en los trasplantes autlogos y alognicos.
La sangre tambin es una fuente de clulas
progenitoras, pero antes de recolectar las clulas
troncales es necesario movilizarlas hacia la
periferia usando factores de crecimiento tales
como GM-CSF, G-CSF, IL-3 o combinaciones de
ellos. Sin embargo las citoquinas no slo cumplen
una funcin en los trasplantes sino tambin en la
estimulacin y supresin de la hematopoyesis en
una situacin determinada.
Finalmente, los factores de crecimiento
hematopoytico contribuyen a mantener un amplio

rango de funciones fisiolgicas. Por ejemplo, en
conjunto con un antgeno especfico presentado
por la CPA, la IL-2 contribuye a la proliferacin
de linfocitos T y B, la cual en conjunto con IL-1
promueve la produccin de clulas NK a partir de
progenitores hematopoyticos. La IL-2 e IFN-
promueven la maduracin de los linfocitos B y
actan directamente en la estimulacin de la
produccin de IFN- por los macrfagos y clulas
NK, e igualmente aumentan la capacidad
citotxica de los macrfagos.
Las citoquinas que estimulan la
hematopoyesis son tambin responsables del
desarrollo, mantencin y activacin funcional de
las clulas efectoras de la respuesta inmune. Los
linfocitos cumplen un papel fundamental en la
respuesta inmune, pero son clulas tales como
granulocitos, eosinfilos y otros que participan
activamente en la primera lnea de respuesta frente
a la agresin causada por un agente patgeno o
una agresin mecnica. Las principales citoquinas
que estimulan la hematopoyesis son los diferentes
"factores estimuladores de colonia", denominados
por CSF antecedido por la inicial del tipo de clulas
progenitoras sobre la cual acta. Entre estos
tenemos GM-CSF, G-CSF, M-CSF. Otras
citoquinas como IL-3 , IL-7, IL-12 y "c-kit ligand"
o (SCF) tienen una funcin esencial en la
hematopoyesis. Las acciones de estas citoquinas
son influenciadas por otras citoquinas, algunas de
las cuales como TNF-, LT, IFN- y TGF-,
inhiben el crecimiento de los progenitores
hematopoyticos.
Las citoquinas que tienen un efecto
estimulador directo en la proliferacin de las
clulas progenitoras mieloides son IL-3, GM-CSF,
G-CSF, M-CSF e IL-5. La eritropoyetina (Epo)
acta sobre los progenitores eritroides. La IL-3 y
el GM-CSF son citoquinas que actan sobre los
progenitores ms tempranos, mientras que el GCSF, M-CSF, Epo e IL-5 actan sobre progenitores
de linaje ms restringido.
Todas estas citoquinas, a excepcin de IL-5, han
sido usadas en estudios clnicos en humanos y ellas
han acelerado la recuperacin de la hematopoyesis
en una variedad de patologas. Sus efectos son dosis
dependientes y su toxicidad es mnima.
Los factores estimuladores de colonias actan
en forma aditiva a sinrgica cuando se usan en
230
Sin ttulo-2
230
5/26/06, 10:26 AM
combinacin. Esto ha llevado a producir citoquinas

recombinantes a partir de protenas de fusin entre diferentes citoquinas. Una de estas citoquinas,
PIXY321, producida por la fusin de GM-CSF e
IL-3 por tcnicas de biologa molecular, es 10
veces ms activa que la combinacin de las 2
citoquinas. Las razones de esta sinergia se
desconocen .
Algunos de estos factores de crecimiento
interactan con componentes de la matrix
extracelular para contribuir a la funcin de los
progenitores o clulas efectoras.
El GM-CSF es producido por linfocitos T,
macrfagos, fibroblastos y clulas endoteliales.
Esta citoquina es un factor de sobrevida y
crecimiento para progenitores hematopoyticos,
as como para precursores ms maduros tales como
eritrocitos, linfocitos T, megacariocitos, e
igualmente para clulas endoteliales. Esta
citoquina es adems un factor de diferenciacin y
activacin para granulocitos y monocitos. Por otra
parte, GM-CSF junto con G-CSF, IL-5 y M-CSF
inducen la proliferacin y diferenciacin de
precursores de neutrfilos, eosinfilos y monocitos
respectivamente.
Es interesante notar que el receptor de GMCSF, que es un complejo formado por una cadena
de baja afinidad unida a una cadena , comparte
esta ltima cadena con los receptores para la IL-3
e IL-5. Esta propiedad de los receptores podra
explicar, en parte, que estas citoquinas posean
funciones similares.
El G-CSF es producido por macrfagos,
fibroblastos, clulas endoteliales y clulas que
conforman el estroma de la mdula sea. Este es
un factor de crecimiento, diferenciacin y
activacin de neutrfilos y sus precursores.
Sinergiza con IL-3 para estimular el crecimiento
de progenitores hematopoyticos, y causa
proliferacin y migracin de clulas endoteliales.
El receptor de G-CSF est compuesto de una sola
molcula con una estructura hbrida que contiene
un dominio Ig, un dominio hematopoyetina y 3
dominios FNIII. Existen formas solubles del receptor.
El M-CSF es un factor de crecimiento,
diferenciacin y activacin para macrfagos y sus
clulas progenitoras. Este es producido por
mltiples fuentes, incluyendo linfocitos
monocitos, fibroblastos, clulas endoteliales,
mioblastos y osteoblastos. Esta citoquina puede
ser producida como una molcula soluble o una
molcula de membrana.
4.3.2. Otras citoquinas estimuladoras de la

hematopoyesis
Varias citoquinas que no tienen un efecto
directo sobre las clulas troncales o progenitoras,
pueden aumentar el efecto proliferativo de los
factores estimuladores de colonias en combinacin
con ellos. Entre estas citoquinas tenemos: SCF,
IL-1, IL-4, IL-6, IL-7, IL-9, IL-11, IL-12, LIF,
MIP-1 (Macrophage Inflammatory Protein1), MIP-1 (Macrophage Inflammatory Protein-1) y MIP-2 (Macrophage Inflammatory
Protein-2).
De todas estas citoquinas la que tiene el efecto
ms notable es SCF. Esta citoquina est presente de
manera soluble o ligada a la membrana celular debido
al procesamiento alternativo del mRNA. SCF soluble
aumenta el nmero y el tamao de CFU-GEMM,
BFU-E, CFU-GM, CFU-G derivadas por
estimulacin con Epo o Epo ms IL-3, GM-CSF o
G-CSF. SCF acta en sinergia con los factores
estimuladores de colonias e IL-7. En estudios en
animales, SCF ha sido asociado con aumento de la
hematopoyesis (aumento de clulas troncales y
progenitoras) en la mdula sea y movilizacin de
clulas troncales hacia la sangre. El receptor para
SCF es el proto-oncogen, c-kit, de ah que SCF sea
tambin conocido como "c-kit ligand", (ligando para
c-kit) el cual est expresado en todos los progenitores
hematopoyticos excepto en precursores del linaje
B. C-kit es una glicoprotena de membrana que consta
de 5 dominios tipo inmunoglobulina y un dominio
tirosina kinasa intracelular. El receptor funcional es
probablemente un homodmero al igual que el SCF
funcional.
La IL-7 es producida por clulas estromales
de la mdula sea y del timo. sta acta como un
factor de crecimiento para los progenitores de los
linfocitos B y T, aunque tambin estimula el
crecimiento de linfocitos T maduros.
La IL-9 es una citoquina que aumenta la
proliferacin de los linfocitos T y de precursores
eritroides aunque su funcin principal es estimular
a los mastocitos. Esta citoquina es producida
principalmente por linfocitos Th2 activados.
La IL-11 es secretada por lneas celulares
obtenidas de clulas estromales de mdula sea y
acta sobre clulas troncales multipotenciales y
progenitores comprometidos hacia macrfagos y
megacariocitos.
En un estudio reciente hecho in vivo en
ratones, se demostr la capacidad de IL-12 para
movilizar progenitores hematopoyticos hacia la
231
Sin ttulo-2
231
5/26/06, 10:26 AM
sangre perifrica, efecto que se produce en sinergia

con otras citoquinas. La IL-12 es producida por
macrfagos y linfocitos B. Esta citoquina aumenta
la respuesta inmune mediada por clulas, mientras
que suprime la respuesta humoral. Los numerosos
efectos estimulatorios hacen pensar de que IL-12
podra ser beneficiosa en el tratamiento de
neoplasias.
CX 3 C corresponden a quimioquinas cuyas

cistenas se encuentran separadas por uno o tres
aminocidos, respectivamente. Las quimioquinas
actan a travs de su interaccin con receptores
que poseen siete dominios de transmembrana
acoplados a la familia de protenas G heterotrimricas y la transduccin de la seal de
quimiotaxis es mediada por la subunidad Gi sensible a la toxina de Pertussis. Los receptores de
quimioquinas se denominan de la misma manera
que los ligandos seguidos por la letra R y un
nmero (CCR1-9, CXCR1-5, XCR1, etc). Segn
la nueva nomenclatura propuesta, las quimioquinas se designan con una letra L seguida por un
nmero correspondiente al nmero del gen que
codifica para esa quimioquina (tabla 11-3).
Probablemente la mayora, si no todas, las
quimioquinas se han originado por duplicacin
gnica a partir de un gen ancestral. De hecho, los
genes de muchas quimioquinas se encuentran
agrupados en ciertas regiones cromosmicas. Un
gran nmero de genes de quimioquinas CC
humanas que tienen efectos sobre monocitos se
encuentran agrupados en la regin 17q11.2,
mientras que los genes de quimioquinas CXC que
actan principalmente sobre neutrfilos se
localizan en la regin cromosmica 4q12-13. No
obstante, recientemente se ha descrito que algunas
quimioquinas CXC especficas para linfocitos T
(CXCL9, CXCL10 y CXCL11) forman una nueva
mini-agrupacin gnica separada de la principal
agrupacin 4q12-13. Esta diversificacin
reflejara un cierto grado de especializacin
funcional desarrollado a travs de la evolucin.
La duplicacin gnica de las quimioquinas
explicara su conservacin entre las especies, la
redundancia de sus funciones y la promiscuidad
con que se unen a sus receptores. Es posible que
esta multiplicidad de funciones haya surgido en
respuesta a la necesidad de producir una gran
cantidad de factores quimiotcticos que aseguraran
el reclutamiento de diferentes tipos de leucocitos
al sitio de la inflamacin.

Las citoquinas involucradas como molculas
supresoras de la hematopoyesis son: lactoferrina,
la subunidad H de ferritina, las prostaglandinas
E1 y E2, TNF-, TNF-, IFN-a, IFN-, IFN-,
TGF-, inhibina y algunos miembros de la familia
de las quimioquinas.
5. QUIMIOQUINAS
Las quimioquinas corresponden a un grupo
de pequeas protenas bsicas (8-14 kDa),
secretadas y estructuralmente relacionadas que
fueron inicialmente descritas como molculas
inducidas por la inflamacin y capaces de atraer
monocitos, neutrfilos y linfocitos T activados.
Posteriores investigaciones han mostrado que las
quimioquinas cumplen un importante papel en la
coordinacin del trfico linfocitario a travs de
todo el cuerpo durante la vigilancia inmune y en
la direccin de complejos movimientos celulares
durante el desarrollo y diferenciacin de los
linfocitos. Las quimioquinas tambin tienen
efectos sobre clulas del sistema nervioso y el
endotelio donde ejercen efectos angiognicos. Dos
propiedades generales caracterizan a estas
molculas: no son especie-especficas y son
promiscuas en el uso de sus receptores. No obstante, tambin existen quimioquinas muy
especficas. Hasta ahora se han descrito ms de
50 quimioquinas y en algunos casos la misma
molcula ha sido reportada con nombres diferentes
contribuyendo a crear una cierta confusin en este
campo. Por lo tanto, recientemente se ha planteado
una nueva clasificacin sistemtica de las
quimioquinas (tabla 11-3). Las quimioquinas se
clasifican en cuatro familias de acuerdo al nmero
y espaciamiento de los aminocidos cistenas
localizados cerca de su extremo amino-terminal.
La familia CC agrupa a las quimioquinas cuyas
dos cistenas se encuentran adyacentes, la familia
C presenta una sola cistena y las familias CXC y
5.1. Quimioquinas en la diferenciacin

linfocitaria
En los rganos linfoides primarios (mdula
sea para linfocitos B y el timo para linfocitos T)
ocurre la diferenciacin y maduracin de los
linfocitos a partir de una clula progenitora
multipotencial (ver captulos 3 y 13). Recientes
estudios han mostrado que las clulas progenitoras
232
Sin ttulo-2
232
5/26/06, 10:26 AM
Tabla 11-3. Clasificacin de las quimioquinas y sus receptores

Nombre sistemtico Ligando humano
Ligando murino
Receptores
Familia C
XCL1
XCL2
Linfotactina/SCM-1/ATAC
SCM-1
Linfotactina
desconocido
XCR1
XCR1
Familia CX3C
CX3CL1
Fractalquina
Neurotactina
CX3CR1
Familia CC
CCL1
CCL2
CCL3
CCL4
CCL5
CCL6
CCL7
CCL8
CCL9/10
CCL11
CCL12
CCL13
CCL14
CCL15
CCL16
CCL17
CCL18
CCL19
CCL20
CCL21
CCL22
CCL23
CCL24
CCL25
CCL26
CCL27
I-309
MCP-1/MCAF
MIP-1/LD78
MIP-1
RANTES
desconocido
MCP-3
MCP-2
desconocido
Eotaxina
desconocido
MCP-4
HCC-1
HCC-2/Lkn-1/MIP-1
HCC-4/LEC
TARC
DC-CK1/PARC AMAC-1
MIP-3/ELC/exodus-3
MIP-3/LARC/exodus-1
6Cquina/SLC/exodus-2
MDC/STCP-1
MPIF-1
MPIF-2/Eotaxina-2
TECK
Eotaxina-3
CTACK/ILC
TCA-3, P500
JE
MIP-1
MIP-1
RANTES
C10, MRP-1
MARC
MCP-2
MRP-2, CCF18, MIP-1
Eotaxina
MCP-5
Desconocido
Desconocido
Desconocido
LCC-1
TARC
Desconocido
MIP-3/ELC/exodus-3
MIP-3/LARC/exodus-1
6Cquina/SLC/exodus-2/TCA-4
ABCD-1
Desconocido
Desconocido
TECK
Desconocido
ALP/CTACK/ILC
CCR8
CCR2
CCR1, CCR5
CCR5
CCR1, CCR3, CCR5
desconocido
CCR1, CCR2, CCR3
CCR3
desconocido
CCR3
CCR2
CCR2, CCR3
CCR1
CCR1, CCR3
CCR1
CCR4
desconocido
CCR7
CCR6
CCR7
CCR4
CCR1
CCR3
CCR9
CCR3
CCR10
Familia CXC
CXCL1
CXCL2
CXCL3
CXCL4
CXCL5
CXCL6
CXCL7
CXCL8
CXCL9
CXCL10
CXCL11
CXCL12
CXCL13
CXCL14
CXCL15
GRO/MGSA-
GRO/MGSA-
GRO/MGSA-
PF4
ENA-78
GCP-2
NAP-2
IL-8
Mig
IP-10
I-TAC
SDF-1/
BLC/BCA-1
BRAK/bolequina
Desconocido
GRO/KC
GRO/KC
GRO/KC
PF4
LIX
Cka-3
Desconocido
Desconocido
Mig
IP-10
Desconocido
SDF-1
BLC/BCA-1
BRAK
Lungquina
CXCR2, CXCR1
CXCR2
CXCR2
Desconocido
CXCR2
CXCR1, CXCR2
CXCR2
CXCR1, CXCR2
CXCR3
CXCR3
CXCR3
CXCR4
CXCR5
Desconocido
Desconocido
233
Sin ttulo-2
233
5/26/06, 10:26 AM
hematopoyticas (CPH) humanas expresan el receptor CXCR4 y que en experimentos in vitro son
capaces de migrar y de inducir la expresin de
molculas de adhesin en respuesta a la
quimioquina CXCL12. Esta quimioquina se ha
detectado tempranamente en el hgado fetal
murino durante la colonizacin de las CPH (da
embrionario 10.5-12.5) y decae abruptamente
cuando estas clulas migran desde el hgado hacia
la mdula sea (da embrionario 14.5). A su vez,
en la microvasculatura y en las clulas estromales
de la mdula sea es posible detectar CXCL12.
Experimentos genticos han mostrado que ratones
que no expresan el gen de CXCL12 o el receptor
CXCR4 (CXCR4-/-) mueren perinatalmente y
presentan una mielopoyesis y linfopoyesis de
clulas B reducida en el hgado fetal y
prcticamente ausente en la mdula sea. Estos
resultados sugieren que CXCL12 es el nico
ligando de CXCR4 y son un ejemplo de
especificidad funcional de las quimioquinas. Una
vez que las clulas B han terminado su proceso de
maduracin en la mdula sea, ellas abandonan
este rgano y salen a la circulacin perifrica.
Estudios in vitro han mostrado que a partir del
estado de diferenciacin descrito como de clulas
B inmaduras, stas comienzan a perder su
capacidad de respuesta a CXCL12 lo que ha sido
interpretado como una estrategia para escapar al
efecto de retencin de esta quimioquina y poder
as emigrar de la mdula sea.
Por otra parte, la maduracin de los timocitos
implica la migracin de estas clulas a travs de
distintos subcompartimentos tmicos que
comienza en la regin ms externa de la corteza y
culmina en la mdula tmica. Diversos estudios
han mostrado la expresin diferencial de ciertas
quimioquinas y la respuesta tambin diferencial
de los timocitos a lo largo de este proceso. Hasta
ahora, en la regin cortical slo se han identificado
las quimioquinas CXCL12 y CCL25. La deteccin
de CXCL12 se correlaciona con la alta expresin
de su receptor CXCR4 en timocitos doble positivos
(CD4+/CD8+), si bien su accin puede estar
sobrepuesta con otros factores ya que el desarrollo
de clulas T ocurre normalmente en los ratones
CXCR4-/-. CCL25 es detectada en clulas
dendrticas y epiteliales tmicas en la corteza, en
la mdula e incluso en el timo fetal lo que sugiere
que podra participar en el reclutamiento de clulas
progenitoras tmicas. Sin embargo, estudios in
vitro han mostrado que la neutralizacin de CCL25
no influye sobre el poblamiento tmico. Por otro
lado, el receptor de esta quimioquina, CCR9, es

expresado por timocitos doble negativos y doble
positivos pero cuando estos linfocitos maduran y
se transforman en linfocitos T simple positivos
pierden la expresin de CCR9 y adquieren CCR7
adems de L-selectina. En contraste a la corteza
tmica, varias quimioquinas han sido detectadas
en la mdula incluyendo a CCL22, CCL17,
CCL19, CCL21, CCL11 y CXCL16. La
participacin de CCL22 y CCL17 es consistente
con la expresin del receptor de estos ligandos,
CCR4, en timocitos que han sobrevivido al
proceso de seleccin positiva y que transitan hacia
la mdula tmica. En este mismo estado de
maduracin los linfocitos T expresan el receptor
CCR7 y muestran una aumentada capacidad de
responder a sus ligandos CCL19 y CCL21. El
patrn de expresin de estas dos ltimas
quimioquinas y de su receptor, sugiere que ellos
estn implicados en la organizacin celular tmica
atrayendo a los linfocitos T haca las vas de salida
del timo.
5.2. Quimioquinas en la recirculacin de los
linfocitos a travs de los rganos linfoides
secundarios
Una vez que los linfocitos B y T maduros
son liberados a la circulacin, ellos viajan
constantemente a travs de los rganos linfoides
secundarios (OLS) en bsqueda de antgeno. Para
que esto ocurra, los linfocitos deben interactuar
con las clulas endoteliales columnares (HEV) de
las vnulas post-capilares ubicadas dentro del OLS
y luego transmigrar hacia su interior (ver captulo
12). La sospecha que las quimioquinas podran
participar en este proceso provino de resultados
que mostraron que la toxina de Pertussis, un
inhibidor de protenas G, bloqueaba la adhesin
de leucocitos al endotelio. Estudios posteriores
demostraron que las quimioquinas median la
activacin de las integrinas hacia un estado
conformacional de mayor afinidad, evento crucial
en la obtencin de una adhesin ms firme entre
linfocito y endotelio. La quimioquina CCL21 es
detectada con gran intensidad por HEVs de los
ndulos linfticos y de las placas de Peyer y su
importancia en el "homing" de linfocitos a OLS
est basada en el estudio de ratones plt. Debido a
una mutacin espontnea an desconocida, las
HEVs de estos ratones no pueden expresar el gen
de CCL21 y sus ndulos linfticos y placas de
Peyer muestran un reducido nmeros de clulas
234
Sin ttulo-2
234
5/26/06, 10:26 AM
T. Adems, la adhesin a HEVs y el "homing" de

linfocitos T a los OLS puede ser restaurado
despus de que estos ratones plt son inyectados
subcutneamente con CCL21. Se ha determinado
que el receptor de esta quimioquina corresponde
a CCR7 el cual es expresado por linfocitos T
vrgenes. Consecuentemente, los ratones CCR7/- presentan el mismo fenotipo que los ratones plt,
es decir, deficiente nmero de linfocitos T en los
ndulos linfticos. En el modelo murino existen
tres quimioquinas capaces de unir a CCR7: dos
isoformas de CCL21, las cuales slo difieren en
un slo aminocido (serina por leucina en la
posicin 65) y CCL19, pero solamente la isoforma
CCL21/serina no es expresada en los ratones plt.
Esto significa que a pesar de la presencia de los
otros ligandos para CCR7 (CCL21/leucina y
CCL19) nicamente CCL21/serina puede mediar
la migracin de linfocitos T a los ndulos
linfticos. Una posible explicacin para este
resultado es que los otros dos ligandos no sean
expresados en el lugar ms apropiado para llevar
a cabo la extravasacin o que cada ligando
transduzca diferentes seales a travs del mismo
receptor. En este caso, CCL21/serina correspondera a otro ejemplo de especificidad de las
quimioquinas. Otra interesante observacin
rescatada de los ratones plt es que la recirculacin
de linfocitos B a los rganos linfoides secundarios
no se ve afectado, lo que significara que la
adhesin de las clulas B a las HEVs no depende
de CCL21. Esto es corroborado por el hecho de
que en ratones normales las clulas B se adhieren
a una regin de las HEVs en la cual no ha sido
detectada CCL21 y a la cual no se adhieren los
linfocitos T. Por lo tanto, la expresin topolgica
diferencial de quimioquinas podra ser el inicio
de la segregacin de linfocitos haca las zonas B y
T de los OLS, proceso en el cual participan otras
quimioquinas. Por otra parte, se ha mostrado que
las clulas B de ratones impedidos de expresar el
receptor CXCR5 son incapaces de migrar desde
la zona rica en clulas T haca la zona folicular B
en el bazo y en las placas de Peyer. En amgdalas
inflamadas este receptor es expresado por una
poblacin particular de linfocitos T de ayuda que
asisten a las clulas B en la produccin de
anticuerpos. El ligando para este receptor,
CXCL13, ha sido detectado en el manto folicular
y en las HEVs foliculares pero no en la zona T.
Por lo tanto, en el folculo del OLS, la quimioquina
CXCL13 podra facilitar la interaccin de clulas
B-T necesaria para una eficiente respuesta inmune.
Los ratones deficientes en la expresin de

CXCR5 como de CCR7 presentan una severa
desorganizacin de los OLS, lo que significa que
las quimioquinas son fundamentales en el
desarrollo y mantencin de microambientes
localizados dentro de los tejidos linfoides (zonas
B y T).
5.3. Quimioquinas en el "homing" de los
linfocitos a sitios efectores perifricos
A diferencia de los linfocitos T vrgenes que
migran azarosamente a travs de todo el cuerpo,
los linfocitos T de memoria/efectores presentan
una migracin preferencial y selectiva haca los
sitios efectores perifricos, proceso conocido como
"homing". Estudios recientes han demostrado que
las quimioquinas podran jugar un papel
importante en el "homing" de los linfocitos a
tejidos tales como la piel (tejido cutneo) e
intestino (tejido mucoso). Las clulas T de memoria cutneas se caracterizan por la expresin
de un antgeno llamado CLA, mientras que los
linfocitos de memoria que migran preferencialmente al tejido intestinal expresan la integrina
47 como marcador especfico. Se ha determinado que el receptor de quimioquina CCR4 es
expresado en altos niveles en linfocitos T CLA+
pero est prcticamente ausente en linfocitos T
47. A su vez, el ligando de CCR4, la
quimioquina CCL17, ha sido detectada en clulas
endoteliales de vnulas de la piel inflamada, pero
no en vnulas de la lmina propia de la mucosa
intestinal. Otra quimioquina, llamada CCL27
tambin es capaz de promover la migracin de
linfocitos T de memoria a la piel a travs de su
interaccin con el receptor CCR10, el cual es
expresado por las clulas de Langerhans,
melanocitos, fibroblastos y clulas endoteliales de
la microvasculatura dermal. Por otro lado, el receptor CCR9 es expresado especficamente por
linfocitos T de memoria 4 7hi con homing
preferencial hacia el tejido intestinal y no por los
linfocitos T de memoria cutneos. Consecuentemente, tan slo los linfocitos T 47hi responden
a la quimioquina CCL25, ligando de CCR9,
aunque solamente se ha podido detectar la
expresin del mRNA de CCL25 en el intestino.
5.4. Quimioquinas y enfermedades
Las quimioquinas pueden ser divididas en dos
categoras. La primera corresponde a las
235
Sin ttulo-2
235
5/26/06, 10:26 AM
quimioquinas constitutivas u homeostticas

responsables del trfico linfocitario basal y de la
mantencin y estructuracin de los rganos
linfoides. La segunda categora est integrada por
las quimioquinas inducibles o inflamatorias que
son expresadas en respuesta a un estmulo o estrs
fisiolgico. Esta induccin puede significar un
aumento en el nivel de expresin del mRNA de
una quimioquina de hasta 300 veces en pocas
horas de activacin. Sin embargo, una alta
expresin de quimioquinas puede ser la causa de
una descontrolada activacin celular y provocar
un dao tisular o enfermedad. De hecho, existe
una estrecha relacin entre la expresin de ciertas
quimioquinas y enfermedades asociadas con la
infiltracin de leucocitos. En seres humanos la
relacin ms irrefutable se encuentra en el
sndrome de inmunodeficiencia adquirida
(SIDA), mientras que para otras patologas la
asociacin ha sido inferida de modelos animales.
En el SIDA se ha demostrado que el VIH
(Virus de la Inmunodeficiencia Humana) requiere
de CD4 y los receptores de las quimioquinas
CXCR4 y CCR5 para infectar una clula . Este
hallazgo provino de la identificacin de una
delecin de 32 nucletidos en el receptor de
quimioquina CCR5 que protege contra el SIDA a
individuos homozigotos y frena la progresin
de la enfermedad en personas heterozigotas. Los
receptores CCR5 y CXCR4 definen diferentes
poblaciones de clulas T (de memoria y vrgenes,
respectivamente) lo que probablemente est
relacionado con los diferentes tropismos celulares
del virus (macrfagos y clulas T) y con su
utilizacin en diferentes estados de la enfermedad
(CCR5 en estados tempranos y CXCR4 en estados
tardos).
Otra enfermedad relacionada con la expresin
de ciertas quimioquinas es la esclerosis mltiple
(EM). Esta es una enfermedad autoinmune,
neuroinflamatoria crnica y recurrente, en la cual
el reconocimiento de un autoantgeno presente en
las fibras nerviosas recluta a linfocitos T y
macrfagos hacia el sistema nervioso central. Esta
enfermedad tiene perodos de remisin lo que
implica la existencia de mecanismos inmunes de
regulacin. El modelo animal para estudiar la
EM es la Encefalomielitis Alrgica Experimental
(EAE), la cual puede ser inducida en ratones
mediante la inmunizacin con antgenos derivados
de la mielina. Utilizando este modelo se ha
encontrado una correlacin entre las lesiones
inflamatorias provocadas por esta enfermedad y
la deteccin de las quimioquinas CCL5, CCL3,

CCL4, CXCL10 y CCL2. La utilizacin de
anticuerpos neutralizantes anti-CCL3 sugiere que
el desarrollo de lesiones inflamatorias agudas est
asociado a CCL3, mientras que CCL2 participara
en la reincidencia de la enfermedad. A pesar de
algunos resultados discrepantes obtenidos con
ratones knock out para la expresin de estas
quimioquinas y de sus receptores, pareciera ser
que CCL2, su receptor CCR2 y, en menor
extensin CCL3 y CCR1, participaran
activamente en el desarrollo de esta enfermedad.
En humanos se ha encontrado que el lquido
cefalorraqudeo de pacientes con EM en estado
de reincidencia o de ataque activo contiene
grandes cantidades de CCL3, CXCL10, CXCL9
y CCL5. El anlisis de las clulas T presentes en
el lquido cefalorraqudeo demostr que estas
expresaban CXCR3 y CCR5. Asimismo, se han
detectado CCL2, CCL7, CCL8, CXCL10 y
CXCL9 dentro de las lesiones activas de cerebros
autopsiados de pacientes con EM. Consistente con
estos resultados se encontr que macrfagos, microglia y linfocitos T activados expresaban los
receptores CCR2 y CCR5, mientras que los
astrocitos reactivos presentaban CCR3 y CCR5.
Una creciente serie de evidencias ha
demostrado que la formacin de placas
ateroesclerticas son el resultado de una respuesta
inflamatoria al dao arterial producido por la
hipercolesterolemia o la hipertensin. Utilizando
modelos experimentales de esta enfermedad, se
ha observado que ratones CCL2-/- presentan 6585% menos acumulacin de lpidos en las arterias
que el ratn que expresa CCL2. Similares
resultados fueron obtenidos al utilizar ratones con
una deficiencia en la expresin del receptor de
CCL2 (CCR2). En todos los casos, se observ
una disminucin en el contenido de macrfagos
de la pared arterial. Esto sugiere que bajo
condiciones de hipercolesterolemia, CCL2 podra
participar en la quimioatraccin de monocitos que
expresen CCR2 hacia los sitios de formacin de
la placa ateroesclertica. En concordancia con
estos resultados, en un modelo de ratn con
hipertensin inducida experimentalmente se
observ que CCR2 es requerido para la infiltracin
de macrfagos hacia la pared arterial. La
extrapolacin de estos hallazgos a los seres
humanos est fundamentalmente basada en la
deteccin de las quimioquinas CCL2, CCL5,
CCL3 y CCL11 en las placas ateroesclerticas de
pacientes que sufren de esta enfermedad.
236
Sin ttulo-2
236
5/26/06, 10:26 AM
En la artritis reumatoides se ha encontrado

una variedad de quimioquinas que incluyen a
CCL2, CCL3, CCL5, CXCL8 y CXCL10 en el
fluido sinovial de las articulaciones comprometidas. Estas quimioquinas han sido detectadas
en clulas sinoviales y en los leucocitos
infiltrantes. A su vez, en las clulas infiltrantes se
ha detectado la presencia de los receptores CCR2,
CCR5, CXCR2 y CXCR3. Al igual que en el
SIDA se ha asociado la presencia del alelo de
CCR5 que posee una delecin de 32 nucletidos
con una progresin menos severa de la artritis.
En el desarrollo del cncer las quimioquinas
podran cumplir varias funciones potenciadoras.
En primer lugar, se ha observado que las propias
clulas tumorales pueden secretar factores
quimiotcticos de leucocitos, particularmente
CCL2, los cuales pueden representar una
importante fuente de factores angiognicos. De
hecho, en cncer de mama se ha correlacionado
el grado de infiltracin de los macrfagos con la
vascularidad del tejido invadido. En segundo
lugar, las mismas quimioquinas pueden actuar
como factores de crecimiento para las clulas
tumorales. As por ejemplo, CXCL1 estimula la
proliferacin de lneas celulares pancreticas y de
melanoma mientras que CXCL8 tiene el mismo
efecto sobre clulas tumorales de pulmn. Por
otro lado, la presencia de leucocitos asociados al
tumor podra reflejar el intento fallido del sistema
inmune por eliminar el cncer. Siguiendo esta idea
se han desarrollado varios trabajos con CCL2,
CCL5, CCL1, CCL20, CCL21, CXCL10 y XCL1
con la finalidad de utilizarlas en la generacin de
una respuesta inmune antitumoral ms potente.
Finalmente, las quimioquinas podran participar
en la metstasis del tumor. Varios tipos celulares
malignos expresan receptores de quimioquinas lo
que les permitira, una vez alcanzada la
circulacin, migrar en respuesta a sus ligandos
presentes en clulas de otros rganos o tejidos.
amino-terminal mediante la retencin de la

metionina inicial de CCL5 recombinante (MetRANTES) o la adicin qumica del radical
aminoxipentano a la serina amino-terminal de
CCL5 (AOP-RANTES) genera dos potentes
antagonistas de esta quimioquina. Tambin ha
resultado interesante el empleo de un inhibidor
viral de quimioquinas de la familia CC (vCCI)
utilizado por los Poxvirus para evadir la respuesta
inmune. Los efectos de estos antagonistas han sido
probados in vitro o en modelos animales de
experimentacin para algunas enfermedades
relacionadas con la expresin de quimioquinas.
Se ha mostrado que Met-RANTES reduce
la extensin y severidad de la artritis reumatoidea.
Adems, este antagonista es capaz de inhibir la
liberacin de radicales libres de eosinfilos
activados por quimioquinas, por lo que
potencialmente podra ser usado en enfermedades
asociadas a una infiltracin de este tipo de
leucocitos, tal como el asma alrgica.
Adicionalmente, en este tipo de patologas podra
emplearse el inhibidor viral de quimioquinas
vCCI, el cual provoca una notable mejora de la
funcin pulmonar y una disminucin de la
inflamacin de la va area y del parnquima
pulmonar en modelos de ratn con asma inducida
por alergeno. Por otra parte, AOP-RANTES ha
resultado ser un potente inhibidor de la infeccin
de clulas mononucleares de sangre perifrica por
VIH-1 y de la replicacin de este virus en
macrfagos. En el caso de los antagonistas de
CCL2, basados en la delecin de aminocidos de
su regin amino terminal, se ha determinado que
stos son capaces de retrasar la aparicin de la
artritis o de reducir sus sntomas en modelos de
ratones MRL-lpr. La transfeccin in vivo del
cDNA de uno de los antagonistas de CCL2 (7ND)
ha sido usado como terapia gnica contra la
ateroesclerosis suprimiendo el reclutamiento de
monocitos hacia los vasos sanguneos coronarios.
Finalmente, se ha observado que inhibidores de la
biosntesis del colesterol utilizados ampliamente
como drogas en la prevencin de enfermedades
cardiovasculares tambin inhiben la produccin
de CCL2. Esto significa que parte de los efectos
benficos de estas drogas tambin provienen de
su accin anti-inflamatoria y que los inhibidores
de quimioquinas representan innovadoras
herramientas farmacolgicas para la prevencin
de enfermedades cardiovasculares.
5.5. Quimioquinas y terapia

Debido a la importante funcin que las
quimioquinas cumplen en diversos aspectos de la
respuesta inmune y a su participacin en graves
patologas, varios estudios se han orientado a la
bsqueda de antagonistas de quimioquinas con
potenciales aplicaciones teraputicas. La delecin
de los primeros ocho aminocidos de CCL5 o de
CCL2 origina protenas incapaces de producir
quimiotaxis. Asimismo, la extensin de la regin
237
Sin ttulo-2
237
5/26/06, 10:26 AM
LECTURAS SUGERIDAS
Aggarwal, B.B. and Puri, R.K., Eds., Human
cytokines: their role in disease and therapy,
Blackwell Science, 1995.
Ansel, K.M., and Cyster, J.G., Chemokines in
lymphopoiesis and lymphoid organ development,
Curr. Opin. Immunol. 13: 172-179. 2001.
Callard, R. and Gearing, A., Eds., The cytokine
Factsbook, Academic Press Limited, 1994.
Campbell, J., and Butcher, E., Chemokines in
tissue-specific and microenvironment-specific
lymphocyte homing, Curr. Opin. Immunol.,12:
336-341. 2000
Gerard, C., and Rollins, B., Chemokines and
disease, Nature Immunology 2: 108-115. 2001.
Karnitz L. and Abraham R., "Cytokine receptor
signaling mechanism", Curr. Op. Immunol. 7:320326, 1995.
Moser, B., and Loetscher, P., Lymphocyte traffic control by chemokines, Nature Immunology
2: 123-128. 2001.
Nicola, N.A., Ed., Guidebook to cytokines and
their receptors, Oxford University Press, 1994.
Nicholson LB. and Kuchroo V., "Manipulation of
the Th1/Th2 balance in autoimmune disease",
Curr. Op. Immunol. 8:837-842, 1996.
Theze, J., Ed., The cytokine network and immune functions, Oxford University Press, 1999.
Zlotnik, A., and Yoshie, O., Chemokines: A new
classification system and their role in immunity,
Immunity 12: 121-127. 2000.
238
Sin ttulo-2
238
5/26/06, 10:26 AM

Captulo 12
RECEPTORES DE ADHESIN, HOMING
Y ACTIVACIN DE LINFOCITOS
Jorge Rodrigo Mora S. y Mario Rosemblatt S.
1. Introduccin
2. Modelo general de adhesin leucocitaria
3. Receptores de adhesin y sus
ligandos
3.1. Receptores de adhesin de la familia de las integrinas
3.2. Receptores de adhesin de la
superfamilia de las inmunoglobulinas (SFIg)
3.3. Molculas de adhesin de la familia de las selectinas
4. Interacciones linfocito-endotelio
4.1. Trfico linfocitario a travs del
endotelio inflamado
4.2. Trfico linfocitario a travs del

endotelio columnar (HEV)
4.3. Trfico linfocitario hacia la piel
5. Regulacin del posicionamiento
("homing") de linfocitos
6. Receptores de adhesin en la diferenciacin y activacin linfocitaria
6.1. Receptores de adhesin y diferenciacin temprana en la mdula sea
6.2. Receptores de adhesin y diferenciacin en el microambiente de
los OLS
239
Sin ttulo-2
239
5/26/06, 10:26 AM
240
Sin ttulo-2
240
5/26/06, 10:26 AM
RESUMEN
Para que ocurra una respuesta inmune especfica, los linfocitos deben dejar la circulacin
atravesando el endotelio de los rganos linfoides secundarios e ingresar a los rganos linfoides
secundarios: ganglios linfticos perifricos, placas de Peyer (mucosa intestinal), y bazo. Por otro
lado, en el sistema inmune la regulacin de la maduracin y proliferacin de los linfocitos a
clulas efectoras depende del sitio anatmico en el cual se localizan las clulas, y por tanto de las
interacciones que se establecen entre stas y su microambiente. Este dilogo entre linfocitos y
estroma est regulado por la presencia, en la membrana, de linfocitos y de clulas estromales de
receptores y contrarreceptores especficos de adhesin y por la disponibilidad local de citoquinas
y quimioquinas.
En este captulo se describen las diferentes familias de receptores de adhesin y sus
contrarreceptores y se presenta informacin sobre la participacin de estos receptores en los
diferentes mecanismos y procesos involucrados en la respuesta inmune, tanto normal como patolgica. Se discute el papel de estos receptores as como de sus contrarreceptores en la iniciacin y la duracin de la respuesta inmune, as como tambin sobre su participacin en la actividad efectora, recirculacin y posicionamiento o homing especfico de los linfocitos en los
diferentes tejidos. Se presenta la informacin reciente que sustenta la idea de que los linfocitos
vrgenes y de memoria/efectores tienen vas de homing diferentes y especficas para determinados tejidos, lo cual contribuye a hacer ms eficiente y especfica una respuesta inmune. Se
discute la evidencia reciente en el contexto de que el homing tejido-especfico de un linfocito
sea una caracterstica que probablemente perdure en el tiempo, dando fundamento a la idea de
considerarlo como parte de la memoria inmunolgica.
parte por la existencia de tejidos especializados

conocidos como rganos linfoides secundarios
(OLS), los cuales estn encargados por un lado
de concentrar los antgenos provenientes desde
tejidos no linfoides (tambin llamados terciarios), y por otro de permitir la entrada preferencial de linfocitos vrgenes, incrementando con ello
tremendamente la probabilidad de que un linfocito dado encuentre su antgeno especfico en lo que
se conoce como respuesta inmune primaria, que
es aquella donde un linfocito virgen es activado
por primera vez.
Por otro lado, las clulas dendrticas (DC),
clulas presentadoras especializadas en presentar
antgenos a linfocitos T nave (vrgenes), se encargan de captar antgenos en los tejidos
perifricos (mediante macropinocitosis,
fagocitosis, y endocitosis mediada por receptor),
procesarlos y presentarlos en el contexto de MHCI (fenmeno conocido como "crosspriming") o
MHC-II, y finalmente transportarlos a los OLS
para presentrselos a linfocitos T (LT). Por otro
1. INTRODUCCIN
Los linfocitos son clulas esencialmente
migratorias. Estudios clsicos que datan desde los
aos 60 indicaron que los linfocitos circulan entre
la sangre y la linfa de forma constante. Nuestro
sistema inmune se caracteriza por generar una gran
variedad en la especificidad linfocitaria, que en
un adulto se estima entre 25-100 millones de
clones distintos. Sin embargo, el nmero de estos
linfocitos capaces de reconocer un antgeno individual es muy limitado (algunos miles como mximo), lo cual genera un desafo importante, el cual
ha sido ilustrado en la siguiente analoga: Imaginen balones de 150 m de dimetro circunnavegando la tierra (comparable al volumen de un linfocito en reposo [125 femtolitros] en un adulto
[75 litros]), que deban detectar dentro de horas
estructuras mucho ms pequeas que se originan
sbitamente en cualquier parte de nuestro planeta
y que son solamente reconocibles por contacto
directo. Este problema logstico se soluciona en
241
Sin ttulo-2
241
5/26/06, 10:26 AM
lado los linfocitos B, que reconocen antgenos en

su forma nativa (sin necesidad de ser procesados
ni presentados), tambin son activados y se diferencian en los OLS. Despus de su activacin inicial en los OLS, los linfocitos ya transformados
en clulas efectoras y/o de memoria deben dispersarse y viajar a aquellos sitios del organismo
(generalmente tejidos terciarios como la piel o lmina propia de la mucosa intestinal) donde deben
eliminar al antgeno invasor y actuar como vigas
frente a futuras invasiones, en lo que se denomina
respuesta inmune secundaria.
La respuesta inmune (RI) secundaria presenta
varias caractersticas distintivas: (i) Existe desde
su inicio un nmero enormemente mayor de
linfocitos especficos capaces de reconocer al
antgeno, comparados con la RI primaria. (ii) La
respuesta de cada linfocito es intrnsecamente ms
rpida, ya que se requiere un contacto de mucho
menor duracin con la clula presentadora de
antgeno (en el caso de LT), y a su vez no se requiere de seales co-estimuladoras tan exigentes
como en la activacin inicial. Esto a su vez posibilita que clulas no especializadas funcionen
como clulas presentadoras de antgenos. (iii) No
se requiere que esta respuesta ocurra en OLS, de
hecho la RI secundaria habitualmente se produce
en tejidos terciarios. (iv) Generalmente es una RI
polarizada, ya sea de tipo T helper-1 o tipo T helper2, lo cual determina que sea predominantemente
celular o humoral y a su vez que est dominada por
linfocitos B que producen un determinado isotipo
de inmunoglobulina y por ltimo. (v) Actualmente
se ha determinado que en una RI secundaria los
linfocitos presentan predileccin para migrar preferentemente a aquellos tejidos asociados al OLS
donde se produjo la RI primaria, fenmeno que se
conoce como homing tejido-especfico. Inclusive, se ha postulado que el homing tejido-especfico sera una caracterstica adicional de lo que se
conoce como memoria inmunolgica, caracterstica que se ha transformado en la base de las terapias
actuales de vacunacin.
Tanto para que pueda ocurrir una RI primaria como secundaria, los linfocitos deben entrar a
los tejidos donde se producirn estas respuestas
(ya sea OLS o tejidos terciarios, respectivamente). El paso de los linfocitos desde la sangre al
tejido ocurre en las vnulas postcapilares, el llamado endotelio columnar o High Endothelial
Venules (HEV) (excepto en bazo, pulmones, e
hgado), no en arteriolas ni capilares (con lo cual
se minimiza el riesgo de interferir con el intercam-
bio de gases y perfusin del tejido). Una etapa crtica para que los linfocitos puedan atravesar las
vnulas postcapilares es la adhesin de estos
linfocitos al endotelio de estos vasos. Esta es una
etapa finamente regulada, que sucede en una serie
de pasos secuenciales y que depende de la
interaccin entre mltiples receptores de adhesin
presentes en la membrana de los linfocitos y sus
respectivos ligandos desplegados por las clulas
endoteliales. En este captulo se har referencia a
las diferentes familias de receptores de adhesin y
se describirn los mecanismos adhesivos que regulan la migracin de los linfocitos a los tejidos.
2. MODELO GENERAL DE ADHESIN

LEUCOCITARIA
El modelo actual de cmo los linfocitos se
adhieren al endotelio de un vaso sanguneo es
extrapolable a la adhesin de los leucocitos en
general (incluyendo por ej. neutrfilos). El modelo de adhesin de mltiples pasos fue originalmente propuesto en 1991 y consta al menos de
cuatro etapas, separadas temporal y mecansticamente: (a) frenado y rotacin ("tethering" y
"rolling"), (b) activacin de integrinas, (c) adhesin firme ("sticking") y (d) transmigracin
(diapdesis). Cada una de estas etapas secuenciales
es esencial para que ocurra la transmigracin del
leucocito y depende de molculas genricamente
llamadas molculas de adhesin. Estas molculas se pueden agrupar estructuralmente en diferentes familias, las cuales se describirn en detalle ms adelante y se mencionarn en este momento en el contexto del modelo de adhesin de
mltiples pasos. Aunque, en general, estas etapas
son comunes para todos los leucocitos, el proceso
se describir considerando los linfocitos T (a menos que se indique otra cosa), por ser en ellos donde los fenmenos de adhesin han sido estudiados ms en detalle.
La primera etapa en la cascada de adhesin
se conoce como "tethering" y consiste en el frenado ("agarre") al endotelio venular. Esta etapa
se considera generalmente en conjunto con la etapa inmediatamente siguiente conocida como
"rolling", donde los linfocitos ruedan adheridos
laxamente sobre el endotelio vascular. Tanto el
"tethering" como el "rolling" dependen fundamentalmente de molculas conocidas como
selectinas: L-selectina en los linfocitos y E- o Pselectina en el endotelio vascular, aunque en de-
242
Sin ttulo-2
242
5/26/06, 10:26 AM
terminadas circunstancias pueden tambin participar integrinas del tipo 4 presentes en el linfocito (47 o 41). En cuanto a la distribucin de
selectinas, L-selectina se encuentra en todos los
leucocitos, aunque en los linfocitos su expresin
est restringida especialmente a linfocitos vrgenes. E- y P-selectinas se encuentran principalmente en endotelios inflamados, aunque en la piel se
expresan dbilmente en forma constitutiva. Una
caracterstica importante de las molculas que
participan en el "tethering" y "rolling" de los
linfocitos es el estar predominantemente localizadas en estructuras conocidas como
microvellosidades linfocitarias. Esta distribucin
es importante funcionalmente, como se ha demostrado en experimentos en los cuales se ha reemplazado la porcin de transmembrana e intracelular
de L-selectina para localizarla predominantemente
en zonas del linfocito diferentes de las
microvellosidades, con lo cual se reduce
importantemente su capacidad de mediar el
"tethering" y "rolling" (an manteniendo su capacidad de unir sus ligandos). Interesantemente, las
integrinas 4, que son tambin capaces de mediar
"rolling", se localizan igualmente en las
microvellosidades del linfocito, no as otras
integrinas como LFA-1 que no median "rolling".
Se piensa que esta localizacin dejara estas molculas estratgicamente posicionadas para un primer contacto eficiente con el endotelio. Los
ligandos para selectinas (tanto en el endotelio
como en el linfocito) son glicoprotenas del tipo
sialil-Lewis-X, y que comparten en comn el ser
fucosiladas, sialiladas y sulfatadas. Estos ligandos
se encuentran expresados en forma constitutiva en
el endotelio de los ganglios linfticos constituyendo lo que se denomina Peripheral Node Addressin
(PNAd) (ligandos para L-selectina), y tambin se
encuentran en linfocitos como ligandos para P y
E-selectina, aunque la expresin de estos ligandos
en linfocitos estara restringida a algunos subtipos
funcionales, que sern descritos ms adelante. La
importancia de la etapa de "rolling" queda ilustrada en experimentos en los cuales luego de bloquear ya sea L-selectina o sus ligandos (PNAd),
se bloquea casi el 100% de la adhesin a HEV de
ganglios linfticos. Adicionalmente, en humanos
se ha descrito una enfermedad conocida como
LAD-2 (Leukocyte Adhesion Deficiency-2) en
la cual existe una mutacin en una enzima clave
involucrada en la sntesis de ligandos para
selectinas (una fucosiltranferasa). Estos pacientes presentan una importante inmunodeficiencia
secundaria al defecto de adhesin leucocitaria.

La etapa siguiente conocida como activacin, est fundamentalmente mediada por
quimioquinas presentes en el endotelio y los receptores de quimioquinas presentes en los
linfocitos. Respecto a las quimioquinas presentes
en los endotelios, actualmente no es claro en qu
medida el endotelio de los diferentes tejidos participa directamente en la produccin de estas
quimioquinas. Sin embargo, s es claro que el
endotelio es capaz de presentar algunas
quimioquinas producidas en el estroma del tejido
o que vienen desde sitios distantes (como la piel).
Se ha demostrado que estas quimioquinas (ej. IL8 y ELC) pueden ser transportadas
transcelularmente y presentadas por
proteoglicanos en la superficie apical del endotelio
a los linfocitos. De cualquier manera, el resultado final es que un linfocito que est en la etapa de
"rolling", encuentra a estas quimioquinas en el
endotelio, y a travs de sus receptores de
quimioquinas gatilla una cascada de transduccin
de seales dependiente de protena G, la que finalmente lleva al aumento de la adhesin mediada por integrinas (lo que se denomina en general
como activacin). Esta activacin de las
integrinas estara dada por al menos dos mecanismos: (i) Aumento en la afinidad intrnseca del
dmero de integrina, producido por un cambio en
la estructura terciaria y cuaternaria del dmero, y
(ii) un aumento en la avidez, dado fundamentalmente por un acercamiento de las integrinas entre
s en la membrana del linfocito. Esta etapa de
activacin es independiente de la etapa precedente de "rolling", ya que en linfocitos en los cuales
se ha bloqueado la activacin mediada por
quimioquinas por el tratamiento con toxina
pertussis (inhibidor de protena G) se bloquea tambin la adhesin firme ("sticking") sin afectar la
capacidad de hacer "rolling". Estos linfocitos nunca logran adherirse y finalmente se sueltan y vuelven a la circulacin. Este fenotipo, que puede
lograrse experimentalmente, se encuentra presente en los ganglios linfticos de animales que son
naturalmente mutantes y que carecen de las
quimioquinas ELC y SLC (ligandos para el receptor de quimioquina CCR7). En estos animales los linfocitos T son incapaces de adherirse firmemente a las vnulas de endotelio alto (HEV)
de los ganglios linfticos, an cuando efectan el
rolling sin problema. El mismo fenotipo se observa en ratones "knockout" para CCR7. Por otro
lado, el paso de activacin puede ser sobrepasado
243
Sin ttulo-2
243
5/26/06, 10:26 AM
artificialmente si las integrinas se activan previamente usando steres de forbol (ej. PMA) o
anticuerpos activadores de integrinas.
La etapa siguiente en la transvasacin
linfocitaria, ya enunciada anteriormente, se denomina adhesin firme o sticking, y depende totalmente de molculas de adhesin heterodimricas
conocidas como integrinas, presentes en los
linfocitos. Experimentos donde se han usado
anticuerpos monoclonales bloqueadores de estas
molculas, han demostrado una abolicin de la
adhesin firme de los linfocitos (sin afectar el
"rolling" de stos). Por otro lado, en humanos
existe una enfermedad en la cual los linfocitos son
incapaces de adherirse firmemente al endotelio de
los tejidos, produciendo una importante
inmunodeficiencia que con el tiempo es letal. En
esta enfermedad (afortunadamente rara), conocida como LAD-1 ("Leukocyte Adhesion
Deficiency-1"), los pacientes presentan una mutacin de la cadena de integrina 2, con lo cual
carecen de las integrinas que posee esta cadena,
principalmente LFA-1, la cual es esencial en casi
todos los fenmenos de adhesin estudiados. Los
ligandos para las integrinas, molculas de la
superfamilia de las inmunoglobulinas (ej. ICAM1 y -2, MAdCAM-1, VCAM-1), se encuentran
presentes en el endotelio de los tejidos, ya sea en
forma constitutiva (en los OLS y algunos tejidos
extralinfoides) o en forma inducible en tejidos inflamados.
Por ltimo, una etapa que hasta el da de hoy
est muy pobremente caracterizada es la transmigracin linfocitaria (y leucocitaria en general). Una dificultad para estudiar esta etapa en
forma aislada es el hecho de que adems de ser
dependiente de las etapas anteriores, es probable
que requiera tambin de las mismas molculas que
participan en las etapas previas (ej. quimioquinas).
Por otro lado, se debe tener en cuenta que para
que un linfocito pueda acceder finalmente al tejido, debe ser capaz de disociar (al menos transitoriamente) las uniones entre las clulas endoteliales,
luego la membrana basal endotelial, y finalmente
abrirse paso entre los elementos de matriz
extracelular. Cada una de estas etapas adicionales podra, en teora, estar regulada y requerir nuevos elementos tanto del linfocito (ej.
metaloproteasas) como del tejido, por lo cual decir meramente transmigracin puede demostrar
ser a la larga una sobresimplificacin de este fenmeno.
En la seccin siguiente se profundizar en la
descripcin de las molculas de adhesin que ya

se enunciaron en el contexto de la cascada de adhesin, para lo cual se han agrupado de acuerdo a
caractersticas estructurales en diferentes familias.
3. RECEPTORES DE ADHESIN Y SUS

LIGANDOS
Tres grandes familias de receptores de adhesin ejercen su accin reguladora en el sistema
inmune, receptores de la Familia de las
Integrinas, receptores pertenecientes a la
Superfamilia de las Inmunoglobulinas (SFIg) y
receptores de la Familia de las Selectinas. Ms
recientemente se ha incorporado la creciente Familia de las Quimioquinas y sus Receptores. Si
bien es cierto, las quimioquinas y sus receptores
no participan como pares de adhesin ligando-receptor clsicos, como se discuti previamente, se
sabe que su papel es fundamental en la cascada de
adhesin, y adicionalmente y como se discutir
ms adelante, actualmente se acepta cada vez ms
que tienen un papel muy importante en la regulacin de especificidad fina del "homing" tejido-especfico de las clulas inmunes (y tambin dentro
del microambiente del tejido linfoide). Sin embargo, dado que las quimioquinas y sus receptores
son descritos en detalle en el captulo 11, slo se
mencionarn aqu en el contexto de la cascada de
adhesin, as como tambin aquellas involucradas
en el "homing" tejido-especfico de los linfocitos.
Otros receptores de adhesin, o sus ligandos que
no pertenecen a ninguna de estas familias sern
presentadas desde un aspecto funcional durante este
captulo. Los receptores de adhesin se expresan
en la membrana de los linfocitos u otras clulas inmunes mientras que sus contrarreceptores o
ligandos se encuentran, fundamentalmente, en clulas no inmunes, tales como clulas endoteliales,
clulas accesorias (clulas dendrticas, clulas
dendrticas foliculares, monocitos, etc.), en otros
linfocitos o en la matriz extracelular. En este captulo, se nombrar como receptor de adhesin a
las molculas que se encuentran en la superficie de
los linfocitos u otras clulas inmunes (clulas NK,
etc.) y como ligando a aquellas molculas que
interactan con el receptor y que se localizan en la
clula a la cual se une el linfocito, aunque en muchos casos molculas de la misma familia deban
considerarse como receptor de adhesin cuando se
encuentra en el linfocito o como ligando si se encuentra en otra clula.
244
Sin ttulo-2
244
5/26/06, 10:26 AM
fibronectina. Por otro lado, la cadena V correspondiente al clsico receptor para vitronectina 3
puede tambin formar combinaciones con las cadenas 1,+5,+6, y 8, adquiriendo diferentes
especificidades de unin. Actualmente se han descrito ms de 20 diferentes combinaciones .
Los receptores de la familia de las integrinas
1 conocida tambin como VLA ("Very Late
Antigen") comparten la cadena comn 1 (CD29)
y se encuentran ampliamente distribuidas tanto en
linfocitos B como T. Al menos 9 diferentes cadenas ++(tabla 12-1) han sido identificadas en asociacin con 1.++Estas integrinas 1 tienen como
ligandos una serie de protenas de la matriz
extracelular (MEC) tales como fibronectina (fn),
colgeno (col), vitronectina (vn), y laminina (lm).
Entre las integrinas expresadas por los linfocitos,
la integrina+51+(VLA-5) tiene como ligando el
tripptido RGD (Arg, Cly, Asp) de la fn. Por otro
lado, la integrina 41++(VLA-4) la ms abundante en linfocitos, tiene como ligandos un pptido
de la regin CS-1 de la fn, adems de VCAM-1
("Vascular Cell Adhesion Molecule-1"), una molcula que se expresa en la superficie de las clulas endoteliales en tejido inflamado y en el
endotelio de los rganos linfoides secundarios (ver
molculas de adhesin de la Superfamilia de las
Inmunoglobulinas ms adelante).
Cuatro diferentes cadenas + (CD11) se asocian con la cadena 2++(CD18) formando una
subfamilia (tabla 12-1). Los linfocitos circulantes
expresan fundamentalmente la molcula LFA-1
("Lymphocyte Function Associated Molecule-1")
3.1. Receptores de adhesin de la familia de las

integrinas
Las integrinas son molculas heterodimricas
de transmembrana que se unen a diferentes
ligandos extracelulares y transmiten seales al interior de la clula a travs del citoesqueleto. Las
integrinas estn constituidas por dos cadenas
polipeptdicas, + y , unidas en forma no
covalente (figura 12-1), cuyos extremos
aminoterminales forman una estructura globular
que contribuye a la asociacin no covalente entre
ambas cadenas y tambin a la unin con su ligando. Esta unin al ligando es dependiente de
cationes divalentes (Ca2+ y Mg2+), y su participacin es esencial para la actividad de las integrinas.
Originalmente, las integrinas fueron clasificadas
en tres subfamilias, de acuerdo a la cadena+,+en
las cuales cada una de las tres cadenas ++se asociaba con diferentes cadenas ,++generando diferentes heterodmeros. Recientemente la familia de las Integrinas se ha visto expandida por el
descubrimiento de nuevas cadenas y por el hecho que una misma cadena pueden asociarse
con ms de una cadena . Actualmente se conocen 15 cadenas + y 7 cadenas . La asociacin
entre las distintas cadenas + y imparten al
heterodmero su especificidad frente al ligando,
dndose que diferentes combinaciones
++pueden actuar como receptor para un mismo
ligando. Por ejemplo, la cadena 1 puede combinarse con varias cadenas , dos de las cuales, 4 y
5 imparten al heterodmero la capacidad de unir
Figura 12-1. Molculas de adhesin celular. Se muestra esquemticamente la estructura de las molculas de adhesin. (A)
Familia de las Integrinas, (B) Superfamilia de las Inmunoglobulinas y (C) Familia de las Selectinas.
245
Sin ttulo-2
245
5/26/06, 10:26 AM
o L2 formada por la combinacin de CD11a con

CD18. Esta integrina juega un papel central en el
proceso de transmigracin linfocitaria y ha sido
tambin directamente involucrada en la actividad
de los LT citotxicos (CD8+) as como tambin
en la actividad de clulas T "helper" y clulas "natural killer" (NK). Las otras molculas de la familia 2 (CD11b, CD11c, CD11d) se expresan principalmente en monocitos, neutrfilos y clulas NK.
Desde el punto de vista de la recirculacin
linfocitaria, dos de los principales ligandos de la
integrina CD11aCD18 (LFA-1) son CD54 (ICAM1, "Intercelular Adhesion Molecule-1") y CD102
(ICAM-2) receptores de adhesin pertenecientes
a la Superfamilia de las Inmunoglobulinas (ver
ms adelante).
Otro receptor de adhesin perteneciente a la
familia de las Integrinas, que cumple un rol de
importancia en la migracin y alojamiento de los
linfocitos en placas de Peyer y tejido mucoso es
la molcula 47, una molcula que comparte la
misma cadena + presente en 41. El principal
ligando para 47.corresponde a MAdCAM-1
(Mucosal Addressin Cell Adhesion Molecule-1),
una glicoprotena presente en las clulas
endoteliales del tejido mucoso, aunque
47++tambin se liga (luego de la activacin
linfocitaria) a fn y VCAM-1 (ver tabla 12-1).
transendotelial de los linfocitos, as como en la

interaccin de stos con otras clulas durante la
respuesta inmune es la molcula CD54 (ICAM1). Esta molcula, presente en el endotelio se induce durante los procesos inflamatorios y se une,
a travs de su primer dominio inmunoglobulina
amino terminal, a la integrina CD11 a CD18 (LFA1) presente en linfocitos, que como se mencion
cumple un rol muy importante en la etapa de adhesin firme o "sticking" de los leucocitos.
Otra molcula de esta familia, CD102
(ICAM-2) se expresa en forma constitutiva en el
endotelio y en algunas clulas presentadoras de
antgeno, y participara en los procesos iniciales
de transmigracin y activacin linfocitaria.
Un miembro ms reciente de este grupo de
receptores de adhesin es CD106 (VCAM-1).
CD106 existe en dos formas en la membrana, una
dominante que contiene 7 dominios Ig, y otra que
surge del procesamiento del mRNA generando una
molcula con 6 dominios Ig. Esta molcula no se
expresa en el endotelio vascular normal y es inducida por citoquinas pro-inflamatorias como IL-1,
IFN o TNF, participando as en el proceso
de transmigracin linfocitaria durante la inflamacin. Datos ms recientes indican que VCAM-1
se expresara en forma constitutiva en el endotelio
columnar (HEV, "High Endothelial Venules") de
los rganos linfoides, y participara en el ingreso
de los linfocitos a estos rganos durante los procesos normales de vigilancia y respuesta inmune.
Por otro lado, CD106 ha sido implicada en los
procesos de diferenciacin temprana de linfocitos
B a partir de precursores hematopoyticos en la
mdula sea, as como tambin en las etapas finales de diferenciacin de linfocitos B en los
folculos secundarios. El ligando para VCAM-1
es 41 (VLA-4).
Un miembro ms reciente de esta familia de
receptores de adhesin es MAdCAM-1, el ligando ms importante de 47. Esta molcula se expresa tanto en HEV de placas de Peyer como de
ganglio mesentrico, y tambin en vnulas
postcapilares de la lmina propia de mucosa intestinal. Se han descrito dos formas funcionales
de MAdCAM-1, una que est presente en placas
de Peyer y que tiene capacidad de unir tanto 47
como L-selectina, y otra que se encuentra en lmina propia con capacidad de unir slo 47.
MAdCAM-1 acta como domicilina de mucosa ("mucosal addressin"), es decir, participa en
la adhesin de linfocitos efectores o de memoria
con "homing" hacia mucosa intestinal (ver ms
3.2. Receptores de adhesin de la superfamilia

de las inmunoglobulinas (SFIg)
Los receptores de esta familia comparten el
llamado dominio de inmunoglobulina, compuesto de 90-100 residuos de aminocidos dispuestos
en dos lminas formadas por cadenas de estructura anti-paralelas estabilizadas por enlaces
disulfuro (captulo 6). Las molculas pertenecientes a este grupo pueden dividirse en dos categoras; aquellas involucradas en la interaccin de los
linfocitos con el antgeno (ej. Inmunoglobulinas
y receptores de clulas T, (TCR) o con clulas presentadoras de antgeno (molculas MHC-I y
MHC-II, CD4, CD8) y aquellas que participan en
fenmenos adhesivos ms generales, tales como
CD2, CD54 (ICAM-1), CD102 (ICAM-2), CD106
(VCAM-1) y MAdCAM-1. Aquellas involucradas
en el reconocimiento de antgenos se expresan
fundamentalmente en linfocitos, mientras que
aquellas que actan en fenmenos de adhesin ms
generales se expresan en el endotelio a excepcin de CD2 que se encuentra en linfocitos.
Central en los procesos de migracin
246
Sin ttulo-2
246
5/26/06, 10:26 AM
Tabla 12-1. Receptores de adhesin y sus ligandos.

Molcula de adhesin Distribucin
Ligando
Papel en la adhesin
Selectinas
*Todas unen estructuras tipo Sialil-LewisX
L-Selectina
Todos los leucocitos, excepto PNAd, PSGL-1,
Homing a ganglios
(CD62L)
subgrupos de linfocitos
MAdCAM-1,
linfticos y placas de Peyer
efectores/de memoria
E-Selectina
E-Selectina
Clulas endoteliales
PSGL-1, ESL-1 (EHoming de linfocitos
(CD62E)
Selectin Ligand-1),
efectores y de memoria a la
CLA
piel y sitios de inflamacin
P-Selectina
Clulas endoteliales,
PSGL-1, CD24, PNAd
Homing de LT Th1 a
(CD62P)
plaquetas
sitios de inflamacin,
adhesin de plaquetas a
HEV
Ligandos de Selectinas
Sialil-LewisX
Clulas mieloides, algunos LT
Todas las Selectinas
Depende de la molcula
(sCD15)
Th1, HEV
que lo exprese
PSGL-1
Todos los leucocitos
Ligando esencial para
Homing de LT Th1 a
(CD162)
E-Selectina, tambin
sitios de inflamacin, une
une P- y L-Selectina
plaquetas activadas
PNAd
HEV en ganglios linfticos,
L-Selectina y PHoming de LT vrgenes y
Selectina en plaquetas activadas LT de memoria centrales a
sitios de inflamacin crnica
ganglios linfticos
CLA (HECA-452)
LT con homing a piel,
E-Selectina
Homing de linfocitos
clulas dendrticas,
efectores /de memoria a la piel
granulocitos
+2
Integrinas+
L2
Todos los leucocitos
ICAM-1, 2, 3, 4, y 5
Homing de todos los
(LFA-1, CD11aCD18)
linfocitos a los ganglios
linfticos, placas de Peyer,
la mayora de los sitios de
inflamacin
M2
Clulas mieloides, algunos LT
ICAM-1, Factor X,
Desconocido
(Mac-1, CD11bCD18)
activados
fibringeno, C3bi
X2
Clulas dendrticas
Fibringeno, C3bi
Desconocido
(p150,95, CD11cCD18)
D2
VCAM-1, ICAM-1 y -3
Desconocido
(CD11dCD18)
eosinfilos
+ 4
Integrinas+
41
La mayora de los leucocitos,
VCAM-1, fibronectina,
(VLA-4)
excepto neutrfilos
integrinas 4
efectores y de memoria a
tejidos inflamados
47
Linfocitos, clulas NK,
MAdCAM-1,
(LPAM-1)
mastocitos, basfilos,
fibronectina, dbil a
a tejidos mucosos intestinales
monocitos
VCAM-1
Superfamilia de las Inmunoglobulinas
ICAM-1
Mayora de los tipos celulares
integrinas L2, M2,
Ligando crtico para
(CD54)
y fibringeno
integrinas 2
ICAM-2
integrina L2
Desconocido
(CD102)
plaquetas
VCAM-1
Clulas endoteliales, estroma
Integrinas 41, 47,
(CD106)
de mdula sea, clulas
y D2
efectores/de memoria a
foliculares dendrticas
tejidos inflamados
MAdCAM-1
HEV de placas de Peyer,
Integrina 47, LHoming de linfocitos a
lmina propia, bazo, glndula
Selectina
tejidos mucosos intestinales
mamaria lactante
247
Sin ttulo-2
247
5/26/06, 10:26 AM
adelante), aunque la forma con capacidad de unir

L-selectina participa tambin en la adhesin de
linfocitos vrgenes a HEV de placas de Peyer.
principal ligando para P-selectina es una estructura del tipo SLex que se forma por modificacin
postraduccional sobre PSGL-1 y probablemente
otras glicoprotenas. Cabe destacar que para la
formacin de ligandos tanto para P- como para ESelectina participan unas enzimas denominadas
fucosiltransferasas, en particular la Fuc-IV y la
Fuc-VII. La expresin de estas enzimas es modulada por citoquinas (en particular IL-12 y IL-4),
que a su vez regulan la presencia o no de ligandos
para estas selectinas en los linfocitos.
L-selectina, originalmente designada como
un receptor de migracin y posicionamiento de
linfocitos ha sido ms recientemente detectada en
prcticamente todos los leucocitos. Sin embargo,
y como veremos ms adelante, esta molcula est
expresada diferencialmente en diferentes
subpoblaciones de LT, otorgndoles a su vez propiedades migratorias o de "homing" diferenciales. Dos ligandos tipo mucina (que poseen
carbohidratos sulfatados, sialilados y fucosilados)
parecen ser ligandos para L-selectina; GlyCAM1 ("Glycosilation-dependent Cell Adhesion
Molecule-1") y CD34, los cuales son sintetizados
por las HEV de los ganglios linfticos perifricos
(donde colectivamente se denominan PNAd:
"Peripheral Node Addressins"). Ms recientemente
se ha demostrado que adems de 47,+la forma
de MAdCAM-1 presente en HEV de placas de
Peyer tambin acta como receptor de L-Selectina.
Un listado de los receptores de adhesin descritos en el sistema inmune y sus ligandos se resume en la tabla 12-2.
3.3. Molculas de adhesin de la familia de las

selectinas
La familia de las selectinas est formada slo
por tres protenas caracterizadas por poseer un dominio amino-terminal similar al de una lectina
tipo-C, y por lo tanto capaz de ligar carbohidratos
(ver figura 12-1), aunque de manera Ca2+-dependiente. Dos de estas receptores, E-selectina
(CD62E) y P-selectina (CD62P) se expresan en
clulas endoteliales, mientras que el tercer miembro de la familia, L-selectina (CD62L) se expresa
en leucocitos, a excepcin de linfocitos de memoria/efectores (para distinguirlos de los linfocitos
de memoria centrales que seran CD62L+. Adems de poseer un dominio N-terminal de tipo Clectina que aporta la especificidad a cada selectina,
estas molculas se caracterizan por poseer, inmediatamente a continuacin de este dominio, una
secuencia similar al factor de crecimiento
epidermal (EGF, "Epidermal Growth Factor") seguido por un nmero variable de dominios SCR
("Short Consensus Repeats) anlogos a los encontrados en las protenas reguladoras del complemento (2 en L-selectina, 6 en E-selectina y 9
en P-selectina) seguido por una secuencia de
transmembrana y una cola citoplasmtica.
E-selectina (CD62E) se induce fuertemente
en las clulas endoteliales durante la inflamacin.
Durante los procesos de inflamacin crnica Eselectina se expresa en forma permanente en la
piel donde es reconocida por un ligando sialilado
(tipo SLex) denominado en linfocitos T como CLA
("Cutaneous Lymphocyte-associated Antigen"), el
cual se expresa preferentemente en una
subpoblacin de LT que migran a piel. Se sabe
que CLA es a su vez una modificacin
postraduccional de otra protena ms general llamada PSGL-1 ("P-Selectin Glycoprotein Ligand1"), la cual puede ser modificada adems para formar ligandos para P-selectina.
P-selectina fue inicialmente caracterizada en
plaquetas demostrndose posteriormente su presencia en clulas endoteliales. Tanto en plaquetas
como en clulas endoteliales, P-selectina se acumula en grnulos (grnulos en las plaquetas y
cuerpos de Weibel-Palade en las clulas
endoteliales) desde donde se moviliza a la membrana celular durante el proceso de activacin. El
4. INTERACCIONES LINFOCITO-ENDOTELIO
Estudios que datan de ms de 30 aos han
demostrado que los linfocitos tienen normalmente
la capacidad de migrar entre la sangre y la linfa, y
pasar desde la sangre a los OLS tales como
ganglios linfticos perifricos (axilares,
inguinales), ganglios mesentricos, placas de
Peyer, etc. transvasando a travs del endotelio
especializado de estos rganos. Este endotelio,
denominado endotelio columnar alto (HEV: "High
Endotelial Venules"), est formado por clulas
endoteliales de morfologa columnar, altamente
especializadas en el trfico linfocitario, lo cual se
logra probablemente en parte por la expresin
constitutiva de ligandos para L-selectina (ej.
PNAd, MAdCAM) y para integrinas (ej. ICAM-
248
Sin ttulo-2
248
5/26/06, 10:26 AM
Tabla 12-2. Caractersticas de los linfocitos T vrgenes, de memoria centrales y de memoria efectores.
LT vrgenes
LT de memoria centrales
LT de memoria efectores
Fenotipo
CD45RA+/ CD44LOW
CD45RO+/ CD44HIGH
CD45RO+/ CD44HIGH
Molculas de adhesin
L-Selectina HIGH
LFA-1+
CCR7+
Sin especificidad tisular
L-Selectina HIGH
LFA-1+
CCR7+
Sin especificidad
tisular
Proliferacin rpida
Dan origen a LT efectores
de memoria
IL-2 (rpida), sin IFN- ni
L-selectina NEG
47++CLA
LFA-1+
CCR7NEG
CCR9, CCR4,
CCR6 o CCR10
Proliferacin rpida
Actividad efectora inmediata
(citoquinas o CTL)
IL-2, IFN, IL-4
Varias
Muchas
OLS (ganglios, placas de

Peyer)
Tejidos terciarios (piel, mucosa

intestinal)
Receptores de
quimioquina
Respuesta funcional al
Ag
Respuesta de
citoquinas al Ag
Divisiones inducida
por el Ag
Tejidos blanco de
homing
Expansin clonal
(requiere priming por
CD)
IL-2 (retardada)
IL-4
Ninguna
OLS, mdula sea
1, MAdCAM). El concepto actual es que el

fenotipo HEV de estas vnulas sera dinmico
(y reversible) y probablemente generado por el
microambiente del OLS (entre otras cosas por la
salida de elementos solubles va linfticos).
Por otro lado, se sabe que los linfocitos son
capaces de atravesar el endotelio vascular plano
de los diferentes tejidos (no linfoides) slo en casos
donde existan procesos de inflamacin, aunque en
el caso de algunos tejidos terciarios como la lmina
propia del intestino parece existir expresin
constitutiva de molculas de "homing" como
MAdCAM-1 y probablemente la quimioquina
TECK (ver ms adelante). La comprensin de los
procesos de trfico y de extravasacin linfocitarios
se ha visto incrementada en los ltimos aos
gracias al avance en el conocimiento de los
receptores de adhesin y por los estudios de las
estructuras moleculares presentes en el endotelio
que permiten el trfico transepitelial. Uno de los
conceptos importantes que ha surgido de esta
nueva informacin es que existen vas migratorias
diferentes para los linfocitos vrgenes versus los
linfocitos efectores/de memoria. Este aspecto del
trfico linfocitario se ver ms adelante en el punto
4 (regulacin del posicionamiento o "homing" de
los linfocitos). Un segundo aspecto que ha surgido
de investigaciones recientes es el papel central que
juegan algunas citoquinas y quimioquinas en la
transvasacin linfocitaria en la inflamacin.
Finalmente, dentro de los resultados importantes

que han emergido en los ltimos aos se encuentra
el descubrimiento de que existen marcadas
diferencias en la dotacin de receptores y ligandos
de adhesin en los diferentes endotelios.
Primeramente, el endotelio plano normal (no
inflamado) de los rganos no linfoides no presenta
en su superficie luminal ligandos que permitan la
extravasacin linfocitaria de manera importante.
Estos ligandos se inducen durante el proceso
inflamatorio. Por otro lado, el epitelio columnar
de los OLS presenta diferentes receptores y
ligandos de adhesin dependiendo del sitio
anatmico donde ste se encuentre. As,
dependiendo de sus estructuras adhesivas
encontramos al menos tres grandes correlaciones;
(i) HEV de los ganglios linfticos perifricos; (ii)
HEV de los ganglios mesentricos, placas de Peyer
y vnulas postcapilares de lmina propia intestinal
y (iii) vnulas postcapilares de la piel. Cada uno
de estos endotelios posee ligandos adhesivos
propios que le permiten seleccionar subpoblaciones linfocitarias especficas. Algunos autores
han postulado adems la existencia de estructuras
adhesivas propias en otros sitios tales como el
pulmn y el tejido sinovial, aunque an es
controversial si existen en realidad vas de
migracin eficientes y especficas para esos
tejidos.
A continuacin se revisarn los mecanismos
249
Sin ttulo-2
249
5/26/06, 10:26 AM
involucrados en el trfico en cada uno de estos

endotelios y de las estructuras adhesivas
implicadas.
el sitio de la inflamacin. Todos estos procesos,

desde la interaccin al azar de los leucocitos con
el endotelio hasta la migracin final de stos al
sitio de inflamacin estn regulados por
interacciones mediadas por molculas de adhesin.
Una serie de estudios con anticuerpos especficos
indican que el rodar de los leucocitos sobre el
endotelio luego de una lesin del tejido, est
mediado por mltiples interacciones de baja
afinidad. Estos contactos involucran predominantemente la interaccin entre selectinas y sus
respectivos ligandos tipo Sialil L-X. As, en esta
etapa se han demostrado la interaccin de LSelectina presente en los leucocitos con sus
ligandos en el endotelio (GlyCAM-1 y CD34) as
como la de P-Selectina (constitutiva en el
endotelio) y E-Selectina (inducida en el endotelio
por accin de citoquinas pro-inflamatorias) con
sus correspondientes estructuras sialiladas y
fucosiladas expuestas en la membrana del
leucocito (SLex). De este modo, el "rolling" de
los leucocitos sobre el endotelio est fuertemente
regulado por las selectinas que actuaran en forma
coordinada. Estudios ms recientes han implicado,
adems de las selectinas, la accin de integrinas
en el "rolling" de los leucocitos sobre el endotelio.
Ciertas lneas celulares linfoides usan 47+para
rodar sobre VCAM-1 o sobre MAdCAM-1 en el
endotelio de las mucosas como se enunci
anteriormente.
En una segunda fase del proceso de
transmigracin leucocitaria se produce un aumento
en la fuerza de la adhesin lo que lleva a una
adhesin firme de los leucocitos al endotelio y su
detencin sobre ste ("sticking"). En este proceso
de adhesin firme participan receptores de
adhesin de la familia de las integrinas en los
leucocitos y de la SFIg en el endotelio. La
participacin de estos receptores de adhesin
ocurre luego de un proceso de activacin de las
integrinas (por cambios conformacionales en el
heterodmero), o por mecanismos que actan para
modular la avidez de las integrinas presentes en
los leucocitos, as como tambin por un aumento
en la expresin de novo de receptores de la SFIg.
Entre stos encontramos la accin de ciertas
quimioquinas (IL-8 o MIP-1), citoquinas como
IL-5, o quimioatractantes como C5a producidos
localmente en el sitio de la inflamacin). Por otro
lado, el entrecruzamiento de ciertas protenas en
la superficie de los linfocitos tales como CD2,
CD3, CD44 as como de las selectinas E y P del
endotelio por sus respectivos ligandos inducen un
4.1. Trfico linfocitario a travs del endotelio

inflamado
En personas que sufren de LAD-1
("Leukocyte Adhesion Deficiency-1"), enfermedad en la cual los pacientes muestran una
especial susceptibilidad frente a infecciones
bacterianas recurrentes, los leucocitos son
incapaces de atravesar el endotelio y acumularse
en los sitios de inflamacin. Estudios de adhesin
realizados in vitro con leucocitos de estos pacientes
demostraron que stos son incapaces de adherirse
a monocapas de clulas endoteliales. Estos datos
constituyeron las primeras evidencias de que los
receptores de adhesin son requeridos en el
proceso de transvasacin leucocitaria in vivo. Una
serie de estudios en estos pacientes demostr una
deficiencia en la expresin de la cadena+2++(CD18) de las integrinas, implicando a
esta integrina en el mecanismo de migracin de
los leucocitos desde el lumen vascular a los tejidos
durante los procesos inflamatorios. Estudios ms
recientes han involucrado a varios otros receptores
de adhesin en la transvasacin, demostrando
adems la complejidad de este proceso.
Una de las primeras seales de inflamacin
es la captura de linfocitos y leucocitos por el
endotelio (figura 12-2). Una serie de trabajos que
incluyen elegantes estudios de microscopa
intravital han ayudado a caracterizar una secuencia
de interacciones adhesivas involucradas en la
migracin de los leucocitos desde la sangre a los
sitios de inflamacin. Bajo condiciones normales
de flujo, la interaccin de los leucocitos con el
endotelio es un fenmeno enteramente al azar
observndose que los leucocitos ruedan ("rolling")
a lo largo del vaso sanguneo. En las cercanas de
un sitio donde haya ocurrido un dao vascular o
un proceso inflamatorio, la produccin de
citoquinas y otros mediadores de la inflamacin
inducen una disminucin de la velocidad del flujo
leucocitario observndose el aplanamiento de los
leucocitos sobre el endotelio y su firme adhesin
a ste. Posteriormente, algunos de los leucocitos
se arrastran por el endotelio buscando un sitio
por el cual atravesarlo, pasando finalmente por
entre las clulas endoteliales (diapdesis). Una vez
que los leucocitos se encuentran en el tejido
subendotelial, stos continan su migracin hacia
250
Sin ttulo-2
250
5/26/06, 10:26 AM
Figura 12-2. Modelo de las interacciones adhesivas que actan en la migracin transendotelial. Los leucocitos toman contacto
al azar con el endotelio sobre el cual ruedan (rolling). En las cercanas del sitio en que ocurre un proceso inflamatorio disminuyen
la velocidad, sufriendo aplanamiento y adhesin firme al endotelio. Posteriormente los leucocitos salen del vaso sanguneo, pasando
entre las clulas endoteliales (diapdesis) y llegan al sitio de inflamacin. Obsrvese la participacin de distintas molculas de
adhesin por parte de los leucocitos y clulas endoteliales, en las diferentes etapas del proceso.
aumento en la avidez de las integrinas 2,+en

especial CD11aCD18 (LFA-1). As tambin, la
adhesin de LT al endotelio mediante CD31
(PECAM-1) una molcula de adhesin de la SFI
presente tanto en el endotelio como en leucocitos
(que promueve la adhesin a travs de
interacciones homotpicas CD31-CD31) aumenta
la actividad funcional de las integrinas 1. Por otro
lado, molculas tales como TNF-1, IFN e IL1 inducen en el endotelio la expresin de VCAM1 y de ICAM-1, ligandos de las integrinas
linfocitarias 41 y CD11aCD18 (LFA-1),
respectivamente. El resultado final de la induccin
de nuevas molculas de adhesin o del aumento
de la afinidad y avidez de receptores preexistentes
originan nuevas interacciones adhesivas entre
integrinas y molculas de la SFIg con sus
respectivos ligandos provocando la adhesin firme
de los leucocitos al endotelio. Luego de este
proceso de adhesin firme, la gran mayora de los
leucocitos adheridos al endotelio comienzan a

arrastrarse sobre la superficie de ste mediante un
proceso que requiere la modulacin cclica de la
actividad de las integrinas y sus ligandos. Algunos
leucocitos logran introducirse en las uniones entre
las clulas endoteliales para pasar por diapdesis
al espacio extravascular. Este fenmeno de
transmigracin est fuertemente regulado por la
accin de quimioatractantes como IL-8 y
citoquinas como IL-1 y TNF producidos
localmente. Dado que la adhesin es un requisito
de la diapdesis, los estudios dirigidos a identificar
los receptores involucrados en el proceso de
diapdesis se han visto complicados por la
dificultad de distinguir entre la participacin de
los receptores de adhesin en la adhesin
propiamente tal o en la transmigracin. Sin
embargo, los resultados obtenidos a la fecha
involucran la participacin de ICAM-1 y su
receptor CD11aCD18 (LFA-1) y del par VCAM-
251
Sin ttulo-2
251
5/26/06, 10:26 AM
1/41 en el fenmeno de migracin transendotelial de los leucocitos.

Una vez que los linfocitos han atravesado la
pared vascular, deben adherirse a las clulas del
epitelio o a los elementos de la matriz extracelular.
La evidencia experimental sugiere que la
activacin de los LT in vivo produce un aumento
de la avidez de las integrinas 1 y 2++ por largos
perodos, lo que permitira la mantencin de los
LT activados en el microambiente local del sitio
de la inflamacin. Molculas de la matriz
extracelular tales como fibronectina y
trombospondina jugaran a travs de su interaccin
con 41 y 51 un rol central en este fenmeno.
Un efecto similar tendra la interaccin entre la
integrina 31 con epiligrina, una molcula de la
membrana basal de los epitelios. Aquellos
linfocitos que hayan disminuido la afinidad/avidez
de sus integrinas u otros receptores de adhesin
abandonaran el sitio de la inflamacin para volver
a la circulacin va linfticos.
descarga directa de stos a los sinusoides en la

llamada circulacin abierta.
Endotelio Columnar Ganglionar. En los ganglios
perifricos se han encontrado dos ligandos
especficos para L-Selectina denominados
domicilinas (addressins); GlyCAM-1
("Glycosylation-dependant Cell Adhesion
Molecule-1") y CD34. Ambos ligandos son mucinas
que portan cadenas laterales de carbohidratos que
requieren estar sialiladas, y sulfatadas para unir LSelectina. Estos ligandos, que se expresan en mayor
abundancia en el endotelio de los ganglios
perifricos que en cualquier otro rgano, permitiran
la recirculacin de linfocitos vrgenes (Lselectina+), as como tambin de un subgrupo de
linfocitos de memoria (centrales) CD62L+ hacia
estos ganglios. ICAM-1, presente en las HEV
tambin ha sido involucrado en la recirculacin de
linfocitos a los ganglios perifricos ya que
anticuerpos contra esta molcula bloquean la
migracin de los linfocitos desde la sangre a los
ganglios. Puesto que CD11aCD18 (LFA-1), el
ligando de ICAM-1 presente en los linfocitos, se
encuentra normalmente en un estado inactivo, ste
debe ser activado previamente para que se una a su
receptor, lo cual est dado por las quimioquinas SLC
y/o ELC, las cuales se unen al receptor CCR7, el
que se encuentra expresado especficamente en LT
vrgenes y de memoria centrales. El papel e
importancia crucial de las quimioquinas en la
cascada de adhesin ya se ilustr al inicio de este
captulo, pero baste recordar que se ha demostrado
que la presencia tanto de CCR7 como de sus
ligandos son esenciales para permitir la adhesin
firme del linfocito T. Para ilustrar an ms la
importancia del modelo secuencial de mltiples
pasos, esta cascada permite explicar por qu por
ejemplo los neutrfilos (que no poseen CCR7) son
incapaces de adherir y transmigrar en ganglios
perifricos (an cuando expresan L-selectina).
Aunque el entrecruzamiento del TCR es capaz de
producir activacin de las integrinas, se sabe que
en el endotelio esto ocurre por una va independiente
de la estimulacin del LT por su antgeno ya que
los linfocitos vrgenes que entran a los ganglios
como parte del proceso de vigilancia inmune normal
no se encuentran necesariamente activados.
Estudios recientes en endotelio aislado de amgdala
humana indican que VCAM-1 se expresara en
forma constitutiva en este endotelio, sugiriendo la
participacin del par VCAM-1/41 en la entrada
de los linfocitos a este rgano.
4.2. Trfico linfocitario a travs del endotelio

columnar (HEV)
En los ganglios u otros rganos linfoides
secundarios tales como en las placas de Peyer,
amgdalas, etc. el endotelio venular se encuentra
formado por un tipo especfico de clula
endotelial, la clula endotelial columnar (HEV:
"High Endothelial Venules"). Estas clulas
expresan receptores de adhesin diferentes que
las clulas endoteliales planas de la vasculatura
perifrica y estn especializadas en la migracin
de los linfocitos hacia el interior de los rganos
linfoides secundarios. Aproximadamente un 25%
de los linfocitos que circulan por el endotelio
columnar lo atraviesan para entrar al OLS,
comparado con el bajo nmero de linfocitos que
atraviesan el endotelio vascular normal. Esto se
debe a que las HEV expresan vas de adhesin
en forma constitutiva, mientras que en el
endotelio normal estas vas de adhesin slo se
activan durante la inflamacin. Los mecanismos
adhesivos que actan en las HEV son diferentes
y dependiendo del rgano en cuestin, ya que
diferentes receptores de adhesin se expresan en
los ganglios perifricos comparadas por ejemplo
con aquellas expresadas por las HEV de placas
de Peyer, ganglios mesentricos, u otras mucosas.
En el bazo, por otro lado, la entrada de los
linfocitos no ocurre a travs del endotelio sino
que se efecta, fundamentalmente, por la
252
Sin ttulo-2
252
5/26/06, 10:26 AM
dbil). E-Selectina se induce preferencialmente

en las vnulas de la piel durante los estados de
hipersensibilidad de tipo retardada y durante las
inflamaciones crnicas de la piel, proporcionando
uno de los elementos centrales que influencia el
paso de linfocitos T a la piel. En humanos, estudios
efectuados en linfocitos localizados en la piel, han
demostrado que stos expresan un carbohidrato
especfico denominado Cutaneous Lymphocyteassociated Antigen (CLA). Esta molcula, la cual,
como se mencion, es una modificacin
postraduccional de PSGL-1, parece encontrarse
exclusivamente en linfocitos T de tipo memoria/
efector en la dermis y est ausente en otras
subpoblaciones linfocitarias provenientes de otros
epitelios. CLA aparece como el principal ligando
de E-Selectina en esos tejidos. Dado que ESelectina se expresa tambin en otros tejidos
adems de la piel, se ha sugerido que la interaccin
CLA/E-Seletina no sera suficiente para explicar
la exquisita segregacin de los linfocitos CLA+
en la piel. A este respecto, y al igual que para
otros tejidos, se ha planteado recientemente que
un elemento de especificidad adicional (y
probablemente determinante), sera el grupo de
receptores de quimioquina que estara presente en
LT CLA+. En particular, se ha planteado que
CCR4, y ms recientemente CCR10 y CCR6
tendran un papel importante en la determinacin
de especificidad migratoria fina de LT a piel, donde
adems se han identificado las quimioquinas y/o
ligandos para estos receptores (MDC/TARC,
CTACK, y MIP3, respectivamente). Sin
embargo, hasta el momento esto ltimo es
controversial, ya que se ha identificado que por
ejemplo CCR4 se encuentra tambin en LT CLA
negativos y que se expresa adems en linfocitos
Th2, por lo cual su especificidad en relacin a
"homing" a piel es, a la fecha, cuestionable.
Endotelio columnar de placas de Peyer.

Estudios de bloqueo de la adhesin con
anticuerpos especficos permitieron la
identificacin de una nueva molcula de adhesin
llamada MAdCAM-1 ("Mucosal Addressin Cell
Adhesion Molecule-1"), la cual es virtualmente
especfica del endotelio de mucosa intestinal.
MAdCAM-1 se expresa principalmente en el
endotelio de placas de Peyer, en el endotelio de la
lmina propia del intestino, y en las vnulas de la
glndula mamaria. Esta molcula, que presenta
dominios tipo Ig y tipo mucina, tiene dos
receptores descritos. Uno de ellos es una molcula
de la familia de las integrinas que presenta la
cadena 4 ligada a la cadena 7. El otro es LSelectina, aunque como se mencion, L-selectina
slo se une a la forma de MAdCAM presente en
placas de Peyer. Experimentos de adhesin han
demostrado que clulas portadoras de 47 pero
no 41 son capaces de adherirse a HEV de placas
de Peyer o a MAdCAM-1 directamente. Por otro
lado, y de acuerdo con el modelo secuencial de
mltiples pasos, recientemente se ha descrito que
el receptor de quimioquina CCR9 est presente
preferentemente en LT efectores y/o de memoria
de lmina propia y tambin en linfocitos
intraepiteliales (IEL) de intestino delgado.
Interesantemente, su expresin est fundamentalmente restringida a LT 47+, por lo que se ha
planteado que ste sera el receptor de quimioquina
encargado especficamente de activar la adhesin
mediada por esta integrina en la mucosa del
intestino delgado. Adicionalmente, el nico
ligando descrito para CCR9, la quimioquina TECK
(CCL25) se ha descrito en endotelio de lmina
propia.
En resumen, la presencia o ausencia de ciertos
receptores de adhesin en los linfocitos, o de
determinados ligandos en el endotelio columnar
de diferentes rganos linfoides definiran las
subpoblaciones de linfocitos que migraran a los
diferentes rganos. As, a los ganglios perifricos
migran linfocitos con un fenotipo L-Selectina+/
+CR7+/+LFA+, mientras que los linfocitos que
migran a placas de Peyer y lmina propia intestinal
tendran un fenotipo L-selectina-/low/+CR9+/
47+.
5. REGULACIN DEL POSICIONAMIENTO ("HOMING") DE LINFOCITOS

Qu determina que un linfocito virgen
adquiera despus de activarse un potencial de
"homing" tejido-especfico?. Para ilustrar la
importancia de esta pregunta, vale la pena recordar
que los LT vrgenes pueden migrar indistintamente
por todos los OLS (ganglios perifricos,
mesentrico y placas de Peyer), pero que slo
despus de activarse y pasar a ser LT de memoria
y/o efectores adquieren preferencia para migrar a
4.3. Trfico linfocitario hacia la piel

Estudios recientes han demostrado que el
endotelio de la piel expresa E- y P-Selectina de
manera inducible y tambin constitutiva (aunque
253
Sin ttulo-2
253
5/26/06, 10:26 AM
determinados tejidos y no otros, fenmeno que se

ha denominado "homing" o posicionamiento
tejido-especfico (ej. aquellos con "homing" a
mucosa intestinal no migran a piel y viceversa).
Es importante mencionar que el hecho de que los
linfocitos presenten restriccin y especificidad en
cuanto al "homing" a determinados tejidos es
determinante para el desarrollo o no de una
respuesta inmune adecuada, especialmente si se
considera que aquellos linfocitos que presentan
"homing" tejido-especfico son los llamados
efectores y/o de memoria, y que justamente son
los que estn encargados de proteger ms
eficientemente frente a un segundo encuentro con
el antgeno. Adicionalmente, en modelos animales
de algunas enfermedades autoinmunes intestinales
(ej. enfermedad de Crohn y colitis ulcerosa) se ha
demostrado que el bloqueo de una de las molculas
implicadas en el "homing" a mucosa intestinal
( 4 7 ) tendra la capacidad de disminuir
importantemente la severidad de la enfermedad.
Esto tiene la ventaja de que al posibilitarse la
respuesta inmune en otros tejidos, no sera
necesario inmunosuprimir a los pacientes (como
lo hacen las terapias inmunosupresoras estndar
en uso actualmente). Sin embargo, la meta ms
ambiciosa final sera poder bloquear el "homing"
a un tejido slo de aquellos clones implicados en
la respuesta patolgica, dejando la posibilidad de
que otros clones no patognicos puedan responder
a otros antgenos en ese tejido, es decir, en el fondo
un modo de establecer tolerancia especfica por
esta va.
Volviendo a la pregunta inicial de qu
determina el "homing" tejido-especfico en un
linfocito al activarse y pasar a ser linfocito efector
y/o de memoria, partiremos mencionando que
existen al menos cuatro teoras conceptualmente
diferentes que intentan explicar este mismo
fenmeno. Aunque algunas de ellas tienen mayor
o menor aceptacin, todas estn basadas en
algunos hechos comunes. Se ha demostrado que
si se reinfunde en un animal linfocitos tomados
desde un tejido, stos preferentemente migrarn
al tejido desde donde fueron aislados (en este
sentido presentan "homing" por el tejido de origen)
y que linfocitos efectores/de memoria tomados
desde piel o mucosa intestinal, presentan
preferentemente receptores de "homing"
especficos para piel o mucosa intestinal
respectivamente. A continuacin se discutir
brevemente las diferentes teoras que intentan dar
cuenta de los hechos descritos anteriormente, para
lo cual se mencionar antecedentes que permiten

apoyarlas como tambin algunas de sus
debilidades.
a) La teora actualmente ms aceptada es
aquella que propone que el sitio de entrada del
antgeno determinara de algn modo el fenotipo
de "homing" de un linfocito. A este respecto,
existen dos trabajos que muestran (en humanos)
que un antgeno que entra por va oral produce un
significativo mayor nmero de clones que
expresan la molcula de migracin especfica a
la mucosa intestinal+47+y que son, al mismo
tiempo, especficos contra el antgeno, comparados
con el mismo antgeno inoculado por va parenteral
(lo cual de hecho produce clones especficos contra
el antgeno, pero que son 47+negativos). Estos
trabajos tienen el valor de haber sido hechos en
humanos, pero al mismo tiempo presentan el
problema de haber usado antgenos complejos (con
muchos potenciales eptopos); cabe as la
posibilidad de inducir la respuesta de diferentes
clones T y por tanto cabra la posibilidad de que
no sea la misma especificidad de linfocito la que
se expande preferentemente al inmunizar por una
u otra va, con lo cual existe la posibilidad de que
en un caso se expandan clones predeterminados
para ser+ 4 7+positivos y en el otro, clones
predeterminados para ser+47+negativos. Al
mismo tiempo, el hecho de administrar el antgeno
por una u otra va no garantiza que la activacin
se producir slo localmente en el tejido de entrada
(de hecho, se ha demostrado que un antgeno que
entre por va oral puede activar tambin linfocitos
en el bazo). Aunque esta es una hiptesis
teleolgicamente atractiva, puesto que tiene
sentido fisiolgico que un linfocito vuelva donde
encontr por vez primera su antgeno, es bueno
ser cautelosos al interpretar los datos que la
sustentan.
b) Otra hiptesis sostiene que la dotacin de
receptores de "homing" estara fuertemente
asociada al fenotipo Th1 o Th2 de un linfocito.
En lo concreto, se ha demostrado que clulas
cultivadas en condiciones de polarizacin Th1,
pero no Th2, adquieren expresin de ligandos para
P y E-selectinas y por lo tanto capacidad de
"homing" a piel y otros tejidos inflamados.
Tratando de conciliar este modelo con el anterior,
cabe destacar que en mucosa intestinal se ha
descrito una desviacin del equilibrio de linfocitos
hacia Th2, lo cual est de acuerdo con el hecho de
que los linfocitos activados en ese microambiente
no expresaran ligandos para P/E-selectinas. Sin
254
Sin ttulo-2
254
5/26/06, 10:26 AM
sera el mismo, es decir, slo se encontraran en

un tejido linfocitos con un determinado fenotipo
de "homing" pero no otro, sin que necesariamente
exista un evento instructivo inicial en este
fenotipo. Aunque esta es una hiptesis altamente
provocativa, como se mencion anteriormente no
existen evidencias que la apoyen directamente.
De todas las hiptesis enunciadas
anteriormente, la ms aceptada actualmente es que
el sitio de entrada del antgeno, es decir el tejido
donde el linfocito encontrara su antgeno, jugara
un rol determinante en la induccin de "homing"
tejido-especfico. La mayor popularidad de esta
hiptesis se debe probablemente a que pensado
desde un punto de vista funcional es ms
atractivo fisiolgicamente pensar que el
potencial de "homing" pueda ser instruido por el
microambiente del tejido donde es presentado el
antgeno, de manera tal que el linfocito
predominantemente regrese al sitio donde es ms
probable que vuelva a encontrar el antgeno, y al
mismo tiempo donde realmente se necesita esta
respuesta inmune, disminuyendo por otro lado la
probabilidad de dao en tejidos donde esta
respuesta no se necesita. Desde hace ms de 10
aos que se piensa que el potencial de "homing"
tejido-especfico de un linfocito podra ser
instruido por el microambiente del tejido en el
cual este linfocito es activado. Sin embargo,
actualmente es completamente desconocido qu
elementos en el tejido seran los encargados de
determinar esta propiedad en los linfocitos. Poder
contestar esta pregunta no slo es importante desde
el punto de vista mecanstico, sino porque adems
dara la posibilidad de poder modular la respuesta
inmune en forma ms especfica.
En nuestro laboratorio hemos abordado esta
pregunta planteando como hiptesis que los
elementos que determinaran el "homing" dentro
de un tejido seran las DC presentadoras de
antgeno. Esta hiptesis se basa, entre otras cosas,
en el hecho de que para que un linfocito adquiera
un potencial de "homing" tejido-especfico debe
en primer lugar ser activado, y que actualmente
se acepta que las nicas clulas presentadoras de
antgeno capaces de activar eficientemente
linfocitos T virgen son las CD. Dado lo anterior,
estas clulas seran al menos elementos necesarios
en este proceso. Los resultados de nuestro
laboratorio estn plenamente de acuerdo con
nuestra hiptesis ya que muestran que comparadas
con CD de ganglios linfticos perifricos (PLN) o
bazo las CD derivadas de placas de Peyer son
embargo, otro trabajo logr demostrar que in vivo

no existira una asociacin predominante entre el
ligando de E-selectina CLA ("homing" a piel) con
el fenotipo Th1 o Th2, lo que sugiere que si bien
es cierto que bajo condiciones in vitro sera posible
encontrar una asociacin con un fenotipo o
molcula de "homing", esta asociacin no
necesariamente ocurre in vivo.
c) Otros autores han propuesto que el hecho
de encontrar linfocitos con un fenotipo
predominante en un tejido dependera de
diferencias en la tasa de proliferacin y/o apoptosis
de estas clulas en el tejido, es decir, linfocitos
activados en un tejido determinado tendran una
mejor posibilidad de sobrevivir y/o proliferar en
ese mismo tejido. De esta manera, los partidarios
de esta hiptesis sostienen que la acumulacin de
linfocitos en un tejido determinado no dependera
de la entrada preferencial de estas clulas al tejido
(es decir no dependera de mayor adhesin de esos
linfocitos al endotelio), sino que de una mayor o
menor proliferacin y/o apoptosis de estas clulas
en el tejido. Sin embargo, los datos que sustentan
esta hiptesis podran tambin ser explicados en
el contexto de una preferencia en el "homing" en
vez que en diferencias de proliferacin y/o
apoptosis.
d) Finalmente, una hiptesis que ha sido
planteada recientemente es que sera el tejido en
s el que seleccionara los linfocitos con el fenotipo
de "homing" adecuado. Hasta el momento no
existen datos que apoyen directamente esta
hiptesis, aunque a decir verdad tampoco existe
evidencia formal que permita descartarla
totalmente. Sin embargo, los autores de esta
hiptesis sostienen que a la luz de los datos
actuales no se puede excluir que el hecho de
encontrar linfocitos preferentemente con un
determinado fenotipo de "homing" en un tejido
podra ser el resultado de un evento inicial
estocstico donde los linfocitos al activarse
adquieran una dotacin de receptores de homing
al azar, y que sea el tejido en s (con su dotacin
especfica de addressins) el que seleccione
aquellos linfocitos con la dotacin de receptores
adecuada o necesaria para entrar. De este modo,
por ej. si el antgeno entra por va mucosa, esto
favorecera la proliferacin y sobrevida de aquellos
linfocitos 47+ que pudieron entrar al tejido
mucoso, pero no de aquellos 4 7 que no
ingresaron, lo cual a su vez contribuira an ms a
la seleccin adecuada y proliferacin de
determinados clones. Con esto, el resultado final
255
Sin ttulo-2
255
5/26/06, 10:26 AM
capaces de inducir una significativa mayor

expresin de la integrina de "homing" a
mucosa+47 en linfocitos T y una clara respuesta
a la quimioquina TECK, que como se discuti
anteriormente son las dos molculas que han sido
postuladas como receptores de "homing" para
mucosa intestinal. En acuerdo con estos resultados
hemos logrado demostrar adems que estas
diferencias fenotpicas se traducen efectivamente
en una diferencia funcional in vivo, ya que
linfocitos activados con CD de placas de Peyer
migran significativamente ms a placas de Peyer
y dramticamente mejor a lmina propia del
intestino comparados con aquellos activados con
CD de PLN. Finalmente, en nuestros ensayos
hemos encontrado que la mayor expresin
de+47+inducida por CD de placas de Peyer no
se asocia a una mayor o menor produccin de IFN
, lo que nos ha llevado a pensar que el fenotipo
de "homing" no necesariamente se correlaciona
con una u otra respuesta T "helper".
En su conjunto, nuestros resultados destacan
una forma completamente nueva en la cual CD
pueden educar a LT.
Un concepto propuesto recientemente es que,
en general, existiran diferentes subpoblaciones de
LT, a saber: LT nave, LT de memoria centrales, y
LT de memoria efectores. Esta clasificacin est

basada en la expresin diferencial de las isoformas
CD45RA y CD45RO y de las molculas de
"homing" L-selectina y CCR7, as como tambin
por caractersticas funcionales diferenciales. Esto
ha planteado un nuevo paradigma para estudios
subsecuentes, por lo cual creemos importante
mencionar las propiedades generales de estas
subpoblaciones descritas (tabla 12-3).
La existencia de subpoblaciones de LT de memoria efectores se correlacionara con lo que
actualmente conocemos en relacin a "homing"
de LT a tejidos terciarios, tejidos en los cuales se
encuentran predominantemente LT con fenotipo
CD44HIGH / CD45RO / L-SelectinaNEG / y con
dotacin de molculas de "homing" especficas
para el tejido analizado (ej. 47 / CCR9 para
mucosa intestinal y CLA para piel). Por otro lado,
la funcionalidad de los putativos LT de memoria
centrales sera mantener un pool de LT de memoria (con rpida respuesta al antgeno) que mantenga
la capacidad de acceder a OLS en el caso que el
antgeno (o uno relacionado) entre por una va
diferente a aquella que utiliz la primera vez. A su
vez, frente a una segunda estimulacin antignica,
estos LT de memoria centrales daran origen a LT
de memoria efectores, los cuales per se tendran
Tabla 12-3. Caractersticas de los LT nave, de memoria central y memoria efector

LT Nave
LT de memoria central
LT de memoria efector
Fenotipo
CD45RA+/CD44Low CD45RO+/ CD44 High
CD45RO+/ CD44 High
Molculas de adhesin
L-SelectinaHigh
47-+/+CLA_
LFA-1+
L-Selectina High
47-+/+CLA _
LFA-1+
L-Selectina Neg
47+/+/+CLA+/LFA-1+
Receptores de
quimioquina
CCR7+
Sin especificidad
tisular
CCR7+
Sin especificidad
tisular
CCR7_
CCR9+/+/ CCR4+/
CCR6+// CCR10+/
Respuesta funcional al Ag
Expansin clonal
Proliferacin rpida
(requiere priming Dan origen a LT
por CD)
efectores de memoria
Proliferacin rpida
Actividad efectora
inmediata (citoquinas o
CTL)
Respuesta de citoquinas al
Ag
IL-2 (retardada)
IL-2 (rpida), sin IFN-

ni IL-4
IL-2, IFN, IL-4
Divisiones inducidas por el

Ag
Ninguna
Varias
Muchas
Tejidos blanco de
homing
OLS, mdula sea
OLS (ganglios, placas de

Peyer)
Tejidos terciarios (piel,

mucosa intestinal, otros?)
256
Sin ttulo-2
256
5/26/06, 10:26 AM
involucradas an no se han definido con certeza.
un compromiso ms restringido para circular por

ciertos tejidos terciarios y no otros (pero no por
OLS). Es importante mencionar, que aunque esta
subdivisin de los LT de memoria es atractiva y
permite explicar algunos fenmenos, su
funcionalidad in vivo en trminos de migracin
diferencial de estas diferentes subpoblaciones an
no ha sido demostrada. Por otro lado, esto se ha
descrito hasta el momento en humanos, y no es
conocido actualmente si existe un ejemplo murino
para estos diferentes subtipos de LT. Tampoco se
conoce qu factores determinan que durante una
estimulacin antignica determinados LT
progresen hasta el estadio de LT de memoria
centrales y otros hasta LT de memoria efectores.
A modo de resumen, y tomando en cuenta esta
ltima subdivisin mencionada, los linfocitos LT
podran ser clasificados de acuerdo a su potencial
de "homing" como se indica en la tabla 12-4.
6. RECEPTORES DE ADHESIN EN LA
DIFERENCIACIN Y ACTIVACIN
LINFOCITARIA
6.1. Receptores de adhesin y diferenciacin
temprana en la mdula sea
Aunque son escasos los estudios que ligan la
participacin de molculas de adhesin y sus
ligandos en la diferenciacin de linfocitos B en la
mdula sea, algunos resultados en conjunto con
datos de experimentos realizados in vivo con
anticuerpos versus receptores de adhesin en primates, demuestran en forma clara la importancia
de los receptores de adhesin y sus ligandos en la
linfopoyesis temprana.
Tabla 12-4. Potencial de homing de los linfocitos T segn su estado de diferenciacin.

"Tethering"/"Rolling"
Activacin
LT
Endotelio
LT
Endotelio
LT nave y LT de memoria centrales
Migracin a OLS
Sin restriccin
L-selectin
Migracin a mucosa 47
intestino delgado
Migracin a piel
CLA /
Otros
ligandos
de P/Eselectina?
LT
PNAd
CCR7
SLC /ELC
(GlyCAM1, CD34) /
MAdCAM1
LT de memoria efectores
LFA-1
ICAM-1
MAdCAM-1 CCR9?
TECK?
47
LFA-1?
ICAM-1?
MAdCAM1
E / Pselectinas
MDC
/TARC?
MIP3__
CTACK?
LFA-1
41?
ICAM-1
VCAM-1?
CCR4?
CCR6?
CCR10?
Las clulas estromales de la mdula sea, en

conjunto con receptores de la matriz extracelular
(MEC) proporcionan el microambiente necesario
para la linfopoyesis y la hematopoyesis en general. Algunas de las clulas que conforman el
complejo estroma medular proporcionan las
citoquinas requeridas para la diferenciacin de los
linfocitos B en la mdula, mientras que otras
En relacin a "homing" tejido-especfico de

linfocitos a otros territorios, al da de hoy se piensa
que, en efecto, existiran otras vas de migracin.
A este respecto, cabe mencionar que se han
postulado vas de "homing" especfico a pulmn,
articulaciones, mucosa de intestino grueso, mdula
sea, y eventualmente sistema nervioso central,
aunque su especificidad y las molculas
257
Sin ttulo-2
257
"Sticking"
Endotelio
5/26/06, 10:26 AM
seales necesarias para esta diferenciacin

provienen de la interaccin directa entre las clulas
estromales y los precursores linfocitarios. In vivo,
la interaccin entre los precursores linfoides y el
microambiente medular es compleja; durante las
primeras etapas de diferenciacin los precursores
deben permanecer en ciertas zonas cercanas a la
periferia de la mdula para moverse luego hacia
el centro donde su interaccin con clulas
reticulares y macrfagos de la mdula promueve
la diferenciacin. Finalmente las clulas pasan al
seno central de la mdula, en donde su interaccin
con las clulas endoteliales permite a los linfocitos
maduros salir finalmente a la circulacin como
linfocitos B vrgenes. Estos procesos e
interacciones requieren de la participacin de
receptores de adhesin y sus respectivos ligandos,
de manera que estas molculas juegan un papel
central en la regulacin de la linfopoyesis. Algunas
de las interacciones que han sido reconocidas en
este proceso incluyen contactos entre la integrina
41+(VLA-4) presente en los precursores
linfoides y su ligando VCAM-1 presente en clulas
del estroma medular o con fibronectina presente
en la MEC. Anticuerpos anti-VLA-4 o contra
VCAM-1 bloquean la adhesin de progenitores
de lneas celulares B a cultivos de mdula sea e
inhiben la diferenciacin de clulas B en cultivos
de mdula sea de larga duracin. Un receptor de
adhesin presente en los linfocitos y que no
pertenece a ninguna de las familias antes
mencionadas es CD44. Esta molcula, que tiene
como ligando al cido hialurnico, es una protena
de membrana que como resultado de un proceso
de "splicing" alternativo de su mRNA presenta
mltiples isoformas en la membrana celular (una
de las cuales est presente en los linfocitos
efectores y de memoria). CD44 participa en varias
etapas durante la linfopoyesis as como en la
recirculacin linfocitaria. Los progenitores B
presentan altos niveles de CD44 en su membrana,
niveles que disminuyen durante la maduracin
para volver a aumentar en el linfocito B maduro.
Anticuerpos anti-CD44 bloquean la interaccin
entre los precursores B y lneas celulares derivadas
de la mdula sea e interesantemente son capaces
de inhibir la diferenciacin de linfocitos B en
cultivos de mdula sea.
Por otro lado, y aunque no cabe duda de la
participacin de receptores de adhesin en la
diferenciacin de linfocitos T en el timo, la
contribucin de molculas de adhesin especficas
en este proceso es menos clara, debido
fundamentalmente a la insuficiencia de los

modelos experimentales con que se cuenta para
estudiar las interacciones celulares en el timo. La
participacin de receptores de adhesin en las
interacciones entre las clulas T maduras y clulas
accesorias o con los linfocitos B durante la ayuda
inmune se discutir ms adelante.
6.2. Receptores de adhesin y diferenciacin en
el microambiente de los OLS
Los receptores de adhesin participan
tambin en las etapas finales de la diferenciacin
de los linfocitos B activados en el microambiente
de los OLS. Estas interacciones incluyen entre
otras: (i) contactos que ocurren en las zonas T del
OLS entre linfocitos T especficos para un cierto
antgeno y las DC interdigitantes (DC-I), que a
su vez son un subgrupo de las CD y (ii)
interacciones en el centro germinal entre los
linfocitos B activados con las DC foliculares (DCF) y los LT especficos para el mismo antgeno.
Las DC-I se encuentran en la zona T de los
OLS y en otros rganos no linfoides tales como
corazn, pulmones, riones, etc. Estas clulas
presentan una alta expresin de antgenos MHC
clase II y como se discuti son centrales en la
iniciacin de la activacin de LT, actuando como
clulas presentadoras de antgeno y entregando
adems una segunda seal coestimulatoria a los LT
(ej. CD80, CD86, CD2-Ligando), seal que
depende de la interaccin ntima entre el LT y la
DC-I. Las DC-I expresan adems numerosos
receptores de adhesin, incluyendo CD11aCD18
(LFA-1), ICAM-1, ICAM-2 y CD44. Experimentos
realizados con anticuerpos contra diferentes
receptores de adhesin o sus ligandos bloquean la
respuesta de LT estimulada por DC-I. Estos
resultados sugieren que la interaccin funcional
entre las DC-I y los LT requiere de interacciones
entre los pares adhesivos ICAM-1/LFA-1, y ICAM2/LFA-1. En particular, se sabe que la interaccin
ICAM-1/LFA-1 es esencial para la respuesta CD8
CTL, ya sea primaria o secundaria.
Por otro lado, las DC-F actan como un
importante sistema para atrapar antgeno en el
tejido linfoide ya que ellas ligan complejos
antgeno-anticuerpo en forma altamente eficiente
en los denominados icosomas. Se postula que la
interaccin de los linfocitos B con los complejos
icosomas presentes en la superficie de las DC-F y
con los LT especficos para el mismo antgeno
(previamente activados en la zona T por las DC-
258
Sin ttulo-2
258
5/26/06, 10:26 AM
I), conjuntamente con la produccin local de

citoquinas en el centro germinal, jugaran un papel
central en mecanismos tan importantes como
salvar a los LB de la apoptosis, en la induccin de
la sntesis de anticuerpos, en los cambios de clase
de inmunoglobulina, en la llamada maduracin
de afinidad de los LB, y probablemente en la
mantencin de LB de memoria. Aunque el detalle
de los mecanismos moleculares involucrados en
estos procesos se desconoce, existe evidencia de
que los receptores de adhesin tendran un papel
central en estos importantes fenmenos.
Recientemente se ha demostrado la presencia de
VCAM-1 e ICAM-1 en DC-F. Experimentos con
anticuerpos contra estas molculas o contra los
respectivos receptores de adhesin 41++y
CD11aCD18 (LFA-1) presentes en los LB, han
permitido establecer la participacin de estos pares
adhesivos en las interacciones celulares en el
centro germinal. En relacin al "homing" de los
LB en el microambiente de los folculos linfoides,
se ha demostrado que el receptor de quimioquina
CXCR5 presente en LB, al igual que su ligando
BLC (CXCL13) producida especficamente por
DC-F en el folculo de los OLS (excepto en
ganglios perifricos, donde se piensa que este rol
es cumplido por MIP-3 o MIP-3) son
requeridos para la localizacin del LB en los
folculos linfoides. Tambin se ha implicado al par
SDF-1 y a su receptor CXCR4 (CXCL12) en el
"homing" microambiental de LB, aunque su rol
ha sido menos documentado. En los centros
germinales, aquellos LB que no son seleccionados
por el antgeno para transformarse en clulas de
memoria (ya sea porque no responden al antgeno
o porque pierden afinidad por ste en el proceso
de maduracin de afinidad) son eliminados a travs
de un proceso de apoptosis. Estudios de inhibicin
de la adhesin con anticuerpos especficos
sugieren que la adhesin de los LB a las DC-F va
los pares adhesivos ICAM-1/LFA-1 y VCAM-1/
41 es necesaria para salvar a los LB de la
apoptosis, contribuyendo en conjunto con el
antgeno a la seleccin de los linfocitos B.
La informacin presentada en este captulo
muestra claramente la importancia de la
participacin de los receptores de adhesin en los
diferentes mecanismos y procesos involucrados en
la respuesta inmune tanto normal como patolgica.
Es evidente que estos mltiples receptores y
ligandos proporcionan seales que controlan,
conjuntamente con los receptores especficos para
el antgeno, la especificidad, la iniciacin y la
duracin de la respuesta inmune, as como tambin

la actividad efectora, recirculacin y posicionamiento o "homing" especfico de los linfocitos
en los diferentes tejidos. Asimismo, cada vez es ms
claro que los linfocitos, tienen vas de "homing"
especficas para determinados tejidos, lo cual
contribuye a hacer ms eficiente y especfica una
respuesta inmune. De esta manera, el "homing"
tejido-especfico sera el equivalente a dotar a los
linfocitos efectores y de memoria de una clave para
entrar al tejido donde es ms probable que vuelvan
a encontrar su antgeno, y al mismo tiempo al
bloquear la entrada a otros tejidos, se disminuyen
las posibilidades de que estos linfocitos ya
armados puedan producir dao al organismo (en
la forma de hipersensibilidad o autoinmunidad).
Finalmente, el hecho de que el "homing" tejidoespecfico de un linfocito sea una caracterstica que
probablemente perdure en el tiempo, dara
fundamento a la idea de considerarlo como parte
de la memoria inmunolgica.
LECTURAS SUGERIDAS
Bradley, L., Watson, S., Lymphocyte migration
into tissue, Curr Opin In Immunol 8: 312-320,
1996.
Cinamon, G.; Grabovsky, V.; Winter, E.; Franitza,
S.; Feigelson, P; Shamri, R.; Dwir, O.; Alon, R.,
Novel chemokine functions in lymphocyte migration through vascular endothelium under shear
flow, J Leukoc Biol 69 (6) 860-6, 2001.
Dunon, D.; Piali, L.; Imhof, B.A., To stick or not
to stick: the new leukocyte homing paradigm,
Curr Opin cell Biol 8( 5):714-23, 1996.
Moser, B., Loetscher, P., Lymphocyte traffic control by chemokines, Nature Immunol 2(2):1238, 2001.
Taub, D.D., Chemokine-leukocyte interactions.
The voodoo that they do so well, Cytokine Growth
factor Rev. 7(4): 355-76, 1996.
Worthylake, R.A., Burridge, K., Leukocyte
transendothelial migration: orchestrating the underlying molecular machinary, Curr Opin Cell
Biol 13(5):569-577, 2001.
259
Sin ttulo-2
259
5/26/06, 10:26 AM
260
Sin ttulo-2
260
5/26/06, 10:26 AM

Captulo 13
ONTOGENIA Y DIFERENCIACIN
DE CLULAS B Y T
Rodrigo Naves P. y Mario Rosemblatt S.
1. Introduccin
2. Regulacin gnica de la diferenciacin linfocitaria
3. Diferenciacin y maduracin de
linfocitos B
3.1. Etapa antgeno-independiente
3.2. Etapa antgeno-dependiente
4. Diferenciacin y maduracin de
linfocitos T
4.1. Migracin de los precursores de
linfocitos T
4.2. Diferenciacin
4.3. Seleccin tmica
261
Sin ttulo-2
261
5/26/06, 10:26 AM
262
Sin ttulo-2
262
5/26/06, 10:26 AM
RESUMEN
La produccin de clulas B o T maduras y funcionales involucra la conversin de una
clula troncal pluripotente, cuyo fenotipo est fundamentalmente definido por la expresin de la
molcula CD34, en una clula comprometida con uno de varios linajes. Este proceso est sometido a un estricto programa de regulacin gnica en el cual diversos genes son activados o reprimidos mediante la accin concertada de factores de transcripcin. Involucra tambin la diferenciacin y proliferacin de estas clulas en un microambiente apropiado. Los precursores linfoides
ms inmaduros no estn plenamente identificados, aunque existe una serie de marcadores que
han permitido adjudicar un cierto fenotipo a este precursor. La evidencia experimental indica que
existira una clula progenitora linfoide comn para linfocitos B y T. Las seales de proliferacin y diferenciacin para cada tipo celular estaran dadas por el microambiente particular interacciones celulares y los factores solubles- en el cual madura cada uno de estos tipos celulares, el timo para las clulas T, y la mdula sea y los rganos linfoides secundarios (OLS) para las
clulas B. Aunque an se desconoce muchas de estas seales.
En la diferenciacin de los linfocitos B encontramos una etapa antgeno independiente que
ocurre en la mdula sea y una etapa antgeno dependiente que ocurre fundamentalmente en los
OLS. Los linfocitos B que emigran de la mdula sea (linfocitos B virgen) expresan simultneamente receptor para antgeno tipo IgM e IgD. Luego de su encuentro y seleccin por el antgeno
en los OLS los linfocitos B sufren un cambio de clase de inmunoglobulinas y, a travs de un
proceso de mutaciones, un aumento en su afinidad por el antgeno. Estos cambios de afinidad se
llevan a cabo con una mantencin fiel de la especificidad por el antgeno. Los procesos de diferenciacin tanto en la mdula sea como en los centros germinales de los OLS estn regulados
por las interacciones celulares y por citoquinas producidas localmente.
La produccin de linfocitos T maduros ocurre fundamentalmente en el timo. Los progenitores hematopoyticos generados en la mdula sea migran al timo donde pasan por un activo
proceso de diferenciacin y proliferacin. Los precursores T que llegan al timo no muestran
ninguno de los marcadores tpicos de los linfocitos T maduros, son CD4-CD8- (dobles negativos) y TCR-. A partir de estas clulas se producen timocitos dobles positivos (CD4+CD8+) que
expresan a su vez el TCR maduro. Finalmente estas clulas dobles positivas terminan generando
la poblacin madura de linfocitos circulantes T "helper" (LTh) CD4+ y linfocitos T citotxicos
(TLc) CD8+. Los timocitos dobles positivos pasan por una doble seleccin antes de transformarse en simples positivos y salir a la circulacin; una seleccin positiva que permite generar linfocitos
T maduros que reconocen antgeno en funcin de su propio MHC (eliminndose los linfocitos T
que no reconocen a su propio MHC) y una seleccin negativa que elimina los linfocitos T
autorreactivos (que reconocen antgenos propios).
En este captulo es abordarn los principales mecanismos que llevan a la maduracin de los
linfocitos hacia clulas efectoras capaces de montar una respuesta inmune adaptable afectiva y se
discutir a nivel celular y molecular cmo esta
respuesta llega a ser eficaz contra patgenos, evitando el reconocimiento de los antgenos propios.
Los mecanismos de diferenciacin deben asegurar que el repertorio, tanto de linfocitos B como T
se genere en forma continua de manera de poder
1. INTRODUCCIN
Los estudios de los procesos de diferenciacin de linfocitos B y T han sido, tal vez, una de
las reas ms estudiadas de la inmunologa en la
ltima dcada. Aunque esta rea no ha estado libre de controversias y muchas de las cuales an
persisten, sus resultados han sido espectaculares
y han sentado las bases de numerosos procesos en
otras facetas de la biologa celular y molecular.
263
Sin ttulo-2
263
5/26/06, 10:26 AM
reconocer los antgenos forneos manteniendo la

eficacia de la respuesta inmune. Estos mecanismos
llevan en ltima instancia a la expresin, en la superficie de los linfocitos, de receptores especficos
para antgeno y de molculas co-estimuladoras que
aseguran la respuesta inmune. Por otro lado, muchos de estos linfocitos se transforman en clulas
de memoria que persisten durante largo tiempo. En
este captulo se discutirn estos mecanismos y se
definirn las etapas que llevan a la generacin de
clulas inmunocompetentes.
Diversas evidencias han demostrado que la

activacin del programa de expresin gnica especfica de las clulas B en el siguiente estado de
diferenciacin (pre-pro-B) est controlado por la
accin coordinada y cooperativa de los factores
de transcripcin codificados por el gen E2A (E12
y E47) y por el factor de clulas B temprano EBF.
Estos factores regulan la expresin y el rearreglo
de los genes de IgH e Igk y son requeridos para la
adecuada expresin de los genes activadores de
las enzimas de recombinacin (Rags). Dentro de
los genes regulados por E2A y EBF se encuentra
el gen que codifica para el factor transcripcional
Pax-5 el cual acta en el siguiente estado de diferenciacin conocido como pro-B. Se ha observado que clulas pro-B impedidas de expresar Pax5 presentan un fenotipo de clulas comprometidas en el linaje de clulas B pero continan expresando varios genes relacionados con otros linajes celulares. Este resultado sumado al hecho
de que Pax-5 puede actuar como un activador
transcripcional cuando es expresado en bajas concentraciones y como un represor a altas concentraciones, han llevado a proponer que la induccin de expresin de Pax-5 llevara a la represin
de los genes asociados con los otros linajes celulares.
En el caso de la maduracin de los linfocitos
T una serie de decisiones deben ser tomadas a lo
largo del proceso de diferenciacin. En primer lugar la clula progenitora linfoide puede seguir por
la va de maduracin que conduce hacia el linaje
de las clulas B o T. Luego, el linfocito T puede
diferenciarse en clulas que expresan un TCR
o un TCR y despus, en el caso de los linfocitos
TCR, la eleccin debe ser tomada entre seguir
hacia el linaje CD4+ o CD8+. Seales proporcionadas a travs del pre-TCR, el TCR, factores solubles e interacciones celulares son determinantes en el destino final de los linfocitos T en la diferenciacin. Al igual que en la maduracin de las
clulas B, el programa de diferenciacin de las
clulas T est sometido a un estricto control
transcripcional. Entre los factores de transcripcin
que participan en estos procesos, las protenas
Notch cumplen un destacado papel de regulacin.
Las protenas Notch corresponden a una familia
de receptores de transmembrana que regulan procesos de diferenciacin neuronal y epidermal.
Trabajos publicados recientemente han mostrado
que la inactivacin inducible del gen Notch-1 en
ratones recin nacidos o en clulas troncales de
mdula sea conducen a un bloqueo temprano del
2. REGULACIN GNICA DE LA DIFERENCIACIN LINFOCITARIA

La maduracin de linfocitos implica la progresin secuencial de una clula troncal
pluripotente a travs de estados intermedios de
diferenciacin para llegar finalmente a una clula
absolutamente funcional. Se ha observado que las
clulas progenitoras troncales expresan bajos niveles de los genes especficos de los diferentes
linajes celulares que ellas son capaces de originar.
Esto ha llevado a proponer que una vez que la clula troncal se compromete en la diferenciacin
de un linaje celular particular ocurrira la consolidacin de la expresin gnica especfica de ese
linaje y la represin de los genes que participan
en la diferenciacin de los restantes linajes.
En base a estudios de expresin gnica diferencial y al anlisis de ratones deficientes en la expresin de genes especficos se ha podido establecer
la participacin jerrquica y combinatorial de nuevos factores de transcripcin implicados en la diferenciacin de los estados ms tempranos de las clulas linfoides (figura 13-1). Por ejemplo, los factores
de transcripcin PU.1 e Ikaros participan en la diferenciacin de la clula troncal hematopoytica al
estado de clula progenitora linfoide. PU.1 participa en la regulacin de la expresin del receptor de
IL-7 que es requerido en la etapa de proliferacin de
la clula progenitora linfoide. Ratones deficientes
en la expresin de PU.1 mueren a las pocas horas o
das de haber nacido y exhiben ausencia de clulas
linfoides y mieloides lo que pone de manifiesto su
importancia en la generacin de una clula
progenitora comn para ambos linajes. Por su parte,
Ikaros es capaz de interactuar con los factores de
transcripcin Aiolos y Helios y participa en la especificacin, diferenciacin y homeostasis linfocitaria.
Un defecto en la expresin de Ikaros impide el desarrollo de clulas precursoras tempranas.
264
Sin ttulo-2
264
5/26/06, 10:26 AM
Figura 13-1. Regulacin transcripcional de la diferenciacin linfocitaria. La diferenciacin de una clula troncal hematopoytica
en una clula progenitora linfoide o en una clula progenitora mieloide es capaz de dar origen a todas las clulas sanguneas
maduras. La activacin de los factores de transcripcin Ikaros y PU.1 es clave en la etapa de diferenciacin haca una CPL. La
posterior maduracin de esta clula en un linfocito B o T depender de la accin concertada de otros factores transcripcionales, los
cuales activarn o reprimirn la actividad de diversos genes involucrados en el programa de diferenciacin especfico de cada
linaje celular. Algunos de ellos, tales como Ikaros, E2A (E47 y E12) y Notch participan en varias etapas de la maduracin de
linfocitos B y T. Abreviaturas utilizadas: DN, doble negativo; DP, doble positivo; SP, simple positivo; PGM, progenitor granulocito/
macrfago; PME, progenitor megacariocito/eritrocito.
proceso de diferenciacin de las clulas T sin afectar el desarrollo de los linfocitos B o de algn otro
linaje hematopoytico. La observacin ms interesante fue que las clulas del timo de estos ratones expresaban marcadores del linaje de clulas
B y que fenotpicamente se asemejaban a clulas
B inmaduras. Por otro lado, estudios complementarios mostraron que ratones irradiados trasplantados con clulas troncales de mdula sea, que
expresan constitutivamente la forma activa de
Notch-1 (dominio intracelular) dieron origen a una
poblacin de clulas que expresaron marcadores
del linaje de clulas T. Lo destacado de este experimento es que el desarrollo de los linfocitos T
se llev a cabo en la mdula sea, independiente
de la influencia del ambiente tmico y que la diferenciacin de las clulas B fue abortado en el temprano estado pre-pro-B. Sin embargo, la diferen-
ciacin del linaje de clulas mieloides no fue afectada. A nivel molecular, se ha mostrado que la va
de transduccin de seales de Notch es capaz de
interferir con la actividad de la protena E47 codificada por el gen E2A lo que explicara la represin del programa de diferenciacin de las clulas
B. Tambin hay evidencias que muestran que
Notch-1 participara en la determinacin del linaje de linfocitos T que expresan un TCR o un
TCR, as como tambin en la diferenciacin
hacia CD4+ versus CD8+. Todos estos resultados demuestran que Notch es esencial en la determinacin del destino de las clulas T. Ya que se
ha encontrado que el ligando de Notch est presente tanto en la mdula sea como en el timo. La
pregunta que an queda por responder es cmo se
controla la va de transduccin de seales de Notch
para que slo se active en el timo. La respuesta
265
Sin ttulo-2
265
5/26/06, 10:26 AM
tendra que especular la participacin de factores

adicionales especficos de estos ambientes celulares, que regulan la capacidad de las clulas
progenitoras para responder a los ligandos de
Notch.
En base a todos los recientes antecedentes
que hemos descrito se ha propuesto un modelo de
diferenciacin de clulas linfoides basado en la
actividad diferencial de diversos factores
transcripcionales (figura 13-1). Segn este modelo, en la mdula sea las clulas progenitoras
linfoides seran refractarias a la estimulacin del
ligando de Notch-l debido a la ausencia de un estmulo adicional apropiado, lo que las conducira
a travs de la diferenciacin de clulas B. En estados tempranos de esta maduracin la accin coordinada de los factores E2A y EBF activara la
expresin del programa de diferenciacin gnica
de las clulas B entre los cuales se encuentra Pax5. A su vez, la sobreexpresin de Pax-5 reprimira la expresin de los genes especficos de los
otros linajes celulares. Por su parte, la clula
progenitora linfoide que migra desde la mdula
sea hacia el timo, encontrara en este
microambiente las seales necesarias para activar
la va de transduccin de seales de Notch. A su
vez, Notch inhibira la funcin del factor de transcripcin codificado por el gen E2A bloqueando
as el programa de diferenciacin de clulas B en
el timo.
mieloides). Recientemente, se ha identificado una

clula progenitora (linfoide) capaz de diferenciarse
especficamente hacia el linaje de las clulas
linfoides (clulas B, T y NK). Esta clula
progenitora linfoide correspondera al estado ms
temprano de diferenciacin linfocitaria, que se
caracteriza por una alta actividad mittica. Estudios de mutacin gnica y el anlisis de
inmunodeficiencias primarias (ver captulo 30),
han evidenciado el requerimiento de interleuquina7 (IL-7) en esta etapa de alta proliferacin. Posteriormente, y debido a la activacin de un programa gentico especfico las clulas progenitoras
linfoides son conducidas hacia la diferenciacin
del linaje B. La clasificacin de los siguientes
estados de diferenciacin de las clulas B est
definido, principalmente, por el rearreglo de los
genes de cadena liviana y pesada de las
inmunoglobulinas y por la ausencia o presencia
de marcadores de superficie celular. Las clulas
en el estado pro-B no producen inmunoglobulinas
y se distinguen por la expresin de los marcadores CD19, CD43 y B220. En el siguiente estado
de diferenciacin, denominado pre-B, ocurre la
recombinacin de los genes V-D-J de las cadenas
pesadas de las inmunoglobulinas (ver captulo 6)
y la sntesis y expresin citoplasmtica de la cadena pesada (H) . Sin embargo, estas clulas no
expresan inmunoglobulinas en su membrana, ya
que an no sintetizan la cadena liviana (L), y por
lo tanto son incapaces de reconocer o responder a
antgeno. Posteriormente, algunas de las cadenas
H se asocian a una "cadena L de reemplazo", molcula estructuralmente similar a la cadena L normal pero que no posee la regin variable de sta.
La combinacin de la cadena H con la cadena L
de reemplazo constituyen el receptor de clulas
pre-B (pre-BCR), el que regulara la sntesis ulterior de las cadenas L y la consiguiente maduracin de los linfocitos B. En la etapa siguiente de
maduracin (linfocitos B inmaduros) ocurre la
recombinacin de los genes VJ de las cadenas livianas y por tanto la sntesis de las cadenas livianas ( o ) las cuales se asocian con la cadena
pesada++para generar una molcula de IgM en
el citoplasma. Estos linfocitos B no pueden generar nuevas regiones variables (de cadenas L o H)
en la mdula sea y se les considera
funcionalmente inmaduros. De hecho, su encuentro con antgenos propios puede llevarlos a un estado anrgico (inactivacin funcional) o de muerte celular ms que a una activacin. Sin embargo,
esta es una importante etapa de seleccin negativa
3. DIFERENCIACIN Y MADURACIN DE
LINFOCITOS B
El proceso de maduracin de los linfocitos B
involucra dos etapas generales claves; una etapa
antgeno-independiente, que ocurre en la mdula
sea y una etapa antgeno-dependiente que ocurre, fundamentalmente, en los OLS, lugar en el
cual los linfocitos B especficos para un determinado antgeno, toman contacto con ste.
3.1 Etapa antgeno-independiente
En los mamferos, clulas troncales hematopoyticas pluripotentes provenientes del hgado fetal colonizan la mdula sea reclutadas por la accin de la quimioquina CXCL12 secretada por las
clulas del estroma medular. Estas clulas
troncales tienen la capacidad de renovarse permanentemente y de dar origen a la totalidad de las
clulas sanguneas maduras (linfoides y
266
Sin ttulo-2
266
5/26/06, 10:26 AM
de linfocitos B autorreactivos que eventualmente

podran ocasionar enfermedades autoinmunes.
Posteriormente, los linfocitos B son capaces de coexpresar molculas de IgM y de IgD en la membrana celular, las cuales pueden actuar como receptores especficos para antgeno. En esta etapa
los linfocitos adquieren competencia funcional y
son denominados clulas B maduras (figura 13-2).
Adems de la regulacin gnica mediada por diversos factores de transcripcin y de IL-7, se conoce que protenas tirosina quinasa de la familia Src y
ciertos procesos adhesivos entre los linfocitos B en
desarrollo y los elementos del estroma de la mdula sea (ver captulo 12) actan como factores
inductores de la diferenciacin de clulas B.
Los linfocitos B virgen que expresan en su
das o semanas. La capacidad del sistema inmune

de producir inmunoglobulinas de diferentes
especificidades y combatir infecciones est determinada por la posterior diferenciacin de los
linfocitos B virgen en los rganos linfoides secundarios, lugar donde se produce el cambio de clase
de inmunoglobulinas y la maduracin de la afinidad. Estos cambios se producen con una fiel mantencin de la especificidad por antgeno. En este
sentido es importante hacer notar dos caractersticas importantes del proceso de diferenciacin de
los linfocitos B que aseguran la mantencin de la
especificidad antignica: (a) la llamada "exclusin
allica" fenmeno que permite que aunque cada
individuo heterocigoto recibe dos alelos de los
genes para inmunoglobulina (uno de cada padre)
Figura 13-2. Etapas en la maduracin de los linfocitos B.
slo uno logra expresarse en cada linfocito y (b)

la denominada "exclusin del isotipo de cadena
liviana" que regula la expresin de las cadenas L
de manera que cada linfocito B produce ya sea
cadenas k o pero nunca las dos.
membrana receptores especficos para un determinado antgeno, salen de la mdula sea y entran en la circulacin perifrica. Estudios in vitro
han mostrado que a partir del estado de clulas B
inmaduras los linfocitos experimentaran una disminucin en su respuesta a la quimioquina
CXCL12 lo que les permitira escapar a la accin
reclutadora de este factor y abandonar la mdula
sea. En la periferia, los linfocitos B vrgenes
migran a los rganos linfoides secundarios donde
completarn su proceso de diferenciacin. Estas
clulas B virgen expresan, simultneamente, IgM
e IgD de la misma especificidad en su membrana
y de no encontrar antgeno mueren en unos pocos
3.2 Etapa antgeno-dependiente

En las etapas siguientes de la diferenciacin
de los linfocitos B participan como elementos centrales el antgeno y los linfocito T de ayuda (Th).
Ciertos antgenos, fundamentalmente antgenos no
proteicos tales como los polisacridos y lpidos, no
requieren de la ayuda de los LTR. Estos antgenos,
267
Sin ttulo-2
267
5/26/06, 10:26 AM
son llamados Timo-independientes. Por otro lado,

los linfocitos B que reconocen antgenos Timodependientes s requieren de la colaboracin de
los linfocitos Th. Estos antgenos son encontrados por los linfocitos en los diferentes OLS: en el
bazo para los antgenos introducidos por la va
sangunea, en los ganglios para los antgenos colectados por la linfa, en las Placas de Peyer y tejido mucoso para antgenos ingeridos o inhalados y
en la piel. Es as que la respuesta humoral a
antgenos T-dependientes propiamente tal comienza en las zonas T de los OLS donde los linfocitos
B antgeno-especfico toman contacto con los LTh
capaces de reconocer el mismo antgeno. Los
linfocitos B migran posteriormente a los folculos
donde entran en contacto con elementos celulares
del estroma llegando a formar los Centros
Germinales (CG), zona de alta proliferacin celular. Los linfocitos B de los CG presentan una muy
baja expresin de la protena anti-apopttica Bcl2, de manera que aquellos linfocitos B que no son
rescatados por las Clulas Foliculares Dendrticas
(CFD) a travs de antgeno y de otras interacciones
adhesivas mueren, pasando a otro compartimento
donde son destruidos por los macrfagos de cuerpos tangibles que se encuentran en gran nmero
en la zona B de los OLS.
Con el fin de revisar estas etapas del desarrollo del linfocito B un poco ms en detalle se
considerar los eventos que ocurren en un ganglio linftico como ejemplo de los mecanismos
que llevan a la diferenciacin final y a la proliferacin de los linfocitos B maduros (figura 13-3).
Los linfocitos B (al igual que los linfocitos

T) entran al ganglio a travs del epitelio columnar
que tapiza las vnulas post capilares de los OLS
(ver captulo 12) donde entran en contacto breve
con los linfocitos T de ayuda, migrando posteriormente a los folculos linfoides para formar all,
luego de un proceso de diferenciacin y de una
activa proliferacin, los CG. En el folculo, los
linfocitos B entran en contacto con las CFD. Estas clulas estn especializadas en retener y presentar al linfocito B, antgeno sin procesar y en
forma nativa (formando un complejo con el anticuerpo, conocido como icosoma). Esta interaccin
involucra, adems del antgeno y el respectivo receptor (IgM/IgD) por parte del linfocito B, una
serie de molculas de adhesin y sus respectivos
ligandos. Estas interacciones tienen como resultado la produccin de citoquinas que inducen en
el linfocito B nuevos procesos de diferenciacin
con cambios en la clase de inmunoglobulina y
activa proliferacin. Como resultado de estos cambios se generan los CG, los cuales poseen una estructura fina que contiene una zona oscura de
centroblastos en activa proliferacin y una zona
clara que contiene los llamados centrocitos, clulas no proliferantes. Esta zona clara contiene adems la ms alta densidad de CFD y una pequea
proporcin de linfocitos T, probablemente
antgeno-especficos. Es en estos CG donde se
generan los linfocitos B de memoria y donde ocurren las hipermutaciones de las regiones V de las
inmunoglubulinas. Estas mutaciones son consideradas necesarias para la llamada maduracin de
Figura 13-3. Etapas que marcan el desarrollo final de los linfocitos B en un ganglio linftico perifrico.
268
Sin ttulo-2
268
5/26/06, 10:26 AM
la afinidad de los anticuerpos sricos las cuales

pueden llevar a cambios de afinidad pero tambin a cambios de especificidad. Los procesos
que regulan este fenmeno deben asegurar la seleccin de los mutantes de alta afinidad y la eliminacin de los mutantes de baja afinidad as como
tambin de los linfocitos B autorreactivos que
pudieran resultar del proceso de hipermutaciones.
La maduracin de la respuesta inmune humoral
favorece el aumento de la afinidad, ya que aquellos linfocitos cuya afinidad disminuye a causa de
las mutaciones, debern competir por antgeno,
presentado en la superficie de las CFD, con aquellos de ms alta afinidad.
Las seales y mecanismos que median los
procesos finales de migracin, de diferenciacin,
de proliferacin y de mutacin de los linfocitos B
dentro del CG son en gran parte desconocidos,
aunque los indicios experimentales involucran claramente la participacin de molculas de adhesin y citoquinas. Por ejemplo, la administracin
in vivo de anticuerpos capaces de bloquear la
interaccin entre CD40 con su ligando CD40L o
entre las molculas coestimulatorias CD28 (B7)
con CTLA-4 bloquean las reacciones de los CG.
Mucho queda por investigar en esta importante
rea de la respuesta inmune humoral, especialmente en lo que respecta al posible papel de las
citoquinas en las etapas finales de diferenciacin
y proliferacin. Hasta ahora, tanto IL-2 como IL10 han sido involucradas en la ayuda proporcionada por los linfocitos T y en la "decisin" final
de los linfocitos B de tomar el camino de un linfocito B de memoria o de una clula plasmtica productora de anticuerpos.
procesos deben generar un repertorio de linfocitos

T maduros que cumpla dos requisitos fundamentales: primero que reconozca antgeno en funcin
del propio MHC (restriccin MHC) y segundo que
estos linfocitos T no reconozcan antgenos propios (tolerancia).
4.1. Migracin de los precursores de linfocitos T
Se desconoce la naturaleza exacta de la clula precursora que da origen a los linfocitos T. En
humanos, una putativa clula precursora de la lnea T ha sido identificada en base a la expresin
de la molcula de superficie CD34. Esta molcula se expresa en las clulas troncales pluripotentes
de la mdula sea que dan origen no slo a los
linfocitos T sino que tambin a los linfocitos B, a
las clulas dendrticas y a clulas endoteliales de
la vasculatura. Estas clulas CD34+ de la mdula
sea (o del hgado fetal) se transforman, al ser
colocadas en un microambiente tmico en cultivo,
en linfocitos T, desconocindose sin embargo los
mecanismos que llevaran a los progenitores T de
la mdula sea a migrar al timo in vivo. Se postula, sin embargo, que estos precursores expresaran en su superficie receptores de adhesin que
se ligaran selectivamente al endotelio tmico permitiendo su entrada al interior del rgano. Uno
de estos receptores podra ser la misma molcula
CD34 ya que existen evidencias que esta molcula interactuara con la L-Selectina, una molcula
de adhesin presente en los linfocitos.
Una vez en el timo los precursores de los
linfocitos T mantienen una alta capacidad
proliferativa. Alrededor de 1 a 10 clulas precursoras pueden repoblar un timo al ser implantadas
en ste y estudios in vitro han demostrado que una
sola clula progenitora es capaz de generar alrededor de 105 linfocitos T maduros en un perodo
de 10 a 15 das, con TCRs de una amplia gama de
especificidades distintas. Por otro lado, estudios
efectuados con timos irradiados han demostrado
que a pesar de la alta capacidad de divisin de los
precursores, stos, una vez en el timo pierden su
capacidad de autorrenovacin, y deben ser constantemente reemplazados por nuevas clulas
progenitoras a partir de la mdula sea.
4. DIFERENCIACIN Y MADURACIN
DE LINFOCITOS T
Es generalmente aceptado que los linfocitos
T se originan en la mdula sea a partir de un precursor capaz de migrar al timo, el principal rgano donde se lleva a cabo la diferenciacin de los
linfocitos T. Este proceso de maduracin de los
linfocitos T en el timo (denominados timocitos en
oposicin a los linfocitos T maduros que se encuentran en circulacin), y la generacin del repertorio de receptores de LT puede dividirse en
tres etapas ntimamente relacionadas: (a) la migracin de los progenitores de la mdula sea al
timo, (b) la diferenciacin de estas clulas
progenitoras y (c) un proceso de seleccin. Estos
4.2. Diferenciacin
Los estudios de la ontogenia y diferenciacin
de los linfocitos T se han realizado fundamentalmente usando como modelo el ratn. En este ani-
269
Sin ttulo-2
269
5/26/06, 10:26 AM
mal, los primeros precursores T se detectan en el

timo en el da 11 de gestacin (correspondiente
aproximadamente a la semana 7-8 en humanos)
ubicndose en la zona cortical de ste. A medida
que los timocitos migran hacia zonas ms internas de la corteza stos van avanzando en su proceso de diferenciacin. En estados finales de
maduracin los linfocitos T pasan desde la corteza hacia la mdula y finalmente salen del timo a
la periferia a travs de las vas linfticas o venas.
El ambiente tmico representado por las
interacciones fsicas que se establecen entre los
timocitos y los diferentes tipos celulares que all
se encuentran (clulas epiteliales, dendrticas y
macrfagos) y los factores solubles que son liberados al medio externo son claves en los procesos
de maduracin y seleccin. Una serie de trabajos
sugieren que el patrn diferencial de expresin de
ciertas quimioquinas y de sus receptores, en particular CXCL12, CCL17, CCL19, CCL21, CCL22
y CCL25, estara relacionado con la migracin de
los timocitos a travs de los diferentes
subcompartimentos tmicos. Entre las diferentes
citoquinas que las clulas estromales tmicas
secretan, se ha identificado a IL-7 como un
modulador directo de la sobrevida, diferenciacin,
transcripcin y rearreglo gnico del TCR. Adems, la diferenciacin de linfocitos T est sometida a un estricto control de expresin gnica mediada por factores transcripcionales tales como
GATA-3, E12, E47, HEB, NF-kB, Ikaros y Notch.
Dos marcadores de superficie presentes en
las clulas T han sido de gran utilidad en proporcionar informacin sobre los procesos de diferenciacin de los linfocitos T, stos son las molculas CD4 y CD8. En base a la expresin de estos
dos marcadores, la poblacin de linfocitos T en
un individuo adulto puede ser dividida en cuatro
grupos: los linfocitos T dobles negativos (CD4CD8-), los dobles positivos (CD4+ CD8+) que representan poblaciones ms o menos inmaduras de
linfocitos T y los simples positivos (CD4+ CD8y CD4- CD8+) que corresponden a las poblaciones ms maduras de linfocitos T. En los estudios
de los procesos y mecanismos que conducen a la
formacin de la poblacin de linfocitos T maduros, los principales esfuerzos han estado dirigidos
a definir los mecanismos que llevan a la generacin, a partir de un precursor nico, de las dos
principales subpoblaciones de linfocitos T maduros, los linfocitos Th que presentan el fenotipo
CD4+ CD8- y los linfocitos T citotxicos (Tc) cuyo
fenotipo es CD4- CD8+, y a explicar la elimina-
cin durante el proceso de diferenciacin, de aquellos clones de linfocitos T autorreactivos capaces

de reconocer antgenos propios.
Las primeras clulas del linaje T que aparecen en el timo se detectan en la corteza tmica externa y no expresan los marcadores CD4, CD8,
TCR ni CD3, un marcador comn de clulas T.
Este estado de maduracin es conocido como proT y los timocitos son denominados dobles negativos. Estas clulas, que representan aproximadamente el 5% de los timocitos expresan CD44 (una
glicoprotena adhesiva de membrana), Thy-1 (en
el ratn) y HSA (antgeno estable al calor). En
este momento de la diferenciacin (da 13 a 14 de
gestacin), los genes del TCR se encuentran an
en la configuracin germinal. En el siguiente estado de maduracin conocido como pre-T, se inicia la recombinacin y expresin de los genes de
la cadena del TCR (da 15 de gestacin) la cual
se asocia con una protena invariante llamada pT
y con las protenas del complejo CD3
(,+,++,+) para dar origen al receptor de clulas pre-T o pre-TCR. Este complejo proteico es
capaz de transducir seales a travs de la va de
protenas tirosina quinasa Src y su actividad es
esencial para la continuacin hacia los posteriores estados de maduracin. Aproximadamente, el
80% de estas clulas dobles negativas pasan por
una etapa en la cual expresan transitoriamente la
molcula CD8 (y el HSA) para dar origen, posteriormente, a un precursor CD4+ CD8+ doble positivo (ver figura 13-3). Estas clulas dobles positivas se encuentran en una etapa activa de
rearreglo de los genes que codifican para la cadena del receptor de las clulas T sin que logre
detectarse expresin del TCR en el citoplasma o
en la membrana (da 17 de gestacin). Los primeros rearreglos gnicos y la aparicin del TCR
completo ocurren en forma coordinada con la expresin de los otros marcadores del linaje T, esto
es CD4, CD8 y CD3 (ver ms adelante). En este
estado de clulas dobles positivas el TCR es completamente funcional y puede responder a antgeno
lo que permite que los linfocitos sean sometidos a
los eventos de seleccin positiva y negativa. El
20% restante de las clulas dobles negativas probablemente nunca expresan CD4 o CD8 pero s
expresan un TCR con las cadenas . Estas clulas son los primeros linfocitos T que maduran en
el timo y representan clulas que se diferenciaran por una va independiente de los linfocitos T
. Aunque las clulas expresan un TCR funcional 2 das antes que las clulas la expresin
270
Sin ttulo-2
270
5/26/06, 10:26 AM
de las cadenas rpidamente sobrepasa la expresin de de manera que al momento del nacimiento los ratones tienen un repertorio de
linfocitos T con un 90% de clulas cuyo TCR es
fundamentalmente del tipo . Posteriormente,
los timocitos migran hacia la regin tmica
medular donde se diferenciarn en dos poblaciones distintas de clulas simples positivas; los LTh
con fenotipo CD4+ CD8- (restringidos por MHC
clase II) y los LTc con un fenotipo CD4- CD8+
(restringidos por MHC clase I). Estos dos tipos
celulares expresan en su membrana altos niveles
de TCR y son clulas totalmente competentes
capaces de migrar fuera del timo. El curso temporal del proceso de maduracin de los linfocitos
T se muestra en la figura 13-3.
gida por MHC (Seleccin Positiva). Estos eventos

de seleccin, que llevan a la produccin de linfocitos
T "efectivos" ocurren en el timo luego de la expresin del TCR, CD4 y CD8 y antes que estas clulas
salgan a la periferia (figura 13-3).
a) Seleccin Positiva. En este proceso el
microambiente tmico, elemento central en la llamada educacin tmica, interacciona con los
timocitos en desarrollo de manera de permitir la
sobrevida slo de aquellas clulas que expongan
en su superficie un TCR capaz de interaccionar
con un pptido presentado por su propio MHC (figura 13-4). De esta manera aquellos linfocitos T
que no presenten afinidad por su propio MHC
mueren en el timo. En esta etapa de seleccin
todos aquellos linfocitos T que por azar en el
reordenamiento de sus genes del TCR generaron
un receptor que no est restringido por el MHC
propio son eliminados, ya que, posteriormente,
ellos sern incapaces de interactuar con las clulas presentadoras de antgeno (CPA) y reconocer
antgeno. Dado que los linfocitos T no sufren el
proceso de hipermutacin somtica que les permita cambiar la afinidad o especificidad antignica
de su receptor, como ocurre con los linfocitos B,
el proceso de seleccin positiva permite asegurar
la mantencin de una poblacin de linfocitos T
cuyos TCR pueden actuar en forma efectiva durante la respuesta inmune.
4.3. Seleccin tmica

En el timo ocurren dos importantes eventos de
seleccin que son centrales en la generacin del repertorio de linfocitos T maduros circulantes. Uno
de estos procesos permite la generacin de
autotolerancia eliminando o silenciando aquellos
linfocitos T que poseen una alta afinidad por
antgenos propios (Seleccin Negativa). El otro proceso de seleccin deriva en la generacin de linfocitos
T maduros con un TCR capaz de reconocer el MHC
(Complejo Principal de Histocompatibilidad) propio asegurando que la respuesta inmune sea restrin-
Figura 13-4. Seleccin positiva y negativa. Etapas en la diferenciacin de los linfocitos T en el timo
271
Sin ttulo-2
271
5/26/06, 10:26 AM
Utilizando como modelo ratones transgnicos

para un TCR que reconoce a antgeno en el contexto de determinados MHC de clase I y de clase
II, se determin la presencia de linfocitos T en la
periferia solamente si el ratn expresaba el MHC
homlogo con aquel reconocido por el TCR
transgnico. Estos experimentos, conjuntamente
con otros de la misma ndole, lograron clarificar
el papel central del haplotipo de las clulas de la
corteza tmica en la seleccin positiva de los
linfocitos T. Estos experimentos lograron demostrar tambin que la mayora de los timocitos producidos en el timo no son capaces de reconocer
antgeno en el contexto del MHC apropiado, no
logran su estado final de maduracin, y son eliminados por apoptosis. Pero no slo el haplotipo
MHC de las clulas de la corteza tmica juega un
papel importante en la seleccin positiva, el
pptido contenido en el bolsillo del MHC tambin participa como elemento de seleccin. Experimentos de mutacin de la molcula de MHC
que alteran la unin del pptido al bolsillo reducen en forma significativa la seleccin positiva.
Los resultados de stos y otros experimentos indican que existen ciertas combinaciones de
pptido-MHC particularmente efectivas en la seleccin positiva, probablemente debido a un reconocimiento directo del pptido por el TCR. La
evidencia experimental parece indicar entonces
que la gran mayora de los timocitos CD4+ CD8+
sufren un proceso de muerte programada en el timo
y que la seleccin positiva los rescatara de la
apoptosis. Este rescate estara mediado por seales generadas por el TCR al enganchar al MHC
del haplotipo correcto y que contiene a su vez un
complemento de pptidos adecuados.
Resultados experimentales demuestran adems que la generacin, a partir de los timocitos
CD4+ CD8+ (dobles positivos), de los linfocitos
T simples positivos, (CD4+CD8- o CD4-CD8+),
sera un proceso al azar a travs del cual un
timocito perdera en forma estocstica la expresin de uno u otro co-receptor (CD4 o CD8) sin
la influencia de la especificidad del TCR. En
otras palabras, si por azar un timocito termina
con una combinacin apropiada de CD4 y TCR
restringido por el MHC clase II entonces ese
timocito ser estimulado y rescatado de la
apoptosis mediante la seleccin positiva. Igualmente un timocito que por azar termin con la
molcula CD8 en su superficie, ser rescatado si
tiene la combinacin apropiada de TCR restringido por MHC de clase I.
b) Seleccin Negativa. El proceso de Seleccin

Positiva recientemente descrito, genera una poblacin de linfocitos T cuya nica restriccin es
la de reconocer antgeno en funcin de su propio
MHC. Es concebible entonces que dentro de esta
poblacin existan clones de linfocitos T capaces
de reconocer antgeno propios generados y presentados en el estroma tmico. Esto resultara en
un importante nmero de linfocitos T capaces de
generar autoinmunidad. Sin embargo, esto no es
la situacin normal sino ms bien la excepcin.
Actualmente se sabe que la autotolerancia, es decir la incapacidad del sistema inmune de reaccionar contra antgenos propios se debe principalmente (aunque no nicamente) a la eliminacin o
silenciamiento, durante la diferenciacin de las
clulas T en el timo, de los clones autorreactivos.
Este proceso de delecin fsica o de eliminacin
funcional (anergia) de clones autorreactivos en el
timo se conoce como Seleccin Negativa. Este
proceso funciona de tal forma que solamente aquellos linfocitos T que posean un TCR capaz de reconocer un pptido extrao presentado por un
MHC propio sern finalmente seleccionados para
salir a la periferia como linfocito T maduro. La
eliminacin de los clones T autorreactivos ocurre
en la etapa en la cual los timocitos
CD4+CD8+TCR+ se unen a un pptido propio
presentado por molculas MHC propios de las
clulas dendrticas presentes en el timo. La eliminacin de los timocitos autorreactivos ocurre
aparentemente por mecanismos de muerte celular
programada causada, en este caso, por la activacin de los timocitos provocada por los
autoantgenos. La evidencia experimental indica
que las seales intracelulares que se generan a travs del TCR en un linfocito inmaduro en el timo
seran diferentes de las generadas en un linfocito
T maduro, de manera tal que en un caso causan
apoptosis mientras que en el otro causaran activacin y generacin de una respuesta inmune.
LECTURAS SUGERIDAS
Akashi, K.; Reya, T.; Dalma-Weiszhausz, D. and
Weissman, I.L., Lymphoid precursors, Curr.
Opin. Immunol. 12: 144-150, 2000.
Ansel, K.M. and Cyster, J.G., Chemokines in
lymphopoiesis and lymphoid organ development,
272
Sin ttulo-2
272
5/26/06, 10:26 AM
Busslinger, M.; Nutt, S.L. and Rolink, A.G.,

Lineage commitment in lymphopoiesis, Curr.
Opin. Immunol. 12: 151-158, 2000.
Deftos, M., and Bevan, M., Notch signaling in T
cell development, Curr. Opin. Immunol. 12: 166172, 2000.
Kee, B.L. and Murre, C., Transcriptional factor
regulation of B lineage commitment, Curr. Opin.
Immunol. 13: 180-185, 2001.
Osborne, B., Transcriptional control of T cell
development, Curr. Opin. Immunol. 12: 301-306,
2000.
273
Sin ttulo-2
273
5/26/06, 10:26 AM
274
Sin ttulo-2
274
5/26/06, 10:26 AM

Captulo 14
REGULACIN DE LA RESPUESTA INMUNE
Ulises Vergara C., Claudio Ziga M. e Ivn Palomo G.
1. Introduccin
2. Regulacin de la respuesta inespecfica
3. Regulacin de la respuesta inmune
especfica
3.1. Mecanismos inmunolgicos y no
inmunolgicos de regulacin
3.2. Delecin y anergia clonal. Tolerancia inmunolgica
3.3. Activacin de linfocitos T supresores
3.4. Regulacin mediante linfocitos
Th1 y Th2
3.5. Regulacin idiotpica o red
idiotipo-anti-idiotipo
3.6. Regulacin "feedback" por anticuerpos y complejos inmunes
3.7. Regulacin por Prostaglandinas
3.7.1. Prostaglandina E2 (PGE2).
275
Sin ttulo-2
275
5/26/06, 10:26 AM
276
Sin ttulo-2
276
5/26/06, 10:26 AM
RESUMEN
El repertorio linfocitario disponible para la activacin por distintos antgenos, la
autotolerancia y el desarrollo de una respuesta inmune especfica, estn controlados por diversos
mecanismos de regulacin tanto inmunolgicos como no inmunolgicos. Los mecanismos no
inmunolgicos de regulacin implican relaciones recprocas entre el eje hipotlamo-hipfisisadrenal (HHA) y citoquinas inflamatorias como IL-1, IL-6 y TNF. Citoquinas, hormonas como
ACTH, prolactina, progesterona y hormonas tiroideas, neurotransmisores como acetilcolina,
catecolaminas y endorfinas y mediadores biolgicos como histamina, serotonina y bradiquinina,
parecen integrados en un poderoso circuito inmunorregulador o red inmuno-neuro-endocrina.
Los mecanismos inmunolgicos de regulacin del sistema inmune implican la disponibilidad del antgeno mismo, la interaccin entre distintas clulas inmunocompetentes, la activacin
de diversas subpoblaciones linfocitarias con liberacin de una combinacin particular de mediadores solubles como citoquinas, leucotrienos y prostaglandinas, la regulacin idiotpica (red
idiotipo-anti-idiotipo) y la regulacin o "feedback" por anticuerpos y complejos inmunes. Estos
mecanismos inmunolgicos de regulacin del sistema inmune pueden operar tanto a nivel central como perifrico y pueden controlar la recirculacin y "homing" de las distintas subpoblaciones
linfocitarias, el procesamiento y la presentacin de antgenos y la activacin, proliferacin y
diferenciacin de las distintas clulas inmunocompetentes.
inespecficos de proteccin como el sistema del

complemento y la actividad fagoctica y
destructiva de neutrfilos y macrfagos. La estrategia de la respuesta inmune inespecfica, a diferencia de la respuesta adquirida, no es reconocer
un gran nmero de eptopos sino ms bien unas
pocas molculas PAMP ("Pathogen-Associated
Molecular Patterns"), altamente conservadas y
compartidas por un gran nmero de
microorganismos. Estos patrones moleculares son
reconocidos por receptores PRR ("PatternRecognition Receptor") expresados en distintas
clulas del Sistema Innato. Los ejemplos ms conocidos de PAMPs son lipopolisacridos (LPS),
pptidoglicanos, cido lipoteicoico, mananos,
DNA bacteriano y RNA de doble hebra. La mayora de estas molculas son expresadas slo por
microorganismos, lo que implica una muy baja
probabilidad de respuesta autoinmune por reaccin cruzada con patrones moleculares de los
agentes infecciosos. El reconocimiento de molculas PAMPs por receptores PRR en las clulas
del hospedero, inducirn cambios que sern muy
importantes en el desarrollo tanto de la respuesta
innata como de la respuesta adquirida. As,
macrfagos activados iniciarn la sntesis de las
1. INTRODUCCIN
La respuesta inmune es esencialmente
destructiva y orientada a la neutralizacin y eliminacin, tanto de agentes infecciosos y de clulas y molculas extraas, como detritus y productos moleculares de clulas propias y de clulas
envejecidas, transformadas o tumorales. Esto implica, necesariamente, la existencia de un sofisticado mecanismo de regulacin que permita responder, agresivamente, contra lo extrao, al tiempo que se acepta, tolera o no se reacciona contra
las clulas propias, que estn envejecidas, alteradas o transformadas y expresen marcadores
ACAMP (Apoptosis Cell Associated Molecular
Pattern).
En el presente captulo se describen distintos
mecanismos de regulacin tanto de la respuesta inmune inespecfica como de la respuesta especfica.
2. REGULACIN DE LA RESPUESTA
INESPECFICA
Adems de las barreras fsicas a la infeccin,
los individuos estn provistos de mecanismos
277
Sin ttulo-2
277
5/26/06, 10:26 AM
llamadas citoquinas de alarma (IL-1, IL-6, IL12, TNF), la produccin de interferones (IFN) -
y -, con la consiguiente inhibicin de la
replicacin viral y la activacin de clulas NK.
La activacin de hepatocitos por IL-6 inducir la
sntesis de protenas de fase aguda PCR y MBP
(Protena C Reactiva y Mannose Binding
Protein, respectivamente), con el consiguiente
reclutamiento y activacin del sistema del complemento por la ruta de las lectinas Adems las
diversas citoquinas van a regular o determinar la
calidad de la respuesta inmune especfica induciendo la expresin de molculas de presentacin
antignica, de seales accesorias de coestimulacin CD28, CD80, CD86, CD40, CD40L) y
la polarizacin hacia una respuesta inmune de tipo
Th1 o Th2.
La sntesis de IL-12 resulta fundamental en
la desviacin hacia una respuesta Th1 y es regulada por un mecanismo de "feedback" positivo, mediado por IFN o por un mecanismo de
"feedback" negativo mediado por de IL-10. Por
otro lado, se ha descrito que la unin del receptor
CR3 del sistema del complemento, con anticuerpos
o partculas unidas a iC3b, inhiben la sntesis de
IL-12 en monocitos/macrfagos humanos y de ratn. Lo anterior, sumado al hecho que CR2 participa en la activacin de linfocitos B, implica que el
sistema del complemento no slo es un mecanismo efector sino que puede tambin actuar como
elemento regulador positivo de la respuesta humoral y regulador negativo de la respuesta celular.
Una vez activados, los mecanismos efectores
inespecficos pueden actuar agresivamente, no slo
sobre el agente infeccioso invasor, sino tambin
sobre clulas propias y deben, por lo tanto, ponerse en marcha mecanismos de regulacin que
eviten el dao tisular.
Carboxipeptidasa N que acta como inhibidor

de las anafilotoxinas C3a, C4a y C5a.
Inhibidores del complejo de ataque a la membrana ("Membrane Attack Complex") como
la protena S o vitronectina, SP40, el factor
de restriccin homlogo (HRF) y CD59 o
MIRL ("Membrane Inhibitor of Reactive
Lysis").
2.2. Regulacin de la accin de clulas NK

En un individuo inmunocompetente normal,
una alta y prolongada respuesta NK puede conducir a una respuesta autoinmune puesto que las clulas NK son capaces de lisar clulas autlogas
normales (precursores de linfocitos B, timocitos
y clulas de la mdula sea) o suprimir la proliferacin de clulas troncales eritroides. Ratones
atmicos y ratones con inmunodeficiencia severa
combinada (SCID), aun cuando son incapaces de
generar una respuesta T especfica al virus de la
coriomeningitis linfoctica (LMCV), presentan una
respuesta NK ms elevada y ms prolongada (14
das) que los ratones normales, en los cuales la
activacin NK no se prolonga ms all de los 3 a
4 das. Se ha sugerido que la actividad citotxica
de las clulas NK sera negativamente regulada
por interleuquina-4 (IL-4) y factor de crecimiento
beta (TGF- "Transforming growth factor beta"),
sintetizado por linfocitos T CD8+ y T CD4+ del
tipo Th2 (ver punto 3.4 y captulo 11).
3. REGULACIN DE LA RESPUESTA INMUNE ESPECFICA

El desarrollo de una respuesta inmune celular y/o humoral requiere el reconocimiento
antignico por el receptor de linfocitos T (TCR) o
linfocitos B (BCR), respectivamente. Por otro
lado, la mantencin de la respuesta inmune en el
tiempo requiere la presencia continua del antgeno,
pero su sola administracin y la existencia de
clones linfocitarios especficos no aseguran el desarrollo de una respuesta inmune dado que la naturaleza, forma fisicoqumica, dosis y va de administracin del antgeno son factores importantes para estimular o inhibir la activacin de
linfocitos T y/o B especficos. As, polisacridos
bacterianos inducen una respuesta IgM mientras
los antgenos proteicos inducen tanto una respuesta
inmune humoral, como una respuesta celular. Por
otra parte, antgenos administrados por va sub-
2.1. Regulacin del sistema del complemento.

La activacin del sistema del complemento
es regulada a travs de una rpida degradacin o
inactivacin de algunos de sus componentes mediante protenas reguladoras unidas a membrana
o solubles en el plasma. (Ver captulo 18):
Inhibidor de C1 (C1 Inh).
Factor de aceleracin del decaimiento (DAF
o CD55) de las convertasas de C3 y C5.
Asociacin del factor I y diversos cofactores
(factor H, C4bp, MCP o CD46 y CDR1 o
CD35) para la disociacin o degradacin de
C4b y/o C3b.
278
Sin ttulo-2
278
5/26/06, 10:26 AM
cutnea, intramuscular o intradrmica inducen respuesta inmune, mientras los antgenos administrados por va oral o va intravenosa inducen tolerancia, fundamentalmente mediante supresin y
anergia de clones linfocitarios. Dosis bajas del
antgeno inducen supresin mientras las dosis altas
favorecen la anergia. Ratones inoculados primaria
y secundariamente con extracto de mdula espinal
en coadyuvante completo de Freund, desarrollan
Encefalitis Alrgica Experimental (EAE), lo que
no ocurre en ratones inoculados con el extracto
medular luego de una administracin primaria por
va oral, de protena bsica de mielina (MBP). Los
ratones que desarrollan encefalitis ponen en marcha una respuesta celular T CD4 especfica para
MBP, caracterizada por la secrecin de IFN-,
mientras los ratones que no manifiestan la enfermedad desarrollan una respuesta T CD8 caracterizada por la produccin de TGF- e IL-4.
Las citoquinas estn involucradas en la regulacin cualitativa y cuantitativa de la respuesta
inmune dado que participan en el control de una
serie de eventos asociados a la activacin, proliferacin y diferenciacin de linfocitos, con la consiguiente adquisicin de diversas funciones
efectoras o la apoptosis de las distintas
subpoblaciones linfocitarias (ver captulo 11).
Estos mediadores son liberados por, virtualmente, todas las clulas involucradas en la respuesta
inmune como linfocitos T, linfocitos B, clulas
NK, macrfagos, granulocitos y clulas
dendrticas, as como clulas derivadas del
endoderma (clulas del epitelio tmico), ectoderma
(queratinocitos) o mesnquima (clulas
endoteliales). Las interacciones mutuas entre las
diversas citoquinas y la modulacin de sus receptores determinan la intensidad de la respuesta
inflamatoria y el curso de la respuesta inmune especfica al determinar si la exposicin a un
antgeno determinado conducir a tolerancia o al
desarrollo de una respuesta inmune celular y/o
humoral. Tanto inmunidad como tolerancia son
fenmenos especficos que pueden tener consecuencias catastrficas para el individuo si no operan mecanismos que permitan regular el desarrollo de la respuesta inmune. As, con no poca frecuencia, las consecuencias patolgicas de una enfermedad infecciosa no son resultado directo de
la accin del agente infeccioso, sino de una respuesta inmune normal o muchas veces aberrante
contra el patgeno.
Un antgeno extrao induce generalmente una
respuesta que conduce a la diferenciacin de c-
lulas efectoras derivadas de linfocitos B o

linfocitos T y la sntesis de anticuerpos y/o
citoquinas, con la consiguiente eliminacin del
antgeno y generacin de memoria inmunolgica.
Un antgeno propio, en cambio, puede inducir un
fenmeno denominado "ignorancia" o estimular
una respuesta negativa que conduce a la eliminacin (deleccin), supresin o inactivacin
(anergia) de clones autorreactivos especficos. El
reconocimiento antignico y seales accesorias de
coestimulacin y citoquinas desempean un rol
fundamental, tanto en la deleccin o anergia de
los clones linfocitarios autorreactivos, como en la
expansin clonal y la diferenciacin que conducen al desarrollo de una respuesta inmune efectora
y a la eliminacin del antgeno, al tiempo que se
generan clulas de memoria para responder a un
nuevo encuentro con el antgeno.
La eliminacin del antgeno se convierte entonces en un importante mecanismo accesorio para
regular el curso de la respuesta inmune, puesto
que las clulas efectoras y los productos de la activacin linfocitaria (anticuerpos, citoquinas), son
por lo general de corta vida media.
3.1. Mecanismos inmunolgicos y no inmunolgicos de regulacin
En general, la regulacin del sistema inmune incluye tanto mecanismos inmunolgicos como
no inmunolgicos.
Los mecanismos no inmunolgicos implican relaciones recprocas entre el eje hipotlamohipfis-adrenal (HHA) y citoquinas inflamatorias
como IL-1, IL-6 y TNF (ver captulo 15).
Citoquinas, hormonas (ACTH, prolactina,
progesterona, hormonas tiroideas), neurotransmisores (acetilcolina, catecolaminas,
endorfinas) y mediadores biolgicos como
histamina, serotonina y bradiquinina parecen integrados en un poderoso circuito inmunorregulador denominado red inmuno-neuro-endocrina.
La activacin del eje hipotlamo-hipfisisadrenal, por las citoquinas inflamatorias IL-1, IL6 y TNF, resulta en la produccin de hormona
liberadora de corticotrofina (CRF) por neuronas
paraventriculares del hipotlamo y la secrecin de
hormona corticotrfica (ACTH) por la hipfisis.
ACTH acta sobre el sistema nervioso simptico,
con la secrecin de epinefrina y norepinefrina, y
sobre la corteza suprarrenal estimulando la sntesis y secrecin de glucorticoides que tienen efecto antiinflamatorio, inhibiendo la sntesis de
279
Sin ttulo-2
279
5/26/06, 10:26 AM
citoquinas, al tiempo que aumentan la expresin

de receptores para estas citoquinas. Los
glucorticoides tienen un efecto inmunosupresor
sobre linfocitos B, linfocitos T y clulas NK (disminuyendo la produccin de anticuerpos, la sntesis y secrecin de citoquinas y la actividad
citotxica de linfocitos T y clulas NK).
Los mecanismos inmunolgicos de regulacin de la respuesta inmune pueden operar a nivel
central en los rganos linfoides primarios (mdula sea y timo) o a nivel perifrico en los rganos
linfoides secundarios o en los distintos rganos y
tejidos. Durante el reordenamiento gnico y la diferenciacin celular que conducen a la generacin
de linfocitos B (en la mdula sea) o de linfocitos
T (en el timo) se producen tanto linfocitos capaces de reconocer antgenos extraos como
linfocitos contra lo propio. Deben, por lo tanto,
ponerse en marcha mecanismos de regulacin que
permitan la expansin de los linfocitos contra lo
extrao y la eliminacin (deleccin) o la
inactivacin (anergia) de los clones linfocitarios
autorreactivos.
A nivel perifrico el desarrollo de una respuesta inmune efectiva requiere el reconocimiento de antgenos por el receptor linfocitario, seales accesorias de coestimulacin (principalmente
las interacciones CD80/CD86/CD28 y CD40/
CD40L) y el efecto regulador de diversas
citoquinas a travs de receptores especficos. Una
respuesta inmune efectiva requiere entonces la
interaccin entre distintas clulas inmunocompetentes y los mecanismos de regulacin de
esta respuesta pueden operar tanto a nivel de la
recirculacin y "homing" de las distintas clulas,
como a nivel del procesamiento y presentacin de
antgenos y la activacin, proliferacin o diferenciacin de los clones linfocitarios especficos. A
nivel de la recirculacin y "homing" de las distintas subpoblaciones celulares, los mecanismos de
regulacin operan a travs de la expresin de receptores especficos en el endotelio vascular de
los ganglios linfticos o en distintos tejidos no
linfoides y la expresin de ligandos especficos
expresados en las distintas subpoblaciones celulares inmunocompetentes. Un ejemplo clsico, es
la molcula PSLG-1, receptor de P-Selectina
(CD62P), expresada slo en linfocitos Th1 lo que
permite a estas clulas migrar preferencialmente
a ciertos tejidos (por ejemplo a piel inflamada).
En general, los mecanismos de regulacin de
la respuesta inmune a nivel perifrico implican la
interaccin entre distintas subpoblaciones celulares
(linfocitos B, linfocitos T y clulas NK; macrfagos

y clulas dendrticas para la presentacin antignica
y clulas accesorias como neutrfilos, eosinfilos,
basfilos y mastocitos), la secrecin de mediadores solubles (citoquinas, leucotrienos y
prostaglandinas), la activacin de linfocitos T supresores, la regulacin idiotpica (red idiotipo-antiidiotipo) y el "feedback" por anticuerpos.
3.2. Delecin y anergia clonal. Tolerancia
inmunolgica
Durante la diferenciacin de linfocitos T en
el timo, se ponen en marcha una serie de eventos
que aseguran la exclusin allica del receptor T
y la seleccin de linfocitos T capaces de reconocer fragmentos peptdicos en asociacin con molculas MHC de clase I o de clase II en la superficie de clulas del epitelio tmico o de clulas
dendrticas (seleccin positiva) al tiempo que se
eliminan (deleccin) o inactivan (anergia) aquellos linfocitos autorreactivos que reconocen con
alta avidez y afinidad los antgenos propios (seleccin negativa) (ver captulo 13). La afinidad
del receptor TCR, del correceptor CD4 o CD8, de
las molculas MHC y de otras molculas de adhesin, as como la concentracin del pptido, parecen fundamentales para determinar la avidez de
la interaccin entre el linfocito T y la clula presentadora del antgeno. Experimentos utilizando
ratones transgnicos han permitido demostrar que
existe una correlacin entre la especificidad del
receptor TCR por molculas de MHC de clase I o
de clase II y el desarrollo o maduracin de
linfocitos CD8 o CD4, respectivamente. Adems
ratones mutantes deficientes en la expresin de
molculas MHC de clase I debido al "knock out"
del gen de la 2 microglobulina o del gen TAP, no
contienen clulas CD8, mientras ratones deficientes en molculas de clase II contienen muy pocos
linfocitos CD4. As y de acuerdo con el modelo
instructivo de diferenciacin, la unin coordinada de la molcula MHC de clase I con el receptor
TCR y con el correceptor CD8, inhibe la expresin de CD4 en los linfocitos T doble positivos
(CD4+ y CD8+) originando linfocitos citotxicos
T CD8+, mientras la unin coordinada de la molcula de clase II con TCR y el correceptor CD4
inhibe la expresin de CD8 para dar origen a
linfocitos Th CD4. En contraposicin a este modelo instructivo se ha planteado un modelo
estocstico de diferenciacin que postula que la
inhibicin en la expresin de CD4 o CD8 es al
280
Sin ttulo-2
280
5/26/06, 10:26 AM
azar e independiente de la especificidad de TCR

por la molcula MHC de clase I o de clase II, de
manera que slo aquellos linfocitos doble positivos en los que TCR y el correceptor reconocen la
misma molcula MHC podrn diferenciarse en
linfocitos T CD4 o linfocitos T CD8.
Eventos de seleccin positiva y negativa ocurren tambin durante la diferenciacin de
linfocitos B en la mdula sea para la expansin
de los clones linfocitarios B maduros (que expresan IgM e IgD) capaces de reconocer antgenos
extraos al tiempo que se eliminan aquellos clones
inmaduros (slo expresan IgM) que unen con avidez antgenos propios multimricos o
multivalentes de superficie o se inactivan aqullos que unen antgenos solubles oligovalentes (ver
captulo 13). Aun cuando linfocitos T y linfocitos
B utilizan distintos genes para generar el receptor
antignico y presentan requerimientos estructurales y funcionales distintos para reconocer el
antgeno, los mecanismos generales de diferenciacin en el rgano linfoide primario son similares y en ambos casos se produce deleccin o
anergia de los clones linfocitarios autorreactivos.
Los individuos resultan as, especfica y naturalmente tolerantes a sus propios antgenos.
Ahora bien, la tolerancia producida por la
deleccin o anergia clonal, puede ocurrir tanto a
nivel central como a nivel perifrico (dependiendo de si el autoantgeno se expresa en los rganos linfoides primarios o en la periferia) y es el
resultado del reconocimiento antignico en condiciones tales que la unin al receptor linfocitario
no conduce a la activacin celular sino ms bien
a su eliminacin o inactivacin debido a la ausencia de las seales adecuadas de coestimulacin
o a la puesta en marcha de un programa de muerte celular o apoptosis. Durante el desarrollo de
una respuesta humoral y luego del "switching"
isotpico (o cambio isotpico de la cadena pesada de la inmunoglobulina) e hipermutacin
somtica del receptor BCR en el centro germinal,
slo aquellos linfocitos B que han desarrollado
un receptor con alta afinidad por el antgeno sern positivamente seleccionados para continuar
su diferenciacin en clulas plasmticas o en clulas memoria, mientras el resto muere por
apoptosis.
Por ltimo es importante sealar que la tolerancia no slo puede ser inducida contra lo propio
por deleccin o anergia de clones linfocitarios
autorreactivos, sino tambin contra lo extrao
mediante diversos mecanismos de supresin de la
respuesta inmune celular y/o humoral. As, las

clulas presentadoras de antgeno, y linfocitos T
y linfocitos B especficos, pueden ser destruidos
por citotoxicidad directa mediada por linfocitos T
citotxicos o clulas NK, por citotoxicidad dependiente de anticuerpos (ADCC) o funcionalmente
inactivados por accin de mediadores solubles
como prostaglandinas y diversas citoquinas. Adems es posible encontrar, tanto a nivel perifrico
como a nivel central, linfocitos con una muy baja
densidad de su receptor o una escasa afinidad del
mismo, de manera tal que cuando se encuentran
con el antgeno, simplemente no se activan o lo
ignoran completamente (ignorancia antignica).
3.3. Activacin de linfocitos T supresores
Durante el desarrollo de una respuesta inmune pueden muchas veces activarse distintas
subpoblaciones de linfocitos T reguladores que
inhiben linfocitos T o linfocitos B especficos para
el antgeno, y actan por lo tanto como linfocitos
T supresores. La forma como se activan estos
linfocitos T supresores y los mecanismos utilizados para inhibir el desarrollo de una respuesta inmune celular y/o humoral no estn an definidos
y son todava materia de controversia, pero s est
claro que la mayora de estas clulas T supresoras
son linfocitos T CD8+ y slo una pequea fraccin corresponden a linfocitos T CD4+.
Los linfocitos T supresores pueden inhibir el
desarrollo de una respuesta inmune mediante 3 mecanismos distintos. El primero implica citolisis por
contacto directo con liberacin de perforina y
granzimas A y B, que activan la cascada de las
caspasas y conducen a la apoptosis de la clula
blanco (linfocitos T, linfocitos B especficos o
cualquier clula que presente antgenos a estos
linfocitos). El segundo se basa en la expresin
aumentada de FasL (CD95L), que inicia la muerte programada por agregacin de Fas (CD95) y
activacin de va de las caspasas en la clula blanco. Finalmente, el tercer mecanismo implica la
secrecin de citoquinas citotxicas como TNF y
linfotoxina TNF. Los linfocitos T supresores
(CD4 o CD8), pueden secretar adems citoquinas
que inhiben la respuesta inmune, como ocurre con
TGF- (que inhibe la activacin y proliferacin
de clulas NK y linfocitos T y) , con IFN (que
inhibe linfocitos Th2 y el "switching" isotpico
hacia IgE en linfocitos estimulados por IL-4) y
con IL-4 e IL-10 (que inhiben linfocitos Th1 y la
activacin de macrfagos).
281
Sin ttulo-2
281
5/26/06, 10:26 AM
dades infecciosas por bacterias, virus, hongos o

parsitos y la produccin de IL-12 o de IL-4, luego de la estimulacin inicial del sistema inmune,
parece un evento crucial en la diferenciacin de
linfocitos Th1 o Th2 a partir de T CD4+ precursores (linfocitos Thp) que slo secretan IL-2. Luego
de la estimulacin inicial por el antgeno,
macrfagos y clulas dentrticas secretan IL-12,
activando clulas NK y promoviendo la produccin IFN. Altos niveles de esta citoquina, producidos por clulas NK y/o linfocitos T, actan
sobre linfocitos Thp favoreciendo la diferenciacin hacia Th1, al tiempo que inhiben la produccin de citoquinas que favorecen la diferenciacin
de Th2 (IL-4, IL-10) (figura 14-1). El efecto beneficioso de la respuesta Th1 es, al menos en parte, mediada por la secrecin de IFN que tiene
efecto antiviral directo, promueve la citotoxicidad
de clulas NK y linfocitos T citotxicos (LTc) y
activa la capacidad destructiva de macrfagos estimulando la produccin de radicales superxidos,
xido ntrico y proteasas.
La fuente inicial de IL-4 para la diferenciacin de linfocitos Th2 no est claramente definida, pero la evidencia experimental sugiere que
linfocitos TABNK1.1 (clulas TNK), linfocitos
T- y mastocitos y basfilos son capaces de secretar esta citoquina.
El desarrollo de una respuesta con exclusin
de la otra (Th1 versus Th2), parece tener efectos
importantes en la susceptibilidad o resistencia a
diversas infecciones y la supresin de las funciones efectoras que se observa en infecciones crnicas, es a menudo el resultado de la produccin
diferencial de citoquinas en etapas tempranas de
la misma. En ratones, la induccin de una respuesta
Th1 tiene un efecto protector contra el parsito
Leishmania major, lo que no ocurre contra el parsito Trichuris muris, donde la respuesta protectora es de tipo humoral y por lo tanto activada por
Th2. Por otro lado, la infeccin experimental con
Leishmania major induce una respuesta protectora de tipo Th1 en los ratones de la cepa resistente
CBA/J, mientras los ratones de la cepa susceptible Balb/c desarrollan una respuesta Th2 y mueren rpidamente durante la infeccin. Estos resultados sugieren que el desarrollo de una respuesta
Th1 o Th2 es de alguna manera dependiente del
repertorio gentico del individuo y la inoculacin
de IL-12 en los ratones susceptibles Balb/c inhibe
el desarrollo de una respuesta Th2 y los ratones se
hacen resistentes a la infeccin experimental con
Leishmania major.
3.4. Regulacin mediante linfocitos Th1 y Th2

Los linfocitos T "helper" (Th) cumplen un rol fundamental en el desarrollo y la regulacin, tanto de
la respuesta inmune celular, como de la respuesta
humoral. Luego del reconocimiento antignico y
la estimulacin por IFN o por IL-4, los linfocitos
T CD4+ pueden diferenciarse en linfocitos Th1 o
linfocitos Th2, respectivamente. Los linfocitos Th1
secretan predominantemente IL-2, IFN y
linfotoxina (TNF-) que activan macrfagos y son
los principales efectores de la inmunidad celular
contra patgenos intracelulares y de las reacciones de hipersensibilidad retardada. Los linfocitos
Th2 en cambio, secretan principalmente IL-4, IL5, IL-6, IL-9, IL-10 e IL-13 (tabla 14-1) y son los
inductores de los altos niveles de IgG e IgE, de la
eosinofilia, de la citotoxicidad mediada por
eosinfilos y de la activacin de mastocitos.
Tabla 14-1. Citoquinas producidas por

distintas subpoblaciones de linfocitos T.
CITOQUINA
Th1
Th2
T CD8
IFN
IL-2
TNF
TNF
GM-CSF
IL-3
IL-4
IL-5
IL-6
IL-10
IL-13
++
++
++
++
++
++
-
+
+
++
++
++
++
++
++
++
+/+
++
++
+
-
La induccin de una respuesta Th1 y la produccin de IL-2 e IFN inhibir el desarrollo de

una respuesta Th2, mientras la activacin de
linfocitos Th2 y la secrecin de IL-4 e IL-10 inhibir
el desarrollo de una respuesta Th1. Sin embargo,
tanto linfocitos Th1 como linfocitos Th2 colaboran
en el desarrollo de la respuesta humoral y promueven el "switching" a diferentes subclases de IgG:
en el ratn Th2 promueve el cambio a IgG1 e IgE y
Th1 promueve el cambio a IgG2a.
El desarrollo de una respuesta Th1 o Th2 es
fundamental en la evolucin de diversas enferme-
282
Sin ttulo-2
282
5/26/06, 10:26 AM
cientes en IL-10 (pero producen altos niveles de

IL-12 e IFN) mueren por dao tisular caracterizado por infiltrado celular y necrosis, y no por una
infeccin descontrolada.
Ahora bien, puesto que la respuesta inmune
contra diversas enfermedades infecciosas parece
estar determinada por la particular combinacin
de citoquinas secretada por los linfocitos Th, se
ha sugerido que la incapacidad para controlar la
evolucin de una enfermedad infecciosa es muchas veces el resultado de una respuesta inmune
inapropiada o aberrante y no de una respuesta insuficiente. As una respuesta inflamatoria Th1 que
tiene indiscutibles efectos beneficiosos en el control de diversos microorganismos, es tremendamente nociva si se pone en marcha contra
antgenos propios y, en muchos casos de enfermedades autoinmunes rgano-especficas, la activacin de una respuesta inmune Th1 desempea
un rol fundamental en la patognesis de la enfermedad. As ocurre en la tiroiditis autoinmune, la
esclerosis mltiple, la enfermedad de Crohn, la
artritis reumatoide y la diabetes mellitus tipo I, de
manera que cualquier intento de inhibicin de la
respuesta Th1 o la administracin de citoquinas
como IL-4 e IL-10 que inhiben la respuesta Th1,
puede tener enorme impacto en la prevencin o
tratamiento de estas enfermedades. Por el contrario, en cuadros atpicos (como la fiebre de heno,
el asma bronquial y la dermatitis atpica) y en el
lupus eritematoso sistmico (LES) en los que una
respuesta humoral dependiente de linfocitos Th2
parece estar involucrada en la inmunopatognesis
de la enfermedad, el tratamiento debe estar orientado a la inhibicin de esa respuesta Th2. Se describe una subpoblacin de LT CD4+ denominados Tr1 o Th3, que sintetizan IL-10,TGF- y pequeas cantidades de IFN pero no IL-4. Se ha
estudiado el papel regulador de estas clulas en el
epitelio intestinal; es probable que estn
involucradas en la regulacin de la respuesta inmune frente a la flora intestinal normal y por otro
lado, alteraciones en relacin a estas clulas podran estar involucradas en patologas como la
Enfermedad de Crohn, donde existe una respuesta celular exagerada.
Figura 14-1. Diferenciacin de linfocitos Th1 y Th2. (A)

Macrfagos y clulas dendrticas (CPA) procesan y presentan
antgenos en el contexto de molculas MHC de clase II a
linfocitos T precursores (Thp) y secretan IL-12 activando clulas NK y produciendo IFN que favorece la diferenciacin
de linfocitos Th1 a partir de los linfocitos Thp que slo secretan
IL-2. Los linfocitos efectores Th1 secretan predominantemente
IL-2, IFN y TNF con efecto antiviral directo (IFN) y activacin de una respuesta celular mediada por linfocitos T
citotxicos y macrfagos activados. (B) La presentacin
antignica en el contexto de molculas MHC de clase II a
linfocitos Thp y la estimulacin por IL-4 (producida por
linfocitos CD4 NK 1.1+, linfocitos T o mastocitos) favorecen la diferenciacin hacia linfocitos Th2 que estimulan la respuesta inmune humoral promoviendo la sntesis y secrecin
de IgE y eosinoflia.
En general las infecciones parasitarias se asocian con frecuencia a la estimulacin de una de

las subpoblaciones Th1 o Th2. As una respuesta
Th2 con elevados niveles de IgE y una marcada
eosinofilia es caracterstica de las infecciones por
helmintos como Toxocara, Filaria y Schistosoma.
De manera similar las infecciones por protozoos
como Toxoplasma, Trypanosoma y Plasmodium
estn asociadas a inmunidad celular y fenmenos
de hipersensibilidad retardada que son activados
por una respuesta Th1.
La regulacin de la respuesta Th1 por IL-10
es fundamental para evitar los efectos nocivos de
una respuesta celular aberrante. As, ratones normales son resistentes y sobreviven a la infeccin
con Toxoplasma gondii, mientras ratones
genticamente manipulados para hacerlos defi-
3.5. Regulacin idiotpica o red idiotipo-antiidiotipo

El desarrollo de respuesta inmune contra un
antgeno conduce a la proliferacin o expansin
de clones linfocitarios T o B antgeno especficos
283
Sin ttulo-2
283
5/26/06, 10:26 AM
y a la sntesis y secrecin de anticuerpos especficos. El receptor de estos linfocitos (TCR o BCR)

y los anticuerpos sintetizados pueden luego activar linfocitos capaces de reconocer determinantes antignicos o idiotopos de la porcin variable
del receptor linfocitario o del anticuerpo antgenoespecfico (figura 14-2), poniendo en marcha un
mecanismo de control idiotpico o red idiotipoanti-idiotipo que regular la activacin de los
clones linfocitarios antgeno-especficos y determinar la evolucin de la respuesta contra el
antgeno original.
dos en el sitio de combinacin del receptor (son

por lo tanto "imgenes internas" o similares al
eptopo antignico original) y aqullos que reconocen idiotopos ubicados por fuera del sitio de
combinacin, en el dominio variable del receptor
linfocitario.
Los receptores antignicos de los linfocitos
T (TCR), de los linfocitos B (BCR) o las molculas de inmunoglobulina se encuentran en niveles
muy bajos durante el periodo neonatal y seran
por lo tanto, incapaces de poner en marcha mecanismos de tolerancia a la estructura idiotpica propia del dominio variable del receptor linfocitario.
En el repertorio linfocitario de un individuo pueden, por lo tanto, encontrarse linfocitos T y/o
linfocitos B, capaces de reconocer idiotopos y de
originar una respuesta anti-idiotpica contra todos
los idiotopos de ese receptor. De esta manera la
regulacin idiotpica del sistema inmune controlara el repertorio linfocitario disponible para activacin por un antgeno y, en ltimo trmino, estara involucrada en el desarrollo de inmunidad o
de tolerancia a diversos antgenos. El aislamiento
de anticuerpos neonatales, de baja afinidad y elevada multirreactividad con diversos antgenos e
idiotipos linfocitarios, que se producen de manera natural en ausencia de estimulacin antignica
evidente, y la existencia en el suero normal humano de anticuerpos anti-idiotpicos de clase IgG
que reaccionan o reconocen anticuerpos naturales
parecen apoyar la participacin de la red idiotipoanti-idiotipo en el control del repertorio
linfocitario.
Los idiotopos son entonces estructuras nicas de la porcin variable de un receptor
linfocitario o de un anticuerpo. El conjunto o la
suma de todos los idiotopos de un receptor
linfocitario particular constituye el idiotipo de ese
receptor o de esa molcula de inmunoglobulina.
En consecuencia una respuesta anti-idiotpica estar dirigida contra todos los idiotopos de un receptor linfocitario o de una molcula de anticuerpo e incluir a todos y cada uno de los linfocitos T
y linfocitos B anti-idiotpicos que han sido
especficamente activados.
Figura 14-2. Regulacin idiotpica. La red idiotipo-antiidiotipo incluye tanto: (A) linfocitos B o anticuerpos que
reconocen idiotopos en el receptor de un linfocito T o de un
linfocito B como (B) linfocitos T cuyo receptor reconoce
pptidos idiotpicos de un receptor T o de una inmunoglobulina
presentados en el contexto de una molcula MHC, por una
clula presentadora de antgeno o por un linfocito B que procesa su propio receptor BCR.
Durante el reordenamiento gnico y la diferenciacin celular que ocurren en el timo o en la

mdula sea, para la generacin de las distintas
poblaciones linfocitarias, existe una muy baja probabilidad de originar linfocitos con la misma secuencia y especificidad en su receptor TCR o BCR,
pero s pueden generarse linfocitos cuyo receptor
reconoce o tiene especificidad por la regin variable del receptor de otro linfocito T o linfocito
B. La secuencia aminoacdica de la regin variable del receptor linfocitario constituye, por lo tanto, una estructura nica y seala la individualidad
de cada linfocito T o linfocito B y las diferencias
que existen entre los determinantes antignicos o
idiotopos de los distintos receptores, tienden a
concentrarse en las regiones hipervariables de los
mismos. Adems los anticuerpos anti-idiotpicos,
que reconocen idiotopos de un receptor linfocitario
o de una molcula de inmunoglobulina, pueden
separarse en los que reconocen idiotopos ubica-
3.6. Regulacin o "feedback" por anticuerpos

y complejos inmunes
La administracin pasiva de anticuerpos especficos contra un antgeno puede regular la respuesta inmune estimulando o inhibiendo el desa-
284
Sin ttulo-2
284
5/26/06, 10:26 AM
rrollo de la respuesta humoral y/o celular dependiendo del isotipo de los anticuerpos administrados. La administracin pasiva de IgM por ejemplo, puede estimular la sntesis de anticuerpos contra el antgeno favoreciendo el procesamiento y
presentacin del antgeno por fagocitos profesionales que incorporan los complejos antgeno-anticuerpo por la va de receptores Fc, o poniendo
en marcha un mecanismo de regulacin idiotpica
que amplifica la respuesta contra el antgeno. La
administracin pasiva de anticuerpos IgG en cambio, tiende a inhibir el desarrollo de la respuesta
inmune debido probablemente a:
d) La unin, la regin Fc de los anticuerpos que

forman parte de complejos inmunes al receptor Fc de linfocitos T, promueve la puesta en
marcha de mecanismos de supresin de la
respuesta inmune.
En clnica la administracin de inmunoglobulina intravenosa representa un tratamiento de
primera lnea en pacientes con inmunodeficiencia
humoral y es un agente inmunomodulador alternativo o complementario en pacientes con desrdenes inflamatorios sistmicos y enfermedades
autoinmunes (tabla 14-2), en los cuales suprime,
previene o retarda las manifestaciones clnicas. Los
efectos de la administracin de inmunoglobulina
intravenosa se manifiestan a distintos niveles y a
travs de distintos mecanismos de accin como el
bloqueo de receptores Fc en macrfagos
esplnicos, la neutralizacin de autoanticuerpos
circulantes, inhibicin del dao mediado por complemento y la modulacin de la sntesis y secrecin de citoquinas inflamatorias (tabla 14-3).
a)
La neutralizacin de eptopos especficos y

la eliminacin del antgeno, lo que evidentemente conduce a la remocin del estmulo
antignico necesario para activar diversas
subpoblaciones linfocitarias.
b) La activacin de un mecanismo de regulacin
idiotpica que inhibe el desarrollo de la respuesta inmune.
c) La unin de complejos inmunes que contienen antgenos multideterminantes inhibir la
activacin de los linfocitos B antgeno-especficos debido a que la doble seal de reconocimiento generada por la unin simultnea del
antgeno al receptor linfocitario por una parte
y la unin del dominio Fc del anticuerpo a receptores Fc por la otra, impide la generacin
de segundos mensajeros indispensables para
la activacin linfocitaria (figura 14-3).
Tabla 14-2. Enfermedades autoinmunes y

cuadros inflamatorios sistmicos en los que se
ha mostrado efecto benfico de
inmunoglobulina intravenosa.
Prpura trombocitopnico idioptico

Neutropenias autoinmunes
Anemias hemolticas autoinmunes
Eritroblastopenia autoinmune
Enfermedad de von Willebrand
Sndrome de Kawasaki
Dermatomiositis
Artritis reumatoide
Polimiositis
Sndrome de Gillain-Barr
Miastenia gravis
Esclerosis mltiple
Diabetes mellitus insulino dependiente
Colitis ulcerativa
Enfermedad de Crohn
Figura 14-3. Regulacin o "feedback" por anticuerpos o

complejos inmunes. La doble seal de reconocimiento generada por la unin simultnea al receptor linfocitario y a receptores Fc, de complejos inmunes formados en fase fluida, impide la generacin de segundos mensajeros indispensables para
la activacin linfocitaria. Mientras el antgeno multiepitpico
del complejo se une al receptor linfocitario, el dominio Fc de
anticuerpos del mismo complejo se une a un receptor Fc,
inactivando al linfocito B.
285
Sin ttulo-2
285
5/26/06, 10:26 AM
Tabla 14-3. Mecanismos de accin de la inmunoglobulina intravenosa
Bloqueo de receptores Fc en macrfagos esplnicos

Unin de fragmentos C3b y C4b e inhibicin del dao por complemento
Modulacin de la sntesis y secrecin de citoquinas inflamatorias
(IL-1, IFN, TNF).
Neutralizacin anti-idiotpica de autoincuerpos circulantes
Modificacin de la solubilidad, clearance y propiedades inflamatorias
de los complejos inmunes
Neutralizacin de superantgenos y toxinas (Sndrome de Kawasaki)
Regulacin idiotpica de linfocitos B y linfocitos T
trado que la PGE2 induce la apoptosis en clulas T

inmaduras (doble positivas TCD4+/CD8+) y en
clulas T maduras inactivas, pero inhibe la
apoptosis de clulas T maduras y activadas. En
este ltimo caso se ha observado que disminuye
la expresin del mRNA que codifica FAS-L (FAS
ligand). La PGE2 favorece adems la produccin
de IL2, IL-5 e IL-10 (respuesta Th2), probablemente mediada por AMPc, e inhibe la produccin
de IFN e IL-2 (respuesta Th1).
En los linfocitos B, la PGE2 induce apoptosis
de las clulas inmaduras, pero no en las clulas
maduras. Por otra parte, en linfocitos B estimulados con LPS e IL-4, la PGE2 estimula la produccin de la IgG1 e IgE, en desmedro de la produccin de IgG3 e IgM, mediante un mecanismo dependiente de AMPc
En clulas presentadoras de antgeno
(CPA) de tejidos perifricos, la PGE2 activa CPA
profesionales (clulas dendrticas, macrfagos),
pero una vez que stas han migrado a los rganos
linfoides secundarios, su maduracin y por tanto
su capacidad de presentar antgenos, son inhibidas
por PGE 2. Tambin se ha observado que en
macrfagos, la PGE2 inhibe la sntesis de TNF,
IL-1, IL-8 e IL12.
3.7. Regulacin por Prostaglandinas

Las prostaglandinas son pequeas molculas lipdicas que regulan numerosos procesos orgnicos, incluyendo funcin renal, agregacin
plaquetaria, liberacin de neurotransmisores y
modulacin de la respuesta inmune. En respuesta
a un estmulo inflamatorio, la produccin de
prostaglandinas se inicia con la Fosfolipasa A2 que
libera cido araquidnico desde los fosfolpidos
de membrana. El cido araquidnico es luego
transformado en endoperxidos cclicos (PGH2)
por accin de la Cicloxigenasa (Cox-1 y Cox-2).
La Cox-1 se expresa constitutivamente en la mayora de los tejidos y acta en procesos de regulacin mucosa; Cox-2, en cambio, es una enzima
inducible involucrada en los procesos de regulacin de la inflamacin. Prostaglandina sintetasas
especficas transforman PGH 2 en distintas
prostaglandinas (PGI2, PGF2, PGD2 y PGE2 ) que,
una vez liberadas de las clulas, actan cerca de
su sitio de produccin unindose a receptores de
membrana especficos. De la PGD2 deriva la molcula 15-d PGJ2 que es producida por diversas
clulas.
3.7.1. Prostaglandina E2 (PGE2)

La PGE2 es producida por diversas clulas
(incluyendo fibroblastos y macrfagos) y ejerce
su accin unindose a uno o varios de los receptores: EP1 EP2 EP3 EP4.
En linfocitos T, la PGE2 inhibe la proliferacin de linfocitos T helper y T citotxicos y
an cuando el mecanismo de accin no est bien
establecido, se ha sugerido que inhibira la liberacin de Ca2+ intracelular y la actividad de la
tirosina kinasa p59. Por otra parte, se ha demos-
Esta prostaglandina es producida por diversas clulas (mastocitos, clulas T, plaquetas y

macrfagos alveolares) y deriva de la PGD2. Se
desconoce su mecanismo de ingreso a las clulas,
pero probablemente lo hace a travs de un mecanismo activo o por una molcula transportadora
aninica.
En linfocitos T y linfocitos B la
prostaglandina 15-d PGJ2 inhibe la proliferacin
286
Sin ttulo-2
286
5/26/06, 10:26 AM
celular e induce apoptosis. En neutrfilos, esta

prostaglandina inhibe la produccin de radicales
libre de oxgeno y en macrfagos se ha descrito
que inhibe la produccin de sintetasa de xido ntrico (NOS), de TNF y de IL-1, mediante un
mecanismo que involucra la inhibicin de diversas quinasas.
LECTURAS SUGERIDAS
Aste-Amezaga, M., et al., "Molecular mechanisms
of the induction of IL-12 and its inhibition by IL10 ", The Journal of Immunology, 160: 59365944,1998.
Cobbold, S. and Waldmann, H. "Infectious Tolerance", Current Opinion in Immunology, 10:518524, 1998.
Finkelman, F., et al., "The role of IL-13 in helminth-induced inflammation and protective immunity against nematode infections", Current Opinion in Immunology, 11:420-426, 1999.
Groux, H. and Powrie, F., "Regulatory T cells and
inflammatory bowel disease", Immunology Today,
10: 442-445, 1999.
Kalinski, P., et al., "T-cell priming by type-1 and
type-2 polarized dendritic cells: the concept of a
third signal", Immunology Today, 12:561-567,
1999.
Medzhitov, R. and Janewey Jr., C., "Innate Immunity ", The New England Journal of Medicine,
343:338-344, 2000.
Noben-Trauth, N., et al., "Conventional, naive
CD4+ T cells provide an initial source of IL-4
during Th2 differentiation", The Journal of Immunology, 165: 3620-3625, 2000.
Sarah, G., et al., Prostaglandins as modulators of
immunity, Trends in Immunology, 23(3):143-150,
2002.
Von Andrian, U. and Mackay, C., "T-cell function
and migration", The New England Journal of
Medicine, 343:1020-1033, 2000.
287
Sin ttulo-2
287
5/26/06, 10:26 AM
288
Sin ttulo-2
288
5/26/06, 10:26 AM

Captulo 15
NEUROINMUNOLOGA
Hugo Folch V., Miguel Barra M. y Patricio Esquivel S.
1. Introduccin
2. Interacciones entre el sistema nervioso central, sistema endocrino y sistema inmune
2.1. Inervacin de los rganos linfoides
2.2. Existencia de un eje Sistema nervioso central-hipfisis-sistema inmune
2.3. El SNC tiene "conocimiento" de la
entrada de antgeno al organismo y
responde a l
2.4. El sistema inmune produce hormonas
2.5. El sistema inmune tiene receptores
para hormonas y neuropptidos
2.6. Otras seales derivadas del sistema
inmune tienen efecto en el sistema
neuroendocrino
3. Resultante de la interaccin del sistema nervioso, sistema endocrino y el
sistema inmune: evidencias en el organismo vivo que demuestran su efecto en la respuesta inmune
3.1. Efecto del "stress" en la respuesta

inmune
3.2. Depresin e inmunidad
3.3. Efecto de los factores sociales en la
respuesta inmune
3.4. Las drogas psicoactivas alteran el
funcionamiento del sistema linfoide
3.5. Las hormonas sexuales modulan la
respuesta autoinmune
4. Algunos casos en que el sistema inmune origina cambios o trastornos en el
sistema nervioso
4.1. Efecto de los anticuerpos a nivel del
sistema nervioso
4.2. Efecto de complejos antgeno-anticuerpo en el sistema nervioso central
4.3. Rol patognico de linfocitos T,
macrfagos y citoquinas en el tejido nervioso
289
Sin ttulo-2
289
5/26/06, 10:26 AM
290
Sin ttulo-2
290
5/26/06, 10:26 AM
RESUMEN
El funcionamiento del sistema inmunolgico depende de mltiples factores que regulan
cada uno de los eventos, tanto celulares como moleculares, que se ponen en marcha en el momento de la entrada del antgeno. Los factores que condicionan la respuesta inmune pueden
clasificarse en intrnsecos, los que se originan en el propio sistema inmune, y en factores extrnsecos que provienen del medio interno del organismo, alguno de los cuales se encuentran condicionados por el entorno en que el individuo desarrolla su actividad. De los factores reguladores
externos al sistema inmune, el sistema neuroendocrino juega un papel preponderante.
El sistema neuroendocrino influye sobre el sistema inmune directamente mediante la
inervacin de los rganos linfoides, los productos del eje hipotlamo-hipofisiario y otras hormonas o neuropptidos, para los cuales los linfocitos tienen receptores especficos. Por otro lado,
los linfocitos producen hormonas y neuropptidos, que junto con las citoquinas que induce el
estmulo antignico, pueden ser percibidos por el sistema nervioso central y modificar su actividad.
La demostracin de la interaccin de los sistemas neuroendocrinos e inmunolgico, permiten explicar el efecto inmunodepresor producido por circunstancias que inducen "stress", factores sociales adversos, consumo de drogas psicoactivas o las hormonas sexuales, entre otras.
1.
hesin expresadas en su superficie, citoquinas y

anticuerpos y por otro, elementos ajenos al sistema inmune, pero que condicionan el medio interno
en el cual se desarrolla la respuesta inmune:
citoquinas secretadas por clulas que no pertenecen al sistema inmune, temperatura, nutrientes, pH,
vitaminas, hormonas y neuropptidos; elementos
stos que, a su vez, sufren la influencia de factores
ajenos al individuo (figura 15-1).
Esta visin integradora del sistema inmune,
lo hace aparecer como interdependiente del resto
del organismo, contrapuesta con la posicin sostenida hasta no hace mucho tiempo, en que se consideraba al sistema inmune prcticamente como
autnomo. Probablemente uno de los avances ms
significativos del ltimo tiempo, haya sido el poner en evidencia la interdependencia del sistema
nervioso central (SNC), sistema endocrino y sistema inmune, que establecen una red interactiva
que regula y condiciona fuertemente la respuesta
inmune. Este aspecto queda demostrado por la
existencia de receptores en la membrana de
linfocitos para neurotransmisores y hormonas, se
sabe que los linfocitos producen hormonas y que
existen clulas del sistema neuroendocrino que
producen citoquinas que hasta hace poco eran atribuidos slo al sistema linfoide (figura 15-2).
INTRODUCCIN
El sistema inmune puede ser considerado

como un rgano sensorial capaz de reconocer estmulos no cognoscitivos como bacterias, virus y
tumores, mientras que el sistema nervioso central
reconoce estmulos cognoscitivos clsicos: qumicos, fsicos y emocionales. Los sistemas inmune, nervioso central y neuroendocrino
interactan a travs de la liberacin de citoquinas
y hormonas con un circuito de retroalimentacin.
En este circuito la va aferente est representada
por el sistema inmune que informa al sistema nervioso central y estimula el eje hipotlamohipofisiario-adrenal a travs de la liberacin de
productos de linfocitos activados.
La respuesta inmune, elemento efector elaborado especficamente frente a un antgeno, depende de una gran cantidad de factores, que pueden
englobarse en aquellos dependientes del medio interno del organismo y aquellos dependientes del
medio externo. Entre los factores del medio externo cabe destacar temperatura ambiental, radiacin
solar, ciclos estacionales, ciclo da-noche, etc. Entre los factores del medio interno destacan, por un
lado, los elementos propios del sistema inmune
como linfocitos T, linfocitos B, molculas de ad-
291
Sin ttulo-2
291
5/26/06, 10:26 AM
Figura 15-1. Algunos de los aspectos ms relevantes que condicionan el accionar de clulas B, T y macrfagos. stos se
encuentran divididos en 3 categoras: (a) los factores reguladores que provienen del propio sistema inmune, ( b) factores externos
al sistema linfoide, provenientes del medio interno del organismo y (c) elementos externos al individuo que juegan un rol en la
respuesta inmune actuando sobre el sistema linfoide o el medio interno.
Figura 15-2. Interaccin entre el sistema neuroendocrino y el sistema inmune. El esquema muestra cmo adems de las
funciones propias cada uno de estos dos sistemas homeostticos pueden producir linfoquinas, hormonas y neuropptidos y que las
clulas de ambos, tienen receptores para estos factores de regulacin.
que asegura que las respuestas inmunes e

inflamatoria estn en armona con otras funciones del organismo. Estos sistemas usan similares
ligandos y receptores para establecer una comunicacin fisiolgica intra e intersistema, lo que
juega un papel relevante en la homeostasis. As,
2. INTERACCIONES ENTRE EL SISTEMA

NERVIOSO CENTRAL, SISTEMA ENDOCRINO Y SISTEMA INMUNE
El sistema inmune est constantemente
interactuando con el sistema neuroendocrino lo
292
Sin ttulo-2
292
5/26/06, 10:26 AM
no slo las hormonas clsicas pueden ser producidas por clulas del sistema inmune, sino que una
variedad de citoquinas (originalmente descritas
como producidas por monocitos y linfocitos) son
sintetizadas y liberadas por una variedad de glndulas endocrinas y tejido nervioso. Adems, receptores especficos para estas molculas pueden
encontrarse en los sistemas inmune y neuroendocrino. A continuacin se desarrollar brevemente algunos expuestos de esta interaccin:
que mediante sus productos de secrecin puede

actuar directamente sobre las clulas del sistema
inmune o activar a glndulas perifricas del sistema endocrino como tiroides, suprarrenales o
gnadas, cuyos productos hormonales a su vez
pueden actuar sobre el sistema linfoide. La estrategia ms usada para poner en evidencia la existencia de este eje regulatorio es la lesin selectiva en determinadas reas del SNC o de la hipfisis.
Al respecto se ha demostrado que la destruccin
selectiva del hipotlamo anterior reduce la
celularidad del timo y bazo, deprime la respuesta
proliferativa de las clulas T a mitgenos, disminuye la actividad NK (de clulas natural killer),
induce una baja en la produccin de anticuerpos e
inhibe el "shock" anafilctico. Se puede concluir
as, de estos experimentos, que el hipotlamo anterior tiene la capacidad de influir la respuesta
inmune tanto celular como humoral. La hipofisectoma, a su vez, produce una baja en la celularidad
de la mdula sea, una discreta anemia y una involucin tmica. En animales que presentan
hipfisis hipofuncional, el bazo y los ndulos
linfticos se presentan atrofiados. En general los
reportes coinciden en que la hipofisectoma reduce la respuesta inmune celular y humoral.
Por otra parte, experimentos de diferenciacin de clulas T in vitro han demostrado que
cocultivos de explantes hipotalmicos (regin
medio basal), con hipfisis y timo representan un
eje de accin que culmina con la diferenciacin
de clulas de mdula sea en clulas Thy1+. Este
efecto opera a travs del lbulo anterior de la
hipfisis y es dependiente de la presencia de
hipotlamo, lo que indica la produccin por parte
de esta estructura nerviosa de factores reguladores que actuaran sobre hipfisis la cual a su vez
liberara factores que actuando sobre timo inducen a sus clulas para liberar hormonas tmicas,
responsables finales de la diferenciacin de clulas T. En el eje de diferenciacin de clulas T descrito antes (hipotlamo-hipfisis-timo) se ha demostrado que la hipfisis participa liberando
prolactina (PRL) e IL-6 que seran, al menos parcialmente, responsables de la liberacin de hormonas tmicas en esta glndula linfoide.
Estudios in vivo, demuestran que la administracin de extractos hipotalmicos provenientes de
animales jvenes, restauran los niveles de timulina
circulante en animales viejos, en los cuales esta
hormona es inexistente. Adems, estos animales
viejos que presentan una respuesta inmune T dependiente disminuida, cuando reciben extractos
2.1 Inervacin de los rganos linfoides

Los rganos del sistema inmune estn conformados por un estroma de clulas y fibras organizadas en una red tridimensional, que da soporte a las diferentes poblaciones celulares directamente involucradas en la respuesta inmune. Las
clulas del sistema inmune son en su mayora mviles, dispuestas en compartimentos y sujetas a sbita proliferacin o extensos procesos de muerte
programada producto de la estimulacin
antignica. En la cintica de estos procesos la
inervacin del estroma juega un papel importante: el anlisis de los neurotransmisores que contienen los axones de un rea en particular de tejido linfoide, ha permitido demostrar en sus terminaciones norepinefrina, neuropptido Y, substancia P, el pptido relacionado con el gen de la
calcitonina y el pptido intestinal vasoactivo.
Todas estas substancias son vasoactivas y como
tales pueden modificar el flujo sanguneo local,
influyendo de esta forma en el trfico celular. Por
otra parte, tambin se ha descrito una accin directa de estas substancias de origen nervioso sobre los linfocitos, derivado del hecho de que estas
clulas tienen receptores especficos para la mayora de dichos productos. Su accin sobre la clula linfoide se traduce en la elevacin de los niveles intracelulares de segundos mensajeros, lo
que con seguridad contribuye a la estimulacin
linfocitaria y a la generacin de una respuesta inmune compartamentalizada. Esto ltimo se deriva de la diferente inervacin que es posible observar en reas T, reas B o zonas de interaccin celular T-B como la zona marginal del bazo.
2.2 Existencia de un eje Sistema nervioso central-hipfisis-sistema inmune
La literatura provee mltiples evidencias
sobre la existencia de circuitos reguladores que se
originan en el SNC y lo conectan con la hipfisis,
293
Sin ttulo-2
293
5/26/06, 10:26 AM
hipotalmicos provenientes de ratones jvenes,

presentan una respuesta T de niveles tan altos como
los detectados en el animal joven. Esto indicara
que el "envejecimiento" del sistema inmune sera
ms bien responsabilidad del hipotlamo como
elemento regulador central.
Se sabe que la hipfisis libera una serie de hormonas bien conocidas, cuya secrecin se encuentra bajo la influencia de factores hipotalmicos. De
las hormonas hipofisiarias conocidas, PRL y hormona del crecimiento (GH) parecen jugar papeles
importantes en la estimulacin de la funcin inmune. Por otra parte, la hormona adreno-corticotrofina
(ACTH) tambin aparece involucrada, jugando
generalmente un papel inhibitorio de la respuesta
inmune, ya que estimula la secrecin de
glucocorticoides (ver tabla 15-1).
Adicionalmente, se ha demostrado que la secrecin hipofisiaria de otros factores de crecimiento e interleuquinas, tambin tienen influencia en
el desarrollo de la respuesta inmune (figura 15-3).
su estimulacin va linfoquinas que, mediante la

interaccin con su receptor neuronal son capaces
de activar las clulas del sistema nervioso, directa
o indirectamente, generando un efecto estimulatorio de cascada en un sistema de neuronas
interconectadas. Al respecto, existen evidencias
que el lipopolisacrido bacteriano induce la liberacin de interleuquinas en estructuras del sistema nervioso y de la hipfisis, siendo esa una seal importante de entrada de antgenos bacterianos
al organismo.
2.4 El sistema inmune produce hormonas
Antiguos experimentos de Pierpaoli, demostraron que ratones enanos hipo-hipofisiarios podan mejorar en parte sus severos trastornos
endocrinos, si eran transfundidos con linfocitos
singeneicos de animales normales, dando pie para
pensar que las clulas inmunes eran capaces de
producir algunas hormonas. Ms tarde pudo ser
demostrado que leucocitos perifricos de animales infectados con virus o bacterias producen
ACTH y endorfinas, idnticas a las producidas
en la adenohipfisis. Igual cosa se ha demostrado para linfocitos T estimulados con superantgeno estafiloccicos, los que producen
tirotrofina (TSH), GH y gonadotrofina corinica
(GC). Adicionalmente, en lneas celulares tanto
2.3 El SNC tiene "conocimiento" de la entrada de antgeno al organismo y responde a l

Se sabe que el proceso de inmunizacin induce, a nivel del SNC, por un aumento de las descargas elctricas en regiones discretas del
hipotlamo. Esto probablemente, es derivado de
Tabla 15-1. Modulacin de la respuesta inmune por hormonas hipofisiarias

Hormona
Efecto Modulador
Corticotropina
Sntesis de anticuerpos
Produccin de IFN-
Crecimiento de clulas B.
Endorfinas
Sntesis de anticuerpos.
Actividad de clulas NK.
Tirotropina
Aumenta sntesis de anticuerpos.

Comitognico con ConA.
Hormona del crecimiento (GH)
Clulas T citotxicas.
Aumenta respuesta inmune.
Hormona luteinizantes (LH) y

Hormona folculo estimulante (FSH)
Produccin de citoquinas.
Prolactina (PRL)
Aumenta respuesta inmune.

Induce receptores a IL-2
294
Sin ttulo-2
294
5/26/06, 10:26 AM
Figura 15-3. Esquema de interacciones positivas (+), negativas (-) o de ambos tipos () que ocurren entre hipotlamo-hipfisis y
glndulas endocrinas, hipotlamo, hipfisis y glndulas endocrinas con el timo, accin de las hormonas tmicas sobre los linfocitos
perifricos, efecto de hormonas provenientes de las diferentes glndulas endocrinas y de neuropptidos ya sea origen central o
provenientes de terminaciones nerviosas perifricos, sobre los linfocitos maduros y posible accin de productos de linfocitos
sobre estructuras nerviosas y endocrinas.
la metenkephalina sobre la funcin T. En efecto,

receptores opioides de alta afinidad han sido identificados en lneas celulares linfoides de diferente
origen.
En la tabla 15-2 se presenta un resumen de
los receptores para algunas hormonas y
neuropptidos en clulas linfoides.
B como T se ha demostrado la presencia de

mRNA para la mayora de las hormonas conocidas. Tambin se ha demostrado que las clulas
nodrizas del timo, son capaces de producir
oxitocina y vasopresina, pudiendo as, postularse
para el sistema inmune una funcin en la modulacin del sistema endocrino y ms an su fortificacin directa en el "concierto endocrino" del
organismo.
2.6 Otras seales derivadas del sistema inmune con efecto en el sistema neuroendocrino
2.5 El sistema inmune tiene receptores para

hormonas y neuropptidos
El estudio de elementos del sistema inmune que

pueden afectar el sistema nervioso, sirviendo de
comunicadores entre ambos sistemas, se ha centrado en las citoquinas, elementos clsicos de
comunicacin dentro del sistema inmune. Al respecto se sabe que IL-1 aumenta los niveles de
ACTH y corticosterona en el torrente sanguneo de ratas y ratones, actuando directamente
sobre la hipfisis y paralelamente estimulando
La real comunicacin de hormonas y

neuropptidos con las clulas linfoides, necesita
de la demostracin de receptores para estas substancias. As, las primeras evidencias de la existencia de receptores opioides en la membrana de
los linfocitos, surgieron de la demostracin del
efecto inmuno-modulador que posee la morfina y
295
Sin ttulo-2
295
5/26/06, 10:26 AM
la produccin de factor liberador de

corticotrofina (CRF) en el hipotlamo.
Adicionalmente, IL-1 induce una hipofuncin
de la glndula tiroides. Por otro lado, IL-6 y
TNF (Factor de necrosis tumoral) aumentan los
niveles de ACTH y junto con INF- se ha demostrado afectan los mecanismos reguladores del sueo a nivel del SNC. En la tabla 15-3
se presenta el efecto de diferentes citoquinas en
el sistema neuroendocrino.
LH, Hormona luteinizante
Otros mensajeros inmunolgicos potenciales
son serotonina e histamina producidos en grandes
cantidades en determinados procesos inmunes.
Fuera de los mediadores sealados existen mltiples otras substancias generadas en el sistema inmune, candidatos a ejercer funciones parecidas y
cuyo efecto especfico espera ser demostrado.
Tabla 15-2. Receptores para hormonas y neuropptidos en clulas linfoides

Pptido
Clulas que presentan receptores
Corticotropina
Linfocitos T y B
Enkefalinas
Linfocitos T y B
Endorfinas
Linfocitos T y B
Tirotropina
Linfocitos T
Hormona del Crecimiento
Linfocitos T
Prolactina
Linfocitos T, B y macrfagos
Oxitocina
Timocitos
VIP
Linfocitos T
Somatostatina
Linfocitos T y B
Sustancia P
Linfocitos T
Tabla 15-3. Efecto de citoquinas en el sistema neuroendocrino

Hormonas Neuroendocrinas
Citoquina
ACTH
TSH
PRL
GH
LH
IL-1
IL-2
IL-6
IFN-
Nd
TNF
Nd
E, Estimula; I, Inhibicin; O, Sin efecto; Nd, No determinado.

ACTH, Hormona adrenocorticotrofina; TSH, Tirotrofina; PRL, Prolactina; GH, Hormona del crecimiento;
296
Sin ttulo-2
296
5/26/06, 10:26 AM
plasmticos que se produce por esta va. Sin embargo, reconociendo su importancia, parece ser que
los efectos inmunolgicos del "stress" no obedecen slo a esa causa, ya que cuidadosos estudios
en animales adrenalectomizados con la correspondiente terapia de reemplazo, han dado resultados
controversiales.
3. RESULTANTE DE LA INTERACCIN
DEL SISTEMA NERVIOSO, SISTEMA
ENDOCRINO Y EL SISTEMA INMUNE:
EVIDENCIAS EN EL ORGANISMO
VIVO QUE DEMUESTRAN SU EFECTO
EN LA RESPUESTA INMUNE
Al considerar al organismo como un todo, y
mediante la evaluacin de parmetros inmunolgicos se hace evidente los efectos que los sistemas nervioso y endocrino tienen sobre el sistema
linfoide. Sobresalen al respecto los efectos del
stress, de factores sociales, de drogas psicoactivas y de las hormonas sexuales.
3.2 Depresin e inmunidad

La depresin mayor es un cuadro de bastante frecuencia. Est estrechamente asociado al
stress considerndose como una respuesta exagerada a l desde el punto de vista biolgico y clnico. La depresin se acompaa de cambios
neuroendocrinos, particular y notoriamente un
aumento en la actividad del eje hipotlamohipfisis adrenal. Por otra parte las manifestaciones de la depresin incluyen cambios en las funciones vegetativas tales como sueo, apetito y
otras. Dado que hay muchas evidencias que las
citoquinas estn involucradas en la mayora de
estas caractersticas de la depresin, es altamente
probable su participacin independiente del papel
de otros neurotransmisores.
3.1 Efecto del "stress" en la respuesta inmune

En el hombre es conocido el efecto depresor
que, sobre el sistema inmune, tienen los cambios
en las relaciones interpersonales de los individuos.
Ejemplos clsicos en este aspecto son el fallecimiento de uno de los cnyuges o el divorcio. El
efecto del "stress" crnico, como el de una familia que cuida a alguno de sus miembros afectados
de demencia, o individuos que sufren diversos
grados de depresin, tambin es detectado por el
sistema inmune cuyos parmetros generales, en
estos casos, estn bajo la mediana de una poblacin normal. Los individuos bajo condiciones
estresantes presentan, en general, un mayor riesgo a contraer enfermedades virales y representan
un grupo de riesgo en relacin a la ocurrencia de
neoplasias. Los hallazgos ms recurrentes en estos casos son una pobre respuesta blastognica de
los linfocitos perifricos, alteracin de la relacin
de los linfocitos T CD4+/CD8+ y una baja notable en el nmero de las clulas NK.
En animales, el efecto depresor del "stress"
en el sistema inmune ha sido probado mediante
un aumento de la morbilidad y mortalidad por
neoplasias inducidas o trasplantadas.
Los animales sometidos a "stress" presentan,
igual que en el hombre, alteraciones importantes
en la respuesta de sus linfocitos a mitgenos, una
marcada disminucin del nmero relativo de las
clulas NK en los rganos linfoides perifricos y
alteraciones en las clulas macrofgicas, que demuestran una menor capacidad fagoctica y una
baja capacidad germicida intracelular.
Los efectos descritos tienden a explicarse, a
menudo, por el efecto estimulador que tiene el
"stress" sobre el eje hipotlamo-pituitaria-glndula
suprarrenal y al aumento de los corticoides
3.3 Efecto de los factores sociales en la respuesta inmune

En la especie humana se correlacionan positivamente con una buena respuesta inmune: una
buena calidad de vida, un entorno social agradable y una familia bien avenida. Esta correlacin
positiva aumenta si a esta condicin se adiciona
un buen estatus socio-econmico y un alto nivel
de educacin.
Estudios en roedores demuestran, por otra parte, que el tamao del grupo, su composicin y grado de hacinamiento influyen en forma importante
en la respuesta inmune. Tambin el aislamiento o
la privacin del contacto materno en los primeros
das de vida inducen cambios medibles en la maduracin del sistema inmune. Ms an, animales
mantenidos en un grupo cerrado muestran diferencias en sus parmetros inmunolgicos de acuerdo
a la jerarqua social que ocupan en la colonia.
Como corolario de esto, se puede suponer
que los factores sociales que rodean a cada individuo influyen en su resistencia a las enfermedades infecciosas, crecimiento de neoplasias y enfermedades autoinmunes, an cuando este punto
requiere mayor investigacin.
297
Sin ttulo-2
297
5/26/06, 10:26 AM
ductos de la respuesta inmune celular:
3.4 Las drogas psicoactivas alteran el funcionamiento del sistema linfoide
4.1 Efecto de los anticuerpos a nivel del sistema nervioso
Es conocido que los opiceos, la cocana y la

marihuana adems de su efecto estimulatorio para
el SNC, ejercen un efecto depresor de diversos
parmetros inmunolgicos. En general, los fumadores crnicos de marihuana al igual que los animales de experimentacin que recibieron 9tetrahidrocananbinol, uno de sus principios
psicoactivos ms potentes, demuestran importantes alteraciones en el sistema macrofgico, una
reducida respuesta blastognica de los linfocitos
T y B, un bajo porcentaje de clulas NK y baja
produccin de IL-2 e IFN. Los efectos de la cocana parecen ser an ms pronunciados.
Los anticuerpos unidos a receptores de membrana de la clula nerviosa pueden bloquear, estimular o alterar la funcin de estas estructuras. Pueden, ms an, inducir lisis celular a travs de la
activacin de la cascada del complemento, y junto con esto mediante la accin de sus sub-productos moleculares puede amplificar y diversificar los efectos de la noxa primaria. Adicionalmente
los anticuerpos dirigidos contra estructuras
intracelulares pueden bloquear el transporte axonal
y causar otros trastornos en las clulas nerviosas.
3.5 Las hormonas sexuales modulan la respuesta autoinmune
4.2 Efecto de complejos antgeno-anticuerpo

en el sistema nervioso central
El hecho que para la mayora de las enfermedades autoinmunes, el gnero ms afectado sea
el femenino, tanto en el hombre como en los animales de experimentacin, permite suponer que
las hormonas sexuales juegan un papel importante en la patognesis de estas enfermedades. Esta
nocin se refuerza cuando se constata que el embarazo o el climaterio cambia a menudo en las
mujeres el curso de la enfermedad autoinmune.
En animales experimentales la gonadectoma o la
administracin de esteroides gonadales permite
demostrar claramente el papel inmuno-regulador
de estos compuestos, el que puede ser ejercido directamente sobre las diversas subpoblaciones
linfocitarias o a travs del efecto modulador que
estas substancias tienen sobre la glndula tmica.
El depsito de complejos inmunes a nivel de

vasos sanguneos cerebrales, plexo corodeo y
neuronas, al activar la cascada del complemento
altera la barrera hemato-enceflica y los productos bioactivos del complemento, al igual que en el
caso anterior, pueden producir inflamacin y dao
tisular local.
4.3 Rol patognico de linfocitos T, macrfagos
y citoquinas en el tejido nervioso
La inmunidad celular, que a menudo tiene
como blanco componentes de la mielina o directamente constituyentes de las clulas neuronales,
pueden generar infiltrados linfocitarios y/o
monocticos con una alta produccin local de
citoquinas, que en suma producen destruccin o
alteracin del tejido nervioso circundante.
4. ALGUNOS CASOS EN QUE EL SISTEMA

INMUNE ORIGINA CAMBIOS O TRASTORNOS EN EL SISTEMA NERVIOSO
LECTURAS SUGERIDAS
Por ltimo, pero no menos importante para
la vida de los individuos, es posible afirmar que
una respuesta inmune persistente como la que se
da en las enfermedades autoinmunes o en las infecciones virales crnicas pueden alterar profundamente el funcionamiento del SNC, causando
cambios en el comportamiento de hombres y animales, estados de letargo y an demencia.
Los agentes desencadenantes de estos cuadros neurolgicos parecen ser fundamentalmente
tres: anticuerpos que dan reaccin cruzada con
estructuras del cerebro, complejos inmunes y pro-
Adder, R, Felten, D. and Cohen, N. (Eds.)

Psychoneuroimmunology, second edition,
Academic Press Inc., 1991.
Immune-neuroendocrinology, special issue,
Immunol Today, 15: 503-552, 1994.
Goetzl, E., Adelman, D.C. and Sreedharan, S.P.
Neuroimmunology. Advances in Immunology
48: 161-184, 1990.
298
Sin ttulo-2
298
5/26/06, 10:26 AM

Captulo 16
INMUNIDAD DE MUCOSAS
Ulises Vergara C. e Ivn Palomo G.
1. Introduccin
2. Sistema inmune de mucosas
2.1. Organizacin estructural
2.2. Transporte y presentacin de
antgenos
3. Funciones efectoras de la inmunidad de mucosas
3.1. Respuesta inmune de anticuerpos
3.2. Respuesta inmune celular
4. Inmunizacin a travs de mucosas
4.1. Uso de adyuvantes
5. Tolerancia inducida a travs de
mucosas
299
Sin ttulo-2
299
5/26/06, 10:26 AM
300
Sin ttulo-2
300
5/26/06, 10:26 AM
RESUMEN
El compartimiento ms conocido del sistema inmune es el sistmico, sin embargo el compartimiento epitelial que agrupa los tejidos linfoides asociados a la piel, mucosas y glndulas
secretoras, tiene tambin gran importancia.
El tejido linfoide asociado a mucosas (MALT) se ubica en mucosas de los tractos
gastrointestinal, genitourinario y respiratorio. En los tractos intestinal y respiratorio son muy
importantes las clulas M, especializadas en el transporte de antgenos desde el epitelio que
tapiza los folculos linfocitarios, a los sitios de induccin de la respuesta inmune. All se encuentran clulas dendrticas, que capturan y procesan los antgenos para ser presentados a los linfocitos
T (LT).
La respuesta inmune de mucosas puede ser de tipo humoral y/o celular. En el primer caso
tiene una fundamental participacin la IgA de secrecin. La inmunidad celular, por su parte,
junto con participar en la eliminacin de microorganismos a travs de LT especficos, proporciona seales accesorias de coestimulacin para la diferenciacin de linfocitos B.
En este captulo, adems, se describe las caractersticas que tiene la inmunizacin a travs
de mucosas y las diferencias que sta presenta respecto de la inmunizacin va sistmica.
mariamente de isotipo IgA, que previenen la

entrada de agentes patgenos a travs de mucosas.
La respuesta inmune sistmica puede eliminar de
manera muy efectiva las infecciones sistmicas,
pero generalmente falla en la proteccin de las
superficies mucosas. As, el desarrollo de una activa respuesta inmune local, es esencial para la
prevencin de la mayora de las enfermedades infecciosas.
Las mucosas del tracto respiratorio y
gastrointestinal estn continuamente expuestas a
una gran variedad de antgenos y macromolculas,
pero un nmero muy limitado de ellas entran al
organismo y causan enfermedad.
Las barreras epiteliales representan la primera
lnea de defensa contra el ambiente externo, rico
en potenciales patgenos. Sin embargo, el tejido
linfoide asociado a distintos epitelios difiere en
su organizacin celular y en las estrategias utilizadas en la captura y presentacin de antgenos,
no slo para proporcionar resistencia a distintos
agentes infecciosos, sino tambin para distinguir
entre agentes dainos y substancias inocuas. Esto
es particularmente importante en el tracto digestivo, donde respuestas no deseadas contra antgenos
alimentarios o contra la flora intestinal, puede conducir a alergias alimentarias, inflamacin y otros
problemas.
1. INTRODUCCIN
Desde un punto de vista estructural, el sistema inmune puede separarse en dos compartimientos distintos y finamente regulados: (i) el compartimiento sistmico, que incluye a la mdula
sea, bazo y ganglios linfticos y (ii) el compartimiento epitelial, que incluye tejido linfoide asociado a la piel, las superficies mucosas y glndulas secretoras (glndulas lagrimales, glndulas
salivales y glndulas mamarias).
Cada compartimiento incluye tanto clulas
asociadas a la respuesta inmune humoral, como
aqullas asociadas a la respuesta inmune celular.
Sin embargo la naturaleza y propiedades de la
respuesta inmune son distintas en cada compartimiento. As, la inmunizacin a travs de las
mucosas resulta frecuentemente en la estimulacin
tanto de una respuesta a nivel de mucosas, como
de una respuesta sistmica. La inmunizacin
parenteral, en cambio, slo induce una respuesta
sistmica, sin activacin del sistema inmune asociado a mucosas. Los anticuerpos asociados al
compartimiento sistmico son principalmente de
isotipo IgG, cuya funcin se asocia, generalmente, a la neutralizacin de agentes patgenos en el
torrente circulatorio. Los anticuerpos asociados al
compartimiento epitelial, son por el contrario, pri-
301
Sin ttulo-2
301
5/26/06, 10:26 AM
Aun cuando la produccin de anticuerpos

polimricos (particularlmente IgA) constituye un
componente claramente importante del sistema
inmune de mucosas, la respuesta IgE est tambin
asociada a la exposicin a antgenos a travs de
las mucosas (alergenos). Alergias alimentarias y
asma son ejemplos comunes de reacciones mediadas por IgE en las mucosas. Adems, existe una
subpoblacin de linfocitos que residen en los
epitelios (linfocitos intraepiteliales) y pueden constituir la primera lnea de defensa contra infecciones en las mucosas, cumpliendo tanto funciones
efectoras citotxicas como funciones reguladoras
de la respuesta inmune. Las clulas citotxicas son
particularmente importantes en la proteccin contra infecciones virales que son comunes en las
superficies mucosas.
Por ltimo, la incorporacin oral de antgenos
puede inducir una tolerancia perifrica antgenoespecfica, conocida como tolerancia oral. Esta
tolerancia oral prevendra las alergias alimentarias
y las reacciones inflamatorias contra antgenos
inocuos derivados de la microflora normal y puede tener un enorme potencial en el tratamiento de
enfermedades autoinmunes y de enfermedades
inflamatorias.
marcadamente reducidos en animales de laboratorio mantenidos en un ambiente libre de grmenes y expandidos en condiciones de elevada
estimulacin antignica.
2.1. Organizacin estructural
El tejido linfoide MALT incluye una coleccin de linfocitos y clulas accesorias ubicadas
en el epitelio y lmina propia de las mucosas asociadas a los tractos gastrointestinal, genitourinario
y respiratorio. En el tracto gastrointestinal el tejido linfoide (GALT: Gut Associated Lymphoid
Tissue), incluye las placas de Peyer, apndice y
ndulos linfoides aislados. En el tracto respiratorio, el tejido linfoide incluye el tejido linfoide asociado a nasofaringe que est constituido por amgdalas palatinas y adenoides (NALT:
Nasopharyngeal-Associated Lymphoid Tissue)
y el tejido linfoide asociado al rbol bronquial
(BALT: Bronchus-Associated Lymphoid
Tissue).
En el tracto intestinal, la barrera epitelial est
formada por una capa nica de clulas epiteliales
que contiene fundamentalmente enterocitos y clulas globosas o caliciformes productoras de
mucus. Las clulas epiteliales estn selladas por
uniones estrechas, en la regin apical de sus membranas. El tejido linfoide asociado a la mucosa
se ubica a lo largo del tracto gastrointestinal y
contiene folculos linfocitarios distribuidos individualmente o en forma de grupos que constituyen estructuras organizadas como las placas de
Peyer y el apndice. El epitelio que tapiza los
folculos linfocitarios recibe el nombre de epitelio asociado al folculo (FAE: FollicleAssociated Epithelium) y se distingue del epitelio de otros sitios del intestino, por la presencia de clulas M especializadas en el transporte
de antgenos, a los sitios de induccin de respuesta inmune en las mucosas (figura 16-1). Estas clulas pueden ocupar hasta el 10% del epitelio FAE
en las placas de Peyer de humanos y ratones y
hasta el 50% en conejos. Los enterocitos pueden tambin realizar transcitosis de
macromolculas y probablemente de partculas
inertes, pero este transporte parece muy poco eficiente en la estimulacin de una respuesta inmune, debido a que se realiza en sitios alejados del
tejido linfoide MALT.
2. SISTEMA INMUNE DE MUCOSAS

El sistema inmune de mucosas puede ser
morfolgica y funcionalmente separado en dos tipos de estructuras: (i) tejido estructuralmente organizado en la forma de tejido linfoide asociado
a mucosas (MALT: Mucosal-Associated
Lymphoid Tissue) y (ii) tejido linfoide difuso
que consiste de linfocitos intraepiteliales y clulas presentadoras de antgeno, localizados en la
lmina propia del tejido mucoso. El tejido MALT
representa las reas linfoides aferentes o
inductivas, donde se produce el encuentro con los
antgenos, su captura y procesamiento por clulas
presentadoras (clulas dendrticas subepiteliales
y macrfagos) y, una posterior y adecuada presentacin a linfocitos T y B, para el desarrollo de
una respuesta inmune efectiva. Por su parte, las
regiones de tejido difuso representan las reas
linfoides eferentes donde los antgenos entran en
contacto con clulas efectoras diferenciadas,
anticuerpos y/o clulas citotxicas. El desarrollo,
tanto del tejido linfoide estructuralmente organizado, como del tejido linfoide difuso, es altamente antgeno dependiente, de manera tal que estn
302
Sin ttulo-2
302
5/26/06, 10:26 AM
mentos celulares necesarios para inducir y regular

una respuesta inmune, pero organizados de manera
tal que facilitan el desarrollo de inmunidad. Existen
reas de linfocitos B (folculos B) que estn rodeadas por linfocitos T. Aunque los centros germinales
contienen linfocitos B en activa divisin, existen relativamente pocas clulas plasmticas en comparacin con sitios similares de ganglios linfticos y bazo.
El rea entre los folculos y el epitelio de la mucosa
intestinal es rica en linfocitos B, linfocitos T,
macrfagos y clulas dendrticas que estn estratgicamente ubicados para responder a los distintos
antgenos, bacterias o partculas transportadas a travs del epitelio mucoso especializado ubicado por
encima de las placas de Peyer.
En el tracto gastrointestinal, linfocitos activados en el tejido linfoide GALT y, probablemente
clulas presentadoras de antgeno, pueden adems
migrar a los ganglios mesentricos que drenan las
placas de Peyer, con la consiguiente expansin de
la respuesta inmune puesto que diferentes clulas
efectoras pueden ahora migrar a superficies
mucosas y otros tejidos. Clulas efectoras tal como
clulas productoras de IgA, linfocitos T helper
(LTh), linfocitos T citotxicos, linfocitos T y otras
poblaciones celulares migrarn a la lmina propia
submucosa y al epitelio de la mucosa intestinal. La
regin submucosa conocida como lmina propia,
es el sitio ms importante de produccin de
anticuerpos en las superficies mucosas y, se ha estimado que alrededor del 80% de las clulas productoras de anticuerpos estn localizadas en esta
regin de las mucosas (figura 16-2).
Figura 16-1. La estructura general del tejido linfoide asociado a mucosas es representada por el esquema de una
seccin transversal de placa de Peyer. El epitelio asociado
al tejido linfoide (FAE) tapiza los folculos linfocitarios (placas de Peyer) y se distingue del epitelio de otras regiones del
intestino, por la presencia de clulas, especializadas en el transporte de antgenos. La parte inferior de la figura, muestra un
esquema ampliado del epitelio FAE (Follicle-Associated
Epithelium) con clulas M que presentan un nmero reducido de microvellosidades irregulares en su regin apical y una
profunda invaginacin basolateral o bolsillo intraepitelial que
contiene linfocitos T, linfocitos B y eventualmente, macrfagos
o clulas dendrticas.
Las placas de Peyer, linfondulos y apndice son los mayores sitios de induccin de una respuesta inmune contra antgenos gastrointestinales
y microorganismos. Las placas de Peyer y otros
linfondulos se encuentran a todo lo largo del
tracto gastrointestinal, y en un gran nmero en
colon y recto; existen aproximadamente 15 placas de Peyer o linfondulos por cm2 en el colon y
25 por cm2 en el recto. Sin embargo, este nmero
no es estable, dado que existe una reduccin de
hasta el 50% en el nmero de placas de Peyer de
los 20 a los 50 aos de edad.
Las placas de Peyer contienen todos los ele-
Figura 16-2. Representacin esquemtica de la respuesta

inmune, en el tejido linfoide asociado a la mucosa intestinal. Antgenos o bacterias son transportados a las placas de
Peyer por transcitosis a travs de clulas epiteliales especializadas (clulas M). Clulas dendrticas capturan estos antgenos
para su procesamiento y presentacin a linfocitos foliculares.
Linfocitos activados y eventualmente clulas presentadoras de
antgeno migran luego a los ganglios linfticos que drenan las
placas de Peyer y, despus de expansin y maduracin, clones
linfocitarios migrarn a la lmina propia (linfocitos B comprometidos en la produccin de IgA) o al epitelio de la mucosa intestinal (linfocitos T citotxicos).
303
Sin ttulo-2
303
5/26/06, 10:26 AM
antignica, los linfocitos B proliferan y diferencian en clulas comprometidas en la sntesis y secrecin de IgA, IgM e IgE.
Las clulas M se caracterizan por la presencia de microvellosidades cortas, pequeas vesculas citoplasmticas y la existencia de un gran
dominio membranoso endoctico para la incorporacin de macromolculas, partculas y agentes
patgenos. Sin embargo, las clulas M son altamente selectivas y no permiten la entrada de todos los antgenos o microorganismos. As, slo
patgenos y toxinas bacterianas que pueden estimular los mecanismos de transporte intracelular,
pueden atravesar el epitelio intestinal va clulas
M, para su captura, procesamiento y presentacin
por clulas dendrticas y macrfagos alojados en
los bolsillos intraepiteliales. La cara basolateral
de las clulas M est profundamente invaginada
formando un gran bolsillo intraepitelial a travs
del cual se entregan por transcitosis macromolculas y partculas. Estos bolsillos intraepiteliales
pueden contener linfocitos B, linfocitos T y eventualmente macrfagos o clulas dendrticas (figura 16-1). De esta manera el transporte de antgenos
solubles y partculas a travs de las clulas M,
constituye el primer paso en la induccin de una
respuesta inmune en las mucosas del tracto bronquial y del tracto intestinal. Las clulas M son
adems, capaces de sintetizar IL-1 y, se ha sugerido que pueden proporcionar seales accesorias de
coestimulacin para la activacin de linfocitos T
y linfocitos B, en el tejido linfoide asociado a la
mucosa.
Las Clulas dendrticas ubicadas en la regin
subepitelial o domo de las placas de Peyer, son
probablemente las clulas ms importantes en el
procesamiento y presentacin de los antgenos
transportados a travs del epitelio y en la regulacin de la respuesta inmune humoral y celular que
pondr en marcha en el tejido linfoide asociado a
la mucosa intestinal. Las clulas dendrticas estn
fundamentalmente posicionadas para capturar y
procesar antgenos solubles transportados por las
clulas M, mientras antgenos particulados y bacterias sern fagocitados y procesados por los
macrfagos alojados en las invaginaciones de las
clulas M. Antgenos ya degradados sern luego
liberados por los macrfagos, para su captura y
presentacin por las clulas dendrticas
subepiteliales. Se produce as una colaboracin
entre clulas dendrticas y macrfagos para la induccin de una respuesta inmune protectora: los
macrfagos induciran fundamentalmente una res-
2.2. Transporte y presentacin de antgenos

La forma como los antgenos son adquiridos,
procesados y presentados por clulas profesionales, es fundamental para la induccin de inmunidad a nivel de epitelios y a nivel sistmico.
El tejido linfoide asociado a mucosas es
morfolgicamente distinto del tejido linfoide
sistmico y recibe antgenos a travs de los diversos epitelios, ms que de la circulacin linftica o
sangunea.
El epitelio estratificado de la cavidad oral,
amgdalas, faringe, esfago, uretra y vagina carece de uniones estrechas, pero la ntima asociacin
entre las clulas epiteliales y las glicoprotenas de
la matriz intercelular, determinan que los epitelios
sean impermeables a la mayora de los antgenos,
agentes infecciosos y vacunas. Protenas o
macromolculas no pueden difundir pasivamente
a travs de estos epitelios estratificados. Por lo
tanto, los antgenos son obtenidos por clulas
dendrticas que migran y se prolongan hasta el lmite exterior del epitelio para capturar antgenos
y luego presentarlos en el tejido linfoide local o
en un tejido linfoide distante.
En el tracto gastrointestinal, la induccin de
una respuesta inmune requiere que antgenos, bacterias o partculas sean transportadas desde el
lumen del epitelio hacia las placas de Peyer. La
superficie mucosa del intestino est cubierta por
una capa nica y continua de clulas epiteliales
selladas por uniones estrechas, y cubiertas por
un fuerte glicocalix formado por una capa de
glicoprotenas ancladas a las membranas celulares. Se agregan adems mucinas, enzimas digestivas, lactoferrina, lisozima, pptidos antimicrobianos e IgA secretora, como mecanismos adicionales de proteccin de las superficies mucosas,
formando una formidable barrera contra potenciales patgenos y antgenos.
En los epitelios simples del tracto intestinal
y del tracto bronquial, en los cuales los espacios
intercelulares estn sellados por uniones estrechas,
existen sin embargo, clulas epiteliales especializadas (clulas M) que por transporte transepitelial
desde el lumen, entregan macromolculas, partculas y microorganismos, directamente al tejido
linfoide asociado a la mucosa. Luego de entrar al
tejido MALT, los antgenos son rpidamente capturados y procesados por clulas presentadoras de
antgeno, tales como clulas dendrticas
subepiteliales y macrfagos, para su presentacin
a linfocitos T y B. Luego de la estimulacin
304
Sin ttulo-2
304
5/26/06, 10:26 AM
puesta Th1 con la consiguiente activacin de

linfocitos T citotxicos, mientras las clulas
dendrticas seran responsables de la induccin de
una respuesta Th2 con la consiguiente activacin
de linfocitos B y un switching isotpico (cambio de clase) preferencial hacia anticuerpos IgA
(ver captulos 6 y 14).
nado componente secretor la protege de la accin

de proteasas en las secreciones (ver captulo 6).
Luego de la activacin por el antgeno, los
linfocitos B proliferan y hacen switching
isotpico a clulas comprometidas en la produccin de IgA, las cuales eventualmente abandonan
el tejido linfoide asociado a la mucosa y migran
al sitio inicial de induccin de la respuesta inmune para su diferenciacin final en clulas
plasmticas secretoras de IgA (figura 16-3). As,
linfocitos B, comprometidos en la secrecin de
IgA, migrarn desde el tejido linfoide
nasofarngeo, al tracto digestivo alto, mientras el
tracto genitourinario recibe preferentemente clulas productoras de IgA desde el tracto digestivo
bajo. El tracto gastrointestinal recibe en cambio
clulas desde GALT.
La migracin preferencial hacia las mucosas,
de linfocitos estimulados en el tejido linfoide asociado al epitelio, se asocia claramente a la expresin de molculas de adhesin especficas en los
linfocitos y, de sus respectivos ligandos en clulas endoteliales de vasos sanguneos de tejido
mucoso y/o en clulas epiteliales de la mucosa.
La principal funcin de la IgA secretada es
mantener la integridad de las barreras mucosas de
potenciales agentes infecciosos o txicos. En el
lumen, la IgA secretada puede neutralizar virus,
toxinas bacterianas, enzimas y prevenir la entrada
de virus, la adherencia microbiana y la absorcin
de antgenos.
Durante su transporte a travs de las clulas
epiteliales de las mucosas, los dmeros de IgA
pueden unir antgenos intracelulares e inhibir el
ensamblaje de algunas partculas virales.
En la lmina propia, la IgA dimrica elimina
antgenos que cruzan la barrera epitelial, unindose a ellos y transportndolos a lumen o va
hepatocitos hacia el conducto biliar. Adems, como
consecuencia de su resistencia a la proteolisis y
alta avidez por el mucus, la IgA secretada retiene
sus capacidades de unin y transporte en las
secreciones mucosas.
Aunque la secrecin de IgA es un componente importante de la inmunidad de mucosas, la
respuesta mediadas por IgE est tambin asociada con la exposicin transmucosal a antgenos
(alergenos). Alergias alimentarias y asma, son
ejemplos comunes de reacciones mediadas por
IgE, luego de la exposicin a antgenos en las superficies mucosas. Respuestas IgE especficas, son
tambin importantes en la defensa contra enfermedades parasitarias.
3. FUNCIONES EFECTORAS DE LA INMUNIDAD DE MUCOSAS

Luego de la estimulacin antignica en los
sitios de induccin, clulas efectoras antgeno especficas, abandonan el tejido MALT va vasos
linfticos aferentes y alcanzan la circulacin sangunea va conducto torcico. Desde ah se diseminan hacia los sitios efectores de respuesta inmune, en la lmina propia y el epitelio de mucosas
de los tractos respiratorio, gastrointestinal y
genitourinario (figura 16-2).
Las clulas efectoras incluyen clulas
plasmticas productoras de IgA, clulas productoras de IgM y, eventualmente clulas comprometidas en la sntesis y secrecin de IgE. Se agregan
linfocitos efectores T de colaboracin y T
citotxicos, adems de linfocitos T y otras clulas. En adultos, alrededor del 80% de los
linfocitos B activados, se localizan en la lmina
propia. Los otros linfocitos residen en el epitelio
y se les conoce como linfocitos intraepiteliales,
que cumplen tanto funciones efectoras, como funciones inmunorreguladoras.
3.1. Respuesta inmune de anticuerpos
Una caracterstica fundamental de la inmunidad de mucosas es la produccin local de IgA,
que constituye ms del 80% de los anticuerpos en
los tejidos mucosos, en los cuales son inducidos,
transportados y regulados por mecanismos distintos de aqullos que caracterizan a la inmunidad
sistmica.
La IgA de secrecin es de primaria importancia en la defensa inmunolgica y acta no slo
en la resistencia a agentes patgenos restringidos
a mucosas, sino tambin contra microorganismos
que producen infecciones sistmicas, a pesar que
inicialmente colonizan superficies mucosas (especialmente en los tractos respiratorio o
gastrointestinal).
La IgA de secrecin corresponde a un
homodmero unido por una cadena J; el denomi-
305
Sin ttulo-2
305
5/26/06, 10:26 AM
Figura 16-3. Movilizacin de linfocitos desde sitios de induccin de la respuesta inmune en los tejidos inmunes MALT a los
sitios efectores de la respuesta inmune. Luego de la estimulacin antignica en los sitios de induccin de una respuesta inmune
en las mucosas (GALT, BAT, NALT), linfocitos activados clulas abandonan el tejido linfoide va vasos linfticos aferentes, para
alcanzar la circulacin sangunea a travs del conducto torcico. Va sistmica, los distintos clones linfocitarios pueden ahora
diseminarse a los distintos sitios efectores de la respuesta inmune (epitelio y lmina propia de mucosas y glndulas excretoras).
sadas por clulas dendrticas y/o macrfagos.

Linfocitos Th1, linfocitos Th2 o una combinacin
de ambos, parecen importantes en la mantencin
de la respuesta IgA secretada. La respuesta Th2
es importante para la diferenciacin terminal de
los linfocitos B y citoquinas como interfern
gamma (IFN-) producida por linfocitos Th1,
parece inducir la expresin del receptor de Ig
polimricas, requerido para el transporte de IgA
en las mucosas. La induccin de una respuesta Th1
es esencial en la proteccin contra patgenos
intracelulares. La respuesta Th2 en cambio, parece ms importante en la proteccin de patgenos
como Helicobacter pylori y de parsitos helmintos
y en el control de enfermedades inmunomediadas
como los desrdenes autoinmunes rgano-especficos y la enfermedad de Crohn.
3.2. Respuesta inmune celular

La induccin de una respuesta inmune efectiva a nivel de mucosas, requiere la activacin de
linfocitos T especficos, los cuales no slo contribuyen a la eliminacin de infecciones, sino tambin proporcionan las seales accesorias de
coestimulacin para la diferenciacin de linfocitos
B, en clulas productoras de IgA o IgE y la secrecin de citoquinas y quimioquinas esenciales en
el desarrollo de la respuesta inmune.
Linfocitos Th. Los LTh son mediadores cruciales
en la induccin de una respuesta inmune humoral
y/o celular a nivel de mucosas y su polarizacin
hacia linfocitos Th1 o Th2 est influenciada por
citoquinas, quimioquinas y otras molculas expre-
306
Sin ttulo-2
306
5/26/06, 10:26 AM
La subpoblacin Th2 proporciona seales accesorias de coestimulacin para la activacin de

linfocitos B y el cambio de clase hacia anticuerpos
de isotipos IgA e IgE, mediante la expresin de
molculas de adhesin y la secrecin de
citoquinas como IL-4, IL-5, IL-6 IL-10 e IL-13.
Aunque las citoquinas Th2 desempean un rol
importante en la diferenciacin de linfocitos B
comprometidos en la produccin de IgA, el factor
transformante beta (TGF-), producido por LTh1
y otras clulas, es fundamental en el switching
IgA. Desafortunadamente, TGF- tambin suprime la proliferacin de linfocitos y as, ratones deficientes en este factor, mueren como consecuencia de una masiva enfermedad linfoproliferativa
dentro de las primeras 4 semanas de vida.
La subpoblacin Th1 en cambio, se caracteriza por la secrecin de IL-12, linfotoxina, factor
estimulador de colonias granulocito-monocito
(GM-CSF) e IFN- y determina la inmunidad celular regulando la funcin de macrfagos y clulas T citotxicas, que resultan particularmente
importantes en el control de agentes patgenos
intracelulares que penetran las mucosas. Los
linfocitos Th1 estimulan adems el switching
isotpico hacia subclases de IgG, que caracteriza
la respuesta sistmica inducida como consecuencia secundaria de la activacin del sistema inmune asociado a mucosas.
Luego de su transporte a travs de clulas M,
bacterias intracelulares que afectan la mucosa del
tracto intestinal (como Salmonella), penetran en
las placas de Peyer para infectar y sobrevivir en
los macrfagos. Macrfagos infectados producirn IL-12 que promueve el desarrollo de una respuesta Th1 con la consiguiente produccin de
linfotoxina e IFN- que determinan la activacin
de los macrfagos infectados y de linfocitos T
citotxicos.
4. INMUNIZACIN
MUCOSAS
307
307
TRAVS
DE
La estimulacin adecuada del sistema inmune asociado a la mucosa es un requisito indispensable para el desarrollo de una proteccin efectiva de las superficies mucosas contra la colonizacin e invasin por diferentes agentes patgenos.
La eficacia con la cual los antgenos administrados por va oral son transportados a travs
del epitelio intestinal depende de la sobrevida de
las molculas en el ambiente hostil del tracto
gastrointestinal. El acceso a la membrana de las
clulas epiteliales es inhibido por la capa de mucus,
por el empaquetamiento apretado de las
microvellosidades y por el glicocalix celular. Todas estas estructuras en conjunto retienen diversas enzimas y crean un ambiente altamente
degradativo en la regin apical de las clulas
epiteliales y se hace, por lo tanto, indispensable
que los antgenos persistan en el lumen intestinal
el tiempo necesario para un eficiente contacto con
las clulas epiteliales y su posterior transporte
hacia el tejido MALT.
Como consecuencia de lo anterior, el desarrollo de un sistema exitoso de inmunizacin a travs de las mucosas debe cumplir una serie de requerimientos: (i) el sistema debe ser resistente al
ambiente enzimtico y hostil del tracto
gastrointestinal y debe ser capaz de guiar los
antgenos a travs de la capa mucosa hasta los sitios de induccin que contienen clulas presentadoras de antgeno para el desarrollo de una respuesta inmune efectiva y no de tolerancia, (ii) la
respuesta debe inducir inmunidad local en la mucosa (y en algunos casos en sitios efectores de
mucosas distantes), adems del desarrollo de una
fuerte inmunidad sistmica y (iii) debe activar
mecanismos efectores que incluyan la produccin
de citoquinas y el desarrollo de una respuesta local (anticuerpos IgA) y sistmica (IgG) y de una
respuesta Th1 que incluya la activacin de
linfocitos T citotxicos para la proteccin contra
agentes infecciosos intracelulares.
Se han desarrollado as, diversas estrategias
para prolongar la permanencia en el intestino de
drogas y vacunas administradas por va oral. Se
han utilizado, por ejemplo, bioadhesinas como
lectinas y adhesinas bacterianas que se unen al
mucus intestinal (muco-adhesinas) o a la regin
apical de las clulas del epitelio intestinal. De
manera similar se han desarrollado partculas sintticas como liposomas, ISCOMs (Immune
Linfocitos Tc. En la mucosa del tracto intestinal,

cerca del 80% de los linfocitos intraepiteliales
pertenecen a la subpoblacin T CD8+, en contraste a lo que ocurre en la lmina propia, donde
la mayora de los linfocitos T residentes pertenecen a la subpoblacin T CD4+.
Los linfocitos T de la subpoblacin T, puede alcanzar hasta el 50% de los linfocitos
intraepiteliales en algunas cepas de ratones; pero
en humanos los linfocitos T pueden constituir
slo cerca del 13% de los linfocitos
intraepiteliales
Sin ttulo-2
5/26/06, 10:26 AM
gnicos y requieren, por lo tanto, adyuvantes

que al ser coadministrados con los antgenos,
estimularn el desarrollo de una respuesta inmune protectora.
Los adyuvantes pueden aumentar la vida
biolgica o inmunognica de los distintos
antgenos, facilitar su transporte y captura a travs de los epitelios, estimular la produccin de
citoquinas y el desarrollo de una respuesta Th1
y/o Th2.
En la tabla 16-1 se muestra algunos
adyuvantes que se han usado con xito en diferentes modelos experimentales y utilizando
distintas vas de inmunizacin a travs de
mucosas.
Stimulating Complex) y micropartculas del

copolmero poli-DL-lactide-co-glycolide, y diversos vehculos recombinantes vivos, de origen viral
(Vaccinia, Herpes, Adenovirus, Poxvirus) o
bacteriano (Salmonella), destinados a la proteccin
de los antgenos recombinantes extraos, del ambiente hostil intraluminal del intestino. Adems la
conjugacin de antgenos con ligandos como
lectinas, adhesimas microbianas o anticuerpos, que
se unen a receptores de membrana de las clulas
M, constituyen una excelente estrategia para facilitar el transporte de antgenos a travs del epitelio.
4.1. Uso de adyuvantes
Los antgenos administrados a travs de las
mucosas, son generalmente poco inmuno-
Tabla 16-1. Adyuvantes que, coadministrados en el antgeno, estimulan

el sistema inmune asociado a mucosas
Adyuvante
Modelo experimental Ruta de inmunizacin Antgeno utilizado
Toxinas bacterianas*
Ratn
Oral o intranasal
Virus papiloma humano
Ratn
Ratn
Intranasal
Oral
Ratn
Intranasal
Protena de H. nfluenzae
Ureasa recombinante de
H. pylori
Pptido sinttico de Virus
Respiratorio Sincicial
IL-12
Ratn
Intranasal
Vacuna influenza
Toxina tetnica
Muramyl dipptido
Ratn
Rata
Oral, intranasal
Intraintestinal
Rotavirus y Virus Sendai

Porina de N. gonorrhoeae
CpG oligonucletidos
Ratn
Intranasal
Ag superficie Hepatitis B
Avridina
Ratn
Rata
Oral
Intraintestinal
Virus influenza muertos

Toxina del clera
MonofosforilLpido A
Ratn
Rata
Intraintestinal
Intraintestinal
Ovoalbmina
Toxina del clera
Almina
Ratn
Intranasal
Toxoide tetnico
MF59
Ratn
Intranasal
Subunidad de vacuna
virus influenza
Ratn
Intranasal
Protena envoltura Virus

Respiratorio Sincicial
* Toxina del clera producida por V. cholerae y Txina lbil al calor producida por E. coli.
ISCOM, Immune Stimulating Complex.
308
Sin ttulo-2
308
5/26/06, 10:26 AM
5. TOLERANCIA INDUCIDA A TRAVS DE

MUCOSAS
Chen, H., Recent advances in mucosal vaccine

development, J. Controll. Rel. 67: 117-128, 2000.
La infeccin con patgenos que afectan las

mucosas conduce generalmente al desarrollo de
una activa respuesta inmune protectora. Sin embargo, la administracin oral de antgenos solubles
puede conducir al fenmeno llamado tolerancia
oral, que se caracteriza por la ausencia de
respuesta inmune perifrica, luego de la
inoculacin sistmica del mismo antgeno.
La tolerancia oral parece afectar tanto a la
inmunidad humoral como a la inmunidad celular,
pero el tipo de respuesta tolerada parece depender
de la naturaleza del antgeno y de su forma de
ingestin. As, la respuesta celular y la respuesta
humoral mediada por IgE se hacen fcilmente
tolerantes con bajas dosis de antgeno. La
tolerancia de tipo IgM o IgG ocurre en cambio,
con altas dosis de antgeno.
La tolerancia oral puede producirse por
deleccin de clones linfocitarios, anergia clonal o
debido a una activa supresin de la respuesta inmune
producida por factores liberados por linfocitos T
(Ej.:TGF-). La tolerancia oral, mediada por anergia o deleccin clonal, se produce fundamentalmente a altas dosis de antgeno. La ingestin de
bajas dosis de antgeno, conduce en cambio a
tolerancia mediada por subpoblaciones linfocitarias
T CD4+ y T CD8+ que suprimen activamente el
desarrollo de una respuesta inmune o de una
respuesta inflamatoria.
Aun cuando la tolerancia puede constituir una
dificultad en el desarrollo de vacunas que se
administren por va oral, la habilidad de la tolerancia
oral para prevenir reacciones adversas puede
utilizarse para tratar diferentes enfermedades
inmunolgicas y/o inflamatorias, incluyendo
enfermedades autoinmunes y el rechazo al
trasplante de tejidos.
Hoyne, G. F., et al., Immunological tolerance to

inhaled antigens, Am. J. Respir. Crit. Care Med.
162: 5169-5174, 2000.
Jepson, M.A., Clark, M.A. Studying M cells in
Peyers patches of the intestine, Int. Rev. Cytol.
167: 91-159, 1998.
Kaiserlian, D., Etchart, N., Entry sites for oral
vaccines and drugs: a role for M cells, enterocytes
and dendritic cells?, Semin. Immunol. 11: 217-224,
1999.
Kraehenbuhl, J.P., Neutra, M.R., Epithelial M
cells: Differentiation and function. Annu. Rev.
Cell. Dev. Biol. 16: 301-332, 2000.
McCluskie, M.J., Davis, H.L. Mucosal immunization with DNA vaccines, Microbes and Infection 1: 685-698, 1999.
Reseigno, M., Borrow,P. The host-pathogen interaction: New Themes from Dendritic Cell Biology, Cell 106: 267-270, 2001.
Strobel, S., Mowat, A.M., Immune response to
dietary antigens: oral tolerance. Immunol. Today
19: 173-181.,1998.
Vasquez-Torres, A., Fang, F.C., Cellular routes
of invasion by enteropathogens Curr. Opin.
Immunol. 3: 54-59, 2000.
LECTURAS SUGERIDAS
Brandtzaeg, P., et al., Regional specialization in
the mucosal immune system: what happens in the
microcompartments?, Immunol. Today 20: 141151, 1999.
Brandtzaeg, P., Farstad, I.N., Haraldsen, G., Regional specialization in the mucosal immune system: primed do not always home along the same
track, Immunol Today 20: 267-277, 1999.
309
Sin ttulo-2
309
5/26/06, 10:26 AM
310
Sin ttulo-2
310
5/26/06, 10:26 AM

Captulo 17
INMUNOLOGA DE LA REPRODUCCIN
Mnica Imarai B. y Juana Villegas M.
1. Introduccin
2. El sistema inmune asociado a la
mucosa reproductiva
2.1. El sistema inmune asociado a la
mucosa reproductiva de la hembra
2.2. El sistema inmune asociado a la
mucosa reproductiva del macho
3. Induccin de la respuesta inmune
en la mucosa reproductiva
3.1. Induccin de la respuesta inmune en la mucosa reproductiva de
la hembra
3.2. Respuesta inmune a las infecciones en la mucosa reproductiva de
la mujer
4. El sistema inmune local en el embarazo

4.1. La Interfase materno fetal
4.2. Expresin de MHC en las clulas trofoblsticas
4.3. Las clulas NK de la decidua
4.4. Los linfocitos T de la decidua
4.5. Citoquinas en la preez
5. Factores inmunolgicos que afectan
la fertilidad
5.1. Aborto espontneo recurrente de
causa inexplicada
5.2. Anticuerpos antiespermticos
311
Sin ttulo-2
311
5/26/06, 10:26 AM
312
Sin ttulo-2
312
5/26/06, 10:26 AM
RESUMEN
El sistema inmune asociado a la mucosa reproductiva de los mamferos constituye la primera lnea de defensa frente a infecciones que afectan al tracto reproductor. Las clulas
inmunocompetentes presentes en la mucosa reproductiva del macho y de la hembra (incluido el
ser humano), estn constituidas por linfocitos T y B, macrfagos, clulas dendrticas, y en el
tero, por clulas pertenecientes al linaje de las clulas NK. Los microorganismos patgenos
infectan a travs de los epitelios y pueden alcanzar las clulas del estroma, en donde clulas
presentadoras como los macrfagos y clulas dendrticas inducen la respuesta inmune. Algunos
de los epitelios que expresan MHC clase II podran tambin presentar antgenos al sistema
inmune. La inmunidad humoral mediada por IgA e IgG juega un papel fundamental en la proteccin a la infeccin por algunos microorganismos como N. gonorrhoeae, mientras que para
microorganismos de infeccin intracelular como Chlamydias y virus Herpes, la inmunidad mediada por clulas (Th1), tiene una funcin importante en la eliminacin del patgeno. En los
mamferos, la capacidad del sistema inmune local de reconocer y eliminar elementos
inmunolgicamente extraos debe regularse para evitar el rechazo del feto durante el embarazo o
preez. Algunos mecanismos parecen estar relacionados con la ausencia de MHC clase II y clase
I polimrficos en el tejido fetal que se encuentra en contacto con las clulas inmunocompetentes
maternas (trofoblasto). Adems, la presencia de MHC clase I no polimrficos en el trofoblasto,
podra mantener seales inhibitorias para la poblacin NK de la decidua, que son las clulas
inmunocompetentes ms abundantes durante la preez. Por otro lado, la desviacin de la respuesta inmune hacia la activacin de clulas Th2 y la presencia de citoquinas inmunosupresoras
tambin contribuyen a mantener una relacin de tolerancia al feto. Alteraciones de esta condicin de inmunotolerancia podran generar algunas patologas del embarazo en la mujer como el
aborto espontneo recurrente y tanto en mujeres como en hombres, infertilidad mediada por
anticuerpos antiespermticos.
canismos de regulacin que llevan a la madre

a tolerar al feto, en la creencia de que este conocimiento permitir desarrollar exitosas terapias de tratamiento para la infertilidad. En este
captulo se describe el sistema inmune local
asociado a la mucosa reproductiva del macho
y de la hembra y la induccin de respuesta inmune frente a algunos microorganismos. Adems, se analiza las caractersticas del sistema
inmune local de la madre durante el embarazo
y la posible regulacin relacionada con los tejidos fetales. Por ltimo, se describe algunos
aspectos del sistema inmune local que se asocian a infertilidad.
1. INTRODUCCIN
Dos de las ms interesantes reas del conocimiento en el campo de la Inmunologa de
la Reproduccin son la respuesta inmune a las
infecciones del tejido reproductivo y la
inmunobiologa del embarazo o preez. La problemtica de las infecciones por diversos
microorganismos patgenos que producen enfermedades de transmisin sexual, entre las que
se incluye el SIDA, ha motivado el desarrollo
de la investigacin destinada a caracterizar el
sistema inmune local asociado a la mucosa
reproductiva, conocer los mecanismos de induccin de respuesta inmune local y los mecanismos de inmunidad frente a las infecciones.
Por otro lado, se ha desarrollado un creciente
inters en entender cmo opera el sistema inmune durante el embarazo y los complejos me-
313
Sin ttulo-2
313
5/26/06, 10:26 AM
los agregados leucocitarios. En el estrato funcional del endometrio, los leucocitos son linfocitos
T, macrfagos y linfocitos granulares grandes
(LGL: CD56+ CD16-). Estas clulas LGL son una
poblacin caracterstica del endometrio y pertenecen al linaje de las clulas NK. Por su parte, los
linfocitos B, clulas plasmticas y clulas NK convencionales, son muy escasos en este tejido y los
granulocitos polimorfonucleares slo aparecen
durante la menstruacin. En esta zona del
endometrio, la proporcin y distribucin de los
leucocitos vara segn la fase del ciclo (figura 171). En la fase proliferativa y secretora temprana,
los leucocitos constituyen el 10% de las clulas
totales del estroma y se encuentran ms bien dispersos en el tejido, mientras que en la fase secretora
tarda, stos constituyen ms del 20% de las clulas estromales y se encuentran agregadas, adyacentes a las glndulas y vasos sanguneos. Este
incremento se debe en gran parte al aumento de
LGL y a un pequeo aumento en el nmero de
macrfagos. Los linfocitos T, dispersos en el
estroma, epitelio glandular y superficial del
endometrio, no varan durante las fases del ciclo
menstrual.
Tal como ocurre en la mucosa gastrointestinal
y respiratoria, el sistema inmune local del tracto
reproductor responde frente a los antgenos
2. EL SISTEMA INMUNE ASOCIADO A LA

MUCOSA REPRODUCTIVA
2.1. El sistema inmune asociado a la mucosa
reproductiva de la hembra
En la hembra de especies como el ratn, la
rata y en la especie humana, los leucocitos son
componentes normales de la mucosa del oviducto, tero y vagina. Los leucocitos son linfocitos T
del fenotipo CD4+ y CD8+, macrfagos y
granulocitos, y se encuentran dispersos en el
estroma de la mucosa. Tambin se encuentran
linfocitos distribuidos en el tejido epitelial. Los
leucocitos propios de la mucosa reproductiva tambin residen en los ganglios linfticos regionales
que drenan estos rganos, pudiendo recircular a
otros tejidos mucosos (ver captulo 16).
En la mujer, el tejido linfoide del tero tiene
caractersticas que dependen del ciclo menstrual.
En el estrato basal del endometrio, que no presenta variacin con el ciclo, la poblacin leucocitaria
corresponde principalmente a linfocitos T,
linfocitos B, macrfagos y ocasionalmente clulas natural killer (NK). Los leucocitos se encuentran en agregados, generalmente adyacentes a las
glndulas y dispersos en el estroma, con excepcin de los linfocitos B que slo se encuentran en
Figura 17-1 Variacin de las poblaciones leucocitarias en el estrato funcional del endometrio durante las fases del ciclo
menstrual y embarazo temprano. La poblacin leucocitaria del endometrio aumenta en la fase secretora del ciclo menstrual.
Los leucocitos que aumentan son los linfocitos granulares grandes (LGL) y, en menor magnitud, los macrfagos.
314
Sin ttulo-2
314
5/26/06, 10:26 AM
ducen y secretan IgA en la mucosa reproductiva

de la mujer son principalmente el oviducto y el
endocervix. En el tero, las clulas plasmticas
productoras de IgA son ms bien escasas por lo
que en este rgano la IgA debe ser transportada
desde el suero. Una excepcin notoria a la generalidad de las especies es la que se observa en el
tero del ratn, donde el estroma uterino contiene
numerosas clulas plasmticas productoras de IgA,
lo que asociado a la presencia del receptor en el
epitelio indica que esta inmunoglobulina se produce localmente. No se conoce el significado fisiolgico de estas diferencias entre especies.
Aparte de las inmunoglobulinas, en los rganos reproductivos de la hembra se produce una
gran variedad de citoquinas (ver captulo 11). Las
citoquinas tienen la funcin de promover la proliferacin celular y recambio del tejido, de establecer comunicacin entre las clulas y entre los sistemas reproductivo e inmune y de regular la respuesta inmune local. Todas estas funciones son
necesarias en el tracto reproductor. En el tero de
la mujer se sintetizan en abundancia Factor
estimulador de colonias 1 (CSF-1), Factor de crecimiento epidermal (EGF), Factor de crecimiento
de fibroblastos (FGF), Factor de necrosis tumoral
(TNF-), Factor transformador de crecimiento
(TGF-), Interleuquina 1 (IL-1), Interleuquina
2 (IL-2), Interfern (IFN) y Factor transformador de crecimiento (TGF-). Algunas de las funciones propuestas para estas citoquinas son el reclutamiento de macrfagos, estimulacin o inhibicin de la proliferacin, angiognesis, diferenciacin trofoblstica, desarrollo del miometrio,
funcin en la implantacin y menstruacin, etc.
Algunos de los genes que codifican para estas
secretando inmunoglobulinas a la superficie mucosa. En estos sitios, la primera lnea de defensa

frente a las infecciones son las inmunoglobulinas.
En la mucosa reproductiva de la mujer, las
inmunoglobulinas estn presentes en el fluido
oviductal, secrecin uterina, moco cervical, fluido cervico-vaginal y fluido vaginal. Las
inmunoglobulinas secretadas son del isotipo IgG
e IgA y, en menor proporcin, IgM. La IgG es
transferida desde el suero por difusin intercelular,
endocitosis de fase fluida y otros mecanismos que
en conjunto se denominan transudacin. La IgA
se produce localmente en las clulas plasmticas
del estroma de la mucosa reproductiva y se une al
receptor de inmunoglobulinas polimricas presente en la cara basal del epitelio de estos rganos.
El complejo IgA-receptor es transportado en vesculas a travs del epitelio y la inmunoglobulina
es liberada en el lumen unida a un polipptido
derivado de la protelisis del receptor. Este
polipptido se denomina componente secretor y
permanece unido a la IgA. Esta forma de
inmunoglobulina se denomina IgA secretada
(IgAs) (ver captulo 6).
La presencia de clulas plasmticas productoras de IgA y del receptor de inmunoglobulinas
polimricas (receptor Igp), no es uniforme en los
diferentes rganos del tracto reproductor de la
mujer, existiendo adems importantes diferencias
entre especies (tabla 17-1). En el oviducto,
endocervix y vagina de la mujer existen numerosas clulas plasmticas productoras de IgA, pero
el receptor Igp slo se encuentra en el epitelio
columnar simple del oviducto y endocervix y no
existe en los epitelios estratificados de la vagina y
ectocervix. Esto indica que los rganos que pro-
Tabla 17-1. Clulas plasmticas (CP) secretoras de IgA y componente secretor (CS), en el tracto
reproductor de la mujer
Especie
Humana
Ratn
Rata
Equina
Oviducto
tero
Cervix
Vagina
CP
CS
CP
CS
CP
CS
CP
CS
+
+
ND
+
+
ND
ND
-
++
+
+
+
+
+
++
+/+
+/+
+
-
+
+/+
Trazas
+
+
-
ND: no determinado
Tabla adaptada de Parr MB, Parr EL (1997)
315
Sin ttulo-2
315
5/26/06, 10:26 AM
citoquinas contienen sitios de respuesta a

estrgenos, indicando que en los rganos
reproductivos existe una relacin de regulacin
muy estrecha entre los niveles de hormonas
esteroidales sexuales y las citoquinas producidas
localmente. Los niveles de estradiol y/o
progesterona regulan la sntesis uterina de CSF-1,
EGF, FGF, TNF, TGF, IL-6 e IFN.
de experimentacin. Por lo tanto, en esta seccin

slo se describe la respuesta inmune local en el
tracto reproductor femenino.
3.1. Induccin de la respuesta inmune en la
mucosa reproductiva de la hembra
Una etapa crtica en la induccin de la respuesta inmune es la incorporacin y presentacin
de antgenos. En el tracto reproductor femenino,
el antgeno se incorpora a la mucosa a travs del
epitelio donde aparentemente no existen clulas
especializadas para ello, como son las clulas M
del intestino delgado. Donde mejor se ha descrito
este proceso es en el ratn. La incorporacin del
antgeno al epitelio en la vagina y cervix del ratn
es dependiente de los niveles de estradiol y
progesterona, de manera que sta ocurre en mayor magnitud en diestro y preez temprana. Las
protenas presentes en el tero del ratn y rata,
son endocitadas en el epitelio en perodos
progestacionales, incluyendo preez temprana y
tambin en sitios inyectados con progesterona.
Durante el estro y despus de la administracin
de estradiol no se produce incorporacin de protenas al epitelio. Las clulas epiteliales del cervix,
tero y oviducto de varias otras especies, incluyendo el humano, tambin endocitan protenas,
partculas y bacterias. En estos casos, no est claramente definida la influencia de las hormonas
esteroidales sexuales en el proceso.
Una vez que el antgeno ha ingresado al
estroma de la mucosa, las clulas presentadoras
de antgenos que infiltran el tejido (clulas de
Langerhans, clulas dendrticas y macrfagos),
pueden a su vez incorporar, procesar y presentar
el antgeno a los linfocitos de la mucosa o de los
glanglios regionales, induciendo la respuesta inmune local. Se ha postulado que las clulas
epiteliales tambin pueden procesar y presentar
antgenos. El epitelio uterino y oviductal de la
mujer y hembras de otras especies, contienen en
su superficie molculas MHC de clase II y molculas coestimuladoras como ICAM-1 e ICAM-2
(ICAM: Molcula de adhesin intercelular). Sin
embargo, hasta la fecha no hay evidencias directas que demuestren que estas clulas epiteliales
induzcan efectivamente activacin de linfocitos T
frente a un antgeno especfico.
Los estudios realizados en la mujer y en animales de experimentacin revelan que despus de
la inmunizacin local con protenas y microorganismos, se puede inducir secrecin de inmunoglo-
2.2. El sistema inmune asociado a la mucosa

reproductiva del macho
El tejido mucoso del epiddimo, de glndulas accesorias (prstata, vescula seminal y glndula bulbo-uretral) y de la uretra del hombre, contiene tambin las clulas efectoras y presentadoras del sistema inmune, tales como macrfagos,
linfocitos T CD4+ y linfocitos T CD8+. Adems,
la uretra contiene gran nmero de clulas
plasmticas productoras de IgA indicando que este
rgano, que es puerta de entrada para infecciones
por diversos microorganismos, tiene gran actividad en la respuesta inmune local.
La secrecin prosttica y lquido seminal
contienen inmunoglobulinas del isotipo IgG e IgA.
Tambin puede detectarse pequeas cantidades de
IgM en el fluido prosttico. La presencia de componente secretor asociado a la IgA indica que este
isotipo de inmunoglobulina es de origen local. La
uretra masculina tambin contribuye a la produccin local de inmunoglobulinas ya que, adems
de las clulas plasmticas productoras de IgA,
contiene el receptor Igp, presente adems en el
tejido epitelial.
Varias citoquinas son sintetizadas en el testculo y glndulas accesorias. Algunas como CFS1, IFN-, IFN-, IL-1, IL-1, TNF y TGF
podran tener funciones de regulacin de la respuesta inmune local de la mucosa reproductiva
masculina. Sin embargo, esto slo se ha demostrado en el caso de CFS-1, porque los ratones deficientes en CSF-1 knock-out, presentan ausencia o extremada disminucin de macrfagos en el
tejido reproductivo.
3. INDUCCIN DE LA RESPUESTA INMUNE EN LA MUCOSA REPRODUCTIVA

La induccin de la respuesta inmune en las
mucosas del sistema reproductor se conoce mucho mejor en el tracto reproductor de la mujer y
de las hembras de algunas especies de animales
316
Sin ttulo-2
316
5/26/06, 10:26 AM
bulinas especficas (IgA e IgG), en la mucosa

reproductiva. Esto indica que en este tejido mucoso existen todos los elementos para la presentacin y reconocimiento del antgeno. Cuando la
inmunizacin se realiza va sistmica se produce
una baja o nula respuesta en la mucosa, mientras
que la inmunizacin en otros tejidos mucosos
como el rectal y la cavidad peritoneal, produce
incluso mejores niveles de respuesta en la mucosa reproductiva. Esto se debe a que existe un sistema inmune mucoso comn, en el que las clulas
inmunocompetentes circulan y colonizan todos los
tejidos mucosos (ver captulo 16).
La induccin de respuesta inmune celular mediada por los linfocitos helper tipo Th1 (ver captulos 11 y 14) tambin ocurre en la mucosa
reproductiva de la mujer y de animales de experimentacin. Los linfocitos Th1 estimulan la activacin de macrfagos, linfocitos citotxicos y produccin de anticuerpos que activan el complemento. Estos mecanismos efectores son los ms importantes en la eliminacin y resistencia a la infeccin por microorganismos intracelulares.
de tipo celular, mediada por linfocitos Th1 y por

linfocitos T CD8+. En la respuesta de tipo humoral, se producen anticuerpos contra la protena principal de membrana externa. Las inmunoglobulinas
especficas son secretadas y se detectan en el moco
cervical de la mujer. Estos anticuerpos neutralizan la infeccin de clulas en cultivo o la infeccin de animales de experimentacin, adems, la
presencia de estos anticuerpos en las secreciones
se correlaciona con un menor nmero de
Chlamydias recuperadas desde el cuello uterino.
Esta correlacin no se produce con las
imunoglobulinas IgG e IgM especficas presentes
en el suero, sugiriendo que son los anticuerpos
producidos localmente, presentes en las
secreciones del tracto reproductor, los que estn
involucrados en la eliminacin del patgeno. Respecto a la respuesta inmune celular, se ha demostrado que tanto en la mujer como en el ratn, siendo los linfocitos Th1 los mediadores ms importantes en la eliminacin y resistencia a la infeccin por Chlamydias. Los linfocitos Th1 estimulan la activacin de macrfagos, linfocitos
citotxicos y produccin de anticuerpos que activan el complemento. Adems, estos linfocitos producen IFN- que tiene efectos citotxicos en las
clulas infectadas por Chlamydias. Se ha encontrado que animales deficientes en IFN- o que no
expresan el receptor para IFN-, eliminan ms lentamente a la bacteria. Los linfocitos T citotxicos
CD8+ tambin reconocen clulas infectadas por
Chlamydias. Sin embargo, ratones deficientes en
estos linfocitos controlan la infeccin por
Chlamydias, indicando que la deficiencia es compensada por la respuesta celular mediada por
macrfagos y por la produccin de inmunoglobulinas especficas en el tracto reproductivo del
ratn.
Neisseria gonorrhoeae infecta la mucosa del
cuello uterino y de la trompa de Fallopio de la
mujer. En este caso se ha caracterizado muy bien
la respuesta inmune humoral pero no se sabe si la
respuesta inmune celular juega un papel importante en la proteccin. En la mujer, las infecciones por esta bacteria inducen anticuerpos de los
isotipos IgA e IgG, detectables en la secrecin
cervico-vaginal. La IgA es producida localmente
por las clulas plasmticas que invaden el estroma
del endocervix y las trompas de Fallopio cuando
se produce la infeccin. El mecanismo efector de
las inmunoglobulinas es diferente segn el isotipo
y las caractersticas de la mucosa reproductiva. IgA
e IgG pueden activar el complemento presente en
3.2. Respuesta inmune a las infecciones en la

mucosa reproductiva de la mujer
Los microorganismos que producen infecciones de transmisin sexual, como Neisseria
gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis, virus Herpes simplex 2 y otros virus que producen infecciones sistmicas como el virus de la inmune deficiencia humana (HIV), hepatitis B y hepatitis C,
infectan la mucosa del tracto reproductor del hombre, de la mujer y de animales de experimentacin. La infeccin involucra unin, invasin,
replicacin y transporte de los patgenos al tejido
subepitelial, donde normalmente inducen respuesta inmune local. En esta seccin, se describe a
modo de ejemplo algunas caractersticas de la respuesta inmune local, que se produce frente a los
tres microorganismos que infectan con mayor frecuencia el tracto reproductor de la mujer:
Chlamydia trachomatis, Neisseria gonorrhoeae y
virus Herpes simplex 2. En el hombre la respuesta
inmune a la infeccin ha sido mucho menos estudiada y no se describe en esta seccin.
Chlamydia trachomatis infecta el cuello uterino de la mujer y ocasionalmente asciende al
endometrio y la trompa de Fallopio. La persistencia de la infeccin puede llegar a producir
salpingitis e infertilidad. La respuesta inmune a la
infeccin es de tipo humoral, sistmica y local, y
317
Sin ttulo-2
317
5/26/06, 10:26 AM
la secrecin cervical que durante la infeccin por

N. gonorrhoeae se encuentra activado y unido a
la bacteria. La opsonizacin mediada por IgG promueve la fagocitosis por neutrfilos, mientras que,
IgA funciona principalmente neutralizando una
variedad de molculas y de esta manera inhibiendo
la unin de la bacteria a los epitelios y la infeccin. Adems, los complejos inmunes formados
por IgA y antgeno estimulan la produccin de
secrecin mucosa, lo que contribuye a impedir el
acceso del patgeno desde el canal cervical a la
cavidad uterina.
El virus Herpes simplex 2 infecta la mucosa
oral y reproductiva del ser humano. Despus de
la infeccin primaria se localiza en los ganglios
sensoriales desde donde puede reinfectar la mucosa. Como respuesta a la infeccin por virus
Herpes simplex 2 se producen IgG e IgA sricas
que reconocen glicoprotenas de la envoltura y
cpside viral. En las secreciones cervicales, se
observa una respuesta IgG, IgA e IgM de especificidad similar a la de las inmunoglobulinas
sricas. El papel que estas inmunoglobulinas juegan en proteccin no est claro, sin embargo, estos anticuerpos diluidos pueden bloquear in vitro
la infeccin de clulas epiteliales, indicando que
in vivo se encuentran en concentracin suficiente
como para proteger de la infeccin. La concentracin de IgA producida localmente se ha
correlacionado con la disminucin de partculas
virales recuperadas del tracto reproductor de la
mujer, sugiriendo que esta inmunoglobulina estara involucrada en la eliminacin del virus. La infeccin de la mucosa reproductiva por virus Herpes simplex 2 produce estimulacin de linfocitos
T CD4+ Th1 y de linfocitos T citotxicos (CD8+)
en la mujer y en ratones. Estos linfocitos se encuentran en las lesiones y en los ndulos linfticos
regionales y transferidos a animales no inmunes,
producen proteccin de la infeccin.
induccin de tolerancia inmune al feto.

4.1. La interfase materno fetal
Una caracterstica fundamental de la preez
de los mamferos es la formacin de la placenta,
el rgano que permite la interrelacin entre la
madre y el feto en desarrollo. El desarrollo de la
placenta involucra una serie de eventos conocidos como implantacin. Durante este proceso el
blastocisto se adhiere, penetra e invade el
endometrio (decidua) y las clulas del trofoblasto
del embrin se diferencian para formar la placenta.
En la mujer este proceso es particularmente
invasivo ya que las clulas trofoblsticas infiltran
incluso el miometrio.
Desde el punto de vista anatmico en la mujer embarazada se pueden establecer tres zonas de
interfase materno-fetal (figura 17-2). En estas zonas es donde el tejido inmune de la madre puede
reconocer los antgenos fetales de origen paterno.
Una de estas zonas de interfase corresponde a las
vellosidades placentarias, donde las clulas del
sinciciotrofoblasto de origen fetal estn en contacto directo con la sangre materna. Otra zona de
interfase la constituyen las arterias espirales del
endometrio y miometrio, donde el endotelio materno es reemplazado por clulas fetales derivadas del trofoblasto, denominadas citotrofoblastos
extravellosidades. Estos citotrofoblastos estn en
contacto directo con el tejido endometrial. La tercera zona de interfase es la zona de la membrana
corinica que se encuentra en contacto con la
decidua.
4.2. Expresin de MHC en las clulas
trofoblsticas
Las clulas trofoblsticas que estn en contacto directo con las clulas inmunocompetentes
de la decidua no expresan los genes del MHC de
clase II, an despus de la estimulacin con IFN. Tampoco expresan dos de los principales genes
polimrficos del MHC de clase I, HLA-A y HLAB. Sin embargo, las clulas trofoblsticas expresan HLA-G, un gen MHC de clase I conocido
como no-clsico (ver captulo 8). Varias caractersticas de la protena HLA-G sugieren que su funcin est relacionada con la tolerancia maternofetal. Primero, esta protena se encuentra casi exclusivamente en el citotrofoblasto extravellosidades y en la membrana corinica. Adems del
timo, no existe evidencia concluyente de que esta
4. EL SISTEMA INMUNE LOCAL EN EL

EMBARAZO
La respuesta inmune en la mucosa reproductiva de la hembra de los mamferos, ha debido
adaptarse para tolerar al feto y a los espermatozoides, que de otra manera seran rechazados al
igual que los trasplantes alogeneicos (ver captulo 37). A continuacin se describe el sistema inmune de la mujer durante el embarazo, destacando aquellas caractersticas que pueden explicar la
318
Sin ttulo-2
318
5/26/06, 10:26 AM
Figura 17-2 Zonas de interfase materno-fetal en la placenta. Se distingue al menos dos zonas de interaccin materno-fetal: a)
los sinciciotrofoblastos y la sangre materna de los espacios intervellosidades y b) los citotrofoblastos extravellosidades y tejido
linfoide del endometrio. En estas zonas de interaccin, el sistema inmune de la madre puede ser estimulado por los antgenos
fetales de origen paterno.
protena se exprese en otros tejidos. Segundo, a

diferencia de MHC-I clsico, el gen HLA-G casi
no presenta polimorfismo, es decir, tiene muy pocas variantes allicas. Esto implica que durante
la preez, la protena trofoblstica heredada de los
genes paternos ser idntica o levemente diferente a la protena materna y por lo tanto, estas molculas no inducirn respuesta alogeneica de rechazo. Tercero, una caracterstica propia del gen HLAG es que el mRNA sufre splicing alternativo y
se genera una forma soluble que tambin podra
tener funciones reguladoras sobre el sistema inmune materno.
Las clulas trofoblsticas expresan otros dos
genes MHC de clase I, HLA-E y HLA-C. El gen
HLA-E codifica tambin para una protena de clase
I no clsico, que une un grupo de pptidos muy
restringido. Se postula que su funcin sera inhibir el ataque al trofoblasto por parte de las clulas
NK. HLA-C es un gen MHC de clase I clsico
pero se expresa en niveles mucho ms bajos que
HLA-A y HLA-B en tejidos normales y su funcin es desconocida.
(clulas granulares de la glndula metrial). A partir de la fase lutea del ciclo menstrual y en la primera etapa del embarazo, las clulas NK aumentan en nmero hasta llegar a ser las ms abundantes en la decidua. Tanto en la mujer como en el
ratn, estas clulas disminuyen notablemente al
trmino de la preez. Las clulas NK se encuentran en estrecha relacin anatmica con las clulas trofoblsticas, distribuidas especialmente alrededor de las arterias espirales, glndulas
endometriales y junto a los trofoblastos que invaden el tejido materno.
Aunque la funcin de las clulas NK durante
la preez es desconocida, se sabe que estas clulas tienen actividad citoltica similar a las clulas
NK de sangre perifrica. Las clulas NK de la
decidua expresan los receptores inhibitorios (KIR)
por lo que se cree que su actividad ltica es inhibida
en la interfase materno fetal por la presencia de
los ligandos HLA-G y HLA-C (figura 17-3).
4.4. Los linfocitos T de la decidua
Los linfocitos T se encuentran dispersos en
la decidua y no varan en nmero durante la preez. En la mujer, los linfocitos T deciduales no
proliferan en respuesta a las clulas trofoblsticas
ni frente a linfocitos alogeneicos, indicando que
los linfocitos T de la decidua se encuentran en un
estado de anergia similar al encontrado en los
4.3. Las clulas NK de la decidua

Las clulas NK de la decidua (LGL: CD56+,
CD16-), difieren fenotpicamente de las encontradas en la periferia (CD56+, CD16+). En el ratn
las clulas NK corresponden a las clulas GMG
319
Sin ttulo-2
319
5/26/06, 10:26 AM
trofoblasto. Otras como IGF-1, TNF-, IL-6 y

CFS-1 promueven la sntesis y secrecin de hormonas placentarias.
Varias de las citoquinas producidas en estos
tejidos tienen adems funciones inmunorregulatorias, as por ejemplo, IFN- estimula la respuesta inmune Th1 (inmunidad celular), IL-10
inhibe la respuesta inmune tipo Th1 y TGF presenta actividad inmunosupresora. El equilibrio
entre los niveles de tales citoquinas en el tracto
reproductor, puede estar relacionado con la capacidad de discriminacin del sistema inmune local, entre clulas inmunolgicamente extraas pero
normales al individuo (tales como los espermatozoides y el embrin) y una variedad de microorganismos patgenos que infectan el tracto
reproductor. De esta manera, el sistema inmune
local puede ser capaz de iniciar una respuesta inmune de carcter y extensin apropiados al estmulo, es decir, una respuesta de tolerancia a los
espermatozoides y al embrin y de rechazo a los
microorganismos patgenos. Este es un campo
de la inmunologa de la reproduccin de activa
investigacin.
Figura 17-3 Expresin de MHC de clase I (HLA.G y

HLA.C) en las clulas trofoblsticas. La actividad ltica de
las clulas NK de la decidua que es estimulada por los receptores de activacin KAR, puede permanecer inhibida por la
unin del MHC del trofoblasto a los receptores KIR.
linfocitos de la mucosa intestinal. En ratones

transgnicos existe tolerancia sistmica a los
antgenos paternos, lo que se produce por una disminucin transiente de los linfocitos especficos
para las molculas MHC paternas durante la preez. Tambin a nivel sistmico se produce desviacin de la respuesta inmune hacia una respuesta humoral mediada por linfocitos Th2, evitando
de esta manera el posible dao que una respuesta
celular mediada por Th1 pudiera producir en la
preez.
5.
FACTORES INMUNOLGICOS QUE

AFECTAN LA FERTILIDAD
4.5. Citoquinas en la preez

Dada la relevancia de la respuesta inmune
en todos los procesos involucrados en la reproduccin, no es raro que fallas a este nivel conduzcan a fallas en la fertilidad. En humanos existe
una intensa investigacin para conocer ms exactamente los mecanismos subyacentes y poder desarrollar mejores terapias. A continuacin, se describen como ejemplos de fallas de la fertilidad por
causa de factores inmunolgicos, la alteracin en
la implantacin del embrin que conduce al aborto espontneo recurrente y tambin, la produccin
de anticuerpos antiespermticos, que pueden ser
causa de falla en la fertilidad al dificultar la fecundacin.
Las citoquinas tienen una funcin importante durante la preez y son producidas en tejidos
fetales y la decidua. En estos tejidos se sintetizan
citoquinas inflamatorias tales como IL-1, TNF,
IL-6 e IL-8; linfoquinas tales como IFN-, IL-2 e
IFN-; factores de crecimiento tales como el Factor estimulador de colonias de granulocitos (GCSF), Factor estimulador de colonias de
granulocitos y macrfagos (GM-CSF), Factor
estimulador de colonias de macrfagos (M-CSF)
y factores inmunosupresores como TGF1,
TGF2 e IL-10 (ver captulo 11). Algunas
citoquinas producidas por los tejidos embrionarios
o maternos, tienen efectos regulatorios sobre la
implantacin, el desarrollo del embrin y de la
placenta. Su efecto se produce a travs de los receptores que se encuentran en los tejidos blanco.
Por ejemplo, IL-11 se produce en las clulas del
endometrio e induce diferenciacin de las clulas
del estroma a clulas deciduales favoreciendo de
esta manera la implantacin. Otras citoquinas
como CSF-1, que se produce en el citotrofoblasto,
promueven la invasin y diferenciacin del
5.1. Aborto espontneo recurrente de causa

inexplicada
El aborto espontneo recurrente de causa
inexplicada se ha relacionado con la
desrregulacin de varios aspectos de la respuesta
inmune que se requieren para la implantacin del
embrin a pesar de que ste puede ser considerado como un aloinjerto, al portar los antgenos he-
320
Sin ttulo-2
320
5/26/06, 10:26 AM
Th1 en el endometrio peri-implantacional, mientras que normalmente un predominio Th2 confiere proteccin. La falla del embarazo puede explicarse por varios mecanismos inmunolgicos secundarios a cambios en las proporciones normales de los 2 grupos de citoquinas, sobre todo a nivel local en la interfase materno-fetal. Entre las
citoquinas Th1, IL-12 sirve de estmulo para la
diferenciacin de clulas Th0 a Th1, las que por
efecto de IFN- y TNF-, culminan en el desarrollo de una respuesta citotxica de rechazo del
conceptus. El aumento anormal de citoquinas Th1
puede ser provocado por antgenos del trofoblasto,
del espermatozoide, microbianos u otros, que estimulan a las clulas inflamatorias e inmunes maternas hacia el desarrollo de respuesta inmune celular.
El aborto recurrente de causa no explicada
se ha asociado adems, con la expresin de molculas HLA-DR1 y con la presencia de
autoanticuerpos rgano inespecficos como
anticardiolipinas y antinucleares. Esto puede deberse a la hipersecrecin de TNF-, dado que existe un desequilibrio de ligamiento entre HLA-DR1
y TNF-.
redados del padre. La implantacin es un proceso

esencial para la reproduccin humana en la que se
produce invasin del endometrio materno por parte
del concepto. Este hecho pone inevitablemente al
conceptus en contacto con las clulas inmunocompetentes maternas y por ello, la interaccin
materno-fetal durante el perodo peri-implantacional es crucial para determinar el xito o el fracaso del proceso reproductivo. Cmo escapa normalmente el feto a la vigilancia por parte de las
clulas NK endometriales que son el tipo
linfocitario predominante en el sitio de implantacin?. Una posible explicacin surge del hallazgo
de que mujeres y hombres de la misma edad poseen claras diferencias en la actividad de las clulas NK. Las mujeres tienen menor actividad de
clulas NK que los hombres de su misma edad.
Asimismo, el nivel de actividad de las clulas NK
previo a la concepcin, puede predecir el resultado del embarazo, ya que mujeres con alto nivel de
actividad NK tienen mayor riesgo de aborto. Por
otra parte, se ha postulado que la ausencia de las
molculas MHC polimrficas, HLA-A, HLA-B y
de clase II, en la interfase con el tejido materno y
a la presencia de molculas MHC clase I HLA-G,
con un bajo polimorfismo en el sinciciotrofoblasto
influyen positivamente en la sobrevida del injerto
fetal. Sumados estos hechos, se plantea que es a
travs de estos determinantes no polimrficos,
sumado a la ausencia de otras molculas MHC,
que se logra localmente la inhibicin de la
citotoxicidad por las clulas NK y de linfocitos T.
De tal manera que tanto una perturbacin en la
expresin de HLA-G, como en el estado de activacin de las clulas NK influye en la sensibilidad del trofoblasto a la lisis y en el equilibrio mantenido en el sitio de implantacin.
La actividad de clulas NK es influenciada
por numerosas citoquinas, entre ellas las citoquinas
secretadas por los linfocitos Th1 que son capaces
de activarlas se han encontrado asociadas con el
aborto. Por otro lado, TGF- sera una citoquina
protectora del embarazo al disminuir el grado de
activacin de las clulas NK. Ya sea como resultado de una mayor activacin o una reduccin en
la inmunosupresin, las clulas NK de pacientes
abortadoras parecen estar sujetas a un ambiente
proclive a la activacin, reflejado en un nivel de
actividad de clulas NK mayor que en embarazos
normales. Recientemente se han acumulado evidencias del importante papel que desempean las
citoquinas T helper en el rechazo del embarazo,
el cual es mediado por el predominio de citoquinas
5.2. Anticuerpos antiespermticos

Anticuerpos con especificidad por el espermatozoide o alguno de sus componentes se pueden encontrar en diferentes secreciones corporales de hombres y mujeres, pero su significado
como posible causante de alteraciones de la fertilidad es muy variable. El hallazgo de anticuerpos
antiespermticos en el suero no tiene relevancia en
fertilidad, en cambio s puede tenerla cuando estn
presentes en el tracto reproductivo (tabla 17-2). Dichos anticuerpos pueden desarrollarse en forma
primaria sin una causa reconocible. En otros casos, los anticuerpos se desarrollan secundariamente a una alteracin en los mecanismos normales
de supresin de la respuesta inmune, ya que el
espermatozoide es altamente inmunognico tanto
para la mujer como para el mismo hombre que lo
produce. Esto sucede en el hombre porque los
antgenos espermticos aparecen durante la pubertad, es decir despus que ya se ha establecido la
tolerancia a los antgenos propios.
Actualmente se considera que dichos
anticuerpos son una causa de reduccin de la fertilidad, alterando la capacidad antiespermticos
fecundante del espermatozoide, inhibiendo
interacciones gamticas por aglutinacin o por
321
Sin ttulo-2
321
5/26/06, 10:26 AM
Tabla 17-2. Hallazgo de anticuerpos antiespermticos en secreciones humanas

Muestra
Isotipo de Ig
Suero (hombre)
Suero (mujer)
Moco cervical
Plasma seminal
Espermatozoide a
IgG, IgM
IgG, IgM
IgG, IgA
IgG, IgA
IgG, IgA
Relevancia en fertilidad
Ninguna
Ninguna
Posible
Posible
Posible
los anticuerpos aparecen adheridos a la superficie del espermatozoide

Referencia: Bohring C., Krause W., Reproduktionsmedizin 16: 3-7, 2000.
inmovilizacin del gameto masculino, o tambin,

influenciando negativamente el desarrollo del
embrin. Se ha sugerido que los anticuerpos unidos a la superficie espermtica participan en
citotoxicidad mediada por complemento o
fagocitosis por macrfagos activados. Los
antgenos, blancos de reacciones inmunolgicas
asociadas con infertilidad, son molculas expresadas en la superficie, accesibles en el espermatozoide intacto para reaccionar con linfocitos o
anticuerpos. Se ha intentado caracterizar los
antgenos espermticos relevantes en fertilidad,
sin lograrlo completamente hasta ahora porque la
especificidad de los anticuerpos antiespermticos
parece ser extremadamente heterognea. Un ejemplo es el denominado antgeno de fertilizacin (FA1), que fue caracterizado como una glicoprotena
de 49 kDa presente en espermatozoides de varias
especies de mamferos. Se afirm inicialmente que
este antgeno era el blanco de anticuerpos presentes en el suero de hombres y mujeres infrtiles,
sin embargo, tambin lo sera para anticuerpos
presentes en individuos frtiles, con lo que su relevancia para la reproduccin permanece en discusin. Posteriormente se ha detectado una serie
de antgenos de peso molecular entre 23 y 72 kDa,
mediante electroforesis bidimensional y Westernblot con los anticuerpos presentes en el plasma
seminal de hombres infrtiles. Esto parece confirmar la heterogeneidad ya mencionada de la especificidad de los anticuerpos antiespermticos.
Debido a que el espermatozoide no est presente en la etapa de desarrollo del individuo cuando se establece la tolerancia a los antgenos propios, es necesario su aislamiento del sistema inmune para evitar el reconocimiento y rechazo
como clulas extraas. La primera lnea de defensa contra el desarrollo de una respuesta autoinmune
antiespermtica es la barrera hemato-testicular

constituida por las ajustadas uniones entre las clulas de Sertoli en el testculo, luego por el epitelio mucoso del tracto genital masculino, suplementado por una barrera inmunosupresora local de
linfocitos T supresores abundantes en el tejido
intersticial del testculo y en la submucosa del
epiddimo. Las clulas de Sertoli tambin
fagocitan y degradan espermatozoides y productos residuales de la espermatognesis, evitando as
el contacto con el sistema inmune. Por ltimo, los
factores inmunosupresores del plasma seminal
protegen al espermatozoide incluso al encontrarse en el tracto genital femenino. Todo lo anterior
explica que la formacin de anticuerpos
antiespermticos se asocia en el hombre con la
inflamacin o infecciones del tracto genital, trauma o torsin testicular, lesin y/u obstruccin parcial de los conductos reproductivos masculinos,
vasectoma y tumores. La prdida de continuidad
en la superficie mucosa de los conductos
testiculares o eferentes permite el acceso de
macrfagos al tracto reproductivo, los que
engloban y degradan espermatozoides, para luego presentar antgenos al sistema inmune. Confirmando lo anterior, alrededor del 50% de los hombres vasectomizados presenta anticuerpos
antiespermticos en el suero y parece haber un
control gentico de la tendencia a formar estos
anticuerpos ya que en el grupo de hombres
vasectomizados que desarrollaron anticuerpos se
encontr mayor frecuencia de HLA-A28 y Bw22.
En la mujer, el depsito de espermatozoides
en el tracto genital puede conducir al desarrollo
de anticuerpos antiespermticos. En el caso de
ruptura de las barreras mucosas, hay ingreso de
antgenos espermticos, los que son reconocidos
por linfocitos B subepiteliales que desarrollan una
322
Sin ttulo-2
322
5/26/06, 10:26 AM
respuesta de anticuerpos con predominio de IgA.

La aparicin de estos anticuerpos tambin puede
reflejar una falla de los factores supresores del
plasma seminal. La presencia de anticuerpos
antiespermticos en el tracto genital femenino interfiere con la fecundacin ya sea, porque impide
la migracin de los espermatozoides a travs del
moco cervical y con ello las interacciones
gamticas, o porque influye negativamente en el
desarrollo del embrin.
Lim, K.J.H., et al., The role of T-helper cytokines

in human reproduction. Fertil. Steril; 73: 136142, 2000.
Naz, R.K., Menge, A.C., Antisperm antibodies:
origin, regulation, and sperm reactivity in human
infertility. Fertil. Steril. 61: 1001-1013, 1994.
LECTURAS SUGERIDAS
Parr, M.B., Parr. E.L., Immunoglobulins in the

female genital tract en Bronson, R.A., Alexander,
N.J., Anderson D., Branch, D.W. and Kutteh, W.H.
(eds), Reproductive Immunology, Blackwell
Science Inc., Cambridge, MA, pp. 275-308, 1997.
Anderson D., Interaction between male genital

tract infection, immunity and infertility en
Bronson RA., Alexander N.J., Anderson D.,
Branch D.W. and Kutteh, W.H. (eds),
Reproductive Immunology, Blackwell Science
Inc., Cambridge, MA, pp. 383-417, 1997.
Somigliana, E., Vigan, P., Vignali, M.,

Endometriosis and unexplained recurrent
spontaneous abortion: pathological states resulting
from aberrant modulation of natural killer cell
function?, Human Reprod. Update; 5: 40-51,
1999.
Bainbridge, DRJ., Evolution of mammalian

pregnancy in the presence of the maternal immune
system, Reviews of Reproduction; 5, 67-74, 2000.
Stagg, A,J., Vaccines against Chlamydia

approaches and progress, Mol Med Today; 4,
166-173, 1998.
Bulmer, N.J., Cellular constituents of human

endometrium in the menstrual cycle and early
pregnancy en Bronson R.A., Alexander N.J.,
Anderson D., Branch D.W. and Kutteh W.H. (eds),
Cooper M.D., Moticka, E.J., Mucosal immune
response of the human female genital tract to
sexually transmitted disease pathogens en
Bronson R.A., Alexander N.J., Anderson, D.,
Branch D.W. and Kutteh W.H. (eds),
Domagala, A., Kamieniczna, M., Kurpisz, M.,
Sperm antigens recognized by antisperm
antibodies present in sera of infertile adults and
prebubertal boys with testicular failure. Int. J.
Androl. 23: 150-155, 2000.
Heyborne, K., Silver, R.M., Immunology of
postimplantation pregnancy en Bronson, R.A.,
Alexander N.J., Anderson, D., Branch, D.W. and
Kutteh, W.H. (eds), Reproductive Immunology,
Blackwell Science Inc., Cambridge, MA, pp. 383417, 1997.
323
Sin ttulo-2
323
5/26/06, 10:26 AM
324
Sin ttulo-2
324
5/26/06, 10:26 AM

SECCIN
III
MECANISMOS EFECTORES DE LA
RESPUESTA INMUNE
325
Sin ttulo-2
325
5/26/06, 10:26 AM
326
Sin ttulo-2
326
5/26/06, 10:26 AM

Captulo 18
SISTEMA DEL COMPLEMENTO
Arturo Ferreira V. y Julio Scharfstein
1. Introduccin
2. Generalidades sobre la activacin
y regulacin del Sistema del Complemento
2.1. Generacin de enlaces covalentes
por parte de C3b y C4b, al reaccionar con estructuras de las superficies atacadas por el sistema.
2.2. Las C3 y C5 convertasas de las
rutas clsica y alterna son funcionalmente homlogas:
3. Ruta clsica: algunos detalles moleculares
3.1. Unin C1
3.2. Activacin de C4 y C2
3.3. Convertasa de C3
3.5. Mecanismos que confinan la activacin del complemento a las
membranas blanco (target) o
culpables
3.6. Ruta de las lectinas

4. Ruta alterna: algunos detalles moleculares
4.1. Activacin de la ruta alterna
4.2. Papel de la properdina
5. Fase terminal: generacin del complejo destructor de membranas
5.1. Generacin de C5-8
5.2. Polimerizacin de C9
5.3. Efecto funcional de la insercin
del MHC en las membranas
5.4. Perspectivas futuras del estudio
de la fase final de la activacin
del complemento
6. Algunos aspectos genticos del
Complemento
7. Complemento y Enfermedad
327
Sin ttulo-2
327
5/26/06, 10:26 AM
328
Sin ttulo-2
328
5/26/06, 10:26 AM
RESUMEN
El Complemento es un sistema extremadamente pleiotrpico conformado por alrededor de
40 protenas, que interrelacionan en el sistema inmune mltiples funciones efectoras, frecuentemente mediadoras de mecanismos inflamatorios. Durante su activacin se generan tres grupos de
pptidos con funciones que, en condiciones fisiolgicas, promueven la fagocitosis, la inflamacin, la destruccin de membranas biolgicas de agentes agresores y la estimulacin tanto de
mecanismos inmunes innatos, como adquiridos. La activacin del sistema puede ocurrir a travs
de dos rutas, involucrando en la ruta clsica la presencia de complejos inmunes. La ruta alterna se
activa por superficies biolgicas con caractersticas bioqumicas particulares, en ausencia de
anticuerpos. Una variante de la ruta clsica involucra ciertos carbohidratos y enzimas que generan directamente la convertasa clsica de C3, sin participacin del componente C1, ni de
anticuerpos. Estos mecanismos generan la convertasa de C3 que activa enzimticamente al tercer componente C3, depositndolo sobre las membranas biolgicas prximas al sitio de la activacin. El tercer componente se une covalentemente a estas membranas por medio de enlaces
hidroxister o amidoster. Estos mecanismos de accin generan tambin convertasas de C5 (clsica y alterna) que activan enzimticamente al quinto componente C5, continuando una serie de
interacciones no enzimticas, que involucra a los componentes C6-C9, culminando con el ensamblaje del MAC. Estos complejos son estructuras macromoleculares anfifilicas, que se insertan en membranas biolgicas agresoras, generando verdaderos tubos o canales que causan profundas alteraciones en las membranas, culminando con la lisis celular. La activacin del sistema
es controlada meticulosamente por protenas presentes en la fase soluble y tambin unidas a
membranas. Estas protenas controladoras pueden mediar la degradacin enzimtica de componentes activos, particularmente C3b y C4b. Tambin pueden impedir la generacin de convertasas
o desensamblar aquellas ya generadas. La regulacin tambin puede ocurrir a nivel de la generacin del MAC. Aunque la mayora de los genes que codifican las protenas del complemento se
encuentran dispersos en el genoma, algunos de ellos se encuentran ligados en cromosomas definidos. As, por ejemplo, los genes que codifican el segundo y cuarto componente de la ruta
clsica (C2 y C4) y el factor B de la ruta alterna, se encuentran todos ligados en el centro del
MHC, desconocindose las implicancias funcionales de este ligamiento. En sntesis, el arte del
sistema del complemento consiste en generar funciones opsonizantes y lticas concentradas sobre membranas agresoras culpables y no sobre membranas vecinas, propias, inocentes, favorecido esto por la funcin de las anafilotoxinas que facilitan el acceso al sitio de la agresin, de
numerosos elementos inmunocomponentes. La marcacin indeleble u opsonizacin de muchas
superficies antignicas por C3b y C4b, las direcciona hacia rganos linfoides, donde se inicia
la respuesta inmune especfica. La incorporacin de C3b y C4b sobre complejos inmunes puede
mediar la solubilizacin de stos. La activacin descontrolada del sistema puede generar una
serie de patologas, al igual que la deficiencia de algunos componentes.
un estado de inmunidad que le permitir al individuo reaccionar en forma ms efectiva en la eventualidad probable de reencuentros futuros con el
agente agresor.
En el proceso de reconocimiento participan,
como componentes esenciales, clulas y
anticuerpos. Entre las clulas, los linfocitos T
citotxicos (LTc) pueden reconocer y destruir clulas infectadas en forma autosuficiente. Los LTc
1. INTRODUCCIN
Si aceptamos que el sistema inmune existe
porque existe la agresin exgena (virus, bacterias, hongos, parsitos en general) y endgena (clulas neoplsicas principalmente), entonces, la funcin principal de este sistema sera el reconocimiento y destruccin de estos agresores. De este
encuentro, reconocimiento y destruccin, resulta
329
Sin ttulo-2
329
5/26/06, 10:26 AM
sintetizan complejos macromoleculares que, luego de contactar estrechamente con las clulas infectadas, los insertan en la membrana de stas,
destruyndolas.
Por otra parte, las clulas B producen
anticuerpos, altamente especficos, que les sirven
como receptores integrales de membrana y como
productos de exportacin, o sea, como verdaderas sondas que reconocen al agente patgeno, incluso a gran distancia del punto de produccin.
Sin embargo, estas sondas, por s solas, normalmente no pueden matar ni destruir a los organismos invasores. Excepcionalmente, los anticuerpos
podrn ser suficientes si bloquean, por ejemplo,
un ligando para un receptor celular presente en un
parsito, cuyo ciclo biolgico implica necesariamente una etapa intracelular. (En este captulo, el
trmino parsito ser utilizado en un sentido amplio, refirindose a agentes agresores tales como
bacterias, virus, hongos, protozoos, etc.). En otras
palabras, los anticuerpos son molculas cuya funcin principal es reconocer, pero, frecuentemente, el reconocimiento, aunque necesario, no es suficiente.
En este contexto, el Sistema del Complemento representa un mecanismo srico auxiliar, eficiente de defensa innata. Es uno de los primeros
sistemas de amplificacin biolgica cuyos mecanismos moleculares fueron descritos en detalle,
sirviendo como ejemplo sofisticado y didctico sobre mecanismos de regulacin proteoltica. Debido a la gran versatilidad de las interacciones protena-protena, la investigacin sobre su modo de
activacin y regulacin ofrece ejemplos importantes sobre la relacin entre estructura y funcin
de protenas, sobre la influencia de la variabilidad
gentica y sobre las consecuencias en clnica mdica. Capaz de generar una gama de actividades
biolgicas, el sistema est formado por aproximadamente 40 molculas, presentes en el plasma
o sobre membranas biolgicas, en todos los
vertebrados estudiados hasta ahora. Tal como
ocurre con los procesos de activacin de las
serino-proteasas responsables de la coagulacin y
de la hemostasis, la activacin del sistema del
complemento implica la activacin sucesiva (cascada) de precursores enzimticos de serino
proteasas plasmticas. Las principales consecuencias biolgicas de este proceso son:
Complex). Este es un complejo macromolecular

formado por la asociacin de seis molculas: C5b,
C6, C7, C8, C8 y C9. La generacin de este
complejo est orientada al ataque de membranas
biolgicas. Tiene propiedades fsico-qumicas
anfiflicas (hidrofbicas e hidroflicas) que le permiten insertarse en membranas biolgicas
fosfolipdicas que se encuentren en la proximidad
inmediata al sitio de activacin, alterando profundamente su estructura. Generan en ellas verdaderos forados que cambian drsticamente sus
propiedades de permeabilidad. Una ilustracin
clsica y dramtica de esto se logra al sensibilizar
glbulos rojos con anticuerpos especficos. Los
glbulos pueden incluso aglutinarse, pero estarn
intactos. Al agregar suero fresco como fuente de
complemento, las clulas se lisarn. Si una de estas clulas se mira al microscopio electrnico se
ver la membrana perforada por una multitud de
orificios circulares, simtricos, equidistantes, provocados por el MAC.
b) Opsonizacin de antgenos por fragmentos
C3b y C4b. Estas opsoninas se unen
covalentemente a la superficie de clulas invasoras cercanas al sitio de activacin. Por s solas no
producen dao, pero si las clulas extraas sensibilizadas con ellas, son detectadas por una clula
fagoctica profesional, como el macrfago, sern
fagocitadas muy eficientemente y luego destruidas intracelularmente. Estas clulas fagocticas
tienen receptores de superficie para estos fragmentos opsonizantes. Adems de contribuir a la
fagocitosis, estas opsoninas pueden contribuir a
la focalizacin de antgenos hacia ndulos y
ganglios linfticos, donde hay una gran concentracin de linfocitos B. Esto sucede porque, similar a lo que ocurre con los macrfagos, los
linfocitos B tambin expresan receptores para los
fragmentos de C3 y C4. Adems, las clulas
dendrticas foliculares tambin son portadoras de
estos receptores. Esto otorga al sistema una importante funcin estimuladora de la respuesta inmune, si consideramos que, para ser inmunognicos, los antgenos deben llegar a los rganos linfoides. Por otra parte, como los complejos
inmunes pueden activar al sistema, una tercera
funcin de estos fragmentos sera impedir formacin de agregados de complejos inmunes insolubles en el organismo.
a) Formacin de un Complejo Destructor (ltico)

de membrana, conocido tambin como "Killer
Complex" o "MAC (Membrane Attack
c) Un tercer grupo de productos generados se conoce como anafilotoxinas. Son fragmentos de
330
Sin ttulo-2
330
5/26/06, 10:26 AM
bajo peso molecular (alrededor de 5 kDa) que se

generan a partir de C3, C4 y C5. Se llaman C3a,
C4a y C5a. Han sido cristalizadas a homogeneidad. Inoculadas subcutneamente, en cantidades
de nanomoles, inducen una violenta reaccin
inflamatoria local con un gran edema. Su funcin
principal es aumentar la permeabilidad capilar. Son
agentes fundamentales en el fenmeno inflamatorio fisiolgico que, frecuentemente, acompaa
a muchas infecciones. Por el hecho de tener una
potente actividad biolgica, estos factores tienen
vida media corta, siendo rpidamente destruidos
por caboxi-peptidases plasmticas.
El nombre de anafilotoxinas es incorrecto (se
conserva por razones histricas) ya que no son
toxinas y no inducen shock anafilctico, que es
una reaccin generalizada. Las anafilotoxinas inducen la liberacin local de varios productos de
las clulas mastodeas, siendo el ms importante
la histamina. Una reaccin similar ocurre con los
basfilos circulantes que tienen receptores para
C3a y C5a. Los neutrfilos, en cambio, tienen
receptores slo para C5a, induciendo en ellos una
fuerte actividad leucotxica.
2. GENERALIDADES SOBRE ACTIVACIN Y REGULACIN DEL SISTEMA

DEL COMPLEMENTO.
El complemento puede activarse a travs de
dos rutas principales (clsica y alterna) presentadas, en forma muy resumida, en la figura 18-1. C3
ocupa una posicin central en el sistema, siendo un
objetivo principal de estas rutas el activarlo.
Ruta clsica: Requiere de la participacin de complejos inmunes. Implica la activacin de C1 a C9.
Con una sola excepcin, la secuencia de nmeros
refleja la secuencia de pasos en el proceso de activacin. La excepcin tiene orgenes histricos (C4
es activado antes que C2 y C3, pero C2 y C3 fueron descubiertos antes que C4).
En la ruta clsica, la participacin de iones
Ca2+ y Mg2+ es esencial. En ausencia de estos iones
la activacin no ocurre. As, si a un suero fresco
se le agrega EDTA, (cido etelendiaminotetraactico), suficiente para quelar todo el Ca2+ y
Mg2+ y luego agregamos glbulos rojos sensibilizados con anticuerpos, no habr lisis. El Ca2+
Figura 18-1. Resumen de las dos vas principales de activacin del Sistema del Complemento
331
Sin ttulo-2
331
5/26/06, 10:26 AM
estabiliza a C1, formado por la asociacin de 3

protenas: C1q, C1r, C1s.
Como veremos ms adelante, la manosa, carbohidrato presente en una variedad de agentes agresores exgenos, puede mediar la activacin de la
ruta clsica, prescindiendo de la participacin de
complejos inmunes y de C1, constituyendo as lo
que se conoce como bypass de las lectinas.
en la superficie de la clula hospedadora.

Como se mencion, la activacin en cascada
es siempre acompaada de la liberacin de muchos pptidos biolgicamente importantes. Como
convencin, los pptidos o fragmentos se designan con letras minsculas. Por ejemplo, C3 puede generar varios fragmentos, no todos con funciones conocidas. As, a partir de C3 se genera
C3b, C3a, C3c, C3g, C3d, C3dg; de C4 se genera
C4a, C4b, C4c, C4d; de C5: C5a, C5b; de B: Bb,
Ba; de C2: C2a, C2b.
Los fragmentos b son de tamao mayor que
los a, sin excepcin. (A pesar que esto ya fue resuelto en un taller de nomenclatura internacional,
hace ya ms de 15 aos, algunos libros an mantienen una excepcin representada por C2, en que
el fragmento mayor sera a y el menor b. En este
texto usaremos lo convenido en ese taller).
En la literatura, con frecuencia, se puede encontrar una raya sobre un componente o enzima
activada. Por ejemplo C1, significa C1 activado.
Algunas molculas del complemento son muy interesantes, en cuanto a estructura, como es el caso
de C1q y C4-bp. Estas molculas, al igual que
IgG e IgM, presentan al microscopio electrnico
imgenes que parecen racionales si se piensa en
sus funciones.
Las caractersticas generales de los componentes del complemento se resumen como sigue:
Ruta alterna: Su objetivo tambin es activar a

C3. No requiere la participacin de C1, C2, C4,
ni de complejos inmunes. Participan, en cambio,
los factores B, D y properdina (P). Requiere de la
participacin de Mg2+.
Regulacin: El sistema del complemento, por su
potencial destructor para el hospedero, debe ser
cuidadosamente regulado. Este trabajo es realizado por varias protenas que funcionan en diferentes puntos de la cascada. Estas protenas estn
presentes en el suero o unidas a membranas biolgicas. Las mejor caracterizadas son:
En el suero: a) Inhibidor de C1 (C1INH)
b) C4 binding protein (C4-bp)
(Protena ligante de C4)
c) Inactivador de C3b y C4b (I)
d) Factor H (H)
e) Protena S
f) Inactivador de anafilotoxinas
g) SP40, 40
h) Properdina (P)
a) C2, C3, C4, C5, B se fragmentan durante la

activacin generando C2a, C2b; C3a y C3b; C4a
y C4b; C5a y C5b, Ba y Bb. C1r y C1s tambin se
fragmentan pero los productos generados se designan simplemente como mayor y menor
b) Todos los componentes son glicoprotenas
c) La concentracin srica flucta entre 1-2 mg/
ml (C3) y menos de 1 ug/ml (D)
d) El peso molecular flucta entre 20 kDa (D) y
750 kDa (C1: q, r, s)
e) N de cadenas: 18 (C1q); 7 (C4-bp); 3 (C4; C8);
2 (C3, C5, C1r, C1s); 1 (C2, C6, C7, C9, B)
f) Precursores (no funcionales) por proteolisis limitada se hacen funcionales en una reaccin en cascada unidireccional (C1r, C1s, C4, C2, C3, C5, C3, B)
g) La regulacin ocurre en varios puntos de la cascada
h) Durante la activacin se generan mecanismos
moleculares que concentran la accin ltica y
opsonisante sobre membranas biolgicas blanco
("culpables") y no sobre clulas vecinas inocentes
i) Algunos componentes se preasocian estratgicamente en ausencia de estmulo
Como parte integral de membranas o actuando sobre ellas:

a) CR1 : Receptor de C3b y C4b
b) DAF: "Decay accelerating factor". (Factor acelerador del decaimiento, de convertasas).
c) CR2: Receptor de C3d y C3dg,
iC3b
d) MCP: "Membrane Cofactor
Protein" (Protena cofactor de
membrana)
I es el nico factor regulador que posee actividad enzimtica. Para inactivar irreversiblemente las
enzimas C3 convertasas clsica y alterna, I depende
crticamente de la interaccin reversible de co-factores especializados (C4-bp, H y CR) con sus ligandos
respectivos, C4b en la ruta clsica y C3b en la ruta
alterna. MCP y DAF, aceleran el decaimiento de las
enzimas convertasas clsica y alterna, ensambladas
332
Sin ttulo-2
332
5/26/06, 10:26 AM
Los genes estructurales de estas protenas

estn dispersos en el genoma. Curiosamente, sin
embargo, los genes para C2, B y C4 se encuentran
en un cluster en el centro del Complejo Principal de Histocompatibilidad (MHC), en todas las
especies estudiadas hasta ahora. Hay otras curiosidades genticas. El gen estructural de C3 en el
ratn est en el cromosoma 17, ligado a H-2, pero
a una gran distancia gentica, 13 centimorgans,
telomrico a la regin D. En humanos, en cambio, el gen estructural de C3 est en el cromosoma
19, no ligado a HLA, complejo gentico que se en-
cuentra en el cromosoma 6. Se desconoce la razn

por la cual C2, B y C4 estn siempre formando parte
integral del MHC. C8 est formado por dos protenas cuyos genes estructurales estn, en humanos, en
el cromosoma 1. Un gen codifica las cadenas
alfa-gamma, que son secretadas como un precursor
de una cadena. Otro gen codifica la cadena beta.
Las tres cadenas se integran postsintticamente para
formar la molcula funcional de tres cadenas que
conocemos como C8. Dos cadenas (alfa y gamma)
estn unidas covalentemente, la otra no. La tabla
18-1 resume estos datos.
Tabla 18-1. Caracterstica generales de las protenas del Sistema del Complemento
Componente
PM
(kDa)
Cadenas
N kDa
kDa
Cromosoma
humano
Concentracin
(ug/ml suero)
A: 26.5
B: 26.5
C: 24
1
1
1
80
---
Sustrato
C1q
462
18(6A+6B+6C)
C1r
C1s
C4
83
83
205
1
1
3 (,,)
--: 97
: 75
: 33
12
12
6
50
50
600
C1r, C1s
C4, C2
---
C2
C3
102
185
1
2 (,)
-: 110
: 75
6
19
20
1300
C3, C5
---
D
B
C5
24
92
190
1
1
2(,)
--: 115
: 75
X?
6
9
1
210
70
B
C3, C5
---
C6
C7
C8
120
110
150
1
1
3 (,,)
--: 64
: 64
: 22
1
5
1
1
9
55
56
55
-------
C9
C1 INH
C4-bp
I
71
110
500
88
1
1
7
2
--55
: 55
: 30
5
11
1
4
59
200
250
35
------C4b, C3b
S
P
H
CR1
DAF
83
220
150
205
73
1
4
1
1
1
-56
----
17
20
1
1
1
505
5
560
---
-----------
*Se designa como substrato slo a aquellas molculas que son degradadas proteolticamente
333
Sin ttulo-2
333
5/26/06, 10:26 AM
De acuerdo a lo mencionado, muchas de las

serino proteasas del sistema complemento circulan como precursores no funcionales (zimgenos).
La activacin del complemento puede ser definida entonces como una cascada de reacciones en
que precursores enzimticos no funcionales son
activados por proteolisis limitada y especfica en
un proceso unidireccional e irreversible. As, la
protena que en una etapa es substrato, al sufrir la
ruptura de un enlace peptdico se transforma en
una enzima nueva, a veces alterando sutilmente su
especificidad enzimtica, lo que le permite actuar
sobre un substrato distinto. La consecuencia principal de esto es que un pequeo estmulo inicial
puede ser amplificado tremendamente (efecto de
cascada). Mecanismos de este tipo evidentemente
requieren de un sistema de control riguroso, que
opera en diversas etapas de la cascada.
Una caracterstica muy interesante del sistema del complemento es que, incluso en ausencia
de estmulo, muchas protenas circulan en el
plasma ya laxamente asociadas entre s, listas para
actuar, tal es el caso de:
procedimientos bioqumicos estndares.

Las enzimas (convertasas de C3 y de C5) participan en la cascada, son complejas y se generan
durante la activacin:
a) En la ruta clsica, la convertasa de C3 (C4b,
C2b), generada por la accin secuencial de C1
sobre C4 y C2 (figura 18-2), acta sobre C3
generando dos fragmentos, C3b y C3a.
a) C1q, C1r, C1s (todos necesarios para la activacin de C4 y C2).

b) C4, C2, C4bp (C4 y C2 forman la convertasa
clsica de C3. C4-bp es cofactor de I para
inactivar a C4).
c) C3, P, B (participan en la convertasa alterna de
C3).
d) C5, C6, C7, C8, C9 (Forman el "killer
complex" o Complejo de Ataque de Membranas,
MAC).
El sitio enzimtico activo de la C3 convertasa

est localizado en el fragmento C2b. C2 y C4
circulan preasociados. C4 al liberar su fragmento
C4a, por accin de C1s, cambia en su conformacin terciaria y esto induce un cambio en la
conformacin de C2 el que, al igual que C4, expondra un sitio susceptible de ser digerido por
C1s. C4 se une covalentemente a estas membranas. A su vez, C2 slo puede unirse a travs de C4
a la membrana que est siendo atacada.
C2b, disociado de C4b, es prcticamente inactivo, debe combinarse con C4b para poder actuar sobre C3. Se cree que la funcin de C4b en la
C3 convertasa es modular (acomodar) al
substrato C3 en la posicin adecuada para ser
digerido por C2b. En otras palabras, C4b es un
cofactor enzimtico: es esencial para que la
subunidad cataltica C2b pueda romper un enlace
peptdico en C3.
La C3 convertasa genera muchos fragmentos C3b. La mayor parte de ellos pasa a la fase
fluida, una proporcin menor acta como
opsoninas y tambin para direccionar antgenos
hacia rganos linfoides
Se trata entonces de un conjunto de verdaderos organelos flotantes, dispersos en el plasma,

listos para actuar. En general, varios de ellos
copurifican, cuando se intenta aislarlos por
b) C5 convertasa clsica: Como paso posterior a

la activacin de C3 en la ruta clsica, ocurre la
generacin de la convertasa de C5 de la misma
ruta (figura 18-3).
Figura 18-2. Esquema simplificado de la generacin de la convertasa de C3.
334
Sin ttulo-2
334
5/26/06, 10:26 AM
Figura 18-3. Esquema simplificado de la generacin de la convertasa de C5.
Una proporcin menor de los fragmentos

C3b, generado por la convertasa respectiva, se
asocian a la misma. Se produce as un cambio en
la especificidad del sitio enzimtico presente en
C2b. El complejo tendr ahora especificidad por
C5, ya sea a travs de la modulacin de C2b por
C3b (modulacin de enzimtica) o de la modulacin de la molcula de C5 (modulacin de
substrato), al contactar con C3b.
o como opsoninas se unen indeleblemente a una

variedad de agresores. Como puede predecirse,
la formacin de estos enlaces requiere proximidad entre C3 o C4 con clulas. La reaccin puede
ocurrir con estructuras aceptoras presentes en diversos patgenos, aunque accidentalmente puede
involucrar a membranas de clulas del hospedero. Es inespecfica, desde el punto de vista
inmunolgico. Esta proximidad, calculada en 40
nm desde la convertasa o desde C1s (lugares en
que se genera C3b y C4b, respectivamente), es un
elemento clave del sistema que centra la accin
en las membranas atacadas y no sobre membranas vecinas inocentes.
En humanos existen dos isotipos de C4, codificados en el complejo HLA. Mientras el enlace tioster del isotipo C4A reacciona directamente con nuclefilos aminos de la superficie atacada, el isotipo C4B es ms complejo. Una vez
activado (por digestin de su cadena por C1s),
la histidina en posicin 1106 (cido asprtico en
C4A) ataca al enlace tioster formando un intermediario acil-imidazol. E tiol liberado acta luego como una base para catalizar la transferencia posterior del grupo acil a nuclefilos
hidroxlicos, incluyendo el agua.
Es posible que estos mecanismos bsicos
tambin operen en otras especies. De hecho, en
el ratn tambin existen dos isotipos de C4, codificados en el complejo H2.
Los vertebrados disponen as de un mecanismo defensivo de alta eficiencia que les permite unir covalentemente, C3b y C4b a la superficie atacada. Estos conceptos se resumen en
la figura 18-4.
2.1. Generacin de enlaces covalentes por parte de C3b y C4b, al reaccionar con estructuras de las superficies atacadas por el sistema
Uno de los aspectos ms importantes y caractersticos del sistema del complemento es que,
despus de la activacin, las molculas de C3b y
C4b tienen un tiempo muy corto (fracciones de
segundo) para unirse covalentemente a la membrana atacada. Si no lo hacen, decaen. A nivel
molecular, esto significa que el sitio de unin
neoformado tiene vida corta. Este sitio es
hidroflico y aparece despus de la fragmentacin
de las molculas por C1s (C4) o por C4b,2b (C3).
En el centro de la cadena alfa de C3 y C4,
se encuentra un enlace tioster, formado por
interaccin del grupo carboxilo de un cido
glutmico y el grupo sulfhidrilo de una cistena.
(Este tipo de enlace tambin es compartido por la
2-macroglobulina, un inhibidor de proteasas). La
activacin de estos enlaces es uno de los eventos
ms importantes en el plasma para la eliminacin
de agresores que activan al complemento. Se generan as enlaces covalentes de tipo hidroxister
o amidoster con grupos hidroxilos y aminos presentes en las superficies antignicas agresoras. De
esta manera, C3b y C4b, presentes en convertasas
335
Sin ttulo-2
335
5/26/06, 10:26 AM
Figura 18-4. Generacin de enlaces covalentes entre componentes activados y superficies receptoras.
En concordancia con lo anterior, C3 y C4 pueden

ser inactivados por amonio o hidrazima
(H2NNH2), que pueden atacar nucleoflicamente
el enlace tioster.
2.2. Las C3 y C5 convertasas de las rutas
clsica y alterna son funcionalmente
homlogas
Esta homologa se basa en que ambos tipos
de convertasas (clsica y alterna) generan productos idnticos (figura 18-5) y sus componentes tienen homologa estructural y gentica.
Basado en estos resultados se puede proponer que:
Figura 18-5. Resumen de los productos generados por las
convertasas de C3 y C5 de las rutas clsica y alterna.
336
Sin ttulo-2
336
5/26/06, 10:26 AM
a) Es posible que C3 y C4 sean productos de genes

duplicados ya que existe alta homologa de secuencia primaria en los vecindarios de los enlaces tioster en la cadena alfa de ambas molculas. En otras palabras, la homologa va ms all
de la presencia del cido glutmico y de la cistena
involucrados en el enlace.
b) En ambas convertasas de C3, C3b o C4b actan como cofactores de las enzimas (C2b o Bb).
c) Es posible que tanto en las C3 convertasas
como en las C5 convertasas de ambas rutas, las
proenzimas (C2, B) sean productos de genes duplicados.
d) Las convertasas de C5 clsicas y alternas no
difieren en lo fundamental. En la alterna, C4b
es reemplazado por molculas de C3b que,
posiblemente, representan una duplicacin gnica
de C4 o viceversa.
Figura 18-6. Estructura de C1q.
e) Los productos de la accin de las convertasas

clsicas y alternas son los mismos.
porcin resiste la accin de colagenasas y conserva la capacidad de unirse a complejos antgeno
anticuerpo an despus de tratada con la enzima.
C1r y C1s se unen a la porcin fibrilar de
C1q, en forma no covalente. Por su parte, C1q se
une, en forma no covalente, a travs de sus porciones globulares, a las molculas de anticuerpo del complejo antgeno-anticuerpo. Especficamente, C1q se une al dominio CH2 de la porcin Fc de la molcula de anticuerpo. Se une
eficientemente a IgG1,2,3. Complejos inmunes
formados por IgG4 no activan al complemento.
Las IgG no activan al complemento cuando
estn libres en el suero porque C1q debe formar
un complejo con 2 molculas de Ac cuyos fragmentos Fc deben estar a una distancia crtica de
30-40 nm. Se ha demostrado experimentalmente
que el nmero de pares de molculas de IgG
adecuadas para unir C1q, aumenta exponencialmente cuando el nmero total de molculas
de IgG unidas aumenta linealmente. Ej: En un
glbulo rojo que tiene 1.000 molculas de IgG
unidas, slo un 1% forma pares adecuados (problema estadstico que asume que los antgenos
estn distribuidos al azar en la superficie). Este
1% aumenta al 20% cuando se unen 2.000 molculas de IgG por glbulo rojo.
En la IgM los fragmentos Fc estn a una distancia adecuada, ya que es un pentmero de
monmeros de inmunoglobulina tetramrica. Sin
embargo, no activa al complemento cuando se
3. RUTA CLSICA: ALGUNOS DETALLES

MOLECULARES
3.1. Unin de C1
La presencia o generacin de complejos antgeno
- anticuerpo desencadena la cascada a travs de la etapa de reconocimiento, que requiere la participacin
de C1. C1 est formado por las subunidades q, r, s.
El reconocimiento mismo es efectuado por C1q. Al
microscopio electrnico, C1q tiene una estructura
con un notable parecido a un ramo de 6 tulipanes.
La figura 18-6 resume estos conceptos.
Cada una de las seis unidades de C1q (cada
tulipn) consta de una porcin fibrilar y una porcin globular, participando tres tipos de cadenas
de peso aproximado a 25 kDa. C1q tiene entonces
18 cadenas, lo que da un peso total aproximado
de 400 kDa. Las cadenas (A,B,C) son muy similares, pero no idnticas y probablemente representan el producto de tres genes duplicados
(ligados en la cromosoma 1 en humanos). Los
tulipanes estn unidos en pares a travs de sus
cadenas C, por lo cual hay tres dmeros C-C y seis
dmeros A-B. Todos unidos por puentes disulfuro.
La parte fibrilar tiene una estructura similar
al colgeno por lo cual es sensible a la colagenasa.
La parte globular es la responsable del reconocimiento de los complejos antgeno-anticuerpo. Esta
337
Sin ttulo-2
337
5/26/06, 10:26 AM
encuentra libre en el suero. Se sabe tambin que

una sola de estas molculas es suficiente para lisar
un glbulo rojo (de all que se dice que es
hemolticamente ms eficiente que la IgG y que,
incluso, se la llame hemolisina). La IgM, al reaccionar con antgenos sobre una membrana celular cambia su estructura plana a una forma
tridimensional, semejante a un corchete, exponiendo el dominio CH3 que une la porcin globular
de C1q. Con antgenos solubles, o en ausencia de
antgenos, tender a asumir la forma plana. La IgM
es la molcula diseada para mediar el ataque
temprano de membranas biolgicas por parte del
complemento.
C1s y C1r son serino esterasas. Se unen
no covalentemente a la porcin fibrilar de C1q,
en forma de dmeros de frmula 2C1r: 2C1s,
generando un tetrmero lineal (figura 18-7). Las
molculas de C1s estn en los extremos de la
cadena que tiene una longitud de 50 nm. La
estructura y contenido aminoacdico de ambas
es parecido, lo que sugiere que se originaron por
duplicacin gnica. Cada monmero tiene un
peso de 83 kDa y est formado por una sola cadena polipeptdica. Al activarse, cada cadena se
fragmenta y el sitio cataltico aparece en el fragmento menor. Este y el mayor permanecen unidos por un puente disulfuro, lo cual implica
la existencia de al menos una cistena en cada
fragmento. Esto permite que la actividad
enzimtica se mantenga incorporada al complejo C1q-Ac-Ag.
Se desconoce el mecanismo exacto de la
autoactivacin de C1r que ocurre cuando la porcin globular de C1q interacta con los fragmentos Fc de los complejos inmunes. La explicacin
ms aceptada es que C1r, como muchos otros

zimgenos, tendra una capacidad limitada de
autoactivarse. Esta posibilidad se basa en la observacin que C1r purificado forma dmeros en
solucin y que en estos dmeros se produce la
autoactivacin, o sea que cada miembro del par
es capaz de activar al otro. Es posible entonces
que cuando C1 se combina con los complejos inmunes, a travs de la porcin globular de C1q, las
relaciones espaciales en el tetrmero 2(C1r:C1s)
sean favorables para que se produzca la
autoactivacin de por lo menos una molcula de
C1r, la que podra activar a la otra. Las dos molculas de C1r activado estaran as en condiciones
de activar a las dos molculas de C1s. Evidentemente, este mecanismo implica una considerable
flexibilidad dentro del tetrmero para que se realice la activacin o autoactivacin, considerando
que las molculas de C1r estn en los extremos
del mismo.
3.2. Activacin de C4 y C2
Esta etapa cumple al menos 3 funciones, todas derivadas de la asociacin covalente de C4b y
C3b sobre la superficie activante:
a) Se facilita la fagocitosis a travs de la unin a
los receptores para C3b y C4b presentes en la superficie de los fagocitos profesionales (CR1).
b) Se genera C3 y C5 convertasas, utilizando C4
y C2, de modo que la activacin pueda proseguir
hasta la activacin de C3 y C5.
c) El depsito covalente de C3 y C5, direcciona
los antgenos hacia rganos linfoides, facilitando as la induccin de la respuesta inmune especfica.
La molcula de C4 no es una enzima sino
que acta como matriz o cofactor positivo para el
ensamblaje de las C3 y C5 convertasas. Es una
molcula extremadamente verstil. Tiene al menos siete dominios importantes y topogrficamente diferentes que le permiten interactuar con:
a)
b)
c)
d)
Figura 18-7. Unin de C1s y C1r a C1q.
C1s de la ruta clsica, o MASP de la ruta de

las lectinas, lo que determina su activacin.
Membranas biolgicas atacadas (unin
covalente).
C2, para formar la convertasa de C3.
CR1, de clulas fagocticas, lo que le permite
actuar como opsonina.
338
Sin ttulo-2
338
5/26/06, 10:26 AM
e)
f)
g)
presente en fase fluida, generando gran cantidad

de C3b. C3 es digerido en su cadena alfa por el
sitio cataltico presente en C2b del complejo
C4b,2b (C3 convertasa). Esta etapa tiene al menos 3 funciones, derivadas tambin del depsito
covalente de C3b sobre membranas biolgicas:
C4bp, lo que media su inactivacin, cuando

pasa a fase fluida.
I, lo que media su inactivacin en fase fluida,
cuando es reconocido por C4bp.
C3, requisito para la activacin de ste por parte
de C2b. As, C3 puede actuar como opsonina,
o formar parte de la convertasa de C5.
a) Facilitar la fagocitosis.
Una vez iniciada la activacin de C4 y C2, la
reaccin puede ocurrir en muchos puntos de la
membrana simultneamente, alejndose en forma
radial desde el punto en que se produjo la reaccin Ag-Ac (figura 18-8).
La fragmentacin de C4 en C4b + C4a es un
punto de amplificacin de la cascada. As, por
cada molcula de C1s activado se generan alrede-
b) Proporcionar un sitio de unin para C5, de manera tal que C5 es modulado y puede ser digerido
por C2b presente en la nueva convertasa generada (convertasa de C5 o C4b,2b,3b).
c) Direccionar antgenos hacia rganos linfoides,
facilitando as la induccin de la respuesta inmune adquirida. Esta funcin sera compartida con
Figura 18-8. Esquema de la secuencia desde el reconocimiento antignico hasta la implantacin del Complejo de Ataque a
Membrana.
dor de 30 molculas de C4b que se unirn a la

membrana, lo que representa no ms del 5% del
C4b generado por esa molcula de C1s.
Qu ocurre con los C4b que pasan a la fase
fluida? Para evitar el ataque a membranas propias,
inocentes, vecinas, es importante inactivarlos.
C4, dado que el receptor CR1 de los linfocitos B

es comn para C3b y C4b. C3 es una molcula de
190 kDa, sintetizada como una sola cadena que es
luego digerida a una cadena alfa de 115 kDa y una
cadena beta de 75 kDa, que permanecen unidas
por puentes disulfuro.
Hoy, existe considerable evidencia que los
genes estructurales de C3 y C4 se originaron por
duplicacin. Esta aseveracin se basa en que, aparte de la importante homologa gnica, son
funcionalmente anlogos: Se unen covalentemente
Las molculas de C3 convertasa generadas
sobre la membrana biolgica reaccionarn con C3,
339
Sin ttulo-2
339
5/26/06, 10:26 AM
a las superficies celulares y son capaces de generar

las C3 y C5 convertasas por accin de dos serino
proteasas que tambin son anlogas (C2b y Bb).
El 10-15% del total del C3b generado se une
a las clulas. Es otro paso de amplificacin ya que
aproximadamente 200 molculas de C3b se depositan sobre la clula por cada C3 convertasa. Al igual
que en el caso de C4b, la gran cantidad de C3b que
pasa a la fase fluida debe ser inactivada.
c) La corta vida de los sitios de unin de C3b y

C4b restringe la unin de estas molculas a un rea
circular de 40 nm de radio, cuyo centro est dado
por la molcula de C1s o por la C3 convertasa.
Finalmente, en la figura 18-9 se muestran las
etapas en que ocurre amplificacin.
La C5 convertasa fragmenta a C5 en C5a y
C5b. Este es el ltimo paso enzimtico en la activacin del complemento. C5 circula preasociado
con C6-C7-C8-C9. Al generarse C5b, el complejo C5b-C9 cambia de hidroflico a anfiflico, exponiendo sectores hidrofbicos que le permiten
insertarse en membranas biolgicas.
C6, C7, C8 y C9 en el complejo destructor
MAC se encuentran en proporciones estequiomtricas definidas. C9 se polimeriza alrededor de
un pilar formado por C5b-C8, formando una especie de tubo que se inserta en la membrana. Esta
estrategia es similar a la usada por las clulas T
killer o citotxicas y NK que destruyen a la clula
blanco insertando una estructura tubular (perforina)
en sus membranas plasmticas. Es un verdadero
misil que las clulas T insertan en las membranas
que ellas, con sus receptores especficos, reconocen como extraas. Esta estructura tubular tiene
una notoria similitud al MAC.
En la membrana celular atacada por la activacin de la ruta clsica podemos distinguir tres
tipos de sitios topogrficamente definidos. El primero, donde se realiza el reconocimiento
antignico por los anticuerpos; el segundo, donde
se generan las C3 y C5 convertasas y, el tercero,
donde se inserta el MAC.
Figura 18-9. Etapas de amplificacin en la activacin del Sistema del Complemento.
3.6. Ruta de las lectinas

La ruta de las lectinas, descrita ms recientemente, puede considerarse como un
bypass de la ruta clsica. Al igual que la
ruta alterna, se activa en forma independiente
de anticuerpos. Cuando los macrfagos
fagocitan bacterias u otros agentes agresores,
son estimulados para secretar citoquinas como
IL-1, IL-6 y TNF. stas actan sobre los
hepatocitos, los que responden produciendo
protenas de fase aguda, entre las cuales se
encuentra la lectina que une manosa (mannose
binding lectin o MBL).
Siendo la manosa un componente principal
de las glicoprotenas de la pared bacteriana (y
probablemente de otros agresores), la MBL se
une a las bacterias y otros patgenos, actuando,
no slo como una potente opsonina, sino tambin mediando la activacin del complemento.
Concretada esta unin, un complejo proenzimtico, unido en forma dimrica a MBL (MBL
-associated serine protease o MASP) se activa,
actuando sobre C4 y C2, en una manera aparentemente idntica a como lo hace C1s activado,
presente en el complejo macromolecular C1qC1r2-C1s2 (figura 18-10).
3.5. Mecanismos que confinan la activacin del

complemento a las membranas blanco
(target) o culpables, en la ruta clsica.
a) La activacin de C1 requiere la unin de por lo
menos un par de inmunoglobulinas a una distancia crtica o de una molcula de IgM unidas a la
superficie antignica.
b) Slo C2b, modulado por combinacin con C4b
unido a superficies antignicas, puede formar las
C3 y C5 convertasas.
340
Sin ttulo-2
340
5/26/06, 10:26 AM
Figura 18-10. Ruta de las lectinas. La manosa de la superficie bacteriana se une a MBL (mannose binding ligand). La MASP2
(MBL-associated serine protease, forma dimrica), forma complejo con MBL (MBL - MASP2) que hidroliza a C2 y C4. Se
muestra adems la activacin de la ruta clsica a travs de un complejo antgeno-anticuerpo (Ag-Ac).
Parece, entonces, que habra similitudes funcionales y estructurales importantes entre los complejos C1q-C1r2-C1s2 y MBL-MASP2. As, MBL
tiene similitudes estructurales importantes con C1q
(de hecho, al microscopio electrnico, tambin
presenta una estructura semejante a un ramillete
de tulipanes) y, en MASP2, un monmero sera
similar a C1r y, el otro, a C1s. La deficiencia de
MBL ha sido asociada con susceptibilidad a un
amplio rango de enfermedades bacterianas.
MBL tambin puede unirse a IgA polimrica,
induciendo la activacin del complemento, lo cual
podra explicar mecanismos defensivos mediados
por IgA, a nivel de mucosas.
especficos, caracterstica fundamental de esta ruta,

al igual que la ruta de las lectinas. Difiere de la
ruta clsica mediada por anticuerpos, en que
proporciona una lnea de defensa que est inmediatamente disponible pues no requiere de inmunizacin previa. Participan en ella seis protenas
plasmticas: C3, B, D, H, I y P. De stas, B, D y P
participan exclusivamente en esta ruta. Las seis
protenas realizan una vigilancia continua que escapa un poco a los conceptos inmunolgicos convencionales. Por ello, esta ruta y la de las lectinas
corresponden esencialmente a mecanismos de inmunidad innata
Cmo ocurre la discriminacin entre molculas del hospedador y molculas extraas si no
participan los anticuerpos?
Una de las consecuencias inevitables del inicio de los mecanismos de amplificacin descritos, anteriormente, es la generacin de una gran
cantidad de molculas C3b que se unen
indiscriminadamente a clulas del organismo
4. ACTIVACIN DE LA RUTA ALTERNA

La ruta alterna proporciona al hospedador un
mecanismo de defensa innata, muy efectivo. Este
mecanismo se realiza en ausencia de anticuerpos
341
Sin ttulo-2
341
5/26/06, 10:26 AM
agresor activador y a clulas del hospedador (no

activadoras o inocentes o bystanders). En el
hospedador existe una serie de protenas
reguladoras que inactivan rpidamente a las molculas de C3b que atacan a sus propias clulas.
Estas protenas reguladoras estn presentes en el
plasma y tambin como protenas integrales de las
membranas celulares del hospedador.
Los organismos sensibles al ataque de la ruta
alterna incluyen bacterias, hongos, virus, clulas
tumorales inducidas por virus, otras lneas de clulas tumorales y eritrocitos humanos carentes de
DAF (factor acelerador del decaimiento de
convertasas).
El C3b que se deposita en estos tipos de partculas puede funcionar como opsonina o pasar a
formar parte de C3 o C5 convertasas alternas. Las
C3 convertasas neoformadas pueden generar ms
C3b que se deposita hasta que la superficie es saturada o hasta que se agota el stock de C3. La ruta
alterna del complemento puede depositar hasta 2
millones de molculas C3b en la superficie de un
glbulo rojo en un perodo menor de 5 min.
Las caractersticas principales de las protenas que participan en la ruta alterna son las siguientes:
B:
Contiene histidina, cido esprtico y serina

en posiciones homlogas con otras serino
proteasas. Sin embargo, en el extremo
amino terminal tiene 300 residuos adicionales con secuencia diferente a las de otras
serino proteasas. Esta es tambin una caracterstica de C2.
D:
Circula en forma activa. Es una proteasa

altamente especfica, ya que su nico
substrato conocido es B. Rompe un enlace
Arg-Lys en B slo cuando est unido a C3b,
liberando el fragmento Bb. Juega un papel
similar al de C1s de la ruta clsica. No se
sabe si hay homologa de secuencia primaria entre estas dos enzimas.
H:
Cofactor regulador negativo. Se une a C3b

y slo en estas condiciones, la cadena alfa
de ste se torna sensible a la digestin por I.
I:
Serino proteasa que acta como factor regulador negativo. Digiere las cadenas alfa
de C3b y C4b. Requiere de los cofactores
H, (sobre C3b), CR1 (sobre C3b y C4b,
ambos unidos a membranas) y C4-bp (sobre C4b, en fase fluida), para ejercer su funcin enzimtica.
P:
Regulador positivo. Existe en dos formas,

activa e inactiva. Se activa en presencia de
C3b,Bb (C3b convertasa alterna) y
estabiliza este complejo. Tambin estabiliza
a la C5 convertasa alterna, (C3b)n,Bb, (n>1)
4.1. Activacin de la Ruta Alterna

Se desconoce el mecanismo exacto de generacin de las primeras molculas de C3b
metaestables (enlace tioster activado). Est claro que participan slo las seis molculas mencionadas. Los pasos ms aceptados se ilustran en la
figura 18-11.
Se distinguen cuatro etapas: Iniciacin, Depsito de C3b, Reconocimiento y Amplificacin.
a) Iniciacin. En la Iniciacin se generara una
forma de C3 alterado por hidrlisis de su enlace
tioster (sin proteolisis de la cadena alfa, como
ocurre en la ruta clsica y en la ruta de las lectinas).
Designaremos a este C3 como C3(H20). Se formara muy lentamente en soluciones acuosas fisiolgicas (0,005% del C3 disponible) o 50 - 100
ng/ml (cercano a la concentracin de D). La
concentracin de C3 es 1 - 2 mg/ml en todas las
especies vertebradas estudiadas.
En la ruta alterna, C3(H2O), tendra todas las
propiedades funcionales de C3b excepto que, por
un perodo corto de tiempo, esta protena sera
resistente a la inactivacin por H e I, dado que
mantiene intacto el extremo amino terminal de su
cadena alfa. C3(H2O) forma un complejo con B
nativo, en presencia de concentraciones fisiolgicas de Mg2+. Esta propiedad aparece inmediatamente despus de la hidrlisis del enlace tioster.
El complejo C3(H2O),B es activado por D formndose una C3 convertasa de fase fluida C3(H2O),
Bb. (Ntese que en esta enzima C3 no ha sido digerido proteolticamente). Esta C3 convertasa de fase
fluida es la primera enzima capaz de generar C3b
metaestable. La enzima misma est confinada a la
fase fluida (a diferencia de la ruta clsica y de las
lectinas, donde la C3 convertasa, C4b, 2b, est confinada a la superficie de la clula atacada, unida
covalentemente a travs de C4b). El C3b metaestable
generado puede difundir durante 60 seg, hasta encontrar una superficie receptiva.
Ntese que la iniciacin no necesita de partculas activantes, es espontnea, y estara ocurriendo siempre. Se podra decir que la ruta alterna est siempre iniciada. Si contina o no depender de la naturaleza de la superficie receptiva.
342
Sin ttulo-2
342
5/26/06, 10:26 AM
Figura 18-11. Activacin de la Ruta Alterna. En este proceso se distinguen 4 etapas: Iniciacin, Depsito de C3b, Reconocimiento y Amplificacin.
b) Depsito de C3b. La habilidad del enlace

tioster del C3b metaestable para reaccionar con
una amplia variedad de carbohidratos (grupos
hidroxilos), protenas (grupos aminos), capacita a
esta ruta para depositar C3b sobre una amplia gama
de microorganismos. Es muy posible entonces que
el primer factor de resistencia del hospedero que
encuentra un microorganismo invasor, es C3b,
generado constantemente por C3(H2O), Bb en fase
fluida. C3b se unir covalentemente a su superficie y lo har apetecible para los fagocitos profesionales.
Una caracterstica muy particular de la ruta
alterna es que el depsito covalente de C3b parece continuo e indiscriminado tanto sobre las clulas del hospedador como sobre las de los organismos agresores. El hospedador resuelve este problema con molculas reguladoras negativas que
inactivan a C3b. Ms adelante se ver cmo se
resuelve este problema.
activadores y no activadores ocurre poco despus

del depsito inicial de C3b. Esta discriminacin
es el resultado de una capacidad diferencial de los
factores reguladores para controlar el proceso de
amplificacin, dependiendo si se trata de una superficie activadora o no activadora. En general,
C3b en fase fluida y C3b unido a superficies o
membranas del hospedador (no activadores por
definicin) es rpidamente inactivado por H e I.
En cambio, cuando C3b se une a partculas invasoras activantes, la C3 y C5 convertasas son protegidas de la destruccin mediada por las protenas reguladoras de la fase fluida. Aparentemente,
esto es determinado por la eficiencia con que el
factor H pueda interactuar con el C3 unido a la
superficie. As, se ha determinado que C3b, unido a superficies activantes, no muestra afinidad
por el factor H, mientras que su afinidad por el
factor B y la properdina permanece inalterada. En
otras palabras, la habilidad para distinguir entre
superficies activadoras y no activadoras de la ruta
alterna es un atributo de C3b o de H o de ambos y
c) Reconocimiento. La discriminacin entre
343
Sin ttulo-2
343
5/26/06, 10:26 AM
este atributo es expresado o modulado por caractersticas bioqumicas de la superficie de la partcula.

An no est claro qu estructuras moleculares son reconocidas por la ruta alterna. Un aspecto comn de todos los activadores es la presencia de carbohidratos, pero la gran variedad y
complejidad de las estructuras glucosdicas hace
difcil visualizar cules son los determinantes
moleculares compartidos que son reconocidos. Un
aspecto comn a la mayora de los activadores es
la presencia de concentraciones muy bajas de cido silico. Es notorio el hecho que los glbulos
rojos de oveja, que activan muy mal la ruta alterna humana, se convierten en activadores eficientes si se elimina o modifica el cido silico de su
superficie, por ej. con neuraminidasa. Es poco
probable, sin embargo, que ste sea el nico factor implicado. Es posible que el cido silico cumpla una funcin moduladora cuyo mecanismo no
est definido.
miento, c) Aumenta exponencialmente, debido a

la amplificacin o retroalimentacin y, d) Alcanza un plateau, correspondiente al agotamiento de
componentes o de receptores de superficie.
La vida media de C3b,Bb (Mg2+) es alrededor de 90 segundos. La presencia de concentraciones fisiolgicas de H acelera la disociacin del
complejo, bajando la vida media a menos de 1 segundo.
d) Amplificacin y Regulacin La retroalimentacin positiva, dependiente de C3b, es una caracterstica exclusiva de la activacin de la ruta
alterna del complemento, o sea, la convertasa de
C3 es capaz de generar muchas molculas de C3b
que tienen la capacidad potencial de generar nuevas convertasas de C3 y C5. Es importante sealar que D convierte B en Bb slo cuando ste est
unido a C3b. Este proceso es controlado por los
factores H e I. As, C3b depositado en una superficie activadora es relativamente resistente a la
inactivacin por H e I. Lo mismo ocurre con las
convertasas de C3 que se generen sobre este tipo
de superficie. Este balance entre amplificacin y
control permite a la ruta depositar C3b de la fase
fluida al azar sobre partculas activantes y no
activantes. Sin embargo, tambin le permite, amplificar slo aquellas pocas molculas que se han
unido a superficies activantes.
La convertasa de C3 estabilizada, C3b, Bb,
P, al actuar sobre C3, genera una gran cantidad de
fragmentos C3b parte de los cuales, en presencia
de Mg2+, pueden combinarse con el factor B que
se hace sensible a la accin de D. Se genera as la
convertasa de C3 alterna que puede repetir el proceso.
En sntesis, el depsito de C3b sobre partculas activadoras tiene cuatro caractersticas importantes: a) Depende del tipo de partcula
activante, b) Tiene un perodo de latencia, probablemente correspondiente a la etapa de reconoci-
5. FASE TERMINAL: GENERACIN DEL

COMPLEJO DESTRUCTOR DE MEMBRANAS
4.2. Papel de la properdina

La properdina se une slo a la convertasa de C3 o
de C5 alterna que se encuentran unidas a membranas. Su participacin comienza slo despus
que se ha iniciado el proceso de amplificacin.
As, C3b,Bb,P tiene una vida media dos logaritmos
ms larga que C3b,Bb. Este efecto condujo a algunos investigadores a creer que la ruta alterna no
poda ser activada en ausencia de properdina.
En esta fase participan siete componentes del

Sistema del Complemento (tabla 18-2).
El ensamblaje del MAC puede visualizarse
en dos etapas: a) ensamblaje del complejo C5b-8
y b) polimerizacin de C9.
5.1. Generacin de C5b-8
C5 no tiene enlace tioster a pesar de tener
homologa de secuencia primaria con C4, C3 y
alfa 2 M. Por lo tanto, no forma enlaces covalentes
con membranas. El pilar C5b-8 se encuentra unido, por medio de C5b, a C3b de las convertasas
de C5 clsica o alterna. A su vez, ese C3b se encuentra unido covalentemente a la superficie de
la clula agresora.
Los componentes terminales del complemento son hidroflicos en su estado no activado. Para
expresar su funcin, consistente en destruir o alterar drsticamente las membranas externas de
los organismos invasores, estos componentes deben sufrir una transicin del estado hidroflico o
un estado anfiflico, para poder insertarse en la
fase lipdica de las membranas. Esta transicin es
una caracterstica que define a las protenas terminales del complemento. Bsicamente, implica
una serie de interacciones protena-protena que
344
Sin ttulo-2
344
5/26/06, 10:26 AM
Tabla 18-2. Propiedades de las protenas terminales del Complemento

Componente
Subunidades
Peso molecular
(kDa)
C5
alfa
(S-S)n
beta
124
C6
1 cadena
120
C7
1 cadena
110
C8()
alfa
(S-S)n
gamma
64
C8()
beta
64
C9
1 cadena
73
1 cadena
80
76
22
S-S : Puente disulfuro.
se traducen en el ensamblaje de complejos

macromoleculares heteropolimricos que expresan simultneamente dominios hidroflicos e
hidrofbicos.
La activacin proteolitca de C5 es realizada
por cualquiera de las dos C5 convertasas. C5 se
une a C3b de la C5 convertasa donde sufre modulacin de substrato y posterior accin proteoltica,
ya sea por parte de las sub-unidades catalticas
C2b (clsica) o Bb (alterna). Como productos se
libera C5a y el fragmento C5b permanece unido
a la sub-unidad C3b de la C5 convertasa y modula a C6, para iniciar la formacin de un pilar (formado por C5b a C8) sobre el cual se ordenar C9
para formar el tbulo. C5-C9 circulan
preasociados laxamente, con caractersticas
hidroflicas.
C5b se une estequiomtricamente con C6.
El complejo C5b-6 permanece an unido al C3b
de la convertasa y modula a C7 producindose
una transicin irreversible de un complejo
hidroflico a un complejo anfiflico. Esta es la primera oportunidad en la activacin del complemento en que se realiza la transicin hidroflica anfiflica.
Considerando que C5b est unido al C3b de
las convertasas, este complejo est muy prximo
a la membrana por lo cual la insercin es muy
eficiente y se acerca al 100%. Por otra parte, si la
superficie activante no es parte de una membrana

fosfolipdica, como el caso de los complejos inmunes y las membranas de ciertos tipos de hongos, como el zimosan mismo, C5b-7 no tendr
dnde unirse y el complejo ser liberado a la fase
fluida. Este complejo es peligroso para el
hospedador pues puede insertarse en membranas
inocentes vecinas y generar el MAC. Esto es evitado por un conjunto de protenas plasmticas o
inhibidores de C5b-7.
C8 se une al pilar heteropolimrico a travs
de su subunidad beta. C8 alfa-gama es necesario
para iniciar la polimerizacin de C9. Por lo tanto,
ambas unidades, la beta y la alfa-gamma son necesarias para que C8 exprese su funcin. Un defecto gentico en cualquiera de los tres genes
involucrados en la generacin de las 3 cadenas de
C8, resulta en la incapacidad de formar el MAC,
con las consecuencias patolgicas que corresponde (susceptibilidad aumentada a una serie de infecciones bacterianas). La porcin alfa-gamma de
C8 pasa a formar parte del dominio hidrofbico
del heteropolmero.
5.2. Polimerizacin de C9
C9 monomrico es hidroflico, globular de
50-80Ao de dimetro. Si se incuba en forma pura
a 37oC, en condiciones fisiolgicas, se produce la
345
Sin ttulo-2
345
5/26/06, 10:26 AM
polimerizacin de aproximadamente 17 molculas, generando un complejo tubular anfiflico (poli

C9). La velocidad de polimerizacin es fuertemente aumentada in vitro si se incluye C5b-8.
Poli C9 tiene una estructura de 160Ao de largo, 100A o de luz y est formado por 17
protmeros. Este tbulo tiene un dominio
hidrofbico localizado en la cara externa de uno
de los extremos del homopolmero y un ensanchamiento en el otro extremo. El interior del tbulo
parece ser hidroflico. El dimetro de los tbulos
en solucin y el dimetro de las lesiones producidas por el complemento es similar, lo cual indica
que esta estructura forma parte importante del
MAC.
Si poli C9 es agregado a una suspensin de
glbulos rojos inducir la lisis de stos de manera similar a como lo hace el MAC. Esta lisis ocurrir incluso si los glbulos rojos y el poli C9 son
de un mismo individuo. En condiciones fisiolgicas. Esto no ocurre, pues el proceso de
polimerizacin de C9 y su insercin a membranas
biolgicas requiere de la presencia tutelar de
C5b-8, complejo que acta como aceptor de C9.
La polimerizacin de C9 ocurre simultneamente con el desplegamiento de los monmeros
que, en su forma globular hidroflica no activa,
tienen un dimetro de 50Ao. Se genera as una
forma alargada anfiflica de 160Ao de longitud.
El homopolmero tubular formado por C9 en
solucin es resistente a la disociacin por SDS.
La estabilidad del tbulo frente a SDS se explica
por la generacin de enlaces disulfuro entre los
monmeros. Es probable que esta estabilidad
bioqumica de poli C9 es un prerrequisito para que
pueda cumplir su funcin citoltica en el MAC,
resistiendo las defensas proteolticas de las clulas atacadas.
En el MAC, el receptor de poli C9, esto es

C5b-8, es detectado como un apndice de 150 Ao
ubicado en la salida del tbulo. Este apndice se
disocia en presencia de SDS, mientras que la estructura tubular permanece intacta. La estructura
tubular del MAC es diferente a la de poli-C9 ensamblado in vitro. El MAC est compuesto de una
molcula de C6, una de C7, C8 alfa-gamma, C8
beta y 10-17 molculas de C9. Se trata entonces
de una estructura heteropolimrica. La figura 1812 compara la estructura del MAC y de poli C9.
Es muy posible que C6, C7, C8 y C9 sean
protenas codificadas por genes duplicados pues
muestran cierta homologa de secuencia primaria
y reactividad cruzada con algunos anticuerpos.
5.3. Efecto funcional de la insercin del MAC
en las membranas
El MAC, insertado en la membrana, ocupa
una rea del 10.000 (AO)2. Si se insertan grandes
nmeros de este heteropolmero, por ej. sobre
membranas bacterianas, la superficie total de la
bacteria puede aumentar ms de dos veces. Evidentemente, esta expansin dramtica puede ser
devastadora si consideramos slo el efecto mecnico implicado. Si los atacados son glbulos rojos, la insercin de slo 800 MAC har que estas
clulas pierdan su forma bicncava y adoptarn
una forma esfrica. Es muy posible que slo el
efecto mecnico de la insercin de los MACs provoque la muerte celular independientemente de
otros efectos osmticos o metablicos que los canales puedan inducir. Entre estos otros efectos
estn:
1. Entrada de Ca2+ al ambiente intracelular
con la activacin indiscriminada de una variedad
de rutas metablicas.
Figura 18-12. Complejo de ataque a membrana (MAC) comparado con poli C9.
346
Sin ttulo-2
346
5/26/06, 10:26 AM
2. Salida K+, entrada Na+. La clula activa

una serie de mecanismos de bombeo compensatorio lo cual conduce a desembolso indiscriminado de ATP, con altos gastos de energa, sucesos
que pueden acelerar la muerte celular.
Existen algunos tipos celulares que han desarrollado mecanismos de escape al ataque por
MAC. As, las bacterias Neisseria gonorrhea,
Salmonella minesota, ciertos tipos de Escherichia
coli, y algunas lneas de clulas neoplsicas, activan el complemento, hasta la formacin del MAC,
pero, usando diferentes mecanismos, resisten la
accin de este complejo.
6. ALGUNOS ASPECTOS GENTICOS

DEL COMPLEMENTO
5.4. Perspectivas futuras del estudio de la fase

final de la activacin del complemento
C4-bp, H, CR1 (CD35), CR2 (CD21), DAF

(CD55), MCP (CD46): Constituyen un conjunto de protenas reguladoras, que actan ya
sea en fase fluida (C4-bp, H o como molculas integrales de membranas (CR1, CR2, DAF,
MCP). Todas estas protenas presentan propiedades estructurales similares y los genes que
las codifican se encuentran ubicados en un solo
cromosoma (1, en humanos y ratones). Con excepcin de DAF, todos son cofactores de I, ya
sea en fase fluida o en membranas, mediando
as la degradacin de molculas de C3b o C4b
que se hayan insertado accidentalmente en
membranas propias o que hayan pasado a la
fase fluida.
C2, B y C4:. Los genes que codifican C2, B y C4,

sin excepcin, se encuentran en el centro de los
MHC de todas las especies vertebradas estudiadas. Son componentes especiales, porque participan en la formacin de los 2 tipos de convertasas
de C3 y de C5.
C3: El gen que codifica C3 se encuentra en el
cromosoma 17 del ratn, a 13cM de la regin D.
En humanos se encuentra en el cromosoma 19, no
ligado a HLA.
El descubrimiento de la polimerizacin de C9
como el mecanismo subyacente al dao de membranas biolgicas mediado por el complemento
hizo renacer el inters en el estudio de esta fase de
la activacin. Por otra parte, se ha descubierto que
los linfocitos T citotxicos y clulas NK pueden
destruir clulas agresoras o extraas, insertando
en sus membranas protenas citolticas o
perforinas. La perforinas polimerizan en el citoplasma de estas clulas en poliperforinas, en una
manera muy similar a poli-C9. La reactividad
inmunolgica cruzada entre C9 y poliperforina,
sugiere relaciones de homologa entre los genes
que los codifican.
Las imgenes al microscopio electrnico de
lesiones producidas por clulas NK o clulas T
citotxicas y aquellas producidas por el complemento son muy similares.
Probablemente, los mecanismos moleculares
de polimerizacin, cambios conformacionales,
transicin hidroflica-anfiflica, insercin en membranas y formacin de canales transmembranas,
son similares para C9 y perforinas. Es muy probable entonces que C9 y las perforinas sean miembros de familias genticamente relacionadas cuya
funcin es la destruccin de las membranas de
agentes invasores y, posiblemente, de clulas
tumorales.
Evidentemente, existen diferencias importantes en las estrategias seguidas por las perforinas y
por C9 para lograr la insercin del misil en las
membranas extraas, pero el resultado final sera
el mismo: muerte celular. En el primer caso, el
complejo macromolecular citotxico es ensamblado intracelularmente para ser luego transferido a la
clula blanco, que contacta a la clula citotxica.
C8: Est formado por la asociacin del producto

de 3 genes. C8 alfa es codificado en el cromosoma
humano 1 (se desconoce la ubicacin del gen en el
ratn). C8 beta es codificado en los cromosomas 1
y 4, mientras que C8 gamma es codificado en los
cromosomas 9 y 2, en humanos y ratones, respectivamente. A nivel proteico, las cadenas alfa y gamma
estn unidas covalentemente, mientras que la cadena beta se asocia al dmero en forma no covalente.
El dmero y el monmero se ubican en posiciones
diferentes en el pilar molecular C5b C9.
7. COMPLEMENTO Y ENFERMEDAD
El sistema del complemento ha evolucionado como un medio rpido para destruir agentes
agresores, ya sea directamente lisndolos o, indirectamente, mediando la activacin de clulas
fagocticas profesionales. El arte del sistema del
complemento consiste en focalizar la accin ltica
y opsonizante sobre membranas biolgicas de
agresores. Esta tarea no es trivial, considerando
que las distancias entre membranas de clulas pro-
347
Sin ttulo-2
347
5/26/06, 10:26 AM
pias, inocentes, y clulas agresoras, culpables,

son frecuentemente virtuales. Por lo tanto, el complemento puede, accidentalmente, mediar dao a
tejidos propios.
Durante la activacin del sistema se generan
una serie de fragmentos flogsticos que en situaciones particulares pueden mediar inflamaciones
severas.
Ms conocidas son las consecuencias patolgicas de las deficiencias en componentes del sistema. As, las deficiencias de C3, gentica o derivada de la accin de protenas reguladoras, conduce a problemas de opsonizacin, que se manifiestan en susceptibilidad aumentada a una serie
de infecciones. Las deficiencias parciales de MBL
conducen a infecciones piognicas que afectan
principalmente a nios que ya han perdido la inmunidad pasiva materna. Las deficiencias asociadas con componentes del MAC se asocian con
infecciones principalmente con Neisseria.
Deficiencias de C1q, C1r, C1s, C4 y C2: Se
asocian con enfermedades tipo lupus eritematoso
sistmico (SLE). La patogenia de estas enfermedades estara asociada con la capacidad del complemento para solubilizar complejos inmunes.
La deficiencia del inhibidor de C1r y C1s
(C1-INH) conduce a una activacin descontrolada
de las serino proteasas, lo que conduce a
angioedema hereditario, enfermedad que afecta
principalmente a mujeres.
Finalmente, la interaccin de MBL con IgA
polimrica podra explicar el depsito de protenas del complemento en nefropatas mediada por
IgA.
Morgan, B.P. and Harris, C.L., Complement

Regulatory Proteins, Academic Press, N.Y,
USA, 1999.
Morley, B.J. and Walport, M.J., The Complement
Facts Book, Academic Press San Diego, USA,
2000.
Reid, K., The Complement System a Major
Effector Mechanism in Humoral Immunity, The
Immunologist, 3: 206-209, 1995.
Ross, G., Immunobiology of the Complement
System. An Introduction for Research and
Clinical Medicine, Academic Press, INC, 1986.
LECTURAS SUGERIDAS
Abbas, AK.; Lichtman, AH.; Pober J.S., Cellular
and Molecular Immunology, Fourth Edition.
W.B. Saunder Company. Pennsylvania, USA,
2000.
Janeway, Ch.A.; Travers, P.; Walport, M. and
Shlomchik, M., Immunobiology, Fifth Edition,
Garland Publishing, NY, USA, 2001.
Male, D.; Cooke A.; Owen, M.; Trowsdale, J. and
Champion, B., Complement, Advanced
Immunology, MOSBY, New York, USA, 1996.
348
Sin ttulo-2
348
5/26/06, 10:26 AM

Captulo 19
INMUNIDAD MEDIADA POR CLULAS
Luz Blanco P. y Javier Puente P.
1. Introduccin
2. Citolisis mediada por linfocitos T
2.1. Mecanismo membranoltico
2.2. Mecanismo dependiente de la interaccin FasL-Fas
3. Citolisis mediada por clulas NK
3.1. Citotoxicidad mediada por clulas
NK
3.2. Receptor FcRIIIA (CD16)
4. Mtodos de estudio del proceso citoltico
5. Hipersensibilidad retardada (HR)
349
Sin ttulo-2
349
5/26/06, 10:26 AM
350
Sin ttulo-2
350
5/26/06, 10:26 AM
RESUMEN
Los principales linfocitos citotxicos son los linfocitos T CD8+ citotxicos (LTc) pertenecientes a la respuesta inmunolgica especfica y las clulas NK, pertenecientes a la respuesta
inmunolgica innata. Los primeros, como una caracterstica general de los LT, basan su especificidad en el reconocimiento del antgeno a travs del TCR; las clulas NK, que son TCR-, poseen
una amplia variedad de receptores de activacin y de receptores de inhibicin de la citotoxicidad
para interactuar con la clula blanco, lo que apoya su falta de especificidad. Uno de los receptores de las clulas NK es el receptor para la porcin Fc de las IgG (FcRIII o CD16), el cual
permite explicar la citotoxicidad dependiente de anticuerpos (ADCC). El mecanismo de citolisis
es muy similar en ambos casos e implica las siguientes etapas: reconocimiento y unin de la
clula sensible o clula blanco; activacin de la clula citotxica: transduccin de seales y
reorientacin de los elementos del citoesqueleto hacia la zona de contacto con la clula blanco;
secrecin de los componentes de los grnulos, perforina y granzimas (enzimas proteolticas de
los grnulos) que van a provocar dao a la membrana de la clula blanco (mecanismo
membranoltico) y adems los componentes de los grnulos pueden ingresar a la clula blanco y
activar el mecanismo de muerte celular programada o apoptosis de la clula blanco. La interaccin
FasL - Fas inicia el proceso de apoptosis que se caracteriza por la activacin de enzimas proteolticas
(caspasas) y la posterior fragmentacin del DNA. Ambos mecanismos participan simultneamente en los linfocitos citotxicos granulares, en cambio los linfocitos agranulares y otros subtipos minoritarios de LT, produciran lisis solamente a travs del mecanismo de apoptosis. Finalmente, ocurre la lisis de la clula blanco y la apoptosis o el reciclamiento de la clula efectora, la
cual puede transformarse en una clula de memoria en el caso de los LTc. Los monocito/macrfagos
activados pueden ejercer la destruccin de microorganismos por fagocitosis y de clulas
eucariticas por citotoxicidad. Un mecanismo que refleja muy bien estas acciones es el de hipersensibilidad retardada, en el cual se logra la activacin de los macrfagos a travs de las citoquinas
producidas por los LT CD4+ y CD8+ post contacto con la clula presentadora del antgeno,
inicindose un complejo proceso que culmina con la activacin de los macrfagos.
lulas tumorales, clulas transformadas por virus,

clulas infectadas con bacterias patgenas
intracelulares; y adems, tambin lisan bacterias
y parsitos libres. La unin entre los linfocitos
citotxicos y las clulas blanco resulta en una
interaccin caracterstica que culmina con la lisis
de la clula blanco, proceso que ser analizado en
el presente captulo.
La primera etapa del proceso citoltico es la
etapa de unin entre la clula citotxica y la clula blanco. La unin en el caso de los LTc, implica el reconocimiento del antgeno asociado al
Complejo Principal de Histocompatibilidad
(MHC) de la clula blanco por el receptor T (TCR)
y adems participan numerosas molculas de adhesin de la superficie de las clulas en contacto.
En el caso de las clulas NK, clulas altamente
heterogneas, pueden participar en la interaccin
1. INTRODUCCIN
La citotoxicidad mediada por clulas la ejercen principalmente los linfocitos T citotxicos
(LTc) y las clulas natural killer (NK) o agresoras naturales. Si bien ambos tipos celulares poseen una serie de propiedades comunes, existen
importantes diferencias. Slo las clulas NK, que
forman parte de la inmunidad innata, poseen
citotoxicidad espontnea y expresan constitutivamente las molculas citotxicas determinantes del proceso ltico; en cambio, las clulas T
constituyentes de la inmunidad adquirida, requieren del proceso de seleccin por el antgeno y no
expresan en reposo los genes de las molculas
citotxicas; es decir, en este caso corresponden a
genes inducibles. Las clulas sensibles a su accin o clulas blanco son fundamentalmente: c-
351
Sin ttulo-2
351
5/26/06, 10:26 AM
con la clula blanco una gran variedad de receptores de activacin e inhibicin de la citotoxicidad
y molculas de adhesin; uno de stos es el receptor para la porcin Fc de las inmunoglobulinas G:
FcRIII (CD16), responsable de la citotoxicidad
dependiente de anticuerpos (ADCC). Las clulas
NK tambin son capaces de reconocer las molculas MHC en la clula blanco, a travs de receptores especficos, tanto de inhibicin (en la mayora de los casos) que genera una seal inhibitoria
de la actividad ltica como tambin de activacin
de la citotoxicidad.
La etapa siguiente denominada etapa de activacin, implica cambios importantes en ambos
tipos celulares, en los linfocitos citotxicos se inicia este proceso a travs de la transduccin de seales (ver captulo 10); reordenamiento de los elementos del citoesqueleto y finalmente cambios en
la expresin gnica y cambios morfolgicos. Esta
unin conducente a la activacin de los linfocitos
citotxicos, es tambin determinante para la clula blanco, pues genera en stas la seal letal que
marca el punto irreversible conducente a su muerte. Esta seal letal puede ocurrir por dos mecanismos: (a) La interaccin de las molculas de la superficie celular ligando de Fas o FasL y Fas (FasL
- Fas), puede iniciar el fenmeno de muerte celular programada o apoptosis de la clula blanco, el
cual se caracteriza por la fragmentacin inicial del
DNA; FasL es inducido en las clulas citotxicas
post-contacto con la clula blanco. (b) A travs de
la secrecin de componentes citotxicos de los
grnulos, constituidos por protenas formadoras
de poro (PFP o perforina) y enzimas proteolticas,
denominadas en general granzimas. Estos componentes provocan dao en la membrana de la
clula blanco lo que culminar con la lisis celular
(mecanismo membranoltico). Bajo estas circunstancias, las perforinas, granzimas y otros componentes de los grnulos pueden ingresar a la clula
blanco y activar la va de la apoptosis. Adems,
tanto los LTc como las clulas NK producen y
secretan una serie de citoquinas que pueden participar directamente en el proceso ltico o bien, estimular a otras clulas del sistema inmune. Es
importante sealar que la muerte de la clula blanco ocurre generalmente a travs de mecanismos
mixtos, membranoltico y mediado por la
interaccin FasL-Fas; sin embargo, existen subpoblaciones minoritarias de LTc y clulas NK sin
grnulos en su citosol, capaces de provocar
citlisis aparentemente mediada slo por
apoptosis. La etapa de lisis propiamente tal, es
independiente de la clula efectora, las que pueden

reciclarse e iniciar nuevamente el proceso o quedar
como una clula de memoria en el caso de los LTc.
Tambin, estas clulas efectoras activadas pueden
sufrir apoptosis inducida por el contacto con la clula blanco y post-activacin, proceso que experimentan tanto los LTc como las clulas NK. Por su
parte, la clula blanco queda bajo la accin de los
mecanismos intracelulares que gobiernan la
apoptosis y bajo la accin ltica de las molculas
citotxicas que culminarn con su muerte.
Finalmente, en este captulo se analiza la accin efectora de los macrfagos en un tipo especial
de hipersensibilidad, denominada hipersensibilidad retardada en que la interaccin de clulas presentadoras de antgeno (CPA) con linfocitos T CD4
(Th1) provoca la generacin de citoquinas y otros
mediadores endgenos que permitirn la migracin
y activacin de los macrfagos y otros leucocitos
en una reaccin localizada.
2. CITOLISIS MEDIADA POR LINFOCITOS T

El establecimiento de una respuesta inmune
requiere la interaccin concertada de linfocitos T
y B activados por sus respectivos antgenos. El
reconocimiento del antgeno especfico por los receptores B o T de los linfocitos maduros, conduce
a su proliferacin y por lo tanto, a la expansin
clonal. Parte de la poblacin de linfocitos que ha
reconocido a su respectivo antgeno se diferencia
en clulas hiperreactivas al antgeno y de larga
duracin, denominadas clulas de memoria. Dentro de las clulas T existen diferentes subtipos, por
lo que pueden ocurrir diferentes respuestas
efectoras: tales como la produccin de citoquinas
a travs de los linfocitos CD4+ o la generacin de
una actividad citotxica, predominantemente mediada por los linfocitos T CD8+ (LTc). Estas clulas citotxicas se encargan de lisar selectivamente
clulas del individuo infectadas o transformadas
por mecanismos citotxicos dependientes del contacto clula-clula. Por lo tanto, la accin principal defensiva de las clulas citotxicas es complementar la accin de los anticuerpos encargados fundamentalmente de reconocer antgenos
forneos en el organismo y activar mecanismos
efectores para su destruccin.
Los LTc se caracterizan por el siguiente
fenotipo bsico: TCR+, CD3+, CD8+; en algunos
casos pueden ser tambin CD4+. Algunos son pequeos agranulares, otros grandes y granulares,
352
Sin ttulo-2
352
5/26/06, 10:26 AM
dendrticas son capaces de presentar antgenos

exgenos en el contexto de molculas MHC clase
I, por lo cual estas clulas son los principales candidatos para realizar la labor de muestreo
antignico permanente.
Las clulas T CD8+ que han reconocido a su
antgeno se encuentran capacitadas para lisar a las
clulas blanco y esta funcin efectora debe ser ejercida para que se generen LTc de memoria. La
interaccin de LTc con la clula blanco es fuertemente dependiente de Mg2+, este requerimiento
reside principalmente en la unin LFA-1 - ICAM1; Ca2+ no puede reemplazar al Mg2+ aunque presenta un comportamiento sinrgico a concentraciones sub-ptimas de este ltimo.
La figura 19-1 esquematiza el proceso citoltico
general: (a) unin a la clula blanco (conjugacin);
(b) activacin de la clula efectora (reconocimiento/
transduccin de seales); (c) generacin de la seal
letal en la clula blanco, que abarca a los mecanismos de muerte celular por mecanismos:
membranoltico (exocitosis de grnulos) y/o a travs de la interaccin FasL Fas que induce la muerte celular programada o apoptosis de la clula blanco y (d) separacin y reciclamiento de la clula
efectora y lisis propiamente tal de la clula blanco.
lo que explica la existencia de los diversos mecanismos citolticos. Originalmente se pensaba que
la interaccin del LTc con la clula blanco ocurra
nicamente entre el complejo TCR-CD3 con el
pptido presentado en conjunto con las molculas
de MHC clase I o II; sin embargo, la fuerza de
esta interaccin es muy dbil y son numerosas las
molculas adicionales cuya participacin es necesaria, tales como: CD2, CD8, CD28 y LFA-1 y
en la clula blanco, B7, CD22, ICAM-1 o 2 y LFA3. Entre las principales molculas inducidas postcontacto con las clulas blanco se encuentra la protena de superficie celular FasL, conocida tambin
como Apo1L y CD95L. La contribucin de estas
molculas no est limitada solamente a la unin
intercelular, sino que tambin pueden generar seales coestimuladoras para los LTc que complementan la seal iniciada por la interaccin entre los complejos TCR-CD3 y MHC-pptido. En esta etapa los
LT interactan con su clula presentadora o clula
blanco, formando una estructura fsica y funcional
importante o sinapsis inmunolgica, la que permite una unin ptima entre los receptores y sus
respectivos ligandos, y la liberacin de los mediadores en forma localizada.
Como ya se ha analizado previamente, los
LTc requieren presentacin del antgeno, generalmente un pptido proveniente del medio
intracelular unido al MHC tipo I (ver captulo 9).
En nuestro organismo existen alrededor de 1013
clulas nucleadas y slo unos cientos de LTc vrgenes. Luego, es prcticamente imposible que cada
LTc est permanente vigilando esta enorme cantidad de clulas en bsqueda del antgeno contra el
cual est predeterminado. De hecho, raramente se
encuentran circulando LTc en los tejidos
perifricos. Recientemente, se ha caracterizado a
la clula capaz de realizar la vigilancia
inmunolgica en la periferia y de transportar a los
rganos linfoides los antgenos desde ubicaciones
distantes en el organismo. Esta es una clula presentadora derivada de la mdula sea, que
internaliza protenas forneas (derivadas de virus
o patgenos intracelulares) o directamente fagocita
a las clulas infectadas, transformadas o los restos celulares y luego migra al rgano linfoide para
presentar los antgenos as adquiridos; an no est
definido molecularmente cmo esta clula logra
presentar antgenos exgenos en el contexto de
molculas MHC clase I, tericamente destinado
exclusivamente a la presentacin de antgenos
endgenos. En estudios realizados in vitro se ha
demostrado que tanto macrfagos como clulas
Figura 19-1. Diagrama representativo de las principales

etapas de la citotoxicidad mediada por clulas T y NK.
353
Sin ttulo-2
353
5/26/06, 10:26 AM
En el programa de transduccin de seales,

durante la activacin de los LT (ver captulo 10)
ocurren bsicamente una serie de eventos de
fosforilacin/desfosforilacin de protenas, mediados por protena quinasas PK y/o fosfatasas, la
generacin de segundos mensajeros inositol
trifosfato (IP3), diacilglicerol (DAG) y Ca2+ como
seales positivas y otras mediadas ya sea por
fosfatasas encargadas de la desfosforilacin de las
protenas activadas (por fosforilacin) o por mediadores que desarrollen su accin a travs de
AMP-cclico, actan como seales negativas. Este
programa tambin ocurre en los LTc, por lo cual
es conveniente tenerlo presente en el anlisis del
proceso de citotoxicidad. De particular importancia, es la participacin de las isoenzimas de la PKC en el proceso de exocitosis de los grnulos; este
tipo de enzimas es estimulado por DAG y Ca2+, y
el proceso de exocitosis es imitado por steres de
forbol e ionforos de calcio. Los inhibidores de
protenas tirosina kinasas y de protena kinasa C,
inhiben el proceso citoltico. Adems, en general,

aquellos mediadores endgenos (hormonas,
neurotrasmisores) o exgenos (frmacos) que acten a travs de influjos de Ca2+, en los linfocitos
citotxicos estimulan la citoxicidad y aquellos que
producen aumento de AMPc se comportan como
inhibidores.
Estudios realizados principalmente in vitro
han demostrado que los LTc pueden quedar en un
estado anrgico o tolerante al reconocer a su
antgeno en ausencia de las molculas
coestimuladoras o cuando reconocen a un antgeno
modificado respecto del original (con ciertos
aminocidos cambiados respecto del pptido
antignico).
La seal letal en la clula blanco, definida
como el punto a partir del cual la clula blanco
queda irreversiblemente programada para la lisis,
se puede generar en base a cualquiera de los dos
mecanismos: membranoltico o dependiente de la
interaccin FasL Fas apopttico, (figura 19-2)
Figura 19-2. Representacin esquemtica de la citotoxicidad de los LTc CD8+, frente a clulas blanco (CPA) Fas+ y Fas-. En
el primer caso ocurren simultneamente los dos mecanismos de citolisis: membranoltico e interaccin Fasl-Fas; FasL es inducido
postcontacto con la CPA. En este tipo de lisis hay formacin de poros y apoptosis. En el caso de clulas Fas-, solamente ocurre el
mecanismo membranoltico. En algunos casos ocurre slo la interaccin FasL Fas: LT agranulares y otros sub-tipos minoritarios
de LT, el mecanismo de lisis est basado solamente en esta interaccin.
354
Sin ttulo-2
354
5/26/06, 10:26 AM
nada Linfohistiocitosis hemofagoctica en la cual

se encuentra mutado el gen que codifica para
perforina o PFP. Estos pacientes tienen
descontrolada su respuesta inmune predominando los LTc y macrfagos activados y tambin altas concentraciones de IFN- y TNF- en la sangre. En base a estos antecedentes, se ha propuesto
una funcin adicional para esta protena la cual
sera esencial para el control de la respuesta inmune ya que permitira la eliminacin de las clulas activadas y/o de las clulas presentadoras de
antgeno.
Las granzimas (enzimas de los grnulos) son tambin importantes en el proceso de lisis de la clula
blanco. La mayor parte de stas (ms del 90% de
las protenas de los grnulos) presentan actividad
de serina-proteasa y pueden ser divididas en dos
grupos: granzimas B, C, D, E, F y G que son altamente homlogas entre s (aproximadamente 6090%) y granzima A que est menos relacionada
(aproximadamente 54-62%). Si bien su actividad
proteoltica las ajusta muy bien a la accin
citotxica de los LT, tambin se encuentren en los
linfocitos CD4+ no citotxicos, por lo cual podran
tener otras funciones como por ejemplo la separacin de la clula blanco de la clula efectora, permitiendo el reciclaje de esta ltima. A travs del
estudio acucioso de los poros formados por poliperforina, se pudo demostrar el paso de granzimas,
especialmente de la granzima B, hacia la clula
blanco y de esta forma pueden activar a las enzimas
proteolticas cistena proteasas o caspasas que inician la cascada de reacciones bioqumicas conducentes a la apoptosis de la clula blanco. Se ha
demostrado adems, que la granzima B ingresa a
la clula blanco a travs de la interaccin con receptores y una posterior endocitosis; es decir, por
un mecanismo independiente de la formacin de
poros. En estas condiciones tambin puede iniciar
la cascada de activacin de las caspasas. Otros
constituyentes de los grnulos son enzimas
hidrolticas como fosfatasa cida, catepsina D y
L-glucosidasa, las que tambin pueden activar la
apoptosis de la clula blanco. Recientemente se
ha descrito un nuevo componente de los grnulos, la protena granulisina que tiene una muy limitada actividad ltica sobre diversas clulas. Pertenece a las protenas que unen lpidos activando
a enzimas que degradan lpidos como glucosilceramidasa, con lo cual aumenta la concentracin
de ceramidas; las ceramidas son tambin
activadoras de la cascada de caspasas. Mediante
miscroscopa electrnica se ha demostrado que la
los que sern analizados en detalle a continuacin:

2.1. Mecanismo membranoltico
Como su nombre lo indica, el mecanismo
membranoltico implica la secrecin, por parte de
los LTc de diversos componentes contenidos en
los grnulos (ej: perforina, granzimas y
proteoglicanos) los que participan en la destruccin de la membrana celular y por tanto de la clula blanco. Un evento importante y previo a la
secrecin, es el reordenamiento de los elementos
del citoesqueleto hacia la zona de contacto. Este
reordenamiento ocurre nicamente en la clula
efectora (en este caso LTc), no en la clula blanco
favoreciendo la fusin de los grnulos con la membrana para la liberacin de su contenido al exterior. Muy rpidamente, luego de la unin con la
clula blanco, el centro organizador de
microtbulos (MTOC) de la clula efectora se
orienta hacia la zona de contacto; es por esto que
los agentes perturbadores de los microtbulos son
potentes inhibidores de la citolisis, enfatizando la
importancia de esta etapa. La secrecin de los grnulos, como ya se mencion, es un proceso dependiente de Ca2+.
La perforina o protena formadora de poro
(PFP), inicialmente tambin denominada
citolisina, se encuentra en los grnulos de secrecin, es la principal protena citotxica y por lo
tanto la candidata esencial para explicar la
citotoxicidad mediada por los linfocitos. Es una
protena inducible en los LT, que se expresa con
su funcin citotxica a las 18-30 horas post-induccin; es decir, luego de la activacin del TCR
o bien por accin de citoquinas, tales como IL-2 o
IL-7. La perforina (65 kDa) presenta y homologa
estructural con los componentes C6-C9 del complemento. La PFP es secretada al medio
intercelular donde se une a la membrana
plasmtica de la clula blanco y polimeriza a poliperforina, proceso que tambin depende de Ca2+.
La PFP se une a fosfolpidos de la membrana, especialmente a residuos de fosforil-colina. De esta
forma, se generan lesiones similares a las observadas por accin del complemento, pero en este
caso mediadas por un solo tipo de protena. De
hecho, la PFP en presencia de Ca2+ puede lisar directamente una gran variedad de clulas nucleadas,
eritrocitos y vesculas lipdicas; sin embargo, tambin hay clulas resistentes a su accin. Recientemente, se ha descrito una enfermedad gentica
muy poco frecuente y fatal en humanos, denomi-
355
Sin ttulo-2
355
5/26/06, 10:26 AM
granulisina provoca dao a la pared de bacterias

tanto libres como intracelulares que infectan a
clulas. Esta importante observacin sugiere un
nuevo papel a los LTc que les permite actuar directamente en la destruccin de patgenos libres
e intracelulares. El mecanismo de accin de esta
protena es la separacin de la membrana externa
del citoplasma, con la consiguiente acumulacin
de lquido en el citoplasma, alteracin de la permeabilidad de la membrana conducente a la lisis
osmtica de la bacteria.
Los LTc sintetizan y almacenan en sus grnulos proteoglicanos, mayoritariamente
condroitinsulfato A; estos compuestos tambin son
secretados en el proceso citoltico y se les atribuye un papel protector de la clula efectora contra
las molculas citotxicas, ya que los LTc no son
destruidos en el proceso ltico. Adems, al pH de
los grnulos, estos proteoglicanos se unen a la PFP
y granzimas evitando la degradacin o inactivacin
de estos componentes mientras se encuentran almacenados.
Para explicar la citotoxicidad mediada por los
linfocitos, se han postulado diversos mecanismos
efectores alternativos, no necesariamente
excluyentes entre s. Los LT activados tambin
secretan una gran variedad de citoquinas, tales
como: TNF y (linfotoxina) e IFN-. In vitro
TNF- presenta actividad citotxica frente a una
amplia variedad de clulas, an cuando no se ha
demostrado su participacin directa en la accin
de los LTc. Finalmente, tambin se ha postulado
un papel citotxico a la molcula de ATP; este
nucletido es efectivamente secretado al medio
intercelular por los LTc activados y a travs de
receptores purinrgicos en la clula blanco gatilla
la lisis y defragmentacin del DNA en distintos
tipos celulares. Los LTc son resistentes a esta accin aparentemente gracias a la presencia de una
activa ecto-ATPasa.
El mecanismo membranoltico entonces implica la participacin combinada de diversos agentes citotxicos que permiten explicar el dao en la
clula blanco: muerte celular por la lisis osmtica
y por apoptosis.
trado que el bloqueo de la expresin de PFP no

impide la activacin ni la proliferacin de las clulas T y adems, en cepas de ratones deficientes
en PFP se ha demostrado la existencia de un mecanismo citotxico totalmente independiente de
PFP. Esta actividad citotxica ocurre a travs de
la interaccin de FasL, presente en las clulas
efectoras activadas, y el receptor Fas (Apo1,
CD95) presente en las clulas blanco. El receptor
Fas es una glicoprotena de 35 kDa, perteneciente a la superfamilia de receptores para TNF; se
encuentra expresado en linfocitos maduros, en
linfocitos transformados por infeccin viral
(HTLV-1, HIV, EBV) y en diversos tejidos no
linfoides. Los anticuerpos anti-Fas pueden inducir el proceso de apoptosis en las clulas que poseen estas molculas; por lo que el conjunto de la
informacin existente permite sugerir una directa
correlacin entre la presencia de Fas en la clula
blanco y su probabilidad de sufrir apoptosis. La
molcula FasL es una protena transmembrana
de 40 kDa, que aparece en los linfocitos activados; puede ser tambin liberada de la membrana
por accin de una metaloproteinasa y de esta forma transformarse en CD95L soluble que acta
como una molcula efectora citotxica.
La interaccin LTc con la CPA respectiva,
provoca la induccin de FasL en los primeros; si
la CPA es Fas+ se producir la interaccin que inicia la cascada de activacin de caspasas. El receptor Fas se encuentra asociado a la protena
adaptadora FADD (protena con dominio de muerte asociada a Fas) y con la aspartil-proteasa, enzima convertidora de interleuquina-1- (ICE), que
es la enzima iniciadora de la cascada de activacin de las cistena proteasas o caspasas (cistenaaspart-asas) va que permite la activacin de
nucleasas con el consiguiente dao al DNA y
muerte celular por apoptosis. Algunas de las
enzimas de esta va participan tambin en otros
procesos fisiolgicos tales como la activacin de
citoquinas pro-inflamatorias. Las caspasas se encuentran como pro-enzimas, las que una vez activadas, por protelisis limitada, pueden propagar
esta accin mediante su actividad proteoltica sobre residuos especficos de cido asprtico. La
induccin del proceso de apoptosis provoca una
elevacin pre-ltica del Ca2+ intracelular lo que
favorece la accin de las enzimas encargadas del
desenrrollamiento y fragmentacin del DNA
(topoisomerasas y endonucleasas) que son dependientes de Ca2+. En suma la apoptosis de la clula
blanco se caracteriza por la condensacin de la
2.2. Mecanismo dependiente de la interaccin

FasL-Fas
Los CTL agranulares y tambin los
granulares presentan la posibilidad de lisar directamente a la clula blanco a partir solamente de la
interaccin de receptores y ligandos. Se ha demos-
356
Sin ttulo-2
356
5/26/06, 10:26 AM
cromatina, la formacin de estructuras tipo burbuja en la membrana plasmtica y la fragmentacin del DNA. Posteriormente, ocurre estrechamiento celular, dilatacin del retculo
endoplsmico y finalmente fragmentacin celular con la formacin de fragmentos membranosos
sellados denominados cuerpos apoptticos, los
cuales son eficientemente removidos por
fagocitosis evitando de este modo la generacin
de una respuesta inflamatoria. Los LT activados
que expresan simultneamente Fas y FasL, pueden interactuar entre s y autodestruirse, proceso
que permite la disminucin de la respuesta
inmunolgica. Como ya se ha mencionado, la
apoptosis de la clula blanco puede ser inducida
tambin por accin de la perforina y de algunas
de las granzimas del mecanismo membranoltico.
La tabla 19-1 resume las principales caractersticas de los LTc CD8+.
Los mecanismos efectores utilizados por los

LTc CD8+ son tambin empleados por otras clulas del sistema inmunolgico. Tanto las clulas
NK, como algunos linfocitos T CD4+, expresan o
pueden expresar luego de ser activados; perforina,
granzimas y FasL, y por lo tanto ejercer funciones citotxicas. En base a mutaciones de cada una
de estas vas mediadoras de la lisis se ha comprobado que en el ratn, los LTc CD8 + ejercen
citotoxicidad principalmente por exocitosis de los
grnulos, mientras que los LTc CD4+, la ejercen
principalmente por la interaccin FasL Fas. Un
sub-tipo minoritario de LT, descritos principalmente en el ratn, se caracteriza por un fenotipo CD4+
o CD4-, CD8- doble negativo (DN) y NK1.1+
marcador de clulas NK murinas, por lo que se
han denominado linfocitos NKT. Este tipo de LT,
que tambin se ha identificado en los seres humanos, expresa un TCR constituido por un restringi-
Tabla 19-1. Propiedades generales de las clulas citotxicas

Linfocitos T citotxicos
Receptores y co-receptores que interactan con la clula blanco1.
TCR, CD8, CD28, CD95L2
Funcin citotxica
Mecanismo membranoltico: Muerte celular por lisis osmtica y apoptosis
Interaccin FasL Fas (CD95L CD95): Muerte celular por apoptosis.
Clulas NK
Receptores y co-receptores que interactan con la clula blanco
Receptores de activacin
NKp46, NKp44, NKp30, NKG2C/D, CD2, CD16, CD28, CD44, 2B4, CD95L2
Receptores de inhibicin3
Superfamilia del tipo lectina C: NKG2A/B; Superfamilia inmunoglobulinas:KIR 2-DL1 (p58.1),
KIR2-DL2/3 (P58.2); KIR 3-DL1 (p70). LIR-1.
Funcin citotxica : Citotoxicidad natural y ADCC.

Mecanismo membranoltico: Muerte celular por lisis osmtica y apoptosis
Interaccin FasL Fas (CD95L CD95): Muerte celular por apoptosis.
Se incluyen los receptores y co-receptores ms representativos de la funcin citotxica.

CD95L es inducido post-contacto con la clula blanco.
3
Algunas sub-poblaciones de LT CD8+ tambin expresan receptores de inhibicin de las familias de
protenas sealadas, actuando como inhibidores de la citotoxicidad y de la secrecin de citoquinas. CD:
Antgenos de grupo de diferenciacin. KIR: Receptor de citotoxicidad del tipo inmunoglobulinas; LIR:
receptor similar a inmunoglobulinas.
2
357
Sin ttulo-2
357
5/26/06, 10:26 AM
do conjunto de cadenas y una cadena

invariante; reconocen a la molcula CD1 de la
CPA, que son similares a las molculas MHC-I,
pero se encuentran localizadas en el genoma fuera de la regin que codifica para las molculas
MHC-I. La molcula CD1 presenta componentes
lipdicos bacterianos a las clulas NKT. Los
linfocitos NKT estn capacitados para expresar
FasL y en respuesta a la IL-12 producen perforina
y adquieren funciones citotxicas frente a clulas
tumorales.
La expresin constitutiva de FasL por algunos tipos celulares ha permitido explicar, al menos parcialmente, la existencia de reas
inmunolgicas privilegiadas, definidas como aquellas reas en que una alteracin aun muy menor,
puede provocar un dao irreversible. Tal es el caso
del ojo, las clulas del parnquima y testculo, las
clulas de Sertoli, ambos tipos celulares expresan FasL en forma constitutiva, lo que les permite
eliminar clulas T y clulas tumorales que expresen Fas. En estas reas se ha observado tambin
un menor rechazo a los trasplantes de tejido.
Los LTc que han reconocido y destruido a
una clula blanco pueden diferenciarse a clulas
de memoria adquiriendo una hiper-reactividad
contra el antgeno reconocido y pueden durar
meses o aos localizadas en los rganos linfoides
secundarios, o pueden sufrir el proceso de
apoptosis post-activacin. Las seales que determinan el destino de estos LTc an no estn claramente definidas, pero en base a recientes estudios
con ratones transgnicos se ha postulado la participacin de PFP en el control de la expansin de
los LTc y de IFN- en la regulacin de la
inmunodominancia y la fase de muerte de los LTc.
Sin duda, en el desarrollo de vectores adecuados
para vacunas que requieran la induccin de inmunidad celular es importante considerar que para
obtener LTc de memoria deben cumplirse todas
las etapas previamente descritas, es decir no basta
con la sola presentacin del antgeno, sino adems se requiere que los LTc hayan desplegado su
capacidad citotxica en respuesta al antgeno reconocido.
mielomonocticas en base a su origen, fenotipo y

funcionalidad. Provienen de la mdula sea y se
encuentran en la sangre y tejidos linfticos, especialmente el bazo. Una de las funciones ms caracterstica de las clulas NK es la citolisis ejercida sobre una gran variedad de clulas: clulas
tumorales, clulas transformadas por virus, clulas infectadas por bacterias intracelulares y diversos microorganismos tales como bacterias, hongos y parsitos. Una segunda caracterstica importante es la secrecin de citoquinas, especialmente
IFN-. Morfolgicamente las clulas NK corresponden a linfocitos granulares grandes y su
fenotipo ms aceptado es: CD3-, TCR-, CD2,
CD8 , CD16 + , CD56 + . Existen tambin
subpoblaciones minoritarias agranulares. Las clulas NK pueden activarse a travs del contacto
con clulas sensibles o clulas blanco o por la accin de mediadores solubles, principalmente
citoquinas.
La accin citoltica mediada por estas clulas,
es mayoritariamente espontnea, es decir no requiere activacin previa y no est restringida a la
presencia del Complejo Principal de Histocompatibilidad. Este concepto actualmente ha
cambiado pues se ha descrito una gran variedad
de receptores que reconocen a los complejos MHC
clase I de la clula blanco pero este reconocimiento, a diferencia de lo que ocurre con los LTc, en
las clulas NK genera principalmente una seal
negativa, inhibindose la lisis de la clula blanco.
Existe una amplia variedad de receptores de inhibicin y de receptores de activacin de la
citotoxicidad; algunos de ellos tienen como
ligandos molculas de MHC-I. Una de las principales diferencias entre las clulas NK y los LTc
radica en que la capacidad efectora de estos ltimos depende finalmente del receptor TCR, en
cambio, en el caso de las clulas NK, existe una
variedad de receptores en la misma clula, algunos capaces de activar y otros capaces de inhibir
su programa citoltico.
3.1. Citotoxicidad mediada por clulas NK
La citotoxicidad mediada por las clulas NK
(CMC-NK) ocurre tambin en etapas; la primera
es la etapa de reconocimiento y unin a la clula
blanco. Esta etapa no es determinante en el proceso citoltico, ya que las clulas NK se unen con la
misma afinidad tanto a clulas sensibles como a
clulas resistentes. Sin embargo, cuando se unen
a una clula sensible (clula blanco), o se estimu-
3. CITOLISIS MEDIADA POR CLULAS NK

Las clulas NK, pertenecientes al sistema
inmunolgico innato, son una tercera poblacin
muy heterognea de linfocitos, que se puede diferenciar de los linfocitos B, T y clulas
358
Sin ttulo-2
358
5/26/06, 10:26 AM
la alguno de los receptores activadores de la

citolisis se produce la activacin, es decir la serie
de procesos bioqumicos que caracteriza a esta
etapa, fosforilacin de protenas y enzimas, especialmente protena quinasas y protenas
adaptadoras y la generacin de los segundos mensajeros (ver Captulo 9). La citotoxicidad es la
funcin ms reconocida de estas clulas, la que
les confiere un amplio papel defensivo frente a
enfermedades infecciosas y neoplsicas. La CMCNK puede ser de dos tipos: a) Citotoxicidad natural; la ejercen sobre clulas tumorales, transformadas por virus, infectadas por bacterias
patgenas intracelulares y sobre algunos tipos de
clulas normales; se basa en el reconocimiento
celular por mecanismos an no del todo comprendidos, pero que es espontneo y no requiere activacin previa. Existe descrito hasta ahora un amplio repertorio de receptores de activacin y de
inhibicin, que permiten explicar, en parte, la
citotoxicidad natural. b) Citotoxicidad dependiente
de anticuerpos (ADCC), ha sido hasta ahora la ms
estudiada y es dependiente del receptor Fc de baja
afinidad de IgG (FcRIII o CD16); este receptor
reconoce al fragmento Fc de los anticuerpos que
recubren a la clula blanco. Los mecanismos de
lisis celular son similares a los descritos para los
LTc; membranoltico e interaccin FasL Fas,
conducente a apoptosis de la clula blanco. En el
mecanismo membranoltico participan, perforina,
granzimas, un factor citotxico de las clulas NK
(NKCF), que corresponde a una protena con actividad citotxica y tambin la protena granulisina
con actividad ltica bacteriana. En el caso de la
lisis por la interaccin FasL Fas; FasL es inducido y expresado en la superficie de las clulas
NK postcontacto con la clula blanco.
El modelo de citotoxicidad natural ms
aceptado hasta ahora, implica la participacin simultnea de receptores de activacin e inhibicin
de las clulas NK en su interaccin con la clula
blanco. Los receptores de activacin al ser activados ponen en marcha la maquinaria citotxica
de las clulas que implica una amplia fosforilacin
de protenas y los receptores de inhibicin al estar asociados a fosfatasas, se encargan de bloquear
la activacin. Bajo esas circunstancias (figura 193) en el balance global de la respuesta, prima la
inhibicin y no hay lisis de la clula blanco. Durante mucho tiempo se buscaron receptores de
activacin que permitieran explicar la
citotoxicidad, sin embargo el mayor conocimiento de este fenmeno hasta ahora ha provenido del
estudio de los receptores de inhibicin que en su

gran mayora reconocen a las molculas MHC-I.
Cuando disminuye o desaparece la expresin de
estos complejos, como es el caso de la infeccin
viral o la transformacin tumoral, mecanismo que
les permite evadir a la respuesta inmune especfica, desaparece la seal de inhibicin y ocurre la
lisis de la clula blanco. En este principio se basa
la actividad anti-viral y anti-neoplsica de las clulas NK. Se ha observado adems, por anlisis
in vitro, que muchas clulas tumorales expresan
tipos de MHC-I que las protegen de la lisis de las
clulas NK al ser reconocidos por los receptores
de inhibicin de la citotoxicidad, mecanismo que
aparece como una nueva posibilidad de evasin
de la respuesta inmune.
Figura 19-3. Activacin de clulas NK. (a) La activacin

conjunta de receptores de activacin y de inhibicin de las
clulas NK representa la situacin en que no hay lisis de la
clula blanco. (b) Si la clula blanco, pierde o disminuye la
expresin del complejo MHC-I, y estn simultneamente presentes los receptores de activacin adecuados, hay lisis de la
clula blanco. En la activacin de las clulas NK se induce la
expresin de FasL; si la clula blanco expresa Fas puede ocurrir tambin lisis mediada por esta interaccin. RA: Receptor
de Activacin; RI: Receptor de Inhibicin. LA: Ligando
Activador.
Existen dos grandes familias de receptores

de inhibicin que reconocen a las molculas de
MHC-I, la superfamilia de las lectinas del tipo C
y la superfamilia de las inmunoglobulinas (tabla
19-1). Los representantes de las lectinas se encuentran localizados en el cromosoma 6 murino y 12
humano y los de la superfamilia de
inmunoglobulinas humana en el cromosoma 19.
Todos estos receptores poseen en su extremo
359
Sin ttulo-2
359
5/26/06, 10:26 AM
citoplasmtico secuencias ITIM (dominio o motivo de inhibicin basado en tirosina del

inmunorreceptor). Qu es lo que reconocen los
receptores de inhibicin en las molculas MHCI? Para poder responder esta pregunta nos referiremos en primer lugar a los receptores KIR (receptores de inhibicin de clulas NK) que han sido
los ms estudiados. Estos receptores reconocen
molculas MHC-I de los tipos A, B, C y G,
especficamente a regiones polimrficas de los
dominios 1, aminocidos 77 a 83. Si bien los
pptidos presentados por estas molculas pueden
afectar la conformacin de la molcula en el sitio
de la interaccin con los KIR, no hay ninguna evidencia hasta ahora, sobre una interaccin directa
entre el receptor y los pptidos antignicos presentados. Por otra parte, la interaccin KIR
MHC-I presenta una estequiometra 1:1 y una
constante de disociacin (Kd), del orden de 10 -6
M; valor que se encuentra en el rango de otras
interacciones clula clula. La interaccin de
los receptores tipo lectina, con los complejos
MHC-I, ocurre tambin a travs del reconocimiento de secuencias de los dominios 1 y 2. Las
clulas NK expresan diversas combinaciones de
receptores, incluyendo los receptores de inhibicin, lo que refuerza el papel del conjunto heterogneo de estas clulas en el reconocimiento celular y desarrollo de sus funciones. Los receptores
de inhibicin, descritos inicialmente en las clulas NK, se encuentran tambin en los LT, especialmente en los LT CD8+ de memoria. En este
tipo de linfocitos se han descrito las mismas funciones; es decir inhibicin de la citotoxicidad y de
la secrecin de citoquinas.
Los receptores de inhibicin del tipo lectina,
que carecen de las secuencias ITIM, receptores
truncados, se comportan como receptores de activacin al interactuar con sus respectivos ligandos;
tal es el caso del receptor CD94-NKG2C, asociado a la sub-unidad DAP12, sub-unidad que posee
secuencias ITAM (Dominio o motivo de activacin basado en tirosinas del inmunorreceptor) en
su extremo citoplasmtico, y que reconoce a molculas MHC-I y del receptor CD94-NKG2D, asociado a la sub-unidad DAP10, que posee secuencias SH2 en su extremo citoplasmtico y que reconoce a la molcula MICA (molcula relacionada a MHC-I de tipo A), una protena homloga
distante de las molculas MHC-I inducible por
estrs, que funciona como antgeno de los LT y
que frecuentemente se encuentra expresada en las
clulas epiteliales tumorales. Este ltimo recep-
tor de las clulas NK presenta por lo tanto reconocimiento y activacin por el contacto con clulas tumorales. La mayora de los receptores de
activacin de las clulas NK actan en forma independiente del reconocimiento de los MHC-I.
Gran parte de estas molculas se conocen desde
hace tiempo: CD2, CD16, CD69, CD28 y el coreceptor 2B4, a los que se han sumado recientemente los denominados NCR: NKp46, NKp44 y
NKp30. Estos ltimos se encuentran asociados a
sub-unidades que poseen secuencias ITAM, y todos activan la citotoxicidad; sin embargo no ha
sido fcil encontrar sus respectivos ligandos en
las clulas tumorales. Aparentemente existe un
escape de la respuesta inmunolgica innata, tal
como existe escape de la respuesta inmunolgica
especfica, en que la transformacin tumoral impide la expresin de los ligandos correspondientes. Los ligandos conocidos son CD58 para CD2,
IgG para CD16; el co-receptor 2B4, reconoce a
CD48, pero su participacin depende de la expresin de los NCR para ejercer su contribucin a la
citolisis.
Las clulas NK pueden ser activadas, a travs del contacto directo con clulas blanco, no
existiendo un solo tipo de receptores involucrado
en la activacin, lo que explicara en parte la heterogeneidad e inespecificidad de su accin. El
FcIIIA o CD16, ha sido uno de los ms estudiados y merece un comentario particular pues da
cuenta del proceso de citolisis mediada por
anticuerpos (ADCC) (ver captulo 10, figura
10-6).
3.2. Receptor FcRIIIA (CD16)
Las clulas NK pueden lisar eficientemente
a clulas tumorales o transformadas por virus si
stas se encuentran recubiertas u opsonizadas con
anticuerpos IgG de determinadas subclases (IgG1
o IgG3 en humanos). Asociados a este receptor se
encuentran las sub-unidades y tambin se han
descrito las sub-unidades CD3 y CD3, an cuando sin la expresin total del complejo CD3; existiendo por lo tanto una clara similitud entre el TCR
y el receptor FcRIIIA, lo cual, permite explicar
la similitud en el mecanismo de activacin de las
clulas NK y linfocitos T. Las clulas NK slo
expresan el receptor de baja afinidad para IgG
(FcRIIIA). La activacin de este receptor, que
no posee actividad enzimtica, a travs de clulas
opsonizadas por anticuerpos o anticuerpos antiCD16 resulta en la ya descrita fosforilacin/
360
Sin ttulo-2
360
5/26/06, 10:26 AM
Finalmente nos referiremos muy brevemente

a las principales citoquinas moduladoras de la actividad citoltica de las clulas NK. Entre estas
citoquinas estimuladoras se encuentran: IL-2, IL7, IL-12, IL-15, IL-18, TNF- y los diferentes
tipos de interfern. De stas, la ms estudiada, del
punto de vista teraputico ha sido la IL-2 pues adems de producir la estimulacin de la citolisis es
capaz, a largo plazo y bajo determinadas condiciones in vitro, de generar una nueva estirpe celular denominada clulas LAK (clulas citotxicas
estimuladas por linfoquinas) que adems de ser
muy heterogneas, se caracterizan por ampliar la
especificidad y la agresividad de la citotoxicidad.
Las clulas LAK se han utilizado como terapia antineoplsica desde mediados de la dcada de los 80.
Recientemente se les han incorporado genes de
citoquinas estimuladoras como TNF- o IL-2, para
optimizar su accin teraputica. Entre las
citoquinas inhibitorias de las clulas NK estn los
factores de crecimiento TGF- (factor de crecimiento transformante ) y PDGF (factor de crecimiento derivado de plaquetas).
desfosforilacin principalmente en tirosina de diversas protenas y la posterior produccin de las

citoquinas IFN- y del factor estimulador de colonias de granulocito-macrfagos (GM-CSF). La
ADCC corresponde entonces al tipo de mecanismo efector en el que las clulas citotxicas carecen de especificidad por el antgeno, reconociendo a travs del receptor Fc la molcula de anticuerpo que acta como puente entre ambos tipos
celulares. La tabla 19-1 resume las principales caractersticas de las clulas NK.
La generacin de IFN- es de particular importancia en los mecanismos defensivos contra la
infeccin, pues existe una extraordinaria coordinacin entre la respuesta de los monocitomacrfagos y las clulas NK, especialmente cuando stos se encuentran infectados con bacterias
patgenas intracelulares. El macrfago en su respuesta inicial al agente infeccioso (bacterias, parsitos, toxinas) es capaz de producir una serie de
citoquinas (TNF-, IL-1, IL-12, IL-15 e IL-18)
que al interactuar con las clulas NK las estimulan para la produccin de IFN-, esta citoquina es
capaz de activar al macrfago, estado en el que
adquiere mecanismos altamente eficientes contra
los microorganismos patgenos. Si bien, obviamente, esta no es la nica va de generacin de
IFN-, es importante en la defensa anti-infecciosa temprana y representa otra de las propiedades
inherentes de las clulas NK. Las citoquinas liberadas por el macrfago y las clulas NK en este
proceso tambin activan a los LT CD4+ y CD8+,
es decir, participan los mecanismos de la inmunidad innata y de la inmunidad adquirida en conjunto.
La persistente accin estimuladora de algunas de las citoquinas provoca inactivacin y muerte de las clulas NK; as el efecto conjunto in vitro
de IL-12 e IL-15 o IL-2 e IL-12 por ejemplo, provoca este efecto en las clulas NK que nos permite dar una respuesta a la situacin fundamental de
eliminacin de las clulas citotxicas una vez activadas para evitar su accin sobre las clulas normales. El solo contacto de las clulas NK con clulas sensibles y su posterior activacin, son tambin seales de inactivacin y muerte para las clulas citotxicas; este efecto se ha denominado
activacin que induce muerte celular (AIMC) y
tambin lo experimentan los LT. En este caso, la
repetida estimulacin antignica sumada a la accin de citoquinas como IL-2 y a la induccin de
la expresin de FasL favorecer
su
autoeliminacin.
4. MTODOS DE ESTUDIO DEL PROCESO

CITOLTICO
Si bien el anlisis de este tipo de metodologas
escapa a los objetivos de este captulo, se har una
breve mencin de stos para complementar la comprensin de los dos tipos de mecanismos
involucrados en la lisis celular.
Para medir la lisis de una clula se pueden utilizar colorantes vitales, los cuales son excluidos de
una clula no daada; o tambin se puede medir la
liberacin de enzimas citoslicas al medio como
ndice de dao, tales como: lctico deshidrogenasa.
Sin embargo, uno de los mtodos ms ampliamente
utilizado es la incorporacin de sales de Cr
radiactivas (Na251CrO4). En este caso las clulas
(blanco) captan inespecficamente el Cr+6 y lo reducen Cr+3, este catin se une a las macromolculas
intracelulares, principalmente a las protenas. Si la
clula blanco radiomarcada sufre dao por accin
de las clulas citotxicas, se libera el Cr+3 al medio
lo que se utiliza para calcular un ndice de
citotoxicidad. Este mtodo no discrimina entre
necrosis y apoptosis; sin embargo, mediante el uso
de inhibidores de la apoptosis, como agentes secuestradores de Ca2+ intracelular, s se puede cuantificar
la contribucin de cada uno de estos mecanismos
en la lisis final de la clula blanco.
361
Sin ttulo-2
361
5/26/06, 10:26 AM
las 24 a 48 hrs. una reaccin tpica localizada en

la piel de enrojecimiento y edema. La HR tambin ocurre en los seres humanos, como por ejemplo debido a la administracin intradrmica del
derivado proteico purificado (PPD), del
Mycobacterium tuberculosis, a individuos que han
padecido de tuberculosis o que han sido vacunados contra esta enfermedad, provocar en ellos la
reaccin de HR. El mecanismo involucrado en el
inicio de la HR experimental es a travs del contacto entre el antgeno extrao y LT CD4+ y CD8+
especficos, logrndose de este modo la activacin, expansin y proliferacin de los LT especficos. La siguiente etapa implica nuevamente el
contacto entre el antgeno y los LT a nivel perifrico local donde se produce como resultado la secrecin de las citoquinas TNF- y TNF-, IL-2 e
IFN-. Las CPA que inician la HR, pueden ser tambin clulas endoteliales venosas que activan a los
LT; estas clulas tienen una activa participacin
en diversos procesos fisiopatolgicos: pueden
interactuar con otras clulas y tambin producir
mediadores, especialmente de la inflamacin.
El encuentro con el antgeno provoca la diferenciacin de las clulas T CD4+ a clulas del
tipo Th1, que se caracterizan por la secrecin de
las citoquinas. El IFN- es un potente activador
de los macrfagos, aumenta la capacidad
fagoctica e induce la expresin de molculas de
MHC-II. La IL-2 es un estimulador de las clulas
T, que en este caso puede actuar en forma autocrina
y adems estimular a clulas T no especficas para
el antgeno. El TNF- y o linfotoxina son dos
citoquinas que ejercen su accin preferentemente
sobre las clulas endoteliales, las cuales producen
(a) mediadores de la inflamacin como
prostaciclina, xido ntrico (NO) que aumentan el
flujo sanguneo local aumentando la llegada de
los leucocitos al sitio de la inflamacin; (b)
quimioquinas, que son pptidos relativamente pequeos con potente actividad quimioatractante y
de activacin de los leucocitos; un ejemplo de
quimioquina es la IL-8; (c) aumento de la expresin de molculas de adhesin que favorecen la
migracin y diapedesis de leucocitos hacia el sito
de la HR. La IL-12 producida por los macrfagos
tambin provoca la diferenciacin a Th1, de modo
que es importante su participacin en el mecanismo general. En su conjunto entonces, los cambios
producidos por estos mediadores explican: la
vasodilatacin, la adhesin de leucocitos y el aumento de la permeabilidad vascular. El papel
efector final lo cumplen los macrfagos activa-
Para la determinacin de apoptosis existen

diversas metodologas, generalmente orientadas al
anlisis de la fragmentacin del DNA; esto principalmente se logra usando precursores radiactivos
(125I-timidina) que se incorporan al DNA de la clula blanco y posteriormente durante la apoptosis
se liberan como seal de fragmentacin ocurrida.
Los mtodos ms utilizados actualmente son el
anlisis directo de los fragmentos de DNA producidos mediante electroforesis en geles de agarosa
y el anlisis del DNA mediante microscopa o
citometra de flujo. Tambin es posible la deteccin de las enzimas proteolticas caspasas activadas intracelulares de las clulas blanco, como ndice de apoptosis, para lo cual se utilizan anlogos de sustrato de estas enzimas, unidos a
fluorocromos, como rodamina, utilizando
citometra de flujo para su deteccin.
5. HIPERSENSIBILIDAD RETARDADA
(HR)
Los linfocitos T, especialmente CD4+, participan en este particular tipo de reaccin, en que
producto de la interaccin entre la CPA y LT CD4+,
se secretan diversas citoquinas que producen a su
vez mltiples efectos. Algunas de estas citoquinas
activan a las clulas endoteliales de las vnulas
para reclutar leucocitos en el sitio y otras se encargan de activar a los monocitos para transformarlos en macrfagos que puedan eliminar a los
antgenos. Es decir, el mecanismo efector final en
la HR es el efecto citotxico mediado por los
macrfagos activados. Este mecanismo participa
en la eliminacin de los patgenos intracelulares,
tales como: Listeria monocytogenes y
Mycobacterium
tuberculosis;
estos
microorganismos no pueden ser eliminados por
los monocitos en reposo y requieren de las
citoquinas activadoras derivadas de los LT y clulas NK para activarse. Este mismo tipo de mecanismo puede ser iniciado por otro tipo de antgenos
inocuos, tales como: antgenos proteicos solubles
o haptenos qumicos. En este caso, sin la participacin de microorganismos patgenos, la activacin de los macrfagos puede generar dao tisular
en el sitio de la reaccin, de aqu deriva el trmino de hipersensibilidad.
Los modelos animales para el estudio de HR
son por ejemplo cobaya inmunizada, a la cual se
le aplican pinceladas del antgeno o bien inyecciones intradrmicas de ste, observndose entre
362
Sin ttulo-2
362
5/26/06, 10:26 AM
dos que han migrado y que presentan una mayor

capacidad de produccin de metabolitos reactivos
del oxgeno, NO y enzimas lisosomales; aumento
de la expresin de molculas MHC y del coestimulador B7 y un aumento tambin en su capacidad productora de citoquinas. Por ello pueden
ejercer diversas funciones, tales como: destruccin de microorganismos por fagocitosis, secrecin a su vez de potentes mediadores de la inflamacin, citoquinas y factores de crecimiento e
inclusive pueden adquirir citotoxicidad contra clulas tumorales. Morfolgicamente, la HR se caracteriza por acumulacin de clulas
mononucleares en el tejido subcutneo y dermis.
Esta acumulacin es notable en venas y vnulas
producindose permeabilidad microvascular, prdida de protenas plasmticas, edema y depsito
de fibrina, estas seran las causas del proceso de
induracin caracterstico de las lesiones en la piel
observadas en esta reaccin.
Ms tardamente en la HR, especialmente si
no se ha logrado eliminar a las clulas infectadas
se forman los denominados granulomas. stos
consisten en un acmulo de clulas y materiales
de desecho rodeados por macrfagos que han
calcificado formando, como ltima medida de seguridad, una barrera fsica de contencin para
impedir la diseminacin del patgeno. En este fenmeno resulta muy importante la participacin
de la IL-12 y Eta-1 u osteopontina (citoquina de
activacin temprana de los linfocitos). La Eta-1
es requerida tempranamente para aumentar y potenciar la secrecin de IL-12, la producen los LT
en el sitio de la infeccin y tiene tambin un papel
en el reclutamiento de los monocitos y en la posterior inhibicin de la IL-10, citoquina inhibitoria
de la formacin de los granulomas.
Los agentes ms estudiados que activan directamente a los monocitos y otras clulas importantes del sistema inmunolgico, son la endotoxina
bacteriana conocida como lipopolisacrido (LPS)
y las lipoprotenas bacterianas; estas molculas
interactan con receptores en el monocito tales
como: CD14 en el caso del LPS y los recientemente caracterizados del tipo Toll (TLR), que reconocen tanto el LPS como las lipoprotenas
bacterianas. La descripcin de los TLR, que en su
regin extracelular son homlogos a la protena
Toll de Drosophila, ha llenado un importante vaco en el mecanismo de accin del LPS, pues corresponde a una molcula transmembrana. CD14
es una protena anclada en la superficie externa
de la membrana plasmtica. Dentro de la amplia
familia descrita de receptores TLR, los TLR2 y

TLR4 reconocen a componentes bacterianos;
TLR4 a LPS y TLR2 a componentes de bacterias
Gram positivas. La activacin de estos receptores
(CD14 y TLR) desencadena una serie de eventos
(especialmente de fosforilacin de protenas) que
comunican la superficie celular del monocito con
el ncleo y que permiten explicar molecularmente
los importantes cambios morfolgicos experimentados durante la diferenciacin a macrfago activado y la expresin de las diferentes citoquinas y
otros productos secretados, que sern capaces de
actuar en estrecha coordinacin con diversos tipos celulares. Por su parte, las clulas NK tambin poseen receptores TLR no as CD14, lo cual
explicara su capacidad de responder al LPS en
ausencia de CD14.
LECTURAS SUGERIDAS
Kgi, D., Lederman, B., Brki, K., Zinkernagel,
R. & Hengartner, H., Molecular mechanisms of
lymphocyte-mediated cytotoxicity and their role
in immunological protection and pathogenesis in
vivo. Annu Rev Immunol. 14, 207-232 (1996).
Moretta, A., Biassoni, R., Bottino, C., Mingari,
M. & Moretta, L. Natural cytotoxicity receptors
that trigger human NK-cell-mediated cytolysis.
Immunology Today, 21, 228-234 (2000).
Trapani, J., Davis, J., Sutton, V.R. & Smyth, M.,
Proapoptotic functions of cytotoxic granule constituents in vitro and in vivo. Curr Opin Immunol.
12, 323-329 (2000).
363
Sin ttulo-2
363
5/26/06, 10:26 AM
364
Sin ttulo-2
364
5/26/06, 10:26 AM

Captulo 20
RESPUESTA INMUNE MEDIADA POR IgE
Arnoldo Quezada L. y Edgardo Carrasco C.
1.
2.
3.
4.
Introduccin
Caractersticas de la IgE
Mastocitos y Basfilos
Receptores para IgE y liberacin de
mediadores
5. Regulacin de la sntesis de IgE
6. Rol biolgico de la respuesta mediada por IgE
7. Aplicaciones biomdicas
365
Sin ttulo-2
365
5/26/06, 10:26 AM
366
Sin ttulo-2
366
5/26/06, 10:26 AM
RESUMEN
La respuesta inmune mediada por IgE se refiere a la unin de un antgeno con su IgE
especfica que ocurre en la superficie de mastocitos o basfilos y determina la liberacin de
numerosos mediadores inflamatorios con accin biolgica sobre vasos sanguneos, glndulas
secretorias, terminaciones nerviosas y msculo liso. Se describen las caractersticas de la IgE, de
los mastocitos y basfilos, enfatizando la presencia de receptores para IgE en estas clulas y la
liberacin de mediadores. En la regulacin de la sntesis de IgE se describen las clulas
involucradas, destacando las subpoblaciones de LTh y las citoquinas que participan en los mecanismos de promocin e inhibicin. En relacin al rol biolgico se sealan las enfermedades que
cursan con altos niveles sricos de IgE, y la participacin de stas en enfermedades alrgicas y
parasitarias.
Finalmente, se comenta las aplicaciones biomdicas de la respuesta mediada por IgE.
1. INTRODUCCIN
2. CARACTERSTICAS DE LA IgE
La respuesta inmune mediada por

inmunoglobulina E (IgE), como su nombre lo indica se refiere a la unin de un antgeno con su IgE
especfica en la superficie de un mastocito o
basfilo que determina la liberacin de numerosos
mediadores inflamatorios con accin biolgica sobre vasos sanguneos, glndulas secretorias, terminaciones nerviosas y msculo liso. La serie de eventos que supone esta reaccin presenta varias particularidades que se describirn en este captulo.
Las primeras observaciones que facilitaron
la identificacin de este tipo de reaccin se atribuyen a Prausnitz y Kstner quienes al inyectar
un extracto antignico de pescado en la piel de
sujetos alrgicos indujeron una reaccin cutnea de roncha y eritema. Si inyectaban suero de
sujetos alrgicos al pescado en la piel de sujetos
sanos, y los inoculaban con el antgeno, podan
transferir pasivamente esta reaccin local.
Basados en estas observaciones se otorg la
denominacin de reaginas a los anticuerpos presentes en el suero de enfermos alrgicos, susceptibles de ser detectados en la piel, con la propiedad adicional de ser transferidos mediante suero a
sujetos sanos.
En los ltimos aos de la dcada del sesenta,
Johansson e Ishizaka en forma independiente lograron identificar a la IgE como responsable de
esta actividad reagnica.
La estructura molecular de la IgE es semejante a las otras clases de inmunoglobulinas en

cuanto a la presencia de dos cadenas pesadas y
dos cadenas livianas (ver captulo 6). Sin embargo, su peso molecular es 190 kDa y las cadenas
pesadas (psilon) poseen cinco dominios. No
acta como opsonina, ni activa el complemento,
pero tiene una alta citofilia y posee dos sitios de
unin a las clulas cebadas o mastocitos, basfilos
y otras clulas (clulas de Langerhans,
macrfagos, linfocitos, eosinfilos y plaquetas).
La zona de unin a dos tipos de receptores celulares (FcRI y FcRII) se encuentran en los dominios C2 y C3 de la cadena pesada, en el segmento
Fc de la inmunoglobulina.
La cantidad de IgE srica normalmente es
muy baja, 0,003% del total de inmunoglobinas, y
aumenta apreciablemente en las enfermedades
atpicas. Existe IgE total o libre srica e IgE unida a los receptores de mastocitos y basfilos.
3. MASTOCITOS Y BASFILOS
Los mastocitos o clulas cebadas se originan
en la mdula sea, a partir de clulas progenitoras
que migran a los tejidos y se diferencian in situ.
Se encuentran distribuidos principal y abundantemente en la piel, mucosa intestinal y mucosa respi-
367
Sin ttulo-2
367
5/26/06, 10:26 AM
ratoria (nasal y bronquial), alrededor de arteriolas

y en conexin con fibras nerviosas sensitivas. Su
tamao vara entre 10 y 15 m, poseen un solo ncleo redondeado u oval excntrico y grnulos
citoplasmticos de 0.1 a 0.4 m de dimetro, en
nmero de 50 a 200 por clula, que contienen
histamina y otros mediadores. Estos mediadores
producen aumento de permeabilidad vascular, contraccin del msculo liso, hipersecrecin mucosa y
estimulacin de terminaciones nerviosas. Los grnulos citoplasmticos electrodensos se encuentran
unidos a la membrana celular, se tien con azul de
toluidina y dan un color rojo metacromtico o violeta. La superficie celular presenta numerosas proyecciones de la membrana. El contenido de
histamina de los grnulos del mastocito es 5 veces
mayor que en los basfilos.
Se han identificado subtipos de mastocitos:
existe una poblacin dependiente de linfocitos T
que predomina en pulmones y mucosa
gastrointestinal y contienen triptasa (una proteasa
neutra que se encuentra en los grnulos
citoplasmticos), y otra poblacin denominada TC
(del tejido conectivo intersticial), que predomina
en la piel y en la submucosa gastrointestinal, que
contienen triptasa, quimasa y heparina.
Los basfilos (ver captulo 3) comparten muchas de las caractersticas de los mastocitos, pero
tambin muestran claras diferencias. Se originan
en la mdula sea, como los otros
polimorfonucleares y son elementos predominantemente circulantes, constituyendo el 0.5 a 1% de
la frmula leucocitaria granuloctica del
hemograma normal. Miden 5 a 7 m y poseen un
ncleo bilobular o multilobulado, con cromatina
densa en la periferia.
La superficie celular es lisa y con cortos
pseudopodios irregulares. Contienen grnulos
citoplasmticos con histamina y presentan
acmulos electrodensos de glucgeno que no se
encuentran en los mastocitos.
Si bien comparten con los mastocitos la particularidad de presentar receptores de membrana
de alta afinidad para la IgE, la importancia de los
basfilos en la inmunidad y en la hipersensibilidad est an por definirse, aunque se sabe que
participan en la fase tarda de la hipersensibilidad
inmediata.
A diferencia de mastocitos, tienen molculas
de adhesin (Mac-1 y LFA-1) que les permite migrar del torrente sanguneo a los sitios de inflamacin alrgica, atrados por receptores de molculas de adhesin del endotelio vascular.
4. RECEPTORES PARA IgE Y LIBERACIN

DE MEDIADORES
Los mastocitos y basfilos poseen en su
membrana celular receptores de alta afinidad para
la IgE (FcRI) (figura 20-1). Estos receptores tienen una estructura tetramrica conformada por una
cadena , una cadena y dos cadenas idnticas.
El sitio de unin se ubica en la porcin terminal
de la cadena del receptor que se une a una porcin de 76 aminocidos ubicada en segmentos de
los dominios C2 y C3 de la cadena de la IgE
(segmento Fc). Otras clulas (eosinfilos,
plaquetas, monocitos/macrfagos, linfocitos B y
linfocitos T) poseen receptores de menor afinidad
(FcRII).
Figura 20-1. Estructura del receptor de IgE.
La unin de la IgE con el receptor de alta

afinidad desencadena la degranulacin de
mastocitos y basfilos cuando dos molculas de
IgE se unen a un antgeno (Ag) multivalente. Las
cadenas y de los receptores son protenas de
membrana que aparentemente participan en la
transduccin de seales y activacin de mastocitos
y basfilos. La interaccin Ag + IgE especfica +
FcRI en la superficie de estas clulas induce la
liberacin de mediadores inflamatorios
preformados (histamina, proteasas, proteoglicanos
y factores quimiotcticos de eosinfilos y
polimorfonucleares) y la generacin posterior de
productos tales como leucotrienos C4, D4 y E4,
prostaglandina D2 y factor activador de plaquetas
(PAF) (figura 20-2).
368
Sin ttulo-2
368
5/26/06, 10:26 AM
Figura 20-2. Papel de la IgE en la respuesta inmune.
En la reaccin de la IgE con su antgeno especfico sobre mastocitos se ha descrito una fase
inmediata o precoz que se inicia a los 5-10 minutos, dura 1 a 2 horas, y es responsabilidad de
histamina, leucotrienos y prostaglandina D2 (figura 20-3). Como consecuencia de ella hay contraccin del msculo liso, vasodilatacin y aumento de la secrecin de mucus. Sin mediar un nuevo
estmulo antignico, a las 3 a 6 horas se produce
una fase tarda, que dura 24-48 horas, caracterizada por un fuerte influjo tisular de clulas
inflamatorias provenientes de la circulacin:
eosinfilos, macrfagos, basfilos y linfocitos T.
En la fase inmediata participan molculas de
adhesin de tipo ICAM-1 del endotelio vascular,
y LFA-1 y MAC-1 de los leucocitos, que detienen
a las clulas inflamatorias, las hacen rodar sobre
el endotelio, y facilitan su migracin
transendotelial (ver captulo 12).
En la fase tarda participan interleuquinas liberadas desde los mastocitos y desde las otras clulas inflamatorias, especialmente eosinfilos,
basfilos, macrfagos y linfocitos Th2, con lo cual

se amplifica enormemente la inflamacin. Por tal
motivo se ha denominado tambin a esta fase como
inflamatoria, y est relacionada con la perpetuacin o mantencin de la reaccin alrgica, y el
estado de hiperreactividad que caracteriza a alguna de sus manifestaciones clnicas (rinitis y asma
alrgicas).
Las dos etapas en la reaccin de hipersensibilidad inmediata han sido demostradas tanto en
la piel, como en la nariz y bronquios, cuando se
hace una provocacin con el antgeno especfico.
Tambin se ha demostrado la expresin de
un receptor de alta afinidad para IgE (FcRI) en
las clulas de Langerhans de la piel. En enfermos
con dermatitis atpica, estudios in vitro revelaron
que las clulas de Langerhans que tienen unida
IgE son capaces de captar caros del polvo de habitacin (Dermatofagoide) para su presentacin
antignica; en cambio en ausencia de IgE unida a
las clulas de Langerhans no era posible estimular clulas T especficas contra este tipo de artr-
369
Sin ttulo-2
369
5/26/06, 10:26 AM
Figura 20-3. Activacin de mastocitos y basfilos. Etapas de la reaccin de hipersensibilidad inmediata. Cuando dos molculas
de IgE contiguas son ocupadas por un antgeno polivalente, se produce activacin de los receptores de IgE de alta afinidad, que dan
lugar a estimulacin del mastocito, con generacin de una fase inmediata y otra tarda de la reaccin de hipersensibilidad.
podos. Estos antecedentes inducen a pensar que

la presencia de IgE en la superficie de clulas presentadoras de antgeno facilita el procesamiento
antignico y ayuda a explicar las reacciones
alrgicas que se desencadenan por contacto con
alergenos a nivel de la piel.
Los receptores de baja afinidad para IgE
(FcRII o CD23) se encuentran presentes en va-
rios tipos celulares, principalmente linfocitos B,

macrfagos, linfocitos T activados, plaquetas y
eosinfilos. Se desconoce su funcin en forma
definitiva. En enfermedades alrgicas se observa
una mayor expresin del receptor FcRII en los
cuatro primeros tipos celulares enumerados, indicando que hay un aumento de la sntesis de IL-4
que participa en la regulacin de la expresin de
370
Sin ttulo-2
370
5/26/06, 10:26 AM
este receptor. Adems es posible que el FcRII

participe en la regulacin de la sntesis de IgE, en
la endocitosis de complejos antigno-anticuerpo
(IgE) y en la liberacin de mediadores
inflamatorios a partir de macrfagos, eosinfilos
y plaquetas, consecutiva a la interaccin entre
alrgeno y su IgE especfica unida a estas clulas.
IL-4, IL-5 e IL-13 actan como estimuladoras.

Adems del contacto directo de linfocitos y de la
presencia de IL-4 participan molculas de adhesin celular en la induccin de sntesis de IgE,
especialmente B7-1 en la clula presentadora y
CD28 en el linfocito Th2.
La clula presentadora de antgeno, que
puede ser una clula dendrtica, un macrfago
o un linfocito B, posee una IgE especfica de
superficie que capta el antgeno correspondiente, lo internaliza y lo procesa, de manera que lo
presenta en su superficie en forma de pptidos
asociados a molculas del Complejo Principal
de Histocompatibilidad (MHC, HLA) de clase
II que interactan con el receptor TCR del LTh2
inductor. Como consecuencia de esta interaccin
se produce la activacin de LTh2 con liberacin
de IL-4 e IL-13 que activan al linfocito B para
secretar IgE especficas. Adems de la accin
de IL-4, para completar la activacin del LB, se
requiere del estmulo del receptor CD40 del LB
por su ligando CD40L expresado en la superficie del LT activado (contacto fsico del LT y
LB). Adems de estas dos vas T dependientes,
es posible inducir sntesis de IgE por va T independiente, mediante activadores directos del
LB tales como virus de Epstein-Barr,
hidrocortisona y anticuerpos monoclonales antiCD40, pero siempre se requiere de la accin de
la IL-4 (figura 20-4).
5. REGULACIN DE LA SNTESIS DE IgE

Los mecanismos celulares y moleculares
que participan en la regulacin de la sntesis de
IgE han sido materia de mucho inters. En la etapa de induccin se requieren dos seales: la primera es isotipo-especfica y es dependiente de
IL-4 liberada por los linfocitos T helper (LTh),
y la segunda debe ser proporcionada por el contacto fsico entre el linfocito B y el linfocito T
inductor, o por activadores de los linfocitos B
que actan en forma sinrgica con la IL-4 para
inducir la sntesis de IgE. El papel de los
linfocitos T en la sntesis de IgE por los linfocitos
B es fundamental.
Inicialmente, se demostr en ratones la existencia de subpoblaciones de LTh con diferentes
patrones funcionales y secreciones de citoquinas.
Los Th1 producen IL-2, IFN y linfotoxina y participan en la inmunidad celular e hipersensibilidad retardada. Los Th2 secretan IL-4, IL-5, IL-6,
IL-10 y seran responsables de la sntesis de IgE
por los linfocitos B y la proliferacin y diferenciacin de los eosinfilos.
Estudios en humanos han identificado en individuos atpicos subpoblaciones de LT con caractersticas similares a los Th2, en cuanto a sus
propiedades funcionales y a su capacidad de producir citoquinas en forma diferencial. Un rea de
gran inters para los investigadores es poder establecer los mecanismos que regulan la diferenciacin de los precursores T (Th0) hacia las
subpoblaciones Th1 o Th2. Entre los factores
involucrados en este proceso se han definido a la
naturaleza del antgeno, su va de administracin,
las citoquinas presentes en el medio tisular en el
momento de la diferenciacin, las caractersticas
genticas del husped y las clulas presentadoras
de antgeno.
Numerosas investigaciones han revelado posteriormente que las subpoblaciones de linfocitos
T juegan un rol importante en la respuesta de IgE.
Las clulas Th1 que secretan IFN e IL-2 actan
como supresoras, en cambio las Th2 que secretan
Se ha demostrado que varias citoquinas

pueden modular la sntesis de IgE. Adems de
IL-4, inducen la sntesis de IgE las IL-5, IL-6 y
TNF, y en cambio actan como inhibidores
IFN, IFN, IL-12, IL-18, TNF, TGF, IL-8,
PGE2, PAF y los neuropptidos VIP y
somatostatina.
En individuos atpicos los mastocitos pueden producir IL-4 y de esta manera facilitan la sntesis de IgE cuando un sujeto se expone a su
alergeno especfico. Adems, la IL-4 producida
por mastocitos condiciona una expansin de las
clulas Th2 en individuos alrgicos. Estas clulas
Th2 como ya vimos son estimuladas por clulas
presentadoras de antgeno que poseen en su superficie IgE para el alergeno inductor, y al activarse liberan ms IL-4 y facilitan la sntesis de
IgE especfica por el linfocito B. Por otro lado, la
IL-4 inhibe la produccin de IFN y la diferenciacin de clulas Th1.
371
Sin ttulo-2
371
5/26/06, 10:26 AM
Figura 20-4. Mecanismo involucrado en la reaccin de hipersensibilidad inmediata y su regulacin. Representacin esquemtica del proceso iniciado por el procesamiento del antgeno por la clula presentadora de antgenos (CPA), exposicin del
eptopo alergnico unido a antgenos HLA-II, y estmulo del receptor TCR del linfocito Th2. En la activacin del linfocito B para
sintetizar IgE especficas, se requiere la participacin de IL-4 e IL-13 liberadas por el LTh2, y la interaccin de la molcula CD40
del LB con su ligando CD40L del linfocito Th2. Dos IgE fijas en la superficie de los mastocitos, al unirse por una molcula
antignica dan lugar a la liberacin de los mediadores de la reaccin de hipersensibilidad inmediata. Este mecanismo es regulado
por el linfocito Th1, a travs de la secrecin de IFN y el sistema monocito-macrofgico por liberacin de IL-12 e IL-18.
y diversos compuestos qumicos. Se considera a

esta IgE como la responsable, por su unin a receptores de alta afinidad en las clulas cebadas,
de la ulterior degranulacin de stas al contactar
con el antgeno especfico. La inflamacin mediada por IgE es responsable de la llamada alergia
atpica causante de rinitis, asma y dermatitis, y
tambin de reacciones generalizadas como urticaria y anafilaxia.
Se ha postulado adems, que por la capacidad de producir vasodilatacin rpida, la IgE podra tener una funcin facilitadora en la inflamacin mediada por complejos inmunes y en la inflamacin mediada por clulas, al permitir una va
de entrada rpida de factores solubles y de clulas
circulantes hacia los tejidos.
Es difcil aceptar la existencia de mecanismos que participen solamente en reacciones de
dao tisular. As, se han acumulado evidencias de
la participacin de la IgE en la proteccin contra
la infestacin por parsitos helmnticos y se han
identificado anticuerpos de clase IgE relacionados con la inmunidad protectiva contra parsitos.
6. ROL BIOLGICO DE LA RESPUESTA

MEDIADA POR IgE
En condiciones normales, los niveles de IgE
en el suero alcanzan valores muy bajos comparados con las otras inmunoglobulinas (aproximadamente 0.05 mg/dL). Estos niveles se elevan en
forma significativa en varias enfermedades, particularmente en las condiciones llamadas
alrgicas, tales como Rinitis alrgica, Asma
bronquial, Dermatitis atpica y Aspergillosis
broncopulmonar alrgica. Tambin se encuentra
aumentada en enfermedades parasitarias, en algunas inmunodeficiencias primarias como el Sndrome de Hiper-IgE, la Ataxia telangectasia y el Sndrome de Wiscott-Aldrich; en la Reaccin de injerto contra husped y en el Mieloma mltiple
IgE, caracterizado por proliferacin de plasmocitos
con produccin de IgE monoclonal.
En las enfermedades alrgicas es posible detectar anticuerpos IgE dirigidos contra antgenos
ambientales (plenes, caros, epitelios animales,
hongos), venenos de insectos, alimentos, frmacos
372
Sin ttulo-2
372
5/26/06, 10:26 AM
En la esquistosomiasis, la equinococosis, la
triquinosis, la ascaridiasis y la toxocariasis existen anticuerpos de clase IgE que pueden participar en reacciones de citotoxicidad celular mediada por eosinfilos contra huevos, larvas y gusanos. Adems, anticuerpos IgE pueden desencadenar reacciones anafilcticas, por ejemplo, ante la
ruptura de un quiste hidatdico, o por la picadura
de abejas. En modelos animales y en enfermos
humanos se ha demostrado que el incremento notable de la sntesis de IgE frente a una infestacin
parasitaria se produce contra antgenos del parsito y adems en forma de IgE no especfica, traduciendo una alteracin en la regulacin de la sntesis normal de IgE. Existen controversias si este
aumento de IgE no especfica es tambin un mecanismo protectivo o por el contrario, es un fenmeno inducido por el parsito para evadir los efectos de la IgE especfica.
LECTURAS SUGERIDAS
Busse, W., Calhoun, W., Sedgwick, J.,
Mechanism of airway inflammation in asthma,
Am Rev Respir Dis, 147:520-4, 1993.
Capron, A., Capron, M., Grangette, C., Dessaint,
J., IgE and inflammatory cells, Ciba Foundation Symposium, 147:153-70, 1989.
Hagan, P., IgE and protective immunity to helminth infections, Parasite Immunol, 15:1-4, 1993.
Hamawy, M., Mergenhagen, S., Siraganian, R.,
Adhesion molecules as regulators of mast-cell
and basophil function, Immunol Today, 15:62-6,
1994.
Janeway, CH. Travers, P., Walport, M., Capra, D.,
Immunobiology, Ed. Masson, 2000.
Leung, D., Mechanisms of the human allergic
response: clinical implications, Ped Clin N Amer,
41:727-43, 1994.
7. APLICACIONES BIOMDICAS
La determinacin de IgE srica y de
anticuerpos IgE especficos, ya sea directamente
en el suero, o indirectamente a travs de las pruebas cutneas, son tiles en el diagnstico de enfermedades alrgicas, parasitarias e inmunodeficiencias.
El mejor conocimiento de la regulacin de
la sntesis de IgE y de la respuesta mediada por
IgE permitir el desarrollo de frmacos o factores teraputicos tiles en el tratamiento de enfermedades en que se involucra este tipo de reaccin inmunitaria. La inmunoterapia con alergenos
produce una accin teraputica favorable, desviando la reaccin mediada por el linfocito Th2
a linfocito Th1. El IFN producido por linfocitos
Th1 y las IL-12 e IL-18 generados por
macrfagos bloquean la accin de los LTh2 y sus
linfoquinas, con lo cual el LB no sintetiza IgE.
Otra aplicacin es el uso de anticuerpos
monoclonales para suprimir la IgE, procedimiento que se est usando con xito en el tratamiento
de rinitis y asma alrgicas.
Finalmente, la informacin ms completa
sobre los antgenos parasitarios y su capacidad para
inducir anticuerpos protectivos IgE, permitir el
desarrollo de vacunas para la prevencin y el control de las enfermedades parasitarias.
Pritchard, D. Immunity to helminths: is too much

IgE parasite-rather than host-protective?, Parasite Immunol., 15:5-9, 1993.
Romagnani, S., Induction of TH1 and TH2 responses: a key rol for the natural immune response?, Immunol Today, 13:379-81, 1992.
Schwartz, L., Mast cells: function and contents,
Curr Opin Immunol, 6:91-7, 1994.
Stites, D., Terr, AI., Basic and Clinical Immunology, Ed. Appleton & Lange, USA, 1994.
Wasserman, S., Mast cells and airway inflammation in asthma, Am J Respir Crit Care Med,
150:539-41, 1994.
373
Sin ttulo-2
373
5/26/06, 10:26 AM
374
Sin ttulo-2
374
5/26/06, 10:26 AM

SECCIN
IV
INMUNOLOGA CLNICA
375
Sin ttulo-2
375
5/26/06, 10:26 AM
376
Sin ttulo-2
376
5/26/06, 10:26 AM

Captulo 21
HIPERSENSIBILIDAD
Arnoldo Quezada L. y Ximena Norambuena R.
1. Introduccin
2. Clasificacin de las reacciones de
hipersensibilidad
3. Hipersensibilidad inmediata mediada por IgE (tipo I)
4. Hipersensibilidad citotxica (tipo II)
5. Hipersensibilidad mediada por complejos inmunes (tipo III)
6. Hipersensibilidad retardada mediada por clulas (tipo IV)
377
Sin ttulo-2
377
5/26/06, 10:26 AM
378
Sin ttulo-2
378
5/26/06, 10:26 AM
RESUMEN
La hipersensibilidad puede definirse como una condicin adquirida de reaccionar
inmunolgicamente a una sustancia antignica de manera tal que esta respuesta inmune causa
una alteracin patolgica o expresin clnica de dao tisular en el husped. Aunque existen ciertas discrepancias, la clasificacin actualmente ms aceptada de las reacciones de hipersensibilidad corresponde a Gell y Coombs quienes describieron cuatro tipos de respuesta de dao
inmunolgico. Se seala las principales caractersticas que tipifican a las reacciones mediadas
por IgE, las reacciones citotxicas, las reacciones mediadas por complejos inmunes y las reacciones de hipersensibilidad mediada por clulas. Se enfatiza en los fenmenos biolgicos que las
caracterizan y se da ejemplos de situaciones clnicas y enfermedades producidas por cada tipo de
reaccin.
alteracin patolgica o expresin clnica de dao

tisular en el husped.
En las reacciones de hipersensibilidad, los
mecanismos inmunes estn funcionando dentro de
los marcos habituales, pero provocan diferente
dao tisular dependiendo de la interaccin de los
elementos humorales y celulares involucrados.
Desde fines del siglo XVIII ya los investigadores biomdicos se esforzaban por controlar y
mejorar el tratamiento de las enfermedades
infectocontagiosas, principal problema de salud y
causa significativa de la mortalidad de esa poca.
As, la inmunologa surgi unida a la microbiologa y gracias a los trabajos cientficos y descubrimientos de destacados personajes como Jenner,
Pasteur y von Behring se perfeccion el mtodo
de vacunacin o profilaxis al introducir pequeas dosis de microorganismos con virulencia atenuada o de material antignico para prevenir la
enfermedad infecciosa correspondiente en los sujetos inyectados (ver captulo 2).
Por otra parte, las evidencias experimentales
de Erlich al describir el horror autotxico, planteaban que el sistema destinado a proteger a los
individuos era incapaz de reaccionar contra sus
propias estructuras. Tales planteamientos retrasaron la interpretacin de los fenmenos de
autoagresin.
Las primeras evidencias de resultados adversos a un procedimiento de inmunizacin con fines protectores son atribuidas a Richet y Portier,
quienes inyectaron a sus perros con extractos de
1. INTRODUCCIN
La necesidad de comprender la
inmunopatogenia de algunas enfermedades humanas y los principios bsicos de la respuesta inmune relacionados con diferentes expresiones patolgicas han permitido profundizar en el conocimiento del sistema inmune y su relacin
fisiopatolgica con los mltiples factores del medio ambiente.
El rol fisiolgico de la respuesta inmune es,
en trminos muy generales, la proteccin del individuo frente a la agresin de agentes nocivos.
Las enfermedades del sistema inmune comprenden varios tipos: a) las inmunodeficiencias: incapacidad o falta de respuesta; b) la hipersensibilidad, respuesta no protectora que causa dao; c) la
autoinmunidad: respuesta dirigida contra las estructuras propias; y d) neoplasias del sistema inmune.
En 1906 von Piquet reconoci que los
antgenos eran capaces de inducir cambios en los
individuos inmunizados, sealando que la capacidad de respuesta frente a agentes extraos era
independiente del resultado. Si esta respuesta resultaba protectora para el husped se denominaba
inmunidad, en cambio si sta era una reaccin
adversa para el sujeto la llamaba hipersensibilidad. La hipersensibilidad podra definirse como
la condicin adquirida de reaccionar
inmunolgicamente a una sustancia antignica de
manera tal que esta respuesta inmune causa una
379
Sin ttulo-2
379
5/26/06, 10:26 AM
una anmona en un intento por protegerlos contra

el veneno de estas actinias y observaron, en algunos animales, una aparente proteccin, en cambio frente a inyecciones sucesivas otros perros presentaban una reaccin dramtica que en la mayora de los casos, determinaba la muerte. Denominaron a este fenmeno antifilaxis o anafilaxis
como trmino opuesto a profilaxis.
Junto a los procedimientos de vacunacin, se
desarroll la seroterapia como mtodo preventivo
y teraputico. Prausnitz y Kstner demostraron en
esa poca que el suero de pacientes alrgicos
era capaz de transferir en forma pasiva la reaccin cutnea a individuos no alrgicos. Esta
reactividad podra ser detectada en la piel y dieron el nombre de reaginas a estas sustancias
involucradas en la produccin de reacciones de
dao.
En 1925 Coca y Cooke, sealaron la predisposicin especial de algunos sujetos, que denominaron atpicos para formar reaginas, con lo
cual se obtuvieron las primeras observaciones sobre el control gentico en la respuesta inmune de
este tipo.
c)
2. CLASIFICACIN DE LAS REACCIONES DE HIPERSENSIBILIDAD
d) Naturaleza de la sensibilizacin
Reacciones de hipersensibilidad propiamente tal: si est dirigida contra antgenos
externos
Fenmenos de autoinmunidad: si est dirigida contra antgenos propios
Las reacciones de hipersensibilidad requieren de una etapa de sensibilizacin para la formacin de anticuerpos y/o linfocitos T sensibilizados a un agente inductor especfico. ste, llmese
alergeno o antgeno, produce un espectro de respuestas en la persona sensibilizada, cada vez que
se exponga al agente o que ste persista en el organismo sin ser neutralizado. Debe considerarse
que la respuesta en el husped ser diferente si
esta relacin es crnica o es recurrente.
En la actualidad las reacciones de hipersensibilidad se pueden clasificar segn diferentes criterios:
a)
b)
Ubicacin del compromiso

Localizadas : afectan a un solo rgano (piel,
mucosa nasal, bronquial, etc.)
Generalizadas: si presentan manifestaciones
generales (hipotensin, fiebre, etc.)
Tipo de mecanismo inmunolgico involucrado

Humorales: mediadas por anticuerpos
Celulares : mediadas por linfocitos T sensibilizados
e)
Mecanismo fisiopatolgico. Una de las clasificaciones vigentes ms aceptada es la propuesta por Gell y Coombs que las divide en
cuatro categoras de reacciones de hipersensibilidad:
Tipo I. Es la denominada reaccin

anafilctica o hipersensibilidad inmediata.
El alergeno o antgeno reacciona con la IgE
unida a las clulas tisulares denominadas
mastocitos y los basfilos circulantes induciendo degranulacin y activacin celular que
determina la liberacin de mediadores activos de la inflamacin.
Tipo II. Llamada tambin hipersensibilidad

citotxica, en la cual un anticuerpo especfico reacciona con componentes de la superficie celular producindose opsonizacin,
citotoxicidad y activacin del complemento
con el consiguiente dao celular y tisular.
Tipo III. Reacciones mediadas por complejos inmunes. Se produce por formacin de
complejos inmunes que activan el sistema de
Complemento, inducen agregacin
plaquetaria, activacin de leucocitos
polimorfonucleares y liberacin de enzimas
proteolticas que causan microtrombos,
vasculitis y necrosis.
Tipo IV. Hipersensibilidad retardada o celular en la cual los linfocitos T que se han
sensibilizado y frente al estmulo antignico
liberan citoquinas que inducen infiltracin y
transformacin principalmente de clulas
mononucleares. Se produce sin la participacin de anticuerpos.
Tiempo entre la exposicin al antgeno o

alergeno y la expresin de la respuesta
Inmediatas: unos pocos minutos
Mediatas : algunas horas
Retardadas: entre 48 a 72 horas
380
Sin ttulo-2
380
5/26/06, 10:26 AM
autopsia de los animales as tratados, es posible

evidenciar hiperdistensin pulmonar secundaria a
broncoconstriccin y signos de dilatacin vascular
generalizada. Las alteraciones descritas corresponden a la denominada anafilaxia generalizada en
su forma ms grave, el shock anafilctico, cuyas
manifestaciones varan en las diferentes especies.
En el hombre, la anafilaxia generalizada se
presenta con prurito intenso, erupcin urticarial,
eritema, vmitos, clicos intestinales, deposiciones lquidas, dificultad respiratoria, edema
larngeo, obstruccin bronquial e hipotensin
arterial. La broncoconstriccin y la vasodilatacin
que son causales de muerte pueden ser contrarrestadas con la administracin de adrenalina. Este
cuadro grave puede presentarse en reacciones adversas a drogas como penicilina y procana y por
picaduras de insectos en sujetos sensibilizados. En
clnica humana son ms frecuentes las reacciones
localizadas en las vas respiratorias (rinitis alrgica,
asma bronquial alrgica) y en la piel (urticaria).
La descripcin clsica incluida en la clasificacin de Gell y Coombs como reaccin inmediata comprende los fenmenos que ocurren a los
15 a 30 minutos de la interaccin del alergeno con
la IgE especfica unida al receptor de alta afinidad
en la membrana del mastocito, que determina la
degranulacin y liberacin de mediadores de la
fase inmediata.
La activacin del mastocito tambin
incrementa la sntesis de mediadores de la respuesta inflamatoria generados en el metabolismo del
cido araquidnico tales como prostaglandina A2,
tromboxano y leucotrienos los que amplifican la
respuesta tisular. Adems participan linfocitos Th2
que generan citoquinas caracteristicas de la fase
tarda como componente de la misma reaccin (IL4, IL-5, IL-10). En esta fase tarda se produce infiltracin celular por eosinfilos, linfocitos y
macrfagos, responsables de inflamacin local
iniciada por la interaccin del alergeno y la IgE.
La persistencia de la hiperreactividad bronquial
en el asma y de la hiperreactividad nasal en la
rinitis alrgica es atribuida a la infiltracin celular
tpica de la fase tarda. Estos conocimientos han
permitido un tratamiento ms racional de estas
enfermedades que requieren frmacos antagonistas de los mediadores (antihistamnicos) o
frmacos que reviertan los efectos de los mediadores sobre los receptores celulares
(broncodilatadores) en la fase aguda combinados
con uso prolongado de medicacin antiinflamatoria (corticoides) para tratar la fase tarda
3. HIPERSENSIBILIDAD INMEDIATA MEDIADA POR IgE (TIPO I)

Las reacciones de hipersensibilidad en que
participa este tipo de respuesta se llaman tambin
anafilcticas, reagnicas o inmediatas. Las caractersticas de la respuesta inmune mediada por IgE
y mastocitos/basfilos fueron descritas en el captulo 20. Brevemente, luego de una exposicin
previa con el antgeno (fase de sensibilizacin),
los mastocitos tisulares y los basfilos a nivel sanguneo que tienen IgE especfica unida a los receptores celulares, en un nuevo contacto con el
antgeno liberan mediadores qumicos contenidos
en los grnulos del citoplasma y producen una
reaccin inflamatoria tisular local provocando
edema, broncoespasmo, vasodilatacin o anafilaxia (figura 21-1). Estos mediadores qumicos son
los que participan en las manifestaciones clnicas
agudas de rinitis alrgica, asma, urticaria y anafilaxia.
Figura 21-1. Representacin de hipersensibilidad de tipo I

o inmediata
Los modelos utilizados para su estudio han

demostrado que en animales previamente
inmunizados o sensibilizados con un antgeno proteico, es posible desencadenar a los pocos minutos de la provocacin con el antgeno una reaccin caracterizada por dificultad respiratoria marcada, asfixia, convulsiones, shock y muerte. En la
381
Sin ttulo-2
381
5/26/06, 10:26 AM
de infiltracin celular responsable de la mantencin de la hiperreactividad.

Los mecanismos desencadenados adems
producen en los tejidos locales un aumento en la
permeabilidad capilar con el ingreso de molculas biolgicamente activas, anticuerpos sricos y
clulas circulantes en los rganos blancos.
Adems, la degranulacin de mastocitos puede ser provocada sin la interaccin antgeno-anticuerpo, por frmacos como morfina, codena entre otras, por anafilotoxinas derivadas del sistema
complemento y por accin de mediadores qumicos de los linfocitos T.
efectores en este tipo de reaccin:

a)
El anticuerpo se une a los antgenos en las

clulas o tejidos y activa la va clsica del sistema del complemento produciendo citolisis
y muerte celular. Ej: algunas reacciones
hemolticas.
b) El anticuerpo citotxico se une al antgeno

celular o tisular y expone los fragmentos Fc
que son reconocidos por clulas fagocticas
las cuales pueden destruir a la clula
recubierta de anticuerpos o liberar enzimas o
componentes que lesionan un tejido, en el
caso de antgenos unidos a membranas
basales. Ej: Sndrome de Goodpasture.
4. HIPERSENSIBILIDAD CITOTXICA
(TIPO II)
c)
Este tipo de lesin mediada inmunolgicamente se caracteriza por la presencia de
anticuerpos dirigidos contra antgenos celulares o
tisulares. En la actualidad, su importancia es menos significativa, ya que la presencia de tales
anticuerpos es menos fundamental que la participacin de complejos inmunes en las lesiones de
los tejidos.
Pueden existir diferentes mecanismos
Los anticuerpos unidos a su antgeno tisular

actan como mediadores de la llamada reaccin citotxica celular dependiente de anticuerpo (ADCC), en la cual las clulas
efectoras pueden ser linfocitos, macrfagos
o clulas NK. En esta situacin, la clula
efectora guiada por el anticuerpo citotxico
libera componentes que daan el tejido donde se encuentra el antgeno (figura 21-2).
Figura 21-2. Representacin de hipersensibilidad de tipo II o citotxica.
382
Sin ttulo-2
382
5/26/06, 10:26 AM
El modelo experimental mejor conocido en

que se ha estudiado este tipo de reaccin es la
llamada nefritis nefrotxica que se produce en
animales inyectados con suero que contenga
anticuerpos contra la membrana basal del
glomrulo. Estos anticuerpos son en su mayora de tipo Ig G y pueden fijar complemento.
En clnica humana, en el sndrome de
Goodpasture que se manifiesta por hemorragia
pulmonar, glomerulonefritis y anemia, es posible detectar anticuerpos circulantes antimembrana basal del capilar glomerular y pulmonar
conjuntamente con depsitos lineales de
inmunoglobulinas en las membranas basales del
tejido renal y pulmonar mediante inmunofluorescencia.
Otras enfermedades en que participara este
mecanismo de dao citotxico son: reacciones
transfusionales, enfermedad hemoltica del recin
nacido, anemia hemoltica autoinmune, citopenias
por hipersensibilidad a drogas y rechazo
hiperagudo de trasplantes, que se produce en sujetos receptores que tienen anticuerpos contra el
tejido injertado.
5. HIPERSENSIBILIDAD MEDIADA POR

COMPLEJOS INMUNES (TIPO III)
Corresponde al dao tisular provocado por
la formacin de complejos inmunes que no han
sido eliminados oportunamente por el sistema
fagoctico. Los anticuerpos que participan en este
tipo de reaccin son de diferente clase (isotipo) y
su unin al antgeno puede ser reversible.
El anticuerpo habitualmente de clase IgM e
IgG se une al antgeno y forma un complejo inmune que induce la activacin del sistema complemento a partir de C1q (va clsica). La activacin del complemento genera anafilotoxinas y factores quimiotcticos cuya accin determina aumento de permeabilidad vascular y activacin e
infiltracin de neutrfilos, que ingieren los complejos inmunes y liberan enzimas lisosmicas daando las clulas y tejidos donde se encuentran
depositados los complejos inmunes (figura 21-3).
El tipo de antgeno que participa en estas reacciones puede ser extrnseco o autoantgeno. Se
manifestar como una enfermedad autoinmune
cuando el antgeno corresponda a un autoantgeno
o cuando presente reaccin cruzada con un
antgeno propio.
Figura 21-3. Representacin de la hipersensibilidad de tipo III o por complejos inmunes.
383
Sin ttulo-2
383
5/26/06, 10:26 AM
Hay que considerar que no todos los complejos inmunes que constantemente se estn formando desencadenan una respuesta nociva. Aquellos inmunocomplejos que s son capaces de despertar respuesta de dao lo harn a travs de la
activacin del complemento, de aminas
vasoactivas que se liberan luego de la activacin
de los basfilos y de mastocitos.
Los inmunocomplejos se depositarn en tejidos u rganos determinados segn el tamao de
los complejos inmunes, de factores hemodinmicos como reas de turbulencias que ocasionan
dao endotelial y tambin depender de la afinidad de unin del antgeno al anticuerpo.
Este grupo comprende dos tipos de reacciones por inmunocomplejos en que se produce dao
tisular: el fenmeno de Arthus y la enfermedad
del suero.
En el primer tipo se produce una precipitacin de inmunocomplejos extravasculares con
necrosis tisular local, con liberacin de sustancias
proteolticas locales e infiltracin neutroflica en
las paredes de los vasos. En las primeras horas
aparece eritema y edema que aumentan progresivamente hasta tres a seis horas, para desaparecer
en diez a doce horas. Las manifestaciones en esta
fase son ms agudas. Ejemplos de este subgrupo
de reacciones se observan en las etapas agudas de
las enfermedades pulmonares denominadas
neumonitis por hipersensibilidad o alveolitis
alrgicas extrnsecas que se producen en sujetos
expuestos por va inhalatoria a partculas orgnicas (esporas de hongos, protenas aviarias, entre
otras). Los enfermos as sensibilizados desarrollan sntomas generales como fiebre y escalofros
conjuntamente con disnea, tos, leucocitosis e infiltrados pulmonares, y tienen anticuerpos
precipitantes en circulacin, detectables mediante las pruebas especficas. La reaccin se produce
cuatro a seis horas despus de la exposicin al
antgeno por va inhalatoria, generando una intensa
inflamacin de la va area y el tejido pulmonar
que puede resolverse en 12 a 18 horas. La persistencia de las lesiones pulmonares con progresin
a fenmenos de alveolitis y fibrosis parecen depender de la participacin de otras clulas
inflamatorias especialmente linfocitos,
macrfagos y fibroblastos. Otros ejemplos son las
reacciones post-inmunizaciones, reacciones a drogas e intolerancia insulnica.
En la enfermedad del suero la formacin de
inmunocomplejos ocurre en el compartimento
intravascular y el depsito posterior se produce
en diferentes territorios tales como rin, piel, articulaciones y vasos sanguneos. La denominacin
de enfermedad del suero proviene de las observaciones hechas en las primeras dcadas del siglo
XX cuando se utilizaba principalmente suero de
caballo como antisuero para el tratamiento de la
difteria, el ttanos u otras enfermedades infecciosas. Hasta un 50% de los enfermos tratados con
este suero heterlogo presentaban fiebre, compromiso general, lesiones cutneas urticariales y
eritematosas, artralgias, linfoadenopatas y
esplenomegalia. Actualmente ocurren reacciones
similares en casos de alergia a la penicilina y otras
drogas y en enfermos trasplantados que reciben
suero antilinfocitario como tratamiento o prevencin del rechazo.
Existen numerosos ejemplos de enfermedades humanas en las cuales es posible encontrar
complejos inmunes circulantes y depsitos en los
tejidos, destacando la glomerulonefritis
postestreptoccica, la endocarditis infecciosa, la
infeccin por virus de hepatitis y enfermedades
autoinmunitarias como artritis reumatoide y lupus
eritematoso sistmico, especialmente en la nefritis
lpica.
6. HIPERSENSIBILIDAD RETARDADA
MEDIADA POR CLULAS (TIPO IV)
Se ha definido como hipersensibilidad tarda
o retardada a las reacciones en que participan
linfocitos T. A comienzos del presente siglo, von
Pirquet denomin "alergia tuberculnica" a la respuesta cutnea positiva obtenida en sujetos infectados con bacilo tuberculoso, al estimular la piel
con preparados del mycobacterium. En 1942,
Landsteiner y Chase demostraron que era posible
transferir en forma pasiva esta reaccin tarda utilizando clulas inmunes y esto no ocurra con suero
inmune.
Existen algunas dificultades para separar la inmunidad mediada por clulas y la hipersensibilidad retardada, ya que ambos trminos describen el
mismo fenmeno inmunolgico, y se refieren a la
respuesta inflamatoria mediada por linfocitos T que
reaccionan con su antgeno especfico, sin considerar si el resultado final es protectivo o nocivo
para el individuo. En sentido ms estricto las funciones efectoras del linfocito T se pueden definir
como la citotoxicidad directa ejercida por linfocitos
citotxicos y la inmunidad mediada por clulas e
hipersensibilidad tarda ejercida por LTH1.
384
Sin ttulo-2
384
5/26/06, 10:26 AM
las plasmticas, clulas epiteloideas y clulas gigantes multinucleadas. Su formacin se interpreta como estimulacin local persistente por
antgenos de baja solubilidad y degradacin que
dan como resultado final esta respuesta local de
clulas mononucleares transformadas. Aparece en
procesos infecciosos, hipersensibilidad retardada
a metales y partculas orgnicas y en sarcoidosis
y otras enfermedades granulomatosas.
La inmunidad mediada por clulas y la hipersensibilidad retardada se pueden inducir por
inmunizaciones y por contacto en la piel y mucosas
con sustancias qumicas sensibilizantes que muchas veces son haptenos que se unen a una protena transportadora como en el caso de dermatitis
por contacto. Tambin se adquiere en forma natural en infecciones por patgenos intracelulares:
virus, bacterias, hongos, protozoos y helmintos.
As, se pueden describir cuatro tipos de reacciones en la hipersensibilidad retardada: a) la sensibilidad de contacto, b) la reaccin tipo
tuberculina, c) la reaccin granulomatosa y d) la
reaccin de Jones Mote.
La reaccin de sensibilidad por contacto es
mxima a las 48 horas, es inducida por haptenos
como el nquel que son capaces de atravesar las
barreras cutneo mucosas y se unen a las protenas. Este complejo formado por hapteno y protena transportadora es capaz de inducir la respuesta
de linfocito T, con abundante infiltrado
mononuclear en la epidermis tal como se ha observado en el eczema. La reaccin de hipersensibilidad de tipo tuberculina se observa entre las
48 y 72 horas manifestndose con infiltracin
linfoctica mononuclear en la dermis. La reaccin
granulomatosa es la observada en la sarcoidosis
y se produce por persistencia del antgeno en el
macrfago favoreciendo la formacin de clulas
epitelodeas y clulas gigantes multinucleadas. La
reaccin de Jones Mote es mxima a las 24 horas y se caracteriza por predominio de basfilos
intralesionales.
Las pruebas cutneas para hipersensibilidad
retardada son tiles y sencillas para la evaluacin
general de la inmunocompetencia y en el diagnstico de enfermedades infecciosas. Cuando se
usan para diagnstico, las pruebas positivas no necesariamente implican enfermedad y en la evaluacin de la competencia inmunolgica deben
considerarse variables que pueden modificar sus
resultados. La reactividad cutnea representa la
capacidad individual de expresar la hipersensibilidad retardada a los antgenos inyectados y su
Las respuestas inflamatorias de este tipo son

importantes en la eliminacin de agentes infecciosos intracelulares, pero pueden dirigirse contra sustancias ambientales normalmente inocuas
y causar enfermedad. Estas respuestas mediadas
por clulas se expresan en 48 a 72 horas en el sujeto previamente sensibilizado y se caracterizan
por el infiltrado inflamatorio predominantemente
por clulas mononucleares, a diferencia de la hipersensibilidad mediada por anticuerpos que ocurre en minutos o algunas horas y presentan infiltrado de tipo polimorfonuclear.
El mecanismo de respuesta supone que LT
inductores son activados por clulas presentadoras de antgeno, con liberacin de citoquinas que
expanden el clon de TH1 los cuales secretan IL-2,
IFN, TNF, IL-3, GM-CSF, como principales
mediadores activos que atraen y activan
macrfagos, producen vasodilatacin, depsitos
de fibrina, formacin de granulomas y destruccin
tisular local (figura 21-4).
Figura 21-4. Representacin de la hipersensibilidad de tipo

IV o mediada por clulas.
Las caractersticas histopatolgicas de las reacciones retardadas muestran infiltrados con predominio de linfocitos y monocitos, depsitos de
fibrina, edema y destruccin tisular que en lesiones avanzadas origina la tpica necrosis caseosa.
El elemento tpico es el granuloma constituido por
acmulos de linfocitos, neutrfilos escasos, clu-
385
Sin ttulo-2
385
5/26/06, 10:26 AM
expresin depende de interacciones entre clulas

linfoides y monocitarias. La anergia es la ausencia de reaccin cutnea retardada a un grupo de
antgenos habituales y bajo ciertas circunstancias
puede considerarse como un estado de depresin
de la inmunidad mediada por clulas. Existen numerosas condiciones clnicas relacionadas con
anergia: inmunodeficiencias congnitas y adquiridas, infecciones y errores en el procedimiento
tcnico.
Las reacciones de hipersensibilidad tipo IV
han demostrado ser parte de varias enfermedades
autoinmunes organoespecficas como la tiroiditis
de Hashimoto y enfermedades del tejido conectivo
como Polimiositis. Tambin se observa en la Reaccin Injerto contra Husped y el Eritema nodoso.
Como se coment anteriormente la clasificacin de Gell y Coombs sigue siendo la ms aceptada, sin embargo varios autores recientemente han
propuesto modificaciones que ayudan a explicar
las relaciones entre los mecanismos efectores, los
elementos celulares y humorales involucrados, los
efectos iniciales y la expresin final del dao
tisular. Estas modificaciones incluyen
subdivisiones de las reacciones clsicas que facilitan la comprensin de los avances en la interpretacin de los mecanismos patognicos de varias
enfermedades inmunolgicamente mediadas (tabla 21-1)
LECTURAS SUGERIDAS
Galli, S.J., Lantz, C.S., Allergy en Paul WE.,
Fundamental Immunology, 4 ed.,
Philadelphia, Lippincott Raven,1999, pp. 11271174.
Janeway C.A. Jr, Travers, P., Immunobiology:
The immune system in health and disease,
New York, Garland Publishing Inc.,1994.
Kay, A.B., Allergy and allergic diseases N
Engl J Med, 344:30-37, 2001.
Quezada A., Gimpel, S., Miranda, D., Las Heras,
J., Andreis, M., Ultrastructural features of
alveolar cells in experimental hypersensitivity
pneumonitis, Respiration 51: 127-36, 1987.
Quezada, A., von Stowasser, V., Murray, G.,
Andreis, M., Modelo experimental de neumonitis
por hipersensibilidad en ratas, Rev Med Chil
111(4):389-396, 1983.
Terr, A., Mecanismo de hipersensibilidad en
Inmunologa Bsica y Clnica, Editores: Stites y
Terr. Manual Moderno Mxico, captulo 29, pp.
425-38, 1993.
Tabla 21-1. Clasificacin de las reacciones de hipersensibilidad de Gell y Coombs modificada

TIPO I
TIPO II
a
IgE
TIPO III
b
Ig G
IgG
TIPO IV
a1
Th 1
a2
Th 2
b
LT citotxico
ANTIGENO
Antgeno
soluble.
Alergeno
Alergeno
asociado a una
clula o tejido
Receptores de
superficie
celular
Antgeno soluble
Antgeno
soluble
Antgeno
soluble
Antgeno
asociado a una
clula
MECANISMO
EFECTOR
Activacin de
clulas cebadas
Complemento
Clulas FcR+
Fagocitos y NK
Seales
alteradas por
anticuerpo
Clulas FcR+,
complemento
Activacin de
macrfagos
Eosinfilos
Basfilos
Citotoxicidad
directa
EJEMPLO
Rinitis Alrgica
Asma
Anafilaxia
Alergia a
penicilina
Reaccin
transfusional
Anemia
Hemoltica AI*
Enfermedad de
Graves
Miastenia
Gravis
Lupus
Eritematoso Sist.
Enfermedad del
suero
Dermatitis de
contacto
Reaccin
tuberculnica
Inflamacin
Rechazo
alrgica crnica trasplante
Diabetes
Mellitus
*AI=Autoinmune
386
Sin ttulo-2
386
5/26/06, 10:26 AM

Captulo 22
ANAFILAXIS
Patricia Daz A.
1. Introduccin
2. Fisiopatologa
2.1. Mastocitos
2.2. Degranulacin de mastocitos y
basfilos
2.3. Participacin de cascadas de la
inflamacin en la reaccin anafilctica y anafilactodea
2.4. Alteraciones funcionales
3. Causas de anafilaxis
3.1. Frmacos
3.2. Ltex
3.3. Picaduras de himenpteros
3.4. Alimentos
3.5. Anafilaxis inducida por inmunoterapia
3.6. Anafilaxis inducida por ejercicio
3.7. Anafilaxis idioptica
4. Causas de reacciones anafilactodeas

4.1. Aditivos
4.2. Medios de contraste
4.3. cido acetil saliclico (AAS) y
anti-inflamatorios no esteroidales
(AINE)
5. Reacciones anafilcticas y anafilactodeas en pabellones quirrgicos
6. Signos y sntomas
7. Laboratorio
8. Tratamiento
387
Sin ttulo-2
387
5/26/06, 10:26 AM
388
Sin ttulo-2
388
5/26/06, 10:26 AM
RESUMEN
Las reacciones anafilcticas son un conjunto de manifestaciones clnicas producidas por la
descarga masiva de mediadores de la inflamacin desde los mastocitos. La liberacin de mediadores puede ser derivada de la reaccin antgeno-IgE unido a mastocito (anafilaxis) o por la
descarga de mediadores no mediada por IgE (reacciones anafilactodeas). Las manifestaciones
clnicas son las mismas en ambos casos e incluyen: urticaria, enrojecimiento de piel, obstruccin
respiratoria, clicos abdominales, diarrea, hipotensin y shock. Las causas son mltiples e incluyen todas aquellas condiciones capaces de desencadenar la activacin de mastocitos en individuos sensibilizados y no sensibilizados. Es un cuadro clnico que puede ir de leve a severo,
requiere tratamiento de emergencia y aquellos individuos a riesgo deben aprender a tomar medidas preventivas y de automanejo de primeros auxilios.
1. INTRODUCCIN
2. FISIOPATOLOGA
El trmino anafilaxis fue acuado por Portier

y Richet en 1902 cuando, al intentar inducir inmunidad, sensibilizaron a perros con veneno de
anmona de mar. Estos animales en contactos posteriores con el veneno, hicieron reacciones
anafilcticas fatales con pequeas dosis del
antgeno. Estos investigadores, llamaron anafilaxis o sin proteccin a esta reaccin como
opuesto al trmino profilaxis o proteccin.
Actualmente, anafilaxis se refiere a los signos y sntomas derivados de la reaccin
inmunolgica de hipersensibilidad inmediata mediada por IgE, que produce una descarga masiva
de mediadores de la inflamacin desde los
mastocitos y basfilos, alterando fundamentalmente vasos sanguneos y msculo liso. Aunque en un
sentido estricto podramos incluir en la definicin
de anafilaxis las reacciones locales como los sntomas de rinitis alrgica al inhalar y depositarse
un antgeno, este trmino se usa para la reaccin
generalizada, multiforme y alejada del sitio de
entrada del alergeno. Esta reaccin es indistinguible desde el punto de vista clnico de la reaccin anafilactodea, en que la descarga de mediadores no es mediada por IgE.
2.1. Mastocitos
Los mastocitos humanos son un grupo heterogneo, multifuncional de clulas con roles en
diversas condiciones como alergia, infestacin parasitaria, angiognesis y remodelacin tisular. Se
originan de clulas hematopoyticas derivadas de
la mdula sea, entran a la circulacin como precursoras de clulas mononucleadas que expresan
mRNA de stem cell factor(SCF) y receptores
para SCF en su membrana. De la sangre migran a
los tejidos donde bajo la influencia de los factores
microambientales, se diferencian y maduran como
mastocitos. Su origen es muy diferente a los
basfilos que derivan de los precursores de
granulocitos al igual que los eosinfilos y entran
a la circulacin cuando ya estn maduros. Al mismo tiempo, los basfilos no migran hacia los tejidos en condiciones normales, esta migracin se
ha descrito en la fase tarda de la respuesta alrgica.
Los estudios inmunocitoqumicos han demostrado la presencia de dos fenotipos de
mastocitos, dependiendo del contenido de
proteasas neutrales: mastocitos Mt que contienen
slo triptasa y mastocitos Mtc que contienen
triptasa y quimasa. Al comienzo se atribuy su
presencia a las diferentes localizaciones, mucosas
y tejido conectivo. Actualmente, sabemos que la
presencia de ellos depende ms de la patologa
que del tipo de tejido as los Mt estaran relacio-
389
Sin ttulo-2
389
5/26/06, 10:26 AM
nados con el sistema inmune con un rol importante en la defensa y localizados preferentemente en
las mucosas, estn aumentados en nmero en reas
donde hay infiltracin linfocitaria y en enfermedades alrgicas. En cambio los Mtc que se encuentran preferentemente en submucosas y tejido
conectivo, no estaran relacionados con el sistema inmune y tendran una funcin primaria en
angiognesis y remodelacin tisular.
Las reacciones de hipersensibilidad inmediata
se inician cuando las molculas de alergeno se
unen a dos molculas de IgE en la superficie celular del mastocito, entrecruzando sus regiones Fab
(ver captulo 20). Esto permite as el movimiento
de los receptores Fc que inducen la activacin de
la membrana celular y los eventos citoplasmticos
que culminan en la liberacin de mediadores
preformados contenidos en los grnulos y la generacin de nuevos productos como los
eicosanoicos y citoquinas.
a) Mediadores preformados
Varias molculas se encuentran preformadas
en los mastocitos y basfilos (tabla 22-1).
La Histamina o B-imidazoletilamina, fue sintetizada en 1907 y denominada histamina o derivada de tejidos (del griego histos). Posteriormente, al inyectar histamina por va endovenosa, fue
posible reproducir los sntomas de animales sensibilizados, por lo que se consider ser el mediador humoral de las reacciones alrgicas. La
histamina es sintetizada en el aparato de Golgi de
los mastocitos y basfilos, a partir de la
decarboxilacin de la histidina su aminocido precursor. Una vez formada la histamina se une a los
residuos cidos de la cadena de glicosaminoglican
de la heparina u otro proteoglicano. La cantidad
de histamina en mastocitos humanos aislados de
pulmn, piel, tejido linfoide e intestino delgado
es de 3-8 pg por clula. Niveles bajos de histamina
son secretados en forma continua, pero se desconoce su estmulo, niveles ms altos de secrecin
se produce cuando la clula es estimulada con
antgenos, anti-IgE, concanavalina A, substancia
P, poliaminas, opiceos, compuesto 48/80 y una
variedad de citoquinas. Hay evidencias que sugieren que subpoblaciones de mastocitos difieren
2.2. Degranulacin de mastocitos y basfilos

Las manifestaciones clnicas de las reacciones
anafilcticas y anafilactodeas se deben a la liberacin de mediadores desde los mastocitos y
basfilos a saber:
Tabla 22-1. Mediadores preformados de mastocitos humanos

Tipo de mediador
Mediador
Funcin
Amina biognica
Histamina
Contraccin msculo liso y clulas

Endoteliales
Proteasas neutrales
Triptasa
Quimasa
Rompe C3 y C3a Activa fibroblastos

Rompe neuropptidos
Hidrolasas
B-hexosaminidasa
B-glucoronidasa
B-D-galactosidasa
Arilsulfatasa
Hidrolisa carbohidratos complejos

Hidrolisa sulfatos esteres aromticos
Proteoglicanos
Heparina
Condroitin sulfato
Anticoagulante
Desconocida
Enzimas oxidativas
Superoxidismutasa
Peroxidasa
Convierte O2 a H2O2
Convierte H2O2 a H2O
Factores quimiotcticos
ECF-A
NCF-A
Atrae y activa eosinfilo

Atrae y activa neutrfilos
ECF-A, Factor quimiotctico de eosinfilo; NCF-A, Factor quimiotctico de neutrfilos
390
Sin ttulo-2
390
5/26/06, 10:26 AM
segn el estmulo, tanto en la variedad como velocidad de liberacin de los diferentes mediadores. La histamina extracelular es rpidamente
metabolizada a travs de dos vas enzimticas,
metilacin (70%) y oxidacin (30%). La
metilacin es catalizada por una enzima
intracelular la N-metiltransferasa transformndola a N-metilhistamina que es excretada por el rin. Parte de este producto metilado es oxidado
por la monoaminoxidasa y excretada como cido
metilimidazol actico. Tambin, la histamina puede ser directamente oxidada por la diaminoxidasa
(histaminasa) y eliminada como cido imidazol
actico.
La histamina acta en una gran variedad de
tejidos mediante receptores especficos. Gracias
al desarrollo de substancias qumicas que
antagonizan en forma especfica una variedad de
efectos farmacolgicos de la histamina, ha sido
posible determinar tres subtipos de receptores: H1,
H2 y H3. La ocupacin de los receptores H1 de la
histamina produce contractura de la musculatura
lisa gastrointestinal y de la va rea. La inhalacin de histamina es usada en clnica como test
para determinar el grado de hiperreactividad bronquial no especfica en el asma bronquial. La inyeccin intradrmica de histamina, causa una triple respuesta, (a) eritema local producto de la
vasodilatacin arteriolar mediada por receptores
H1 y H2; (b) una respuesta algo ms tarda con
mayor enrojecimiento producido por
neuropptidos con accin vasodilatadora como el
pptido relacionado con el gen de la calcitonina
(CGRP) y (c) luego se forma una ppula que es
consecuencia del edema que sigue a la contraccin de las clulas endoteliales de las vnulas
postcapilares y la exudacin de plasma. La mayor
parte de la formacin de mcula y ppula es por
respuesta de receptores H1, los receptores H2 juegan un rol secundario.
pueden intensificar y prolongar la inflamacin. Por

otro lado la heparina al inhibir la plasmina y
calicrena, inhibe la coagulacin. La quimasa es
capaz de convertir la angiotensina I en
angiotensina II y podra, tericamente, aumentar
la respuesta compensatoria a la hipotensin. En la
tabla 22-2 se muestran mediadores neoformados.
Productos derivados del cido araquidnico
Los productos derivados del cido
araquidnico no estn preformados, se forman al
activarse la clula. Ellos son prostaglandinas,
leucotrienos, tromboxanos y lipoxinas. Al activarse el mastocito mediante entrecruzamiento de los
receptores para Fc de la IgE u otro estmulo, se
activa la fosfolipasa (PLA2) mediante aumento de
calcio y su fosforilacin por una quinasa.
El cido araquidnico es metabolizado por
dos vas, mediante las enzimas cicloxigenasa
(COX) y lipoxigenasa formando prostaglandinas
y leucotrienos respectivamente. La enzima COX
se encuentra en dos formas, COX 1 que se encuentra en forma constitutiva en diferentes tipos
de clulas. COX2 que es altamente inducible por
la accin de citoquinas pro-inflamatorias,
endotoxinas, steres del forbol (PMA), y factores
de crecimiento. Tanto la enzima como su mRNA
es reducido con los corticoides. La generacin de
prostanoides mediante COX2 en macrfagos,
mastocitos y polimorfonucleares se asocia a inflamacin, dolor y fiebre. Los mastocitos humanos y no los basfilos producen prostaglandina D2
(PGD2) lo que ha servido para identificar su presencia en reacciones alrgicas ya que ambas clulas producen histamina.
El cido araquidnico puede ser metabolizado por una variedad de lipoxigenasas, cuando es
metabolizado por la 5-lipoxigenasa se producen
los leucotrienos. As el arquidonato es convertido a 5HPTE y luego a leucotrieno A4. LTA4 es
convertido a dihidroxil leucotrieno LTB4 y luego
a cisteinil leucotrieno LTC4. El rompimiento de
glutamina y glicina produce los metabolitos LTD4
y LTE4, respectivamente.
b) Mediadores neoformados
La degranulacin de mastocitos y basfilos
produce tambin la liberacin de otros mediadores que activan otras vas de la inflamacin, as la
quininogenasa de mastocitos y la calicrena de
basfilos puede activar el sistema quinina. La
triptasa puede activar la calicrena, el sistema complemento y el fibringeno. El factor activador de
plaquetas puede activar el sistema de coagulacin
y producir coagulacin intravascular diseminada.
Factores quimiotcticos atraen eosinfilos que
Factor activador de plaquetas

El Factor activador de plaquetas (PAF) es un
fosfolpido ligado a un grupo ter. El PAF es sintetizado por accin de la fosfolipasa A que hidrolisa
1-O alquil-2 acilgliceril-3 fosforilcolina para producir lisoPAF. Este metabolito es transformado a
391
Sin ttulo-2
391
5/26/06, 10:26 AM
Tabla 22-2. Mediadores generados durante la activacin de mastocitos

Mediador
Funcin
LTC4, LTD4, LTE4
Contraccin msculo liso

Aumento secrecin va area
Dilatacin y aumento de permeabilidad vasos
Disminuye la contractilidad miocrdica
Contraccin arterias coronarias y cerebrales
LTE4
Hiperreactividad va area
LTB4
Quimiotaxis y activacin neutrfilos

Aumenta adherencia leucocitos a endotelio
Aumenta funcin clulas NK
PGE2
Dilatacin y aumento permeabilidad de vasos

Broncodilatacin
PGD2
Broncocontriccin
PGF2alfa
Broncocontriccin
Contriccin vasos pulmonares
TxA2
Broncocontriccin
Aumenta adherencia leucocitos
Aumento agregacin y adherencia plaquetaria
PAF
Agregacin plaquetaria
Quimiotaxis y degranulacin de eosinfilos y neutrfilos
Aumenta permeabilidad vascular
Broncocontriccin
contriccin inducida por inhalacin de alergenos

en individuos asmticos sensibilizados. Por lo tanto es dudoso su rol en el asma bronquial pero en
anafilaxis no ha sido descartado.
PAF mediante la acetilacin por una enzima

acetiltransferasa. La produccin de PAF fue descrita en un comienzo por activacin de basfilos
de conejos. Mastocitos humanos purificados de
pulmn tambin producen PAF y en menor cantidad lisoPAF, que tiene menor actividad que PAF.
En contraste con las plaquetas de conejo, las humanas son menos sensibles a la accin de PAF.
Sin embargo, este mediador tiene accin importante en neutrfilos humanos, en los cuales ejerce
una accin quimiotctica, cambios estructurales,
liberacin de enzimas lisosomales y generacin de
radicales libres. Estas acciones tambin pueden ser
producidas por la generacin de LTB4. PAF tambin tiene accin quimiotctica de eosinfilos tanto in vitro como in vivo, lo que ha hecho especular
que tendra un rol importante en la infiltracin
eosinoflica en alergias. La inhalacin de PAF produce bronco-contriccin en individuos asmticos
y no asmticos. Sin embargo, potentes antagonistas de PAF no son capaces de inhibir la bronco-
Citoquinas
Mastocitos purificados de pulmn humano incubados con SCF y anti-IgE expresan mRNA para
diversas citoquinas como: IL-3, IL-4, IL-5, IL-6,
IL-10, IL-13, GM-CSF y TNF (ver captulo 11).
Factor de Necrosis Tumoral-alfa (TNF-):

se encuentra preformado en los grnulos de
mastocitos. En mucosa nasal y bronquial se
encuentra asociado a la subclase de mastocitos
Mt y en mastocitos de piel se encuentra asociado a la subclase Mtc. En individuos con
rinitis alrgica TNF es liberado junto con
triptasa a los minutos de la provocacin con
alergeno. Esto contrasta con las clulas cl-
392
Sin ttulo-2
392
5/26/06, 10:26 AM
sicas productoras de TNF como macrfagos

y linfocitos que no guardan esta citoquina
preformada y se libera despus de su activacin y transcripcin y por lo tanto de manera
mucha ms lenta que de los mastocitos. La
rpida liberacin de TNF por mastocitos puede tener gran importancia en la inflamacin
alrgica, ya que TNF es crucial para la activacin de NFkB, factor de transcripcin que
aumenta la expresin de mRNA de GM-CSF,
IL,8, IL-6, E-Selectina, VCAM-1 e ICAM-1
en diversas clulas epiteliales y endoteliales.
Interleuquina-5 (IL-5): es crucial para la
maduracin, activacin y sobrevida de
eosinfilos. La produccin de IL-5 se inicia
con la activacin de mastocitos mediante entrecruzamiento de los receptores para IgE. Se
produce slo en la subclase MTt, mastocitos
que estn bajo control de clulas T y estn
aumentados en sitios de inflamacin alrgica
crnica.
Interleuquina-4 (IL-4): es responsable del
estmulo y mantencin de la proliferacin de
linfocitos Th2 y de la sntesis de IgE por clulas B. Por tcnicas inmunocitoqumicas se
ha determinado la presencia de IL-4 en el
80% de mastocitos de la mucosa bronquial.
Se encuentra en los grnulos de mastocitos
Mt y Mtc.
veridad de la reaccin anafilctica se ha

correlacionado con los niveles de la anafilatoxina
C3a, indicando una participacin de la cascada del
complemento. Otros estudios han demostrado la
participacin del sistema calicrena en el desarrollo de angioedema durante una crisis de anafilaxis.
La participacin de los sistemas de complemento, coagulacin, y calicrena-quinina, puede
ser consecuencia de la liberacin de triptasa y
quininogenasa de los mastocitos y calicrena desde los basfilos, sin embargo la hipoxia y el dao
endotelial producido durante el shock pueden activar estos sistemas, como ha sido descrito en otros
shock con hipotensin severa (cardiovascular,
endotxico).
Ms recientemente en modelos experimentales animales, se ha demostrado la participacin
del xido ntrico (NO) durante la anafilaxis. El
NO es producido por el endotelio vascular en forma constitutiva, y su produccin puede ser inducida en diferentes clulas como mastocitos, clulas del msculo liso y otras, por numerosos mediadores, incluyendo histamina, leucotrieno C4,
bradiquinina y substancia P. El NO causa relajacin del msculo liso y aumenta la permeabilidad
vascular produciendo hipotensin.
2.4. Alteraciones funcionales
La mayora de los signos y sntomas de la
reaccin anafilctica pueden ser explicados por la
accin de los mediadores analizados anteriormente. Aunque cualquier rgano puede estar afectado, lo ms frecuente es que haya compromiso de
piel, tracto respiratorio, gastrointestinal y
cardiovascular. stos pueden comprender: eritema cutneo, prurito, sensacin de calor que puede
ir progresando hasta llegar a la urticaria generalizada y angioedema. Los signos y sntomas respiratorios incluyen estornudos, laringoespasmo con
estridor inspiratorio, broncoespasmo con
sibilancias, y disnea. Algunos pacientes presentan nuseas, vmitos, diarrea y dolores abdominales. El compromiso cardiovascular se manifiesta
por hipotensin acompaada de taquicardia y con
menos frecuencia bradicardia y arritmias. La resistencia al flujo de la va area y la cada de la
PO2 se puede atribuir al efecto contrctil directo
de la histamina y otros mediadores que actan
sobre el msculo liso bronquial. Tambin a la accin de la histamina puede deberse la aparicin
de urticaria, sensacin de calor, angioedema y sntomas gastrointestinales. Los estudios sobre
2.3. Participacin de cascadas de la inflamacin en la reaccin anafilctica y

anafilactodea
Los diversos mediadores producidos por
mastocitos y basfilos pueden activar un gran nmero de vas inflamatorias incluyendo: sistema de
las quininas, sistema del complemento, sistema de
la coagulacin y fibrinolisis. La participacin de
estas cascadas proinflamatorias ha sido demostrada en individuos alrgicos sometidos a
inmunoterapia controlada. Cuando el individuo
sufre una reaccin slo urticarial, no experimenta
cambios de sus niveles sanguneos de histamina
ni otros mediadores. Sin embargo, cuando estos
pacientes han experimentado shock, se elevan
significativamente los niveles de histamina en sangre perifrica, la que se correlaciona con la severidad de la hipotensin y en algunos pacientes
con episodios ms severos se observa disminucin de factores de la coagulacin como factor V,
factor VIII, fibringeno, quiningeno, y de los
componentes C3, C4 del complemento. La se-
393
Sin ttulo-2
393
5/26/06, 10:26 AM
hipotensin durante las reacciones anafilcticas y

anfilactodeas, se han realizado cuando estos episodios han ocurrido durante anestesia o
cateterizacin cardaca. Esto ha permitido medir
los fenmenos hemodinmicos, con lo cual se ha
determinado que el evento inicial es la
vasodilatacin con prdida masiva de lquido del
intravascular y paso al extravascular, llegando
hasta perder el 50% del volumen en 10 minutos.
La cada de la presin arterial se correlaciona con
elevacin de histamina, triptasa y C3a. Como
mecanismo compensatorio se liberan
catecolaminas; norepinefrina y epinefrina; se activa el sistema angiotensina con conversin de
angiotensina I a angiotensina II. La respuesta
vasopresora compensatoria es variable, en algunos pacientes, la resistencia vascular perifrica
se eleva en forma anormal, mientras en otros cae
a pesar de la masiva liberacin de catecolaminas.
As, estos pacientes pueden estar en
vasocontriccin mxima y no responden a agentes vasopresores, por lo tanto como la causa de
hipotensin en el shock anafilctico es la prdida
de lquido del espacio intravascular, la terapia de
eleccin es el reemplazo de lquido y los
expandedores de volumen.
dentes familiares de alergia a drogas. La incidencia de alergia a penicilina es de alrededor de 2%

de las personas en tratamiento y reacciones fatales de 1 en 32.000 inyecciones. Cuando un individuo ha sufrido una reaccin alrgica a drogas la
conducta futura es evitarla y slo cuando esto no
es posible, intentar un tratamiento desensibilizante.
3.2. Ltex. Hasta 1980 esta reaccin era poco frecuente, actualmente con el aumento del uso de
ltex ha aumentado su frecuencia y constituye un
problema de salud pblica para grupos de riesgo.
Entre 8-17% de los trabajadores de la salud en
USA, estn sujetos a reacciones al ltex. Entre
los dadores de sangre se ha demostrado que alrededor de un 6% tiene IgE anti-ltex lo que explica
las reacciones alrgicas producidas con ltex en
individuos que desconocen estar en riesgo.
3.3. Picaduras de Himenpteros. Varios grupos
de insectos que se caracterizan por tener lanceta
por la cual inyectan el veneno estn comprendidos en esta clasificacin, a saber las Apidae,
Vespidae y Formicidae. Los alergenos contenidos en el veneno de los himenpteros son protenas y muchos son enzimas. Tambin contienen
pptidos que no son alergnicos pero son responsables de las manifestaciones txicas. Adems de las protenas y pptidos contienen aminas
vasoactivas como: histamina, 5-hidroxitriptamina,
dopamina, norepinefrina y acetilcolina. Las reacciones reportadas por veneno de abeja varan entre un 0.4-3%. En USA alrededor de 25-50 personas mueren anualmente por picaduras de
himenpteros, algunos de ellos sin tener antecedentes de reaccin alrgica a insectos. La manera
ms rpida, simple y econmica de identificar individuos sensibilizados, es el test cutneo. La presencia de test cutneo positivo a veneno de
himenpteros, determina sensibilizacin previa,
pero no predice la forma de reaccionar del individuo, y no discrimina entre aquellos individuos
con reaccin local de los con reaccin sistmica.
Niveles elevados de IgE se observan slo en el
80% de los individuos con test cutneo positivo.
Adems no hay correlacin entre el nivel de IgE y
el grado de sensibilizacin del individuo.
3. CAUSAS DE ANAFILAXIS
Los alergenos que han sido involucrados
como agentes causales de anafilaxis son generalmente protenas o fosfolpidos grandes. Sin embargo, molculas pequeas que acten como
haptenos unindose a protenas del organismo
pueden desencadenar reacciones alrgicas. La respuesta requiere de la exposicin previa al antgeno
y la sntesis de anticuerpo IgE. Sin embargo, la
exposicin al antgeno puede pasar inadvertida y
presentarse una reaccin anafilctica frente a
antgenos que se desconoce estar sensibilizados.
3.1. Frmacos. Los antibiticos son los frmacos
que con ms frecuencia producen reacciones
alrgicas y entre ellos los betalactmicos y sulfas.
Es ms probable que se produzca una reaccin
anafilctica cuando la va de ingreso del antibitico es inyectable. Se ha descrito reacciones
anafilcticas a la primera inyeccin de penicilina,
condicin que es rara, indicando que la sensibilizacin puede ocurrir sin que el individuo est consciente de haber recibido la droga. La alergia a drogas no es ms frecuente en atpicos que en la poblacin general pero s lo es cuando hay antece-
3.4. Alimentos. De los pacientes atendidos por

anafilaxis en un servicio de urgencia, en un tercio
la causa es una reaccin alrgica a alimentos. Hay
gran variedad de alimentos que pueden ser causa
de sensibilizacin, pero los ms frecuentes en pro-
394
Sin ttulo-2
394
5/26/06, 10:26 AM
ducir reacciones anafilcticas son: mariscos, clara de huevos, man, nueces, castaas de caj,
soya, y pescados.
Algunos de estos aditivos han sido causantes de

reacciones sistmicas, en que no ha sido demostrada la IgE especfica. Entre ellos los colorantes
sintticos (anhilinas) como la tartrazina,
carmasina, amaranto, ndigo y otros; los
preservantes como los derivados de sulfitos que
cumplen mltiples funciones, los benzoatos y
parabene. Estos son los que con mayor frecuencia han sido sealados como agente causal de reacciones anafilactodeas.
3.5. Anafilaxis inducida por inmunoterapia.

Durante el tratamiento con inmunoterapia con
extractos alergnicos a pacientes con rinitis
alrgica y asma bronquial alrgica, se pueden producir reacciones anafilcticas. Esto ha llevado a
que en pases como el Reino Unido su uso sea
prohibido y en otros como USA, comits de expertos han dado pautas de recomendaciones de uso,
poniendo especial cuidado en el manejo de pacientes asmticos, ya que tienen ms riesgo de
hacer reacciones fatales.
4.2. Medios de contraste. Las reacciones a medios de contraste utilizados en exmenes

radiolgicos han disminuido con la introduccin
de agentes de baja osmolaridad. Las reacciones
con agentes hiperosmolares se estimaron en un 1%.
En USA alrededor de 8 millones de personas reciben anualmente medios de contraste y de ellas alrededor de 2700 hacen reacciones severas y 500
mueren.
3.6. Anafilaxis inducida por ejercicio. El sndrome de anafilaxis inducida por ejercicio fue
descrito en una serie de individuos que presentaban prurito de piel, urticaria, angioedema,
sibilancias e hipotensin en relacin a ejercicio.
En estos pacientes se ha demostrado
degranulacin de mastocitos y elevacin de
histamina aunque sta no se correlaciona con los
sntomas que presentan. Cerca del 70% de pacientes con este sndrome son atpicos. Hay una
variante que es la anafilaxis inducida por ejercicio en relacin a comidas. Se ha descrito en pacientes que han presentado anafilaxis con ejercicio cuando han ingerido mariscos entre 2 y 24
horas antes. En otros pacientes la sintomatologa
se habra manifestado despus de la ingesta de
apio y ellos presentaban un test cutneo positivo
a apio. En este subgrupo de pacientes, las manifestaciones de anafilaxis se presentan slo cuando hay ingesta de determinados alimentos y ejercicio simultneamente.
4.3. cido acetil saliclico (AAS) y antiinflamatorios no esteroidales (AINE). La

patogenia de la reaccin inflamatoria inducida por
AAS y AINE es debida a la unin inmediata de
estos medicamentos con la cicloxigenasa COX-1
que previene la sntesis de prostaglandinas incluyendo PGE2, permitiendo la metabolizacin del
cido araquidnico por la va de la lipoxigenasa
con la formacin de leucotrienos. Se ha demostrado que las clulas mononucleares de los individuos sensibles a la aspirina tienen gran susceptibilidad por la inhibicin de COX-1 con AAS comparados con los individuos que no reaccionan a
estas drogas. Con la provocacin oral con aspirina en individuos que reaccionan con rinorrea, se
ha determinado aumento de histamina, LTC4,
triptasa y una disminucin de PGE2 en lquido de
lavado nasal, indicando la participacin de
mastocitos. La sintomatologa puede ser prevenida con el uso de antileucotrienos que inhiben sus
receptores o su sntesis.
La incidencia reportada vara dependiendo de
la poblacin seleccionada para el estudio. sta va
desde 2% en grupos de nios hasta 97% en adultos con asma y rinosinusitis o plipos nasales. En
un estudio de 51.979 pacientes que estaban ingiriendo estos medicamentos se report 35 casos de
shock pero en un grupo de pacientes que haban
presentado reaccin anafilctica slo el 3% tena
como agente causal a la AAS.
3.7. Anafilaxis idioptica. En alrededor de dos

tercios de los pacientes que presentan una reaccin anafilctica no es posible determinar su causa. Afortunadamente estos casos son raramente
fatales.
4. CAUSAS DE REACCIONES ANAFILACTODEAS
4.1. Aditivos. Los aditivos en los alimentos cumplen diversas funciones como colorantes,
saborizantes y preservantes. Hay cerca de 3000
substancias permitidas de ser agregadas en alimentos. En general se usan en pequeas cantidades y
la gran mayora no causa reacciones adversas.
395
Sin ttulo-2
395
5/26/06, 10:26 AM
caria y el angioedema son las manifestaciones ms

comunes, seguidas de alteraciones respiratorias
con obstruccin respiratoria alta, disnea y
sibilancias y en un 33% mareos e hipotensin. Con
menor frecuencia se dan las manifestaciones
gastrointestinales incluyendo vmitos, diarrea y
dolor abdominal. Se ha descrito colapso
cardiovascular inmediato sin ser precedido por
sntomas respiratorios o urticaria pero en un 30%
precedidos por sntomas gastrointestinales y en el
85% haba signos neurolgicos de alteracin de
conciencia, temblor y espasmos musculares.
El comienzo de los sntomas se produce entre 5-30 minutos despus de haber recibido el
antgeno va inyectable. Cuando el antgeno es
ingerido los sntomas aparecen habitualmente alrededor de las 2 horas, pero tambin pueden aparecer mas tardamente. Hay correlacin entre la
velocidad de aparicin de los sntomas y la severidad del ataque. Un episodio puede desaparecer
y reaparecer despus de varias horas, es lo que se
llama anafilaxis bifsica. Adems los episodios
pueden mantenerse y reaparecer despus de varios das con mltiples recurrencias y largos intervalos asintomticos.
La muerte por anafilaxis se debe a la obstruccin de la va area y/o colapso cardiovascular.
En estudios post morten de pacientes con obstruccin respiratoria se observa pulmn hiperinflado
y edema de las vas areas, la obstruccin de la
va area se debe a una combinacin de espasmo
muscular edema de la submucosa, y acumulacin
de secreciones en el lumen. Tambin se observa
infiltracin celular especialmente de eosinfilos
en vasos pulmonares, en la lmina propia del
5. REACCIONES ANAFILCTICAS Y
ANAFILACTODEAS EN PABELLONES
QUIRRGICOS
Se desconoce la incidencia de estas reacciones en el acto operatorio. Hay mltiples agentes
utilizados durante el acto operatorio que pueden
causarlas, incluyendo el ltex, ralajantes
neuromusculares derivados de amonio terciario y
cuaternario, sustitutos del plasma y la aplicacin
de otras drogas endovenosas como opioides,
protaminas y otras. Hay estudios que muestran
que las reacciones anafilcticas y anafilactodeas
durante la anestesia estaran aumentando. Las cifras varan entre 1 en 5.000 y 1 en 25.000 con una
mortalidad de 3-4%. En el Reino Unido un 4.3%
de las muertes en el acto operatorio se deberan a
reacciones a drogas. Las reacciones a anestsicos
como tiopental varan entre 1 en 15.000 a 1 en
30.000. Los expandedores de volumen se asocian
a reacciones anafilactodeas variando su incidencia entre 1 en 17.000 con hidroetilalmidn y 1 en
2.600 con gelatina.
6. SIGNOS Y SNTOMAS
En la tabla 22-3 se indica la frecuencia de
aparicin de signos y sntomas en reacciones
anafilcticas. La serie comprende diversos estudios incluyendo 747 pacientes con episodios
anafilcticos de diferente origen y a pesar de la
diversidad de agentes causales, la frecuencia de
signos y sntomas son similares, indicando que el
mecanismo fisiopatolgico es el mismo. La urti-
Tabla 22-3. Signos y sntomas en reacciones anafilcticas

Signos y sntomas
Frecuencia (%)
Urticaria, Angioedema
Disnea, Sibilancias
Mareos, Hipotensin
Nuseas, Vmitos, Diarrea, Dolor abdominal
Enrojecimiento
Edema va area alta
Dolor de cabeza
Rinitis
Dolor retroesternal
88
47
33
30
46
56
15
16
6
396
Sin ttulo-2
396
5/26/06, 10:26 AM
tracto gastrointestinal. Cuando predomina el colapso vascular es posible encontrar signos de

isquemia miocrdica. Individuos que han muerto
por una reaccin anafilctica bien documentada
se ha demostrado niveles altos de triptasa. Es posible obtener IgE especfica y niveles de triptasa
en suero de cadveres hasta 15 horas post morten,
esto permitira en casos de muerte sbita, determinar si sta ha ocurrido por una reaccin
anafilctica.
picaduras de insecto (abejas), alimentos etc.

2. Cuando es factible realizar IgE especfica para
antgeno sospechoso.
3. Evitar el alergeno incluyendo aquellos que tengan reactividad cruzada.
4. Si se identifica el alergeno causal de reacciones
anafilcticas, se debe usar identificacin (brazalete, medalla) que lo seale.
5. Ensear al paciente a usar epinefrina inyectable
para una emergencia (picadura de abeja).
6. Pacientes en riesgo deben evitar ser tratados con
beta bloqueadores, inhibidores de la enzima
convertidora de angiotensina, y de la angiotensina
II e inhibidores de la monoamino-oxidasa. Estas
drogas disminuyen la efectividad de la epinefrina,
e interfieren con la respuesta endgena
compensatoria de la hipotensin.
7. LABORATORIO
El diagnstico de anafilaxis es clnico. Sin
embargo en algunas circunstancias cuando ste no
es claro o se debe descartar otros diagnsticos, puede ser de utilidad la cuantificacin de los niveles
de histamina y de triptasa srica y de histamina
en orina, ya que indica que ha habido descarga de
mediadores de mastocitos. La histamina
plasmtica se eleva a los 5-10 minutos y permanece elevada 30-60 minutos. No ayuda si el paciente es visto despus de una hora de ocurrida la
reaccin. En este caso se puede cuantificar
histamina o sus metabolitos en orina los que permanecen elevados por ms tiempo. Los niveles
de triptasa srica aumentan entre una a una hora y
media de ocurrido la reaccin y permanecen elevados por alrededor de cinco horas. En algunas
ocasiones es posible determinar el agente causal,
especialmente cuando se trata de alimentos, medicamentos o ltex mediante la presencia de IgE
especfica contra el antgeno sospechoso. Hay que
considerar que la sospecha diagnstica del agente
etiolgico se realiza mediante una detallada y
acuciosa anamnesis y el laboratorio sirve para
confirmar la sospecha. En alrededor de dos tercios de los casos de anafilaxis se desconoce el
agente causal.
Tratamiento del episodio agudo

El tratamiento del episodio agudo debe comenzar en el sitio donde ocurre, de inmediato acudir
a un servicio de urgencia, y si no cede hospitalizar al paciente.
Es importante una rpida evaluacin del paciente,
ver la permeabilidad de la va area, estado de
conciencia, medicin de presin arterial y pulso.
Si no presenta obstruccin bronquial, colocar al
paciente en posicin supina y levantar los pies. Si
la reaccin anafilctica fue por una inyeccin colocar torniquete en la zona proximal al sitio de
inyeccin y remover cada 5 minutos mientras se
realiza la terapia.
Tratamiento inmediato:
1. Epinefrina: dosis y va segn gravedad
Segn evaluacin
2. Oxgeno
3. Antagonistas H1y H2
4. Corticoides
5. Broncodilatadores
6. Vasopresores
7. Infusin de lquidos endovenosos
8. TRATAMIENTO
En el tratamiento de la anafilaxis hay que
considerar dos aspectos: a) el tratamiento preventivo para reducir la incidencia de reacciones
anafilcticas y anafilactodeas y b) el tratamiento
del episodio agudo.
Estas ltimas medidas deben ser administradas en unidad de cuidados intensivos.

Es posible que la anafilaxis ocurra en episodios bifsicos, por lo que el paciente debe ser observado por lo menos 2 horas si el episodio agudo
ha sido leve y al menos 24 horas si ha requerido
hospitalizacin.
Medidas para reducir la incidencia de anafilaxia:

1. Anamnesis detallada de alergia a drogas, ltex,
397
Sin ttulo-2
397
5/26/06, 10:26 AM
LECTURAS SUGERIDAS
Gordon J.R., Burd, P.R., Galli, S.J., Mast cells as
a source of mutifunctional cytokines, Immunol
Today, 11: 458-464, 1990.
Lieberman, P., Anaphylaxis and anaphylactoid
reactions in Middeleton Jr., E., Reed, C.E., Ellis,
E.F., Adkinson Jr., N.F., Yunginger, J.W., Busse
W.W. editors, Allergy: principles and practice,
5 ed., St Louis Mo, Mosby, p. 1079, 1998.
Songzhu, An, Goetzl, E.J., Lipid mediators of
hypersensitivity and inflammation in Middeleton,
Jr. E., Reed, C.E., Ellis, E.F., Adkinson Jr. N.F.,
Yunginger, J.W., Busse W.W. editors, Allergy:
principles and practice, 5 ed., St Louis Mo,
Mosby, p.168, 1998.
Stevens, R.L., Austen, K.F., Recente advances
in the cellular and molecular biology of mast
cells, Immunol Today, 10: 381-386, 1998.
Terr, A.I., Anaphylaxis and Urticaria in Stites,
D.P., Terr, A.I. editors, Basic and Clinical
Immunology, 7 ed., Singapur, Lange Medical
Publication, p. 400, 1991.
398
Sin ttulo-2
398
5/26/06, 10:26 AM

Captulo 23
AUTOINMUNIDAD
Ana Mara Agar M. y Mara Anglica Marinovic M.
1. Introduccin
2. Formas clnicas y caractersticas comunes
3. HLA y enfermedades autoinmunes
4. Patogenia de las enfermedades
autoinmunes
5. Autotolerancia
5.1. Falla de la tolerancia central del linfocito T
5.2. Falla de la tolerancia perifrica del
linfocito T
5.3. Falla de la tolerancia del linfocito B
6. Citoquinas y enfermedades autoinmunes
7. Nuevos tratamientos
399
Sin ttulo-2
399
5/26/06, 10:26 AM
400
Sin ttulo-2
400
5/26/06, 10:26 AM
RESUMEN
Una de las propiedades fundamentales del sistema inmune radica en la capacidad de discriminar entre antgenos propios y no propios. Es as, como los linfocitos maduros funcionalmente
competentes son capaces de reconocer y responder a antgenos extraos, pero no pueden reconocer y/o responder a antgenos propios. A travs de mecanismos de autotolerancia se impide la
respuesta contra estructuras propias.
Cuando se pierde esta autotolerancia se producen reacciones inmunes contra los antgenos
propios, reacciones denominadas de autoinmunidad y las patologas que ellas causan se denominan enfermedades autoinmunes.
Las enfermedades autoinmunes se caracterizan por la produccin de anticuerpos y/o clulas T efectoras inmunes que son autorreactivas. Dado que las respuestas de clulas B en humanos
requiere de clulas T inductoras, la produccin de autoanticuerpos implica un desorden del control inmunorregulatorio de las clulas T. Existen varios factores asociados a la aparicin de una
enfermedad autoinmune, entre ellas la herencia juega un rol importante en el desarrollo de la
autoinmunidad. Sin embargo, los patrones hereditarios de estas enfermedades son, a menudo,
complejos. En la actualidad las bases genticas de la autoinmunidad estn enfocadas en los genes
del Complejo Principal de Histocompatibilidad.
Se ha evidenciado la participacin de diversas citoquinas dentro de los mecanismos efectores
involucrados en las enfermedades autoinmunes. La inmunomodulacin de estas sustancias tendra importancia en la intervencin teraputica de ellas.
las efectoras inmunes que son autorreactivas. Dado

que las respuestas de clulas B en humanos requieren de clulas T inductoras, la produccin de
autoanticuerpos implica un desorden del control
inmunorregulatorio de las clulas T.
La presencia de autoanticuerpos no es
indicadora de enfermedad autoinmunitaria, es as
como ttulos bajos de autoanticuerpos contra ciertas estructuras es un hecho, incluso, fisiolgico.
1. INTRODUCCIN
Una de las propiedades fundamentales del sistema inmune, radica en la capacidad de discriminar entre antgenos propios y no propios. Es as,
como los linfocitos maduros funcionalmente competentes son capaces de reconocer y responder a
antgenos extraos, pero no pueden reconocer y/o
responder a antgenos propios.
El sistema inmune posee una enorme diversidad, y el repertorio de especificidades antignicas
expresadas por las poblaciones de clulas T y B
incluyen muchas dirigidas contra autocomponentes, sin embargo a travs de mecanismos de
autotolerancia (no respuesta del sistema inmune a
los antgenos propios) no se producen reacciones
autoinmunes.
Cuando se pierde esta autotolerancia se producen reacciones inmunes contra los antgenos
propios, reacciones denominadas de autoinmunidad y las patologas que ellas causan se denominan enfermedades autoinmunes.
Las enfermedades autoinmunes se caracterizan por la produccin de anticuerpos y/o de clu-
2. FORMAS CLNICAS Y CARACTERSTICAS COMUNES

Las enfermedades asociadas con el fenmeno autoinmune tienden a distribuirse en un espectro que va desde las enfermedades rgano especficas, como la Tiroiditis de Hashimoto, en las cuales los anticuerpos y las lesiones destructivas estn orientadas slo contra un rgano del cuerpo,
mientras en el otro polo se encuentra como ejemplo
tipo, el Lupus eritematoso sistmico (LES), en el cual
los anticuerpos estn dirigidos contra antgenos ampliamente distribuidos en el organismo y las lesio-
401
Sin ttulo-2
401
5/26/06, 10:26 AM
nes caractersticas de la enfermedad son tambin

ampliamente diseminadas (tabla 23-1).
Una serie de caractersticas en relacin al
antgeno, tipo de lesiones y sobreposicin con
otras enfermedades caracterizan a las enfermedades rgano especficas y rgano inespecficas (tabla 23-2).
A pesar de que puedan afectar diversos rganos y
adems en forma muy distinta, las enfermedades
autoinmunes poseen caractersticas comunes, entre las que figuran:
fermedades autoinmunes humanas se pueden

reproducir en animales de experimentacin,
si bien los mtodos de induccin varan para
cada una de ellas.
b) Edad: su aparicin es mucho ms frecuente
en las personas adultas, existiendo una correlacin positiva entre la edad y la frecuencia de estas enfermedades. Es muy comn
tambin encontrar autoanticuerpos no
patognicos en personas de edad avanzada.
Un 5% de mujeres de ms de 50 aos poseen
ttulos bajos a anticuerpos antinucleares.
a) Induccin experimental: la mayora de las en-
c)
Tabla 23-1. Espectro de enfermedades
autoinmunes
rgano
especficas
rgano
inespecficas
Enfermedad autoinmune
Tiroiditis de Hashimoto
Mixedema primario
Tirotoxicosis
Anemia Perniciosa
Gastritis atrfica autoinmune
Enfermedad de Addison
Menopausia prematura(*)
Diabetes juvenil
Sndrome de Goopasture
Miastenia Gravis
Infertilidad masculina(*)
Pnfigo vulgar
Penfigoide
Oftalmia del Simptico
Uveitis Facognica
Esclerosis Mltiple
Anemia hemoltica autoinmune
Prpura trombocitopnico inmune
Leucopenia idioptica
Cirrosis biliar primaria
Hepatitis crnica activa con AgHBs
Cirrosis criptognica(*)
Colitis ulcerosa
Sndrome de Sjogren
Dermatomiositis
Esclerodermia
Lupus eritematoso discoide
Sexo: son ms frecuentes en las mujeres. As

ocurre con la artritis reumatoidea, el LES, la
miastenia gravis, la hepatitis crnica activa,
la cirrosis biliar primaria y muchas otras. En
los animales de experimentacin se ha observado la existencia de una relacin entre
el nivel de estrgenos y presencia e intensidad de procesos autoinmunes.
d) Factores genticos: existe una clara predisposicin familiar a sufrir estas enfermedades. Es frecuente observar la presencia de
diversos procesos autoinmunes en distintos
miembros de una misma familia.
(*) algunos casos
e)
Patologa linfocitaria: las enfermedades primarias del sistema inmunolgico se acompaan con frecuencia de procesos
autoinmunes. De esta manera, por ejemplo,
se observa la aparicin de anemias
hemolticas autoinmunes en la leucemia
linftica crnica.
f)
Factores ambientales: las infecciones virales

y bacterianas se asocian con autoinmunidad,
y los perodos pre-infecciosos, a menudo,
preceden las manifestaciones clnicas de enfermedad autoinmune. En la mayora de estos casos, el microorganismo no est presente
en las lesiones y no es detectable en el individuo cuando la autoinmunidad se desarrolla. Es as como, las lesiones por
autoinmunidad no se deben al agente infeccioso mismo, sino son producto de la respuesta inmune del husped que pueden ser
gatilladas o disreguladas por el microbio.
Entre los muchos posibles efectos de las infecciones se encuentran la activacin
policlonal de linfocitos, la inflamacin
tisular local que lleva a un aumento en la
expresin de coestimuladores, la alteracin
de autoantgenos creando neoantgenos que,
402
Sin ttulo-2
402
5/26/06, 10:26 AM
Tabla 23-2. Comparacin entre las enfermedades rgano especficas y las rgano inespecficas
Enf. rgano especficas
Enf. rgano inespecficas
Antgeno
Especialmente localizado
al rgano dado
Ampliamente
distribuido en el
organismo
Lesiones
El antgeno en el rgano es
blanco para el ataque
inmunolgico
Los complejos se
depositan en forma
sistmica
particularmente en
piel, rin y articulaciones
Sobreposicin
Con otras enfermedades

rgano especficas
Con otras enfermedades

rgano inespecficas
parcialmente, presentan reacciones cruzadas

y dao tisular que lleva a la liberacin de
antgenos anatmicamente secuestrados.
desarrollo de la autoinmunidad. Sin

embargo los patrones hereditarios de estas enfermedades son, a menudo, complejos.
En la actualidad las bases genticas de la
autoinmunidad estn enfocadas en los genes del
(MHC, HLA en humanos).
El estudio de los HLA en grandes grupos de
pacientes con varias enfermedades autoinmunes
ha mostrado que algunos alelos de HLA aparecen
con una mayor frecuencia en estos pacientes que
en la poblacin general. A partir de estos estudios
ha sido posible determinar el riesgo relativo de desarrollar una enfermedad en individuos portadores
de varios alelos de HLA (tabla 23-3). La asociacin ms fuerte se encuentra entre la Espondilitis
anquilosante, una enfermedad inflamatoria y
presumiblemente autoinmune de las articulaciones
vertebrales, con el alelo B27 de los HLA clase I.
Los individuos HLA B27 positivos tienen entre 90100 veces ms posibilidades de desarrollar la
Espondilitis anquilosante que los individuos que
carecen del antgeno B27. Se desconocen los
mecanismos de esta enfermedad y las bases de la
asociacin con el haplotipo sealado.
Recientemente la investigacin en enfermedades autoinmunes se ha enfocado fundamentalmente hacia los loci pleomrficos de HLA DR y
HLA DQ (molculas clase II). Esto debido a la
participacin de las molculas MHC clase II en la
seleccin y activacin de las clulas T CD4+ , y
en consideracin de que las clulas T CD4+ regulan tanto las respuestas humorales como celulares
a antgenos proteicos.
g) Alteraciones anatmicas en los tejidos: tales

como inflamacin o trauma pueden llevar a
la exposicin de autoantgenos que habitualmente no estn expuestos al sistema inmune.
Tales antgenos secuestrados no habran inducido autotolerancia. Al liberarse estos
autoantgenos, pueden interactuar con
linfocitos inmunocompetentes e inducir respuestas inmunes especficas. Entre los
antgenos anatmicamente secuestrados se
encuentran las protenas intraoculares y el
semen. La uveitis pos-traumtica y la orquitis
post-vasectoma, se cree que se deben a respuestas autoinmunes contra autoantgenos que
son liberados de su localizacin normal.
La inflamacin tisular puede tambin producir alteraciones estructurales en autoantgenos y
la formacin de nuevos determinantes capaces de
inducir reacciones autoinmunes. La inflamacin
puede llevar a la activacin macrofgica por
citoquinas de produccin local, y estas citoquinas
estimulan la expresin de coestimuladores cuyo
resultado final puede ser la prdida de la tolerancia perifrica.
3. HLA Y ENFERMEDADES AUTOINMUNES

La herencia juega un rol importante en el
403
Sin ttulo-2
403
5/26/06, 10:26 AM
Tabla 23-3. Ejemplos de enfermedades inmunolgicas ligadas a HLA

Enfermedad
Alelo HLA
Riesgo relativo*
DR4
DR4
DR3
DR3
DR3
B27
6
24
14
10
12
90
Pnfigo vulgar
Hepatitis crnica activa
Sindrome Sjogren
Enfermedad celaca
Espondilitis anquilosante
* Posibilidad de desarrollar una enfermedad en individuos con un alelo particular en comparacin con
individuos que carecen de ese alelo.
puedan ser ms probables.

En condiciones normales el sistema
inmunitario del husped rene una doble condicin: a) desarrolla respuestas inmunitarias con
un repertorio de especificidades tan amplio como
la gran diversidad de sustancias extraas a l y b)
mantiene un estado de tolerancia para los componentes propios (autotolerancia) o un grado de respuesta imperceptible clnicamente.
Esta doble y contradictoria condicin es un
rasgo esencial del sistema inmunitario para que
pueda actuar como un mecanismo clave en el mantenimiento de la integridad del husped. Cuando
se quiebra la autotolerancia ocurre autoinmunidad.
4. PATOGENIA DE LAS ENFERMEDADES

AUTOINMUNES
Existe un gran nmero de vas por las cuales
se puede iniciar una reaccin autoinmune. Sin
embargo para la mayora de las enfermedades
autoinmunes existe un evento crtico comn que
es la activacin de linfocitos T autorreactivos, los
cuales promueven distintos mecanismos efectores
responsables del dao (figura 23-1).
En la mayora de las enfermedades
autoinmunes existe una mezcla de las clsicas respuestas Th1 y Th2 en diversa proporcin. Las
subpoblaciones Th1 favorecen la respuesta inmune celular, la caracterstica patognica ms prominente de las enfermedades rgano especficas
(tiroiditis, diabetes mellitus insulinodependiente),
con activacin de macrfagos, linfocitos T
citotxicos y produccin de citoquinas como TNF
alfa y beta.
En cambio las subpoblaciones Th2 favorecen una respuesta humoral, caracterstica de las
enfermedades rgano inespecficas (LES), en las
cuales hay un efecto directo de los autoanticuerpos
sobre la clula blanco, inducido por lisis mediada
por complemento, fagocitosis, formacin y depsito de complejos inmunes, y en menor medida
citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos.
Adems existe un nmero de enfermedades
autoinmunes mediadas por anticuerpos contra
receptores de superficie celular, los cuales causan
exceso de actividad o inhibicin de la funcin del
receptor.
Se desconoce los mecanismos etiolgicos de
las enfermedades autoinmunitarias, tampoco existe
una opinin unnime en relacin a las causas que
5. AUTOTOLERANCIA
En el ao 1949 Burnett propuso la teora de
la seleccin clonal para explicar la autoinmunidad,
l postulaba que los clones de linfocitos
autorreactivos eran eliminados o delecionados
durante su desarrollo para prevenir las reacciones
autoinmunes. Actualmente sabemos que esto es
parcialmente correcto.
La autoinmunidad resulta de la falla de los
mecanismos normalmente responsables de mantener la autotolerancia.
La autoinmunidad puede resultar de alteraciones primarias de linfocitos T, B o ambos. Actualmente se le da un rol protagnico al linfocito
T por 2 razones principales: (a) el linfocito T
helper es el regulador de todas las respuestas
inmunes a protenas. (b) muchas enfermedades
autoinmunes estn genticamente asociadas o unidas al MHC, y la funcin de las molculas MHC
404
Sin ttulo-2
404
5/26/06, 10:26 AM
Figura 23-1. Mecanismos iniciadores y efectores de autoinmunidad. Los linfocitos T CD4 autorrectivos que han escapado de
la seleccin negativa en el timo, pueden ser activados por diversos mecanismos. Estos linfocitos T a travs de mecanismos efectores
producirn citoquinas del tipo Th1 o Th2, lo cual se traducir ya sea en la produccin de una respuesta inmune mediada por clulas
o la formacin de autoanticuerpos.
es presentar pptidos antignicos a la clula T. Por

lo tanto se cree que la falla de la autotolerancia de
linfocitos T es un mecanismo importante de enfermedad autoinmune .
LT y reaccin autoinmune tejido especfica, (b)

anergia del LT puede fallar debido a defectos en
las molculas que normalmente inactivan estas
clulas, (c) mutaciones que interfieren con los
mecanismos de apoptosis de linfocitos maduros,
puede resultar en enfermedades autoinmunes, por
ejemplo: mutaciones del ligando Fas, (d) defectos
en la supresin mediada por LT: se ha postulado
que algunos autoantgenos normalmente inducen
LT reguladores que producen citoquinas
inmunosupresoras que funcionan manteniendo la
autotolerancia, lo cual se puede perder.
5.1. Falla de la tolerancia central del linfocito

T. La tolerancia central es el mecanismo de seleccin negativa de los linfocitos T inmaduros
autorreactivos que deleciona clulas que poseen
receptores de alta afinidad para autoantgenos.
5.2. Falla de la tolerancia perifrica del linfocito T. La tolerancia perifrica en linfocitos T
maduros autorreactivos es mantenida por anergia,
delecin por apoptosis, supresin por clulas
reguladoras. La autoinmunidad que resulta de la
falla de cada uno de estos mecanismos ha sido
demostrada en distintos estudios experimentales:
(a) expresin aberrante de coestimuladores en tejidos puede resultar en quiebre de la anergia del
5.3. Falla de la tolerancia del linfocito B: Se cree

que muchas enfermedades autoinmunes causadas
por autoanticuerpos son debidas a falla en la tolerancia del linfocito B. Exposicin de linfocitos B
a activadores policlonales como lipopolisacridos,
pueden activar un gran nmero de estas clulas,
incluyendo algunas que son especficas para
405
Sin ttulo-2
405
5/26/06, 10:26 AM
autoantgenos. Debe destacarse que en individuos

normales, la falla para producir autoanticuerpos
contra antgenos propios puede deberse a delecin
o anergia de LT colaboradores y no a tolerancia
de linfocitos B. En estos casos, defectos en la
mantencin de tolerancia del LT puede resultar en
produccin de autoanticuerpos. Este mecanismo
sera importante en la patogenia de varias enfermedades mediadas por anticuerpos, como por
ejemplo: miastenia gravis o enfermedad de Graves.
Los antgenos propios pueden considerarse
como antgenos T dependiente. Considerando a
los antgenos T dependientes como conjuntos
hapteno-portador y que los linfocitos B reconocen a la parte haptnica, mientras que los linfocitos
T cooperadores reconocen al portador, la ruptura
de la autotolerancia puede deberse a diferentes
mecanismos:
determinado patgeno, dando lugar a una fuerte

respuesta de anticuerpos cuyo idiotipo estimule
la produccin de anti-idiotipos que tengan reaccin cruzada con autoantgenos.
c) Activacin de las clulas B mediante ciertas
sustancias, activadores policlonales de clulas B,
capaces de activar inespecficamente a los
linfocitos B sin necesidad de colaboracin de los
linfocitos T. En estos casos se producira una respuesta pluriespecfica dirigida contra muchas sustancias, entre las cuales se encontraran las propias. Los lipopolisacridos y endotoxinas se encuentran entre los activadores policlonales de clulas B ms importantes.
d) Induccin de respuestas autoinmunitarias es especialmente aplicable a las endocrinopatas. Segn
esta hiptesis los linfocitos T helper no se habran hecho tolerantes frente a estructuras muy
concretas y selectivas de ciertas clulas, como por
ejemplo protenas y receptores presentes en la
membrana, y el hecho de que normalmente no existiera una respuesta de anticuerpos sera debido a
que estas clulas no expresan molculas clase II,
por lo tanto, los linfocitos T colaboradores no pueden reconocer a estas estructuras, no ayudando as
a los linfocitos B a producir anticuerpos contra ellas.
Si estas estructuras en un momento dado expresan molculas clase II, entonces podran presentar adecuadamente estos antgenos de la membrana a los linfocitos T colaboradores que ayudaran a los linfocitos B a producir anticuerpos. La
expresin ectpica de las molculas clase II en
clulas que normalmente no la expresan puede ser
inducida por linfoquinas como los interferones
(IFNs) y factor de necrosis tumoral (TNF). Es probable que ello no sea una condicin suficiente, ya
que se ha visto expresin ectpica de molculas
clase II, sin que exista una respuesta
autoinmunitaria contra ellas, probablemente sea
adems necesario que los autoantgenos DR (o
molculas clase II) sean de un determinado tipo.
a) Mecanismo de "bypass" de las clulas T colaboradoras tolerantes para el portador de los

autoantgenos. Esta situacin puede alcanzarse a
travs de varias vas:
Reaccin cruzada de una sustancia extraa con

un antgeno propio de forma que el hapteno
de sta y el del extrao se parezcan, siendo
reconocido por los linfocitos B dirigidos contra el antgeno propio, mientras el portador del
antgeno extrao ser reconocido por otros
linfocitos T cooperadores no tolerados, que se
activarn y ayudarn a los B a producir
anticuerpos contra el antgeno propio.
Drogas o frmacos se podran unir a la parte

portador de un antgeno propio, formndose
un neo-antgeno que ser reconocido por clulas T colaboradoras que ayudarn a las clulas B especficas para el hapteno del
antgeno propio a producir anticuerpos contra ste, llegndose a una situacin similar a
la anterior.
Una droga o un virus, se podran unir a la

molcula presente en la membrana de una
clula, si sta posee molculas clase II lo presentar a los linfocitos T colaboradores y stos ayudarn a linfocitos B especficos para
un autoantgeno (presente en la membrana
de esta clula) a producir autoanticuerpos
contra el mismo.
6. CITOQUINAS Y ENFERMEDADES
AUTOINMUNES
Las citoquinas son mediadores proteicos
involucrados en virtualmente, todos los procesos
biolgicos: inmunidad, inflamacin, diferenciacin
y proliferacin celular. Debido a su importancia en
inmunidad e inflamacin no es sorprendente que
estn involucrados en las enfermedades
b) Estimulacin persistente del husped por un
406
Sin ttulo-2
406
5/26/06, 10:26 AM
de que el TNF es la citoquina central de la artritis

reumatoidea. Estos hallazgos sugieren que las
reacciones Th1 predominan en la sinovitis
reumatoidea, lo cual apoyara el concepto de un
autoinmunes. En el mecanismo de produccin de

las enfermedades autoinmunes se pueden distinguir
3 compartimientos: un aspecto inicial de induccin,
la patognesis y perpetuacin (figura 23-2).
Figura 23-2. Mecanismos de produccin de las enfermedades autoinmunes.
En relacin al rol de las citoquinas en la induccin de enfermedades autoinmunes, las molculas mas ntimamente involucradas son los IFN.
Entre los interferones destaca el IFN, el cual regula la presentacin antignica y la expresin de
HLA clase II, caractersticas necesarias para la
induccin inmune.
Ensayos teraputicos con IFN alfa en pacientes con cncer, mostraron que la infusin de altas
dosis de IFN induce tiroiditis autoinmune. Resultados similares han sido reportados para la infusin de IL-2, pero con una menor frecuencia.
Un segundo aspecto en el cual las citoquinas
son de importancia en las enfermedades
autoinmunes, es en la fase efectora de la enfermedad. En lquido sinovial de pacientes con artritis
reumatoidea se han encontrado prcticamente todas las citoquinas (TNF, IL-1, IL-6, IL-8, GMCSF y TGF-) lo cual no es sorprendente dado
que el tejido consiste en clulas T activadas,
macrfagos, fibroblastos y endotelio. Sin embargo, al estudiar la regulacin de la produccin de
citoquinas en las clulas sinoviales se observ que
el TNF- alfa era la seal regulatoria principal de
IL-1 a nivel articular, llevando al concepto actual
desbalance entre las clulas Th1 y Th2 , y puesto

que las citoquinas Th2 ejercen un efecto anti-inflamatorio La predominancia de las clulas Th1
podra indicar su importancia pro-inflamatoria.
Todas estas investigaciones han permitido disear estrategias teraputicas dirigidas contra
citoquinas pro-inflamatorias (IL-1 y TNF-) utilizando anticuerpos monoclonales.
7. NUEVOS TRATAMIENTOS
Como regla general el tratamiento de las enfermedades autoinmunes est enfocado hacia dos
objetivos, el primero es restablecer la funcin perdida, como por ejemplo la tiroiditis crnica con la
administracin de hormona tiroidea. El segundo
objetivo de la terapia es disminuir la respuesta
autoinmune patolgica con el fin de deprimir la
respuesta inmune en general, es as como se emplean antimetabolitos, corticoesteroides y drogas
anti-inflamatorias las cuales son tiles en desrdenes complejos, como LES y otras enfermedades del tejido conectivo.
Sin embargo esta terapia presenta efectos co-
407
Sin ttulo-2
407
5/26/06, 10:26 AM
laterales y el riesgo de efectuar una inmunosupresin excesiva. Basado en los mecanismos

descritos, nuevos mtodos de terapia ms especficos pueden esperarse en el futuro.
LECTURAS SUGERIDAS
Abbas A., Cellular and Molecular Immunology,
4ta Edicin, Captulo 10, pp. 208-230; Captulo18,
pp. 416-423, WB Saunders, , 2000.
Vacunas de clulas T. Experimentos en animales

sugieren que clones inactivados de clulas T
autorreactivas pudieran ser utilizadas como "vacunas" preventivas administrndolas al animal
antes de que se genere una respuesta autoinmune.
Janeway, Ch., Travers, P., Walport, M.,

Immunobiology The Immune System in Health
and Disease, 4ta Edicin, Captulo 6, pp. 209-211,
Captulo 7, pp. 228-234; Captulo 13, pp. 520-536,
1999.
Bloqueo de las molculas MHC. Por otra parte

la activacin de la clula T puede ser prevenida
bloqueando la unin del pptido autorreactivo a
la molcula MHC de la clula presentadora de
antgeno. Pptidos competitivos que unen el MHC
pero fracasan en gatillar la proliferacin de clulas T previniendo la respuesta inmune especfica.
Rose, N., Autoimmune Diseases: Tracing the

Shared Threads. Hospital Practice, Abril 15: pp.
147-154, 1997.
Theofilopoulos, A, The basis of autoimmunity:
Part I, Immunology Today, 16(2): 90-97, 1995.
Bloqueo coestimulatorio. Con el fin de efectuar

la activacin, la clula T no slo debe reconocer
su determinante antignico correspondiente a travs de su TCR, sino que tambin debe recibir seales estimulatorias a travs de co-receptores o
mediadores solubles. Si las seales coestimulatorias no son recibidas, la clula T se hace
inactiva o anrgica. Es as como el bloqueo de
seales co-estimulatorias parece otra alternativa
para obviar la respuesta autoinmune.
Theofilopoulos, A., The basis of autoimmunity:

Part II, Immunology Today, 16(3): 150-57, 1995.
Cambio en balance Th1-Th2. Una cuarta posibilidad de tratar enfermedades autoinmunes, es

cambiar el balance de clulas Th1 y Th2. La administracin de citoquinas particulares o
inhibidores de citoquinas tendran este efecto.
Tolerancia oral. Los antgenos administrados
oralmente pueden inducir un estado de no respuesta. La induccin de tolerancia oral est bajo investigacin clnica para el tratamiento de varias
enfermedades incluyendo la esclerosis mltiple,
artritis reumatoide, diabetes mellitus y uveitis.
Terapia gnica. Actualmente se estn diseando
estrategias de tratamiento en que se utiliza terapia
gnica.
Cada uno de los enfoques teraputicos descritos tiene ventajas y desventajas. El objetivo final a largo plazo es suprimir la respuesta
autoinmune patognica sin disminuir la inmunidad protectora contra patgenos.
408
Sin ttulo-2
408
5/26/06, 10:26 AM

Captulo 24
ENFERMEDADES REUMTICAS
Sergio Jacobelli G. y Santiago Rivero D.
1. Introduccin
2. Artritis Reumatodea
2.1. Patogenia
2.1.1. Gentica
2.1.2. Infecciones
2.2. Clnica y tratamiento
3. Lupus eritematoso sistmico
3.1. Etiopatogenia
3.1.2. Factores ambientales
3.1.3. Disregulacin del sistema
inmune
409
Sin ttulo-2
409
5/26/06, 10:26 AM
410
Sin ttulo-2
410
5/26/06, 10:26 AM
RESUMEN
En los ltimos aos se han registrado importantes avances en la comprensin de la respuesta
inmune y de algunos mecanismos operacionales en la autoinmunidad. Esto ha sido especialmente
relevante en la relacin entre inflamacin y respuesta inmune. En efecto, la descripcin de las
redes de citoquinas involucradas en la respuesta inmune, ha permitido disear ahora, tratamientos
altamente especficos para la Artritis Reumatodea con resultados sorprendentes y alentadores
para muchos enfermos. Sin embargo, estos tratamientos slo detienen la enfermedad, la que
reaparece al suspenderlos. Tanto para el Lupus como para la Artritis, necesitamos an otro nivel
de comprensin, que nos indique los antgenos iniciales y los mecanismos de control sobre los
que pudiramos actuar para prevenir el dao tisular y el desarrollo de la enfermedad.
un slo enfermo, lo que no tiene una explicacin

adecuada.
En general estos enfermos, a pesar de tener
un aumento en la produccin de autoanticuerpos,
no responden tan normalmente a antgenos
exgenos, de ah que los pacientes con Lupus y
con Artritis Reumatodea, sufren con mayor
frecuencia de infecciones que los controles, lo que
se acenta con los tratamientos que reciben. La
infeccin por inmunosupresin teraputica es un
lamentable efecto secundario de los tratamientos
ms comunmente usados en estas afecciones.
1. INTRODUCCIN
La autoinmunidad sistmica se refiere a
enfermedades autoinmunes en las cuales la
autorreactividad, no est circunscrita a un slo
rgano o tejido. Esta definicin incluye enfermedades como la Artritis Reumatodea y el Lupus Eritematoso Sistmico. Sin embargo no es fcil
presentar una definicin satisfactoria, porque la
demostracin que la causa de la enfermedad es
autoinmune es difcil, ya que requiere la
replicacin de la enfermedad por transferencia de
anticuerpos o clulas, datos que son difciles de
generar. De este modo, la inferencia que una
enfermedad es autoinmune, se hace por el hallazgo
de autoanticuerpos, complemento y linfocitos T
en las lesiones tisulares.
Estas enfermedades tienen algunas
caractersticas comunes, que de algn modo
tendrn que ser explicadas al dilucidar su
patogenia. La primera, es su curso tan variable
entre uno y otro enfermo, marcado por exacerbaciones y remisiones, a veces sin mediar tratamiento. Esto podra implicar potentes mecanismos
de control para regular la respuesta autoinmune.
La segunda es la susceptibilidad aumentada
del sexo femenino, hecho que se observa an en
los modelos animales experimentales. La
influencia hormonal en la respuesta inmune no est
suficientemente aclarada. Una tercera
caracterstica sorprendente, es la presentacin
ocasional de la sobreposicin de manifestaciones
clnicas de varias enfermedades autoinmunes en
2. ARTRITIS REUMATODEA
La Artritis Reumatodea (AR) es una enfermedad crnica, sistmica, cuya expresin clnica
ms importante es articular, lo que lleva a grados
variables de invalidez. Es la forma ms comn de
artropata inflamatoria, con una prevalencia estimada en Chile de 0,5% de la poblacin adulta,
afectando ms frecuentemente a mujeres, con una
proporcin estimada de 3 a 4 es a 1. Desde el punto de vista patolgico, el sitio primario de activacin inmune est en la articulacin. Los aspectos
ms caractersticos son la infiltracin celular de
la membrana sinovial con mononucleares, especialmente linfocitos T y macrfagos y la
hiperplasia de las clulas de la ntima de la membrana sinovial.
Aunque la etiologa de la AR es an desconocida, parece cada vez ms evidente que su
411
Sin ttulo-2
411
5/26/06, 10:26 AM
patogenia se caracteriza por la accin concertada

de distintos tipos celulares, que a travs de diferentes cascadas de seales, interactan entre s y
finalmente llevan a la destruccin de la articulacin. Si bien se considera a la AR una enfermedad
articular, es importante sealar que tambin tiene
una gran cantidad de manifestaciones extraarticulares, lo que pone de manifiesto su carcter
sistmico capaz de producir dao en distintos rganos mayores. En realidad, uno de los misterios
de esta enfermedad, es por qu la membrana
sinovial es el principal rgano blanco. Parece clave para entender estos hechos, la comprensin del
artrotropismo de los antgenos y de las clulas
inflamatorias y el papel que juegan receptores especficos y gradientes quimiotcticas para localizar la inflamacin en la articulacin.
La idea que la AR es un proceso multifactorial
que requiere una combinacin de factores
genticos, ambientales e inmunolgicos, ha ido
adquiriendo mayor aceptacin, aunque el conocimiento de la forma cmo estos factores se relacionan es an incompleto.
de los controles. La descripcin de subtipos de

DR4 permiti plantear una hiptesis general sobre esta asociacin. Los genes DRB1*0401,
DRB1*0404 y DRB1*0405 codifican los subtipos
DR4 Dw4, Dw14 y Dw15 respectivamente, que
se asocian con AR en poblaciones caucsica y japonesa, en tanto que en ciertas poblaciones nativas norteamericanas y en israeles, la asociacin
se encontr con genes que codificaban HLA que
no eran DR4 sino DR6 (DRB1*1402) o DR1
(DRB1*0101) Nomenclatura HLA, ver captulo
41. Al conocerse la secuencia de aminocidos (aa)
y la estructura tridimensional de las molculas del
MHC, se pudo precisar que cada alelo DRB1 asociado con susceptibilidad a la AR porta la secuencia QKRAA o QRRAA del aminocido 69 a 74
de la cadena DR, en tanto que los alelos DR que
no se asocian a la enfermedad tienen secuencias
diferentes en esta regin. (Q, glutamina; K, lisina;
R, arginina; A, alanina). Esta secuencia de 5 aa se
ha denominado el "eptopo compartido"(EC), destacando que la susceptibilidad para la AR estara
conferida por una pequea "casete" de aa que se
encuentran en distintos DR y no slo en el DR4.
Al considerar este eptopo, algunos estudios lo
encuentran en hasta el 96% de los pacientes en
algunas poblaciones, pero esto no es tan notorio
en otras, como griegos, pakistanes y poblacin
negra en Estados Unidos. En Chile un estudio encontr una prevalencia de este eptopo en 56% de
los enfermos comparado con 34% en los controles.
En los ltimos aos ha comenzado a ser
evidente que el EC podra ser ms un marcador
de gravedad de la enfermedad que de
susceptibilidad. Un estudio demostr que los
ndulos reumatodeos, signo de gravedad, se
presentaron en el 100% de los pacientes que eran
homocigotos para el EC, en tanto que los enfermos
que slo tenan un alelo que codificaba para el EC
tenan ndulos en el 59%. Al mismo tiempo, los
enfermos que tenan doble dosis tenan
compromiso de rganos mayores en el 61%
comparado con 11% de los enfermos con un slo
alelo. Estudios chilenos tambin han encontrado
una asociacin entre la aparicin de erosiones
seas y la presencia del EC, especialmente en
doble dosis. Estos datos sugieren que hay una
relacin "dosis-efecto" de los genes MHC, lo que
implicara que la mayor contribucin de los genes
del MHC a la AR es en la gravedad y no en la
susceptibilidad. Esto no es aceptado universalmente, porque resultados de otros estudios
2.1. Patogenia
2.1.1. Gentica
La existencia de una predisposicin gentica
a la AR deriva, fundamentalmente, de la alta concordancia que se observa en gemelos univitelinos.
La prevalencia de esta enfermedad es de alrededor de 0,5-1% en la poblacin general, siendo
menor en algunas (0,1-0,3% en poblaciones china y africana) y mayor en otras (5% en indios Pima
en Estados Unidos). En gemelos univitelinos estudiados en consultorios de la especialidad, la concordancia es de 30-50%, la que baja a 12% si se
estudian enfermos en la comunidad, no en ambiente hospitalario. En gemelos bivitelinos, la concordancia es de 2-5%, similar a la de los parientes de
primer grado. Se ha estimado que alrededor de la
mitad de la predisposicin gentica reside en el
(MHC), estando el resto en otros loci que actualmente estn siendo activamente investigados. Varios productos proteicos codificados por los genes
del MHC son responsables de la presentacin de
pptidos antignicos a los linfocitos T (LT). En la
dcada de los setenta, se describi la asociacin
del HLA DR4 con la AR. En enfermos caucsicos
con AR seropositiva se encontr que el 60-70%
eran HLA DR4 positivos comparado con el 30%
412
Sin ttulo-2
412
5/26/06, 10:26 AM
similares no han sido concluyentes, lo que se ha

atribuido a la inclusin de enfermos con AR leve
o transitoria y a variaciones relacionadas con el
trasfondo tnico y racial.
Es un hecho conocido que en las mujeres con
AR que tienen un embarazo en el curso de su
enfermedad, su artritis entra en remisin en alrededor
del 70% de los casos. Trabajos recientes han descrito
que a mayor disparidad materno-fetal de los alelos
de clase II, DR y DQ, mayores son las posibilidades
de remisin, en tanto que la persistencia de la
actividad artrtica a pesar del embarazo, se asoci
con mayor identidad materno-fetal en estos alelos.
Esto sugiere que la mejora de la AR que
experimentan las mujeres con el embarazo se debe a
fenmenos inmunolgicos especficos y no a una
supresin inmunolgica general del embarazo.
Hay una variedad de genes que se ubican en
el sitio del MHC, pero que no estn directamente
involucrados en la presentacin de antgenos.
Estos genes que no son clase I ni clase II codifican
un grupo heterogneo de protenas que se llaman
colectivamente MHC clase III. Polimorfismo
asociado con el gen del factor de necrosis tumoral
(TNF), con la protena de "shock" trmico 70 y
con el componente C4 del sistema del
complemento, se han relacionado con la
susceptibilidad a la AR. Otros genes fuera del
MHC han presentado cierto grado de asociacin
con la AR, como alotipos especficos de IgG y el
gen del receptor de la quimioquina CCR5.
Recientemente ha habido un gran inters en la
relacin entre la AR y las alteraciones en el gen
que codifica la lectina que une a la manosa (MBL).
En la actualidad debe considerarse como
preliminares todas las asociaciones genticas con
la AR con excepcin de la de los genes del MHC
clase II.
2.1.2. Infecciones
A pesar de los grandes esfuerzos realizados,
no existe an evidencia convincente que demuestre
una etiologa infecciosa de la AR. Como el inicio
de la AR no se agrupa en tiempo ni espacio, se ha
planteado que un microorganismo ubicuo,
posiblemente no patognico, pudiera gatillar la AR
en una persona con el apropiado trasfondo
gentico. Por otro lado, es posible que si existiera
una infeccin, sta pudiera agruparse en tiempo y
espacio, pero no ser detectable por ser subclnica
requiriendo perodos variables de latencia antes
de la aparicin de la inflamacin articular. La idea
prevalente es que la infeccin, si es importante
en la AR, no necesariamente debe estar presente
en las articulaciones, sino que puede ser un
fenmeno inicial, que desencadena un proceso
patolgico, en un ambiente gentico apropiado.
Modelos animales de artritis han sugerido la
posibilidad que agentes bacterianos tengan un
papel en la etiologa o en la patogenia de esta
enfermedad, aunque esto no ha podido ser
comprobado fehacientemente en la enfermedad
humana. El virus Epstein-Barr ha recibido especial atencin, por ser un activador policlonal de
linfocitos B, por estar presente con mayor
frecuencia en enfermos con AR que en controles
y por la homologa de secuencias entre el EC y la
glicoprotena Gp110 de este virus. Sin embargo,
los datos de prevalencia son circunstanciales y la
Gp110 es una de muchas xenoprotenas que
contiene la secuencia QKRAA. As por ejemplo,
la protena dnaj de la E. Coli, que es una protena
bacteriana de shock trmico, tambin tiene esta
secuencia y pudiera representar una unin
potencial entre las bacterias intestinales y la artritis
crnica.
Tabla 24-1. Posibles causas infecciosas de la artritis reumatodea

Potencial Agente Infeccioso
Mecanismo patognico
Micoplasma
Parvovirus B19
Retrovirus
Bacterias entricas
Mycobacterias
Virus Epstein-Barr
Membrana celular bacteriana
Infeccin sinovial directa; superantgenos

Infeccin sinovial directa
Infeccin sinovial directa
Imitacin molecular (QKRAA)
Activacin de macrfagos
413
Sin ttulo-2
413
5/26/06, 10:26 AM
La hiptesis que una o ms infecciones virales

pueda servir de agente gatillante de la AR en un
husped susceptible es atractiva. Se ha planteado que
esta infeccin debera ser con un agente similar a los
lentivirus, los cuales tienen una expresin restringida
dentro de las clulas y pueden permanecer ocultos a
los mecanismos de defensa del husped.
magnitud mayor que la del FR que se ve en la

enfermedad de Waldenstrm o en la crioglobulinemia y (f) La evidencia disponible seala que
el FR representa una va importante para la
amplificacin de la enfermedad articular y para el
desarrollo de complicaciones extra-articulares.
Los anticuerpos anticolgeno II (natural y
denaturalizado), tienen un indudable inters potencial
a juzgar por los datos obtenidos en modelos animales
de artritis. La mayora de los datos en humanos son
consistentes con la hiptesis que la AR no es
producida por el desarrollo de estos anticuerpos, sino
que la respuesta inflamatoria es amplificada por ellos.
La calpastatina es un inhibidor natural de las
calpainas, que son un subgrupo de cistenasproteasas. Anticuerpos anticalpastatina se
encuentra en un 50% de los enfermos con AR, lo
que ha hecho plantear que la neutralizacin de este
inhibidor podra promover la sobreactivacin de
estas proteasas en el tejido sinovial.
Los anticuerpos antinucleares, los anticitoplasma de neutrfilos y los anticardiolipinas,
no parecen tener un papel en la patogenia.
a) Autoanticuerpos
En la membrana sinovial de la AR crnica, la
infiltracin de linfocitos de predominio clulas T CD4
(CD45RO positivo) puede organizarse como un
ndulo linftico y se distribuye perivascular, en tanto
que los escasos linfocitos B estn en el centro de este
cuerpo linfoide y las clulas plasmticas migran fuera
de l al diferenciarse. De este modo, el tejido sinovial
es un rgano productor de anticuerpos en AR.
En la tabla 24-2 se indican los diferentes tipos
de autoanticuerpos encontrados en la AR.
Tabla 24-2. Autoanticuerpos en Artritis

Reumatodea
______________________________________________
b) Inmunidad Celular
Habitualmente se ha considerado que los
linfocitos T CD4+ son cruciales en la patogenia
de la AR, considerando para ello la masiva
infiltracin de stos en la membrana sinovial. En
la tabla 24-3 se presentan algunas evidencias que
refuerzan esta hiptesis.
Factor Reumatodeo
Antinucleares
Anticolgeno tipo II
Anticolgeno tipo IX
Anticardiolipina
Anticitoplasma de neutrfilos
Antikeratina
Antifactor perinuclear
Anticalpastatina
____________________________________________
Tabla 24-3. Evidencias a favor del papel de

los Linfocitos T en la AR
Los Factores Reumatodeos (FR) son

autoanticuerpos que reconocen la regin Fc de la
IgG. El descubrimiento del FR ha sido un hito en
el desarrollo de conceptos de autoinmunidad,
aunque su papel en la patogenia de la AR es slo
parcialmente comprendido. Algunos datos avalan
su importancia en esta enfermedad: (a) La mayora
de los enfermos con AR tienen ttulos elevados de
FR. (b) Los ttulos altos de FR correlacionan con
enfermedad ms grave. (c) La produccin de FR
es abundante en la membrana sinovial y muestra
evidencias de maduracin de afinidad dirigida por
antgeno. (d) El FR puede aumentar la formacin
de complejos inmunes. (e) La avidez del FR de la
AR por la regin Fc de la IgG es varias rdenes de
LT y CPA estn presentes en gran cantidad en

la membrana sinovial.
LT sinoviales expresan marcadores de
activacin y de memoria.
Parece existir cierto grado de oligoclonalidad
en los linfocitos T sinoviales.
Las citoquinas T, IFN- y la IL-17 presentes
en la articulacin reumatodea, son mediadores
de efectos biolgicos relacionados con la
inflamacin y el dao articular.
Citoquinas que promueven la activacin T y
la diferenciacin Th1, como la IL-12 y la IL15 estn en la articulacin en concentraciones
significativas.
LT, linfocitos T; CPA, clulas presentadoras de

antgeno
414
Sin ttulo-2
414
5/26/06, 10:26 AM
Por otro lado, los tratamientos dirigidos a

disminuir la cantidad de LT, no siempre han sido
exitosos, aunque hay que destacar que la linfopenia
en sangre perifrica no siempre se correlaciona
con la realidad en la articulacin.
Los LT sinoviales son en su mayora de memoria (CD45RO+) que expresan un fenotipo
curioso con marcadores de actividad tarda y
reciente como por ejemplo, HLA clase II y CD69
y muy poca expresin de CD25 (receptor de IL-2)
que aparece en forma intermedia en la activacin.
Las clulas T tambin expresan molculas
coestimuladoras que reciben y transducen seales
durante la activacin, tales como, CD28, CD2,
LFA-1, CD6, CD60 y CD40. Por lo tanto, los LT
no slo son abundantes en la sinovial, sino que
tambin expresan estructuras de superficie que
facilitan las interacciones con ligandos en las CPA
adyacentes.
Persisten sin embargo, algunas observaciones
que no aclaran el papel de los LT. As por ejemplo,
no se ha podido demostrar que exista un
autoantgeno especfico, al cual respondan los
linfocitos T, capaz de gatillar o perpetuar la AR.
Esto es, no se ha podido demostrar que la AR sea
una enfermedad autoinmune en su origen. Adems,
las citoquinas derivadas de LT son menos
abundantes en la sinovial, que las producidas por
otras clulas y las erosiones que aparecen en el
curso de la enfermedad no siempre se
correlacionan con el grado de inflamacin clnica
observable en los pacientes. Aunque la importancia
relativa de distintos blancos antignicos para las
clulas T an no es clara, se han hecho esfuerzos
grandes para identificar clones de linfocitos
patognicos. Las diferencias en expansiones
clonales encontradas en distintos enfermos,
sugieren que la inflamacin en curso puede reflejar
respuestas a una diversidad de antgenos propios
o extraos, que son procesados y presentados a
los LT sinoviales por cualquiera de las diferentes
CPA en la membrana sinovial.
La asociacin del eptopo compartido con la
AR, hizo pensar en el papel crucial de los LT en la
patogenia, sin embargo no es claro el mecanismo
de esta asociacin que puede representar entre
otras posibilidades, seleccin tmica particular,
reactividad cruzada, desequilibrio de unin con
otros genes o alteraciones en la transduccin de
seales.
Recientes publicaciones han sealado la
existencia de una probable alteracin en la homeostasis de la respuesta inmune en esta enfermedad.
Citoquinas en AR. Muchas citoquinas se han

detectado en la membrana sinovial y en el lquido
sinovial de enfermos con AR, algunas de ellas en
concentraciones muy elevadas. La sorprendente
respuesta obtenida con tratamientos dirigidos a
prevenir el efecto de algunas de ellas, ha reforzado
la idea del papel preponderante de las citoquinas
en la inflamacin y destruccin articular. En general se ha considerado la AR como una enfermedad
Th1 cuya funcin se asocia con hipersensibilidad
retardada y con respuestas celulares T citotxicas.
Los niveles de IFN- en la articulacin, son sin
embargo muy bajos, aunque los efectos atribuidos
por lo menos en parte a esta citoquina, como la
fuerte expresin de molculas MHC en una
variedad de tipos celulares, es evidente. Tambin
se encuentra IL-12, que favorece la activacin
hacia Th1. La IL-15 y la IL-18, fcilmente
detectables en la sinovial reumatodea, actan
probablemente en forma sinrgica con la IL-12
en promover la diferenciacin hacia Th1. La IL-2
es apenas detectable y muy pocas clulas expresan
el receptor de alta afinidad para esta citoquina.
Especialmente interesantes son el TNF y la
IL-1, ambas producidas por macrfagosmonocitos aunque tambin pueden ser sintetizadas
por clulas T activadas. Estas citoquinas son muy
abundantes en la sinovial lo que unido a su
potente actividad biolgica proinflamatoria, las
ubica en un papel central en la patogenia de la
inflamacin y destruccin articular. La reciente
introduccin de tratamiento dirigido a bloquear
la accin de estas citoquinas, ha sido un avance
importante en el tratamiento de esta enfermedad.
Tambin estn presentes en la sinovial,
inhibidores o antagonistas fisiolgicos de
citoquinas y de metaloproteinasas, sin embargo
su concentracin es inferior a lo que se requiere
para abrogar la respuesta inflamatoria.
c) Interacciones intercelulares
La unin de leucocitos circulantes al
endotelio activado, va molculas de adhesin, es
un requisito indispensable para el desarrollo de
una inflamacin crnica. La combinacin de
selectinas, integrinas y quimioquinas puede crear
un ambiente nico en la sinovial inflamada para
atraer una gran diversidad de poblacin
leucocitaria. La respuesta de los LT son gatilladas
por la interaccin con las CPA (clulas dendrticas,
macrfagos y LB). As por ejemplo, clulas
dendrticas activadas estn presentes en la mem-
415
Sin ttulo-2
415
5/26/06, 10:26 AM
brana y en el lquido sinovial y se puede observar

al microscopio, que interactan con "nidos" de
linfocitos. Recientemente se ha encontrado que los
LT tambin interactan con fibroblastos sinoviales.
La relacin de los macrfagos con los fibroblastos
se realiza, principalmente, a travs de citoquinas,
pero es posible pensar que tambin hay interaccin
intercelular. Por otro lado, los fibroblastos entregan
seales a los LB que previenen su apoptosis.
Esta variada interaccin celular y la red de
citoquinas presente, pudiera explicar el patrn
inhabitual de diferenciacin celular que se
encuentra en la sinovial reumatodea. En este
sentido es notable el fenotipo nico que exiben
los fibroblastos reumatodeos, con caractersticas
de clulas transformadas, de crecimiento agresivo,
que invaden tejidos vecinos y que acumulan
mutaciones de genes que suprimen tumores como
el p53. La dilucidacin de si estas anomalas son
enteramente secundarias a la inflamacin crnica
o si reflejan acontecimientos primarios
relacionados con la etiologa de la enfermedad es
un objetivo actual central en la investigacin sobre
esta enfermedad.
quear citoquinas especficas, abren un camino novedoso y aparentemente muy eficaz para controlar las manifestaciones de esta devastadora enfermedad.
3. LUPUS ERITEMATOSO SISTMICO

El Lupus Eritematoso Sistmico (LES) es una
enfermedad inflamatoria, de tipo autoinmune, de
causa desconocida y que afecta con mayor frecuencia a las mujeres (relacin 9:1).
3.1. Patogenia
En el LES el dao inflamatorio celular o
tisular, est mediado por mecanismos
inmunolgicos, especialmente por autoanticuerpos
y complejos inmunes, dirigidos contra antgenos
propios.
Parece claro que el LES es una enfermedad
multifactorial por lo que se deben considerar diversos aspectos en su etiopatogenia. Los factores
principales que interactan desarrollando la enfermedad, pueden agruparse en: Factores
genticos, Factores ambientales, Disregulacin del
sistema inmune e Inflamacin y dao celular/
tisular crnico (tabla 24-3).

Clnicamente la AR se manifiesta con mayor
frecuencia, como una artritis de comienzo insidioso que afecta especialmente las articulaciones de
las manos y muecas y que progresivamente va
comprometiendo otras articulaciones. Ms raramente, el comienzo puede ser como artritis aguda
poliarticular. Finalmente tambin se encuentra un
comienzo intermedio entre estas dos formas.
El tratamiento de esta enfermedad ha ido
cambiando conceptualmente con el tiempo. De una
etapa que consider a la AR como una enfermedad relativamente benigna, en la cual haba que
tratar de usar slo antiinflamatorios no esteroidales
y slo ms adelante drogas que pudieran detener
el curso de la enfermedad, a otra etapa, a partir de
los setenta, en que los mdicos conscientes de los
estudios epidemiolgicos que comenzaban a sealar el curso devastador que puede tener, comenzaron a aconsejar la introduccin precoz de drogas potentes con el fin de detener el curso de la
enfermedad, antes que aparecieran erosiones articulares. En la actualidad el uso de inmunosupresores, como el Metotrexato es usual en los primeros meses de hecho el diagnstico. La reciente
incorporacin de medicamentos ahora generados
a travs de ingeniera gentica, capaces de blo-
Tabla 24-4. Principales factores que participan en la patagonia del LES

Factores genticos
- Antecedentes familiares
- Marcadores genticos
- Expresin clnica y marcadores genticos
Factores ambientales
- Drogas
- Luz ultravioleta
- Infecciones
Disregulacin del sistema inmune
- Prdida de la tolerancia
- Aumento en la expresin de autoantgenos
- Alteraciones funcionales linfocitarias
- Desbalance de citoquinas
- Hormonas sexuales y eje neurohipotlamo
hipofisiario
Inflamacin y dao celular/tisular
416
Sin ttulo-2
416
5/26/06, 10:26 AM
a) Drogas. Numerosas drogas y medicamentos

pueden inducir el desarrollo de autoanticuerpos,
algunos con capacidad patognica, determinando
un cuadro clnico de LES inducidos por drogas.
Generalmente ste se manifiesta en pacientes que
son genticamente acetiladores lentos (condicin
que favorece el aumento de molculas relacionadas a la respuesta inmune).

La susceptibilidad gentica en el LES, parece indiscutible. Apoyan su papel preponderante varias
observaciones bien conocidas y demostradas.
a) Estudios familiares. Los gemelos monocigotos
tienen un alto grado de concordancia para la enfermedad (14-57%) y los parientes de pacientes
con LES llegan a presentarla en un 5-12%.
b) Luz ultravioleta (LUV). La LUV produce

distintas alteraciones inmunolgicas en la piel, que
pueden favorecer o reactivar el LES. Altera la expresin de autoantgenos en los keratinocitos y los
estimula a producir citoquinas inductoras de la
produccin de autoanticuerpos por linfocitos B
(IL-3, IL-6, GM-CSF, TNF). Activa a los
macrfagos en el procesamiento de autoantgenos.
Favorece el depsito de autoanticuerpos en la
membrana basal dermoepidrmica, por alteracin
de su estructura.
b) Marcadores genticos. Los pacientes con LES

tienen mayor frecuencia de ciertos marcadores
genticos especficos, comparados con la poblacin general. stos incluyen fenotipo HLA clase I
(B-8) y clase II (DR-2, DR-3, DQW1). Las deficiencias genticas de alguno de los componentes
del sistema del complemento (C1, C2 y C4) se
asocian fuertemente al desarrollo LES. Tambin
se han descrito trastornos genticos para el receptor Fc, para el receptor de C1 y para genes promotores de distintas citoquinas (IL-1, IL-10).
Algunos modelos animales han demostrado
gran importancia de trastornos de la apoptosis celular inducida por genes ( FAS-L, ligando de FAS),
y es probable que este trastorno intervenga tambin en el LES humano.
c) Infecciones. Los microorganismos pueden activar el LES a travs de infecciones. Es bien conocida la capacidad de producir anticuerpos de
reactividad cruzada con autoantgenos, que tengan similitud estructural con antgenos
microbianos. Tambin, especialmente las bacterias producen superantgenos que pueden estimular en forma inespecfica a clones de linfocitos T
y/o B autorreactivos, induciendo de esta forma
respuestas autoinmunes.
c) Expresin clnica y marcadores genticos.

Ciertos genes tipo HLA clase II se asocian con la
produccin de autoanticuerpos definidos que pueden influir en ciertas manifestaciones clnicas especficas: DR3, DR2 y DQ a Ac anti-DNA, DR7
a Ac-anti Sm, DR2 a Ac anti-P ribosomal, DR3 a
Ac anti-Ro (SSA), DR4 y DR2 a Ac Anti-U1-RNP,
y los Ac antifosfolpidos a DR4, DR7 y DR53.
Aunque el papel de la predisposicin
gentica al desarrollo de esta enfermedad, parece
importante y bien demostrado, se estima que el
factor gentico como nica causa de LES no sera
posible, y necesita de la interaccin de otros factores que sern comentados. Est bien establecido que su influencia sera multigentica, y se ha
calculado que entre 4 a 8 genes estaran comprometidos en la predisposicin gentica.
3.1.3. Disregulacin del sistema inmune. Constituye el factor crucial en el desarrollo del LES.
Esta alteracin permite el desconocimiento de los
antgenos propios (prdida de la tolerancia) y la
produccin de una respuesta inmune humoral y
celular dirigida contra stos, capaz de producir
un dao patognico sobre clulas y/o tejidos que
pueden manifestarse clnicamente como una enfermedad potencialmente fatal. Se han reportado numerosas alteraciones inmunolgicas en pacientes con LES, que podran agruparse en distintos aspectos.
a) Prdida de la tolerancia. Constitiuye el defecto ms significativo en la patogenia del LES, y
permite el desarrollo de una respuesta inmune
contra distintos antgenos propios. Como se sabe,
el timo a travs de un proceso de seleccin, elimina o inactiva a aquellos clones capaces de reaccionar contra antgenos propios (Seleccin tmica
negativa o Tolerancia central; ver captulo 13). En
3.1.2. Factores ambientales. Su importancia en

el desarrollo del LES no ha sido an bien determinada, pero se estima que actuaran como
desencadenantes de la enfermedad en aquellos
sujetos genticamente susceptibles. Se han descrito diversos factores ambientales importantes:
417
Sin ttulo-2
417
5/26/06, 10:26 AM
los pacientes con LES se describen disfuncin

tmica que rompe la tolerancia central, lo que permite la presencia de clones de linfocitos T
autorreactivos, capaces de generar una respuesta
autoinmune bajo estmulos adecuados.
La tolerancia perifrica, que se realiza en el
sistema inmune perifrico, tambin est alterada.
Se describe dficit de linfocitos T supresores
(CD8+) y activacin de clones autorreactivos
perifricos de LT "helper" (LTh) (CD4+). Ambas
situaciones favorecen el desarrollo de
autoinmunidad patognica. Se describen trastornos de la tolerancia B con prolongacin de su vida
media, tal vez por defectos en la apoptosis o deficiencias del complemento.
pranas de la enfermedad, (iii) disfuncin del sistema de seales entre clulas inmunes, que se
manifiestan en aumento de respuestas del calcio,
hiperfosforilacin de sustratos proteicos
citoslicos y disminucin del factor nuclear kappa
B, y (iv) dependencia de la produccin de
citoquinas Th2 (favorecen la produccin de
anticuerpos).
El resultado final de stas y otras numerosas
alteraciones funcionales linfocitarias, se traduce
en la produccin descontrolada de una gran profusin y diversidad de autoanticuerpos, eje central de la patogenia del LES.
d) Desbalance de citoquinas. Los pacientes de
LES tienen en general un desbalance de citoquinas
con aumento de aquellas proinflamatorias y disminucin de las inmunorreguladoras, creando el
entorno favorable para el desarrollo de
autoinmunidad.
Se ha descrito aumento de IL-4, IL-6 e IL10; stas inducen a que las clulas B autorreactivas
se activen, proliferen y se diferencien hacia clulas B que producen un exceso de autoanticuerpos
contra muchos antgenos nucleares. No relacionados directamente a hiperreactividad B, los
linfocitos T lpicos producen y responden menos
a IL-2, producen menos IFN, IL-12, TGF, TNF
e IL-1. Estos ltimos hallazgos no tienen an un
rol patognico conocido.
b) Autoantgenos. La expresin de los

autoantgenos en pacientes con LES, est aumentada, probablemente como expresin de apoptosis
celular exagerada, que permite el desarrollo aumentado de nucleosomas, que resultan del plegamiento nuclear de la clula en apoptosis y que
contienen una alta expresin de autoantgenos
nucleares (protenas, histonas, DNA). Al respecto se han descrito alteraciones de genes de
apoptosis en pacientes con LES y en modelos
murinos. La generacin de nucleosomas podra
inducir la respuesta autoinmune inicial en el LES,
expresada en autoanticuerpos antinucleosomas.
La interaccin de stos con los autoantgenos nucleares permitira la expresin de sectores
antignicos que naturalmente no se expresan
(antgenos crpticos) y que aparecen en esta situacin desencadenando respuestas autoinmunes sucesivas (expansin del repertorio autoinmune),
responsable de la gran diversidad del
autoanticuerpos antinucleares (por ejemplo antiDNA nativo, anti-U1-RNP, anti-Sm, anti-Ro (SSA), anti-La (SS-B).
En ciertas circunstancias algunos
autoantgenos podran ser inmunognicos, al ser
procesados por clulas APC especiales, o en el
contexto de distintas molculas de adhesin, que
induzcan respuestas T B autoinmunes.
e) Hormonas sexuales y eje neurohipotlamo

hipofisiario. Es un hecho bien conocido, e independiente del grupo tnico, que el LES afecta
preferencialmente a mujeres jvenes, en periodo
frtil, por lo que el papel de las hormonas femeninas en su patogenia, se ha planteado desde siempre. An hoy, no ha podido establecerse con certeza esta predileccin por el sexo femenino
hormonalmente activo. Sin embargo, hay ciertos
elementos de la influencia de las hormonas sexuales en el sistema inmune que se conocen.
La administracin de estrgenos a mujeres
postmenopusicas parece duplicar su riesgo a desarrollar LES. La hidroxilacin del estradiol en
posicin C-16 es mayor en LES, tanto mujeres
como hombres, lo que acarrea ms metabolitos
estrognicos. Los estrgenos estimulan los
timocitos, los linfocitos T CD8+ y CD4+, los
linfocitos B, los macrfagos, la liberacin de ciertas citoquinas proinflamatorias, y la expresin de
molculas HLA y de adhesin en clulas
endoteliales. La suma de estos efectos favorece
c) Alteraciones funcionales linfocitarias. Se han

descrito numerosas alteraciones inmunes en
linfocitos T y B de pacientes con LES, sin embargo su papel en la patogenia de la enfermedad no
se conoce. As, se ha reportado: (i) disminucin
de linfocitos T citotxicos y T supresores (normalmente frenan la respuesta inmune), aumento
LTh, (ii) activacin policlonal de LB en fases tem-
418
Sin ttulo-2
418
5/26/06, 10:26 AM
las respuestas autoinmunes de tipo humoral. Adems presenta un efecto favorecedor del cambio
de clase, desde autoanticuerpos IgM a IgG; este
ltimo isotipo presentara mayor poder
patognico.
Por otra parte se ha observado disminucin
de andrgenos en mujeres con LES, y tambin inadecuada produccin de progesterona. Tambin
se describe en casi todos los pacientes con LES
disminucin en los niveles sricos de DHEA
(Deshidroepiandrosterona) y de compuestos intermediarios de la sntesis de testosterona. En comparacin a los estrgenos, los andrgenos tienen
un efecto inmunosupresor.
La progesterona y la prolactina afectan tambin, al sistema inmune. La progesterona frena la
proliferacin T y aumenta el nmero de CD8+, y
la hiperprolactinemia se ha asociado a
exacerbaciones del LES. Algunos estudios demuestran disregulacin del eje hipotlamo
hipofisiario, con deficiente produccin de
cortisona asociado a hiperproduccin de
prolactina, estableciendo un balance favorable a
una hiperreactividad inmune.
Es importante destacar que adems de la produccin exagerada de complejos inmunes

patognicos en el LES, se han reportado (a) trastornos en la depuracin (clearence) de stos, mediados por disminucin de receptores CR1, saturacin de stos y de los receptores Fc de IgG
(FcR), hipocomplementemia, y (b) disfuncin de
la fagocitosis del sistema fagoctico mononuclear.
La combinacin de ambos factores favorecera
entonces el dao tisular mediado por complejos
inmunes.
El LES es una enfermedad autoinmune,
inflamatoria, crnica, por lo que los mecanismos
patognicos deben perpetuarse por tiempo prolongado. Para este objeto la respuesta autoinmune
debe mantenerse. La prdida de tolerancia persiste para ciertos autoantgenos, mantenindose una
activacin permanente de clones linfocitarios
autorreactivos. Los trastornos de la regulacin inmune (disfuncin de clulas T y B, red idiotipoanti-idiotipo, desbalance de citoquinas) persisten.
Los mecanismos de eliminacin de complejos inmunes estn superados. El resultado final es la
persistencia de la autoinmunidad y su dao secundario a travs del tiempo, planteando as las caractersticas clnicas de la enfermedad.
Como resumen general, se puede decir que
la etiopatogenia del LES est sustentada en la
suceptibilidad gentica, factores ambientales y
hormonales y en la disregulacin inmune. Por lo
tanto es multifactorial, cada uno de ellos
interactuando con los otros. Probablemente la participacin de cada uno de stos sea variable en
cada enfermo. El mejor conocimiento de su
etiopatogenia permitir desarrollar tratamientos
ms eficientes, ms especficos y con menos efectos secundarios.
3.1.4. Inflamacin y dao celular/tisular

La caracterstica inmune, ms destacada en
el LES, es la gran profusin y diversidad de
autoanticuerpos, los cuales inducen dao a travs
de mecanismos directos de interaccin con su
antgeno (alteraciones funcionales celulares), por
activacin del sistema del complemento (citlisis)
y por linfocitotoxicidad dependiente de
anticuerpos. Sin embargo, el mecanismo clsico
de dao tisular en pacientes con LES, lo constituye sin duda, la formacin de complejos
autoinmunes y su depsito en la pared vascular
(por ejemplo: glomerulonefritis lpica, o vasculitis
por complejos DNA anti DNA). Algunas manifestaciones clnicas son tambin producto de dao
inmune por inmunidad celular o LT sensibilizados (por ejemplo: nefritis intersticial).
La generacin de un anticuerpo como efecto
de una respuesta inmune induce la produccin de
un segundo anticuerpo dirigido contra el idiotipo
del anticuerpo inicial. Esta secuencia induce una
red de idiotipo anti-idiotipo que tiene efectos
inmunorreguladores sobre la respuesta inmune
inicial (ver captulo 14). Esta red estara defectuosa en LES, favoreciendo el desarrollo de mltiples autoanticuerpos y tambin aumento en la
activacin de LT CD4+.

El LES es una enfermedad inflamatoria que
puede comprometer diferentes rganos. Sus manifestaciones clnicas ms frecuentes son: sndrome febril y compromiso del estado general; lesiones eritemato papulares de la piel y rash malar,
ambos fotosensibles; poliartralgias y poliartritis;
alopecia; fenmeno de Raynaud: pleuro-pericarditis; anemia por enfermedad inflamatoria o
hemoltica; leucopenia; linfopenia; trombopenia
y prpura trombopnico; y velocidad de
eritrosedimentacin elevada.
Es frecuente, y muy importante para el pronstico, el compromiso renal, que puede manifes-
419
Sin ttulo-2
419
5/26/06, 10:26 AM
tarse por distintos tipos de glomerulonefritis. La

ms grave, y que puede llegar a insuficiencia renal, es la glomerulonefritis proliferativa difusa, caracterizada por depsito de complejos inmunes
glomerulares e inflamacin secundaria. Otra manifestacin clnica potencialmente muy grave, es
el compromiso del sistema nervioso central, con
dao difuso o focal y eventualmente convulsiones.
Todas estas manifestaciones clnicas son muy
variables entre distintos pacientes. El diagnstico de LES se establece frente a la sospecha clnica, con las alteraciones inespecficas del laboratorio general, y la presencia de distintos
autoanticuerpos, especialmente anticuerpos
antinucleares y anti DNA, que tienen mayor valor
diagnstico.
El LES no tiene una causa conocida por lo
que no tiene un tratamiento especfico. Est encaminado a combatir la inflamacin en forma efectiva (corticoesteroides); o frenar los mecanismos
inmunes que la originan (inmunosupresores). La
insuficiencia renal y el compromiso neurolgico
son las causas ms importantes de mortalidad ligadas a la enfermedad. Otra causa frecuente es la
infeccin o la enfermedad vascular ateroesclertica, que estn relacionadas al tratamiento
agresivo y prolongado.
Seldin, M.F.; Amos, CI.; Ward, R. et al., The

Genetics revolution and the assault on rheumatoid
arthritis, Arthritis Rheum 42:1071-1079, 1999.
Silman, AJ.; MacGregor, AJ.; Thomson, W. et al.,
Twin concordance rates for rheumatoid arthritis:
results from a nationwide study, Br J Rheumatol,
32:903-907, 1993.
Schmidt, D.; Goronzy, J.; Weyand, CM., CD4+
CD7- CD28- T cells are expanded in rheumatoid
arthritis and are characterized by autoreactivity,
J Clin Invest, 97:2027-2037, 1996.
Wagner, U.G.; Koetz, K.; Weyand, C.M., et al.,
Perturbation of the T cell repertoire in rheumatoid
arthritis, Proc Natl Acad Sci USA, 95:1444714452, 1998.
Lupus Eritematoso Sistmico

Boumpas, D.T.; Fessler, B.J.; Austin, AH.; Balow,
J.; Klippel, J.; Lockshin, M.; Systemic Lupus
Erythematosus: Emerging Concepts, Ann Int
Med, 123; 42-53, 1995.
Cooper, GS.; Dooley, M.A.; Treadwell, E.L. et
al., Hormonal, environmental, and infectious risk
factors for developing systemic lupus
erytematosus, Arthritis Rheum, 41: 1714, 1998.
LECTURAS SUGERIDAS
Craft, J., Fatenejad, S., Self antigens and epitope
spreading in systemic autoimmunity, Arthritis
Rheum, 40: 1374, 1997.
Artritis reumatodea
Cook, A.D.; Rowley, MJ.; Mackay, IR. et al.,
Antibodies to type II collagen in early rheumatoid
arthritis, Arthritis Rheum, 39:1720-1727, 1996.
Elkon, K., Autoantibodies in systemic lupus

erythematosus, Curr Opin Rheumatol, 7: 384,
1995.
Firestein, G.S., Etiology and Pathogenesis of

Rheumatoid Arthritis In, Harris, R. and Sledge,
Eds. Kelleys Textbook of Rheumatology,
Philadelphia, Saunders, pp. 921-966, 2001.
Hess, EV., Farley, Y., Etiology, enviromental

relationships, epidemiology, and genetics of
systemic lupus erythematosus, Curr Opin
Rheumatol, 7: 371-375, 1995.
Firestein, G.S., Zvaifler, N.J., How important are

T cells in chronic rheumatoid synovitis?, Arthritis
Rheum 33:768-763, 1990.
Horwitz, DA., Jacob, CO., The cytokine network

in the pathogenesis of systemic lupus
erythematosus and possible therapeutic
implications, Springer Semin Immunopathol, 16:
181, 1994.
Fox, D.A., Etiology and Pathogenesis of

Rheumatoid Arthritis, In Koopman W.J. ed.
Arthritis and Allied Conditions, Philadelphia,
Lippincott Williams & Wilkins, pp. 1085-1102,
2000.
420
Sin ttulo-2
420
5/26/06, 10:26 AM
Lahita, R.G., The role of sex hormones in

systemic lupus erythematosus, Curr Opin
Rheumatol, 11:352, 1999.
Mohan, C.; Adains, S.; Stanik, V.; Datta, SK.,
Nucleosome: A Major immunogen for Pathogenic
Autoantibody-inducing T Cells of Lupus, J Exp
Med., 177; 1367-1381, 1993.
Mysler, E.; Bini, P.; Drappa, J.; Ramos, P.;
Friedman, S.M.; Krammer, PH.; Elkon, K., The
opoptosis-1/Fas protein in human Systemic Lupus
Erythematosus, J Clin Invest, 93:1029-1034,
1994.
Reed, W., Lymphocytes, Cytokines,
inflammation, and immune trafficking, Curr
Opin Rheumatol, 6: 461-467, 1994.
Rivero, S.J.; Daz-Jouanen, E.; Alarcn-Segovia,
D.,
Lymphopenia in Systemic Lupus
Erythematosus, Arthritis Rheum, 21: 295-305,
1978.
Schur, P.H., Genetics of systemic lupus
erythematosus, Lupus 4:425, 1995.
Steinberg, A.D., Systemic Lupus Erythematosus;
Theories of Pathogenesis and approach to
Therapy, Clin. Immunol Immunopathol., 72: 171176, 1994.
Theofilopoulos, A.N., The basis of autoinmunity:
Part II Genetic predisposition, Immunol Today,
16: 150-1, 59, 1995.
Theofilopoulos, A.N.,
The basis of
autoimmunity: Part I Mechanism of aberrant selfrecognition, Immunol Today, 16: 90-98, 1995.
421
Sin ttulo-2
421
5/26/06, 10:26 AM
422
Sin ttulo-2
422
5/26/06, 10:26 AM

Captulo 25
SNDROME ANTIFOSFOLPIDO
Ivn Palomo G., Antonio Cabral, Silvia Pierangeli y Ricardo Forastiero V.
1. Introduccin
2. Antgenos y anticuerpos
2.1. Antgenos
2.2. Anticuerpos
3. Mecanismos de trombosis
3.1. Biosntesis de eicosanoides e
isoeicosanoides
3.2. Sistema antitrombtico de la protena C
3.3. Va del factor tisular
3.4. Sistema fibrinoltico
3.5. Anexinas y activacin celular
3.6. Inmunidad celular y perfil de
citoquinas
3.7. Asociacin con factores genticos de riesgo trombtico
4. Manifestaciones clnicas
4.1. Manifestaciones vaso-oclusivas
4.2. Manifestaciones hemocitopnicas
4.3. Otras manifestaciones
5. Laboratorio
5.1. Anticardiolipina por ELISA
5.2. Anticoagulante Lpico
5.3. Pruebas de laboratorio ms especficas para el diagnstico de SAF
5.4. Qu pruebas de laboratorio se
deben usar en el diagnstico de
SAF?
6. Tratamiento
423
Sin ttulo-2
423
5/26/06, 10:26 AM
424
Sin ttulo-2
424
5/26/06, 10:26 AM
RESUMEN
Los anticuerpos antifosfolpidos (aFL) son un grupo heterogneo de anticuerpos que se
encuentran en pacientes con enfermedades del tejido conectivo, infecciones y en asociacin al
uso de drogas. Su presencia se ha relacionado al Sndrome Antifosfolpido (SAF) que se caracteriza
por presentar trombosis, abortos a repeticin y trombocitopenia. La mayora de los anticuerpos
aFL patognicos presentan especificidad para algunas protenas con afinidad por fosfolpidos
aninicos, la ms estudiada es la beta 2-glicoprotena I (2GPI). Varios hallazgos se asocian a los
mecanismos trombognicos de los anticuerpos aFL, destacando los efectos inhibitorios sobre los
inhibidores fisiolgicos de la coagulacin y los efectos que conducen a la activacin celular. La
pesquisa de los anticuerpos aFL se realiza por ELISA anticardiolipina (aCL) y por pruebas de
coagulacin (anticoagulante lpico, AL), incorporndose ms recientemente ensayos ms
especficos como el ELISA para anti-2GPI. En el manejo del SAF se utiliza principalmente
anticoagulacin.
1. INTRODUCCIN
2. ANTGENOS Y ANTICUERPOS
Los anticuerpos aFL se conocen desde

comienzos del siglo XX, primero se los pesquis
por el mtodo de fijacin de complemento,
posteriormente, en los aos cuarenta, a travs de
la prueba para serologa de sfilis, luego, entre los
aos cincuenta y sesenta, con pruebas de
coagulacin. En los ochenta, Harris y colaboradores, mediante un radioinmunoanlisis que
utilizaba cardiolipina en fase slida, aumentaron
significativamente la sensibilidad en la pesquisa
de los anticuerpos aFL, llamados a partir de esa
fecha aCL. Posteriormente se desarroll un ELISA
para detectar aCL.
Los anticuerpos aFL en asociacin con las
complicaciones clnicas definen al SAF primario
o secundario a otras enfermedades o frmacos.
A partir de fines de los ochenta, los
anticuerpos aFL han sido objeto de mltiples
investigaciones tendientes a conocer sus especificidades, mecanismos de unin y su participacin
en la patogenia de las complicaciones.
En este captulo se describirn los siguientes
aspectos sobre el SAF: especificidad antignica
de los anticuerpos aFL, sus mecanismos
patognicos de trombosis, y algunos aspectos
sobre los mtodos de pesquisa en el laboratorio,
manifestaciones clnicas y tratamiento.
Hasta antes de 1990 se pensaba que los

anticuerpos aFL reconocan fosfolpidos aninicos,
lo que justifica su nombre. Actualmente se sabe
que la mayora de los anticuerpos aFL patognicos
tienen especificidad contra algunas protenas con
afinidad por FL con carga negativa; por esta razn
tambin se les denomina Anticuerpos
antifosfolpido-protenas.
2.1. Antgenos
Entre las protenas blanco de los anticuerpos
aFL se destacan la 2GPI y protrombina (PT).
Adems se han descrito otras especificidades:
protena C, protena S, anexina V, kiningeno de
alto peso molecular, trombomodulina, etc. Dada
la importancia de la 2GPI como blanco de los
anticuerpos aFL, a continuacin se describen
algunos aspectos sobre su estructura y actividad
biolgica.
2GPI. Es una protena plasmtica sintetizada en
el hgado, que se une a molculas con carga
negativa, como FL aninicos, heparina y
lipoprotenas, y a plaquetas activadas. Se sabe que
inhibe la va intrnseca de la coagulacin in vitro,
la actividad protrombinasa de las plaquetas y la
agregacin plaquetaria inducida por ADP. Sin
425
Sin ttulo-2
425
5/26/06, 10:26 AM
embargo, la funcin de la 2GPI in vivo no es an

totalmente conocida. La 2GPI es una glicoprotena formada por una cadena polipeptdica de
326 aminocidos (50 kDa). Presenta cinco
dominios de aproximadamente 60 residuos. Los
dominios I-IV presentan la estructura tpica de los
miembros de la superfamilia de protenas de control del complemento (CCP) tambin llamados
dominios sushi. El quinto dominio, que se
encuentra hacia el extremo carboxilo, presenta 82
aminocidos que incluyen dos cistenas adicionales (figura 25-1). El gen que codifica para la 2GPI
humana fue clonado y secuenciado.
Se han identificado los dominios de unin
de la 2GPI a los FL aninicos y a los anticuerpos
aFL. Se ha demostrado que la CL se une a la
secuencia aminoacdica presente en el quinto

dominio de la protena (C 281KNKEKKC 288),
secuencia con carga positiva debido a la presencia
de cuatro lisinas (K) y que se encuentra en la
superficie de la protena. Se ha postulado que
tambin participara el primer dominio. Por otra
parte, se ha establecido que el dominio de unin
para los anticuerpos anti-2GPI est principalmente en el cuarto dominio de la 2GPI, en un
eptopo crptico que se expone cuando la protena
interacciona con los FL aninicos (figura 25-2).
Evidencia ms reciente indica que el dominio I
presenta el eptopo de una gran parte de los
anticuerpos anti-2GPI. Existen dos teoras que
explican la interaccin entre los anticuerpos anti2GPI y la 2GPI: (a) unin de los anticuerpos a
eptopos crpticos expresados en la protena como
resultado de la interaccin con FL y (b) unin de
los anticuerpos a eptopos nativos de la protena
donde la interaccin se produce slo cuando hay
alta densidad antignica sobre superficies celulares
o placas de ELISA. Actualmente el consenso general es la unin de acuerdo a la segunda teora
debido a la reconocida baja afinidad de estos
anticuerpos.
Se han descrito cuatro polimorfismos
genticos en la 2GPI: en el segundo dominio
(Ser88Asn) y en el quinto dominio (Val247Leu,
Cys306Gly, Trp316Ser).
2.2. Anticuerpos
Figura 25-1. Estructura de la 2GPI. Esta glicoprotena posee

cinco dominios (I-V) de aproximadamente 60 aminocidos
cada uno. , glicosilacin; c, cistena.
Los anticuerpos aFL pueden ser de clase IgG, IgM

e IgA, teniendo mayor significacin clnica el
Figura 25-2. Modelo de unin de los anticuerpos anti-2GPI a la 2GP. La interaccin de la 2GPI a fosfolpidos aninicos
permite la exposicin de un eptopo crptico en la 2GPI, regin a la que se unen los anti-2GPI.
426
Sin ttulo-2
426
5/26/06, 10:26 AM
estos anticuerpos juegan un rol fundamental en la

patogenia del SAF. Varios mecanismos (tabla 251) han sido propuestos teniendo en cuenta que los
FL y las protenas que unen fosfolpidos tienen un
papel crucial en el mantenimiento de la hemostasia
e intervienen en una gran variedad de funciones
celulares. A continuacin se presentan los
hallazgos ms relevantes en el campo de la
fisiopatogenia del SAF:
isotipo IgG, seguido de IgM. Los anticuerpos aFL

convencionales (aCL y AL) se asocian a trombosis
venosa y arterial, y a abortos a repeticin. Los
anticuerpos aFL estn presentes en el 1-3% de
individuos normales, generalmente en ttulos
bajos. En cambio, alrededor de un 50% de los
pacientes portadores de Lupus Eritematoso
Sistmico (LES) presentan algn tipo de
anticuerpos aFL. Las embarazadas normales
presentan cifras iguales a la poblacin general
normal, en cambio alrededor del 20% de las
pacientes que desarrollan abortos a repeticin
presentan aCL y/o AL.
Se han distinguido dos clases de aCL: aCL
independientes de 2GPI y aCL dependientes de
2GPI. Los primeros se han encontrado principalmente en pacientes con enfermedades infecciosas;
se uniran a CL en ausencia de 2GPI y no seran
patognicos. Los segundos en cambio, se
encuentran en pacientes con enfermedades
autoinmunes; se unen a 2GPI en presencia de CL
y tendran un rol patognico.
Dos especificidades de los anticuerpos aFL
han sido las ms estudiadas, anticuerpos anti2GPI y anti-PT. Ambos se pueden pesquisar a
travs de ELISAs especficos. Los anticuerpos
anti-2GPI son evaluados adems en el ELISA para
aCL porque uno de los reactivos usados (suero
fetal bovino) y el suero del paciente contiene
2GPI.
Tabla 25.1. Sistemas involucrados en la

patogenia del SAF
Biosntesis de eicosanoides e isoeicosanoides

Sistema antitrombtico de la protena C
Va del Factor Tisular
Sistema Fibrinoltico
Anexinas y Placenta
Plaquetas y Monocitos
Inmunidad celular y Citoquinas
Combinacin con Trombofilias hereditarias
3.1. Biosntesis de eicosanoides e isoeicosanoides.

Estos componentes se sintetizan a partir del cido
araquidnico de las membranas celulares por va
enzimtica (eicosanoides) o por accin de radicales
libres (isoeicosanoides). Varios estudios in vitro
demostraron que algunos anticuerpos aFL
interferan con la produccin de prostaciclina
(PGI2), eicosanoide producido por las clulas
endoteliales (CE), inhibiendo la liberacin de cido
araquidnico o la actividad de las enzimas
involucradas. Estudios ms recientes mostraron
que las IgG de pacientes con SAF estimulan la
sntesis de la cicloxigenasa inducible sin afectar
la expresin de la enzima constitutiva endotelial.
La sntesis in vitro de tromboxano A2 (TXA2),
eicosanoide de origen plaquetario, es incrementada
en presencia de 2GPI y de anticuerpos aFL
purificados de pacientes con SAF. Este efecto no
se observ al utilizar anticuerpos aFL de pacientes
con sfilis. La activacin plaquetaria parece ser
dependiente de la unin del fragmento Fc de las
IgG al receptor celular Fc-RIIA. La biosntesis
de eicosanoides puede ser evaluada a travs de la
eliminacin urinaria de sus metabolitos. En
estudios ex vivo se encontr un disbalance en la
relacin TXA2/PGI2 con un incremento mayor del
metabolito plaquetario indicando una alteracin
in vivo que podra tener relevancia en el desarrollo
Anticuerpos anti-2GPI. En el SAF la mayora

de los anticuerpos aFL se unen a 2GPI y el
hallazgo de anticuerpos anti-2GPI presenta alta
especificidad para el SAF. Algunos anticuerpos
anti-2GPI presentan actividad AL. Fisiolgicamente la unin de la 2GPI a los FL aninicos es
dbil, en cambio en presencia de anticuerpos anti2GPI la unin de la 2GPI a los FL es ms fuerte,
compitiendo as con los factores de la coagulacin.
Anticuerpos anti-PT. En el caso de los
anticuerpos anti-PT la asociacin con trombosis
no es clara. Se sabe que la mayora de los anti-PT
presentan actividad AL y el mecanismo sera similar al descrito para los anticuerpos anti-2GPI, en
este caso interfiriendo con la formacin del
complejo protrombinasa.
3. MECANISMOS DE TROMBOSIS
La asociacin de los anticuerpos aFL con las
complicaciones tromboemblicas sugiere que
427
Sin ttulo-2
427
5/26/06, 10:26 AM
vitro no slo aumentan la expresin del FT sino

que adems incrementan la sntesis proteica y el
mRNA del mismo. La elevacin simultnea in vivo
en los niveles plasmticos del factor de crecimiento
de endotelio vascular (VEGF) y de FT sugiere que
los anticuerpos aFL promueven la liberacin del
VEGF, que a su vez inducira la expresin del FT
con la consecuente activacin de coagulacin.
Recientemente se demostr adems que los
anticuerpos aFL dependientes de 2GPI suprimen
la actividad anti-factor Xa del inhibidor de la va
del factor tisular incrementando la generacin de
factor Xa por el FT.
de trombosis. El aumento del metabolito

plaquetario se asoci a la presencia de anticuerpos
aFL dependientes de 2GPI de isotipo IgG. Los
isoeicosanoides reflejan los fenmenos de
peroxidacin lipdica in vivo y poseen accin
vasoconstrictora y de activador plaquetario,
postulndose que tendran un rol importante en
los eventos involucrados en el desarrollo de
aterosclerosis y trombosis en las lesiones
vasculares. En estudios recientes se hall un
aumento en la excrecin urinaria de los
isoeicosanoides que se asociaba con el incremento
plasmtico de los marcadores de generacin de
trombina y de factor tisular (FT) soluble.
Recientemente se encontr que los niveles
urinarios de los metabolitos de eicosanoides e
isoeicosanoides se correlacionan. Estos hallazgos
apoyan la hiptesis que involucra a los fenmenos
de estrs oxidativo e inflamacin en el desarrollo
del SAF.
3.4. Sistema fibrinoltico. Este sistema a travs

de la transformacin del plasmingeno en
plasmina disuelve el cogulo de fibrina. Diversos
estudios han demostrado un incremento en los
niveles plasmticos del inhibidor (PAI-1) del
activador tisular del plasmingeno (tPA). Una
hiptesis muy reciente propone que el estado
adquirido de hipofibrinolisis en este sndrome es
causado por la unin de los anticuerpos anti-PT
con el plasmingeno inhibiendo su activacin. La
2GPI parece proteger al t-PA de la inhibicin por
el PAI-1 y este efecto es revertido en presencia de
autoanticuerpos aFL que alteran esta funcin de
la 2GPI.
3.2. Sistema antitrombtico de la protena C.

Este mecanismo fisiolgico de control de la
hemostasia es uno de los ms importantes, y varios
estudios han evaluado la relacin entre anticuerpos
aFL y este sistema. En lo que respecta a la accin
de los anticuerpos aFL sobre la activacin de la
protena C (PC) mediada por trombomodulina hay
resultados contradictorios, pero existe consenso
general de que estos anticuerpos inhiben la funcin
de la PC activada (APC). En particular, los
anticuerpos aFL previenen la inactivacin del factor Va por la APC sobre las superficies
fosfolipdicas generando un estado adquirido de
resistencia a la APC con el consecuente efecto
protrombtico. Esto es evidente principalmente
con los anticuerpos aFL dependientes de 2GPI.
Otra de las alteraciones frecuentemente
encontradas en este sistema es la reduccin en los
niveles plasmticos de la protena S (PS) libre (cofactor de la PC) en los pacientes con anticuerpos
aFL. La 2GPI ejerce un efecto inhibitorio
fisiolgico en la unin PS-protena de unin a C4b
(C4bBP) que es reducido en presencia de
anticuerpos aFL y se propone que los anticuerpos
aFL aumentan la afinidad de la PS por C4bBP e
inducen una reduccin en los niveles de PS libre.
3.5. Anexinas y activacin celular. La anexina

V tiene un rol importante al prevenir las reacciones
de coagulacin sobre la superficie placentaria.
Algunos datos indican que los anticuerpos aFL
reducen la concentracin de anexina V sobre las
superficies trofoblsticas placentarias y CE
acelerando la activacin de coagulacin sobre las
mismas por la mayor exposicin de FL. La
activacin endotelial ha recibido mucha atencin
en estos aos y la evidencia indica el cambio del
fenotipo normal antitrombtico del endotelio a un
fenotipo protrombtico por accin de los
anticuerpos aFL dependientes de 2GPI. Adems
de lo ya mencionado (PGI2, FT, anexina V), otros
estudios han demostrado un fenotipo proadhesivo
y proinflamatorio al expresar varias molculas de
adhesin que conducen a la adhesin y posterior
activacin de leucocitos al endotelio. El aumento
en plasma de estas molculas de adhesin es muy
frecuente en pacientes con autoanticuerpos aFL y
se correlaciona con el aumento de los marcadores
que indican actividad trombnica. Utilizando un
modelo animal de microcirculacin (msculo
cremster de ratones) se hall que los anticuerpos
3.3. Va del factor tisular. La estimulacin

inducida por los anticuerpos aFL sobre la actividad
procoagulante de CE y monocitos es debida al
aumento en la expresin de FT en las superficies
celulares. Los anticuerpos aFL autoinmunes in
428
Sin ttulo-2
428
5/26/06, 10:26 AM
4G/4G en el promotor del PAI-1. Los datos indican que la combinacin de factores genticos se
asocia al SAF y podra contribuir al estado
protrombtico en algunos pacientes con
anticuerpos aFL.
En resumen los mecanismos de trombosis o
prdidas fetales mediados por autoanticuerpos en
el SAF pueden ser la consecuencia de dos tipos
de interacciones: (a) la unin de los anticuerpos a
los antgenos unidos a membranas altera la cintica
de las reacciones dependientes de FL y (b) la unin
de los anticuerpos a los antgenos unidos a los
receptores de membranas celulares induce seales
de transduccin y activacin celular.
aFL incrementan la adhesin de leucocitos al

endotelio. Se demostr el rol fundamental de las
molculas de adhesin al no observar el efecto
trombognico en el modelo de trombosis y de
activacin endotelial por parte de los anticuerpos
aFL cuando se usaron animales knock-out en las
molculas de adhesin. Recientemente se demostr la presencia de micropartculas endoteliales
(EMP) en pacientes con autoanticuerpos aFL. La
liberacin de EMP en circulacin podra diseminar
las actividades procoagulantes y proadhesivas ms
all del sitio de formacin de las EMP y contribuir
al estado protrombtico del SAF. Un trabajo
reciente indica que la 2GPI y los anticuerpos aFL
dependientes de 2 GPI se acumulan en los
endosomas tardos de las CE induciendo un
cambio en la movilizacin intracelular de protenas
que podra contribuir a la patogenia del SAF.
4. CLNICA (Antonio R. Cabral)

Las manifestaciones clnicas asociadas a los
anticuerpos aFL pueden agruparse en: (a) Vasooclusivas, (b) hemocitopnicas y, tal vez, (c) las
que podran deberse a la accin directa de los
anticuerpos con tejidos ricos en fosfolpidos, v.
gr., sistema nervioso central y trofoblasto.
3.6. Inmunidad celular y perfil de citoquinas.

El rol de la inmunidad celular en el SAF est siendo
recientemente evaluado. Sin embargo, los ensayos
in vitro muestran datos contradictorios en si las
clulas T CD4 especficas para 2GPI producen
citoquinas del tipo Th1 o Th2. El cambio de
fenotipo Th1 a Th2 podra tener implicancias
clnicas ya que el tratamiento con anticuerpos
especficos anti-idiotipo result ser efectivo
atenuando las manifestaciones clnicas y
serolgicas del SAF experimental en ratones. Los
resultados sugieren que las clulas Th2 tienen un
rol importante en el desarrollo del SAF y que el
cambio Th2 a Th1 se asocia con induccin de
remisin del SAF. En un estudio reciente se hall
que la respuesta inmune del tipo 2 caracteriza a
los pacientes con SAF primario y que aquellos con
anticuerpos aFL sin SAF, al igual que en los
controles normales, predomina el patrn de
citoquinas del tipo Th1. Estos hallazgos en
pacientes con anticuerpos aFL indicaran que el
cambio de fenotipo Th1 a Th2 tambin tendra un
cierto rol en el desarrollo del SAF en humanos.
4.1. Manifestaciones vaso-oclusivas

La manifestacin clnica distintiva del SAF
es la trombosis venosa y/o arterial, ambas suelen
ser recurrentes; las oclusiones arteriales pueden
tener vasculopata con gran proliferacin de la
ntima y de la media como factor asociado. Otras
manifestaciones son el livedo reticularis, lceras
en piernas asociadas a lesin proliferativa probablemente debida tambin a microtrombosis y prdida fetal repetida. Cuando sta ocurre en el tercer trimestre del embarazo, parece deberse a lesin trombtica y proliferativa de los vasos
placentarios.
Otras manifestaciones que en series grandes
de pacientes han probado tener asociacin significativa con anticuerpos aFL son la hipertensin
pulmonar y la mielitis transversa. Igualmente, la
vasculitis, neuropata perifrica, convulsiones e
isquemia cerebral transitoria son manifestaciones clnicas ms frecuentes en pacientes con portadores de LES y anticuerpos aFL que en los
seronegativos.
La prevalencia de infarto del miocardio (IM)
en pacientes con SAF primario o secundario a LES
vara del 4 al 7%, mientras que la de aCL en el
suero de pacientes con IM, pero sin enfermedad
autoinmune, oscila entre el 3 y 80%. Esta diferen-
3.7. Asociacin con factores genticos de riesgo

trombtico. Los eventos trombticos son
multifactoriales y existen algunos pocos estudios
publicados sobre la prevalencia de factores
genticos de riesgo trombtico en pacientes con
anticuerpos aFL. En una serie de 105 pacientes
consecutivos con anticuerpos aFL se evaluaron el
factor V Leiden, el polimorfismo del gen de la
protrombina G20210G, la variante termolbil de
la metilentetrahidrofolato reductasa y el genotipo
429
Sin ttulo-2
429
5/26/06, 10:26 AM
cia quiz dependa del momento de la toma de la

muestra, de algunas variaciones en la sensibilidad
de los ensayos entre los diferentes laboratorios o
de la seleccin de pacientes. Por otro lado, en una
cohorte de 133 pacientes con IM o muerte
cardiaca, anidada en un estudio prospectivo de
4081 hombres sanos, los aCL a ttulos altos aumentaron el riesgo de desarrollar IM alrededor de
2 veces ms que en los sujetos sanos sin aCL; tal
riesgo fue independiente del tabaquismo, la tensin arterial sistlica y de los niveles sricos de
lipoprotenas de alta y baja densidad.
Varios autores han mostrado que los pacientes con LES y aCL tienen mayor prevalencia de
vegetaciones valvulares que los pacientes
seronegativos. Igualmente, en un estudio
ecocardiogrfico de 55 pacientes con SAFP hubo
una prevalencia del 38% de vegetaciones
valvulares, particularmente de las vlvulas mitral
y artica, y slo del 4% en el mismo nmero de
personas sanas.
Los pacientes con LES y AL o con aCL positivos tienen mayor frecuencia de microtrombos
glomerulares, pero no de nefritis lpica. En un
grupo de 667 pacientes con LES, hubo asociacin
negativa de aCL sricos y sndrome nefrtico,
quiz debida a la excrecin urinaria de los aCL
IgG. Adems de los microtrombos glomerulares,
los pacientes con SAFP pueden tener lesiones tipo
microangiopata trombtica o proliferacin
mesangial.
Las trombosis hemorrgicas de las glndulas suprarrenales son alteraciones bien reconocidas en el SAF primario. Por ejemplo, de 38 casos
con hipoadrenalismo asociado a aCL, 30 tuvieron
SAF primario, en la mayora (70%) de los cuales
la insuficiencia suprarrenal fue de iniciacin sbita. La obstruccin del flujo heptico secundaria
a trombosis de venas suprahepticas, sndrome de
Budd-Chiari, es una manifestacin clnica bien reconocida en los sndromes primario y secundario
de anticuerpos aFL. En la actualidad se considera
que el SAF primario es una de las principales causas de Budd-Chiari.
crona de prpura trombocitopnica con anemia

hemoltica autoinmunes (sndrome de Evans) en
pacientes con LES sucede casi siempre en presencia de anticuerpos aFL. Una asociacin en la
que se hace poco nfasis, pero que varios autores
han informado su asociacin con anticuerpos aFL
en pacientes con lupus, es la neutropenia.
La tabla 25-2 muestra la frecuencia de algunas manifestaciones clnicas vaso-oclusivas y
hemocitopnicas en el SAF primario y sus diferencias con el secundario a LES.
4.3. Otras manifestaciones
Algunas manifestaciones clnicas del SAF podran
deberse a la unin del anticuerpo a fosfolpidos
presentes en el sistema nervioso central o en el
trofoblasto. stas incluyen la mielitis transversa,
desmielinizacin, la prdida fetal durante el primer trimestre y, tal vez, algunos embarazos
anembrinicos.
5. LABORATORIO
Los ensayos que detectan anticuerpos aFL
tienen importancia porque ayudan al mdico en el
diagnstico del SAF. Estos anticuerpos se pueden
detectar mediante ensayos de fase slida (aCL) o
por medio de pruebas de hemostasia que detectan
la prolongacin de reacciones de la coagulacin
en las que los fosfolpidos aninicos actan como
catalizadores, y que no pueden ser corregidas con
plasma normal (AL).
El diagnstico de SAF se basa en un ttulo
de moderado a alto de aCL y/o en una prueba positiva para AL (al menos en dos ocasiones distintas), en pacientes que presentan alguna de las
manifestaciones clnicas propia del SAF (punto
4). El ELISA aCL, aunque ha probado ser una
prueba de laboratorio altamente sensible, resulta
positiva tambin en otras enfermedades que incluyen a saber: enfermedades del tejido conectivo,
enfermedades infecciosas como la sfilis, fiebre
Q y SIDA y en algunos sndromes inducidos por
frmacos. Se sabe, sin embargo que los anticuerpos
aFL son clnicamente significativos solamente
cuando estn presentes en pacientes con SAF y
particularmente si los ttulos son elevados; es as
que se ha intentado modificar el ensayo en muchas oportunidades para hacerlo ms especfico
para el diagnstico de SAF.
A continuacin se revisarn las diferentes tc-
4.2. Manifestaciones hemocitopnicas

La trombocitopenia fue la primera manifestacin hemocitopnica reconocida como parte del
SAF. Algn tiempo despus la anemia hemoltica
autoinmune se asoci a anticuerpos aFL, particularmente al isotipo IgM, que reconocen a la
fosfatidilcolina como blanco antignico. La sin-
430
Sin ttulo-2
430
5/26/06, 10:26 AM
Tabla 25-2. Frecuencia de algunas manifestaciones clnicas vaso-oclusivas y hemocitopnicas en

el SAF primario y sus diferencias con el secundario a LES.
Manifestacin clnica
SAF primario
SAF secundario a LES
VASO-OCLUSIVAS
Arteriales
18/41 (44%)
13/101 (13%)
0.0001*
Prdida fetal repetida
20/25 (80%)
23/50 (46%)
0.01*
Livedo reticularis
14/44 (32%)
73/101 (72%)
0.00001*
Valvulopata cardiaca
19/58 (37%)
29/56 (63%)
<0.005**
HEMOCITOPNICAS
Anemia hemoltica
5/44 (12%)
4/58 (7%)
28/101 (28%)
12/56 (21%)
0.05*
<0.05**
6/56 (11%)
<0.05**
13/45 (28%)
53/101 (53%)
0.01*
Neutropenia
Trombocitopenia
* Tomado de Cardiel H, Grupo Multicntrico de la Ciudad de Mxico: Sndrome de antifosfolpido primario (SAFP). Informe
inicial de 51 pacientes. Grupo Multicntrico de la Ciudad de Mxico. Rev Mex Reumatol 1992; 7:4.
** Tomado de Vianna JL, Khamashta MA, Ordi-Ros J, Font J, Cervera R, Lopez-Soto A, Tolosa C, Juliane F, Selva A, Ingelmo M,
Hughes GRV: Comparison of the primary and secondary antiphospholipid syndrome: a European multicenter study of 114 patients. Am J Med 1994; 96:3-9.
SAF. El problema es que este ensayo es tambin

positivo en otras enfermedades que no son SAF.
Sin embargo, debido a que los pacientes con SAF
generalmente tienen niveles altos de aCL, la mayor precisin en el diagnstico se puede lograr
usando puntos de corte ms altos para el ensayo.
Tambin se han empezado a usar otros antgenos
para cubrir las placas de ELISA que aumentan la
especificidad de la prueba y sern descritos en el
punto 5.3.
El primer ensayo de aCL fue un radioinmunoensayo. Muchos laboratorios adoptaron el
ensayo de inmediato y esto acarre la aparicin
de algunos problemas. Por ejemplo, con la tcnica utilizada, interpretacin de los resultados, etc.
Para asegurar que la prueba presentaba valor diagnstico para el SAF, sera entonces necesario identificar anticuerpos por isotipo y cuantificar los resultados. Tambin se destac la necesidad de establecer cules eran los mtodos vlidos as
como procedimientos estandarizados para realizar esta determinacin. Se llev a cabo entonces,
el primer taller internacional de estandarizacin
nicas usadas para validar y mejorar la determinacin de aCL, as como aspectos concernientes a la
especificidad del ensayo. Tambin se discutirn
nuevas pruebas que han demostrado ser ms especficas para el diagnstico de SAF.
5.1. Anticardiolipina por ELISA
La asociacin de una prueba aCL positiva con
manifestaciones clnicas de SAF ocurre, principalmente, cuando los ttulos de aCL son moderados o altos, particularmente si son del isotipo IgG,
que es ms prevalente que el IgM. Sin embargo,
existen reportes de que la presencia de aCL de tipo
IgA y IgM ocasionalmente tambin estn asociados con manifestaciones clnicas de SAF.
Frecuentemente se encuentra que los resultados se expresan en rangos de positividad y adems en unidades GPL y MPL. Se ha demostrado
que la variacin entre laboratorios es menor en
estos casos.
La prueba aCL es sensible y se lo encuentra
positivo en ms del 80-90% de los pacientes con
431
Sin ttulo-2
431
5/26/06, 10:26 AM
en 1986, seguido por otros dos talleres del mismo

tipo.
Desde el momento que el ensayo se puso en
marcha, se han hecho algunos cambios tendientes
a: reducir la unin inespecfica, estandarizar la
cuantificacin de los resultados y los tiempos y
temperaturas de incubacin. Se recomend, por
ejemplo, el uso de suero fetal bovino en vez de
gelatina en la solucin de bloqueo y en el diluyente
porque ello mejoraba la unin de los anticuerpos
a los FL. Este fenmeno fue atribuido posteriormente a la presencia en el suero de 2GPI. Tambin se enfatiz en la necesidad de estandarizar el
procedimiento para obtener valores cuantitativos
precisos, dada la importancia de esos valores en
el diagnstico apropiado de la enfermedad.
mente un 10-16% de los pacientes con SAF son

AL positivo y negativo para aCL y alrededor de
un 25 % son solamente positivos para aCL.
5.3. Pruebas de laboratorio ms especficas
para el diagnstico de SAF
Como se destac anteriormente, uno de los
mayores problemas del ensayo de ELISA para aCL
es el nmero de falsos positivos que presenta, es
decir una gran variedad de pacientes con enfermedades que no son SAF, particularmente de origen infeccioso tienen aCL positivos. ltimamente se han desarrollado modificaciones al ensayo
de aCL. stas incluyen por ejemplo, cubrir las placas 2GPI, con fosfatidilserina o con una mezcla
de fosfolpidos aninicos (APhL ELISA Kit) en
vez de cardiolipina, y estas modificaciones han
resultado en una mayor especificidad del ensayo.
Estudios publicados que utilizan
2GPI+como antgeno, particularmente cuando se
cubren placas de poliestireno de high binding o
oxidadas, han demostrado que el ensayo es relativamente especfico para la deteccin de
anticuerpos presentes en pacientes con SAF. Estudios publicados provenientes de distintos laboratorios indican que la sensibilidad del ensayo
vara del 40 al 90%. La especificidad tambin vara entre los distintos grupos de investigadores,
dependiendo de la seleccin de los sueros de los
pacientes y de la tcnica utilizada. Varios estudios
han demostrado que el ensayo que utiliza la mezcla de fosfolpidos aninicos es un mtodo sensible y especfico para la identificacin de pacientes con SAF.
Estandarizacin del ensayo de aCL por ELISA

En el primer taller de estandarizacin de aCL,
se discutieron y estudiaron los mtodos que deban usarse para medir los ttulos de aCL. Se establecieron unidades de medida, y se propuso el uso
de seis calibradores para que los laboratorios en
distintas partes del mundo pudieran realizar la determinacin de aCL con mejor precisin. En el
segundo taller se demostr que cuando los aCL se
median en forma semicuantitativa, en vez de cuantitativa, era posible obtener mejor acuerdo (correlacin o precisin) en los resultados obtenidos en
distintos laboratorios. En el tercer y cuarto taller
se discutieron temas controvertidos, particularmente con respecto a la especificidad del ensayo,
los antgenos que estos anticuerpos reconocen y
se analizaron y compararon equipos comerciales
para la deteccin de aCL.
5.2. Anticoagulante Lpico
5.4. Qu pruebas de laboratorio se deben usar

en el diagnstico de SAF?
El AL est presente en el SAF con menos

frecuencia que aCL. Se sabe que el AL es una prueba ms especfica para la deteccin de anticuerpos
aFL, ya que generalmente no se encuentra positiva en enfermedades que no sean el SAF. Este ensayo de AL mide la habilidad de los anticuerpos
aFL de prolongar las reacciones de la coagulacin
dependientes de FL.
En publicaciones recientes, se ha demostrado que los anticuerpos aFL son heterogneos y
que los dos tipos de anticuerpos tal vez sean entidades distintas. Se sabe tambin que aunque la
mayora de los pacientes con SAF tienen positivas esas dos pruebas de laboratorio, aproximada-
La correcta y precisa identificacin de pacientes con SAF es importante ya que estos pacientes deben someterse a tratamientos para prevenir la incidencia de trombosis a repeticin, que
incluyen anticoagulacin de por vida, o debe decidirse si tratar o no a una mujer embarazada para
prevenir la recurrencia de prdidas fetales. Adems, existen muchas otras causas de trombosis y
ms an de prdidas fetales. Es entonces importante realizar el diagnstico de SAF con precisin.
En general se acepta que el AL y el ensayo de aCL
por ELISA se deben usar para confirmar el diagnstico presuntivo de SAF.
En resumen, el diagnstico de SAF se puede
432
Sin ttulo-2
432
5/26/06, 10:26 AM
confirmar en pacientes que presenten sntomas clnicos de SAF (trombosis arteriales y/o venosas y/
o prdidas fetales) y que tengan un ttulo de medio a alto de aCL (particularmente IgG, ms de 40
unidades GPL) y/o AL positivo. Sin embargo, hay
situaciones en las que la confirmacin del SAF
puede obtenerse con uno de los ensayos ms especficos que se discutieron en la seccin anterior, el ELISA para anticuerpos anti-b2GPI o el
APhL ELISA Kit:
Pacientes con manifestaciones clnicas de

SAF pero con pruebas de AL y aCL negativas.
El algoritmo mostrado en la figura 25-3

muestra que primero se deben realizar las pruebas
de aCL y de AL. Si estas pruebas (cualquiera de
las dos) son negativas, se debe realizar una prueba ms especfica que pueden incluir el ensayo de
anti-b2GPI o el APhL ELISA Kit. Debido a que
la sensibilidad del citado kit es similar a la del
ensayo de aCL, aquel ensayo que usa la mezcla
de FL puede remplazar al aCL y usarse en el primer nivel junto con el AL.
Pacientes con trombosis venosas y/o arteriales

o con prdidas fetales que son positivos bajos IgG para aCL, o solamente positivos para
IgM o IgA aCL.
Pacientes que presentan manifestaciones clnicas no frecuentes en el SAF como por ejemplo trombocitopenia, tromboflebitis,
ateroesclerosis, prdidas fetales en el primer
trimestre, livedo reticularis, lceras en las
piernas, corea, lesiones cardacas valvulares,
en ausencia de manifestaciones clnicas primarias de SAF.
6. TRATAMIENTO (Antonio R. Cabral)

Adems de su relevancia biolgica, el conocimiento de que el SAF es parte del lupus eritematoso tiene gran importancia teraputica, ya que
las manifestaciones de ste, particularmente las
vaso-oclusivas, requieren tratamiento antiagre-
Figura 25-3. Algoritmo de la secuencia de diagnstico de laboratorio en pacientes que presentan clnica de SAF. Tomado de:
Harris EN, Pierangeli S. Equivocal Antiphospholipid Syndrome. J Autoimmunity 15: 81-5, 2000.
433
Sin ttulo-2
433
5/26/06, 10:26 AM
gante plaquetario y/o anticoagulante y no el

corticoesteroideo o el inmunosupresor. Esta ltima
nocin deriva de que el bajar los niveles de
anticuerpos aFL no tiene efecto positivo en las
manifestaciones del sndrome. Por otra parte, para
que tales niveles bajen se requieren dosis mayores
de corticoesteroides e incluso de inmunosupresores
a largo plazo, quiz mayor al que lo requieren las
manifestaciones clnicas clsicas del lupus.
La prdida fetal repetida se puede prevenir
mediante la administracin de aspirina a dosis de
65 a 100 mg/da. Para ello, la aspirina debe iniciarse temprano en el embarazo y, de preferencia,
antes. La administracin de heparina subcutnea
durante el embarazo aumenta las probabilidades
de tener productos vivos y puede disminuir la aparicin de preeclampsia. Pese a su costo, se favorece el uso de heparina de bajo peso molecular dada
la duracin que deber tener su administracin.
Otra forma de tratamiento que puede aumentar las
probabilidades de xito es la administracin de
gamaglobulina endovenosa. El alto costo, sin embargo, limita su uso a situaciones elitistas. Se ha
propuesto a la prednisona para el tratamiento de
la prdida fetal, pero esta medida no confiere ventaja alguna; de hecho, su uso durante toda la gestacin confiere mayor riesgo de dao que de beneficio.
Debido a que la exposicin de fosfolpidos
aninicos en la superficie de las plaquetas activadas o agregadas parece tener un papel crucial en
la patogenia de la trombocitopenia, se ha propuesto
tratar sta con aspirina a dosis bajas. Los resultados positivos de esta medida en pacientes con SAF
primario no se han reproducido en los del secundario a LES, probablemente debido a los varios
autoanticuerpos antiplaquetarios presentes en el
suero de estos pacientes. En pacientes con LES el
tratamiento de la trombocitopenia, como el de la
anemia hemoltica, s requiere corticoesteroides a
dosis altas por tiempos variables y descensos lentos despus de la recuperacin, as como
inmunosupresores u otras terapias como el
danazol, la gamaglobulina endovenosa y, como
medida extrema aunque no siempre efectiva,
esplenectoma.
El tratamiento preventivo de la trombosis por
SAF es an muy imperfecto. Parece haber consenso, sin embargo, en que requiere anticoagulantes a dosis ajustadas para obtener una intensidad cercana al 3.0 de INR (international
normalization ratio). Debe tomarse en cuenta que
en presencia de anticoagulante lpico, el INR quiz
no refleje el real estado de anticoagulacin; por

ello, se pueden determinar los niveles del factor X
cromognico y del tiempo de protrombinaproconvertina. La decisin de iniciar tratamiento
anticoagulante debe considerar el hecho de que
puede necesitarse a largo plazo y tal vez de por vida.
La suspensin de los anticoagulantes pide mucha
prudencia, debe hacerse gradualmente y evitar la
administracin de vitamina K, pues la suspensin
repentina del tratamiento anticoagulante puede inducir hipercoagulabilidad generalizada grave.
LECTURAS SUGERIDAS
Alarcn-Segovia, D.; Delez, M.; Oria, C.V.;
Snchez-Guerrero, J.; Gmez-Pacheco, L.;
Cabiedes, J.; Fernndez, L.; Ponce de Len, S.,
Antiphospholipid antibodies and the
antiphospholipid syndrome in systemic lupus
erythematosus. A prospective analysis of 500 consecutive patients, Medicine 1989; 68:353-365.
Alarcn-Segovia, D.; Prez-Vzquez, M.E.; Villa,
A.R.; Drenkard, C.; Cabiedes, J., Preliminary
classification criteria for the antiphospholipid syndrome within systemic lupus erythematosus,
Semin Arthritis Rheum 1992; 21:275-286.
Alarcn-Segovia, D., On the catastrophic adjective for the antiphospholipid syndrome, Clin Exp
Rheumatol 1993; 11:587-588.
Amengual, O.; Atsumi, T.; Khamashta, M.; Hughes,
G., Clinical significance of anti-B2 glycoprotein I
antibodies, Ann Med Intern 1996; 147: 15-17.
Asherson,
R.A.,
The
catastrophic
antiphospholipid syndrome (Editorial), J
Rheumatol 1992; 19:508-512.
Cabiedes, J.; Cabral, A.; Alarcn-Segovia, D.,
Clinical manifestations of the antiphospholipid
syndrome in patients with systemic lupus erythematosus associate more strongly with anti-2 glycoprotein 1 than with antiphospholipid antibodies, J Rheumatol 1995; 22: 1899-1906.
Cabral, A.R.; Cabiedes J., Alarcn-Segovia, D.,
Hemolytic anemia related to an IgM autoantibody
to phosphatidylcholine that binds in vitro to stored
and to bromelain-treated erythrocytes, J Autoimmunity 1990; 3:773-787.
434
Sin ttulo-2
434
5/26/06, 10:26 AM
Matsuura, E.; Igarashi, Y.; Fujimoto, M.; Ichikawa,

K.; Koike, T., Anticardiolipin cofactors and differential diagnosis of autoimmune disease, Lancet 1990; 336: 177-178.
Carreras, L.O., Forastiero R.R., Pathogenic role

of antiprotein-phospholipid antibodies,
Haemostasis 1996; 26: 340-357.
Delez, M.; Alarcn-Segovia, D.; Oria, C.V.;
Snchez-Guerrero, J.; Fernndez-Domnguez, L.;
Gmez-Pacheco, L.; Ponce de Len, S.,
Hemocytopenia in systemic lupus erythematosus.
Relationship to antiphospholipid antibodies, J
Rheumatol 1989; 16:926-930.
McNeil, H.P.; Simpson, R.J.; Chesterman, C.N.;

Krilis, S., Anti-phospholipid antibodies are directed against a complex antigen that includes a
lipid binding inhibitor of coagulation: 2 glycoprotein 1 (apolipoprotein H), Proc Natl Acad Sci
(USA) 1990; 87: 4120-4124.
Derksen, R.H.; de Groot, P.G.; Nieuwenhuis, H.K.;

Christiaens, G.C., How to treat women with
antiphospholipid antibodies in pregnancy? Ann
Rheum Dis 2001; 60:1-3.
Palomo, I.; Pereira, J.; Alarcn, M.; Vsquez, M.,

Anticuerpos asociados a trombosis, Rev. Chil.
Cancerol. Hematol. 2000; 10: 69-78.
Dunoyer-Geindre, S.; Kruithof, E.K.O.; de

Rochemonteix, G.; Rosnoblet, C.; Gruenberg, J.,
Reber, G.; de Moerloose, P., Localization of 2glycoprotein I in late endosomes of human endothelial cells, Thromb Haemost 2001; 85: 903-907.
Pierangeli, S.S.; Espnola, R.; Liu, X.; Harris, E.N.,

Thrombogenic effects of antiphospholipid antibodies are mediated by intercellular cell adhesion
molecule-1, vascular cell adhesion molecule-1,
and P-selectin, Circ Res 2001; 88: 245-250.
Forastiero, R.; Martinuzzo, M.; Adamczuk, Y.;

Iglesias Varela, M.L.; Pombo, G.; Carreras, L.O.,
The combination of thrombophilic genotypes is
associated with definite antiphospholipid syndrome, Haematologica 2001; 86: 735-741.
Pierangeli, S.S.; Stewart, M.; Silva, L.K.; Harris,

E.N., Report of an anticardiolipin wet workshop
during the VIIth International Symposium on
antiphospholipid antibodies, J Rheumatol 1998;
25: 156-162.
Harris, E.N.; Gharavi, A.E.; Boey, M.L.; Patel,

B.M.; Mackworth-Young, C.G.; Loizou, S.;
Hughes, G.R., Anticardiolipin antibodies: detection by radioinmunoassay and association with
thrombosis in systemic lupus erythematosus,
Lancet 1983; 2: 1211-1214.
Pratic, D.; Ferro, D.; Iuliano, L.; Rokach, J.;

Conti, F.; Valesini, G., Fitzgerald, G.A.; Violi, F.,
Ongoing prothrombotic state in patients with
antiphospholipid antibodies: a role for increased
lipid peroxidation, Blood 1999; 93: 3401-3407.
Provenzale, J.M.; Ortel, T.L.; Nelson, R.C., Adrenal hemorrhage in patients with primary
antiphospholipid syndrome, Imaging findings. A
J R 1995; 165:361-364.
Harris, E.N.; Pierangeli, S.S., A more specific

ELISA assay for the detection of
antiphospholipid, Clin Immunol Newsletter 1995;
15: 26-28.
Rand, J.H.; Wu, X.X.; Andree, H.A.M.;

Lockwood, C.J.; Guller, S.; Scher, J.; Harpel, P.C.,
Pregnancy loss in the antiphospholipid-antibody
syndrome a possible thrombogenic mechanism,
N Engl J Med 1997; 337: 154-160.
Khamashta, M.A. (Editor), Hughes Syndrome,

Antiphospholipid Syndrome, London, Springer,
2000.
Khamashta, M.A.; Cuadrado, M.J.; Mujic, F.;
Taub, N.A.; Hunt, B.J., Hughes, G.R.V., The
management of thrombosis in the antiphospholipid
syndrome, N Engl J Med 1995; 332:993-997.
Roubey, R., Autoantibodies to phospholipidbinding plasma proteins: A new view of lupus anticoagulants and other antiphospholipid autoantibodies, Blood 1994; 84: 2854-2867.
Martinuzzo, M.; Forastiero, R.R.; Carreras, L.O.,

Anti-2 glycoprotein I antibodies: detection and
association with thrombosis, Br J Haematol 1995;
89: 397-402.
435
Sin ttulo-2
435
5/26/06, 10:26 AM
Silveira, L.H.; Hubble, C.L.; Jara, L.J.; Saway, S.;

Martnez, O.P.; Seleznick, M.J.; Angel, J.; Obrien,
W.; Espinoza, L.R., Prevention of anticardiolipin
antibody-related pregnancy losses with prednisone
and aspirin, Am J Med 1992; 93:403-411.
Vianna, J.L.; Khamashta, M.A.; Ordi-Ros, J.; Font,
J.; Cervera, R.; Lpez-Soto, A.; Tolosa, C.; Juliane,
F.; Selva, A.; Ingelmo, M.; Hughes, G.R.V., Comparison of the primary and secondary
antiphospholipid syndrome: a European
multicenter study of 114 patients, Am J Med 1994;
96:3-9.
Williams, F.M.K.; Parmar, K.; Hughes G.R.V.;
Hunt, B.J., Systemic endothelial cell markers in
primary antiphospholipid syndrome, Thromb
Haemost 2000; 84: 742-746.
436
Sin ttulo-2
436
5/26/06, 10:26 AM

Captulo 26
CITOPENIAS INMUNES
Ivn Palomo G., Jaime Pereira G. y Marcela Vsquez R.
1. Introduccin
2. Anemias hemolticas inmunes
2.1. Sistemas antignicos de los glbulos rojos
2.2. Anemias hemolticas inmunes
2.2.1. Anemias hemolticas aloinmunes
2.2.2. Anemias hemolticas autoinmunes
3. Trombocitopenias inmunes
3.1. Sistemas antignicos de las
plaquetas
3.2. Trombocitopenias inmunes

4. Neutropenias inmunes
4.1. Sistemas antignicos de los
neutrofilos
4.2. Neutropenias inmunes
4.2.2. Neutropenias autoinmunes
437
Sin ttulo-2
437
5/26/06, 10:26 AM
438
Sin ttulo-2
438
5/26/06, 10:26 AM
RESUMEN
Las citopenias (anemia, trombocitopenia y leucopenia) pueden estar asociadas a mecanismos inmunes. En este captulo se describen los antgenos ms relevantes de los glbulos rojos,
plaquetas y neutrfilos y las citopenias mediadas por alo y autoanticuerpos en cada tipo celular.
Se privilegia la informacin sobre fisiopatologa ms que sobre diagnstico y tratamiento.
oxgeno. Las anemias pueden ser clasificadas en

tres grupos de acuerdo al mecanismo que induce
la disminucin de los eritrocitos: Anemias
hipoproliferativas (disminucin en la produccin
de hemates), Anemias hemolticas (destruccin
aumentada de eritrocitos) y Anemias por
hemorragias. En las Anemias Hemolticas (AH),
la destruccin puede ocurrir intravascularmente
o en el bazo y desde el punto de vista fisiopatolgico se les puede clasificar en dos grupos; AH
intracorpusculares que corresponde a alteraciones
propias de los hemates (membranopatas,
enzimopatas y hemoglobinopatas) y AH
extracorpusculares, en las cuales los glbulos rojos
son normales y factores externos a la clula son
los que inducen la hemlisis. Las AH extracorpusculares se pueden clasificar en: no inmunes
(destruccin mecnica, agentes infecciosos,
componentes plasmticos alterados y toxinas) e
inmunes; en este ltimo grupo participan
anticuerpos antieritrocitarios (alo o autoanticuerpos) que provocan las denominadas Anemias
Hemolticas Inmunes (AHI).
1. INTRODUCCIN
En general la disminucin de los glbulos rojos
(anemias), de las plaquetas (trombocitopenia) y
de los leucocitos (leucopenias) se asocian con dos
mecanismos fisiopatolgicos: Disminucin de la
produccin en la mdula sea y aumento de la
destruccin a nivel perifrico. En este ltimo caso
los eritrocitos, plaquetas y granulocitos pueden ser
el blanco de anticuerpos (alo o autoanticuerpos)
que promueven su destruccin o remocin acelerada desde la circulacin. En este captulo se aborda la fisiopatologa y se esboza el cuadro clnico,
diagnstico y tratamiento de cada una de las
citopenias inmunes: Anemias hemolticas inmunes, Trombocitopenias inmunes y Neutropenias
inmunes.
2. ANEMIAS HEMOLTICAS INMUNES

Los glbulos rojos son clulas anucleadas y
bicncavas de, aproximadamente, 7,5 m de
dimetro; tienen como funcin fundamental el
transporte de oxgeno a los tejidos. Presentan una
sobrevida de alrededor de 120 das, periodo
despus del cual son retirados desde la circulacin
por el Sistema Fagoctico Mononuclear (SFM).
En condiciones normales la masa de glbulos
rojos (hemates o eritrocitos) circulante permanece
constante gracias a los mecanismos de control, los
cuales estn finamente regulados para satisfacer
los requerimientos corporales de oxgeno.
Anemia, es un trmino usado para denotar
una condicin asociada a la disminucin del
nmero de eritrocitos y como consecuencia de la
hemoglobina disponible para el transporte de
2.1. Sistemas antignicos de los glbulos rojos

Se han descrito ms de 250 antgenos
eritrocitarios que se agrupan en 25 sistemas
sanguneos, 7 colecciones y 2 series. Los antgenos
eritrocitarios residen en molculas de diversa
estructura y funcin. Alguno de ellos adems de
expresarse en glbulos rojos lo hacen en tejidos
no eritroides; en la mayora de los casos el rol
biolgico sobre las clulas es desconocido. La
bioqumica y la gentica molecular han permitido
establecer la estructura y gentica de la mayora
de estos antgenos.
439
Sin ttulo-2
439
5/26/06, 10:26 AM
Los sistemas sanguneos pueden ser divididos

de acuerdo a la naturaleza bioqumica de los
antgenos. Tambin se les puede clasificar de
acuerdo a la funcin del producto gnico que da
origen al antgeno, en cinco categoras (tabla 261). Recientemente se han incorporado algunos de
los antgenos eritrocitarios a la nomenclatura CD
("cluster of diferentiation").
especificidad antignica reside en estructuras

oligosacridas, producto de la accin de varias
glicosiltransferasas que actan secuencialmente
sobre el tetrasacrido precursor o paraglobsido.
La sntesis de estos antgenos requiere de la accin
de enzimas codificadas por genes ubicados en los
cromosomas 9 (ABO) y 19 (H).
En 1990 se dilucidaron las bases genticas
de los tres principales alelos del locus ABO. Los
antgenos del sistema han sido identificados en
glbulos rojos, en secreciones y sobre la mem-
Sistema ABO. El sistema ABO sigue siendo el

ms importante en la prctica transfusional, la
Tabla 26-1. Clasificacin funcional de los productos gnicos de sistemas sanguneos

Funcin
Sistema (smbolo ISBT)*
Transporte o canales
Rh (RH)
Kidd (JK)
Diego(DI)
Colton (CO)
Kx (XK)
51
3
18
3
1
CD240
MNSs (MNS)
P (P1)
Duffy (FY)
Cromer (CROMER)
Knops (KN)
42
1
6
10
5
CD235
Lutheran (LU)
Xg (XG)
Landsteiner-Wiener
(LW)
Indian (IN)
20
1
3
2
ABO (ABO)
Kell (KEL)
Lewis (LE)
Yt (YT)
Hh (H)
4
26
6
2
1
CD173
Protenas
Estructurales
Gerbich (GE)
CD236
Otros
Scianna (SC)
Dombrock (DO)
Chido/Roger (CH/RG)
OK
Raph
3
5
9
Receptores
Adhesin
Enzimas
Nmero de
antgenos
440
440
CD233
CD234
CD55
CD242
CD44
* ISBT = International Society of Blood Transfusion
Sin ttulo-2
Nomenclatura
CD
5/26/06, 10:26 AM
CD238
CD174
brana de clulas epiteliales y endoteliales. Adems,

estructuras antignicas similares han sido
detectadas en diversos organismos tales como
microorganismos y plantas. La estructura ms
detallada de los antgenos de este sistema
sanguneo se ha mostrado en el captulo 5.
Sistema Rh. El sistema Rh es el ms polimrfico
e inmunognico de los sistemas sanguneos
humanos y el segundo en importancia clnica. El
sistema est compuesto por aproximadamente 50
antgenos, los cuales son codificados por 2 genes
estrechamente unidos, ubicados en el cromosoma
1; uno de ellos codifica la protena RhD que
expresa el antgeno D y sus variantes, y el otro
codifica la protena RhCE que expresa los
antgenos C, c, E, e y sus variantes. Las protenas
RhD y RhCE tienen pesos moleculares que
fluctan de 30 a 34 kDa (figura 26-1). Se ha
descrito la glicoproteina Rh 50, llamada
glicoprotena asociada al Rh (RhAG, CD241),
codificada por un gen ubicado en el cromosoma
6 y que sera esencial para el ensamblaje de las
protenas Rh en la membrana eritrocitaria, as
como para la inmunogenicidad. Existe adems un
grupo de "protenas accesorias del Rh" conformadas por un grupo de otras glicoprotenas
(glicoprotena LW, glicoforina B, banda 3,
protenas asociadas a integrinas y glicoprotena
Duffy); por esta razn se considera al sistema Rh
como un "complejo de protenas Rh".
Las protenas RhD y RhCE tienen un 92%
de homologa entre s y una homologa del 38,5%
y 39.2% con la RhAG respectivamente, adems
ellas muestran una gran similitud en la topologa,
por ejemplo todas presentan 12 regiones
transmembrana, sugiriendo que todas pertenecen
a una misma familia de protenas.
El antgeno D es el ms importante del
sistema. En la poblacin blanca aproximadamente
el 15% de los individuos son designados como
Rh negativos por carecer de la protena D en sus
glbulos rojos, y el 80% de ellos se aloinmunizan
en respuesta al contacto con eritrocitos Rh
positivos. Estos aloanticuerpos son usualmente
del tipo IgG y pueden causar reacciones
hemolticas (ver punto 2.2.1).
Los dems sistemas sanguneos cobran
importancia clnica en la medida en que los
anticuerpos desarrollados causen reacciones
hemolticas transfusionales o enfermedad
hemoltica del recin nacido. La especificidad de
los anticuerpos que ms frecuentemente causan
Figura 26-1. Topologa de las protenas RhD, RhCE y

glicoprotena Rh50 (RhAG). Las protenas del sistema Rh
presentan doce regiones transmembrana. Los crculos indican
los 35 aminocidos diferentes entre la protena D y la CE. En
la protena CE se indican los aminocidos en posicin 103 y
226 donde radica el polimorfismo C/c y E/e, respectivamente.
estos cuadros clnicos son para antgenos de los

sistemas Kell, Duffy, Kidd y MNS.
2.2. Anemias Hemolticas Inmunes (AHI)
Las Anemias Hemolticas Inmunes (AHI) se
pueden agrupar segn participen alo o autoanticuerpos (tabla 26-2). Las Anemias Hemolticas
Aloinmunes, son producidas por anticuerpos que
aparecen en una persona que se expone a antgenos
encontrados en la misma especie, pero que no estn
presentes en sus propias clulas. Por su parte las
Anemias Hemolticas Autoimunes se producen por
alteraciones del sistema inmune que inducen la
formacin de autoanticuerpos (ver captulo 23).
441
Sin ttulo-2
441
5/26/06, 10:26 AM
al antgeno D del sistema Rh, dado que los

hemates fetales Rh positivos, ABO incompatibles, seran rpidamente hemolisados en la circulacin materna por accin de los anticuerpos naturales, antes que el antgeno D estimule al sistema inmune materno.
El neonato que sufre EHRN presenta anemia,
ictericia y hepatoesplenomegalia; el grado de ictericia se correlaciona con la severidad de anemia.
El diagnstico se basa en la deteccin prenatal de anticuerpos maternos mediante la prueba
de antiglobulina indirecta (PAI) Estudios de ultrasonido (ecografas) y el nivel de bilirrubina en
lquido amnitico pueden ayudar a predecir la severidad de la enfermedad y a orientar el manejo
obsttrico de las embarazadas. En la etapa
postnatal, el estudio de sangre de cordn permite
detectar la anemia, reticulocitosis y presencia de
eritroblastos; la prueba de antiglobulina directa
(PAD) suele ser positiva.
El tratamiento en el perodo prenatal, si no
es posible interrumpir el embarazo, es la transfusin intrauterina siempre que se cumplan determinadas condiciones. En el perodo postnatal, se
utiliza la fototerapia si la hiperbilirrubinemia es
leve y en casos ms graves se recurre al recambio
sanguneo.
Para la prevencin de la EHRN inducida por
anti-D, existen protocolos de profilaxis bien establecidos que consisten en la inmunizacin pasiva
de madres Rh negativas, con anticuerpos anti-D
comerciales (Rho IgG), cuyo objetivo es prevenir
que clulas Rh positivas del feto o recin nacido
estimule la respuesta inmune materna y que los
anticuerpos formados ocasionen problemas en
embarazos futuros.
Tabla 26-2. Clasificacin de la Anemias

Hemolticas Inmunes
Anemias hemolticas aloinmunes
Enfermedad hemoltica del recin nacido
Reaccin hemoltica transfusional
Anemias hemolticas autoinmunes
Por anticuerpos calientes
Primaria
Secundaria
Sndromes linfoproliferativos
Mesenquimopatas
Infecciones virales
Enfermedades inmunolgicas
Por anticuerpos fros
Enfermedad de las aglutininas fras
Hemoglobinuria paroxstica a frigori
Inducidas por drogas
2.2.1. Anemias Hemolticas Aloinmunes

Dos son las AHI cuyo mecanismo est
mediado por aloanticuerpos, la Enfermedad
Hemoltica del Recin Nacido (EHRN) y las
Reacciones Hemolticas Transfusionales.
a) Enfermedad hemoltica del recin nacido
La EHRN es una condicin en la cual los glbulos rojos del feto o del neonato son destruidos
por anticuerpos maternos, dirigidos contra un
antgeno presente en sus glbulos rojos, el cual es
heredado del padre. Solamente los anticuerpos IgG
son transportados activamente a travs de la
placenta y por lo tanto capaces de sensibilizar los
glbulos rojos fetales que posteriormente son retirados por el sistema fagoctico mononuclear
(SFM).
Los aloanticuerpos maternos pueden haberse
generado por embarazos o transfusiones previas.
La incompatibilidad ABO es la causa ms
comn de EHRN, la que usualmente es leve, mientras que el anti-D es el anticuerpo asociado con la
mayora de los casos de EHRN moderada a severa. Anticuerpos con otras especificidades tambin
pueden causar esta enfermedad. Sin embargo,
cuando la madre es ABO incompatible con el feto,
disminuye la incidencia de inmunizacin frente
b) Reaccin hemoltica transfusional

Una reaccin hemoltica transfusional ocurre con posterioridad a la transfusin de glbulos
rojos portadores de antgenos extraos para el sistema inmune del receptor, frente a los cuales ste
est aloinmunizado. De acuerdo al momento de
aparicin de los sntomas, stas se clasifican como
inmediatas o tardas.
Reaccin hemoltica transfusional inmediata.
Este tipo de reacciones ocurre cuando los
anticuerpos estn presentes en el plasma del paciente en ttulos altos. La causa ms comn de este
tipo de reaccin es la incompatibilidad ABO, la
que ocasiona el 86% de las muertes por reaccio-
442
Sin ttulo-2
442
5/26/06, 10:26 AM
nes hemolticas transfusionales. Tambin pueden

estar involucrados anticuerpos con especificidades
anti-Kell, anti-Jka y anti-Fya.
Los anticuerpos que ocasionan estas reacciones son principalmente de clase IgM, ellos reaccionan con su antgeno especfico activando el sistema del complemento (ver captulo 18), la coagulacin y el sistema de las cininas. La activacin
del complemento induce la formacin el complejo de ataque a membrana (C5b6789) que provoca
hemlisis intravascular en forma inmediata, con
liberacin de hemoglobina, estroma y enzimas
eritrocitarias. Producto de la activacin del complemento tambin se libera C3a y C5a que actan
como potentes anafilotoxinas, responsables de los
sntomas de fiebre, escalofros, hipotensin y
shock. El estroma eritrocitario contiene sustancias
tromboplsticas que activan la cascada de la coagulacin induciendo Coagulacin Intravascular
Diseminada (CID). El complejo antgeno-anticuerpo formado, tambin activa el sistema de las
cininas, liberando bradicinina, la que provoca
hipotensin y liberacin de catecolaminas que
causan vasoconstriccin en rganos tales como el
rin; esto sumado a la hipotensin y a la CID,
inducen un cuadro de insuficiencia renal aguda.
gran importancia en su prevencin, considerar el

historial transfusional, de trasplantes y de embarazos del paciente.
2.2.2. Anemias Hemolticas Autoinmunes
Una de las formas ms usadas en la clasificacin de las Anemias Hemolticas Autoinmunes
(AHAI) es de acuerdo a la temperatura en que actan los anticuerpos involucrados; as se distinguen las AHAI por anticuerpos calientes y AHAI
por anticuerpos fros. Adicionalmente se incluyen
en este grupo las AHAI inducidas por frmacos.
a) AHAI por anticuerpos calientes
El 70-75% de las anemias hemolticas
autoinmunes son provocadas por anticuerpos calientes; se presentan a cualquier edad y afectan
con mayor frecuencia a las mujeres. De ellas
aproximadamente el 30% son de origen idioptico
y el 70% restante son secundarias a otras enfermedades, tales como sndromes linfoproliferativos, enfermedades autoinmunes e infecciones
(tabla 26-2).
La destruccin eritrocitaria ocurre como consecuencia de la fagocitosis de los glbulos rojos
sensibilizados con autoanticuerpos IgG. Los responsables de la eritrofagocitosis son macrfagos
(presentan receptores para Fc de IgG: FcR), principalmente esplnicos; por ello la hemlisis es de
tipo extravascular y como consecuencia se observa hiperbilirrubinemia.
La PAD suele ser positiva en la mayora de
los casos, confirmando la presencia de glbulos
rojos sensibilizados con IgG y en algunos casos,
adicionalmente, con fracciones del complemento; la PAI puede ser positiva cuando hay una
hemlisis activa.
En caso de existir una enfermedad asociada
a la AHAI, el tratamiento de sta puede revertir el
proceso hemoltico. Adems se requiere el uso de
corticoesteroides, los que actan inhibiendo la sntesis de anticuerpos y la fagocitosis de hemates.
La esplenectoma est indicada en casos de fracaso a otros tratamientos.
Reaccin hemoltica transfusional tarda. Las

reacciones hemolticas transfusionales tardas son
ms leves que las inmediatas. Se producen cuando el ttulo de los aloanticuerpos presentes en el
suero es bajo no siendo detectados por las pruebas pre-transfusionales, luego de la transfusin de
sangre incompatible la respuesta anamnstica hace
aumentar rpidamente los ttulos del anticuerpo.
Los glbulos rojos transfundidos sufren hemlisis
extravascular porque se sensibilizan con anticuerpos IgG o fracciones del complemento, siendo secuestrados por los macrfagos hepticos o
esplnicos. Los anticuerpos estn dirigidos contra antgenos de los sistemas Kell, Rh (D, E y c),
Duffy y Kidd. Este tipo de reacciones transfusionales se presenta con una incidencia de 1 en
3.200 transfusiones.
Los pacientes pueden presentar fiebre moderada con escalofros, ictericia leve, eventualmente se puede presentar hemoglobinemia y
hemoglobinuria.
Para el diagnstico es necesario una muestra
postransfusional en la cual se detectar anemia,
hiperbilirrubinemia y una PAD positiva.
Debido a que este tipo de reacciones ocurre
por una respuesta inmune secundaria, resulta de
b) AHAI por anticuerpos fros

Entre las AHAI por anticuerpos fros se reconocen dos cuadros clnicos, Enfermedad de las
aglutininas fras y Hemoglobinuria paroxstica a
frigori.
443
Sin ttulo-2
443
5/26/06, 10:26 AM
Enfermedad de las aglutininas fras. La enfermedad por aglutininas fras representa aproximadamente el 15% de las AHAI. Esta anemia puede
ser idioptica o secundaria a infeccin por
Mycoplasma pneumoniae o Virus de Epstein Barr
(Mononucleosis infecciosa). La especificidad de
estas crioaglutininas es anti-I en un 90% y anti-i
en un 8%.
En su patogenia participan anticuerpos IgM,
que a temperaturas entre 10 y 30C se unen a los
glbulos rojos e inducen hemlisis (principalmente
intravascular) mediada por complemento. Los
episodios de hemlisis ocurren despus de la exposicin a temperaturas bajas que provocan la
aglutinacin de los glbulos rojos con obstruccin
de la circulacin capilar que se manifiesta por una
coloracin azul o roja de las extremidades (fenmeno de Raynaud).
En el laboratorio es posible evidenciar aglutinacin de los glbulos rojos a temperatura ambiente, adems se encuentra positiva la PAD, habitualmente por complemento (ttulo del anticuerpo mayor a 1:1000 a 4C).
En la enfermedad idioptica no hay tratamiento especfico, salvo que el paciente se mantenga en ambiente temperado. Dado que casi la
totalidad de la IgM se encuentra en circulacin,
en caso de ser necesario se realiza plasmafresis.
Cuando el cuadro hemoltico es secundario a otra
enfermedad, generalmente ceder al ser tratada
la patologa de base.
como consecuencia de una reaccin autoinmune

tras la administracin de ciertos frmacos. Las
AHAI inducidas por frmacos representan entre
el 10-20% de las AHAI.
Existen tres mecanismos principales por los
cuales las drogas pueden inducir la formacin de
los anticuerpos asociados a AHAI (figura 26-2).
Complejos inmunes. El frmaco se une a protenas plasmticas y estimula la formacin de un
anticuerpo anti-droga , el complejo inmune formado, se une inespecficamente al glbulo rojo u
otras clulas por su regin Fab conformando un
complejo trimolecular (droga-anticuerpo-antgeno
de membrana) capaz de activar el complemento
con la consiguiente hemlisis intravascular. La
droga interactuara de forma no covalente con
componentes de membrana generando un
neoantgeno que estimulara al sistema inmune.
La primera droga que se relacion con este
mecanismo, tambin llamado "espectador inocente" fue estibofeno, posteriormente tambin se han
descrito otros frmacos, entre ellos: quinidina,
quinina, cefotaxima, clorambucil, clorpromacina,
isoniacida, rifampicina, sulfonamidas y tiazidas.
En el laboratorio se puede encontrar la PAD
positiva y la PAI negativa. En esta ltima situacin la prueba puede ser positiva si se preincuba
el suero del paciente y los hemates, en presencia
de la droga y complemento.
Adsorcin de droga (hapteno). El frmaco o
alguno de sus metabolitos se fija inespecficamente
a la superficie del eritrocito e induce la produccin de anticuerpos IgG anti-droga, los cuales se
unen a los glbulos rojos cubiertos con la droga
para posteriormente ser secuestrados por el SFM.
Este mecanismo se presenta en pacientes que
han recibido altas dosis del frmaco. La droga ms
caracterstica de este mecanismo es la penicilina;
se ha descrito tambin en cefalosporinas y
tetraciclinas.
Esta anemia cursa con la PAD positiva y la
PAI negativa. Es posible confirmar la presencia
del autoanticuerpo si los hemates a emplear se
sensibilizan con la droga, antes de hacerlos reaccionar con el suero del paciente.
Hemoglobinuria paroxstica a frigori. Esta enfermedad cuya incidencia no supera el 2%, se produce por la unin a los eritrocitos, despus de la
exposicin al fro, del autoanticuerpo de DonathLandsteiner, una autohemolisina bifsica de clase
IgG. Los hemates sensibilizados fijan complemento, sistema que se activa al aumentar la temperatura en la circulacin general, provocando
hemlisis intravascular. La especificidad principal de los autoanticuerpos es anti-P, pero tambin
se han descrito especificidades anti-i y anti-Pr.
Esta enfermedad puede tener una etiologa
idioptica y secundarios a infecciones virales en
nios y a sfilis no tratada en adultos.
La prueba de Donath-Landsteiner es positiva
y permite pesquisar la hemolisina bifsica. La PAD
es positiva y la PAI puede serlo si se realiza a 4C.
Formacin de autoanticuerpos. En este mecanismo la droga induce la formacin de

autoanticuerpos IgG que reconocen antgenos
eritrocitarios (principalmente antgenos del sistema Rh), sin necesidad de que el frmaco est uni-
c) AHAI inducida por frmacos

Este tipo de anemias hemolticas se produce
444
Sin ttulo-2
444
5/26/06, 10:26 AM
Figura 26-2. Mecanismos de las Anemias hemolticas autoinmunes (AHAI) inducidas por frmacos. Se han descrito tres
mecanismos por los cuales los frmacos pueden inducir AHAI: Tipo complejos inmunes, Adsorcin de drogas (hapteno) y Formacin de autoanticuerpos. Las drogas ms representativas de cada mecanismo son estibofeno (droga a), penicilina (droga b) y alfametildopa (droga c), respectivamente.
inmunoglobulinas. Avances en el estudio de laboratorio han llevado en los ltimos 15 aos a una
explosin de informacin nueva acerca de estas
patologas y al reconocimiento que las plaquetas
pueden ser destruidas por aloanticuerpos,
autoanticuerpos y probablemente complejos inmunes en diferentes situaciones patolgicas.
Las plaquetas son elementos celulares
anucleados que se originan por fragmentacin del
citoplasma de los megacariocitos en la mdula
sea, desde donde pasan a la circulacin y viven
por 8 a 10 das antes de ser removidas por el SFM.
Miden entre 1,5 a 3 m de dimetro y en reposo
presentan una forma discoide. Las plaquetas juegan un papel fundamental en las etapas iniciales
del proceso hemosttico (hemostasia primaria);
do a los hemates. La droga ms representativa de

este mecanismo es la alfa-metildopa, pero tambin se incluyen levadopa, procainamida y drogas antiinflamatorias no esteroidales.
En el laboratorio es posible encontrar la PAD
y la PAI positivas.
3. TROMBOCITOPENIAS INMUNES
Desde 1950 se sabe que las plaquetas pueden ser destruidas por procesos de tipo
inmunolgico. Sin embargo, el progreso para entender la patogenia de las trombocitopenias inmunes se vio retardado por problemas metodolgicos
inherentes al estudio de la interaccin plaquetas-
445
Sin ttulo-2
445
5/26/06, 10:26 AM
esta funcin la cumplen gracias a las propiedades

de adhesin, agregacin, secrecin del contenido
de sus grnulos y expresin de superficie
procoagulante. La ocurrencia coordinada y regulada de estos procesos determina la formacin del
tapn plaquetario sobre el cual actan los factores
plasmticos de la coagulacin para formar el tapn hemosttico o trombo.
agregacin plaquetaria mediada por fibringeno.

El complejo heterodimrico GPIIb-IIIa
(CD41-CD61), es la protena ms abundante de la
superficie de las plaquetas, representando alrededor del 15% de la masa proteica de la membrana
con alrededor de 40.000-50.000 copias expresadas por las plaquetas normales en reposo. Debido
a que su activacin la transforma en el receptor de
fibringeno, su papel en la agregacin plaquetaria
es fundamental.
Adems de las integrinas, las plaquetas poseen otro receptor glicoproteico de membrana, la
GPIb-IX (CD42b.c-CD42a), que pertenece a la
familia de "protenas ricas en leucina". Este complejo constituye el receptor para el factor von
Willebrand (FvW), considerado el mayor responsable de la unin de las plaquetas a la matriz
extracelular. La GPIb-IX en la membrana
plaquetaria forma un complejo con la GPV; cada
plaqueta contiene 20.000-30.000 molculas del
complejo en su superficie.
3.1. Sistemas antignicos de las plaquetas

La membrana plaquetaria presenta glicoprotenas (GP) que son fundamentales en los aspectos inmunolgicos asociados a las plaquetas, ya
sea como receptores inmunes especficos o como
blancos altamente inmunognicos. Estas glicoprotenas son a su vez receptores funcionales que participan en las reacciones de adhesin y agregacin durante el proceso hemosttico. En la tabla
26-3 se muestran las principales glicoprotenas y
sus caractersticas.
Tabla 26-3. Caractersticas de las glicoprotenas de membrana de las plaquetas

Glicoprotena
Integrina
Peso molecular
no reducido (kDa)
Funcin en las plaquetas
Ia/IIa
21
150/130
Receptor de colgeno
Ic/IIa
Ic/IIa
5 1
6 1
148/130
148/130
Receptor de laminina
IIb/IIIa
IIb/3
145/95
Receptor de fibringeno, vitronectina,

Factor von Willebrand, fibronectina
Ib/IX
160/17
Receptor del factor von Willebrand
IV
85
Receptor de colgeno y trombospondina
82
Sustrato de trombina
VI
58
Principal receptor de colgeno
Al menos cinco glicoprotenas pertenecen a

la familia de molculas de adhesin Integrinas: el
receptor de colgeno Ia-IIa, el receptor de
fibronectina Ic-IIa, el receptor de laminina Ic'-IIa,
el receptor de vitronectina VnR-IIIa y el receptor
activacin-dependiente IIb-IIIa, responsable de la
El complejo GPIa-IIa (CD49b-CD29), formado por cadenas nicas de 167 y 157 kDa, respectivamente, ha sido demostrado como uno de
los receptores que median la interaccin de las
plaquetas con el colgeno, a travs de la GPla.
Las glicoprotenas de la membrana
446
Sin ttulo-2
446
5/26/06, 10:26 AM
plaquetaria han demostrado ser estructuras altamente polimrficas, por lo que aparte de ser importantes receptores fisiolgicos, constituyen estructuras en las que residen sistemas antignicos
especficos.
plaquetarios especficos se les asign un nombre basado en aquel del paciente en el cual fue
descrito por primera vez. A medida que aument el nmero de antisueros descritos, la confusin de nombres hizo necesario adoptar un sistema simplificado el cual fue propuesto por el
ICSH/ISBT (International Committee for
Standarization in Hematology/International
Society of Blood Transfusion). En este sistema,
a cada aloantgeno se le asign un nmero HPA
(Human Platelet Antigen) en orden
cronolgico de descripcin. Cada sistema HPA
representa un polimorfismo biallico debido a
una sustitucin de un par de bases en el gen y
como consecuencia una diferencia de un
aminocido en la protena madura. La anotacin
a corresponde siempre al alelo de mayor frecuencia y la w representa una asignacin
provisoria hasta que se describan los dos alelos
del sistema.
Los antgenos plaquetarios pueden ser divididos

en dos grupos: (a) Aloantgenos compartidos con
otras clulas sanguneas (Ej. Antgenos de los sistemas ABH, Lewis), y clulas de otros tejidos (molculas HLA clase I; HLA: Human Leukocyte
Antigen) y (b) Aloantgenos plaquetarios especficos.
Aloantgenos compartidos con otras clulas
sanguneas
Antgenos ABH, Lewis, 1 y P. Los antgenos de
grupo sanguneo A y B han sido demostrados en
plaquetas, por serologa convencional, por ms
de 50 aos. Su importancia clnica se circunscribe
a un efecto muy discreto sobre la recuperacin
de las plaquetas en el caso de transfusin de
plaquetas ABO incompatibles. Se ha descrito
tambin que la administracin crnica de
plaquetas ABO incompatibles se asocia a mayor
tasa de refractariedad a la transfusin de
plaquetas.
Caractersticas. La tabla 26-4 muestra los

antgenos plaquetarios especficos descritos hasta
ahora, su localizacin y base molecular. La GP
ms polimrfica es la GPIIIa, en la cual se han
descrito al menos 8 antgenos diferentes.
La figura 26-3 muestra un esquema de las
GPIIb-IIIa y la GPIb-IX, en las que se indica la
ubicacin aproximada de los HPA ms importantes y los sectores donde se han ubicado
autoantgenos.
Antgenos HLA. Las plaquetas poseen molculas HLA clase I, pero no clase II. Cerca del 73%
del total de los antgenos HLA-A y B presentes en
sangre total, estn contenidos en las plaquetas.
stas contienen 10.000-20.000 molculas/clula,
cifra inferior a la encontrada en linfocitos
(>100.000/clula). Los antgenos HLA-C, generalmente se expresan dbilmente. Estudios muestran que la mayor parte de los antgenos HLA clase I son sintetizados endgenamente y son constituyentes de la membrana; pero esto no excluye la
posibilidad que una pequea proporcin de
antgeno HLA sea adsorbida pasivamente por la
superficie plaquetaria desde el plasma. Los
antgenos HLA sobre la superficie de las plaquetas
constituyen los blancos principales de los
aloanticuerpos encontrados en pacientes
politransfundidos, lo que se define como
refractariedad inmune a la transfusin de
plaquetas.
3.2. Trombocitopenias inmunes

Las plaquetas pueden ser destruidas por mecanismos inmunes en los que pueden participar
aloanticuerpos, autoanticuerpos, anticuerpos dependientes de droga y posiblemente complejos
inmunes. El denominador comn de todos estos
procesos es una remocin acelerada de las
plaquetas de la circulacin y acortamiento de la
supervivencia, que se traduce en una disminucin
del nmero de plaquetas circulantes (trombocitopenia) cuando sobrepasa la capacidad de la
mdula sea de responder a la mayor demanda.
En la tabla 26-5 se muestra los diferentes tipos de
trombocitopenias inmunes, clasificadas segn el
tipo de anticuerpo responsable.
Aloantgenos plaquetarios especficos

Nomenclatura. Histricamente, a los antgenos
447
Sin ttulo-2
447
5/26/06, 10:26 AM
Tabla 26-4. Caractersticas de los aloantgenos plaquetarios especficos

Frecuencia
fenotpica (%)*
Sistema
Alelos
Sinnimos
Localizacin
Base molecular
HPA-1
HPA-1a
HPA-1b
PlA1, Zwa
PlA2, Zwb
GPIIIa
Leu33Pro33
97.9
28.8
HPA-2
HPA-2a
HPA-2b
Kob, Sibb
Koa, Siba
GPIb
Thre145Met145
99.3
14.6
HPA-3
HPA-3a
HPA-3b
Leka, Baka
Lekb, Bakb
GPIIb
Ile843Ser843
80.9
69.8
HPA-4
HPA-4a
HPA-4b
Pena, Yukb
Penb, Yuka
GPIIIa
Arg143Glu143
> 99.9
< 0.1
HPA-5
HPA-5a
HPA-5b
Brb
Bra
GPIa
Gln505Lys505
99.0
19.7
HPA-6w
HPA-6bw
Caa, Tua
GPIIIa
Arg489Glu489
2.4
HPA-7w
HPA-7bw
Mo
GPIIIa
Pro407Ala407
0.2
GPIIIa
GPIIb
GPIIIa
GPIIIa
GIb
GPIa
Arg636Glu636
Val837Met837
Arg62Glu62
Arg633His633
Gly15Gln15
Thre799Met799
HPA-8w
HPA-9w
HPA-10
HPA-8bw Sr
HPA-9bw Maxa
HPA-10bw Laa
Groa
Iya
Sita
< 0.01
0.6
< 1.6
< 0.25
0.4
0.25
*Frecuencia fenotpica de la poblacin caucsica.
Figura 26.3. Esquema de las GPIIb-IIIa, GPIb-IX y GPIa-IIa. Se muestra los principales HPA (Human Platelet Antigen) y
las regiones reconocidas como autoantgenos.
448
Sin ttulo-2
448
5/26/06, 10:26 AM
equimosis) y sangrado mucoso que se manifiesta

en las primeras horas de vida. En la mayora de
los casos el PAIN es una enfermedad benigna
autolimitada, que remite espontneamente entre
2-15 das; sin embargo, en casos graves puede
observarse hemorragia visceral e intracraneana.
Esta ltima complicacin se puede presentar en
forma antenatal o perinatal en un 10 a 20% de los
pacientes con PAIN, lo que puede causar dao
neurolgico e incluso la muerte.
Tabla 26-5. Trombocitopenias inmunes

Trombocitopenias aloinmunes
Prpura aloinmune neonatal
Prpura post-transfusional
Trombocitopenias autoinmunes
Prpura trombocitopnico inmune primario
Agudo
Crnico
Patogenia. El PAIN es causado por la transferencia materno-fetal de aloanticuerpos especficos

para los aloantgenos plaquetarios HPA-1b, HPA2a, HPA-3a, HPA-3b, HPA-4a, HP-A4b, HPA-5a,
HPA-5b y los antgenos de baja frecuencia HPA6w a HPA-10, Groa, Iya y Sita. Alrededor del 50%
de los casos de PAIN en las poblaciones caucsicas
son el resultado de una incompatibilidad en el sistema HPA-1; incompatibilidad que compromete
el sistema HPA-5 es la segunda causa en estas
poblaciones. A pesar que es muy frecuente encontrar anticuerpos anti-HLA en las embarazadas, su
papel en la patogenia del PAIN es debatido y solamente 2 casos que pueden corresponder a PAIN
secundario a anticuerpos anti-HLA-A2 han sido
descritos.
Trombocitopenias inmunes secundarias

Enfermedades autoinmunes
Generalizadas (Ej. Lupus Eritematoso Sistmico)
rgano especfico (Ej. Tiroiditis)
Enfermedades linfoproliferativas
Leucemia linftica crnica
Linfomas
Mieloma mltiple
Tumores slidos
Infeccin por HIV
Post-transplante de mdula sea
Infecciones virales
Frmacos
Evaluacin de laboratorio. En el diagnstico

biolgico de las trombocitopenias inmunes en general, se utilizan pruebas comunes a toda
trombocitopenia y mtodos que permiten estudiar
el carcter inmunolgico de su patogenia:

Los aloantgenos plaquetarios especficos y
polimorfismos de las glicoprotenas de membrana juegan un papel clave en la patogenia de diferentes entidades clnicas como el Prpura
aloinmune neonatal, Prpura postransfusional y
Refractariedad a la transfusin de plaquetas.
a) Pruebas generales. El recuento de plaquetas,

hemograma y mielograma se usa al iniciar la investigacin diagnstica de la mayora de las
trombocitopenias. El estudio de sobrevida
plaquetaria, de uso excepcional en clnica, requiere
marcar in vitro plaquetas del paciente con 51Cr o
111
In; permite estudiar la sobrevida plaquetaria y el
o los rganos en que las plaquetas son secuestradas.
Prpura aloinmune neonatal

El Prpura aloinmune neonatal (PAIN) es
una incompatibilidad feto-materna causada por
aloinmunizacin de la madre a antgenos
plaquetarios fetales. Su incidencia es de alrededor de 1:2.000 a 1:3.000 embarazos y a diferencia
de la enfermedad hemoltica del recin nacido,
puede presentarse hasta en un 30% de los casos
durante el primer embarazo. El PAIN se presenta
tpicamente como una trombocitopenia aislada en
un recin nacido (RN) aparentemente sano. En
aquellos RN con trombocitopenia ms profunda
se puede encontrar sangrado cutneo (petequias y
b) Estudio inmunolgico. Entre los mtodos

inmunolgicos ms importantes para el estudio
de las trombocitopenias inmunes estn aquellos
que permiten pesquisar anticuerpos antiplaquetarios sin estudio de especificidad (IgG
asociada a plaquetas y anticuerpos antiplaquetarios circulantes) y los que s permiten estudiar la especificidad de dichos anticuerpos. A
continuacin se describen los principios de los
449
Sin ttulo-2
449
5/26/06, 10:26 AM
mtodos ms usados:
vadas para liberarlas de anticuerpos que contiene

el plasma. El uso de altas dosis de IgG endovenosa,
puede servir como tratamiento de emergencia si
no hay plaquetas disponibles. El tratamiento puede ser pre y/o postnatal; en el primer caso la transfusin de plaquetas es intrauterina.
IgG asociada a plaquetas y anticuerpos

antiplaquetarios circulantes. El estudio
inmunolgico inicial tiene como objetivo demostrar IgG asociada a las plaquetas (PAIgG)
o anticuerpos antiplaquetarios circulantes
(AcAP). Para medir la PAIgG existe un gran
nmero de tcnicas que permiten cuantificar
la IgG presente en la superficie plaquetaria, o
la IgG total si las plaquetas son previamente
solubilizadas. Para la determinacin de la
PAIgG de superficie, lo ms frecuente es utilizar pruebas de unin directa de un anticuerpo anti-IgG humana marcado con radioistopo enzima o fluorescena; la cantidad de IgG
asociada a las plaquetas es directamente proporcional a la cantidad de ligando marcado
que permanece unido a las plaquetas. Para la
pesquisa de AcAP se utilizan, los mismos
mtodos en forma indirecta.
Prpura Post-transfusional
El Prpura Post-transfusional (PPT) se caracteriza por trombocitopenia aguda, grave que
ocurre aproximadamente 5-10 das despus de una
transfusin sangunea. Su incidencia se desconoce, aunque es una condicin muy poco frecuente.
La transfusin que gatilla esta condicin puede
ser de cualquier hemocomponente y habitualmente
se acompaa de una reaccin transfusional febril.
En el suero del paciente se encuentran potentes
anticuerpos antiplaquetarios, sobre el 80% de los
casos con especificidad anti-HPA-1a. La patogenia
es desconocida pero se han propuesto tres teoras
para explicar la destruccin de las plaquetas
autlogas gatillada por la transfusin: (a) unin
de antgeno soluble presente en el producto sanguneo (b) unin de complejo inmune compuesto
por aloantgeno/aloanticuerpo y (c) produccin de
autoanticuerpos por reactividad cruzada. Para el
diagnstico se debe demostrar el anticuerpo en el
suero del paciente; el hallazgo de una trombocitopenia grave y anticuerpos antiplaquetarios especficos, especialmente anti-HPA-1a, hace muy
probable el diagnstico de PPT.
Mtodos para estudio de especificidad

antignica. Estos mtodos son capaces de
identificar la glicoprotena plaquetaria especfica a la que se une el anticuerpo, pero no
cuantifica la cantidad de IgG unida. Se han
descrito varios mtodos: Western Blot
("Immunoblotting"), Inmunoprecipitacin y
las tcnicas de ELISA con captura de
antgeno. Estas ltimas son los que se utilizan ms ampliamente en el estudio de especificidad antignica de las citopenias inmunes de distinta etiologa.
Refractariedad a la transfusin de plaquetas
En casos con sospecha clnica de PAIN el

estudio inicial de laboratorio debe incluir la pesquisa de anticuerpos antiplaquetarios, idealmente
usando plaquetas del padre del RN para incluir
antgenos de baja frecuencia. El hallazgo de
anticuerpos antiplaquetarios obliga a su identificacin, para lo cual se utilizan paneles de plaquetas
tipificadas en ensayos de ELISA con captura de
antgenos. La incompatibilidad antignica se demuestra mediante tipificacin de los antgenos
plaquetarios, lo que actualmente se hace mediante biologa molecular.
La Refractariedad a la transfusin de
plaquetas (RTP) se define como un aumento insuficiente e inesperado del recuento de plaquetas
post-transfusional. En la mayora de los casos la
remocin prematura de las plaquetas transfundidas
obedece a causas no inmunes tales como septicemia, hemorragia activa, uso de drogas, esplenomegalia y edad de las plaquetas transfundidas.
Cuando la causa de la RTP es una aloinmunizacin,
en la mayora de los casos (>75%) los anticuerpos
reaccionan con determinantes expresados por las
molculas HLA presentes sobre la superficie de
las plaquetas. En estudios prospectivos no ms del
10% de los casos de RTP ha sido el resultado de
anticuerpos antiplaquetarios especficos. El diagnstico de esta condicin se basa en la demostracin de estos anticuerpos en el suero del paciente
(ver en punto 3.2.1: Evaluacin de laboratorio).
Tratamiento. Al igual que en otras incompatibilidades maternofetales en el PAIN, se debe proporcionar plaquetas antgeno-negativas de la madre o de donantes fenotipificados negativos. Las
plaquetas usadas en la transfusin deben ser la-
450
Sin ttulo-2
450
5/26/06, 10:26 AM
do tcnicas de desarrollo relativamente reciente,

en el plasma o plaquetas de los pacientes con PTI
crnico se pueden encontrar anticuerpos de clase
IgG o IgM dirigidos contra glicoprotenas de membrana entre las que se incluye: GPIIb/IIIa, GPIb/
IX, GPIa/IIa, GPIV y otras. Estas tcnicas se basan en el principio de captura de antgeno en la
cual un anticuerpo monoclonal anti-GP es inmovilizado en una fase slida al cual se agrega un
lisado de las plaquetas en estudio o plaquetas normales sensibilizadas con el autoanticuerpo. Esto
posibilita la captura del antgeno y cualquier
inmunoglobulina (Ig) unida a ste, la que puede
ser detectada por una anti-Ig adecuadamente marcada.

Prpura trombocitopnico autoinmune primario
El Prpura trombocitopnico autoinmune primario (PTI) es una de las causas ms frecuentes
de trombocitopenia aislada encontrada en la prctica mdica. La enfermedad es causada por
autoanticuerpos que se unen a estructuras de la
membrana plaquetaria, acortando su supervivencia. La presentacin clnica es muy variable desde casos agudos, muy sintomticos a hallazgos
incidentales de trombocitopenia asintomtica.
Debido a sus diferencias clnicas, de manejo y
posiblemente fisiopatolgicas, se discutir en forma separada el PTI crnico del adulto, del PTI
agudo, cuadro este ltimo que se presenta, fundamentalmente, en nios.
Tratamiento. El objetivo del tratamiento especfico es restaurar el recuento de plaquetas, o al

menos alcanzar niveles que aseguren una
hemostasia adecuada. Esteroides, como prednisona oral, seguido de esplenectoma en caso de
respuesta insatisfactoria a los esteroides, forma
parte del manejo inicial estndar del PTI crnico,
con el que se puede alcanzar tasa de remisin cercanas al 80%. En casos de refractariedad a la
esplenectoma y esteroides, existe una serie de tratamientos considerados de segunda lnea que incluyen: IgG endovenosa a altas dosis, IgG anti-D,
danazol e inmunosupresores. Todos estos tratamientos son de alto costo o se acompaan de importantes efectos colaterales.
La transfusin de concentrados plaquetarios
en las trombocitopenias inmunes, en general, debe
ser excepcional, reservndose para casos de hemorragias por trombocitopenias graves, dado que
el efecto sustitutivo es muy escaso por la rpida
destruccin de las plaquetas transfundidas.
a) PTI crnico del adulto

Cuadro clnico. El PTI del adulto se presenta ms
frecuentemente en mujeres entre la 3 y 4 dcada de la vida, aunque puede ocurrir a cualquier
edad en hombres y mujeres. La manifestacin
clnica ms caracterstica es el prpura, trmino
que denota el sangrado de piel y mucosas.
Patogenia. En el PTI crnico las plaquetas son
sensibilizadas por autoanticuerpos, predominantemente de clase IgG, con menor frecuencia IgM
y ocasionalmente IgA. La destruccin plaquetaria
por autoanticuerpos IgG es similar a la fagocitosis
extravascular (esplnica) de glbulos rojos, mediada por IgG. El bazo es tambin un importante
productor de autoanticuerpos antiplaquetarios. A
diferencia de las anemias hemolticas autoinmunes, el mecanismo de accin de los autoanticuerpos
de clase IgM es poco claro, as como la importancia relativa del complemento. Se ha asumido que
la destruccin plaquetaria acelerada en el prpura
trombocitopnico autoinmune, se acompaa de un
incremento compensatorio en la produccin de
plaquetas por los megacariocitos. Sin embargo,
estudios cinticos sugieren que tambin la produccin de plaquetas puede estar disminuida, especialmente en los pacientes ms afectados.
PTI secundario. En alrededor de un 40% de los

casos de PTI crnico del adulto ste se asocia a
otra enfermedad. Las patologas ms frecuentemente asociadas a PTI son el Lupus Eritematoso
Sistmico, enfermedades linfoproliferativas, infeccin por virus de la inmunodeficiencia humana,
infecciones y ms raramente otras condiciones
como el hipertiroidismo, sarcoidosis, miastenia
gravis, etc. La causa de la trombocitopenia se ha
atribuido en estos casos a la accin de autoanticuerpos o complejos inmunes. La diferencia ms
importante con el PTI crnico primario se encuentra en el tratamiento, ya que en el PTI secundario
el manejo de la enfermedad de base se acompaa
de mejora en el recuento de plaquetas.
Evaluacin de laboratorio. Las pruebas de laboratorio que se utiliza en el estudio de trombocitopenias autoinmunes son bsicamente las mismas
descritas en el punto 3.2.1. Brevemente, utilizan-
451
Sin ttulo-2
451
5/26/06, 10:26 AM
b) PTI agudo del nio. El PTI en los nios es

habitualmente una enfermedad autolimitada que
se presenta comnmente con una historia corta de
sangrado mucocutneo en nios de 2 a 10 aos de
edad, de cualquier sexo. La incidencia es de alrededor de 1 caso por 100.000 nios. Es muy frecuente el antecedente de una infeccin viral reciente o vacunacin.
se presentan como PTI agudo continan con

trombocitopenia despus de los 6 meses de iniciado el cuadro, catalogndose en estos casos como
un cuadro de PTI crnico similar al del adulto.
Trombocitopenias inmunes inducidas por
frmacos. La aparicin de trombocitopenia grave asociada al uso de algn frmaco, es una complicacin reconocida desde hace ms de 100 aos.
Muchas drogas (ms de cien) han sido implicadas
en la patogenia de la trombocitopenia inducida por
frmacos, siendo la quinina y la quinidina las ms
frecuentemente reportadas y estudiadas. Los
anticuerpos asociados con esta condicin generalmente requieren la presencia de la droga soluble
para reaccionar con estructuras de la membrana
plaquetaria. Estudios recientes han documentado
eptopos especficos para la unin de anticuerpos
dependientes de droga en la GPIb-IX, GPIIb-IIIa
y la molcula de adhesin celular de endotelio y
plaquetas (PECAM-1). Ciertas drogas (penicilinas, cefalosporinas), se unen covalentemente a la
membrana plaquetaria in vivo y estimulan la produccin de anticuerpos dependientes de hapteno.
En otro grupo de pacientes se forman verdaderos
autoanticuerpos que se hacen independientes de
la droga (metildopa). Aunque las drogas u otras
molculas pequeas pueden conjugarse a protenas in vivo, lo que puede inducir una respuesta
inmune, existe muy escasa informacin que explique la perturbacin del sistema inmune que lleva
a la produccin de autoanticuerpos dependientes
de un frmaco. En cuanto al estudio de laboratorio, la demostracin de los anticuerpos dependientes de droga se puede hacer utilizando las mismas
tcnicas de unin indirecta de una anti-Ig humana, usando plaquetas blanco normales y la droga
apropiada presente en el medio de incubacin. En
muchos casos se puede demostrar las glicoprotenas contra las cuales estn dirigidos los
anticuerpos, mediante el uso de las tcnicas de
ELISA con captura de antgeno, en presencia o
ausencia de la droga implicada. El tratamiento de
la trombocitopenia inducida por frmacos en la
gran mayora de los casos se reduce a la suspensin de la droga responsable, lo que es seguido
por una rpida normalizacin del recuento de
plaquetas.
Patogenia. Debido al distinto curso clnico del PTI

agudo del nio respecto del crnico, se han sugerido mecanismos patognicos diferentes para los
dos sndromes. Hasta ahora, los mecanismos propuestos para el PTI agudo son: (a) interferencia
de un virus con la maduracin de los megacariocitos, (b) reactividad cruzada de anticuerpos
anti-virales con las plaquetas, (c) unin de complejos inmunes virus-antivirus a la superficie
plaquetaria y (d) produccin de un autoanticuerpo
verdadero. De los mecanismos propuestos, el que
tiene mayor base desde el punto de vista experimental, ha sido el que sostiene que en el PTI agudo existira una produccin de autoanticuerpos
plaquetarios verdaderos. Es as como se ha demostrado produccin de IgG por parte de linfocitos
esplnicos de nios con PTI agudo, que se une en
forma especfica a plaquetas. Por otra parte, en el
suero de nios portadores de PTI agudo, se han
descrito anticuerpos que reconocen a la que parece ser la GPV de la membrana plaquetaria. Recientemente se ha demostrado que en un porcentaje alto de casos de PTI infantil, se encuentra un
anticuerpo IgM con especificidad anti-GPIb.
Evaluacin de laboratorio. El estudio de laboratorio del PTI del nio es esencialmente igual al
descrito para el cuadro crnico del adulto; sin
embargo, a pesar de que en la mayora de los casos se encuentra PAIgG elevada y en un 30% de
los casos, anticuerpos antiplaquetarios circulantes, los estudios de especificidad antignica con
ELISAs basados en captura de antgeno, son frecuentemente negativos.
Tratamiento. Sobre el 80% de los nios con
PTI se recuperan en forma espontnea. La hemorragia intracraneana, su complicacin ms grave,
se presenta en menos del 1% de los casos. En los
casos en que est indicado el tratamiento, una combinacin de esteroides y dosis altas de IgG
endovenosa, parece acompaarse de los mejores
resultados.
Aproximadamente un 10% de los nios que
Trombocitopenia inducida por heparina

Aunque en estricto sentido la Trombocitopenia Inducida por Heparina (TIH) es el resul-
452
Sin ttulo-2
452
5/26/06, 10:26 AM
Tratamiento. El tratamiento de la TIH se

circunscribe a la suspensin de la heparina. En
casos seleccionados se pueden utilizar anlogos a
la heparina que no tienen reactividad cruzada con
el anticuerpo.
tado del uso de una droga, su patogenia nica, cuadro clnico y frecuencia de presentacin, hacen necesario considerarla en forma separada. La administracin de heparina endovenosa o subcutnea es
una causa reconocida de trombocitopenia. La frecuencia de esta complicacin vara de 2 a 5% en
diferentes estudios. En la TIH se ha descrito dos
formas: (a) tipo I, por accin directa de la heparina
sobre las plaquetas, que no es mediada
inmunolgicamente y que es habitualmente leve y
(b) tipo II, o inmune, por accin de un
autoanticuerpo antiplaquetario dependiente de
heparina. Lo ms importante de este cuadro es que
los pacientes que presentan una trombocitopenia
profunda asociada al uso de heparina, se complican paradojalmente de fenmenos de trombosis
arterial y menos frecuentemente, venosa.
4. NEUTROPENIAS INMUNES
Los neutrfilos al igual que los hemates y
plaquetas, se originan en la mdula sea a partir
de una clula pluripotencial (ver captulos 3 y 4).
Los neutrfilos maduros (segmentados) representan el mayor porcentaje (55-65%) de leucocitos
sanguneos en los adultos. Tienen como funcin
principal la fagocitosis y destruccin de agentes
infecciosos, proceso que es independiente de la
especificidad de la respuesta inmune. Despus de
permanecer alrededor de 8 horas en circulacin
pasan a los tejidos.
Se entiende por neutropenia la reduccin del
nmero absoluto de neutrfilos en la sangre, valor que puede ser calculado multiplicando el nmero total de leucocitos sanguneos por el porcentaje de neutrfilos (segmentados y baciliformes) obtenido en el recuento diferencial. En general se considera que el lmite normal bajo para
nios y adultos es 1500 neutrfilos/L. Se entiende por neutropenia leve, moderada y grave, 10001500, 500-1000 y <500 neutrfilos/L, respectivamente; clasificacin que se asocia con el riesgo
de presentar infeccin grave. Los sitios ms comunes de infeccin incluyen cavidad oral y
mucosas, piel, y reas perinatal y genital. Los clsicos signos de inflamacin son menos evidentes
en pacientes neutropnicos que en los individuos
que presentan cifras normales o aumentadas de
neutrfilos.
Existen varias causas de neutropenia: (i) Disminucin de produccin por insuficiencia medular
global (ej. Aplasia y Leucemias), (ii) neutropenias
congnitas (ej. Neutropenia cclica), neutropenias
adquiridas (ej. Por infecciones, de tipo nutricional,
Sndrome de Felty, Hiperesplenismo, por activacin del complemento y de origen inmune)
Patogenia. La TIH tipo II se asocia a la presencia

de anticuerpos que estn dirigidos contra el complejo formado entre la heparina y el factor
plaquetario 4 (PF4), una protena bsica, encontrada normalmente en los grnulos alfa de las
plaquetas. Los complejos inmunes formados entre el PF4, la heparina y el anticuerpo, son reconocidos por el receptor FcRIIa de las plaquetas,
lo que induce activacin de las plaquetas, liberacin del contenido de sus grnulos y agregacin.
Simultneamente, los heparinoides presentes sobre la superficie de la clula endotelial unen PF4
y se forma el complejo con el anticuerpo, que resulta en dao de la clula endotelial que se transforma as en una superficie protrombtica.
Evaluacin de laboratorio. El anticuerpo dependiente de heparina se puede demostrar mediante
tcnicas inmunolgicas (ELISA) o funcionales. El
ensayo de ELISA ms ampliamente utilizado se
basa en la fijacin a la fase slida de un complejo
PF4:heparina, sobre el cual se agrega el suero en
estudio. La unin de los anticuerpos al complejo
se demuestra con anti-Ig humana marcada con
enzima. Los ensayos funcionales se basan en la
capacidad que tienen los anticuerpos dependientes de heparina de activar las plaquetas. Con este
fin se ha utilizado la agregacin plaquetaria en
presencia del anticuerpo y heparina o la liberacin de 14C-Serotonina en las mismas condiciones. Recientemente se han desarrollado tcnicas
de citometra de flujo que identifican las
micropartculas liberadas desde las plaquetas durante el proceso de activacin en presencia de
heparina.
4.1. Sistemas antignicos de los neutrfilos

Los neutrfilos presentan antgenos que comparten con otras clulas (ej. molculas HLA) y
antgenos especficos (tabla 24-6). La nomenclatura utilizada para identificar los antgenos especficos de los neutrflos incluye una N (neutrfilo)
seguida de una letra (A, B, C, etc.) que identifica
453
Sin ttulo-2
453
5/26/06, 10:26 AM
los diferentes sistemas antignicos) y un nmero

(1 2) que representa el alelo.
El sistema NB tambin es biallico; los antgenos

NB1 y NB2 residen en una glicoprotena de 5864 kDa -similar a FcRIII- que tambin se une a
la membrana de los neutrfilos a travs de GPI.
El sistema NA se expresa en la glicoprotena

FcRIIIb (CD16) de 50-80 kDa. La glicoprotena,
codificada en el cromosoma 1, posee dos dominios extracelulares del tipo inmunoglobulina y se
une a los fosfolpidos de membrana a travs de la
molcula glicosilfosfatidilinositol (GPI). Existen
alrededor de 20.000 molculas/clula. El sistema
NA es biallico; los antgenos NA1 y NA2 se diferencian en cuatro aminocidos (figura 26-4)
ubicados en el dominio ms distal de la membrana celular.
De los sistemas NC, ND y NE, se tiene menos

informacin que en relacin a los sistemas NA y
NB, y no se han encontrado alelos para los sistemas NC, ND y NE.
4.2. Neutropenias inmunes
En analoga a lo que ocurre con los eritrocitos
y plaquetas, la destruccin inmune de los
neutrfilos puede ser mediada por autoanticuerpos
y aloanticuerpos (tabla 26-7).
Al igual que la anemia y trombocitopenia
aloinmune, la neutropenia aloinmune puede ser
neonatal y postransfusional. La Neutropenia
neonatal aloinmune (NNA), es causada por una
incompatibilidad feto-materna en que estn
involucrados slo los neutrfilos. La incidencia
estimada de NNA es similar a la que se presenta
en el Prpura aloinmune neonatal (PAN), aproximadamente 1-2 de cada 5000 recin nacidos vivos. Al igual que en la eritroblastosis, ocurrira
una isosensibilizacin materna a antgenos heredados del padre y expresados en los neutrfilos
del feto. Se han encontrado leucocitos fetales en
la sangre materna, especialmente durante el primer trimestre y despus del parto. La especifici-
Figura 26-4. Estructura del receptor FcRIIb (CD16). En

la figura se indica el polimorfismo que genera los antgenos
NA1 y NA1.
Tabla 26-6. Sistemas antignicos especficos de los neutrflos

Sistema antignico
Antgeno
Frecuencia
antignica*
NA
NA1
NA2
NA
54
93
nulo
NB
NB1
NB2
92
_
NC
NC1
96
ND
ND1
96
NE
NE1
23
* Poblacin de Estados Unidos
454
Sin ttulo-2
454
5/26/06, 10:26 AM
Tabla 26-7. Clasificacin de las neutropenias

inmunes
4.2.2 Neutropenias autoinmunes

Al igual que en la anemia hemoltica inmune, la tolerancia inmunolgica se puede perder
principalmente por: (a) reaccin inmune cruzada
de un antgeno extrao con un antgeno propio y
(b) disminucin de la actividad supresora de las
clulas T sobre un clon de clulas B (ver captulo
23). Como en otras enfermedades autoinmunes,
la proliferacin de los linfocitos B es clonal.
En la neutropenia autoinmune, los anticuerpos estn dirigidos con mayor frecuencia contra
antgenos del sistema antignico NA. La especificidad anti-NA1 se correlaciona con HLA-DR2.
Tambin se han detectado autoanticuerpos dirigidos contra el complejo glicoproteico de adhesin
CDllb/CD18 y contra actina.
La fagocitosis -por macrfagos de mdula
sea, bazo y otros rganos linfoides- de neutrfilos
sensibilizados con autoanticuerpos, es un importante mecanismo de destruccin de neutrfilos en
la neutropenia autoinmune. Si bien, a diferencia
de los hemates, los granulocitos resisten la accin ltica del complemento, este mecanismo es
importante en la patogenia de la neutropenia, al
aumentar el secuestro por parte de los macrfagos
esplnicos. Los anticuerpos antineutrfilos, adems pueden afectar la funcin de los neutrfilos.
Cuando el antgeno contra el cual est dirigido el autoanticuerpo, tambin est presente en las
clulas mieloides ms inmaduras, la granulopoyesis puede estar marcadamente afectada, lo que
se traduce en una neutropenia habitualmente grave por falta de regeneracin.
Neutropenias por aloanticuerpos

Neutropenia neonatal aloinmune
Neutropenia transfusional aloinmune
Neutropenias por autoanticuerpos
Neutropenias autoinmunes primarias
Neutropenia inmune de la infancia
Neutropenia primaria crnica del adulto
Neutropenias autoinmunes secundarias
Neutropenia secundaria a enfermedades
Neutropenia autoinmune inducida por drogas
dad ms frecuentemente encontrada para los

anticuerpos antineutrfilos ha sido anti-NA1 y
anti-NA2.
A diferencia de la EHRN y en forma similar
al PAN, la NNA puede presentarse en el primer
hijo. La mayora de los pacientes presenta infecciones leves.
La mayora de las Reacciones transfusionales
febriles no hemolticas, se deben a la presencia
de anticuerpos antineutrfilos en el receptor, el que
reacciona contra leucocitos presentes en la sangre
o hemoderivado transfundido. La aloinmunizacin
por antgenos HLA y otros antgenos asociados a
leucocitos -principalmente NAl y NA2- se presentan en pacientes que reciben transfusiones de
granulocitos y plaquetas; especialmente en los
politransfundidos
Neutropenias autoinmunes primarias
Investigacin serolgica de los anticuerpos

antineutrflos
En los nios y adultos, la neutropenia aislada, producto de destruccin aumentada de

neutrfilos, sin asociacin a otra patologa que
pueda explicar el fenmeno, se considera primaria. Frecuentemente estos pacientes presentan
anticuerpos anti-neutrfilos, generalmente IgG. La
Neutropenia inmune de la infancia se presenta
en nios de 3-30 meses, con un promedio de 8
meses. Generalmente los pacientes presentan fiebre e infecciones de piel, odo medio, vas respiratorias o vas urinarias. Al igual que en el PTI
infantil, la neutropenia inmune de la infancia generalmente regresa en forma espontnea. La gran
mayora de los casos de Neutropenia primaria
crnica del adulto se asocia a alteraciones
inmunolgicas o hematolgicas. La mayora de
Los mtodos para estudiar los anticuerpos

antineutrfilos se pueden agrupar en: (i) Mtodos
para pesquisar inmunoglobulina unida a la superficie de los neutrfilos y (ii) Mtodos que
pesquisan el efecto de los anticuerpos antineutrfilos. En el primer caso granulocitos heterlogos
se incuban con suero del paciente y control, y se
cuantifica la unin de los anticuerpos antigranulocitos. Para esto se pueden usar varios mtodos, como son la inmunofluorescencia, citometra
de flujo, enzimainmunoensayos, radioinmunoensayo y protena A estafilocsica. En el segundo
caso se ha usado aglutinacin, opsonizacin y
citotoxicidad.
455
Sin ttulo-2
455
5/26/06, 10:26 AM
los pacientes son mujeres y presentan celularidad

normal o aumentada en la mdula sea.
Bergeron, D., Adams, S., Autoimmun hemolytic

anemias and drug-induced hemolytic anemias en
Immunohematology principles and practice,
Eds. Quinley E., Chapter 16, Lippincott-Raven,
Philadelphia, 1998.
Neutropenias autoinmunes secundarias

Esta es la forma ms frecuente de neutropenia inmune en el adulto. La Neutropenia autoinmune
secundaria se asocia a otras enfermedades (de tipo
autoinmunes, malignas o inmunodeficiencias) y a
drogas. En la patogenia de las neutropenias secundarias a otras enfermedades (ej. Lupus Eritematoso Sistmico, Linfomas) podran participar complejos inmunes, activacin del complemento y reaccin cruzada de anticuerpos con los
neutrfilos. En la Neutropenia autoinmune inducida por drogas, los frmacos que ms frecuentemente asociados incluyen antibiticos,
analgsicos-antinflamatorios, antiarrtmicos,
antimalricos y antitirodeos.
En el estudio de laboratorio tambin utilizan
las pruebas descritas en el punto 4.2.1.
Cartron, J.; Bailly, P.; Le Van Kim, C.; CherifZahar, B.; Matassi, Bertrand O.; Colin, Y., Insights into the structure and function of membrane
polypeptides carring blood group antigens, Vox
Sang 1998;74(Suppl.2):26-64.
Dacie, J., Lewis, S.M. and Waters, H., Serological investigation of auto-immune and drug-induced immune haemolytic anaemias en Practice
Haematology, Eds. Dacie J., Lewis SM., Chapter
29, Seventh edition, Churchill Livingstone, London, 1991.
Foerster, J., Alloimmune hemolytic anemias, en
Wintrobe's Clinical Hematology, Eds. Lee, G.,
Bithell, T, Foerster, J. et al., Chapter 40, Nigth
edition, Lee & Febiger, London, 1993.
El tratamiento depender del tipo particular de

neutropenia y cuando corresponda de la enfermedad de base. La neutropenia immune de la infancia remite espontneamente. En otras neutropenias
lo indicado es evitar las infecciones a repeticin.
Como en otras enfermedades hematolgicas
autoinmunes, tambin se han usado como tratamiento esplenectoma, corticoides e IgG
intravenosa. Por otra parte, se han usado factores
de crecimiento hematopoytico con el propsito
de aumentar la proliferacin y acelerar la diferenciacin de las clulas progenitoras mieloides; los
factores de crecimiento usados son el factor
estimulador de colonias granulocito-macrfago
(GM-CSF) y el factor estimulador de colonia
granuloctica (G-CSF).
Garratty, G., Review: immune hemolytic anemia

and/or positive direct antiglobulin test caused by
drugs, Immunohematology, 1994;10:41-50.
Palomo, I., Pereira J., Fisiopatologa de las
Talca, 1995.
Sherry, C., Acquired immune anemias of
increased destruction en Clinical hematology
principles, procedures, correlations, Eds. StieneMartin, A., Lotspeich-Steininger, C., Koepke, J.,
Chapter 19, Lippincott-Raven Publishers,
Philadelphia, 1998.
LECTURAS SUGERIDAS
Palomo, I., Pereira, J., Fisiopatologa de las

Talca, 1995.
Aster, Rh., Platelet-specific alloantigen systems:

History, clinical significance and molecular
biology en Nance, ST., Ed., Alloimmunity: 1993
and beyond, Bethesda, MD: American
Associations of Blood Banks, 1993.

Avent, N., Reid, M., The Rh blood group system: a review, Blood 2000; 95:375-387.
Blanchette, V.S., Johnson, J., Rand, M., The

management of alloimmune neonatal
thrombocytopenia, Baillires Clinical
Haematology 2000; 13: 365-390.
456
Sin ttulo-2
456
5/26/06, 10:26 AM
Bussel, J., Cines, D., Immune thrombocytopenic

purpura, neonatal alloimmune thrombocytopenia,,
and post-transfusion purpura en Hematology.
Basic Principles and Practice, Hoffman, R.,
Benz, E.J., Shattil, S.J., Furie, B., Cohen, H.J. and
Silberstein. L.E., (Eds.) Churchill Livingstone,
New York 1995, pp. 1849-1870.
McFarland, J.G., Platelet and neutrophil

alloantigen genotyping in clinical practice,
Transfus Clin Biol 1998;5(1):13-21.
Raymond, W., Neutropenia en Lee, G.; Foerster,
J.; Lukens, J.; Paraskevas, F.; Greer, J.; Rodgers,
G., Wintrobe's Clinical Hematology, volume 1,
chapter 73, Tenth edition, Lippincott Williams &
Wilkins, Philadelphia, 1998.
Lucas, G.F., Metcalfe, P., Platelet and granulocyte

glycoprotein polymorphisms, Transfus Med
2000; 10: 157-174.
Winkelstein, A., Kiss, J.E., Immunohematologic

disorders, JAMA 1997;278(22):1982-1992.
Nurden, A.T., Human platelet membrane

glycoproteins en Hemostasis and Thrombosis,
Edition III, Bloom, A.L., Forbes, C.D., Thomas.
D., Tuddenham. E.G.D. eds. Churchill
Livingstone, Edinburgh, 1994, pp. 115-165.
Pereira, J., Polymorphisms of platelet membrane
glycoproteins: molecular biology, clinical
associations and frequency of expression in chilean
and indigenous populations, Haemostasis 1998;
28: 189-195.
Porcelijn, L,. von dem Borne, A.E., Immunemediated thrombocytopenias: basic and
immunological aspects, Baillires Clinical
Haematology 1998; 11: 331-341.
Sutor, A.H., Gaedicke, G., Acute autoimmune
thrombocytopenia, Baillires Clinical
Haematology 1998; 11: 381-389.
Calhoun, D.A., Christensen, R.D., Recent advances in the pathogenesis and treatment of
nonimmune neutropenias in the neonate, Curr
Opin Hematol 1998;5(1):37-41.
Dale, D.C., Immune and idiopathic neutropenia,
Curr Opin Hematol 1998;5(1):33-36
Haurie, C., Dale, D.C., Mackey, M.C., Cyclical
neutropenia and other periodic hematological disorders: a review of mechanisms and mathematical models, Blood 1998; 92(8):2629-2640.
Martino, R.; Muniz-Daz, E.; Arilla, M, Ibanez;
M., Altes; A, Guanyabens, C.; Madoz, P.,
Combined
autoimmune
cytopenias,
Haematologica 1995;80(4):305-310
457
Sin ttulo-2
457
5/26/06, 10:26 AM
458
Sin ttulo-2
458
5/26/06, 10:26 AM

Captulo 27
Mireya Silva B. y Mauricio Oqueteaux T.
1. Introduccin
2. Estudio inmunolgico de las
gammapatas monoclonales
2.1. Pesquisa de una protena
monoclonal
2.2. Identificacin de una protena
monoclonal
2.3. Cuantificacin de inmunoglobulinas
2.4. Viscosidad srica
2.5. Beta-2 microglobulina
2.6. Protena C reactiva
2.7. Interleuquina-6
2.8. Estudios inmunolgicos en orina
3. Gammapata monoclonal de significado incierto
3.1. Aspectos generales
3.2. Evolucin de las MGUS en el
tiempo
4. Mieloma mltiple
4.1. Manifestaciones clnicas
4.2. Pronstico
5. Variedades infrecuentes de mieloma mltiple y otras gammapatas

5.1. Mieloma "indolente"
5.2. Leucemia de clulas plasmticas
5.3. Mieloma osteoesclertico
5.4. Plasmocitoma extramedular
5.5. Plasmocitoma seo solitario
5.6. Macroglobulinemia de Waldenstrm
(MW)
5.7. Enfermedad de cadenas livianas
5.8. Amiloidosis primaria
5.9. Enfermedad por cadenas pesadas
6. Diagnstico diferencial entre
MGUS y MM
7. Patogenia
7.1. Papel IL-6 y va de la ciclina D1
7.2. Genes supresores de tumores
7.3. Apoptosis de clulas plasmticas
7.4. Papel del estroma en las discrasias de clulas plasmticas
8. Tratamiento
459
Sin ttulo-2
459
5/26/06, 10:26 AM
460
Sin ttulo-2
460
5/26/06, 10:26 AM
RESUMEN
En este captulo se analizan las Gammapatas monoclonales en relacin con su concepto,
estudio, clasificacin, aspectos patognicos y tratamiento.
Concepto: se refiere a la definicin de estas patologas y la estructura molecular del componente o protena monoclonal.
Clasificacin: se las diferencia en (a) Mieloma Mltiple, (b) Gammapatas Monoclonales
de Significado Incierto y (c) Variedades infrecuentes de Mieloma Mltiple y otras gammapatas.
Se destacan de ellas sus principales manifestaciones clnicas.
Estudio: se analizan, desde el punto de vista inmunolgico, los procedimientos ms importantes que se utilizan para el diagnstico de estas enfermedades.
Patogenia: el papel de IL-6 y va de la Ciclina D1, los genes supresores, la apoptosis de
Clulas Plasmticas y la probable funcin del estroma son discutidos en este punto.
Tratamiento: se plantean, brevemente, alcances teraputicos actuales
1. INTRODUCCIN
gran nmero de CPs clonales que las originan.

Desde el punto de vista funcional se ha logrado
demostrar, en ensayos in vitro, actividad de anticuerpo contra distintos antgenos, principalmente
de origen bacteriano y, ms an, contra protenas
autlogas (factores de coagulacin, antgenos
eritroides, protenas del SNC, etc). Sin embargo,
en la inmensa mayora de los pacientes no se logra demostrar una actividad especfica de la
inmunoglobulina monoclonal.
Desde un punto de vista clnico, el hecho de
tener su origen en un clon celular nico monoclonal no significa, necesariamente, que se
trate de una neoplasia, si bien el concepto inverso
es vlido para todos los cnceres (es decir, todos
ellos son de origen monoclonal), dado que existen diversos ejemplos de expansiones monoclonales que nunca llegan a constituir una neoplasia,
al menos clnicamente evidente. El ejemplo ms
caracterstico de expansin de CPs que permanece bajo control sin progresin hacia tumor de crecimiento continuo se denomina Gammapata
Monoclonal de Significado Incierto (MGUS,
"Monoclonal Gammopathy of Undetermined
Significance"), mientras que el ejemplo ms genuino de proliferacin de CPs que escapa a los
mecanismos de control y desarrolla una enfermedad maligna lo constituye el Mieloma Mltiple
(MM). La incidencia de las distintas gammapatas
monoclonales est representada en la tabla 27-1.
Las discrasias de clulas plasmticas (CPs)

constituyen un grupo heterogneo de enfermedades que se caracterizan por una expansin de CPs
monoclonales -es decir, con origen en un clon celular singular- en la mdula sea, y por la produccin de una inmunoglobulina tambin monoclonal
o componente M (CM). Las inmunoglobulinas
monoclonales producidas por las CPs patolgicas
suelen migrar en la fraccin gamma () cuando
son sometidas a una electroforesis, razn por la
cual estas discrasias son tambin denominadas
gammapatas monoclonales. En trminos generales, las inmunoglobulinas monoclonales al igual
que las inmunoglobulinas normales - estn constituidas por dos cadenas pesadas de igual clase y
subclase (cadenas H) y dos cadenas livianas del
mismo tipo (cadenas kappa, o lambda ) (ver
captulo 6). Sin embargo, en algunas discrasias es
posible detectar slo un fragmento de la molcula
de inmunoglobulina, como ocurre en la enfermedad por cadenas pesadas o livianas, con expresin
exclusiva de las cadenas , o en el primer caso
y o en el segundo (tambin conocida como
enfermedad de Bence-Jones). As, salvo estas ltimas excepciones, las inmunoglobulinas comprometidas en estas entidades son estructuralmente
similares a su contrapartida normal, estando presentes en cantidades elevadas simplemente por el
461
Sin ttulo-2
461
5/26/06, 10:26 AM
Tabla 27-1. Incidencia y frecuencia relativa de las diferentes

formas de Gammapata Monoclonal
Gammapata Monoclonal
Incidencia
Frecuencia Relativa
1 - 5%
3 - 5*
< 1*
< 1*
< 1*
< 1*
< 1*
65 -70%
12 - 20%
1 - 4%
< 1%
< 1%
2%
< 1%
Gammapata Monoclonal de
Significado Incierto
Mieloma Mltiple
Macroglobulinemia de Wldenstrom
Enfermedad de Cadenas Livianas
Enfermedad de Cadenas Pesadas
Amiloidosis
Crioglobulinemia
* Resultados expresados como nmero de casos nuevos/100.000 habitantes por ao
Tabla 27-2. Estudio inmunolgico de las GM
2. ESTUDIO INMUNOLGICO DE LAS

En sangre (suero)
Dado que el captulo 40 se refiere a los mtodos inmunoqumicos, aqu slo se aplicar,
resumidamente, un esquema operacional para el
estudio de las GM (tabla 27-2).
2.1. Pesquisa de una protena monoclonal

La protena monoclonal se detecta por una
imagen muy particular en el estudio electrofortico
de las protenas sricas y/o urinarias, electroforesis
que puede realizarse en soportes de acetato de celulosa o agarosa.
La imagen consiste en una fraccin proteica
concentrada, de mayor o menor intensidad dependiendo de su concentracin y de lmites muy netos con migracin desde las globulinas 2 hasta
las globulinas . En el densitograma es caracterstica la presencia de una curva aguzada, elevada y
de base estrecha, en relacin con el sitio de migracin de la protena monoclonal (figura 27-1).
El componente monoclonal corresponde al
producto de la secrecin de muchas clulas provenientes de un clon nico de clulas plasmticas.
Son protenas homogneas, idnticas entre s, lo
que explica su migracin puntual en la
electroforesis de protenas (EFP).
Mediante la EFP pueden diferenciarse los
componentes monoclonales de los policlonales,
correspondiendo estos ltimos a respuestas
inmunolgicas fisiolgicas a las estimulaciones
antignicas importantes como son las infecciones.
Electroforesis de protenas
Inmunoelectroforesis de protenas
(IgG, IgA, IgM, IgD, IgE, , )
Inmunofijacin de inmunoglobulinas
(IgG, IgA, IgM, IgD, IgE, , ).
Cuantificacin de inmunoglobulinas
Viscosidad srica
2-microglobulina
Protena C reactiva (PCR)
IL-6
En orina
Proteinuria
Proteinuria 24 hrs.
Electroforesis de protenas (orina concentrada)
Inmunoelectroforesis de protenas
(cadenas livianas y = protenas de Bence
Jones)
Inmunofijacin de cadenas livianas de
inmunoglobulinas
Los componentes policlonales constituyen el

producto de la secrecin de clulas plasmticas
de diferentes clones celulares y son, por lo tanto,
protenas heterogneas entre s, expresndose en
462
Sin ttulo-2
462
5/26/06, 10:26 AM
Figura 27-1. Patrn electrofortico de protenas sricas con presencia de componente M en regin de la gammaglobulinas.
(a) Trazado electrofortico, (b) densitograma (c) Base celular que lo explica.
globulinas y ; los complejos de hemoglobina haptoglobina, propios de la hemlisis, en

globulinas alfa 2, e incluso el punto de aplicacin
de la muestra en el soporte de la EFP.
la EFP como fracciones aumentadas, pero en forma difusa y en el densitograma como curvas aumentadas pero amplias, suaves y de base ancha
(figura 27-2).
Un hecho destacable es la asociacin a una
fraccin monoclonal de una hipogamaglobulinemia. Este signo es orientador hacia una GM
maligna.
En ocasiones existiendo una neoplasia
monoclonal de clulas plasmticas, el CM no aparece en la EFP sricas. Esta circunstancia puede
observarse en la enfermedad de cadenas livianas,
mieloma IgD, enfermedad de cadenas pesadas y
en el mieloma no secretor, afeccin en la cual la
protena monoclonal, indetectable en sangre y orina, puede observarse e identificarse en el interior
de los plasmocitos de la mdula sea por
inmunofluorescencia directa.
Por el contrario, errneamente, pueden considerarse como componentes monoclonales ciertos artefactos como por ejemplo la fibrina que aparece como una fraccin concentrada entre las
2.2. Identificacin de una protena monoclonal

Frente a la pesquisa de un CM electrofortico
o an sin detectarlo claramente cuando se sospecha un mieloma mltiple, macroglobulinemia,
amiloidosis u otras enfermedades relacionadas se
debe realizar una inmunoelectroforesis o una
inmunofijacin de inmunoglobulinas sricas.
Inmunoelectroforesis. Esta tcnica introducida
por Grabar y Williams en 1953 es muy til para la
identificacin de la protena monoclonal, es decir
la clase de cadena pesada y el tipo de cadena liviana de la inmunoglobulina comprometida.
Brevemente, consiste en una electroforesis
srica seguida de una inmunoprecipitacin de las
cadenas pesadas y livianas de las inmunoglo-
463
Sin ttulo-2
463
5/26/06, 10:26 AM
Figura 27-2. Patrn electrofortico de un componente policlonal. (a) Trazado electrofortico, (b) Densitograma, (c) Base
celular que lo explica.
bulinas que contiene la muestra empleando

antisueros poli, tri y monovalentes en geles de
agarosa (figura 27-3).
Inmunofijacin. Esta tcnica, permite objetivar
con bastante certeza la cadena pesada y liviana de
la inmunoglobulina monoclonal del paciente, empleando al igual que la inmunoelectroforesis, la
muestra a investigar (en 6 diferentes posiciones)
en placas de agarosa para obtener, por
electroforesis, la separacin de las protenas de
acuerdo con su carga neta. En la segunda etapa se
aplican los anticuerpos monoespecficos en 5 de
los 6 trazados electroforticos para que la fijacin
ocurra. El informe y por ende el diagnstico se
facilita puesto que el procedimiento permite comparar el nivel de migracin del CM, si lo hay, con
las lneas de precipitacin de las cadenas
monoclonales comprometidas (figura 27-4).
La inmunofijacin puede realizarse en suero, orina, lquido cefalorraqudeo, etc. y posee una
mayor sensibilidad y poder de resolucin que la
inmunoelectroforesis.
Figura 27-3. Patrn Inmunoelectrofortico de componente M formado por IgG (cadenas pesadas ) y cadenas livianas . El esquema representa los arcos de inmunoprecipitacin
de las cadenas pesadas , , y livianas y del suero de un
sujeto control normal (C) en comparacin con los de un paciente (P) portador de una Gammapata Monoclonal IgG-k.
En este ltimo se aprecia deformacin de los arcos de precipitacin de la cadena pesada () de la IgG y de la cadena liviana
y disminucin de la concentracin de los arcos de IgA, IgM
y lo que es habitual en las patologas avanzadas.
464
Sin ttulo-2
464
5/26/06, 10:26 AM
Figura 27-4. Inmunofijacin de inmunoglobulinas. En los rectngulos del gel de agarosa se aplica suero del mismo paciente,
cuyas protenas son separadas por electroforesis de alta resolucin (EF.AR). La aplicacin de antisueros monoespecficos (, , ,
, ) determina la precipitacin del complejo Ag-Ac y la fijacin, lineal, de las protenas monoclonales en el mismo nivel en que
se encuentra el componente monoclonal de la electroforesis de la placa. En este ejemplo, el paciente presenta una gammapata
monoclonal IgA-.
2.3. Cuantificacin de inmunoglobulinas
2.5. Beta-2 microglobulina
La cuantificacin o dosificacin de inmunoglobulinas se realiza mediante tcnicas de

inmunodifusin radial y ltimamente por
nefelometra. Su medicin permite establecer un
ndice pronstico (enfermedad benigna o maligna), mantener un control evolutivo del tratamiento y detectar, precozmente el inicio de una
inmunodeficiencia.
Esta protena que forma parte de la estructura de las molculas clase I del Sistema Principal
de Histocompatibilidad (cadena liviana del
heterodmero) se encuentra en la superficie de todas las clulas nucleadas.
Puede medirse en suero como en orina y sus
niveles constituyen un factor pronstico en los
sndromes linfoproliferativos, particularmente en
el MM. Los pacientes con niveles elevados tienen
una sobrevida significativamente ms corta que
los portadores de GM con niveles normales. Las
cifras elevadas se relacionan con activacin y destruccin de linfocitos. Los valores normales son
1.15-2.03 mg/l.
Como se excreta por el tbulo renal puede
aumentar en las insuficiencias del rin.
2.4. Viscosidad srica

Los pacientes portadores de una GM pueden
evolucionar con sntomas de hiperviscosidad,
como se ha sealado.
La hiperviscosidad se define en base al aumento de la viscosidad relativa del suero sanguneo comparada con el agua. El valor normal es de 1.8, es
decir el suero sanguneo es hasta 1,8 veces ms viscoso que el agua. Las manifestaciones clnicas suelen aparecer con cifras de 5 a 6 y comnmente esto
ocurre cuando el CM corresponde a IgM, IgG3 e IgA.
2.6. Protena C reactiva

La cuantificacin de la PCR srica es empleada comnmente para objetivar la presencia de
465
Sin ttulo-2
465
5/26/06, 10:26 AM
un proceso inflamatorio, aunque inespecficamente. Los niveles de esta protena se elevan en

los pacientes con GM particularmente en el MM.
La IL-6 estimula la produccin de PCR y la
medicin de sta, por lo tanto, indirectamente refleja los niveles de IL-6. El empleo de anticuerpos
monoclonales anti-IL-6 disminuye la produccin
de PCR. Su valor normal es hasta 0.6 mg/dl.
de las CPs, presente entre un 1% y un 5% de la

poblacin mayor de 50 aos y hasta en un 10% de
los mayores de 80 aos cuando se analiza la presencia de una protena monoclonal con tcnicas
como la electroforesis. Sin embargo, si se utilizan
tcnicas de mayor sensibilidad estas cifras se elevan an ms. As, se han reportado incidencias de
hasta un 5% en individuos sanos entre 22 y 65
aos y de 7-8% sobre los 55 aos cuando se utiliza electroforesis de acetato de alta resolucin. Esta
entidad se caracteriza por la proliferacin de un
clon singular -o en un 2 a 3% de los casos de dos
clones diferentes- de CPs, con la capacidad de
producir una protena monoclonal o CM, pero en
ausencia de elementos sugerentes de MM,
macroglobulinemia, amiloidosis, etc. En trminos
generales, los pacientes con MGUS presentan un
componente-M < 3g/dL, menos de un 10% de CPs
en mdula sea, escasa o nula cantidad de protena-M en la orina y ausencia de compromiso
sistmico como lesiones seas, anemia, hipercalcemia o compromiso de la funcin renal.
2.7. Interleuquina-6
Se ha sealado que siendo la IL-6 un factor
muy importante de crecimiento de la clula
plasmtica tumoral, un aumento del nivel srico,
constituye un ndice de malignidad, severidad y,
por ende, de mal pronstico de las GM.
Ha sido comunicado que IL-6 srica es
indetectable en sujetos sanos o en GMSI, (<1pg/ml),
a diferencia de los enfermos con GMM, en los cuales los niveles pueden ser de 20, 30 o ms pg/ml.
2.8. Estudios inmunolgicos en orina
Estos estudios inmunolgicos deben realizarse en orina total de 24 horas, porque es importante conocer el total de la proteinuria diaria y porque para varias tcnicas se requiere concentrar la
orina 50, 100 200 veces, para pesquisar concentraciones mnimas de las protenas monoclonales
excretadas.
La electroforesis de protenas ha de hacerse
con orina concentrada, particularmente cuando la
proteinuria es pequea, para destacar el CM urinario en el trazado electrofortico, para lo cual se
utilizan soportes de acetato de celulosa o agarosa.
La inmunoelectroforesis y/o inmunofijacin
de protenas urinarias tienen por objeto identificar las protenas de Bence Jones, que como se dijo
corresponden a las cadenas livianas monoclonales
o de las molculas de inmunoglobulinas.
Las protenas de Bence Jones pueden observarse durante la evolucin de una GM tpica y en
la enfermedad de cadenas livianas en la cual hay
una gran produccin de cadenas livianas o
monoclonales.
3.2. Evolucin de las MGUS en el tiempo

Desde el punto de vista evolutivo, la MGUS
puede dar origen a un MM caracterstico, situacin que se observa, sin embargo, en slo una
minora de los pacientes. En un estudio realizado
en la Clnica Mayo, de 241 pacientes seguidos
durante 24 a 38 aos, 42 de ellos (17,4%) desarrollaron un MM, 7 (2,9%) una macroglobulinemia
y 8 (3,3%) una amiloidosis primaria; un 10% adicional de pacientes incrementaron el componente
monoclonal en suero, aunque sin llegar a tener
elementos clnicos de enfermedad. Considerando
esta informacin, la tasa actuarial de transformacin de las MGUS es de 14% a 10 aos y de 29%
a 20 aos, para los casos con IgG como protenaM, y de 18% y 37%, respectivamente, para aquellas MGUS IgA. Sin embargo, tanto en el citado
estudio, como en otros, no se ha podido establecer patrones que permitan predecir con claridad
qu grupo de enfermos tienen un mayor riesgo de
sufrir progresin a MM. Por esta razn, y desde el
punto de vista clnico, el avance desde una entidad benigna a una maligna est dada por dos grupos de signos, que requieren necesariamente de
un seguimiento estrecho del paciente: (a) Un aumento sostenido en la cantidad del componente
monoclonal detectable en el suero y (b) La aparicin de dolores seos con lesiones lticas seas no
detectadas previamente. La aparicin de cualquiera
3. GAMMAPATA MONOCLONAL DE SIGNIFICADO INCIERTO

3.1. Aspectos generales
MGUS es la alteracin clonal ms frecuente
466
Sin ttulo-2
466
5/26/06, 10:26 AM
de estos signos es evidencia suficiente para evaluar la enfermedad como progresiva, de modo
que se requiere una intervencin teraputica en la
mayora de los casos que la presentan.
(TNF) o la interleuquina-1 beta (IL-1).

Manifestaciones neurolgicas. Con relativa frecuencia existen en el MM otras dos manifestaciones clnicas asociadas a la patologa sea, como
son la hipercalcemia y las alteraciones
neurolgicas. Estas ltimas se presentan frecuentemente como radiculopatas o como un sndrome de compresin medular, motivadas por la compresin de una raz nerviosa por una lesin vertebral o por el compromiso, ya sea traumtico (secundario a una fractura por aplastamiento) o por
el crecimiento de un plasmocitoma (tumor de CPs)
a la cavidad medular, respectivamente. Si bien
existen casos en que la manifestacin neurolgica
es dependiente de una polineuropata secundaria
a la presencia de paraproteinemia, esta situacin
es ms bien excepcional. En estos casos la protena anmala actuara como anticuerpo dirigido contra determinantes antignicos de la mielina.
4. MIELOMA MLTIPLE
El mieloma mltiple (MM) es una neoplasia
de la lnea linfoide B caracterizada por la acumulacin en mdula sea de una poblacin clonal de
clulas de esta estirpe en su estadio final de diferenciacin, es decir, de clulas plasmticas, y por
la produccin de lesiones osteolticas (y el dolor
seo secundario a ellas) que, junto a la presencia
e incremento del componente M (ya sea en suero
y orina), representan los hallazgos patolgicos ms
frecuentes de la enfermedad. Las primeras observaciones sobre esta enfermedad fueron realizadas
por Henry Bence-Jones en el ao 1845, aunque
los trminos de mieloma mltiple o enfermedad
de Kahler no fueron introducidos sino hasta los
aos 1873 y 1889, respectivamente.
El MM tiene su mayor incidencia durante la 7
y 8 dcada de la vida, si bien un nmero significativo de casos es diagnosticado en edades ms tempranas (un 15% de los casos tienen menos de 50 aos).
El nmero de casos nuevos por cada 100.000 habitantes y ao es de 3 a 5, por lo que el MM constituye
aproximadamente el 1% de todas las neoplasias y el
10% de las neoplasias hematolgicas.
A continuacin se resumen algunas caractersticas clnicas ms relevantes de la enfermedad:
Hipercalcemia. La presencia de hipercalcemia

(>11,5 mg/dL tras correccin por los niveles de
albmina) ocurre en alrededor de un tercio de los
pacientes. Dentro de su patogenia se ha descrito
una alteracin en el balance entre la actividad
osteoclstica (reabsorcin sea) y la osteoblstica
(formacin sea), de modo que la primera prevalece sobre la segunda. Este desbalance estara explicado por la presencia y mayor actividad de ciertas interleuquinas: factor de necrosis tumoral
(TNF) y a la IL-1b, ambos influenciados estrechamente por la actividad de IL-6.
4.1. Manifestaciones clnicas

Sntomas generales. En los pacientes con MM
es frecuente la presencia de sntomas constitucionales, tales como astenia, prdida de peso,
fatigabilidad, etc., muchas veces relacionados a
la presencia de anemia y, en algunas oportunidades, al estado de hipermetabolismo que implica la
enfermedad tumoral, como ocurre en los
infrecuentes casos de leucemia de CPs.
Dolor seo. El sntoma ms tpico y frecuente del

MM es el dolor seo, que se puede encontrar en
un 70-75% de los pacientes en el momento del
diagnstico, si bien esta incidencia se ha reducido
en las ltimas dcadas debido probablemente al
diagnstico precoz, siendo actualmente de alrededor de un 40%. ste se debe a la presencia de
lesiones generalmente de fcil reconocimiento por
medio de mtodos radiolgicos (osteoporosis,
osteolisis o fracturas patolgicas). Sus localizaciones ms frecuentes son el crneo (imagen de
apolillamiento), la columna vertebral
(aplastamientos vertebrales y fracturas), las costillas, la pelvis y los huesos largos a nivel proximal.
Estas lesiones tienen un origen multifactorial, destacando en su generacin la activacin de
osteoclastos secundaria a la presencia de
citoquinas como el factor de necrosis tumoral
Sndrome anmico. El valor medio de la hemoglobina (Hb) en la mayor parte de las series de
pacientes con MM al diagnstico es de alrededor
de 10,5 g/dL, existiendo grados variables de anemia en el 60-70% de los casos. Adems, alrededor
de un 20-25% de ellos presentan anemia severa,
con valores de Hb inferiores a 8,5 g/dL. La anemia
en el MM es de origen multifactorial en que, adems del mecanismo clsico de anemia de enfermedades crnicas, existen otros factores de importan-
467
Sin ttulo-2
467
5/26/06, 10:26 AM
cia, como son: (a) reemplazo de la hematopoyesis

normal por CPs tumorales, (b) actividad
regenerativa disminuida del tejido hematopoytico
residual, (c) insuficiencia renal, (d) deficiencia de
hierro y (e) disminucin de la sobrevida del glbulo rojo. Adems, en los ltimos aos ha quedado de manifiesto el papel de la eritropoyetina (Epo)
y otras citoquinas en la patogenia de la anemia en
el MM, sugirindose que en estos enfermos existira una respuesta inadecuada a la Epo (para el
grado de anemia) y/o una respuesta proliferativa
disminuida de las clulas eritropoyticas a niveles normales de esta sustancia. Por ltimo, se ha
demostrado que algunas citocinas (IL-1, TNF, TGF
e IFN-) pueden disminuir tanto la eritropoyesis
como la produccin de Epo.
de la activacin inicial de las clulas B en reposo;

(c) presencia de clulas T con actividad
inmunosupresora; (d) defectos en la inmunidad
celular (disminucin de clulas CD4 y alteracin
de las clulas NK); (e) alteracin funcional de la
actividad del complemento; (f) presencia de
granulocitopenia, secundaria tanto a infiltracin
medular como al tratamiento quimioterpico; (g)
insuficiencia renal. Los focos y agentes ms frecuentemente comprometidos son el pulmonar
(Streptococcus pneumoniae) y el urinario (bacilos Gram negativos). Si bien la mayor parte de las
infecciones en el MM son de origen bacteriano
(90%), tambin se reconocen en estos pacientes
infecciones de origen viral (Herpes Zoster) y
fngicas (Cndida lbicans, etc).
Insuficiencia renal. La falla renal es un rasgo

caracterstico del MM y es uno de los factores pronsticos ms importantes, representando la segunda causa de muerte en estos pacientes. Aproximadamente un 30% de ellos presentan niveles de
creatinina 2 mg/dL, incidencia que aumenta
durante el curso de la enfermedad. Sin embargo,
la mayora de los enfermos son asintomticos. Su
etiologa es tambin multifactorial, influyendo en
ella la eliminacin de cadenas livianas,
hipercalcemia (estas dos causas presentes en un
90% de los casos afectados) e hiperuricemia, deshidratacin, infecciones urinarias a repeticin,
hiperviscosidad, uso de drogas nefrotxicas (especialmente antibiticos), amiloidosis e infiltracin tumoral. El trmino rin mielomatoso se
usa para designar la formacin de cilindros
tubulares y est invariablemente asociado a la presencia de proteinuria de Bence-Jones.
Otras manifestaciones clnicas. El sndrome de

hiperviscosidad es menos frecuente que en otros
sndromes linfoproliferativos (Macroglobulinemia
de Waldenstrm), pero puede presentarse en algunos casos de mielomas IgA o IgG3. Otro problema de relativa frecuencia lo constituye la
amiloidosis, presente en alrededor de un 10-15%
de los casos, generalmente mielomas Bence-Jones
con excrecin de cadena L lambda.
4.2. Pronstico
La evolucin de los pacientes portadores de
MM es muy variable, con casos que cursan con
una enfermedad agresiva que los lleva a la muerte
en pocos meses y otros con un curso estable y
sobrevida que puede superar incluso los 10 aos,
situndose la mediana de supervivencia en torno
a los 3 aos. Esta variabilidad en el curso clnico
se debe a la presencia de diferentes factores pronsticos, entre los que destacan el estado general,
la edad, la presencia de insuficiencia renal, la anemia, la hipercalcemia y la hipoalbuminemia. En
cuanto al tipo de MM parecen ser de peor pronstico el IgD y el Bence-Jones. La clasificacin
pronstica ms utilizada hasta ahora es la de Durie
Salmon, resumida en la tabla 27-3. En los ltimos aos se han reconocido nuevos factores pronsticos como el nivel de beta-2-microglobulina
(2M), de IL-6, protena C reactiva, la actividad
proliferativa de las CPs (el llamado labelling
index), la expresin de ciertos antgenos en la
clula plasmtica, las alteraciones cromosmicas,
la hipodiploida y la expresin del gen de resistencia mltiple a drogas (MDR-1), algunos de los
cuales sern revisados brevemente.
Infecciones bacterianas. Constituyen la principal causa de morbilidad y mortalidad en el MM,

siendo su incidencia global entre 0,5 y 3 episodios infecciosos por paciente/ao (alrededor de 7
a 15 veces superior a la poblacin normal de la
misma edad). La causa ms importante es la alteracin de la inmunidad humoral, tanto por depresin de la produccin de inmunoglobulinas normales (hipogammaglobulinemia) como por un
hipercatabolismo de las mismas. Otros factores
que parecen influir en la predisposicin a las infecciones incluyen: (a) supresin de la produccin
de anticuerpos y de la proliferacin de clulas B
por parte de los monocitos/macrfagos estimulados por las CPs mielomatosas; (b) reduccin en la
produccin de interleucina 4 (IL-4), responsable
468
Sin ttulo-2
468
5/26/06, 10:26 AM
Tabla 27-3. Criterios de Etapificacin de Durie-Salmon

Estadio I (baja masa tumoral: < 0,6 x 1012/m2)
Hemoglobina > 10g/dL
IgG < 5g/dL; IgA < 3g/dL; Bence Jones < 4g/24h
Nivel de Calcio normal
Presencia de mximo una lesin osteoltica
Estadio II (masa tumoral intermedia: 0,6 1,2 x 1012/m2)
Criterios intermedios entre estadio I y III
Estadio III (alta masa tumoral: > 1,2 x 1012/m2)
Hemoglobina < 8,5g/dL
IgG > 7g/dL; IgA > 5g/dL; Bence Jones > 12g/24h
Nivel de Calcio > 12mg/dL (ajustado por la albmina srica)
Presencia de lesiones osteolticas mltiples
A
Creatinina < 2mg/dL
B
Creatinina 2mg/dL
2-microglobulina. La 2M es uno de los factores pronsticos relevantes y se correlaciona estrechamente tanto con la masa tumoral, el compromiso renal y la clasificacin de Durie-Salmon.
Como factor independiente es capaz de predecir
la supervivencia mejor que cualquiera de los otros
parmetros, por lo que debe estar incorporado en
los protocolos de estudio y tratamiento en todos
los pacientes.
proliferativa y menor posibilidad de obtener

metafases analizables. Sin embargo, entre un 30 y
50% de los pacientes tienen un cariotipo anormal
(20-30% al diagnstico y 35-60% post-tratamiento). Por otro lado, con tcnicas de mayor sensibilidad como hibridacin in situ (FISH) o citometra
de flujo se puede observar cantidades anormales
de DNA (aneuploidas de DNA) en hasta un 80%
de los casos. Las alteraciones ms frecuentes son
traslocaciones (51%) y trisomas (45%). De particular inters ha resultado el valor pronstico ominoso de la prdida de un cromosoma 13
(monosoma 13) o de alteraciones de 11q.
Protena C Reactiva. La concentracin de la PCR

es un reflejo de la actividad de IL-6, citoquina fundamental en la proliferacin y sobrevida de las
CPs. El valor predictivo de este parmetro parece
ser independiente de la 2M, lo que ha permitido
construir algoritmos de estratificacin de riesgo
basados en estos dos parmetros.
5. VARIEDADES INFRECUENTES DE
MIELOMA MLTIPLE Y OTRAS
GAMMAPATAS
ndice Proliferativo de las CPs. El PCLI ("plasma cell labelling index") refleja la actividad
proliferativa de las CPs que suele incrementarse con
la progresin de la enfermedad. La sobrevida de
los pacientes con PCLI < 3% es de 56 meses, que
disminuye a 19 meses cuando este valor es 3%.
5.1. Mieloma indolente

Corresponde a pacientes con criterios diagnsticos inequvocos de mieloma pero en ausencia de anemia, insuficiencia renal, hipercalcemia
o lesiones lticas mltiples. Estos pacientes tienen
usualmente niveles de protena M > 3g/dL pero <
de 4,5g/dL y > 10% de CPs atpicas en mdula
sea. Estos pacientes suelen ser asintomticos y
no requieren tratamiento hasta que se evidencie
una progresin de la enfermedad, lo que ocurre
con una mediana de 26 meses.
Citogentica. Las alteraciones de la composicin

cromosmica tienen un reconocido valor en enfermedades hematopoyticas como las leucemias.
Hasta hace pocos aos la informacin en el MM
era escasa debido a que este es un tumor de clulas esencialmente maduras con baja tasa
469
Sin ttulo-2
469
5/26/06, 10:26 AM
5.2. Leucemia de clulas plasmticas
los aos siguientes. En este sentido, es posible que,

an en ausencia de criterios clsicos de MM en
mdula sea, en aproximadamente un 50% es posible demostrar la presencia de CPs clonales en
mdula sea por medio de citometra de flujo,
sugiriendo que desde un comienzo se trata de un
MM con manifestacin primariamente tumoral
y no infiltrativa.
Los pacientes con esta inhabitual presentacin (< 5% de los pacientes) tienen un recuento
absoluto de CPs 2 x 106/L. Se debe diferenciar
entre la variedad de novo y la transformacin en
Leucemia de Clulas Plasmticas de un mieloma
previamente conocido. El tratamiento de estos
pacientes suele ser ineficaz y la mediana de supervivencia es de slo 2 meses.
5.6. Macroglobulinemia de Waldenstrm

(MW)
5.3. Mieloma osteoesclertico

Entidad descrita por primera vez en 1944 por
Waldenstrm en 2 pacientes con fatiga,
sangramiento de mucosas, adenopatas y anemia
normocrmica asociada a un aumento de la viscosidad plasmtica secundaria la presencia de
grandes cantidades de protena IgM circulante. A
nivel de mdula sea se observa una infiltracin
de clulas linfoplasmocitoides productoras de la
protena IgM monoclonal, con frecuente presencia de basfilos tisulares (mastocitos) que ayudan
en el diagnstico. La edad media de presentacin
es sobre los 60 aos, siendo ms frecuente en el
sexo masculino. Si bien la presencia de
hiperviscosidad es la regla, slo un 20% presenta
sntomas relacionados a ella (cefalea, alteraciones visuales, etc). En todo caso, elevaciones de
sobre 4 veces el valor normal confiere un riesgo
de complicaciones clnicas que obligan a considerar la plasmafresis como una de las medidas
teraputicas en estos casos. En alrededor de un
10% de los casos se observa una neuropata
desmielinizante sensitivo-motora crnica a nivel
perifrico; en la mitad de estos casos la
paraprotena IgM est dirigida contra los eptopos
carbohidratos de la glicoprotena asociada a la
mielina (MAG). En trminos generales la MW tiene una evolucin larvada, con una mediana de
supervivencia de alrededor de 5 aos.
La principal caracterstica de esta enfermedad es la presencia de una polineuropata

inflamatoria crnica desmielinizante causante de
gran incapacidad motora. Esta alteracin aparentemente es secundaria a una inmunoglobulina con
toxicidad para las fibras nerviosas perifricas.
Adems, en esta variedad es frecuente la asociacin de alteraciones endocrinolgicas (sndrome
de POEMS). La mdula sea de estos pacientes
usualmente tiene proporciones normales de CPs
(< 5%) y el diagnstico debe confirmarse con la
biopsia de una lesin ltica. Desde un punto de
vista bioqumico, y comparado con los pacientes
con MM clsico, estos pacientes suelen exhibir
niveles ms elevados de IL-1, TNF- e IL-6, pero
niveles inferiores de TGF-, con un desbalance
que favorece las citoquinas proinflamatorias.
5.4. Plasmocitoma extramedular
Esta rara entidad suele afectar con mayor frecuencia el tracto respiratorio superior aunque ocasionalmente afecta el tracto digestivo y otros rganos, en ausencia de criterios diagnsticos de un
MM convencional. El tratamiento, al igual que en
el caso de un plasmocitoma seo solitario, es la
radioterapia, con lo cual se observan excelentes
resultados, incluyendo la curacin en muchos de
ellos.
5.7. Enfermedad de cadenas livianas
5.5. Plasmocitoma seo solitario
La enfermedad de cadenas livianas o mieloma de

Bence Jones se caracteriza por la produccin
monoclonal exclusivamente de la cadena liviana
kappa o lambda, en ausencia de la cadena pesada
correspondiente. En esta entidad es frecuente la
asociacin a dao renal de diversa magnitud secundario al paso de esta inmunoglobulina a travs
de la membrana glomerular. Adems, y especialmente cuando la cadena liviana es de tipo lambda,
el depsito de esta protena a nivel del glomrulo
Corresponde a una lesin osteoltica nica

constituida por CPs clonales, en ausencia de infiltracin en mdula sea. Suelen tener cantidades
pequeas de componente M ya sea en suero y/o
en orina, la que desaparece tras radioterapia sobre
la lesin. Lamentablemente slo un 50% de estos
casos puede ser curado, dado que la otra mitad de
los pacientes evoluciona hacia un MM clsico en
470
Sin ttulo-2
470
5/26/06, 10:26 AM
y mesangio puede dar origen a una amiloidosis

renal capaz de producir un sndrome nefrtico frecuentemente irreversible.
promete frecuentemente el tracto digestivo, con

sndrome de malabsorcin como sntoma habitual
de presentacin y tiene una evolucin agresiva y
fatal.
5.8. Amiloidosis primaria
Cadenas pesadas
Se caracteriza por la formacin de fibrillas

con configuracin espacial de tipo a partir de
cantidades variables de cadenas livianas
monoclonales, siendo mucho ms frecuente de
observar en casos de clonalidad . Al igual que el
MM, la amiloidosis suele presentarse durante la
sptima dcada de la vida (mediana 62 aos) y se
caracteriza clnicamente por fatigabilidad, baja de
peso, compromiso del estado general y alteraciones neurovegetativas (parestesia, mareo, sncope,
etc) que resultan progresivas y muy limitantes; asimismo, un tercio de los pacientes presenta sndrome nefrtico. Esta enfermedad suele ser tratada
en forma similar al MM, sin embargo, la respuesta puede ser pobre, con compromiso progresivo
que lleva inexorablemente a la muerte.
En esta entidad es frecuente encontrar

hepatoesplenomegalia y, en cambio, es infrecuente
la presencia de lesiones osteolticas. La electroforesis de protenas puede ser normal, pero en dos
tercios de los casos se observa proteinuria
monoclonal. El curso clnico puede ser variable,
con evolucin incluso de varios aos.
6. DIAGNSTICO DIFERENCIAL ENTRE

MGUS Y MM
Adems de la dificultad para definir el grupo
de pacientes con riesgo de progresar hacia un tumor clnico, la diferenciacin inicial entre MGUS
y MM en algunos pacientes puede presentar dificultades, dado que los parmetros clnicos hasta
ahora utilizados no son suficientes para discriminar correctamente en todos los casos, razn por la
cual el diagnstico se realiza en presencia de un
grupo de criterios clnicos como los definidos por
el "Committee of the Chronic Leukemia-Myeloma
Task Force", 1973 (tabla 27-4). Asimismo, la cantidad de componente-M srico suele ser uno de
los parmetros de mayor utilidad, dado que, mientras mayor sea ste, mayor es la probabilidad de
que se trate de un proceso maligno. Los niveles
de hemoglobina, el porcentaje de CPs en mdula
sea, la presencia de hipercalcemia, lesiones lticas
seas, compromiso renal, etc., se utilizan en el
diagnstico diferencial entre estas dos entidades.
Sin embargo, existen casos de MGUS que presentan, por ejemplo, valores de componente-M
mayor de 3 g/dL mantenidos en el tiempo, nivel
utilizado como punto de corte en el caso de la IgG.
Una caracterstica que parece tener importancia
en el diagnstico diferencial es el ndice de proliferacin celular ("labelling index"), que corresponde a la cuantificacin del nmero de CPs en fase
de sntesis de DNA durante el ciclo celular, aunque este mtodo presenta una tasa de falsos negativos elevada (hasta un 30% en la evaluacin de
pacientes con MM). Por ltimo, los niveles de IL6, citoquina relacionada a la proliferacin de las
CPs (ver punto 5), estn incrementados en una
minora de los pacientes portadores de MGUS,
5.9. Enfermedad por cadenas pesadas

Corresponden a enfermedades linfoproliferativas infrecuentes caracterizadas por la produccin monoclonal de Igs que carecen de cadenas
ligeras. El primer reporte fue hecho en un caso de
cadena pesada (enfermedad de Franklin). Sin embargo, dentro de estos sndromes es ms frecuente la enfermedad por cadenas (enfermedad de
Seligmann) la menos frecuente compromete a la
cadena .
Cadenas pesadas
La edad media es de 60 aos y usualmente se
presenta con un cuadro semejante a un linfoma
agresivo, con adenopatas, compromiso del estado general, anemia, fiebre y hepatoesplenomegalia
y raramente a diferencia del MM tradicional- con
lesiones osteolticas. Si bien hay casos de evolucin prolongada, la enfermedad suele cursar agresivamente, con una mediana de supervivencia de
alrededor de 12 meses.
Cadenas pesadas
La mayor parte de los pacientes son de origen mediterrneo, con una presentacin en edades ms precoces que las otras variantes (segunda
a tercera dcada de la vida). La enfermedad com-
471
Sin ttulo-2
471
5/26/06, 10:26 AM
7. PATOGENIA
mientras que se elevan en el 35% a 42% de los

portadores de MM. El patrn inmunofenotpico
evaluado por medio de citometra de flujo presenta menor ndice de error en esta discriminacin;
mientras en el MM las CPs son siempre clonales
en ausencia de CPs normales, en prcticamente el
100% las MGUS es posible demostrar la coexistencia de CPs clonales del todo similares a las
CPs presentes en pacientes con MM- con CPs
policlonales inmunofenotpicamente normales.
Ms an, con este tipo de metodologa es posible
evidenciar la naturaleza aneuploide de las primeras junto a la diploide de las segundas. Resulta
interesante cmo este hecho explicara la diferencia muchas veces utilizada como otro criterio
clnico diferencial- en la presencia de
hipogammaglobulinemia residual en el MM pero
no en las MGUS, que mantienen una produccin
basal normal de inmunoglobulinas por parte de
estas CPs residuales. De cualquier modo, y en un
sentido clnico prctico, es importante sealar que
sigue siendo fundamental el seguimiento clnico
de los pacientes, con mediciones peridicas tanto
de su componente-M como el resto de las
inmunoglobulinas sricas y la evaluacin de posibles sntomas relacionados, para intentar pesquisar los casos de MM verdadero o aquellos casos
de MGUS en transformacin.
7.1. Papel de IL-6 y va de la ciclina D1

Durante la ltima dcada ha quedado demostrado que uno de los factores de crecimiento ms
importantes para las CPs en el MM es la IL-6, que
se acompaa, adems, de un aumento en la expresin de la fraccin soluble de su receptor. El origen de este aumento y su accin es tanto autocrino
(origen en las propias CPs) como paracrino -a partir del estroma medular- y ocurre en respuesta a
otras citoquinas como el TNF o al interfern alfa
(IFN-). As, en etapas iniciales de la enfermedad, las CPs son dependientes de IL-6 para su proliferacin, de modo que la suspensin de esta
citoquina en estudios in vitro se acompaa de una
reduccin en la tasa proliferativa de las clulas
tumorales y de un aumento de su apoptosis. A
medida que la enfermedad avanza, y probablemente como consecuencia de alteraciones adicionales
del ciclo celular, esta dependencia de IL-6 se pierde
y las CPs son capaces de mantener un ritmo
proliferativo elevado an en su ausencia. Recientemente se ha demostrado que los niveles elevados de IL-6 estimulan la expresin de ciclina D1,
con un aumento consecuente en la proporcin de
CPs reclutadas a ingresar al ciclo celular y, por
Tabla 27-4. Criterios diagnsticos de Mieloma Mltiple

Criterios Mayores
Plasmocitoma en biopsia tisular
Plasmocitosis medular 30%
Cuantificacin de la Protena Monoclonal
IgG > 3,5 g/dL
IgA > 2 g/dL
Bence Jones 1g/24h
Criterios Menores
Plasmocitosis medular 10 29%
Protena M presente en niveles inferiores a los descritos en criterios mayores
Lesiones osteolticas
Disminucin en las Inmunoglobulinas no comprometidas en el componente M
IgM < 50 mg/dL
IgA < 100 mg/dL
IgG < 600 mg/dL
El diagnstico se confirma con al menos un criterio mayor y uno menor o tres criterios menores.
472
Sin ttulo-2
472
5/26/06, 10:26 AM
tanto, a un aumento en la proliferacin celular.

Apoyando esta va se ha encontrado una asociacin entre los niveles de expresin de ciclina D1
y la masa tumoral, junto a un incremento en
antgenos asociados a proliferacin celular como,
por ejemplo, Ki67- y a una mayor inmadurez celular. Por el contrario, se ha descrito variantes de
IL-6 con menor afinidad por la gp-130 (constituyente esencial del receptor de IL-6, IL-GR) que
se asocian a un "down regulation" en la expresin
de ciclina D1, lo que se acompaa a su vez de una
menor tasa proliferativa y de un aumento en la
apoptosis en las CPs en lneas celulares. Finalmente, resulta interesante la observacin de que en
casos de MGUS las CPs no tendran niveles
incrementados de IL-6, lo que apoya el papel de
esta va regulatoria en el crecimiento tumoral en
esta enfermedad. A nivel clnico resulta interesante
que la protena C reactiva (PCR) es regulada en
su produccin precisamente por la IL-6, por lo que
la medicin de este marcador se correlaciona con
los niveles de la interleuquina estimuladora y, por
lo tanto, de la actividad tumoral, como ya ha sido
mencionado.
apoptosis en CPs mielomatosas) y disminuye con

niveles elevados de IL-6. Todos estos datos ponen en evidencia la importancia del balance entre
el estmulo proliferativo inducido por citoquinas
particularmente IL-6- sobre la va de las ciclinas,
por un lado, y del efecto contrario dado por las
protenas inhibidoras de estas kinasas como p16
y p21-, por otro, en la regulacin del ciclo celular
en las CPs del MM.
7.3. Apoptosis de CPs
La apoptosis -muerte celular programada- es
un proceso complejo en su regulacin. Una de las
familias de genes ms ampliamente estudiados en
los ltimos aos es la familia de BCL-2, dentro de
la cual existen genes con accin pro-apopttica
(BAX, BCL-X(S)) y otro con funcin antiapoptosis
(BCL-2, BCL-X(L)). En el caso del MM no est
an bien caracterizado el estatus de esta familia
de genes. Sin embargo, se han encontrado diferencias en la expresin de BCL-2 entre CPs de
pacientes con MM y MGUS versus las CPs de
plasmocitosis reactivas, con menor expresin en
estas ltimas y mayor expresin en MM en estadios avanzados. Adems, recientemente se ha reportado que las CPs de MGUS tendran un ndice
apopttico mayor que en casos de MM. Por otro
lado, existe una segunda va de regulacin de
apoptosis en MM aparentemente independiente de
BCL-2, constituida por la va de APO/FAS
(CD95). Al respecto, se ha podido ver que la
apoptosis inducida por el ligando de CD95
(CD95L) se correlaciona con los niveles de CD95
expresados en las CPs en forma independiente del
estatus de BCL-2.
7.2. Genes supresores de tumores

Existen algunas evidencias preliminares sobre el papel de genes supresores en el caso del
MM. As, se ha encontrado mutacin de p53 en
un subgrupo de pacientes, aunque con baja frecuencia. Otro gen supresor es p16, que compite
con la ciclina D1 en su unin a CDK4/CDK6,
inhibiendo la actividad kinasa de este complejo.
Esto resulta en un aumento en la defosforilacin
de pRb (gen de retinoblastoma) y en un aumento
del arresto celular en fase G1 (es decir, limita la
capacidad proliferativa). La inactivacin de este
gen, presente en una serie de tumores, ha sido descrita en algunos casos de MM, tanto a nivel estructural
(cromosmico)
como
por
hipermetilacin, con la consiguiente prdida de
accin represora sobre el complejo ciclina D1/
CDKs, como se ha evidenciado tanto en lneas
celulares de MM como en casos al momento del
diagnstico. Un tercer gen supresor en estudio es
p21, tambin inhibidor de kinasas dependientes
de ciclinas (CDKs) y que contribuyen a mantener
pRb en estado defosforilado. Se ha podido demostrar que en la mayora de los casos de MM este
gen se encuentra expresado en forma constitutiva
y que esta expresin aumenta con el uso de
dexametasona (droga conocidamente inductora de
7.4. Papel del estroma en las discrasias de CPs

Durante los ltimos aos se ha puesto especial nfasis en el papel que parece jugar el estroma
en MM a travs de la accin paracrina de IL-6
(producida por las clulas dendrticas del estroma),
el posible rol de la infeccin por virus Herpes tipo
8, etc., que exceden el propsito de este captulo
pero sobre los que debemos mantener atencin en
los prximos aos.
8. TRATAMIENTO
El detalle del tratamiento en esta enfermedad es complejo y excede los objetivos de esta
473
Sin ttulo-2
473
5/26/06, 10:26 AM
publicacin, por lo que nos remitiremos a un resumen conceptual de los elementos ms importantes:
mdula sea normal.

Dosis altas y trasplante de mdula sea. Dado
que el incremento menor de dosis de agentes
alquilantes no ha logrado un impacto mayor en la
sobrevida de los pacientes, se ha intentado un aumento mayor en dosis capaces de producir aplasia
medular- apoyado por una reconstitucin de la
mdula sea a travs de trasplante de progenitores hematopoyticos autlogos (recolectados del
mismo paciente previamente). As, la experiencia
del grupo francs demostr recientemente que este
tipo de terapia es capaz de lograr una remisin
completa de la enfermedad (ausencia de
plasmocitosis medular y desaparicin del componente M) en hasta un 50% de los pacientes, logrando una significativa mayor sobrevida comparado con dosis convencionales. Esto ha significado que en pacientes jvenes (hasta 60 o incluso
65 aos) con enfermedad agresiva esta sea, actualmente, la alternativa de eleccin en casi todos
los grupos clnicos. Con respecto al trasplante
alogeneico -esto es, a partir de un donante
histocompatible relacionado- la experiencia es menor esencialmente por la edad de la mayora de los
pacientes (lo que disminuye la probabilidad de disponer de un donante) y por la toxicidad propia de
l. Sin embargo, tanto la ausencia de contaminacin tumoral de la mdula sea injertada como el
posible efecto de sta sobre las CPs tumorales
residuales (efecto injerto contra mieloma) han
logrado la curacin de un reducido nmero de pacientes y puede ser una alternativa a evaluar en grupos seleccionados de pacientes.
Terapia de apoyo. Considerando la naturaleza

crnica y hasta ahora no curable de esta enfermedad y las mltiples alteraciones clnicas que puede producir, resulta fundamental la evaluacin
constante y el tratamiento de los dolores seos y
fracturas en hueso patolgico, anemia,
hipercalcemia, etc.
Tratamiento citotxico. Los pacientes inicialmente asintomticos usualmente tienen una masa
tumoral relativamente baja y una velocidad de
progresin lenta. En este grupo no se ha demostrado un beneficio en trminos de mediana de supervivencia con tratamiento citotxico precoz. Por
esta razn en etapas iniciales de la enfermedad
slo est indicado un seguimiento cercano, usualmente evaluando parmetros sencillos como
hemograma y cuanta del componente M mediante una electroforesis de protenas. Por el contrario, en aquellos pacientes sintomticos y/o con
enfermedad de alta masa tumoral o progresiva est
justificado el tratamiento, dado que mejora en forma significativa tanto la calidad como la mediana
de supervivencia. El tratamiento considera dos
formas esencialmente distintas como son:
Dosis convencionales. Las drogas clsicamente
ms utilizadas son la combinacin de Melfaln
(usualmente 0,2 mg/Kg) y Prednisona (usualmente
2 mg/Kg) dados durante 4 das cada 4 a 6 semanas. Esta terapia suele ser relativamente bien tolerada y poco txica y permite un buen control de la
enfermedad tanto en trminos subjetivos como
objetivos. As, alrededor de un 50-70% de los pacientes logra una disminucin en su sintomatologa
despus de 3 a 6 meses de tratamiento, lo que suele acompaarse de una reduccin en la masa
tumoral, pero muy infrecuentemente de una desaparicin del componente M, que se mantiene
evidente en la mayora de los casos. En aquellos
casos que no responden a estas medidas o que se
presentan con alteraciones agudas como insuficiencia renal una segunda alternativa consiste en
quimioterapia endovenosa. Si bien existen diferentes protocolos en este sentido, una de las combinaciones de drogas ms utilizadas son la
Vincristina, Adriamicina y Dexametasona (VAD),
que resulta en un rpido alivio sintomtico en hasta
dos tercios de los casos, con escasa toxicidad a la
Otras drogas. Otras vas teraputicas interesantes de cara al futuro lo constituyen drogas que
modulan la respuesta inmune o la actividad celular como respuesta a las CPs tumorales. En esta
lnea de pensamiento estn drogas como la talidomida, los interferones y la produccin de vacunas
anti-idiotipos especficos para cada paciente, que
por su extensin y complejidad no es posible desarrollar en este captulo.
LECTURAS SUGERIDAS
Hallek, M.; Bergsagel, P.L.; Anderson, K.C.,
Multiple myeloma: increasing evidence for
multistep transformation process, Blood
1998;91:3-21.
474
Sin ttulo-2
474
5/26/06, 10:26 AM
Kawano, M.M.; Mihara, K.; Huang, N. et al.,

Differentiation of early plasma cells on bone
marrow stromal-cells requires interleukin-6 for
escaping from apoptosis, Blood 1995;85:487-94.
Klein, B.; Zhang, X.J.; Lu, Z.Y.; Bataille, R.,
Interleukin-6 in human multiple myeloma,
Blood 1995;85:863-72.
Kyle, R.A., Monoclonal gammapathies en
Clinical Immunology: Principles and Practice,
(Rich, R.R.; Fleischer, T.; Schwartz, B.D.; Shearer,
W.T.; Strober, W., Editores). Mosby-Year Book,
Inc USA, captulo 116, pp. 1801-1811, 1996.
Kyle, R.A., The gammmapathies, Seminars in
Hematology 1995;32(1):4-79.
Kyle, R.A.; Therneau, T.M.; Rajkumar, S.V. et al.,
A long-term study of prognosis in monoclonal
gammopathy of undetermined significance, N
Engl J Med 2002;346:564-9.
Lemoli, R.M.; Martinelli, G.; Zamagni, E. et al.,
Engrafment, clinical and molecular follow -up
of patients with multiple myeloma who were
reinfused with highly purified CD34+ cells to
support
single or tandem high-dose
chemotherapy, Blood 2000;95:2234-9.
Lichstentein, A.; Tu, Y.; Fady, C. et al.,
Interleukin-6 inhibits apoptosis of malignant plasma cells, Cell Immunol 1995;162:248-55.
Longo, D.L., Plasma cell disorders en
Harrisons Principles of Internal Medicine,
14Ed (Fauci, A.S.; Braunwald, E.; Isselbacher,
K.J.; Wilson, J.D.; Martin, J.B.; Kasper, D.L.;
Hauser, S.J.; Longo, D.L., Editores), captulo 114,
pp. 712-718, McGraw-Hill, USA, 1998.
Tricot, G., New insights into role of
microenvironment in multiple myeloma, Lancet
2000;355:248-50.
Vescio, R.A.; Hong, CH.; Cao, J. et al., The
hematopoietic stem cell antigen, CD34, is not
expressed on the malignant cells in multiple
myeloma, Blood 1994;84:3283-90.
475
Sin ttulo-2
475
5/26/06, 10:26 AM
476
Sin ttulo-2
476
5/26/06, 10:26 AM

Captulo 28
ENFERMEDADES ORALES DE ORIGEN
INMUNOLGICO
Benjamn Martnez R.
1. Introduccin
2. Reacciones de hipersensibilidad orales
3. Manifestaciones orales de inmunodeficiencias
3.1. Candidiasis oral en infeccin por
VIH
3.2. Leucoplasia pilosa
3.3. Sarcoma de Kaposi
4. Enfermedades autoinmunes orales
4.1. Sndrome de Sjgren
4.2. lcera oral recurrente (aftas)
477
Sin ttulo-2
477
5/26/06, 10:26 AM
478
Sin ttulo-2
478
5/26/06, 10:26 AM
RESUMEN
La mucosa oral, inclusive la enca, puede presentar distintas lesiones de origen inmunolgico,
ya sea expresin por inmunodeficiencias, reacciones de hipersensibilidad, o manifestaciones de
enfermedades autoinmunes. Muchas otras enfermedades bucales tienen participacin del sistema inmune (por ejemplo las enfermedades periodontales tales como periodontitis y gingivitis)
pero solamente nos referimos en este captulo a aquellas que tienen un origen netamente
inmunolgico, algunas de ellas son muy frecuentes en la poblacin como son las aftas (vulgarmente llamadas "fuegos"), otras ocasionan complicaciones bucales severas (sndrome de Sjgren)
y otras han adquirido gran importancia en los ltimos aos (Sida y sus manifestaciones bucales).
roja o mezcla, blanco y roja, roja y ulceracin.

Las sustancias causales de hipersensibilidad,
pueden ser cualquier sustancia que est o no en
contacto con la mucosa oral, y la gran mayora
provocan una hipersensibilidad tarda o tipo IV
de la clasificacin de Gell y Coombs. Es muy raro
encontrar otro tipo de reaccin de hipersensibilidad en boca, tal como la reaccin I o anafilctica,
pero las tipos II y III prcticamente no se presentan en mucosa oral.
La reaccin de hipersensibilidad tipo IV (ver
captulo 21) es desencadenada en la boca por diversas sustancias tales como las que se encuentran en obturaciones de dientes como por ejemplo
componentes de las amalgamas (plata, mercurio,
estao, cobre), de prtesis dentarias (nquel, cromo, cobalto), de otras coronas dentarias (nquel,
paladio), o sustancias en contacto con la mucosa,
que pueden ser alimentos (naranja, chocolate,
nuez, almendra, flor presente en el agua, etc.).
Tambin cosmticos tales como lpiz labial. Para
establecer el diagnstico es necesario solicitar test
de hipersensibilidad a materiales dentales y alimentos. En el caso del producto dental al cual el
paciente pudiera haberse sensibilizado, debiera ser
reemplazado, por ejemplo las amalgamas por resinas, coronas de metales no nobles por metales
nobles. En general la cermica es muy poco
alergizante y pudiera preferirse en estos pacientes
pero tiene un costo elevado, la otra alternativa son
resinas compuestas pero tambin se ha descrito
hipersensibilidad a este material. En el caso de los
alimentos slo nos queda aconsejar que el paciente evite ingerir dicho alimento. En alergias a pr-
1. INTRODUCCIN
Muchas de las enfermedades de la boca, incluyendo las que comprometen dientes, huesos
maxilares, mucosa oral y glndulas salivales, tienen un componente inmunolgico que puede explicar su origen, la forma como se desarrollan,
cmo se defiende el organismo ante ellas, o por
qu algunos pacientes presentan grados leves y
otras grandes alteraciones. El gran avance experimentado por la inmunologa bsica no ha dejado
de afectar el mejor conocimiento que se tiene de
enfermedades tales como caries, quistes de los
maxilares, cncer oral y aftas.
Indudablemente que no se puede revisar todas las enfermedades de la boca en un captulo,
por lo cual hemos seleccionado aquellas condiciones patolgicas ms interesantes para el
inmunlogo clnico y que pueden estar comprometiendo la boca. En este captulo se describirn
las manifestaciones orales de enfermedades de
origen inmunolgico; se han agrupado en reacciones de hipersensibilidad, enfermedades
autoinmunes e inmunodeficiencias.
2. REACCIONES DE HIPERSENSIBILIDAD ORALES

Las reacciones alrgicas no son extraas de
presentarse en la mucosa oral, y lamentablemente
muchas veces no son reconocidas por el especialista, ya que adoptan un aspecto clnico variado el
cual puede ser una lcera, vescula, lesin blanca,
479
Sin ttulo-2
479
5/26/06, 10:26 AM
tesis metlicas dentales, o pacientes con alergia a

nquel y que poseen en la boca prtesis metlicas,
la alternativa es usar implantes de titanio, las que
tienen un elevado costo.
Las manifestaciones clnicas que se pueden
observar en pacientes con alergias a productos dentales son variadas: lceras mltiples en boca, que
aparecen constantemente, similares a lceras orales recurrentes; lesiones dolorosas, con lceras que
son de dos a seis u ocho milmetros, rodeadas por
halo rojizo, que aparecen constantemente. Esto no
significa que las aftas (tambin llamadas lceras
orales recurrentes) sean de origen alrgico, pero
s en algunos pacientes puede demostrarse una
causa de hipersensibilizacin, y estos pacientes se
pueden mejorar por completo de sus lceras. Las
aftas (ver punto 4.1) no tienen una etiologa clara
pero se cree que diversos factores inmunolgicos,
tales como inmunodeficiencia celular, u otros pueden contribuir a su desarrollo como estrs, factores hormonales, alimentos, alteraciones
hematolgicas, y puede que en muchos pacientes
coincidan varios factores. Existe casi completa
unanimidad respecto a que la causa no es viral,
bacteriana o de origen microbiolgico.
Existen pacientes que presentan lesiones de
hipersensibilidad en contacto con amalgamas, o
grandes obturaciones, en estos casos las lesiones
han sido llamadas reacciones liquenoides, y se han
confundido frecuentemente con liquen plano. El
aspecto clnico de estas lesiones son manchas rojas con halo blanquecino, o estras blancas en la
periferia (estras de Wickham descritas en liquen
plano). Ambas lesiones han sido difciles de distinguir ya que ni clnica ni histolgicamente pueden diferenciarse por completo; la evaluacin del
paciente, en conjunto con la biopsia de la lesin,
el test de hipersensibilidad y la evolucin pueden
llevar a establecer su origen, y su mejor tratamiento. El liquen plano tiene un componente
psicosomtico importante y muchos pacientes tienen cancerofobia al igual como ocurre en el sndrome de boca urente, entidad en la cual se examina al paciente y no se encuentra ninguna alteracin patolgica, pero el paciente se queja de ardor
en lengua, labios y a veces en mejillas. Estos pacientes en raras ocasiones pueden tener el sndrome de boca urente por hipersensibilidad y, por lo
tanto, es conveniente descartar los agentes que se
han mencionado anteriormente.
Como se ha sealado a veces los pacientes
con reacciones de hipersensibilidad orales pueden
presentar lceras tipo aftas, otros presentan lesio-
nes idnticas o similares a liquen plano, otras lesiones blancas tipo leucoplasias, o rojizas tipo
candidiasis eritematosa, o sndrome de boca urente
y que corresponden a hipersensibilidad. El tratamiento debe iniciarse despus que se ha establecido el agente al cual se ha sensibilizado el paciente, suprimir dicha sustancia y en caso de ser
necesario administrar corticoides va sistmica o
tpica, logrndose un rpido alivio.
3. MANIFESTACIONES ORALES DE
INMUNODEFICIENCIAS
La mayora de los pacientes con inmunodeficiencias presenta lesiones orales en algn momento de su evolucin, desde inmunodeficiencias
inespecficas, a inmunodeficiencias celulares o
humorales. Debido a la importancia de la infeccin por HIV slo se describir sta (ver captulo
30).
Desde el inicio de la epidemia por HIV se ha
observado frecuentemente el compromiso de la
boca por diferentes infecciones oportunistas especialmente ocasionadas por hongos (Cndida) y
virus (Epstein-Barr, Herpes). Adems de la importancia que existe en reconocer o detectar un
individuo infectado, lo cual eventualmente se puede realizar por las manifestaciones que se observan en la boca, tambin es importante diagnosticar y tratar adecuadamente las lesiones que se presentan ya que pueden ser causa de severa
morbilidad.
Otro aspecto importante en las lesiones
bucales asociadas con HIV, es que algunas de ellas
estn asociadas con una evolucin ms corta, en
otras palabras, cuando se presenta candidiasis y
leucoplasia pilosa, se ha observado que los individuos HIV positivos con dichas lesiones llegan
antes a SIDA.
Clasificacin de las lesiones orales asociadas con infeccin por HIV (como fue acordado en
la Reunin del Grupo de Clasificacin de la C.E.E.
para los problemas orales relacionadas con la infeccin por HIV, realizada en Londres, en septiembre de 1992). Todas las lesiones en los tres Grupos aparecen en orden alfabtico.
3.1. Candidiasis oral en infeccin por VIH
La infeccin por HIV frecuentemente, ya sea
en individuos asintomticos o con SIDA, se acompaa frecuentemente de infeccin por Cndida en
480
Sin ttulo-2
480
5/26/06, 10:26 AM
Tabla 28-1. Clasificacin de las lesiones orales en la infeccin por HIV

_____________________________________________________________________________________
Grupo I. Lesiones fuertemente asociadas con infeccin por HIV
Candidiasis: Eritematosa, Seudomembranosa
Enfermedad periodontal: Eritema gingival linear, Gingivitis Necrotizante (ulcerativa),
Periodontitis Necrotizante (ulcerativa)
Leucoplasia pilosa
Linfoma no Hodgkin
Sarcoma de Kaposi
Grupo II. Lesiones menos frecuentemente asociadas con infeccin por HIV
Estomatitis necrotizante (ulcerativa)
Enfermedad de Glndula salival
Boca seca por disminucin de flujo salival
Tumoracin uni o bilateral de glndulas salivales mayores.
Hiperpigmentacin melantica
Infecciones bacterianas: Mycobacterium avium-intracelular, Mycobacterium tuberculosis
Infecciones virales: Virus Herpes simplex, Virus Papiloma humano (lesiones tipo verrugas),
Condiloma acuminado, Hiperplasia epitelial focal, Verruga vulgar, Virus varicela
zoster, Herpes zoster, Varicela
Prpura trombocitopnica
Ulceracin NOS (Sin otra especificacin, del ingls: "Not Otherwise Specified")
Grupo III. Lesiones observadas en la infeccin por HIV
Aftas recurrentes
Alteraciones neurolgicas: Parlisis facial, Neuralgia del trigmino
Angiomatosis epitelioide (bacilar)
Enfermedad por araazo de gato
Infecciones bacterianas: Actinomices israelii, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae,
Infecciones por hongos diferentes de candidiasis: Cryptococcus neoformas,
Geotrichum candidum, Histoplasma capsulatum, Mucoraceae (mucormicosis/
cigomicosis), Aspergillus flavus
Infecciones virales: Citomegalovirus, Molusco contagioso
Reacciones a drogas (ulcerativa, eritema multiforme, liquenoide, epidermolisis txica).
_____________________________________________________________________________________
la boca. Esta candidiasis puede ser eritematosa,

como al parecer, empieza en muchos casos, con
enrojecimiento del paladar duro y dorso de lengua, en la cual se observa rea depapilada hacia el
centro de ella, generalmente indolora. En la variedad seudomembranosa se presentan manchas
blanquecinas, que se pueden desprender al raspado, dejando una superficie rojiza, a veces sangrante. Mucho menos frecuente es la variedad
hiperplsica, que generalmente ocurre en cara interna de mejillas. La otra forma de candidiasis, es
queilitis angular, como zona descamativa en las

comisuras, con enrojecimiento. Cuando se observe alguna de estas presentaciones de candidiasis
en un individuo joven y no hay algn factor
predisponente sistmico o localizado para explicar la presencia del hongo en la boca, debiera
solicitarse exmenes para descartar la infeccin
por HIV. Los factores que favorecen el desarrollo
de la candidiasis bucal son muchos, y entre ellos
destacan los siguientes: ingestin previa de
antibiticos o corticoides, dficit nutricionales,
481
Sin ttulo-2
481
5/26/06, 10:26 AM
alteraciones endocrinas, neoplasias malignas, y

otras alteraciones inmunolgicas distintas de la
ocasionada por HIV. La candidiasis tambin es una
condicin frecuente en los extremos de la vida,
recin nacidos y ancianos, portadores de prtesis
(especialmente de acrlico), e individuos con
xerostoma (sequedad de la boca). Se ha demostrado que individuos con HIV, asintomticos, y
que presentan candidiasis, desarrollarn signos
de SIDA al cabo de tres meses, en el 59% de ellos.
Tambin se sabe que cerca del 70% de individuos
con candidiasis oral tienen recuento de LT CD4
menor a 200 clulas/L. El diagnstico de la
candidiasis generalmente se puede realizar por su
aspecto clnico, pero se puede complementar con
frotis y tincin de PAS, o cultivo. El tratamiento
de la candidiasis oral es generalmente tpico:
nistatina, de 500.000 UI, tres o cuatro veces al da
(disolver y despus ingerir), ojal que por lo menos durante un mes en individuos HIV positivos o
con SIDA. Pueden utilizarse otros antimicticos
tal como fluconazol pero es ms costoso.
generalmente se presenta en el paladar duro, como

una mancha violcea o rojiza de lmite difuso, indolora, que en el 20% de los casos puede ser la
primera manifestacin. Esta neoplasia a veces presenta un aspecto tumoral, pero muchas veces se
observa como una mcula rojiza. En el primer caso
tiene un pronstico peor. La casi totalidad de casos observados en Chile, con SK, han sido hombres homosexuales, y al parecer es raro de observar en otros grupos de riesgo. Este tumor es
multifocal y en la boca puede observarse varias
lesiones en paladar y/o enca, aunque lo ms frecuente es que el paciente tenga otras lesiones en
la piel de las extremidades superiores, trax, o piel
de la cara. Histolgicamente este tumor presenta
una proliferacin de clulas fusadas, ms o menos arremolinadas, con formaciones de mltiples
espacios vasculares, con clulas endoteliales
atpicas, y abundante hemorragia antigua y reciente. Lamentablemente cuando se observa, son pocos los meses de vida que le quedan al paciente, y
es tambin poco lo que se puede hacer, a no ser
que el paciente est en un programa intensivo de
terapia anti-retroviral.
3.2. Leucoplasia pilosa

En 1984 Greenspan y colaboradores describieron esta nueva lesin en patologa bucal, la cual
es una mancha blanca, corrugada en el borde de
lengua, bilateral, que no se desprende al raspado y
ocasionada por el virus Epstein-Barr (VEB) que se
observa ms frecuentemente en individuos HIV
positivos, pero que tambin ha sido descrita en otras
inmunodeficiencias. Esta mancha blanca tambin
se caracteriza porque se encuentran hifas de cndida en la superficie, pero es de origen viral, observndose en las biopsias, hiperplasia epitelial, con
marcada paraqueratosis, clulas similares a
coilocitos (en ellas se puede demostrar presencia
de viriones de VEB), de citoplasma claro con cuerpos de inclusin intranucleares, acantosis, y ausencia de infiltrado inflamatorio. El diagnstico de esta
lesin tambin puede realizarse con frotis citolgico
teido con Papanicolau. Esta lesin no requiere tratamiento, pero se ha observado que desaparece con
algunos antivirales, y su importancia es que est
asociada a HIV en la mayora de los pacientes, y
que en aquellos casos que se presenta, se observa
una evolucin a SIDA ms rpida.
4. ENFERMEDADES AUTOINMUNES
ORALES
Las enfermedades autoinmunes pueden afectar la boca, y la ms conocida de ellas es el Sndrome de Sjgren, pero existen muchas otras que
provocan lesiones severas como son el pnfigo,
penfigoide, y en otras que la posible naturaleza de
la lesin se cree que es autoinmune. A continuacin se describirn el Sndrome de Sjgren y las
aftas, debido a que son las ms frecuentes en la
poblacin.
4.1 Sndrome de Sjgren
El Sndrome de Sjgren (SS) consiste en una
trada de xerostoma, queratoconjuntivitis sicca
(sequedad de la conjuntiva ocular) y otra enfermedad autoinmune, la mayora de las veces Artritis reumatodea. Cuando se presenta sin otra
enfermedad autoinmune se conoce como "Sndrome Sicca", o SS primario, y el otro caso SS
secundario, o sea con artritis reumatodea. Para
establecer el diagnstico de (SS), segn criterio
europeo, deben presentarse 4 de las 6 siguientes
caractersticas, siendo requisito la presencia de
(d) (e).
3.3. Sarcoma de Kaposi

El Sarcoma de Kaposi (SK) es la neoplasia
intraoral ms comn que se observa en el SIDA y
482
Sin ttulo-2
482
5/26/06, 10:26 AM
salivales, especialmente de la partida.

Adems del criterio europeo para el diagnstico de SS, existe el llamado de San Diego, en que
el diagnstico se basa en presencia de hallazgos
objetivos (compromiso ocular: test de Schirmer o
rosa de bengala; compromiso oral: flujo salival,
sialografa, scintigrafa), y debe incluir biopsia de
glndulas salivales labiales, y adems estudio
serolgico positivo (SS-A, SS-B, FR, ANA).
Para establecer el compromiso ocular se puede evaluar el flujo de las glndulas lacrimales con
el test de Schirmer (explicacin en el punto C).
En cuanto a la xerostoma debe medirse el flujo
salival, el cual en estos pacientes se hace normalmente con estimulacin con cido ctrico al
5%. De ayuda es la biopsia de glndulas salivales
menores, normalmente de cara interna del labio
inferior, donde se toman tres o cuatro lobulillos
glandulares y se demuestra infiltrado focal
linfocitario (ms de un foco con 50 clulas
mononucleares, principalmente linfocitos),
periductales, que causan reemplazo de acinos glandulares. Otro estudio que se puede hacer es la
sialografia (inyeccin de medio de contraste, especialmente en partidas), aunque en la actualidad se prefiere la cintigrafa de las gldulas
salivales. Tiende a utilizarse cada vez ms el estudio de anticuerpos: SS-A, el cual est presente en
el 70-80% de los pacientes con SS primario y
menos del 10% de SS secundario. El anticuerpo
SS-B, por otra parte se encuentra en el 50-70% de
los SS primarios y menos del 5% de los casos secundarios.
La causa del SS es desconocida, pero pueden existir algunos factores genticos y ltimamente se cree que puede estar relacionado a infeccin por VEB. Cerca del 80 a 90% de los casos
se observan en mujeres, cercanas a los 40 aos, y
en 15% de los pacientes que tienen artritis
reumatodea se observa SS. El principal sntoma
oral es la xerostoma, causada por la disminucin
de la saliva, que a su vez ocasiona fcilmente infeccin por Cndida, en la mucosa del paladar y
dorso de lengua, y tambin queilitis angular. Muchas veces la lengua, especialmente en casos avanzados, se observa depapilada, y que arde. La falta
de saliva tambin favorece el desarrollo de caries
cervicales, dificulta la alimentacin, e impide el
uso adecuado de prtesis removibles. Cerca de un
tercio de los pacientes pueden tener tumoracin
de las partidas en el curso de la enfermedad, generalmente bilateral pero no dolorosa, y recurrente. Debido a la xerostoma no es infrecuente que
a) Uno de tres sntomas oculares

Ha tenido durante los ltimos tres meses, en
forma persistente, molestias por sus ojos secos?
Tiene en forma recurrente sensacin de arenilla en los ojos?
Utiliza sustitutos de lgrimas ms de tres
veces al da?
b) Uno de tres sntomas bucales
Ha tenido durante los ltimos tres meses, en
forma persistente, sequedad de la boca?
Ha tenido tumoracin recurrente o persistente
de sus glndulas partidas?
Frecuentemente toma lquidos para poder
deglutir alimentos secos?
c) Test de Schirmer (menor o igual a 5 mm/5
min). El test de Schirmer es un test
oftalmolgico para la evaluacin de la produccin de lgrimas, en el cual se coloca un
papel filtro en ambos ngulos internos del ojo
y se observa su humectacin al cabo de 5 minutos. Si ella es menor o igual a 5 mm es sugerente de xeroftalma y podra estar asociada a sndrome de Sjgren, aunque existen
muchas causas de ella al igual que en la
xerostoma. El valor normal es de 10 mm de
humedad para cada ojo despus de 5 minutos.
d) Biopsia de glndula salival labial con score
mayor o igual a 1 foco/mm2 (Un foco: infiltrado de al menos 50 linfocitos periductales).
e) Positivo para alguno de los siguientes
autoanticuerpos: Factor reumatodeo (FR),
Anticuerpos antinucleares, (ANA), SS-A, SSB
f)
Positivo en alguno de los siguientes exmenes: cintigrafa, sialografa, flujo salival no

estimulado.
El SS es ms comn en mujeres, y muchos

pacientes se presentan con sntomas artrticos. La
queratoconjuntivitis se manifiesta como sequedad
y sensacin de arenilla en los ojos. Las principales caractersticas orales son: disminucin de la
saliva, dificultad en la deglucin y masticacin,
anomalas en la sensacin del gusto y una mucosa
oral lisa y lustrosa. Algunos pacientes pueden presentarse con tumoracin bilateral de las glndulas
483
Sin ttulo-2
483
5/26/06, 10:26 AM
cervicales y enfermedad periodontal.
se produzca adems la infeccin glandular. La

sialografa, inyeccin de medio de contraste en el
conducto de Stensen, permite detectar sialectasia
puntiforme y no se observa la trama ductal normal, por lo que se observa un aspecto de "cerezo
en flor" o de "frutos sin ramas", pero lo ms importante es determinar la presencia de zonas
radiopacas de ms de 2 mm. Tambin con
cintigrafa de Tecnecio 99 se puede demostrar retardo en la captacin y retardo en el vaceamiento.
El paciente con SS tambin presenta
queratoconjuntivitis, y generalmente ms que el
dentista, es el oftalmlogo quien realiza o sospecha primero del diagnstico. La queratoconjuntivitis es debido a la xeroftalma, falta de lgrimas, y en el SS no slo estas glndulas estn afectadas sino tambin otras como las que se encuentran en cualquier mucosa (respiratoria, esfago,
genital, etc.). Las manifestaciones oculares son
menores en la maana y aumentan en la tarde, con
sensacin de arenilla, o cuerpo extrao en los ojos.
En los exmenes de laboratorio se observan
una serie de alteraciones tales como aumento de
la velocidad de sedimentacin, aumento de los niveles de inmunoglobulinas, especialmente IgG. El
estudio de autoanticuerpos puede ser de utilidad y
en los ltimos aos se est utilizando el factor
reumatodeo, positivo en el 75% de los casos. AntiSS-A y anti-SS-B, son dos anticuerpos que se encuentran especialmente en pacientes con SS primario.
La histopatologa demuestra que todas las
glndulas salivales estn afectadas, y por esta razn se utiliza biopsia de glndulas salivales menores, especialmente desde la cara interna del labio inferior, de donde se extirpan tres a cinco
lobulillos glandulares, y si se encuentran focos de
linfocitos y plasmocitos con 50 o ms clulas cada
uno, se confirma el diagnstico de SS (en una rea
de 4 mm2 de tejido glandular). Entre ms focos de
clulas inflamatorias se observn ms severo es
el cuadro, y dichos focos se asocian con un mayor
reemplazo de acinos, mayor fibrosis y enfermedad ms severa.
El tratamiento del SS es de apoyo en base a
lgrimas y saliva artificiales, ya que no existe ningn tratamiento definitivo. Los sialogogos tales
como pilocarpina pueden estimular la secrecin
salival. Tambin se utilizan corticoides pero el tratamiento debe realizarlo el mdico reumatlogo.
El dentista puede colaborar evitando, tratando o
ayudando a prevenir las complicaciones que aparecen en la boca, tales como candidiasis, caries
4.2 lcera oral recurrente (aftas)

a) Etiopatogenia
La lcera oral recurrente, afta, o estomatitis
aftosa recurrente, y vulgarmente llamada "fuego",
constituye una alteracin de la mucosa de revestimiento de la boca. Diferentes estudios han demostrado una frecuencia entre 5 y 66% de la poblacin, dependiendo del grupo en estudio. La mayora de los autores distingue factores predisponentes y factores etiolgicos en el origen del afta.
Pero la realidad hasta el momento es que la etiologa exacta en la mayora de los casos no se establece, por lo cual es difcil tratar de explicar cmo
diferentes factores etiolgicos pueden llegar a ocasionar la ruptura del epitelio, y especialmente en
algunas ubicaciones de la boca, tal como en fondo de vestbulo, cara interna de los labios, piso de
boca, paladar blando, o sea donde se encuentra la
denominada mucosa de revestimiento, pero generalmente no se presentan estas lceras en la mucosa del dorso de la lengua, la enca o el paladar
duro. De todas maneras para entender mejor como
ocurre esta lesin es importante revisar los factores predisponentes, que en muchos casos puede
explicar el origen del afta y demostrar en algunos
casos factores que pueden corregirse y mejorar o
disminuir la frecuencia de las lceras. La mayora
de los pacientes que presentan aftas son en general sanos, pero debe recordarse que a veces se asocia esta lesin con algunas condiciones generales
tales como la enfermedad de Behet, neutropenia
cclica, sndrome de faringitis y fiebre peridica,
dficit nutricionales, alteraciones gastrointestinales tales como colitis ulcerativa, enfermedad
de Crohn, y en algunas inmunodeficiencias incluyendo SIDA.
Varios estudios han demostrado, especialmente en Inglaterra y Estados Unidos, dficit de
fierro, cido flico, o vitamina B12, y se estima
que aproximadamente el 20% de los pacientes con
aftas presentan este tipo de alteraciones. Debe
sospecharse de dichas alteraciones en pacientes
con aftas que empeoran, o sea que presentan las
lceras cada vez con ms frecuencia o mayor grado de severidad.
Algunos pacientes con aftas correlacionan la
presencia de las lceras con algunos alimentos,
no existen publicaciones con suficiente nmero
de casos que corroboren dicha aseveracin, y ra-
484
Sin ttulo-2
484
5/26/06, 10:26 AM
ramente cambios en la dieta alimenticia producen

algn beneficio. Tambin existe la posibilidad de
reaccin de hipersensibilidad a algn antgeno, que
estara ocasionando probablemente un cuadro similar a dermatitis por contacto, o de atopia en algunos pacientes. En algunas mujeres se ha observado que las aftas tienen un ciclo relacionado con
la fase ltea del ciclo menstrual, presumiblemente
asociado con los cambios en los niveles de
progestgenos. Tambin existen factores locales
que predisponen a la aparicin de las aftas tales
como trauma y en algunas personas predispuestas
a la aparicin de estas lesiones, un trauma mnimo puede desencadenar la lesin, en una mucosa
no queratinizada; esto se relaciona tambin con la
menor frecuencia de aftas que ocurre en fumadores, y la ausencia casi completa de lceras en la
mucosa oral queratinizada. De todas maneras es
claro que las aftas y su etiologa fundamental no
est an clara, y en la actualidad la mayora de los
autores concuerda que existe una alteracin mediada por un mecanismo inmunolgico, pero no
existe tampoco acuerdo del mecanismo
inmunopatognico que ocasiona la ulceracin, que
explique la intermitencia de las lesiones, la naturaleza autolimitante de las lceras, y la falta para
responder ante drogas inmunomoduladoras.
Los estudios histopatolgicos y mediante tcnicas de inmunohistoqumica han permitido demostrar la presencia de linfocitos grandes
granulares (clulas NK) y de linfocitos TCD4+,
en la etapa pre-ulcerativa, mientras que la fase de
ulceracin est asociada con la aparicin de
linfocitos TCD8+, y estos son reemplazados por
clulas TCD4+, en la fase de reparacin. Tambin
se encuentran neutrfilos, pero a diferencia de la
enfermedad de Behet donde ellos estn
hiperactivos, en el afta no se observa alteracin
en la funcin quimiotctica. En la fase ulcerativa
los antgenos HLA de clase I y II se encuentran en
las clulas basales del epitelio y posteriormente
en todos los estratos epiteliales debido probablemente a interfern gamma (IFN) liberado por los
linfocitos T. Estos antgenos pueden servir as de
target para que las clulas epiteliales sean atacadas por linfocitos CD8+, y es posible observar en
biopsias de pacientes con aftas la presencia, ms
all de lo normal, de linfocitos intraepiteliales, en
el estrato espinoso. De todas maneras el mecanismo inmune, que inicialmente se crey que era
mediada por clulas, parece ser ms probable que
involucre un mecanismo de citotoxicidad celular
dependiente de anticuerpos mediada por linfocitos
B, con participacin de complejos inmunes, que

incluso se ha observado elevados en algunos pacientes, pero no precisamente en aquellos que tienen aftas menores. Se ha observado depsito de
complejos inmunes en biopsias, a nivel del estrato espinoso, y hay algunas evidencias de vasculitis
por complejos inmunes que conlleva un deposito
de inmunoglobulinas y complemento.
Uno de los aspectos que durante muchos aos
se ha investigado es la asociacin del afta con algn microorganismo, especialmente de origen
bacteriano, y en concreto del grupo de los
estreptococos, ya sea como patgeno directo o
como estmulo antignico que llevara a la generacin de anticuerpos que podran tener una reaccin cruzada con el epitelio. Inicialmente en el ao
1963 se demostr que sera un Streptococcus
sanguis pero posteriormente se seal que sera
de la cepa Streptococcus mitis, pero estudios siguientes no han demostrado que haya diferencias
entre los sujetos con aftas y controles en cuanto a
su respuesta mitgenica linfocitaria. No se ha demostrado la presencia de antgenos y viriones del
virus herpes en el afta y es claro que los tratamientos del afta que han empleado antivirales no
tienen ningn beneficio.
b) Caractersticas clnicas
Las lceras orales recurrentes pueden
clasificarse, de acuerdo a Lehner, en afta menor,
afta mayor y lceras herpetiformes. La asociacin
con lesiones extraorales de cualquiera de las variedades anteriores, en la cual se observa compromiso de mucosa genital, piel, y a veces articulaciones y alteraciones neurolgicas se denomina
sndrome Behet.
Debido a que no hay ningn otro medio para
hacer el diagnstico del afta, diferente del reconocimiento de sus caractersticas clnicas, es extremadamente importante que el clnico que examina la mucosa bucal, establezca este diagnstico correctamente. Esta lesin se caracteriza por la
recurrencia de una o ms lceras de forma redondeada, dolorosa, a intervalos de unos pocos das o
de meses. Generalmente se inicia en la niez o
adolescencia y persiste durante varios aos.
Lamentablemente no existen suficientes publicaciones que permitan caracterizar los distintos aspectos clnico-patolgicos de las distintas variedades de afta y en general uno encuentra publicaciones que relatan caractersticas para todos los
tipos de aftas y parecera conveniente investigar
485
Sin ttulo-2
485
5/26/06, 10:26 AM
si existen algunos factores importantes en la etiologa, la histopatologa y el tratamiento en los distintos tipos de aftas.
LECTURAS SUGERIDAS
Daniels, T.E., Sjgren's syndrome: clinical
spectrum and current diagnositic controversies,
Adv Dent Res; 10: 3-8, 1996.
Afta menor. Es la variedad ms comn, cerca del

80% de todas las lceras orales recurrentes, y se
caracteriza por lceras, entre 1 y 5, redondas u
ovaladas de menos de 10 mm de dimetro con una
seudomembrana blanco-griscea y rodeada por un
halo eritematoso. Generalmente este tipo de lcera se presenta en cara interna del labio, mejilla y
piso de boca, y excepcionalmente puede encontrarse en la enca y el dorso de la lengua. Estas
lesiones sanan dentro de 10-14 das sin dejar cicatriz. Al parecer esta variedad es un poco ms frecuente en mujeres. Muchas veces antes de presentarse existe una fase prodrmica caracterizada por parestesia en el sitio que posteriormente
aparece la ulceracin.
Daniels, T.E., Fox, P.C., Salivary and oral

components of Sjgren's syndrome, Rheum Dis
Clin North Am.; 18:571-589, 1992.
Eversole, L.R., Viral infections of the head and
neck among HIV- seropositive patients, Oral Surg
oral Med Oral Pathol; 73: 155-163, 1992.
Fox, R.I., Guest Editor in Sjgren's Syndrome,
Rheumat Dis Cl N Am; 18: 507-711, 1992.
Glick, M. et al., Oral manifestations associated
eith HIV disease as markers for immune
suppression and AIDS, Oral Surg Oral Med Oral
Pathol; 69:683-687, 1993.
Afta mayor. Son lceras muy dolorosas, pero afortunadamente menos frecuentes que el afta menor.
El paciente generalmente tiene entre 1 y 10 lceras, miden entre 10-30 mm y tambin recidivan
con frecuencia. Afectan especialmente el paladar
blando, mejillas, cara interna de los labios, pudiendo demorar hasta 6 semanas en sanar y dejando
una cicatriz a diferencia de lo que ocurre en el
afta menor. Esta lcera se puede distinguir del afta
menor, adems del tamao, por que tiene un aspecto crateriforme, y tendencia a presentar bordes levantados, y al igual que el afta menor tambin tiene un exudado fibrinoso amarillento-grisceo, y una periferia rojiza.
Glick, M., Dental Management of patients with

HIV, Quintessence, Chicago, 1994.
Greenspan, J.S., Greenspan, D., Oral hairy
leukoplakia: diagnosis and management, Oral
Surg Oral Med Oral Pathol; 67: 396-403, 1989.
Greenspan, J.S., Greenspan, D., Oral
Manifestations of HIV Infection, Quintessence,
Chicago, 1995.
Greenspan, D.; Greenspan, J.S.; Pindborg, J.J.;
Schiodt, M., AIDS and the Dental Team.
Munskgaard, Copenhagen, 1986.
lceras herpetiformes. Esta variedad de lcera

tiene una frecuencia similar con el afta mayor. Se
caracteriza por la presencia de hasta 100 lceras
pequeas, que pueden afectar de preferencia la mucosa de revestimiento, y ocasionalmente otras zonas, y se inicia como pequeas lceras del tamao de una cabeza de alfiler, que pueden ir aumentando de tamao y coalesciendo entre ellas. Puede haber una permanencia de las lceras en la cavidad oral, pero generalmente sanan a los 14 das.
A veces puede haber disfagia, y al igual que en el
afta mayor, podra haber perdida de peso por la
dificultad para alimentarse.
Hajishengallis, G., Michalek, S.M., Current status of a mucosal vaccine against dental caries,
Oral Microbiol Immunol; 14:1-20, 1999.
Hooks, J.J. et al., Classification, pathogenesis and
etiology of recurrent oral ulcerative diseases and
Behcet's syndrome, J Oral Pathol; 7: 436-438,
1978.
Klein, R.S. et al., Oral candidiasis in high-risk
patients as the initial manifestation of the acquired
immunodeficiency syndrome, N Eng J Med;
311:354-358, 1984.
McCartan, B.E., McCreary, C.E., Oral lichenoid
drug eruptions, Oral Dis; 3:58-63, 1997.
486
Sin ttulo-2
486
5/26/06, 10:26 AM
Rogers, R.S., Recurrent aphthous stomatitis:

clinical characteristics and evidence for
immunopathogenesis, J Invest Dermatol; 69:
499-501, 1977.
Scully, C., Porter, S.R., Recurrent aphthous
stomatitis: current concepts of etiology,
pathogenesis and management, J Oral Pathol
Med; 18: 21-27, 1989.
Scully, C., Sjgren's syndrome: Clinical and
laboratory features, immunopathogenesis and
management, Oral Surg Oral Med Oral Pathol;
62:510-523, 1986.
Tenovuo, J., Antimicrobial function of human
saliva-how important is it for oral health?, Acta
Odontol Scand; 56:250-6, 1998.
Vitali, C.; Bombarieri, S.; Moutsopoulos, H. et al.,
Preliminary criteria for the classification of
Sjgren's syndrome. Results of a prospective
concerted action supported by the european
community, Arth Rheumat; 36: 340-348, 1993.
487
Sin ttulo-2
487
5/26/06, 10:26 AM
488
Sin ttulo-2
488
5/26/06, 10:26 AM

Captulo 29
OTRAS ENFERMEDADES INMUNOMEDIADAS
Cecilia Seplveda C.
1. Introduccin
2. Algunas enfermedades inmunomediadas
2.1. Lupus eritematoso sistmico
2.2. Artritis reumatoidea
2.3. Enfermedades mediadas por anticuerpos
2.4. Otras enfermedades
489
Sin ttulo-2
489
5/26/06, 10:26 AM
490
Sin ttulo-2
490
5/26/06, 10:26 AM
RESUMEN
Un grupo heterogneo de enfermedades es mediado por mecanismos inmunes. Dicha respuesta inmune puede estar dirigida contra antgenos ajenos al organismo o propios.
Entre las enfermedades autoinmunes, el Lupus Eritematoso Sistmico (LES) es una de las
ms caractersticas y afecta principalmente a las mujeres. Se caracteriza por ser rgano inespecfica
y en su patogenia participan complejos inmunes.
Otras enfermedades inmunomediadas, de las que se describe el mecanismo fisiopatolgico
en este captulo, son: Artritis reumatoidea, Anemia hemoltica autoinmune, Sndrome de Good
Pasteure, Enfermedad de Graves y Miastenia gravis.
1. INTRODUCCIN
2. ALGUNAS ENFERMEDADES INMUNOMEDIADAS
Las enfermedades mediadas inmunolgicamente comprenden un grupo clnicamente heterogneo. Pueden ser iniciadas por una respuesta inmune dirigida contra antgenos extraos o propios
(autoinmunidad). Los mecanismos patognicos incluyen la participacin de complejos antgeno-anticuerpo, autoanticuerpos dirigidos contra antgenos
tisulares o de superficie celular, y clulas T. Los
mecanismos efectores por los cuales los anticuerpos
y los complejos inmunes inducen injuria tisular incluyen activacin del sistema del complemento y de
clulas inflamatorias. Las clulas T reclutan y activan macrfagos como los efectores principales de
hipersensibilidad retardada e injuria tisular, en otros
casos actan directamente clulas T CD8+.
En algunas de estas enfermedades el agente
etiolgico es desconocido, como por ejemplo en
el Lupus Eritematoso Sistmico (LES); en otras
de ellas el agente etiolgico se conoce y el dao
est mediado por la respuesta inmune que se genera contra ste o bien a travs del mimetismo
molecular, cuando la respuesta inmune se produce contra un antgeno extrao que tiene similitud
antignica con antgenos propios, como ocurre en
la Enfermedad reumtica.
Algunas de estas enfermedades son
sistmicas, es decir, afectan a varios rganos y sistemas, otras en cambio, son rgano especficas.
En este captulo se incluyen algunas de las enfermedades ms frecuentes: Lupus Eritematoso
Sistmico, Artritis Reumatoidea, Enfermedades
mediadas por anticuerpos y Otras enfermedades.
2.1. Lupus Eritematoso Sistmico

Es el prototipo de las enfermedades sistmicas autoinmunes, aqueja principalmente a mujeres en edad frtil y sus manifestaciones pueden
afectar a todos los rganos y sistemas. La mayora de los pacientes presentan alteraciones de la
piel (por ejemplo eritema malar en mariposa),
dolores y/o inflamacin articular, manifestaciones
renales y hematolgicas. Se caracteriza por perodos de actividad de la enfermedad que fluctan
con perodos de remisin.
Si bien su causa se desconoce, es ampliamente aceptado que se requiere la interaccin de mltiples factores para que el LES se desencadene,
entre ellos factores genticos, hormonales, ambientales e inmunolgicos (ver captulo 24). La
predisposicin gentica del LES est relacionada
con alelos del Complejo Principal de
Histocompatibilidad (MHC, HLA en humanos),
as por ejemplo HLA-DR2 y HLA-DR3 estn aumentados en pacientes con LES, y adems con
deficiencias del complemento, por ej. con el alelo
nulo C4A. Es frecuente encontrar otros miembros
de la familia afectados por enfermedades
autoinmunes o bien detectar en ellos la presencia
de autoanticuerpos sin manifestacin alguna de
enfermedad.
Entre los factores ambientales relacionados
con el LES de gran importancia es la exposicin a
las radiaciones ultravioleta y algunas drogas (LES
491
Sin ttulo-2
491
5/26/06, 10:26 AM
inducido por drogas que es reversible al retirar la

droga).
Las alteraciones inmunolgicas que se encuentran en estos pacientes incluyen la presencia
de autoanticuerpos, aumento de la funcionalidad
de las clulas T "helper" cooperadoras, falla de la
funcin de clulas T supresoras, disminucin del
"clearence" de complejos inmunes.
Mltiples autoanticuerpos son caractersticos
y frecuentes en el LES, entre ellos los anticuerpos
antinucleares dirigidos contra diferentes estructuras nucleares, los que pueden detectarse por la tcnica de inmunofluorescencia indirecta y constituyen un marcador presente en casi el 100% de los
casos. Muchos pacientes tienen anticuerpos antiDNA nativo, as como autoanticuerpos dirigidos
contra estructuras nucleares extractables en salino (ENA). Tambin pueden tener anticuerpos dirigidos contra clulas sanguneas y otras estructuras. Mltiples causas pueden llevar a la aparicin
de estos autoanticuerpos: quiebre de la tolerancia
a lo propio, reactividad cruzada y mimetismo
molecular, alteracin en el control de la apoptosis,
estimulacin policlonal de clulas B, etc. El dao
tisular en el LES es causado en gran medida por
complejos inmunes, incluyendo dao debido a
vasculitis y a glomerulonefritis.
En la actualidad el tratamiento del LES permite una expectativa de sobrevida que supera el
90% a los 10 aos del diagnstico, sin embargo,
muchos pacientes pueden presentar secuelas por
el dao inflamatorio del LES, por ejemplo falla
renal. Por otra parte, pueden presentar complicaciones derivadas del tratamiento sostenido con
corticoides e inmunosupresores.
canismos indirectos por los que podra causar dao

este antgeno, se postula entre otros mecanismos,
que alterara la inmunogenicidad de las estructuras articulares, actuara a travs de mimetismo
molecular, o bien actuar como tipo superantgeno.
En la sinovial inflamada se han encontrado
mltiples citoquinas, postulndose que un
desbalance en su produccin sera un factor decisivo en la fisiopatologa de la AR. As, por ejemplo se encuentran aumentadas citoquinas tales
como IL-1, TNF- e IFN-, las cuales pueden favorecer la inflamacin y proliferacin sinovial, la
destruccin del cartlago y del hueso adyacente y
explicar algunas de las manifestaciones sistmicas
de la enfermedad. Su relevancia en la patogenia
de la AR ha quedado demostrada al demostrarse
que la terapia con anticuerpos monoclonales dirigidos contra el TNF-, logran controlar estas manifestaciones.
Al igual que lo descrito en el LES, en la AR
intervienen mltiples factores. Entre ellos los factores genticos son de gran relevancia, como por
ej. los alelos HLA-DR4, los ms frecuentemente
encontrados en estos pacientes.
La presentacin clnica caracterstica es la de
una poliartritis simtrica, generalmente asociada
a sntomas constitucionales como fiebre y fatiga.
Se afectan, preferentemente, las pequeas articulaciones de manos y pies, las cuales pueden llegar
a deformarse como consecuencia del dao causado por la inflamacin sinovial.
En el 75-90% de los casos se encuentra la
presencia de factores reumatoides en estos pacientes. Estos son autoanticuerpos (generalmente
de clase IgM) reactivos contra la regin Fc de la
IgG. Estos autoanticuerpos no son especficos,
pueden encontrarse presentes en otras enfermedades (inflamatorias, infecciosas, tumorales), y
tambin hasta en un 5% de la poblacin general,
especialmente de edad avanzada, en ttulos bajos.
2.2. Artritis Reumatoidea (AR)

La AR es una enfermedad inflamatoria crnica sistmica, que afecta a alrededor del 1% de
la poblacin, siendo ms frecuente en mujeres, al
igual que el LES. Si bien su causa se desconoce,
ha podido establecerse que esta enfermedad se desencadena en individuos genticamente susceptibles, cuando son expuestos a un agente antignico
relevante (ver captulo 24). Muchas evidencias
apuntan a que las clulas T, activadas por el
antgeno, juegan un rol crtico en el inicio y perpetuacin de la inflamacin sinovial que caracteriza a esta enfermedad. En cuanto a la naturaleza
de este antgeno, se han postulado varios agentes
infecciosos ubicuos, los que en forma directa o
indirecta, desencadenaran el dao. Entre los me-
2.3. Enfermedades mediadas por anticuerpos

Muchas enfermedades inmunolgicas se asocian con la produccin de autoanticuerpos, o se
cree que son causadas por stos. La mayora de
estas enfermedades son rgano-especficas (tabla
29-1).
La Anemia hemoltica autoinmune y la
Trombocitopenia autoinmune son causadas por
autoanticuerpos dirigidos contra los glbulos rojos y las plaquetas, respectivamente. Los
anticuerpos causan lisis dependiente de comple-
492
Sin ttulo-2
492
5/26/06, 10:26 AM
Tabla 29-1. Enfermedades causadas por autoanticuerpos
Enfermedad
Clnica
Mecanismos
Autoanticuerpos
Glomerulonefritis
(S. de Good Pasture)
Nefritis,
hemorragia
pulmonar
Complemento,
neutrfilos
Anti-membrana
basal rin y
pulmn
Anemia autoinmune
Hemoltica
Anemia
hemlisis
Lisis, fagocitosis
Anti-protenas
membrana
Pnfigo vulgar
Vesculas
en piel
Disrupcin
adhesin
intercelular
Anti-uniones
intercelulares
epidrmicas
Penfigoide buloso
Vesculas
en piel
Disrupcin
unin dermoepidrmica
Anti-membrana
basal epidrmica
Miastenia gravis
Debilidad
Muscular
Bloqueo
receptores
acetilcolina
Anti-receptor
acetilcolina
Enfermedad de
Graves
Hipertiroidismo
Estimulacin
receptor TSH
Anti-receptor
TSH
piel se deben a anticuerpos dirigidos contra molculas de adhesin de las clulas epidrmicas o
antgenos de la membrana basal. Los anticuerpos
alteran la adhesin de las clulas entre ellas o a la
membrana basal, causando la formacin de ampollas.
Varias formas de vasculitis, inflamacin de
los vasos sanguneos, se asocian con
autoanticuerpos reactivos con proteinasas de los
grnulos de los neutrfilos, stos son los
anticuerpos anti-citoplasma de neutrfilos
(ANCA) que al reaccionar con el antgeno causan
degranulacin de los neutrfilos e injuria alrededor de los vasos sanguneos.
El Sndrome antifosfolpido, caracterizado
por trombosis venosas y abortos recurrentes, es
causado preferentemente por anticuerpos dirigidos contra complejos protenas-fosfolpidos
aninicos (ver captulo 25).
Anticuerpos dirigidos contra receptores de
membrana pueden causar alteraciones funcionales sin involucrar otros mecanismos. As por ejemplo en la Enfermedad de Graves, una enfermedad autoinmune de la glndula tiroides caracteri-
mento de las clulas sanguneas y las opsonizan,

llevando a un aumento de la fagocitosis por los
fagocitos mononucleares (ver captulo 26). La
anemia hemoltica autoinmune y la trombocitopenia autoinmune son generalmente de causa desconocida, aunque algunas veces se producen como
una reaccin adversa a algunas drogas. En este
ltimo caso, pueden deberse a la presencia de
neoantgenos, creados al unirse la droga o sus
metabolitos a las membranas celulares.
El sndrome de Good Pasture es una enfermedad caracterizada por hemorragias pulmonares
y glomerulonefritis. Es causada por un
autoanticuerpo que se une a un dominio del
colgeno tipo IV presente en las membranas
basales de los alvolos pulmonares y capilares
glomerulares. La unin de este anticuerpo provoca activacin local del complemento y neutrfilos.
Al examen microscpico puede observarse
necrosis e infiltrados neutroflicos y por
microscopa de fluorescencia pueden detectarse
depsitos de anticuerpos a lo largo de las membranas basales.
Algunas enfermedades autoinmunes de la
493
Sin ttulo-2
493
5/26/06, 10:26 AM
zada por hipertiroidismo, un autoanticuerpo especfico para el receptor de la hormona estimulante de la tiroides (TSH) presente en las clulas
epiteliales tiroideas, se une a stos estimulando a
las clulas a producir hormonas tiroideas del mismo modo que lo hace la TSH proveniente de la
hipfisis.
Un ejemplo de inhibicin de la actividad de un
receptor la vemos en la Miastenia gravis, una enfermedad causada por autoanticuerpos que se unen
al receptor de la acetilcolina en la placa motora de la
unin neuromuscular. La unin de estos anticuerpos
interfiere con la trasmisin neuromuscular mediada
por acetilcolina. El resultado es una falla muscular
para responder a los impulsos nerviosos, que se expresa en debilidad muscular progresiva.
Un muy buen ejemplo de enfermedad causada por anticuerpos producidos contra antgenos
extraos que tienen reactividad cruzada con
antgenos propios ocurre en la Enfermedad Reumtica. Esta enfermedad se presenta como una
complicacin tarda de una amigdalitis estreptoccica y se caracteriza por artritis, endocarditis y
miocarditis, y alteraciones neurolgicas. Se cree
que la injuria miocrdica se debe a un anticuerpo
contra una protena de la pared celular del
estreptococo, el cual se une a un antgeno del
miocardio, con el cual esta protena presenta un
mimetismo molecular.
Feldmann, M.; Brenan, F.M. and Maini, R.N.,

Rheumatoid arthritis, Cell 1996; 85: 307-310.
Harris, E.D., Rheumatoid arthritis, N Eng J Med
1990; 322: 1277-1281.
Naparstek, Y., and Poltz, P.H., The role of
autoantibodies in autoimmune diseases, Annual
Review of Immunology 1993; 11: 79-104.
2.4. Otras enfermedades

Existen varias otras enfermedades sistmicas
autoinmunes, adems del LES y de la AR, como
por ejemplo la Esclerosis sistmica progresiva, el
Sndrome de Sjgren, Artritis reumatoide juvenil
Espondiloartropatas y Vasculits sistmicas. Entre las enfermedades rgano-especficas ms frecuentes cabe destacar enfermedades desmielinizantes del sistema nervioso central, diabetes
autoinmune, enfermedades inflamatorias del intestino, varias formas de hepatitis y de nefritis.
LECTURAS SUGERIDAS
Clinical Immunology Principles and Practice.
Editor in chief Robert R. Rich; 1996, vol I, secciones VI y VII.
Fan. P.; Davis, Somer T., et al. A clinical approach
to systemic vasculitis, Seminar Arthritis Rheum
1990; 9: 248-265.
494
Sin ttulo-2
494
5/26/06, 10:26 AM

Captulo 30
INMUNODEFICIENCIAS PRIMARIAS
Mnica Cornejo De L. y Marta Zelazko de Ch.
1. Introduccin
2. Inmunodeficiencias primarias
2.1. Aspectos genticos de las IDP
2.2. Estudios de laboratorio inmunolgico para el diagnstico de IDP
2.3. Caractersticas de las IDP
3. Tratamiento de las inmunodeficiencias congnitas
495
Sin ttulo-2
495
5/26/06, 10:26 AM
496
Sin ttulo-2
496
5/26/06, 10:26 AM
RESUMEN
Existen deficiencias primarias del sistema inmune (defectos genticos que se manifiestan
generalmente en la infancia) o ms frecuentemente secundarias a otros procesos patolgicos. El
defecto puede ser a nivel de la inmunidad especfica (alteracin de LT, B o ambos) o de la inmunidad innata (defectos de fagocitos o del complemento).
Las inmunodeficiencias se manifiestan principalmente por aumento de susceptibilidad a
infecciones. La naturaleza de la infeccin recurrente depende del componente del sistema inmune alterado (ej. deficiencias de inmunidad humoral se asocian a infecciones por bacterias pigenas,
deficiencias de inmunidad celular a infecciones por virus y microorganismos intracelulares).
Existe, adems, asociacin a algunos tipos de enfermedades autoinmunes, mayor frecuencia de
tumores (especialmente linforreticulares) y en algunos casos manifestaciones alrgicas.
En la mayora de las Inmunodeficiencias Primarias el patrn hereditario es de carcter
recesivo (mutaciones en cromosoma X o autosmico). En varias de ellas se ha localizado el
cromosoma especfico, es posible detectar portadores y hacer diagnstico prenatal. En el captulo se describen ejemplos seleccionados de deficiencias primarias de clulas B, T, o ambas y
defectos de Inmunidad Natural.
Las posibilidades teraputicas en la actualidad incluyen el uso de gammaglobulina endovenosa,
trasplante de mdula sea, reemplazo enzimtico y, a futuro, reemplazo del gen defectuoso.
Tanto las Inmunodeficiencias Primarias como

Secundarias se manifiestan por un aumento de susceptibilidad a infecciones. La naturaleza de la infeccin depende del componente del Sistema Inmune alterado, as por ejemplo, defectos de inmunidad humoral se asocian a infecciones por
bacterias pigenas, mientras que defectos de inmunidad celular principalmente por virus y
microorganismos intracelulares.
Adems de las infecciones los pacientes con
IDP Especficas son especialmente susceptibles a
enfermedades malignas de tipo linforreticular (la
mortalidad por cncer en las inmunodeficiencias
puede ser 10 - 200 veces mayor que lo esperado
para poblacin general de la misma edad). Algunas inmunodeficiencias se asocian a enfermedades autoinmunes como anemia hemoltica
autoinmune, prpura trombocitopnico idioptico,
lupus eritematoso, hepatitis crnica activa, entre
otros y puede haber algn papel en el desarrollo
de alergias.
Desde la descripcin en 1952 de la primera
inmunodeficiencia (Agammaglobulinemia,
Bruton) a la fecha se han descrito un gran nmero
de sndromes que regularmente son clasificados
por un grupo de expertos de la Organizacin Mun-
1. INTRODUCCIN
La integridad del Sistema Inmune (SI) es
esencial para la defensa contra organismos infecciosos y sus productos txicos y, por lo tanto, para
la sobrevida de los individuos. Defectos en uno o
ms componentes del SI pueden llevar a enfermedades graves, ocasionalmente fatales. Estas enfermedades se clasifican en 2 grupos: Inmunodeficiencias Primarias (IDP) que son defectos
genticos del Sistema Inmune y se manifiestan
generalmente en la infancia e Inmunodeficiencias
Secundarias que se desarrollan por una variedad
de condiciones patolgicas (como cnceres diseminados, enfermedades metablicas, desnutricin), drogas inmunosupresoras o infecciones de
las clulas del Sistema Inmune (ej. Virus de la
Inmunodeficiencia humana o VIH) (ver captulo
31).
La respuesta deficiente puede resultar a su
vez de anormalidades en la inmunidad adquirida
o innata. Defectos de inmunidad especfica pueden deberse a desarrollo, activacin o funcin
anormal de LT, B o ambos. Alteracin de la inmunidad innata, a defectos a nivel de los
Fagocitos o del Sistema de Complemento.
497
Sin ttulo-2
497
5/26/06, 10:26 AM
dial de la Salud (OMS) (tabla 30-1). En los ltimos aos se ha visto un gran avance en terapia y
en la identificacin de las bases moleculares de
varias de estas enfermedades lo que ha permitido

diagnsticos ms especficos y terapias ms efectivas.
Tabla 30 - 1. Clasificacin de Inmunodeficiencias Primarias

Grupo Cientfico OMS (1999)
Inmunodeficiencias Combinadas
Inmunodeficiencia Combinada Severa (IDCS) T- B+
a) Ligada al cromosoma X (deficiencia c)
b) Autosmica recesiva (deficiencia Jak3)
Inmunodeficiencia combinada severa T- Ba) Deficiencia de RAG 1/ 2
b) Deficiencia de adenosina desaminasa (ADA)
c) Disgenesia reticular
Inmunodeficiencia combinada severa T+ Ba) Sndrome de Omenn
b) Deficiencia del R+IL - 2
Sndrome Hiper IgM ligado a X
Deficiencia de fosforilasa del nucleosido purina (PNP)
Deficiencia de CMH clase II
Deficiencia de CD3 o CD3 , ZAP-70, TAP-2
Deficiencias Predominantemente de Anticuerpos
Agammaglobulinemia ligada al X / Autosmica recesiva
Delecin gen cadena pesada Igs
Deficiencia cadena Kappa
Deficiencia selectiva de Ig
Deficiencia anticuerpos con Ig normal o elevada
Inmunodeficiencia comn variable (IDCV)
Sndrome de Hiper IgM no ligado al X
Hipogammaglobulinemia Transitoria de la infancia
Inmunodeficiencia Asociada a Otros Defectos
Wiskott - Aldrich
Ataxia-Telangiectasia
Anomala de DiGeorge
ID con albinismo
Sndrome proliferativo ligado a X
Deficiencias de Complemento
Deficiencias de Nmero y/o Funcin Fagoctica
Neutropenia congnita
Neutropenia cclica
Defecto de adhesin leucocitaria
Deficiencia de grnulos especficos
Sndrome de Schwachman
Enfermedad Granulomatosa Crnica
a) Ligada al cromosoma X
b) Autosmica recesiva
Deficiencia de glucosa 6 fosfato deshidrogenasa
Deficiencia de mieloperoxidasa
Defectos micobactericidas
a) Deficiencia del receptor IFN
b) Deficiencia del receptor IL-12
498
Sin ttulo-2
498
5/26/06, 10:26 AM
me de Wiskott-Aldrich, Enfermedad linfoproliferativa ligada al X, Sndrome Hiper IgM, Deficiencia de properdina, Enfermedad granulomatosa
crnica.
Algunos ejemplos de mutaciones a nivel de
cromosomas autosmicos incluyen: Deficiencia
de protenas de adhesin (CD18), Inmunodeficiencias combinadas debidas a defecto de
Adenosina Desaminasa (ADA) o Fosforilasa del
nuclesido purina (PNP, Purine Nucleoside
Phosphorylase).
En la actualidad es posible detectar portadores en varias de estas enfermedades, as como tambin hacer diagnstico prenatal estudiando muestras de sangre fetal, clulas amniticas o por biopsia de vellosidades corinicas.
La identificacin en la ltima dcada de numerosos genes implicados en la etiologa de las
Inmunodeficiencias Primarias nos ha permitido
tener una nueva perspectiva al evaluar estas enfermedades. Esta nueva informacin oblig adems a reevaluar los criterios utilizados hasta ahora para hacer diagnsticos de Inmunodeficiencias
Primarias.
Los nuevos criterios diagnsticos recientemente establecidos por la Sociedad Europea
2. INMUNODEFICIENCIAS PRIMARIAS
Las deficiencias de respuesta inmune especfica se clasifican, de acuerdo al Comit de Expertos de la OMS (tabla 30-1), en tres categoras
generales: a) Inmunodeficiencias combinadas, b)
Deficiencias predominantemente de anticuerpos
y c) Inmunodeficiencias asociadas a otros defectos. Por su parte, las deficiencias de inmunidad
innata comprenden: a) Deficiencias del sistema del
complemento y b) Deficiencias de funcin
fagoctica.
2.1. Aspectos genticos de las IDP
En un nmero permanentemente creciente
de IDP se ha localizado el cromosoma especfico
(tabla 30-2) y se ha identificado el error biolgico
fundamental.
En la mayora de las IDP los patrones hereditarios son de carcter recesivo, algunos causados por mutaciones en genes en el cromosoma X
y otras en cromosomas autosmicos. Se ha localizado el gen defectuoso en el cromosoma X en:
Agammaglobulinemia ligada al X, Inmunodeficiencia combinada severa ligada al X, Sndro-
Tabla 30 - 2. Localizacin cromosmica de inmunodeficiencias primarias

Inmunodeficiencia
Cromosoma
Inmunodeficiencia combinada severa ligada al X

Agammaglobulinemia ligada al X
Sndrome de Hiper IgM ligado al X
Sndrome de Wiskott-Aldrich
Enfermedad Granulomatosa Crnica ligada al X
Sndrome Linfoproliferativo ligado al X
Deficiencia de Adenosina Desaminasa
Deficiencia Jak3
Deficiencia de Fosforilasa del Nucleosido Purina
Deficiencia de ZAP- 70
RAG-1/RAG-2
Deficiencia de Cadena Kappa
Delecin de Cadena Pesada de Ig
Ataxia-Telangiectasia
Enfermedad Granulomatosa Crnica Autosmica Recesiva
p22 phox
p47 phox
p67 phox
Deficiencia de Adhesin Leucocitaria I
Sndrome de Chediak - Higashi
Xq13.1 - 13.3
Xq21.3 - 22
Xq26 - 27
Xp11.22 - 11.3
Xp21.1
Xq26
20q13 - ter
19p 13.1
14q13.1
2q12
11p12-13
2p11
14q32.3
11q23.1
16q24
7q11.23
1q25
21q22.3
1q4.3
499
Sin ttulo-2
499
5/26/06, 10:26 AM
(ESID) y el Grupo Panamericano de Inmunodeficiencias Primarias (PAGID) se dividen en 3 categoras: Definitivo, probable y posible. El diagnstico definitivo slo puede hacerse, salvo en
algunas excepciones de IDP ligadas al X, con la
documentacin del defecto molecular para cada
caso. El hallazgo de la mutacin es el mtodo diagnstico ms confiable, la ausencia de mRNA especfico o de protena es suficiente para el diagnstico en algunos sndromes, pero no en todos
porque el mRNA o la protena se pueden expresar
slo transitoriamente o en niveles muy bajos.
Los pacientes deben reunir siempre los criterios clnicos de inclusin caractersticos de las distintas enfermedades para evitar la incorporacin
de pacientes que tengan variantes polimrficas de
los genes asociados con inmunodeficiencias.
c) Estudio de la respuesta inmune inespecfica

Fagocitos
2.2. Estudios de laboratorio inmunolgico para

el diagnstico de IDP
La clnica de las IDP no es claramente distintiva y permite slo sospechar y orientar el diagnstico de los diversos sndromes. En todos los
casos, debern realizarse procedimientos apropiados de laboratorio que permitan evaluar la competencia inmunolgica para definir el tipo y grado de compromiso. Se presenta una breve resea
de los estudios indicados para los diferentes sectores de la respuesta inmune, que debern incluir
siempre la valoracin cuantitativa y funcional:
a) Estudio de la respuesta inmune humoral
Determinacin de la concentracin srica de

IgG, IgM, IgA e IgE.
Recuento de linfocitos B por expresin de
antgenos de diferenciacin (CD19, CD20).
Bsqueda de anticuerpos preexistentes
(Isohemaglutininas antiA y antiB) y respuesta
de anticuerpos a la inmunizacin activa con
antgenos proteicos (anticuerpo anti-tetnico,
anticuerpo anti-diftrico) y antgenos polisacridos (anticuerpo anti- neumococo).
Determinacin de la concentracin srica
de subclases de IgG: IgG1, IgG2, IgG3, IgG4.
Produccin de inmunoglobulinas in vitro
mediante estimulacin con mitgenos
(PWM).
Determinacin cuantitativa y morfolologa de

granulocitos y monocitos.
Estudio de mecanismos microbicidas oxgeno dependientes:
Prueba de reduccin del nitroazul de tetrazolio
(NBT).
Quimioluminiscencia, dihidrorodamina
(DHR), Produccin de anin superxido.
Estudio de la expresin de molculas de adhesin: CD11, CD18, CD15.
Estudios de actividad enzimtica: Mieloperoxidasa, Glucosa 6 fosfato dehidrogenasa.
Actividad bactericida.
Complemento
Actividad ltica del complemento: CH50 y

AP50.
Determinacin de la concentracin srica de
componentes del complemento.
Evaluacin funcional de componentes del
complemento.
Determinacin cuantitativa y funcional de
inhibidores del complemento.
El reconocimiento de portadores sanos y el

diagnstico prenatal, son dos de las nuevas herramientas incorporadas al arsenal diagnstico de
las IDP, que pueden ser realizados con el desarrollo de tcnicas de biologa molecular:
b) Estudio de la respuesta inmune celular
linfocitos/l
Recuento de linfocitos T por expresin de
antgenos de diferenciacin: CD3, CD4, CD8.
Pruebas de hipersensibilidad retardada a distintos antgenos: PPD, candidina, etc.
Respuesta proliferativa in vitro a mitgenos:
PHA, ConA, PMA+Ionomicina.
Respuesta proliferativa a antgenos
(candidina, PPD, toxoide tetnico) y clulas
alogeneicas (cultivo mixto linfocitario).
Produccin de interleuquinas: IL-1, IL-2,
IFN, TNF-alfa, IL-4, etc., en sobrenadantes
de cultivos o por deteccin intracitoplasmtica
en respuesta a mitgenos.
Estudios de actividad enzimtica: ADA, PNP.
Determinacin del valor absoluto de
Estudios de inactivacin del cromosoma X.
500
Sin ttulo-2
500
5/26/06, 10:26 AM
Segregacin de alelos relacionados con la

patologa.
Caracterizacin de la mutacin: a) Tcnicas
de rastreo Ej. Polimorfismo de DNA de simple cadena (SSCP) y b) Secuenciacin del
DNA.
sos debido a micoplasma.

La cuantificacin de Igs de estos pacientes,
en la mayora de los casos demuestra: IgG < 100
mg/dL, IgM e IgA no detectable e incapacidad de
secretar anticuerpos en respuesta a estmulos
antignicos. Las clulas B se encuentran ausentes. En general la inmunidad celular no est afectada.
Se ha demostrado el gen de la agammaglobulinemia ligada al sexo en el brazo largo del
cromosoma X en posicin xq21.3 - 22. Se ha identificado y clonado adems una molcula transductora de seales codificada por el gen llamado
Btk (Bruton tirosine kinase o Tirosina kinasa de
la clula B) que se expresa en etapas precoces del
desarrollo de la clula B, no se encuentra en clulas T o plasmticas y se expresa adems en clulas mieloides. El gen Btk se supone que tiene una
funcin fundamental en la maduracin de la lnea
celular B; probablemente sera la seal para que
las clulas preB reordenen los genes de cadena
liviana, una vez que han aparecido las cadenas
pesadas en su superficie. En pacientes agamaglobulinmicos se generan precursores de las clulas
B en la mdula sea con la maduracin detenida
en el estadio Pre-B.
Las mujeres portadoras de la agammaglobulinemia ligada al X son inmunolgicamente normales y presentan 2 poblaciones de precursores
de clulas B: una mitad que porta un cromosoma
X activo con gen Btk normal y la otra el gen defectuoso. Las clulas que portan Btk mutado en el
cromosoma X activo no maduran a clulas B. Slo
maduran a clulas B aquellas con cromosoma X
activo que tienen el gen normal. La inactivacin
no al azar del cromosoma X en las clulas B en
las portadoras y, fundamentalmente, el hallazgo
de la mutacin en Btk permiten distinguir la XLA
de otras formas autosmicas recesivas poco frecuentes de agammaglobulinemia con ausencia de
LB como son las mutaciones de la cadena mu de
las inmunoglobulinas y mutaciones en el gen
lambda 5/14.1 componente del receptor de la clula Pre-B. Algunos casos de inmunodeficiencia
comn variable tambin presentan ausencia de LB.
2.3. Caractersticas de las IDP

Se describirn a continuacin ejemplos seleccionados de defectos de clulas B, clulas T,
ambos y de defectos de Inmunidad Natural.
2.3.1. Defectos predominantemente
anticuerpos
de
Estas enfermedades fueron las primeras en conocerse debido a que la cuantificacin de

inmunoglobulinas (Igs) sricas se usa como mtodo de rutina desde 1950. Se definen como una reduccin o ausencia de uno o ms isotipos o
subclases de Igs en ausencia de otra patologa, debido a un bloqueo de la maduracin del LB o respuesta defectuosa de estos linfocitos a las seales
de los LT (figura 30-1). Algunos pacientes pueden
tener Ig srica normal, pero no responden apropiadamente a patgenos. Se presentan clnicamente
como infecciones pigenas recurrentes.
A continuacin se describirn algunos ejemplos de dficit de anticuerpos enfatizando el mecanismo del defecto de la clula B.
a) Agammaglobulinemia ligada al sexo (XLA).
Representa el prototipo del dficit de clulas B
puro. Se hereda como un rasgo recesivo ligado al
X. Los nios afectados generalmente no presentan sntomas los primeros 9 - 12 meses de vida,
porque estn protegidos pasivamente por la IgG
transplacentaria adquirida de la madre. Posteriormente tienen infecciones pigenas a repeticin
tales como otitis media, sinusitis, conjuntivitis,
neumona y piodermitis. Los grmenes ms frecuentes son Haemophilus influenzae,
Streptococcus pneumoniae y menos frecuente
Staphylococcus aureus y Streptococcus pyogenes.
Si no se efecta tratamiento profilctico invariablemente resulta en enfermedad pulmonar
obstructiva y bronquiectasias. Pueden presentar
adems viremia persistente y adquirir Poliomielitis
Paraltica si se usa vacuna con virus vivo. Son
susceptibles a Enterovirus y la infeccin con
Giardia lamblia induce diarrea crnica; 35% de
los nios pueden presentar artritis, en muchos ca-
b) Sndrome Hiper IgM ligado al sexo: Se describi en 1961 en 2 varones que presentaban un
cuadro clnico similar a la agamaglobulinemia ligada al X con concentraciones de IgM srica muy
elevada, ausencia de IgA e IgG muy baja (<150
mg/dL). Adems de presentar infecciones pigenas
recurrentes, son susceptibles a infecciones opor-
501
Sin ttulo-2
501
5/26/06, 10:26 AM
incidencia se estima entre 1:50.000 a 1:200.000.

Clnicamente se presenta como infecciones
pigenas sinopulmonares recurrentes. Algunos
pacientes pueden presentar infecciones con grmenes inusuales como Pneumocistis carinii,
micobacterias y hongos y en algunos casos
enterovirus. Los pacientes son altamente susceptibles a otros patgenos entricos como Giardia
lamblia y a Herpes simplex y zoster. Existe una
alta incidencia de enfermedades malignas
linforreticulares y gastrointestinales. Puede observarse una variedad de desrdenes autoinmunes
(anemia perniciosa, anemia hemoltica,
neutropenia). Los familiares de estos pacientes tienen una mayor incidencia de dficit de IgA, enfermedades autoinmunes y condiciones malignas.
La concentracin de IgG y generalmente de
IgA e IgM en el suero se encuentra reducida. El
nmero de clulas B en general es normal aunque
puede estar reducido, pero el defecto no se encuentra a nivel de la diferenciacin sino ms bien
de la activacin in vivo de las clulas B. Cerca del
60% de los pacientes tiene una respuesta
proliferativa disminuida al estimular el Receptor
de Clulas T (TCR), sin embargo no existe una
anomala del mismo sino probablemente un defecto en la transduccin de seales. En ausencia
de una seal apropiada por LT no se producira
proliferacin, diferenciacin ni secrecin de
anticuerpos por las clulas B.
tunistas en particular por Pneumonicistis carinii

y problemas autoinmunes, especialmente
neutropenia recurrente, a menudo severa. La infeccin por Criptosporidium es causa frecuente de
colangitis esclerosante con dao heptico severo.
Aquellos pacientes que sobreviven ms all de la
segunda dcada, presentan un mayor riesgo de
desarrollar cnceres, especialmente del tracto
gastrointestinal, hgado y vescula.
El nmero de LB circulantes es normal, pero
se detecta slo IgM e IgD de superficie. No se
observa desarrollo de centros germinales en
ganglios y bazo. El nmero de clulas T es normal, sin embargo no sintetizan o expresan una
molcula no funcional del ligando de (CD40L),
necesario para la interaccin con la clula B en el
cambio de clase de Igs.
El gen del sndrome de hiper IgM ligado al
X se encuentra en el brazo largo del cromosoma
X en posicin q26. En la actualidad es posible efectuar diagnstico prenatal y de portadoras.
Teniendo en cuenta que el defecto primario
del sndrome se encuentra en los LT, en las ltimas clasificaciones de la OMS el sndrome ha
sido incluido en las ID combinadas.
Un cuadro idntico en las manifestaciones clnicas y perfil inmunolgico ha sido descrito en
mujeres. En esos casos el gen y la expresin del
CD40L es normal, por lo que se sospech un defecto en otras molculas implicadas en la sealizacin de CD40. Recientemente se describi y
public el defecto gentico de esta forma
Autosmica recesiva de Sndrome de Hiper IgM.
Se trata de mutaciones en el gen de la citidina
deaminasa inducido por activacin (AID). Este
hallazgo demuestra que la presencia de AID es un
requerimiento absoluto para la diferenciacin terminal del LB y la produccin eficiente de
anticuerpos.
d) Deficiencia selectiva de IgA. Es una de las

IDP ms frecuentes. Se presenta en 1:700 individuos caucsicos y 1:18.500 japoneses. El patrn
hereditario es variable, en algunas familias se ha
demostrado herencia autosmica recesiva y asociacin a algunos haplotipos HLA (Complejo
Principal de Histocompatibilidad, MHC) Las caractersticas clnicas tambin son variables. La
mayora de los individuos no presentan enfermedad, otros tienen infecciones sinopulmonares. Su
frecuencia es mayor en pacientes con enfermedad
pulmonar crnica que en poblacin normal.
El dficit de IgA se caracteriza por niveles
ausentes o extremadamente reducidos de IgA
srica (< de 7 mg/dL) con IgG e IgM normal. Se
supone que existe un defecto a nivel de la diferenciacin de clulas B que expresan IgA a clulas
plasmticas secretoras de anticuerpos. No se encuentran anormalidades a nivel de clulas T.
La deficiencia de IgA es en realidad una
inmunodeficiencia ms compleja de lo que se sospechaba. Podra tratarse, de una forma de expre-
c) Inmunodeficiencia Comn Variable. El trmino Inmunodeficiencia Comn Variable (IDCV)

se usa para designar un grupo de sndromes an
no bien definidos, pero caracterizados por formacin defectuosa de anticuerpos y en que se han
excluido otros defectos de inmunidad humoral. El
patrn hereditario es variado (autosmico recesivo,
dominante, ligado al X) siendo lo ms comn los
casos espordicos.
En poblacin de origen europeo es la ms frecuente de las inmunodeficiencias primarias especficas. Afecta en igual proporcin a hombres y
mujeres, generalmente entre los 20 y 30 aos. Su
502
Sin ttulo-2
502
5/26/06, 10:26 AM
= <2.000/L) en el primer ao de vida. Existe falla en el desarrollo del Timo. Los pacientes presentan retardo del crecimiento, diarrea intermitente
o crnica e infecciones persistentes con grmenes
oportunistas de baja virulencia (Cndida,
Pneumocistis Carinii, citomegalovirus). Estos
hallazgos requieren diferenciar de nios con Sndrome de Inmunodeficiencia Adquirida (SIDA)
efectuando estudios para detectar Virus de la
Inmunodeficiencia Humana (VIH), como son el
aislamiento viral o reaccin de polimerasa en cadena (PCR) para genoma viral. El diagnstico de
este tipo de inmunodeficiencia es una emergencia
mdica, ya que puede ser rpidamente fatal si el
nio afectado no es sometido a un trasplante de
mdula sea. Existen numerosos sndromes de
Inmunodeficiencia Combinada Severa (IDCS),
sin menos grave de la IDCV. Las deficiencias de

subclases de IgG, de IgA con deficiencia de
subclases de IgG y las deficiencias de funcin de
anticuerpos, tambin podran considerarse formas
intermedias.
e) Deficiencia selectiva de Subclases de IgG. Se
han descrito pacientes con nivel IgG srico total
normal y una o ms subclases de IgG bajo lo normal. Puede asociarse a niveles bajos de IgA. El
dficit de IgG3 es ms frecuente en adultos y del
IgG2, en nios. El nivel normal de IgG4 vara
ampliamente en personas sanas, por lo que es difcil interpretar una deficiencia selectiva de IgG4.
En la tabla 30-3, se resumen las caractersticas de algunos ejemplos de IDP cuyo defecto es
predominantemente de anticuerpos.
Tabla 30 -3. Caractersticas de algunos defectos

predominantemente de anticuerpos
Enfermedad
Igs sricas
Clulas B
Defecto
Agammaglobulinemia
ligada al X
Todos los isotipos
Ausentes o
marcadamente
Mutacin gen Btk
Agammaglobulinemia
autosomica recesiva
Todos los isotipos
Ausentes o
marcadamente
Mutacin cadena
Mutacin gen lambda
5/14.1
Inmunodeficiencia Comn
Variable
Reduccin en uno o ms
isotipos (generalmente IgG)
No
Variable
Dficit selectivo de IgA
IgA1, IgA2
N o SIgA+
Falla en diferenciacin
terminal de cel B IgA+
Deficiencia selectiva de
subclases de IgG
uno o ms subclases de IgG
N o inmadura
Defecto en
diferenciacin de isotipo
cuyos defectos genticos son distintos pero que

son indistinguibles desde la clnica.
Considerando los hallazgos inmunolgicos
un grupo de estos sndromes, que podran llamarse formas clsicas o tpicas de IDCS, se presentan con linfopenia marcada, agamaglobulinemia
y ausencia de funcin inmune celular y humoral.
En este grupo de IDCS clsicas podemos enumerar, entre otras, la IDCS ligada al X (LX), la IDCS
autosmica recesiva (AR), la deficiencia de
2.3.2. Defectos combinados de clulas T y B

Se caracterizan clnica e inmunolgicamente
por defectos tanto en las clulas T como en las
clulas B (figura 30-1). Los criterios diagnsticos
incluyen, presentacin desde los primeros meses
de vida de infecciones severas potencialmente fatales, graves anormalidades de la inmunidad mediada por clulas, deficiencia de anticuerpos y
linfopenia debido al dficit de clulas T (Linfocitos
503
Sin ttulo-2
503
5/26/06, 10:26 AM
Figura 30-1. Defectos combinados de clulas T y B. Estos defectos se caracterizan clnica e inmunolgicamente por defectos
tanto en los LT y LB.
progenitores linfoides al no tener receptores intactos de varias interleuquinas no pueden ser estimulados por los factores de crecimiento necesarios para el desarrollo y diferenciacin normal de
los LT, lo que explica la marcada inmunodeficiencia que resulta. El gen anormal se encuentra
en la regin Xq13. El conocimiento del gen responsable y la posibilidad de establecer la mutacin mediante tcnicas de biologa molecular permite detectar portadoras y realizar diagnstico
prenatal. Recientemente se ha podido corregir el
defecto gentico, insertando el gen de la cadena
del receptor de interleuquina en las clulas
troncales (stem cells) de los pacientes.
En los ltimos aos se ha descrito una forma
de IDCS , con el mismo fenotipo T-, NK-, B+,
pero con patrn de herencia autosmica recesiva.
Adenosn deaminasa (ADA) y la disgenesia

reticular .
a) Inmunodeficiencia Combinada Severa ligada al sexo (IDCS-LX). Es la ms frecuente de las
IDCS, constituye el 50 a 60% del total, lo que
explica que la frecuencia de casos en varones sea
3 veces superior a los casos en mujeres. Se caracteriza por ausencia de linfocitos T y clulas NK
con linfocitos B en nmero normal o aumentado
pero no funcionales (fenotipo es por lo tanto T-,
NK-, B+).
El defecto gentico en la IDCS ligada al X
ha sido identificado como una mutacin de la cadena del receptor de la IL2 . La cadena es un
componente de los receptores de varias citoquinas
como IL4, IL7, IL9 , e IL15. De este modo, los
504
Sin ttulo-2
504
5/26/06, 10:26 AM
Esta entidad se ha relacionado con mutaciones a

nivel de JAK-3, molcula que interviene en la
trasduccin intracelular de seales postestimulacin de la cadena del receptor de IL-2.
txicos (desoxi guanosina trifosfato). Los LT son

particularmente sensibles a la acumulacin de dGTP por lo que se afectan en mayor grado que
los LB (a diferencia de dficit de ADA).
b) Inmunodeficiencia Combinada Severa

autosmica recesiva (IDCS-AR). Tambin conocida como alinfocitosis. Se presenta con un
fenotipo T-, NK+, B-, y representa aproximadamente un 25% del total de las IDCS.
Esta entidad podra ser dividida en dos grupos: IDCS-AR sin radiosensibilidad aumentada e
IDCS-AR con radiosensibilidad aumentada. En la
primera se han encontrado mutaciones en los genes
RAG-1 y RAG-2, involucrados en actividades de
recombinasa para genes V(D)J de las
inmunoglobulinas y del receptor del linfocito T.
En la segunda tambin estaran involucrados mecanismos alterados de recombinacion gentica
V(D)J, pero posiblemente a travs de una protena nuclear denominada DNA-PK (protein-kinasa
dependiente de DNA).
d) Disgenesia reticular. Es un sndrome muy

infrecuente que asocia a la deficiencia inmune con
fenotipo T-, NK-, B-, neutropenia y ocasionalmente trombocitopenia. La alteracin que da lugar a
esta entidad todava no se conoce, pero tiene semejanzas con una enfermedad murina producida
por mutaciones en el gen Pu-1, que afecta la linfo
y la mielopoyesis.
A diferencia de las formas clsicas que se describieron hasta ahora, las formas atpicas o no clsicas de inmunodeficiencia combinada pueden presentarse con recuentos linfocitarios normales, grados variables de hipogammaglobulinemia y en algunos casos, slo con alteraciones funcionales.
An en una misma familia, individuos portadores
de la enfermedad, han desarrollado fenotipos clnicos diversos (infecciones severas en un miembro y autoinmunidad en otro) y de distinta gravedad. Dentro de este grupo de entidades se incluye,
entre otras: deficiencia de expresin de MHC clase II, deficiencia de CD8 o ZAP-70, deficiencia
mltiple de produccin de interleuquinas, deficiencia de IL-2 y las deficiencias de expresin de
molculas del complejo CD3 (cadenas y ) (ver
captulo 7).
c) Deficiencia de ADA. Es otra forma clsica de

IDCS (fenotipo variable T-, NK-, B-). Representa
aproximadamente el 15% de la totalidad de los
casos de estas entidades. Se debe a mutaciones en
el gen que codifica la enzima Adenosin
Desaminasa, en el cromosoma 20q13. Esta enzima participa en el metabolismo de las purinas y
se encuentra distribuida en todos los tejidos, pero
con mayor actividad en el timo. La deficiencia de
ADA determina la acumulacin de intermediarios
txicos de la sntesis de bases pricas (adenosina,
2 deoxyadenosina y 2-0 metiladenosina), que
directa o indirectamente llevan a apoptosis de los
linfocitos.
Recientemente se han identificado variantes
de deficiencias de ADA, segn el tipo de mutacin encontrada. Las deleciones de la regin
cataltica del gen se relacionan con fenotipos clnicos muy graves, mientras que las mutaciones
puntuales que dan lugar a formas inactivas o inestables de la protena, se correlacionan con
fenotipos ms benignos de la enfermedad. Es la
primera IDP en la que se ha ensayado terapia
gnica.
Otra deficiencia enzimtica es tambin capaz de producir enfermedad inmunolgica. Se trata
de la deficiencia de Fosforilasa del nuclesido
purina (PNP), que se debe a defectos en el gen
que codifica la enzima localizado en el cromosoma
14q13.1. En su ausencia se acumulan metabolitos
a) Defectos en la expresin de MHC. Se llam

originalmente Sndrome del linfocito desnudo.
Es una inmunodeficiencia heterognea desde el
punto de vista gentico ya que puede producirse
por mutaciones en distintas protenas que promueven la transcripcin de molculas MHC clase II.
Se hereda de forma autosmica recesiva.
El nmero de clulas T CD4+ en la mayor
parte de los casos est disminuido, pero el recuento
de CD8+ es normal. Se presenta con hipogamaglobulinemia y ausencia de respuesta de las clulas T a antgenos especficos, con respuesta normal a estmulos mitognicos.
b) Defectos de activacin y funcin de clulas
T. Estos defectos, se caracterizan por la presencia
de un nmero normal de clulas T pero que no
son capaces de proliferar o producir citoquinas en
respuesta a estimulacin con mitgenos, antgenos
u otras seales de activacin del TCR.
La caracterizacin a nivel molecular ha demostrado en algunos de estos casos expresin de-
505
Sin ttulo-2
505
5/26/06, 10:26 AM
con LT doble positivos, CD4+ CD8+, LT CD4

normales y ausencia de CD8, demostrando que la
ZAP 70 es crtica para la diferenciacin intratmica
de esta ltima subpoblacin. In vitro, las clulas
mononucleares de estos pacientes no responden
al estmulo del TCR con anti-CD3, pero la respuesta es normal cuando se estimulan con PMA +
ionomicina, evidenciando un defecto temprano de
la estimulacin del receptor del LT.
En la tabla 30-4, se muestran algunos ejemplos de ID combinadas de clulas T y B.
ficiente del complejo CD3/TCR debido a mutaciones que dan lugar a deficiencia selectiva de la
subunidad o del CD3.
Otro de estos sndromes, es el denominado
deficiencia de CD8 o de ZAP-70. La ZAP-70 es
una protena quinasa fundamental para los mecanismos de sealizacin intracelular del TCR (ver
captulo 10). Los pacientes con esta deficiencia
muestran valores normales o aumentados de
linfocitos, con clulas CD4 aumentadas y ausencia de CD8. El timo muestra estructura normal,
Tabla 30 -4. Inmunodeficiencias Combinadas

Enfermedad
Fenotipo
Herencia
IDCS tpicas
IDCS
T - NK - B+
Ligada al X
AR
T- NK+B-
Defecto
Gen cadena gama R IL2, 4, 7, 9 y 15
Gen Jak3
AR
Genes RAG1/RAG2
Radiorresistentes
AR
Recombinacin
Radiosensible
Deficiencia de ADA
T-B-( progresiva)
NK variable
AR
Gen ADA
Disgenesia Reticular
T-NK-BGranulocitos-
---
---
Deficiencia MHC clase II
Variable.CD4
AR
Genes CIITA, RFX5
Deficiencia de molculas
CD3/TCR
Deficiencia de IL2
CD3 o ausentes
AR
Genes cadena ,
Normal
AR
---
Def. de mltiples citoquinas
Normal
---
---
Sndrome de Ommen
Linfocitosis Th2
oligoclonal
AR
Genes RAG1/ RAG2
Deficiencia de CD8
CD8 ausentes
AR
Gen ZAP -70
Deficiencia de PNP
CD3 progresiva
AR
Gen PNP
IDCS atpicas
IDCS Tpicas: con linfopenia, agammaglobulinemia y falta de repuesta a antgenos y mitgenos.

IDCS Atpicas: sin linfopenia, con o sin hipogammaglobulinemia. En algunos casos la respuesta celular in vitro es deficiente slo a antgenos.
506
Sin ttulo-2
506
5/26/06, 10:26 AM
frente a antgenos polisacridos. Es importante el

aumento en el riesgo de enfermedades linfoproliferativas malignas.
2.3.3. Inmunodeficiencias asociadas a otros defectos

Son un grupo de enfermedades que comprometen mltiples sistemas.
c) Ataxia telangiectasia. Este sndrome

autosmico recesivo se caracteriza por ataxia
cerebelar, telangiectasias (en lbulos de las orejas
y conjuntivas), y, en la mayora de los pacientes,
infecciones sinopulmonares recurrentes y marcada incidencia de tumores. Regularmente se encuentran niveles elevados de feto protena. Desde el
punto de vista inmunolgico, la inmunodeficiencia
si no est presente se desarrolla posteriormente en
el 70% de los casos. Las alteraciones son variables, siendo la ms frecuente la disminucin de
Igs (IgG 2, IgG 4, IgA, IgE), y la respuesta a
anticuerpos especficos deficiente que conduce a
las infecciones recidivantes del aparato respiratorio. La funcin y nmero de LT se encuentra reducido.
El defecto gentico asociado a esta enfermedad mapea en el cromosoma 11q23.1 La protena
codificada por este gen, ATM, se encuentra relacionada con el control del ciclo celular, transduccin de seales mitognicas, recombinacin
meitica y respuesta al dao del DNA. Existe un
aumento de la sensibilidad a radiaciones ionizantes
debido a reparacin del DNA defectuoso.
a) Anomala de DiGeorge. Resulta de un desarrollo defectuoso durante la embriognesis del 3

y 4 arcos farngeos. Estas estructuras dan origen
al timo y paratiroides en la sexta a octava semana
de gestacin y al arco artico y porciones de los
labios y orejas a las 12 semanas de gestacin.
La mayora de los pacientes presentan
deleciones a nivel del cromosoma 22q11 que se
han denominado CATCH-22 debido a las anomalas que se originan: Cardacas, Facie Anormal
(dismrfica con micrognatia) Hipoplasia o Aplasia
Tmica, paladar hendido (en ingls Cleft) e
Hipocalcemia (por ausencia de paratiroides). Se
han descrito otros casos que se asocian a consumo de alcohol o diabetes materna.
La mayora de los nios afectados presentan
tetania y/o falla cardaca neonatal. Slo un 20%
de ellos presenta nmero o funcin de LT disminuidos. Los nios que sobreviven pueden adquirir clulas T funcionales y corregir su inmunodeficiencia. Esto es probablemente por la presencia de algo de tejido tmico o porque algn sitio
extra tmico pueda asumir la funcin de la maduracin de los LT. La existencia de estos sitios se
ha sospechado pero no se han podido definir
anatmicamente.
d) Sndrome de Chediak-Higashi (CHS) y

Sndrome de Griscelli (GS). Tanto el CHS
incluido por la OMS entre las deficiencias
asociadas a otros defectos, como el GS, entidades
de herencia autosmica recesiva, se caracterizan
fenotpicamente por presentar albinismo parcial
oculocutneo, acompaado de disfuncin N,
alteraciones en la quimiotaxis y un grado variable
de compromiso T. Estas alteraciones redundan en
una predisposicin a padecer infecciones pigenas.
El CHS, a diferencia del GS, presenta grnulos
gigantes intracitoplasmticos en mltiples clulas,
siendo fcilmente distinguibles en los neutrfilos.
El fenmeno distintivo de estas entidades, es
la presencia de fases aceleradas, cuadros
sistmicos de activacin descontrolada del sistema inmune, gatilladas generalmente por
intercurrencias infecciosas. Estos cuadros son tambin conocidos como sndrome hemofagoctico,
linohistiocitosis hemofagoctica o sndrome de
activacin macrofgica. Clnicamente se presentan con fiebre, citopenias hemticas (por lo menos dos linajes afectados), esplenomegalia,
hipertrigliceridemia y/o hipofibrinogenemia, e
b) Sndrome de Wiskott-Aldrich. Se hereda

como una enfermedad recesiva ligada al X y se
caracteriza por eczema, trombocitopenia y
susceptibilidad a infecciones bacterianas. Las
plaquetas son pequeas. Existe una expresin
reducida de muchas glicoprotenas de superficie
(CD43) pero su papel en la inmunodeficiencia no
est claro.
El gen responsable se encuentra en el brazo
corto (p11.22) del cromosoma X. El producto de
este gen, una protena rica en prolina llamada
WASP, est involucrada en la regulacin de la funcin linfocitaria y plaquetaria. Controla el ensamblaje de filamentos de actina que se requieren para
la formacin de microvesculas. La respuesta
proliferativa de clulas T est ausente o muy disminuida. Las Igs pueden inicialmente ser normales pero luego disminuye especialmente IgM y
suele asociarse con aumento de IgA e IgE. Hay
dficit de produccin de anticuerpos especialmente
507
Sin ttulo-2
507
5/26/06, 10:26 AM
tituye la principal lnea de defensa contra organismos infecciosos. Los fagocitos y el complemento participan adems en la fase efectora de la respuesta inmune especfica.
infiltracin linfohistiocitaria no maligna en mdula sea, ganglio o bazo, acompaada de

hemofagocitosis.
El tratamiento de estos sndromes se basa en
una potente inmunosupresin, pero slo el trasplante de mdula sea despeja la posibilidad de
desarrollar nuevamente cuadros similares.
A pesar de compartir la gran mayora de sus
caractersticas clnicas, el CHS y el GS codifican en cromosomas distintos: el primero mapea
para la protena VPS5 en el cromosoma 1q43,
mientras que el segundo lo hace para la Myosin
5a, en el cromosoma 15q21. Ambas protenas
estn involucradas en trfico intracelular de
organelos.
a) Deficiencias del Complemento. Se han demostrado deficiencias de todos los Componentes del
Complemento (C1q, C1, C4, C2, C3, C5, C6, C7, C8,
C9) a excepcin de deficiencia de Factor B (ver
captulo 18).
En todos los casos se transmiten como defectos autosmicos recesivos; los casos heterozigotos pueden detectarse porque su suero contiene aproximadamente la mitad del nivel normal del
componente deficiente. Las deficiencias de la va
alterna son muy raras. El defecto ms comn es
C9 encontrado en donantes de sangre japoneses
(sin asociacin a enfermedades). Los defectos de
C1, C4 o C2 se asocian a una mayor incidencia de
enfermedades autoinmunes y/o por complejos inmunes. La ausencia de C3 con infecciones recurrentes severas por grmenes gram negativos y
gram positivos. En pacientes con dficit
homozigoto de C5 , C6 , C7 y C8 se han demostrado
infecciones recurrentes por Neisserias. (gonococo,
meningococo).
Se han descrito asimismo deficiencias de Protenas Reguladoras del Complemento solubles y
asociadas a membranas:
e) Inmunodeficiencia con respuesta inadecuada al virus de Epstein-Barr. Es una enfermedad

de herencia ligada al cromosoma X, conocida tambin como sndrome de Duncan o Purtilo. Los individuos con este sndrome, son varones aparentemente sanos hasta que contraen la infeccin con
el virus de Epstein-Barr y desarrollan mononucleosis infecciosa. La evolucin de la infeccin es
fatal en el 60-70% de los pacientes, principalmente
debido a una necrosis heptica causada por LT
citotxicos activados. La mayora de los que sobreviven desarrollan en distintos tiempos, linfomas
B o hipogammaglobulinemia. En los portadores
de esta enfermedad, la infeccin con el virus de
Epstein-Barr gatilla una respuesta inmune vigorosa y descontrolada, acompaada de una proliferacin policlonal T y B. La respuesta humoral contra el virus se desarrolla normalmente contra el
antgeno de la cpside viral (VCA), pero es inexistente contra sus antgenos nucleares (EBNA). Se
describe tambin una deficiente respuesta celular
especfica contra el virus, a pesar del incremento
de los linfocitos CD8+, as como un dficit de la
funcin citotxica anticuerpo-dependiente
(ADCC), mediada esta ltima por las clulas NK.
La alteracin molecular relacionada con esta
enfermedad ha sido localizada en el brazo largo
del cromosoma X (Xq26) y codifica una protena
no cataltica denominada SH2D1A presente en clulas T y NK, cuya funcin sera la de evitar la
activacin celular.
Angioedema Hereditario o Enfermedad de

Quincke. Es una deficiencia autosmica dominante del C1INH. Clnicamente se presenta como
angioedema de la piel y mucosas causada por traumas o algunas veces infecciones virales que pueden llevar a la muerte por edema larngeo. El compromiso de la mucosa intestinal produce dolor
abdominal. Los ataques duran 48 - 72 horas y ceden al caer los niveles de C4 y C2 . En el 85% de
los casos hay un defecto en la sntesis de la protena inhibidora de C1, en el resto puede existir una
cantidad normal pero hay funcin defectuosa.
Las deficiencias de factores reguladores solubles de la va alternativa (Factor I y Factor H)
son raras. Deficiencias de protenas reguladoras
asociadas a membranas incluyen ausencia de DAF
(Decay Acceleratig Factor), HRF (Factor de restriccin homlogo) y CD59. En ausencia de estas
protenas se puede producir lisis por activacin
del complemento en la superficie de glbulo rojo
dando origen a la enfermedad conocida como
Hemoglobinuria Paroxstica Nocturna.
2.3.4. Defectos congnitos de inmunidad natural

La inmunidad innata es mediada principalmente por los fagocitos y el complemento, y cons-
508
Sin ttulo-2
508
5/26/06, 10:26 AM
La base molecular del defecto es expresin deficiente o ausente de la cadena (CD18) del
subgrupo de integrinas 2 CD11a, CD18, CD11b,
CD18 y CD11c CD18). Estas protenas participan en la adhesin de los leucocitos a otras clulas y en la fagocitosis de partculas recubiertas de
Complemento. El gen CD18 se ha clonado y
secuenciado por lo que esta enfermedad es una
ms de las candidatas a terapia gnica.
Se ha descrito una segunda forma de deficiencia de adhesin leucocitaria (LAD-2) que se
debe a la ausencia del ligando Lewis X para las
molculas de adhesin selectina en el endotelio
vascular (ver captulo 12)
b) Defectos de los fagocitos. Pueden existir defectos en el nmero (neutropenia) o la funcin

fagoctica. Esta depende del movimiento en respuesta al estmulo quimiotctico, adherencia,
endocitosis y destruccin (Killing) de las partculas ingeridas. La movilidad depende de la integridad del citoesqueleto y del sistema contrctil
de la clula. La endocitosis depende de la expresin de ciertos receptores para IgG, C3b y IC3b, y
de la fluidez de la membrana. Los defectos de la
funcin fagoctica se enumeran en la tabla 30-1
Enfermedad granulomatosa crnica (EGC). Es
un grupo de defectos caracterizados por falla en
la produccin de radicales superxido, perxido
de hidrgeno y otros radicales de oxgeno fundamentales para la muerte intracelular de los
microorganismos.
Los pacientes afectados desarrollan infecciones recurrentes (adenitis, neumona, osteomielitis,
abscesos, hepatitis) por bacterias generalmente
productoras de catalasa (Staphylococcus aureus,
Escherichia coli, Serratia marcescens), hongos
(Nocardia, Aspergillus) y otros, con formacin de
granulomas especialmente en ganglios linfticos,
hgado y pulmn.
La reaccin NADPH + 20 2 NADP+ + 20+ H+ requiere un citocromo b especfico de los
2
fagocitos y NADPH oxidasa. El citocromo b558
es un heterodmero compuesto de una cadena de
91 kDa y otra de 22 kDa. En aproximadamente un
62% de los pacientes la enfermedad es ligada al
cromosoma X y se han encontrado mutaciones del
gen que codifica la cadena 91 kDa (gp 91 phox).
El 38% restante presenta herencia autosmica
recesiva debido a mutaciones del gen que codifica la cadena 22kDa o 1 de 2 protenas citoslicas
solubles (gp 47 phox o gp 67 phox).
In vitro, se ha logrado corregir el defecto por
expresin de gp91 phox utilizando retrovirus. Desde el punto de vista clnico el uso de IFN
recombinante ha demostrado ser til en prevenir
infecciones serias pero no se han comprobado
cambios significativos en la produccin de anin
superxido por los fagocitos.
3. TRATAMIENTO DE LAS INMUNODEFICIENCIAS CONGNITAS

En teora, la terapia de eleccin es reemplazar el gen defectuoso. Como se mencion anteriormente, esta terapia se ha iniciado en algunas
inmunodeficiencias seleccionadas.
En la mayora de los casos, el tratamiento
actual tiene como objetivos, controlar las infecciones y reemplazar el componente defectuoso del
sistema inmune. Los procesos infecciosos deben
ser tratados rpidamente y con dosis apropiadas
del antibitico seleccionado segn antibiograma. El uso profilctico de antibiticos de amplio
espectro y poco generadores de resistencia, como
el cotrimoxasol, es una prctica frecuente y efectiva entre estos pacientes.
En todo paciente con deficiencia de la respuesta inmune celular, las transfusiones, si son necesarias, deben realizarse con sangre irradiada y
filtrada de leucocitos, por el riesgo de reaccin
injerto contra husped. Las inmunizaciones con
grmenes vivos como las vacunas Sabin
(Poliomielitis) y la BCG (tuberculosis), estn
formalmente contraindicadas.
Las terapias de reemplazo que han demostrado utilidad, son las siguientes:
a) Gammaglobulinas. Se usa en pacientes con
deficiencia de anticuerpos, siendo la administracin endovenosa la va de eleccin. Se recomiendan dosis de 400 a 600 mg/kg/mes, que permitan
mantener niveles sricos de IgG superiores a los
400-500 mg/dL. Son indicacin absoluta de tratamiento permanente con gammaglobulina la
Agammaglobulinemia ligada al sexo, la Deficiencia con hiper IgM, y la Inmunodeficiencia Comn
Deficiencias de adhesin leucocitaria 1 y 2. La

deficiencia de adhesin leucocitaria tipo 1 (LAD1) es una enfermedad autosmica recesiva rara que
se caracteriza por infecciones de la piel,
periodontitis y fstulas intestinales o perianales.
Existe adems un retardo en la cada del cordn
umbilical y dificultad en la curacin de heridas.
509
Sin ttulo-2
509
5/26/06, 10:26 AM
Variable. Las deficiencias de subclases de IgG,

asociadas o no a deficiencia IgA, se benefician
con el tratamiento sustitutivo con gamaglobulina.
En la deficiencia selectiva de IgA, el uso de
gamaglobulina est contraindicado por sus potenciales efectos adversos.
Las Deficiencias Combinadas Severas y otras
deficiencias como el Sndrome de Wiskott Aldrich,
se benefician con el reemplazo de gamaglobulina
como tratamiento auxiliar, pero deben
implementarse otros tratamientos para corregir los
defectos subyacentes.
El desarrollo de efectos adversos, del tipo
de las reacciones anafilcticas, se producen con
poca frecuencia y por mecanismos no bien
aclarados. Con la GGEV, la infusin lenta reduce o elimina estos efectos.
LECTURAS SUGERIDAS
Buckley, R., Primary immunodeficiency diseases due to defects in lymphocytes, N Engl J
Med, 343:18 1319-1324, 2000.
Cavazzana-Calvo, M.; Hacein-Bey, S.; de Saint
Basille, G. et al, Gene therapy of human severe
combined immunodeficiency (SCID)-X1 disease,
Science, 288: 669-672, 2000.
Conley, M.E.; Notarangelo L.; Etzioni A., Diagnostic criteria for primary immunodeficiency,
Clin Immunol 93:3 190-197, 1999.
Chain, M., R. (ed), Primary T-cell immunodeficiencies, Immunol and Allergy Clinics of North
America, 20:1, 2000
b) Trasplante de mdula sea. El trasplante de

mdula sea (TMO) de donante HLA idntico
(hermanos o miembros HLA idnticos en la familia) que ha llevado a una reconstitucin
inmunolgica completa en pacientes con IDCS (incluyendo deficiencia de ADA y PNP), Disgenesia
reticular, en Sndrome de Wiskott-Aldrich, Dficit de adhesin leucocitaria y Dficit de molculas MHC clase II. Desafortunadamente 2/3 de los
pacientes no tienen un donante compatible . En
estos casos puede utilizarse mdula idntica no
relacionada proveniente de "Bancos de mdula" o
se deber realizar el trasplante con mdula sea
haploidntica siendo necesario eliminar las clulas T del injerto para prevenir una complicacin
grave del TMO, la Enfermedad de injerto versus
husped.
La recuperacin inmunolgica post-trasplante puede evaluarse por la mejora clnica, la presencia de linajes celulares inexistentes en el receptor antes del procedimiento. Ejemplo: linfocitos
T y NK, en un paciente portador de IDCS-LX, la
recuperacin de la actividad enzimtica en los deficientes previos, la presencia de inmunoglobulinas
sricas o la deteccin de quimerismo celular (coexistencia de clulas del donante con las del receptor) por tcnicas moleculares, entre otras.
Chain M., R. (ed), Humoral immunodeficiencies, Immunol and Allergy Clinics of North
America, 21:1, 2001.
Ochs, H.; Smith, E.; Puck, J., In Primary Immunodeficiency Diseases. A molecular and genetic
approach, Oxford University Press, 1999.
Pevy, P.; Muto, T.; Levy, Y. et. al., Activation induced cytidine deaminase (AID) deficiency causes
the autosomal recessive form of hyper-IgM syndrome (HIGM2), Cell, 102: 565-575, 2000.
Primary immunodeficiency diseases: report of an
IUS scientific committee, Clin Exp Immunol,
118: Suppl 1:1-28, 1999.
c) Reemplazo enzimtico: El reemplazo parcial

de ADA o PNP puede efectuarse con glbulos rojos congelados irradiados y ADA bovina modificada por conjugacin con polietilenglicol.
510
Sin ttulo-2
510
5/26/06, 10:26 AM

Captulo 31
INMUNODEFICIENCIAS SECUNDARIAS
Mara Antonieta Guzmn M. y Cecilia Seplveda C.
1. Introduccin
2. Infeccin por VIH y SIDA
2.1. Magnitud del problema
2.2. Caractersticas del virus
2.3. Progresin de la infeccin por
VIH-1
2.4. Ingreso al organismo
2.5. Respuesta inmune anti-VIH
2.6 Diagnstico de labororatorio
2.7. Tratamiento
3. Sistema inmune fetal y neonatal
3.1. Inmunidad celular
3.2. Inmunidad humoral
4. Envejecimiento y sistema inmune
5. Inmunidad y nutricin
5.2. Dficit de nutrientes especficos
6. Inmunodeficiencia inducida por ciruga y trauma

7. Inmunodeficiencia secundaria a enfermedades infecciosas
7.1. Inmunodeficiencia secundaria a infecciones virales
7.2. Inmunodeficiencia secundaria a infecciones bacterianas y fngicas
7.3. Inmunodeficiencia secundaria a infecciones parasitarias
8. Inmunodeficiencia secundaria a enfermedades infiltrativas y tumores
8.1. Evasin de la respuesta inmune por
tumores
8.2. Defectos inmunolgicos en tumores
9. Inmunodeficiencia secundaria a terapia inmunosupresora
9.1. Mecanismos de accin
9.2. Impacto de la inmunodeficiencia
asociada a inmunosupresores
511
Sin ttulo-2
511
5/26/06, 10:26 AM
512
Sin ttulo-2
512
5/26/06, 10:26 AM
RESUMEN
En este captulo se incluyen las inmunodeficiencias secundarias ms frecuentes, tanto en el
nio como en el adulto. Se hace nfasis especial en la infeccin por Virus de la Inmunodeficiencia
Humana (VIH) y Sndrome de Inmunodeficiencia Adquirida (SIDA), debido a su relevancia
como problema de salud pblica en todo el mundo. Adems, aun cuando no constituyen
inmunodeficiencias secundarias propiamente tales, se han incorporado algunos aspectos relevantes del sistema inmune neonatal y del sistema inmune del senescente, edades extremas de la
vida en las cuales el sistema inmune presenta algunas caractersticas especiales que pueden semejar una inmunodeficiencia.
1.
mente en algunos subgrupos de la poblacin, por

ejemplo en hombres ancianos de origen mediterrneo en el caso del sarcoma de Kaposi y la
neumonia por Pneumocystis carinii en individuos
inmunodeprimidos por terapias inmunosupresoras,
la ocurrencia de este tipo de enfermedades en personas jvenes previamente sanas no tena precedentes. Una caracterstica comn en esta nueva
enfermedad, era la presencia de una progresiva y
severa inmunodeficiencia; de ah su nombre, sndrome, porque se presenta como un conjunto de
signos y sntomas relacionados, de inmunodeficiencia adquirida, para distinguirlo de formas congnitas de inmunodeficiencia.
Pronto se reportaron casos de SIDA en otros
grupos de la poblacin, tales como consumidores
de drogas intravenosas (CDI), personas que haban recibido transfusiones y productos de la sangre como los hemoflicos y, por ltimo, hijos de
madres con SIDA.
Todo indicaba que un agente infeccioso transmisible por contacto sexual ntimo y por la sangre
era el responsable de este sndrome, y en 1983 se
identific y reconoci como agente causal del
SIDA, el virus de inmunodeficiencia humano
(VIH). Este virus tiene la particularidad de daar
al sistema de defensas del organismo, como queda de manifiesto por la severa disminucin e incluso eliminacin de los linfocitos T CD4+
("helper") que lo caracteriza, en consecuencia, el
individuo queda inerme frente a la agresin de
mltiples agentes infecciosos y la muerte se produce, de no mediar ningn tratamiento, principalmente debido a estas complicaciones.
INTRODUCCIN
Las inmunodeficiencias secundarias son

aquellas que, a diferencia de las inmunodeficiencias
primarias, no son causadas por alteraciones intrnsecas en el desarrollo y funcin de los componentes del sistema inmune. Estas inmunodeficiencias
pueden afectar a uno o a varios de sus componentes y pueden ser transitorias o definitivas de acuerdo a la naturaleza y posibilidades de tratamiento o
eliminacin de la causa que las produce. La ms
conocida es la infeccin por VIH y el SIDA, otros
ejemplos son las inmunodeficiencias secundarias
a malnutricin, enteropatas perdedoras de protenas, tumores malignos linforreticulares, las inducidas por ciruga y trauma, tratamientos
inmunosupresores y quimioterapia. Como grupo,
las inmunodeficiencias secundarias son las ms comunes, especialmente las asociadas al VIH y a la
malnutricin, pudiendo presentarse a cualquier
edad.
2. INFECCIN POR VIH Y SIDA
El Sndrome de Inmunodeficiencia Adquirida SIDA fue reconocido como una nueva enfermedad en el mundo, en el ao 1981. Los primeros
casos en ser identificados, que pusieron en alerta
a la comunidad mdica y cientfica, se diagnosticaron en hombres homosexuales jvenes, previamente sanos, los cuales desarrollaron raras enfermedades tales como sarcoma de Kaposi y
neumonia por Pneumocystis carinii. Aunque estas enfermedades se haban observado ocasional-
513
Sin ttulo-2
513
5/26/06, 10:26 AM
demia. La deteccin de anticuerpos anti-VIH se

implement en los bancos de sangre del pas a
partir del segundo semestre de 1987, frenando la
exposicin por transfusiones de sangre y otros
productos hemoderivados. Sin embargo, se observa un aumento de casos asociados a la drogadiccin intravenosa, va que es hoy la fundamental
dentro de la transmisin sangunea. Los casos asociados a transmisin vertical constituyen el 2%
del total, con una tasa de transmisin del VIH de
la madre infectada a su hijo que alcanza al 27%,
cifra acumulada desde el inicio de la epidemia.
2.1. Magnitud del problema

La infeccin por VIH y el SIDA constituyen
una epidemia mundial de gran magnitud, el VIH
se ha propagado y sigue propagndose por todo el
orbe, apareciendo incluso en comunidades inicialmente poco afectadas por la epidemia. Hasta fines de 2000, segn las estimaciones del Programa
Conjunto de las Naciones Unidas sobre el VIH/
SIDA (ONUSIDA) y la Organizacin Mundial de
la Salud (OMS), copatrocinadora del ONUSIDA,
haba en el mundo un total de 36,4 millones de
personas viviendo con el VIH/SIDA, de los cuales ms de 14 millones corresponden a mujeres.
El nmero total de nios menores de 15 aos con
VIH, infectados en su mayora a travs de su madre antes de nacer, durante el parto o por la lactancia natural, se calcula en aproximadamente 5
millones desde los inicios de la epidemia, de los
cuales alrededor de 3 millones ya han fallecido.
Se calcula en alrededor de 16.000 las nuevas infecciones por el VIH que ocurren diariamente, de
las cuales al menos un 60% ocurre en adolescentes y nios.
En Amrica latina y el Caribe hay aproximadamente 1,8 millones de personas que viven
con el VIH, calculndose la prevalencia del VIH
en alrededor de 1 de cada 100 adultos en casi
todos los 44 pases y territorios de la regin. Las
tasas ms altas se observan en pases como Brasil y Argentina, y las ms bajas en Ecuador y
Bolivia.
En Chile, el primer caso de SIDA se notific en 1984 y hasta el 30 de junio de 2000 se haban notificado 3.741 enfermos y 3.492 portadores asintomticos en las trece regiones del pas.
La cifra real de portadores del VIH en el pas
podra ascender a alrededor de 30.000-40.000
personas.
El 89,7 % de los casos de SIDA son hombres
y el 10,3% mujeres, con un crecimiento mayor de
casos de SIDA en mujeres en relacin a los hombres, incluyendo todos los mecanismos de transmisin. La proporcin de casos de SIDA entre
hombres y mujeres ha disminuido con el tiempo,
desde 31,5:1 en 1990 a 8,5:1 en 1997.
Los principales grupos de edad afectados estn entre los 20 y 49 aos y concentran el 85,2%
de los casos. Los menores de 20 aos representan
el 2,7% y los mayores de 50 el 12,1%. En cuanto
a las categoras de exposicin, la principal es la
exposicin sexual con el 92% de los casos. La va
sangunea alcanza al 6% desde el inicio de la epi-
2. 2. Caractersticas del virus

El VIH est clasificado en la familia
Retroviridae y pertenece a la subfamilia de los
lentivirus. Se distinguen dos tipos de VIH: VIH-1
y VIH-2, siendo el VIH-1 ms importante debido
a su potencial patognico mayor, reflejado en su
rpida diseminacin por todo el mundo. El VIH-1
infecta las clulas CD4+ del sistema inmune, conduciendo a una profunda depresin de la inmunidad. Sin embargo, este virus tambin puede infectar otras clulas, como se ver ms adelante.
Estructura del VIH
Al microscopio electrnico, el VIH tiene las
caractersticas de un lentivirus, con un core con
forma de cono compuesto por protenas. Dentro
de esta cpside o nucleoide se encuentran dos hebras idnticas de cido ribonucleico (RNA), el material gentico del virus, estrechamente asociadas
con la enzima transcriptasa reversa que transcribe
el RNA viral en DNA en la clula hospedera, otras
enzimas y protenas.
La superficie del virus se caracteriza por la
presencia de 72 trmeros o tetrmeros formados
por las glicoprotenas de envoltura. stas se originan a partir de un precursor de 160 kDa, la
glicoprotena (gp) 160, la cual es clivada dentro
de la clula hospedera en una gp 120 externa y
una gp 41 de transmembrana. Parte de la porcin
central y terminal de la gp41 tambin se expresa
hacia el exterior del virin, donde se une a la gp120
de manera no covalente.
La gp120 del virin, localizada externamente, contiene el sitio de unin para el receptor celular y los dominios neutralizantes mayores. Se ha
reportado que la porcin externa de la gp41 y parte de la p17, contienen eptopos de reconocimiento para anticuerpos neutralizantes.
514
Sin ttulo-2
514
5/26/06, 10:26 AM
Organizacin genmica del VIH-1
molcula CD4, presente en la membrana de las

clulas CD4+, en particular linfocitos T helper
(LTh). El sitio de unin de CD4 a la gp120 del
virus se ha localizado en D1, la misma regin de
CD4 de unin a las molculas del Complejo Principal de Histocompatibilidad (MHC) clase II. En
el virus, la regin principal de unin a CD4 est
en la regin conservada C4, cerca del extremo
carboxiterminal de la gp120. En esta interaccin,
de gran afinidad, son importantes la conformacin
tanto de CD4 como de la gp120.
Enseguida de la unin de la gp120 a la molcula CD4, la gp120 se desplaza, permitiendo la
exposicin del dominio de fusin de la gp41, necesario para la continuacin del proceso. Este dominio se unira a un receptor de fusin celular,
permitiendo la fusin del VIH con la clula.
Varios estudios sobre la interaccin inicial
virus-clula hospedera indicaron que el receptor
CD4 solo no era suficiente ni tampoco el nico
medio para permitir la entrada viral a la clulas.
De este modo, se lleg a identificar que ciertos
receptores de quimioquinas actan como
correceptores del virus. As, la molcula CXCR-4
acta como correceptor para cepas virales
linfocitotrpicas, usualmente con fenotipo inductor de sincicios, en cambio CCR-5, ayuda a las
cepas macrofagotrpicas no inductoras de
sincicios a entrar a la clula. Una variante gentica
de CCR-5, con una delecin de 12 bp se ha relacionado con resistencia a la infeccin por VIH-1
e in vitro, las clulas mononucleares de sujetos
que han estado expuestos al VIH, pero que son
homocigotos para esta mutacin habitualmente son
resistentes a la infeccin. Tambin se ha sugerido
un retardo en la progresin de la enfermedad en
individuos que son heterocigotos para el alelo
mutante.
Los receptores de quimioquinas toman contacto estrecho con el asa V3, facilitando una unin
ms estrecha del virus con la membrana de la clula hospedera, facilitando as la fusin. El mecanismo de entrada de la cpside, sin embargo, es
desconocido.
Muchas clulas CD4- son susceptibles de ser
infectadas por VIH, incluyendo fibroblastos de la
piel y de la pulpa dental, clulas foliculares
dendrticas, clulas de la glia, clulas endoteliales
de capilares cerebrales, clulas epiteliales cervicales, clulas del trofoblasto, clulas de epitelio
intestinal, clulas del epitelio renal. Se postula
que esta infeccin es posible por la interaccin
con receptores secundarios como los de
El tamao genmico del VIH-1 es de alrededor de 9,8 kb. Contiene genes estructurales: gag,
pol y env, y al menos 8 genes reguladores.
El transcripto primario del VIH es un RNA
mensajero (mRNA) largo, el cual es traducido en
las protenas Gag y Pol. Por clivaje proteoltico,
se originan las protenas y enzimas maduras. Los
productos de los genes no estructurales del VIH
constituyen una variedad de protenas virales
reguladoras y accesorias que pueden afectar la
replicacin del virus en varios tipos celulares.
Algunos estudios sugieren que los genes accesorios pueden ser ms importantes para la replicacin
del VIH-1 en los macrfagos que en los linfocitos
CD4+.
Variacin gentica del VIH-1
El VIH-1 se encuentra en los individuos infectados como mezcla de variantes virales
genticamente
relacionadas,
llamadas
cuasiespecies, que son el resultado de una alta tasa
de error en la actividad de la transcriptasa reversa.
La variacin gentica observada no est distribuida uniformemente en el genoma viral, siendo env
el gen viral ms variable y gag y pol ms conservados. Sin embargo, no todas las regiones de env
varan en la misma forma, distinguindose 5 regiones variables (V1 a V5) y 4 regiones constantes. La tercera regin hipervariable de la gp120,
que tiene una estructura en asa central o loop V3,
contiene el sitio ms importante para la neutralizacin por anticuerpos. El asa V3 tambin est
involucrada en el tropismo celular y formacin de
sincicios. Esta gran variacin gentica en un mismo individuo, da cuenta de la rpida emergencia
de variantes resistentes a anticuerpos neutralizantes, a clulas T citolticas y drogas antirretrovirales. Adems, la naturaleza diploide del genoma
del VIH contribuye a aumentar la variacin viral
mediante la recombinacin gentica.
Ciclo de replicacin viral
La transmisin del VIH requiere de una adecuada interaccin del virus con receptores de la
superficie de la clula hospedera. Luego de sta,
se producen diversos eventos que facilitan la penetracin de la cpside viral a travs de la membrana celular.
El principal receptor celular del VIH es la
515
Sin ttulo-2
515
5/26/06, 10:26 AM
quimioquinas o por un receptor de fusin desconocido. Tambin se ha demostrado que en

neuronas actan como receptores virales los
glicolpidos de membrana galacilceramida y
galacilsulfuro. Estos receptores se han relacionado tambin con la infeccin de clulas intestinales y del epitelio vaginal.
El VIH establece adems uniones con otras
molculas presentes en la membrana de la clula
hospedera y que pueden aumentar su infectividad,
como por ejemplo molculas MHC y molculas
de adhesin celular (LFA-1, ICAM-1, CD44), protenas que unen la manosa presente en la envoltura viral.
Un concepto clave en los eventos iniciales de la interaccin del VIH con la clula es
que probablemente la unin a CD4 provoca
cambios conformacionales tanto en la gp120
como en CD4. Esta alteracin causa los cambios necesarios para la unin con CXCR-4,
CCR-5, u otros co-receptores. Luego ocurre la
fusin entre gp41 y el receptor de fusin y se
produce la fusin virus-clulas, que es pH independiente. Enseguida se produce la entrada
del core completo en la clula. Posteriormente
se inician eventos intracelulares como la transcripcin reversa, produccin del DNA viral y
su duplicacin en un DNA de doble cadena que
llega al ncleo en donde se integra en el DNA
cromosomal. La produccin del mRNA y del
RNA genmico viral conduce posteriormente
a la produccin de las poliprotenas virales. Enseguida se incorpora el RNA genmico en la
cpside formada en la membrana celular y en
compartimientos intracelulares, ocurriendo el
procesamiento de las poliprotenas Gag y GagPol en la membrana celular y en los viriones
en gemacin. Estas protenas procesadas se incorporan en la envoltura viral constituyendo
los nuevos viriones maduros. En la tabla 31-1
se presentan las etapas del ciclo celular del
VIH-1.
Mecanismos adicionales de entrada del virus a la clula hospedera pueden estar mediados
por receptores Fc y del complemento. De hecho,
en estudios sobre la respuesta humoral en la infeccin por VIH, se ha demostrado la facilitacin
de la infeccin viral mediada por anticuerpos.
interaccin de factores intracelulares con las regiones LTR (long terminal repeat) presentes en
los extremos del genoma viral. Durante este proceso, se activan factores transcripcionales, por
ejemplo NF-B cuya interaccin con regiones de
los LTR puede aumentar o suprimir la replicacin
viral. Ciertas citoquinas y hormonas, as como
protenas transactivadoras de otros virus, pueden
tambin aumentar la produccin del VIH va estos eventos intracelulares.
Tabla 31-1. Ciclo celular del VIH
Control de la replicacin del virus

El estado de activacin de las clulas T es
importante para la replicacin viral e involucra la
Unin de la gp120 de la envoltura viral al receptor de superficie celular: CD4 u alternativo.

Cambio conformacional de la gp120 y quizs de la molculas CD4.
Unin de otra regin de la gp120 a un coreceptor.
Desplazamiento de gp120.
Clivaje proteoltico del asa V3.
Interaccin del domino de fusin del VIH (por
ej. gp41) con un receptor de fusin de la superficie celular (posiblemente un glicolpido).
Fusin virus:clula.
Entrada del RNA viral asociado con el core
al citoplasma celular.
Inicio de la transcripcin reversa.
Produccin del DNA viral a partir del RNA
viral y su duplicacin en hebras de doble cadena, generacin forma circulares unidas
covalentemente y no covalentemente.
Transporte del DNA copiado al ncleo, integracin de las formas circulares unidas no
covalentemente al DNA cromosomal.
Produccin del mRNA viral y del RNA
genmico viral a partir del DNA proviral integrado.
Produccin de protenas virales.
Incorporacin del RNA genmico en la
cpside formada en la membrana celular.
Procesamiento de las poliprotenas Gag y
Gag-Pol en la superficie celular y en los
viriones en formacin.
Gemacin de la cpside viral a travs de la
membrana celular con incorporacin de las
glicoprotenas de envoltura procesadas presentes en la superficie celular.
516
Sin ttulo-2
516
5/26/06, 10:26 AM
10 aos; los progresores rpidos, evolucionan a

SIDA en 3 a 4 aos, y corresponden al 5-10% de
los casos; y finalmente, los no progresores, o
progresores lentos, que corresponden a no ms del
5% de los pacientes con infeccin por VIH, y que
permanecen asintomticos por perodos de ms de
10 a 15 aos, manteniendo recuentos de clulas
CD4+ superiores a 400/L, y cargas virales muy
bajas o indetectables.
Existen varios cofactores involucrados en la
evolucin a la enfermedad, como la va de transmisin, edad al momento de la infeccin, estado
previo del sistema inmune del husped,
primoinfeccin sintomtica, coinfecciones con
otros patgenos, etc.
Se han descrito importantes asociaciones del
sistema HLA ("Human Leukocyte Antigen", MHC
en humanos) y progresin de la infeccin por VIH,
en este sentido, se han identificado haplotipos
HLA-A1/B8/DR3/B35, asociados con una rpida
progresin a SIDA, y con una mayor susceptibilidad a la infeccin, en tanto haplotipos HLA-A9/
A25/ A32/ B5/ B18/ B27/ DR5/ DR6/ DR13, se
asocian a individuos que presentan una lenta progresin a SIDA, y haplotipos HLA-A2/ A28/
DR13, a personas seronegativas, frecuentemente
expuestas al VIH, por lo que se asocian con cierta
resistencia a la infeccin.
Otro factor importante a considerar en el curso de la infeccin por VIH, es la respuesta de clulas Th1 y Th2. Aparentemente se producira un
"switch" en el curso de la infeccin por VIH, predominando la respuesta Th2 sobre Th1, lo que se
ha relacionado con una rpida progresin a SIDA.
Mecanismos citopticos
Muy importante en la comprensin de la
patognesis del VIH en el individuo infectado es
el conocimiento de los mecanismos citopticos por
los que actan el virus o sus protenas sobre las
clulas infectadas y no infectadas. Ciertos VIH-1
aislados de individuos con enfermedad avanzada,
tienen una mayor capacidad para matar clulas
infectadas en cultivo que los aislados de individuos asintomticos. La muerte celular parece ser
el resultado de la formacin de clulas
multinucleadas, necrosis y apoptosis.
La formacin de clulas multinucleadas o
sincicios que ocurre en cultivo, y quizs en el individuo, es el resultado de la fusin de clulas infectadas con clulas CD4+ no infectadas; parece
involucrar carbohidratos y glicolpidos de la superficie celular y muy probablemente mltiples
interacciones gp120:CD4. VIH inductores de
sincicios (IS) se encuentran ms frecuentemente
en individuos con enfermedad avanzada. Sin embargo, exceptuando el cerebro, no hay evidencias
de la existencia de clulas multinucleadas in vivo.
Varias observaciones han relacionado la
muerte celular con toxicidad directa del virus o de
la envoltura viral. El mecanismo no es claro, pero
podra involucrar un cambio de la integridad de la
membrana celular y/o apoptosis. Se ha descrito
actividad citotxica a varias protenas virales.
La apoptosis acelerada de clulas T que se
observa en la infeccin por VIH-1 puede estar relacionada con varios mecanismos: protenas
virales especficas que actan como inductoras,
interaccin de las protenas del virus con la molcula CD4, interaccin de citoquinas con sus receptores (particularmente el sistema Fas/Fas-ligando). A todos estos mecanismos, pueden sumarse defectos de las clulas presentadoras de antgeno
que llevan a una actividad defectuosa de las clulas T y, por ltimo, una actividad tipo superantgeno del VIH.
2.4. Ingreso al organismo

El VIH ingresa al organismo, directamente a
travs del torrente sanguneo, o a travs de mucosas, pudiendo ingresar como virus libre o clulas
infectadas, lo habitual es la transmisin sexual a
nivel de la mucosa genital. Las primeras clulas
infectadas son las clulas dendrticas de la lmina
propia, stas se fusionan con clulas CD4+, y se
produce diseminacin a otros tejidos. El VIH
puede ser detectado en los ganglios linfticos
regionales, a los pocos das despus de producida
la infeccin. Posteriormente ocurre diseminacin
sistmica. Lesiones en la mucosa e inflamacin,
debido a lceras genitales, uretritis o cervicitis,
favorecen que se establezca la infeccin por VIH.
En los ganglios linfticos se produce
infeccin de clulas CD4+ activadas, y
2.3. Progresin de la infeccin por VIH-1

La evolucin en el tiempo de un paciente
con infeccin por VIH es muy variable, sin embargo, se han evidenciado mltiples factores, que
intervienen en una mayor o menor progresin a
SIDA. En general, se describen tres grupos de
pacientes de acuerdo a su evolucin: los
progresores tpicos, que corresponden al 80-90%
de los casos, y cuya sobrevida es aproximadamente
517
Sin ttulo-2
517
5/26/06, 10:26 AM
diseminacin a otros tejidos linfoides y rganos a

distancia. Es importante comprender que desde el
punto de vista virolgico, no existe perodo de
latencia, ya que estos rganos linfoides,
constituyen un reservorio del virus, y un sitio de
constante replicacin. Existe un verdadero
secuestro del VIH a nivel de las clulas dendrtico
foliculares, presentes en los ganglios linfticos.
curativo sino que est orientado a suprimir la

replicacin viral, permitiendo la recuperacin
inmunolgica del individuo, mejorando su estado
de salud y calidad de vida.
a) Tratamiento antirretroviral
Los objetivos teraputicos frente a la infeccin por VIH han ido evolucionando en funcin
de la eficacia y seguridad de los antirretrovirales,
y de una forma esquemtica se han ido planteado
las siguientes alternativas posibles: (i) Reduccin
sustancial de la carga viral, sin que necesariamente se pretenda que la viremia sea indetectable, (ii)
carga viral plasmtica indetectable y (iii) erradicacin de la infeccin.
Los principios generales del tratamiento frente a la infeccin por VIH son los siguientes: (i)
tratamiento intenso, con el propsito de suprimir
al mximo la replicacin viral, (ii) anlisis de beneficios y riesgos del inicio del tratamiento
antirretroviral, (iii) desarrollo de resistencia a los
antirretrovirales, (iv) base de la teraputica actual
son las combinaciones de antirretrovirales, (v) el
recuento de LT CD4+ y la carga viral son imprescindibles, (vi) la adherencia al tratamiento es un
pilar esencial frente a la infeccin por VIH.
Los antirretrovirales disponibles comercialmente pertenecen a 3 familias: (i) los inhibidores
de la transcriptasa reversa anlogos de
nuclesidos: zidovudina (ZDV), didanosina (ddI),
zalcitabina (ddC), estavudina (d4T), lamivudina
(3TC), (ii) los inhibidores de la transcriptasa
reversa no anlogos de nuclesidos: delavirdina,
y (iii) los inhibidores de proteasa: ritonavir (RIT),
saquinavir (SAQ), indinavir (IND) y lopinavir.
Cada uno de estos medicamentos tiene un perfil
de efectos adversos que es necesario considerar, e
interacciones con otros frmacos.
2.5. Respuesta inmune anti-VIH

En la infeccin por VIH, la evolucin a SIDA
est relacionada con el xito de la respuesta inmune
en controlar la replicacin y diseminacin del virus. La respuesta inmune especfica, tanto humoral
como mediada por clulass se ha demostrado en
pacientes con infeccin por VIH, sin embargo, est
claro que esta inmunidad especfica al virus, no
confiere adecuada proteccin. Esto se explica, en
cierta medida, por el hecho de que las clulas CD4+,
necesarias para iniciar una repuesta inmune
especfica y protectora, son destruidas o alteradas
funcionalmente; adems el virus presenta un alto
grado de variabilidad gentica, lo que lleva a
variaciones antignicas, que le sirven al VIH para
evadir al sistema inmune del husped.
2.6. Diagnstico de laboratorio
La pesquisa de anticuerpos anti-VIH en
muestras de suero es el mtodo ms comnmente
empleado para el diagnstico de laboratorio de la
infeccin por VIH. Los antgenos usados en los
ELISAs y otras pruebas de tamizaje para pesquisar anticuerpos anti-VIH incluyen pptidos
recombinantes/sintticos de VIH-1 y VIH-2. Debido a que estas pruebas son muy sensibles pero
no tan especficas, y dado la trascendencia del
diagnstico de infeccin por el VIH es necesaria
la confirmacin de los resultados positivos. Entre
las pruebas de confirmacin se pueden citar las
basadas en la inmunoelectrotransferencia o
western blot (la ms usada), inmunofluorescencia indirecta, radioinmunoprecipitacin e
immunoblot con antgenos recombinantes.
b) Otros tratamientos
En el paciente con infeccin por VIH es esencial la atencin integral. No slo considerar la terapia farmacolgica, sino el apoyo psicolgico
para l y su entorno, apoyo nutricional, prevencin de complicaciones oportunistas, uso adecuado de ciertas vacunas, prevencin de reinfecciones
con el VIH (sexo ms seguro), entre otras medidas. En este marco tambin puede tener un lugar,
en casos seleccionados, la terapia inmunolgica
con citoquinas como la IL-2 para estimular la reconstitucin inmunolgica.
2.7. Tratamiento
El tratamiento en los pacientes VIH positivos depender de la etapa en que se encuentra la
enfermedad. Se han establecido parmetros clnicos y de laboratorio para decidir el momento ms
adecuado para iniciar este tratamiento, que no es
518
Sin ttulo-2
518
5/26/06, 10:26 AM
Respuesta humoral
Respuesta celular
La produccin de anticuerpos con especificidad para varios de los componentes virales, se

produce precozmente en el curso de la infeccin
por VIH, constituyendo la base para el diagnstico.
Hay evidencias que demuestran que una
disminucin de los anticuerpos anti-gag o anti-pol,
precede la progresin a SIDA en 1 a 4 aos.
Existen anticuerpos que pueden neutralizar
la infectividad de virus libres, o unidos a membrana, antes de su entrada a las clulas, tambin
se han reportado anticuerpos neutralizantes de
protenas estructurales internas. El principal
eptopo neutralizante, est localizado en la regin
hipervariable de la gp120 de la envoltura, la regin
V3, los anticuerpos con especificidad para esta
regin son tipo-especfico.
En el genoma viral, que codifica para las gp
120 y gp 41, se han identificado los sitios
especficos de reconocimiento antgnico, de
anticuerpos neutralizantes, con propiedad ADCC
(Citotoxicidad dependiente de anticuerpos) y
reconocimiento de clulas T especficas.
Los anticuerpos neutralizantes contra la
regin hipervariable V3 de la gp 120, al parecer
inhiben la infeccin al bloquear cambios
conformacionales de la gp120, necesarios para el
proceso de fusin y entrada del VIH a la clula.
Tambin se han descrito anticuerpos neutralizantes
contra la regin de unin a CD4 de la gp120, su
rol protector es menos eficaz que los anteriores.
Los niveles sricos de anticuerpos neutralizantes, aparecen 2 a 4 semanas despus de la
primoinfeccin, alcanzando su "peak" durante la
fase asintomtica. En etapas avanzadas de la
infeccin, estos anticuerpos se encuentran a muy
bajos niveles. En cuanto a los anticuerpos con
propiedad ADCC, o fijacin del complemento,
existe an bastante controversia de su rol benfico
o deletreo in vivo. Se ha observado que anticuerpos
anti-VIH, que median ADCC de clulas que
expresan gp120 o gp41, se elevan precozmente en
el curso de la infeccin, y son detectados a travs
de toda la evolucin, disminuyendo sus niveles con
el desarrollo de la enfermedad.
Tambin se han descrito los anticuerpos
facilitantes de la infeccin por VIH, va receptores
del complemento o fraccin Fc de las
inmunoglobulinas. El significado "in vivo" de estos
anticuerpos facilitantes es an controvertido,
aunque se ha observado que su presencia se
correlaciona con progresin a SIDA.
Existen evidencias de la importancia de la

inmunidad celular especfica anti-VIH, y de su
rol en la progresin a SIDA. Se han identificado
respuestas de clulas Th anti-VIH, clulas CD8+
que median citotoxicidad directa de clulas
infectadas, va restriccin MHC clase I, y tambin
clulas CD8+ que suprimen la replicacin del VIH
por mecanismos MHC independientes. Se han
identificado los eptopos de la envoltura viral, que
son el blanco de los LTh y LT citotxicos, sin
embargo, se ha evidenciado respuesta a la mayora
de las protenas estructurales y reguladoras del
virus.
Diferentes ensayos de inmunizacin activa,
en modelos animales, han demostrado que la
respuesta inmune mediada por LT CD8+, es la que
mejor se correlaciona con proteccin de la
infeccin por VIH.
Para desarrollar una vacuna anti-VIH eficaz,
es necesario comprender ampliamente los aspectos de la inmunidad protectora anti-VIH.
3. SISTEMA INMUNE FETAL Y NEONATAL

El recin nacido est expuesto a infecciones
neonatales por bacterias pigenas, virus y ciertos
patgenos intracelulares como Toxoplasma Gondii
y Listeria Monocytogenes, dada la inmadurez de su
sistema inmunitario, tanto humoral como celular.
Tanto los linfocitos T CD4+ como los T
CD8+ aparecen en el hgado y bazo a las 14 semanas de gestacin, luego se produce un aumento
progresivo hasta los 6 meses de vida extrauterina
que declina gradualmente hasta llegar a los niveles del adulto durante la infancia. La relacin CD4/
CD8 es mayor durante la vida fetal (3,5) vs 2,5 al
trmino del embarazo. La relacin en un adulto se
estima entre 1,2 y 2,1.
As, los linfocitos T en nios de trmino estn aumentados en nmero y presentan una mayor expresin de CD38 (marcador timocitario) o
de CD45RA (marcador de linfocitos T nave, presentes en el 90% de estos linfocitos a esta edad vs
un 60% de representacin en la misma poblacin
T en un adulto).
Tambin existe una respuesta normal a
mitgenos pero una menor respuesta proliferativa
519
Sin ttulo-2
519
5/26/06, 10:26 AM
a anticuerpos anti-CD2 y anti-CD3, lo que correspondera a una propiedad general de los linfocitos
T nave ms que a una caracterstica nica de los
linfocitos T del recin nacido.
Existe adems un dficit de la produccin de
linfoquinas, IL-3, IL-4, IL-5 e IFN-, comparado
con la produccin de los linfocitos T del adulto.
Por los factores ya mencionados y por la
menor expresin de molculas coestimuladoras,
como por ejemplo el ligando CD40 de superficie,
existe una menor colaboracin para la funcin de
los linfocitos B, que tienen una menor produccin
de anticuerpos.
En general, las respuestas T citotxicas estn disminuidas en recin nacidos, promediando
el 30 a 60% de aquella generada por las clulas
adultas.
principalmente de IgM, como por ej. Salmonellas

y Escherichia Coli y donde los niveles de IgG protectores son suficientes para la madre, pero no para
el feto o recin nacido, ya que la madre puede montar una respuesta inmune secundaria con rapidez y
tambin una respuesta de IgM ms rpida a estos
antgenos de evocacin, cuando su sistema inmune se encuentra nuevamente con el patgeno.
Respecto a los niveles de inmunoglobulinas,
es importante destacar que la IgM alcanza el nivel
de un adulto al ao de vida, la IgA en la adolescencia y la IgG alrededor de los 5 a 6 aos. En un nio
prematuro, se observarn menores concentraciones
de inmunoglobulinas que en un nio de trmino.
Respecto a las concentraciones de los factores del Complemento, y su actividad funcional estn disminuidas incluso en recin nacidos de trmino, y estas deficiencias son an ms evidentes
en prematuros. La va alterna ms es la afectada.
La sntesis de los factores del complemento
se inicia a las 6 a 14 semanas de vida intrauterina,
pero no es significativa hasta el tercer trimestre
de la gestacin. Al trmino del embarazo, los niveles de las protenas del complemento representan el 50 a 75% de los niveles maternos.
Tambin se ha observado que la concentracin de fibronectina, una glicoprotena de alto peso
molecular, que acta como opsonina, est reducida en el recin nacido, en especial en aquellos que
presentan distress respiratorio, asfixia y cuadros
spticos.
Respecto a las caractersticas del sistema
fagoctico a esta edad, podemos sealar que el
nmero de neutrfilos circulantes se eleva poco
despus del nacimiento, pero la capacidad de respuesta medular y produccin de nuevas clulas
en la presencia de cuadros infecciosos es limitada, especialmente en prematuros. Estas clulas
alcanzan un peak a las 12 a 14 horas del nacimiento, y posteriormente disminuyen, alcanzando a las
72 horas los niveles sanguneos de un adulto
El nmero de monocitos circulantes, est
normal o aumentado en recin nacidos, con una
capacidad de respuesta medular conservada. La
produccin de macrfagos comienza desde la cuarta semana de gestacin, pero se desconoce el nmero de macrfagos tisulares en recin nacidos.
Estas clulas tienen una permanencia de 2 a 3
meses en los tejidos, luego de un paso sanguneo
de 2 a 3 das como monocitos.

Aunque existe sntesis de anticuerpos especficos desde las 20 a 24 semanas de vida intrauterina,
la concentracin de IgM e IgA es baja al momento
de nacer, por la falta de exposicin antignica. Respecto a la inmunoglobulina G, el neonato depende
del paso transplacentario de este anticuerpo para
protegerse contra ciertos patgenos, lo que ocurre
principalmente en las ltimas 8 a 10 semanas de la
gestacin, por lo cual un nio prematuro es ms
susceptible a desarrollar estas infecciones. Este paso
transplacentario comienza a niveles bajos desde la
octava semana de gestacin, aumenta progresivamente durante el embarazo y en el recin nacido de
trmino incluso excede en 5 a 10% el nivel de
inmunoglobulina G materna.
Los linfocitos B del feto y neonato humano
son funcionalmente inmaduros y sus respuestas
de anticuerpos especficas son esencialmente IgM
y la respuesta a antgenos polisacridos est severamente alterada. Los linfocitos B neonatales no
se diferencian a clulas plasmticas productoras
de IgG o IgA por falta de colaboracin de los LTh
cuya actividad tambin est disminuida, como
veremos posteriormente.
Tambin puede producirse una tolerancia
neonatal a antgenos encontrados durante la vida
intrauterina y desarrollarse una anergia clonal de
estos linfocitos especficos, y ello puede explicar
el dficit de produccin de anticuerpos que puede
observarse en infecciones congnitas adquiridas
tempranamente in tero, como la Rubola.
Existe un problema adicional con ciertos
patgenos, ante los cuales la respuesta materna es
520
Sin ttulo-2
520
5/26/06, 10:26 AM
La quimiotaxis de neutrfilos y monocitos

est disminuida, probablemente debido a una menor expresin de molculas de adhesin, defecto
que se hace ms evidente en prematuros. Por este
motivo, la liberacin de monocitos a tejidos inflamados o infectados, est retardada.
Las funciones fagoctica y microbicida de
neutrfilos y monocitos provenientes de recin
nacidos sanos, estn conservadas in vitro pero alteradas en nios enfermos, especialmente si son
prematuros.
La produccin de citoquinas monocitarias
est relativamente conservada en recin nacidos
de trmino, y son capaces de secretar IL-1, IL-6,
TNF- e IL-8, en forma similar a las clulas de
un adulto, ante un estmulo endotxico.
Tambin est conservada la capacidad de producir GM-CSF y G-CSF (Factor estimulador de
colonias granulocito-monocito y granulocito, respectivamente).
Las clulas natural killer (NK) representan
un 10 a 15% de los linfocitos circulantes en el
adulto y en el recin nacido. Se observan en el
hgado fetal a partir de la sexta semana de gestacin. Su nmero alcanza un peak en el primer ao
de vida y a los 4 a 5 aos alcanza los niveles de un
adulto. Respecto a su funcionalidad, es importante destacar que sta aumenta progresivamente en
la vida fetal y postnatal, y que slo el 50% de ellos
expresa el marcador CD56 al momento del nacimiento. A esta edad estas clulas tienen una menor actividad citoltica.
cambios en la regulacin de la funcin de los

monocitos/macrfagos. Por estas razones, la
senescencia inmunolgica ms bien hay que entenderla como una disrregulacin del sistema inmune, que como una deficiencia.
Si bien no hay cambios de los linfocitos T
totales con la edad, se produce un aumento significativo del cuociente entre las dos principales
subpoblaciones de linfocitos T, (LT CD4+ y LT
CD8+), debido a un aumento significativo de los
linfocitos T CD4+. A diferencia de lo que se encuentra en el individuo joven, en el que predominan las clulas T CD4+ vrgenes (no han tenido
contacto con antgeno), que se caracterizan por el
marcador de membrana CD45RA+, en el
senescente estas clulas T CD4+ son predominantemente linfocitos T de memoria, que llevan el
marcador CD45RO+ . En los jvenes, el porcentaje de clulas T virgen excede al de clulas T de
memoria. A lo largo de la vida, la activacin de
las clulas T vrgenes estimula su transicin a clulas T de memoria, y por esta razn el tamao de
estos dos compartimientos celulares, cambia recprocamente con la edad. Ya en las edades medias de la vida, las clulas T de memoria son ms
numerosas que los LT vrgenes. Ambas
subpoblaciones difieren no solamente en las molculas que ellas activan sino tambin en las
citoquinas que producen. Por estas razones, el
cuociente alterado entre estas subpoblaciones contribuye en forma importante al efecto de la edad
sobre la respuesta inmune.
Debido a que la expansin clonal de las clulas T es una etapa importante en la respuesta
inmune, se ha estudiado extensamente la capacidad de respuesta proliferativa de los linfocitos T
en individuos jvenes y en senescentes. En los
ancianos se ha encontrado que la capacidad de
respuesta proliferativa de las clulas T a mitgenos
como "phytohemagglutin" (PHA), "concanavalin
A" (Con A) y al anticuerpo monoclonal anti-CD3,
est disminuida. Estos cambios parecen explicarse por alteraciones de la expresin de diversos
proto-oncogenes que regulan la proliferacin de
los linfocitos T, constatadas en estos grupos de la
poblacin.
Esta menor capacidad de respuesta
proliferativa de las clulas T en los ancianos, se
asocia con una disminucin de la produccin y de
la respuesta a la IL-2, interleuquina que es esen-
4. E N V E J E C I M I E N T O Y S I S T E M A
INMUNE
En el anciano hay una mayor incidencia de
enfermedades en general, y de enfermedades infecciosas en particular. Si bien parece lgico plantear que en el anciano, existe una inmunodeficiencia asociada con la edad, que podra explicar esta mayor incidencia, los marcadores ms
comunes de inmunodeficiencia no se constatan en
el senescente saludable. Por ejemplo, no se produce una disminucin del recuento de linfocitos
totales circulantes ni de la concentracin de
inmunoglobulinas sricas con la edad. Ms bien,
la senescencia inmunolgica se caracteriza por un
cambio en el nmero y competencia de las
subpoblaciones linfocitarias y de las citoquinas que
ellas producen, como asimismo por un cambio en
el repertorio de los linfocitos (menos clones) y
521
Sin ttulo-2
521
5/26/06, 10:26 AM
cial en esta etapa. Parece ser que esto se debe a

una disminucin de la expresin de los receptores
de alta afinidad para la IL-2, que se ha constatado
en estos individuos.
La produccin de otras citoquinas
inmunorreguladoras no est disminuida en el anciano. Con la edad la produccin de IFN- no cambia y la produccin de IL-4 y de IL-6 aumenta.
Estas citoquinas actan como factores de crecimiento de las clulas B, pueden contribuir al aumento de la produccin de autoanticuerpos y de
Igs monoclonales, que se observan en el
senescente.
Estos cambios en la produccin de citoquinas
en el anciano pueden deberse, al menos en parte,
al cambio que ocurre en la proporcin de clulas
T vrgenes y de memoria, ya que la secrecin de
citoquinas producidas por estas dos subpoblaciones celulares, es diferente. Ambas producen IL2, pero las clulas T de memoria son las principales productoras de IFN, IL-4 e IL-6. La expresin
dominante de esta subpoblacin particular de
linfocitos y la resultante produccin de citoquinas
puede contribuir a la mayor susceptibilidad a ciertas infecciones, que se produce con la edad.
La declinacin de las respuestas cutneas de
hipersensibilidad retardada, asociada con la edad,
fue el primer indicador que demostr que la funcin de las clulas T se altera con el envejecimiento. Muchas personas de edad avanzada, a pesar de
infeccin previa con el Mycobacterium tuberculosis, tienen respuestas dbiles o no tienen respuestas cutneas frente al PPD y otros antgenos de
evocacin.
no son severos, pero ellos pueden contribuir, a

hacer ms profundas las alteraciones de la inmunidad celular que se describen antes.
5. INMUNIDAD Y NUTRICIN
La nutricin inadecuada, influencia
adversamente la mayora de las funciones inmunes normales. La primera lnea de defensa en la
inmunidad normal es la integridad fsica de piel y
mucosas. Deficiencias de nutrientes especficos se
han correlacionado con alteraciones de estas importantes barreras, entre otras, la deficiencia de
vitamina A, riboflavina y piridoxina. La deficiencia proteica se asocia con atrofia generalizada de
la piel y, a nivel celular, puede llevar a una
deplecin del nmero de linfocitos y de clulas
plasmticas en el espacio intersticial de las membranas mucosas. Estas clulas juegan un rol importante en la produccin de IgA secretora, la principal inmunoglobulina de las mucosas.
La disminucin de la funcin de las clulas
T y de la inmunidad celular es el hallazgo ms
consistente en la evaluacin inmunolgica de los
individuos malnutridos. Hay deplecin tanto de
los linfocitos circulantes como tisulares y las respuestas cutneas de hipersensibilidad retardada
estn disminuidas, en forma proporcional a la severidad de la malnutricin. Las respuestas
proliferativas de los linfocitos T estn alteradas
en forma variable. Los mecanismos responsables
de esta disminucin de la inmunidad celular se
conocen slo parcialmente, postulndose la participacin de numerosos factores. En nios, estas
alteraciones se recuperan luego de una suplementacin diettica adecuada.

La inmunidad humoral se afecta poco. En general, el nmero y funcin de los linfocitos B permanece intacto, as como las inmunoglobulinas,
que pueden estar normales o levemente aumentadas. Hace excepcin la IgE, que puede estar muy
alta, independientemente de la contribucin de
otros factores, tales como parasitosis o alergia,
reflejando una regulacin defectuosa de su produccin por las clulas T.
Otros componentes del sistema de defensas
inespecfico, tales como el sistema fagoctico,
tambien est disminuido en la malnutricin, tan
frecuente en el anciano. La fagocitosis generalmente se mantiene intacta, pero algunos estudios
han mostrado una migracin y una capacidad
bactericida deficiente. En general, estos defectos
5.2. Dficit de nutrientes especficos

Se ha demostrado que las deficiencias de
nutrientes especficos, incluyendo vitaminas esenciales y minerales, tienen un efecto adverso sobre
varios parmetros de la inmunidad. El problema
de las interacciones de los micronutrientes con el
sistema inmune es complejo, debido a la asociacin frecuente con otras deficiencias nutricionales,
la presencia de infecciones clnicas o subclnicas,
las cuales por s mismas tienen un efecto sobre el
sistema inmune. Las deficiencias aisladas de
522
Sin ttulo-2
522
5/26/06, 10:26 AM
micronutrientes son raras, exceptuando las de fierro, la vitamina A y zinc.

El rol de la deficiencia de vitamina A en la
disminucin de las respuestas inmunes parece ser
muy importante, como queda demostrado por la
significativa disminucin de la morbimortalidad
que se ha observado en poblaciones deprivadas,
sometidas a suplementacin diettica con esta vitamina. La vitamina A parece jugar un papel importante en las funciones inmunes, como se mencion, en la mantencin de la integridad de las
barreras anatmicas, pero adems, se han documentado otros defectos inmunolgicos en el dficit de vitamina A: leve reduccin del peso del timo,
disminucin de la respuesta de los linfocitos T a
los mitgenos, disminucin de la produccin de
anticuerpos especficos, disminucin de la proliferacin de los linfocitos T in vitro y aumento de
la adherencia bacteriana a las clulas epiteliales
respiratorias.
La deficiencia de zinc se ha estudiado ms
extensamente que otras deficiencias. Estos estudios han demostrado que el zinc tiene los siguientes efectos profundos sobre la funcin inmune:
atrofia de tejidos linfticos en animales de experimentacin, deplecin linfocitaria, disminucin de
las respuestas de hipersensibilidad cutnea retardadas, disminucin de la respuesta proliferativa
de los linfocitos a mitgenos, menor quimiotaxis
de los neutrfilos, entre otras.
La deficiencia de vitamina E se asocia con
una disminucin de la inmunidad celular, disminucin del recuento de linfocitos T y de las respuestas de las clulas NK. Tambin se han observado sntesis de anticuerpos disminuidas. Estos
efectos son mayores cuando existe concomitantemente un dficit de selenio.
No existe mucha informacin acerca de los
efectos de la malnutricin y, en particular, de dficit especficos de micronutrientes, en poblacin
anciana. La mayor parte de los trabajos, a este respecto, se han efectuado en nios.
saria para la reparacin de la herida y para la defensa local contra los microorganismos.
Esta reaccin tambin evoca una respuesta
sistmica que, en general, es depresora de la inmunidad, cuya finalidad sera proteger al organismo de un sndrome de inflamacin sistmico
que podra llegar a ser deletreo. El grado de
inmunodeficiencia se correlaciona con el grado
de injuria y estrs y es causa de mayor morbilidad
y mortalidad en pacientes quirrgicos y
traumatizados, entre otras, sepsis y falla orgnica mltiple.
Los individuos con mayor riesgo son los recin nacidos, senescentes, pacientes con enfermedades severas subyacentes, especialmente las que
afectan al sistema inmune, malnutridos y alcohlicos. La identificacin de estos pacientes es importante y en pacientes con ciruga electiva es til
la evaluacin previa de la inmunocompetencia, ya
que pacientes anrgicos o que se hacen anrgicos
con la ciruga tienen mayor riesgo de sepsis y tambin mayor mortalidad.
7. INMUNODEFICIENCIA SECUNDARIA
A ENFERMEDADES INFECCIOSAS
Existen diversos mecanismos por los cuales
un agente infeccioso puede producir una alteracin de la respuesta inmune.
Es un hecho conocido que despus de algunas infecciones, como por ejemplo el sarampin,
el paciente que la ha experimentado queda propenso a tener otras infecciones, lo que da cuenta
de un deterioro de la respuesta inmune. Este dficit suele ser transitorio en la mayor parte de las
patologas infecciosas que lo producen, pero existen otras, como la infeccin por VIH (ver punto
2) que conducen a un deterioro progresivo del sistema inmune.
Entre estos mecanismos de depresin
inmunitaria estn la infeccin directa de las clulas
del sistema inmune, la alteracin de subpoblaciones
linfocitarias con linfopenia generalizada, supresin
de la respuesta de LTh, activacin de linfocitos T
supresores, y la generacin de mediadores solubles
que afectan la accin de clulas o mediadores
inmunolgicos (interferones y citoquinas derivadas
del husped y factores supresores y superantgenos
derivados del patgeno).
Existen diversos estudios epidemiolgicos
que muestran la mayor incidencia de infecciones
respiratorias altas y bajas durante epidemias de
6. INMUNODEFICIENCIA INDUCIDA POR

CIRUGA Y TRAUMA
El trauma quirrgico, ya sea accidental o en
el pabelln gatilla una respuesta inflamatoria y
metablica, destinada a controlar sus efectos y a
la reparacin. En general, el estrs quirrgico evoca una respuesta pequea y controlable. La inflamacin local producida por este proceso es nece-
523
Sin ttulo-2
523
5/26/06, 10:26 AM
influenza, e infecciones por virus sincicial respiratorio y adenovirus, en estos pacientes. Tambin
se ha observado la asociacin de infecciones simultneas, como por ejemplo, neumopatas por
Citomegalovirus y Herpes simplex, e infeccin por
virus de Epstein-Barr con Candidiasis diseminada, entre otros ejemplos. A continuacin se analizan algunos de los principales patgenos asociados con inmunodepresin:
presores. Los primeros estaran encargados de eliminar los linfocitos B infectados y los linfocitos
supresores ms bien inhibiran la proliferacin B y
mantendran al virus en estado latente. En esta enfermedad, existira un estmulo de la IL-10, proveniente de linfocitos Th2, y tambin por un homlogo viral de esta IL-10, que actan en forma
inhibitoria, de la actividad Th1, de la liberacin de
citoquinas y de la sntesis de IL-12, actuando sobre
los macrfagos para inhibir la activacin Th1.
Tambin se ha observado un aumento temporal del nmero de clulas NK, que presentan,
sin embargo, una funcin disminuida, que dura
aproximadamente 4 semanas, durante el curso de
una MNI.
La infeccin por virus de Epstein-Barr tambin se ha asociado con defectos inmunitarios ms
severos y permanentes.
7.1. Inmunodeficiencia secundaria a infecciones virales

Sarampin. Este virus infecta directamente
a las clulas linfoides, incluyendo monocitos,
linfocitos T y B, tambin es capaz de alterar la
actividad de clulas NK y la sntesis de
inmunoglobulinas. Este perodo de inmunodepresin habitualmente se manifiesta por unas pocas semanas, pudiendo conducir al desarrollo de
otras infecciones en ese momento. Este virus, se
une a CD46, una protena regulatoria del complemento, que acta como receptor viral, y esta unin
impide la produccin de interleuquina 12 por
monocitos y macrfagos, in vitro. La IL-12 es crtica en el desarrollo de la inmunidad celular, ya
que es un potente inductor de IFN- en linfocitos
T y clulas NK y es importante en el desarrollo de
respuestas de tipo Th1 y respuestas de hipersensibilidad retardada. Si se mide la produccin de
IL-12 por monocitos de sangre perifrica de pacientes con sarampin, se observa una marcada
supresin de la produccin de esta citoquina. Este
fenmeno es objetivable hasta varios meses despus de la infeccin aguda.
En esta patologa, como existe un dficit
inmunitario global, comandado por la supresin
de la proliferacin T ante el estmulo antignico,
tambin es posible encontrar anergia cutnea en
las pruebas de hipersensibilidad retardada, que es
una caracterstica comn de infecciones donde el
compromiso de la inmunidad celular es preponderante.
Citomegalovirus. La infeccin por este virus de

la familia de los Herpes virus puede manifestarse
por un sndrome mononuclesico o por patologas habitualmente ms graves, cuando ocurre una
reactivacin de la infeccin en condiciones de
depresin inmunitaria (Infeccin VIH, uso de
inmunosupresores, etc), con diseminacin de la
infeccin y compromiso orgnico generalizado.
Una vez que este agente infecta los monocitos, se
replica en ellos e induce la produccin de una
molcula inhibitoria de la actividad de la IL-1.
Una vez que las personas superan la
primoinfeccin por Citomegalovirus, la mayor
parte queda como portadora de la infeccin en
estado latente, y esta infeccin puede reactivarse
con gran agresividad en casos de inmunodeficiencias posteriores.
Otros Herpes virus. La infeccin por virus herpes simplex se asocia con una expansin de la
poblacin T supresora, lo que se manifiesta con
una linfoproliferacin disminuida y una menor
produccin de anticuerpos. Las glicoprotenas
virales pueden inhibir directamente la citolisis
mediada por complemento, y, a travs de la unin
al fragmento Fc de la IgG, impedir una adecuada
fagocitosis. A nivel de recuentos hematolgicos,
puede existir una linfopenia transitoria.
El virus herpes 6, causante de la Roseola infantil,
puede infectar directamente las clulas NK. Tambin se han reportado alteraciones en distintas funciones inmunitarias en la fase temprana de
reactivacin de infecciones por virus varicella
zoster.
Virus de Epstein-Barr. Este es un virus de la familia de los Herpes virus, causante de la

Mononucleosis Infecciosa (MNI), capaz de infectar directamente a los linfocitos B unindose al receptor CD21 de la superficie linfocitaria, y transformarlos produciendo una expansin policlonal de
linfocitos B, con aumento de la produccin de
anticuerpos, y por otra parte, existe una intensa proliferacin de linfocitos T CD8+, citotxicos y su-
524
Sin ttulo-2
524
5/26/06, 10:26 AM
Virus Influenza. La infeccin aguda produce una

linfopenia global transitoria, con disminucin de
la proliferacin linfocitaria, incremento de la actividad NK debido a produccin de IFN y generacin de linfocitos supresores que inhiben la produccin de IL-2.
la presencia de un mayor nmero de linfocitos T

CD 8 supresores y defectos en las clulas T CD4+.
Virus de la Rabia. Este virus expresa un
superantgeno viral, que puede producir notorios trastornos inmunitarios, ya sea por delecin clonal o
poderosas respuestas proliferativas de linfocitos T.
Rinovirus. Es el agente del resfro comn, con

una gran variedad de serotipos, lo cual representa
un ejemplo de estrategia de evasin viral a la respuesta inmunitaria, que es especfica de cada
serotipo. Existe un receptor natural del virus, la
molcula de adhesin intercelular ICAM-1
(CD54). La infeccin por este virus lleva a un aumento de la produccin de IFN- y de la actividad
de las clulas NK.
7.2. Inmunodeficiencia secundaria a infecciones bacterianas y fngicas

Existen distintas alteraciones inmunolgicas,
comunicadas en humanos, que se han observado
en infecciones bacterianas graves, que incluyen
alteracin de la quimiotaxis leucocitaria, disminucin de la eliminacin de partculas por el sistema fagoctico-mononuclear, fagocitosis disminuida y alteracin transitoria de la funcin
bactericida. Estas alteraciones no son consistentes en todos los estudios publicados y se refieren
a la presencia de linfopenia y cambios de las
subpoblaciones de linfocitos T CD3+, CD4+ y
CD8+.
Componentes aislados de algunos microorganismos tienen efectos supresores de la inmunidad, como por ejemplo, el Lipoarabinomannan,
de origen micobacteriano o componentes de
Candida Albicans, que afectaran especialmente
la funcin linfocitaria T.
Distintos productos bacterianos ejercen un
efecto de superantgeno sobre los linfocitos T, lo
que puede conducir a estas clulas a su delecin
clonal o a su inactivacin funcional. Entre ellos
podemos mencionar toxinas estafiloccicas y
estreptoccicas. Otros agentes no bacterianos asociados a un efecto de superantgeno son el virus
de la rabia y el virus de la inmunodeficiencia humana.
Adenovirus. La infeccin por este virus se caracteriza por un dficit en la produccin de IL-2 y de
la capacidad de respuesta inmunitaria a esta
citoquina. Este virus produce una protena capaz
de antagonizar los efectos de los interferones y
otra protena que se une a las molculas del MHC
clase I, dificultando as la respuesta citotxica de
los linfocitos T CD 8+.
Virus Sincicial Respiratorio. Existen diversos
estudios sugerentes de una modulacin del sistema inmune por parte de este agente, sin que podamos claramente hablar de una inmunodepresin
secundaria. Lo que se ha observado es una
inmunomodulacin viral especfica a nivel de los
linfocitos T helper 2 de memoria, que participaran en la expresin de manifestaciones
obstructivas respiratorias, inclusive asma que presentan algunos sujetos, pero existe an bastante
controversia sobre este tema.
Virus Rubola. Este virus es capaz de infectar
directamente diversas clulas del sistema inmune, lo que se ha evidenciado en diversos estudios
que han utilizado citometra flujo.
7.3. Inmunodeficiencia secundaria a infecciones parasitarias

Algunas infecciones parasitarias severas se
asocian con algunos dficit inmunitarios, entre
ellas podemos mencionar la Malaria (asociada con
alteracin de la respuesta de anticuerpos a
antgenos proteicos y polisacridos), la
Esquistosomiasis (asociada con disminucin de
respuestas linfocitarias a mitgenos in vitro y con
escasa respuesta inflamatoria alrededor de los parsitos tisulares in vivo), la Enfermedad de Chagas
(asociada con produccin de molculas capaces
de bloquear la activacin del complemento) y otras
Papilomavirus. Este agente es el causante de patologas cutneas como verrugas y condilomas

acuminados, que en general, son difciles de erradicar, pese a respuestas celulares y humorales
medibles contra este agente, lo que sugiere una
inmunosupresin funcional. Se ha identificado la
presencia de un factor soluble, derivado de
linfocitos de sangre perifrica, en estos pacientes,
inhibitorio de la produccin y actividad de IL-2.
Tambin se han reportado, en algunos pacientes,
525
Sin ttulo-2
525
5/26/06, 10:26 AM
Tripanosomiasis (asociadas con depresin de respuestas celulares y humorales) y algunas infecciones por Nemtodos (asociadas con disminucin
de respuestas proliferativas in vitro hacia antgenos
parasitarios e incapacidad de produccin de ciertas citoquinas como IL-1, IL-2 e IFN-.
cionar segn la etapa de desarrollo en que este

tumor se encuentre. Respecto a la expresin
de antgenos por las clulas tumorales, es
importante destacar que existen los llamados
antgenos de diferenciacin, asociados a tumores, que requieren de otras seales
antignicas para su reconocimiento, ya que
representan eptopos celulares normales y que
tambin existe expresin de neoantgenos, que
contienen eptopos diferentes a los de
antgenos normales, que se han utilizado en
ciertas estrategias de tratamiento antitumoral.
(e) Los tumores pueden antagonizar funciones
inmunolgicas a travs de la produccin de
factores solubles, la baja expresin de
citoquinas en el microambiente tumoral o la
induccin de defectos molculares en el receptor del linfocito T.
A ENFERMEDADES INFILTRATIVAS Y
TUMORES
Se han observado diferentes alteraciones en
las respuestas inmunolgicas de pacientes con cncer, tanto in vivo como in vitro, dadas por su enfermedad de base, a las cuales se pueden agregar
las propias de las terapias antitumorales correspondientes.
Estos pacientes presentan una mayor susceptibilidad a infecciones, una menor respuesta en pruebas cutneas de hipersensibilidad retardada y una
menor respuesta de inmunoglobulinas especficas
ante vacunaciones, entre otros defectos.
Estas acciones no son comunes a todos los

tipos de cncer existentes, y se observan distintas
alteraciones asociadas a distintas patologas
neoplsicas. As por ejemplo, se sabe que en el
linfoma de Hodgkin y en algunos Gliomas malignos, existe secrecin de prostaglandinas por las
clulas tumorales, como prostaglandina E2 que es
capaz de aumentar la actividad de clulas
supresoras de la actividad monocitaria.
Las clulas tumorales (y tambin los
linfocitos T humanos), son capaces de producir
TGF- (factor de crecimiento transformante-),
que dependiendo de la concentracin, tiene efectos supresores la respuesta inmune, afectando la
funcin de linfocitos T, B y clulas NK, la produccin de IL-1, adems de la funcin macrofgica
y la produccin de clulas inmunocompetentes en
la mdula sea.
Las clulas tumorales normalmente son destruidas por diversos mecanismos inmunolgicos,
como la citotoxicidad mediada por linfocitos T
CD8+ y clulas NK, y la lisis celular mediada por
complemento, activada por las vas clsica y alterna. Las clulas normales expresan inhibidores
del complemento que las protegen de esta cascada ltica en condiciones fisiolgicas. Se ha observado que varios tumores pueden expresar estas
molculas en alta concentracin, como por ejemplo carcinomas, sarcomas, glioblastomas,
melanomas y papilomas. Estos factores
inhibidores son CD59, DAF (factor activador de
la degradacin del complemento) y CLI (inhibidor
de la citolisis por complemento). Estudios in vitro
muestran que la expresin de los mRNA de estas
8.1. Evasin de la respuesta inmune por tumores

Ante el hecho de que ocurra la expansin de
un tumor, al menos en su etapa inicial, podra pensarse en una falla inmunolgica que permita el
desarrollo y diseminacin posterior de ste. Lo que
ocurre es que estas clulas tumorales pueden evadir los mecanismos de control del sistema inmune
de varias formas, entre ellas:
(a) Disminuir la expresin de las molculas MHC
clase I en su superficie, dificultando el procesamiento y presentacin antignica a
linfocitos citotxicos.
(b) Disminuir la expresin de molculas de adhesin y de -2 microglobulina de superficie,
dificultando el reconocimiento antignico y
causando la prdida de la inhibicin del crecimiento por contacto entre las clulas, fenmeno que ocurre en tejidos sanos normalmente.
(c) Falta de expresin de molculas coestimuladoras en tejidos tumorales, como por ejemplo la molcula B7 (CD80), lo que dificulta
su reconocimiento por distintos subgrupos de
linfocitos T.
(d) Las clulas tumorales pueden ser pobremente inmunognicas, dependiendo de los
antgenos que expresen, lo cual puede evolu-
526
Sin ttulo-2
526
5/26/06, 10:26 AM
molculas se correlaciona con la resistencia a la

citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos.
En investigaciones basadas en modelos de
carcinoma de colon humano, se han observado diversos defectos moleculares del receptor del linfocito T, que se presentan progresivamente a medida que se desarrolla el tumor, y que comprometen su estructura interna y su funcin.
A TERAPIA INMUNOSUPRESORA
Existen numerosas enfermedades autoinmunes e inflamatorias cuyo tratamiento farmacolgico necesariamente induce un dficit
inmunitario iatrognico. Algunos de estos
frmacos tambin se utilizan en la prevencin del
rechazo de trasplantes. Dichos frmacos
inmunosupresores se presentan en la tabla 31-2.
8.2. Defectos inmunolgicos en tumores

Todos estos complejos mecanismos desarrollados por las clulas tumorales y su interaccin
con las clulas normales, finalmente conducen a
la expresin de una serie de defectos
inmunolgicos, entre los que podemos mencionar la disminucin de las respuestas de hipersensibilidad retardada, de respuestas proliferativas a
mitgenos, de sntesis de inmunoglobulinas, de
respuestas monocitarias oxidativas, de produccin
de citoquinas y el aumento de la actividad
supresora a nivel monocitario. En algunos tumores, como linfomas y leucemias, se puede observar adems la presencia de linfopenia.
En resumen, podemos concluir que existen
diversas estrategias desarrolladas, a veces en forma evolutiva por las clulas tumorales, que les permiten por un lado escapar del control inmunolgico y por otra, alterar esta respuesta inmune
afectando el nmero y la funcin de distintos grupos de clulas inmunocompetentes.
9.1. Mecanismos de accin

Estas terapias tienen distintas especificidades
sobre el sistema inmune, y as, algunos frmacos
actan ms selectivamente o ms generalizadamente, como analizaremos a continuacin.
Las sustancias que actan sobre las clulas
en divisin (Agentes alquilantes, antiproliferativos, inhibidores del metabolismo de las
purinas) y las radiaciones ionizantes disminuyen
la produccin de linfocitos B y T maduros en el
timo y mdula sea. Cuando son administrados
junto a un antgeno, actan selectivamente sobre
linfocitos T y B activados, sin afectar los linfocitos
de memoria en fase G0 del ciclo celular.
Los linfocitos T de memoria que circulan
entre la sangre y la linfa son relativamente insensibles a los tratamientos inmunosupresores, pero
pueden destruirse por irradiacin linfoide total,
drenaje prolongado del conducto torcico, proce-
Tabla 31-2. Categoras de Frmacos Inmunosupresores

Antiproliferativos
Metotrexato, Ciclofosfamida, Azatioprina, Mizobirina/Micofenolato, Brequinar,
Deoxispergualina
Antagonistas de las Inmunofilinas, Sirolimus, Ciclosporina A, Tacrolimus (FK506), Rapamicina
Glucocorticoides
Antinflamatorios no esteroidales
Agentes biolgicos
Globulinas antilinfocito y antitimocito, Gammaglobulina endovenosa, Anticuerpos monoclonales.
Citoquinas y antagonistas de sus receptores
Otros:Talidomida, Dapsona.
Radiaciones ionizantes
527
Sin ttulo-2
527
5/26/06, 10:26 AM
dimientos de afresis repetidos e inyecciones de

anticuerpos antilinfocitarios, que retiran una parte de los linfocitos T de larga vida. La renovacin
celular por parte del timo es ms efectiva en individuos jvenes que en ancianos.
Algunos inmunosupresores actan sobre la
presentacin de antgenos a los linfocitos T (IL-10,
Deoxispergualina) o sobre las interacciones celulares generadoras de seales coestimuladoras
(Anticuerpos anti-CD4, anti-LFA-1). Otros inhiben
la transcripcin de los genes de citoquinas por las
clulas T activadas (Ciclosporina A, FK506,
Glucocorticoides) o bloquean las seales de progresin de la fase G1 a la fase S del ciclo celular
(Rapamicina, Anticuerpos anti-CD25). Las molculas que interfieren con el metabolismo de las
purinas inhiben la expansin clonal de los linfocitos
T activados (Azatioprina, Mizobirina, Brequinar,
Mofetil micofenolato metabolizado al producto
activo, el cido micofenlico en el organismo. Los
agentes alquilantes (Mostaza nitrogenada,
Ciclofosfamida, Clorambucil) y el Metotrexato tambin actan en este estado, pero sin ninguna especificidad frente a los linfocitos T. Adems, algunos
frmacos actan sobre la diferenciacin de los
linfocitos T y B activados por antgenos
(Deoxispergualina y Citoquinas que controlan el
desarrollo celular Th1 y Th2 (IFN-, IL-4). Se profundizar brevemente los mecanismos de accin y
efectos colaterales de algunos de estos frmacos.
timidilato, la sntesis de novo de purinas y la divisin celular. En dosis altas, produce una fuerte
toxicidad hematolgica y digestiva, aunque este
efecto puede neutralizarse con la administracin
preventiva de cido flico. A dosis bajas, no se
asocia con mayor riesgo de mutagenicidad ni
teratogenicidad, pero posee toxicidad heptica y
puede producir fibrosis pulmonares.
La Azatioprina, derivado de la 6-Mercaptopurina, no es activa por s misma, sino por sus
derivados. Bloquea la transformacin del cido
inosnico en cido adenlico, precursor de bases
purnicas (guanina, hipoxantina). Su accin se ejerce, principalmente, sobre los linfocitos T CD4+ y
CD8+ y sobre las clulas NK, pero tambin sobre
el conjunto de clulas hematopoyticas, por lo cual
se requiere un ajuste muy preciso de sus dosis. La
administracin concomitante de inhibidores de la
sntesis de cido rico (alopurinol) debe evitarse
debido al riesgo de aplasia medular. La sobredosis
puede producir pancitopenia, macrocitosis aislada y lesiones hepticas. Este frmaco es utilizado
principalmente en trasplantes de rganos, con frecuencia asociado a corticoides. En enfermedades
autoinmunes, la Azatioprina se utiliza, principalmente, en las formas corticorresistentes o
corticodependientes con el fin de reducir la dosis
de stos y sus efectos indeseables.
Nuevos inhibidores de la biosntesis de
nucletidos
Agentes Alquilantes
Son tres frmacos que inhiben en forma similar las respuestas linfocitarias T y B, pero con
una menor incidencia de mielosupresin que los
agentes anteriormente analizados.
Estos agentes forman uniones covalentes con

el DNA, y cuando se administran a altas dosis, conducen a la muerte celular. Actan, principalmente,
en clulas en divisin y su uso implica riesgos como
el desarrollo de aplasia medular, alopeca, esterilidad, cistitis hemorrgica, y a largo plazo, el desarrollo de tumores, como cncer vesical y leucemia
mieloide. Por tener efectos mutagnicos y
teratognicos, es indispensable el uso de un tratamiento anticonceptivo paralelo. Su accin se ejerce principalmente sobre los linfocitos B (Supresin
de la produccin de anticuerpos e hipogammaglobulinemia), los linfocitos T CD8+ a bajas dosis y los linfocitos T CD4+ a altas dosis.
La Mizobirina y el cido Micofenlico inhiben

la accin de la inosinmonofosfatodehidrogenasa,
suprimiendo la sntesis de nucletidos guannicos.
Brequinar inhibe una enzima requerida para la
sntesis de novo de pirimidinas (Dihidroorotato
dehidrogenasa).
Antagonistas de Inmunofilinas
La Ciclosporina A es un derivado de origen
fngico, descubierta en 1976, que acta
selectivamente frente a linfocitos T activados. Se
une a receptores intracitoplasmticos, las
ciclofilinas A, B, C y D de la familia de las
inmunofilinas y este complejo inhibe la accin de
la fosfatasa 2B o Calcineurina. Este efecto condu-
Inhibidores del metabolismo de las purinas y

pirimidinas
Uno de ellos es el Metotrexato; al inhibir la
tetrahidrofolato reductasa, bloquea la sntesis de
528
Sin ttulo-2
528
5/26/06, 10:26 AM
ce a un bloqueo de la transcripcin, calcio dependiente, del gen de IL-2 y de otras citoquinas como
IL-3, IL-4 e IFN-. Al contrario de los frmacos ya
analizados, que actan sobre todas las clulas que
sintetizan activamente DNA, este frmaco acta
exclusivamente sobre los linfocitos activados, principalmente sobre los linfocitos T CD4+. No tiene
efectos adversos sobre la hematopoyesis y no modifica la poblacin de linfocitos T de memoria. Su
accin inmunosupresora es rpidamente reversible
despus de suspender la terapia. Entre sus efectos
secundarios podemos mencionar: nefrotoxicidad,
con hipertensin arterial secundaria.
leucotrienos, y la actividad de la fosfolipasa A2,

adems de inhibir la ciclooxigenasa de los
macrfagos.
Los corticoides tambin son inhibidores de
distintas proteasas: colagenasa, elastasa y
activador del plasmingeno y de la produccin de
derivados del xido ntrico. Por otra parte, actan
sobre las clulas endoteliales e inhiben la permeabilidad vascular inhibiendo la expresin de los
genes MHC clase II y de las molculas de adhesin ELAM-1 e ICAM-1. En el hombre, slo los
timocitos y los linfocitos T activados son susceptibles a la lisis por apoptosis.
Los corticoides ms utilizados como
inmunosupresores son la Prednisona y la
Metilprednisolona. Los efectos secundarios son
mltiples: sndrome Cushingoide, hipertensin
arterial, osteoporosis, cataratas, diabetes, alteracin del crecimiento, acn, defectos de cicatrizacin, entre otros.
El FK506 es un macrlido de origen fngico, que

acta a menores dosis que la Ciclosporina A. Este
frmaco se liga a una inmunofilina citoplasmtica,
y este complejo tambin inhibe, a nivel
transcripcional, la sntesis de IL-2 y otras citoquinas.
La Rapamicina es otro macrlido que se une al
mismo receptor citoplasmtico que FK506 pero
sus efectos son distintos. Este frmaco bloquea la
actividad de una serintreoninquinasa y su asociacin con la ciclina D1, que controla la entrada de
las clulas a la fase S del ciclo celular. Por ello, la
Rapamicina no disminuye la sntesis de citoquinas
pero impide la expansin clonal de linfocitos T
estimulados por antgenos.
Globulinas antitimocitos y Anticuerpos

monoclonales
Las globulinas antitimocitos o antilinfocitos
se obtienen inmunizando conejos o caballos con
estas clulas de origen humano y se utilizan, primordialmente, en la prevencin y tratamiento de
los rechazos de trasplante. Tienen el severo riesgo
de inducir una Enfermedad del suero, debido a la
produccin de anticuerpos contra estos anticuerpos
heterlogos (de otra especie), que se manifiesta
clnicamente en 10 a 30% de los pacientes, alrededor del dcimo da de tratamiento, con la aparicin de fiebre, artritis, adenopatas dolorosas, y
leucocitosis con trombopenia y cada del nivel
plasmtico del frmaco administrado. Esta patologa implica la detencin de la terapia o el cambio por un anticuerpo de otro origen.
Los anticuerpos monoclonales anti-CD3 u
OKT3, tienen un poderoso efecto inmunosupresor.
El sitio probable de accin de este frmaco es la
interferencia con transduccin de seales que siguen al reconocimiento del receptor T (TCR) al
antgeno presentado por clulas presentadoras de
antgeno. Adems existira un efecto de lisis directa de los linfocitos T CD3 debido a que se produce una rpida cada de los recuentos
linfocitarios. Se utiliza ampliamente en la prevencin y tratamiento del rechazo de alotrasplantes.
Como estos frmacos son de origen murino,
tienen el potencial de inducir anticuerpos humanos y desencadenar una Enfermedad del suero. La
Glucocorticoides
Se unen a receptores intracitoplasmticos y
son traslocados al ncleo celular, donde el complejo se fija a secuencias reguladoras especficas,
los elementos de respuesta a glucocorticoides, modulando positiva o negativamente la transcripcin
de ciertos genes, en particular, genes que codifican para citoquinas. Tambin tienen efectos sobre
la traduccin del RNA, la sntesis y la secrecin
de citoquinas ( IL-2 e IFN-).
In vivo, los glucocorticoides inhiben el acceso de los leucocitos a focos inflamatorios. A dosis
altas, inducen una neutrofilia por movilizacin del
pool marginal y una linfopenia que afecta principalmente a linfocitos T CD4+, por redistribucin
de stos. Tienen, por lo tanto, su mayor efecto sobre la inmunidad celular.
Su accin antinflamatoria se explica, principalmente, por los efectos que poseen sobre
macrfagos y neutrfilos. Ellos inhiben la sntesis de IL-1, IL-6 y en menor grado de TNF. Tambin disminuyen la sntesis de prostaglandinas y
529
Sin ttulo-2
529
5/26/06, 10:26 AM
modificacin de este tipo de frmacos sustituyendo la regin Fc por la secuencia aminocida de

IgG humana, puede colaborar en producir
anticuerpos monoclonales menos sensibilizantes
y con mejor cintica in vivo.
Mellors, J.W.; Muoz, A.; Giorgi, J.V. et al., Plasma viral load and CD4+ lymphocytes as prognostic
markers of HIV infection, Ann Intern med 1997;
126: 946-954.
Pantaleo, G.; Menzo, M.; Vaccarezza, C.; Graziosi,
O.J.; Cohen, J.F.; Demarest, D.; Montefiori, J.M.;
Orenstein, C.; Fox, L.K.; Schrager, J.B.;
Margolick, S.; Buchbinder, J.V.; Giorgi and A.S.
Fauci, Studies in subjects with long-term
nonprogressive human immunodeficiency virus
infection, N. Engl J. Med 332: 209-216, 1995.
9.2. Impacto de la inmunodeficiencia asociada a inmunosupresores

Los tratamientos inmunosupresores producen un dficit inmunitario que puede traducirse
en patologas infecciosas o tumorales, por lo cual
estas terapias deben ser cuidadosamente vigiladas del punto de vista clnico y de laboratorio.
La inmunosupresin intensa acarrea el riesgo de
infecciones oportunistas, particularmente por
hongos, virus y protozoos, as como a la emergencia de tumores asociados a infecciones virales
crnicas.
Rich, R. (editor in chief), Clinical Immunology,

Principles and Practice, Vol I. Secondary
Immunodeficiencies, pp. 707-836, 1996.
Rich, R. (editor in chief), Clinical Immunology,
Principles and Practice Vol II. Therapy of
immunologic diseases, caps. 126, 129 y 130, 1996.
Seplveda C., Cecilia y Afani S., Alejandro (Editores), SIDA, tercera edicin. Publicaciones Tcnicas Mediterrneo Ltda., Santiago, Chile, 2002.
LECTURAS SUGERIDAS
Atabani, S.; Byrnes, A.; Jaye, A.; Kidd, M.;
Magnusen, A.; Whittle, H.; Karp, C., Natural
Measles causes prolonged supression of
interleukin-12 production, J Infect Dis, 2001;
184: 1-9.
Serie Documentos CONASIDA, Boletn

Epidemiolgico Trimestral, Ministerio de Salud
de Chile.
Barr-Sinoussi, F.; Cherman, J.C.; Rey, F. et al.,

Isolation of T-lymphotropic retrovirus from a
patient at risk for acquired immune deficiency
syndrome (AIDS), Science 1983; 220: 868.
Sherman, AR., Zinc, copper, and iron nutriture

and immunity, J Nutr 1992;122: 1212.
Waynes S.J. et al., Cell mediated immunity as a
predictor of morbidity and mortality in subjects
over 60, J Gerontol 1990; 45: M45.
Chandra, R.K., Micronutrients and immune

functions: an overview, Ann NY Acad Sci 1990;
587: 147.
Weksler, M.; Schwab, R.; Ai-hao, D., Aging and

the immune system en Clinical Immunology,
Robert Rich, Ed. 1996, Mosby, captulo 49, p. 789.
DePaoli, P.; Battistin, S.; Santini, G.F., Agerelated changes in human lymphocytes
subsets:progressive reduction of the CD4/CD45R
population, Clin Immunol Immunopathol 1988;
48:290.
Whitley, R., Roizman, B., Herpes Simplex Virus

Infection, Lancet 357: 1513-18, 2001.
Flynn, J., Ernst, J., Immune responses in tuberculosis, Curr Op Immunol 12: 432-436, 2000.
Informe sobre la epidemia mundial de VIH/SIDA,
Programa Conjunto de las naciones Unidas sobre
el VIH/SIDA y Organizacin Mundial de la Salud, junio de 1998.
530
Sin ttulo-2
530
5/26/06, 10:26 AM

Captulo 32
Eva Burger, Edilia Andrews G. y Heriberto Fernndez J.
1. Introduccin
2. Inmunidad frente a bacterias extracelulares
2.1. Caractersticas generales de las bacterias extracelulares
2.2. Mecanismos de inmunidad natural
2.2.1. Mecanismos comunes a bacterias
extra e intracelulares
2.2.2. Inmunidad natural a bacterias
extracelulares
2.3. Inmunidad adquirida a bacterias
extracelulares
2.3.1. Neutralizacin de toxinas o enzimas
bacterianas por anticuerpos
2.3.2. Efectos directos del sistema del complemento
2.3.3. Efecto conjunto de anticuerpo, complemento y lisozima
2.3.4. Opsonizacin y facilitacin de la
fagocitosis
3. Inmunidad frente a bacterias intracelulares
3.1. Caractersticas generales de las bacterias intracelulares
3.2. Inmunidad natural a bacterias intracelulares
3.2.1. Clulas NK
3.2.2. Leucocitos polimorfonucleares

neutrfilos
intracelulares
3.3.1. Macrfagos activados
3.3.2. Linfocitos T
3.3.3. Efecto conjunto de linfocitos T
CD4+ y CD8+
3.3.4. Linfocitos T
3.3.5. Citoquinas
3.3.6. Granulomas
4. Anlisis comparativo del desarrollo de inmunidad en infecciones por bacterias
extracelulares e intracelulares.
5. Estrategias de intervencin inmune en relacin a bacterias intracelulares
5.1. Tipos de vacunas para bacterias intracelulares en uso
5.2. Desarrollo de nuevas vacunas
5.2.1. Identificacin de antgenos protectores
5.2.2. Cepas vaccinales atenuadas y
recombinantes
5.2.3. Vacunas de subunidades y empleo
de adyuvantes
5.2.4. Vacunas DNA
531
Sin ttulo-2
531
5/26/06, 10:26 AM
532
Sin ttulo-2
532
5/26/06, 10:26 AM
RESUMEN
En este captulo se presenta algunas caractersticas de las bacterias extracelulares e
intracelulares, incluyendo principios de su patogenicidad y virulencia. Algunos aspectos de la
inmunidad frente a bacterias son abordados separadamente, cuando los mecanismos inmunolgicos
activos son diferentes en estos dos grupos de microorganismos.
Se describen los componentes de la respuesta inmune innata o natural comunes a ambos
grupos bacterianos, tales como la influencia de la especie, el papel de la piel, de la concentracin
de hierro y de substancias inhibitorias no inmunolgicas como por ejemplo la lisozima. Se discute la participacin de las citoquinas inflamatorias en la inmunidad natural a bacterias extracelulares
y de las clulas NK y de los leucocitos polimorfonucleares neutrfilos en la inmunidad natural a
bacterias intracelulares.
Consecuentemente, se analiza la participacin de la respuesta inmune adquirida en la proteccin contra infecciones bacterianas. Los mecanismos efectivos relevantes son el brazo humoral de la respuesta inmune en el caso de las bacterias extracelulares y el brazo celular de la
respuesta inmune en el caso de las bacterias intracelulares. Tratndose de mecanismos completamente diferentes, stos fueron abordados separadamente. As, en el tpico inmunidad adquirida a
bacterias extracelulares, se presenta la neutralizacin de toxinas o de enzimas bacterianas por
anticuerpos, los efectos del sistema complemento, ya sean directos o en conjunto con anticuerpos
y lisozima, adems de la opsonizacin y facilitacin de la fagocitosis por el fragmento Fc de IgG
y/o el componente C3b del complemento. En lo tocante a inmunidad adquirida a bacterias
intracelulares se analiza la participacin de varias poblaciones celulares, tales como macrfagos
activados, linfocitos T, linfocitos T CD4+ y sus subpoblaciones, linfocitos T CD8+, linfocitos T, estudindose tambin la participacin de citoquinas y granulomas.
Finalmente, se presentan estrategias de inmunointervencin en la prevencin de infecciones causadas por bacterias intracelulares, destacndose las vacunas ya en uso y las nuevas vacunas en desarrollo, comprendiendo la identificacin de antgenos protectores, cepas atenuadas y
recombinantes, vacunas de subunidades y de DNA y el efecto de adyuvantes.
1. INTRODUCCIN
2.
En el contexto de un libro de Inmunologa,

interesa estudiar los microorganismos de acuerdo
con la respuesta inmune que inducen y no segn
su clasificacin taxonmica. Considerando que entre la respuesta inmune frente a bacterias
extracelulares e intracelulares existen diferencias
fundamentales, en este captulo, su estudio ser
presentando dividido bajo ese aspecto, con excepcin de aquellos mecanismos de inmunidad natural comunes a ambos tipos de bacterias.

EXTRACELULARES
2.1. Caractersticas generales de las bacterias

extracelulares
Las bacterias extracelulares son capaces de
replicarse fuera de las clulas del hospedero, como
por ejemplo en la circulacin, en el tejido
conectivo y en espacios tisulares como las vas
areas y el lumen intestinal.
Entre las bacterias extracelulares se cuentan
las cocceas Gram (+) piognicas
(Staphylococcus, Streptococcus) y los bacilos,
principalmente anaerobios (Clostridium). Dentro
de las Gram (-) se encuentran cocos (Neissera
meningitidis, N. gonorrhoeae y otras Neisseria) y
533
Sin ttulo-2
533
5/26/06, 10:26 AM
una gran gama de bacilos, incluyendo los

microorganismos entricos (Escherichia coli).
Las bacterias extracelulares causan enfermedad por varios mecanismos:
san ser procesadas. Este complejo es, entonces,

reconocido por linfocitos T CD4+ expresando
receptores de antgeno de cierto V. En resumen,
estos superantgenos se ligan a molculas del MHC
clase II y simultneamente al TCR de un alto porcentaje de los linfocitos T, independientemente del
pptido que est siendo presentado. Las respuestas txicas se deben a la estimulacin de linfocitos
T y a la consiguiente excesiva produccin de
citoquinas.
Produccin de exotoxinas. La patogenicidad

bacteriana puede ser producida por la secrecin de
protenas, las cuales son las toxinas ms potentes
conocidas y que tienen varios efectos patolgicos.
Estas toxinas pueden ser exotoxinas, activamente
secretadas por las bacterias y tambin, endotoxinas,
las que forman parte de la pared bacteriana.
Las exotoxinas son citotxicas y tienen la capacidad de translocarse a clulas de mamferos. El
mecanismo general por el cual ello ocurre es por la
unin especfica de una porcin de la molcula a la
superficie de la clula, mientras que otra parte de la
molcula es el dominio txico. Estas dos porciones
pueden ser producto de un gen nico o de dos genes.
Los lugares blancos intracelulares son diferentes,
as como tambin su modo de accin. Como ejemplos de exotoxinas se pueden citar las toxinas
diftrica, colrica, tetnica y clostrdica.
La respuesta inmune contra bacterias
extracelulares tiende a destruir las bacterias y a
neutralizar los efectos de sus toxinas.
Secrecin de lipopolisacridos (LPS). El LPS es

otra clase de molcula que acta indirectamente,
causando autointoxicacin del hospedero. El LPS
liberado por las bacterias se une con gran afinidad
por la porcin altamente conservada en todas las
enterobacterias (lpido A) a la protena de fase
aguda LPS-ligante. El complejo se une a
macrfagos, induciendo la formacin de TNF- e
IL-1, las cuales desencadenan una cascada de
citoquinas por parte de varias clulas del sistema
inmune, desencadenando la sintomatologa caracterizada por leucocitosis, choque y coagulacin
intravascular diseminada.
Invasin bacteriana. Algunas bacterias secretan
substancias nocivas como hialuronidasa (lisa el
cido hialurnico del tejido conectivo y permite
la diseminacin bacteriana), estreptoquinas (enzima fibrinoltica capaz de disolver cogulos),
colagenasas y elastasas que destruyen la estructura del tejido conjuntivo.
Induccin de la respuesta inflamatoria excesiva. Las bacterias piognicas inducen una respuesta
inflamatoria muy acentuada la cual puede llevar a
lesin tisular.
Secrecin de superantgenos. Los Staphylococcus
y los Streptococcus del grupo A producen toxinas
que tienen la capacidad de activar un porcentaje
muy alto de linfocitos T. Los sntomas clnicos varan pero en general incluyen choque sistmico. La
respuesta inmune a estas substancias y a protenas
relacionadas con ellas las torna nicas en trminos
de efectos biolgicos y patolgicos. Los efectos
patolgicos de las enterotoxinas estafiloccicas son
mediadas por citoquinas, como el TNF-.
Las enterotoxinas estafiloccicas son algunos de los mitgenos naturales ms potentes
para linfocitos T, actuando en concentraciones
de 10-9 M o menos, uno de cada cinco linfocitos
T responde a ella. La respuesta a enterotoxinas
estafiloccicas requiere de clulas presentadoras
de antgeno expresando molculas del Complejo
Principal de Histocompatibilidad (MHC) clase II.
Estas enterotoxinas se unen directamente a la porcin constante de las molculas clase II (por fuera
del sitio de unin para los antgenos) y no preci-
2.2. Mecanismos de inmunidad natural

2.2.1. Mecanismos comunes a bacterias extra
e intracelulares
influencia de la especie. Existe la resistencia de
determinadas especies a ciertas infecciones. La
resistencia de las gallinas a Brucella abortus es
un ejemplo de esta condicin, la cual es una manifestacin de factores genticos.
Integridad de la piel. La piel ntegra sustenta una
alta densidad de bacterias comensales y potencialmente patognicas pero, luego, por debajo de la
superficie ella es estril. En la piel ntegra, es imposible la penetracin de bacterias o de otros
microorganismos excepto la de cercarias de
Schistosoma. Heridas pequeas permiten la entrada de staphylococcus y/o streptococcus mientras que heridas ms profundas y la destruccin
534
Sin ttulo-2
534
5/26/06, 10:26 AM
de los tejidos generan un medio anaerobio y permiten el acceso de clostridium.
son bactericidas para bacterias Gram (+).

Contenido de hierro. Un factor determinante del
xito o no de una invasin bacteriana es el contenido de hierro en los fluidos orgnicos. Muchas
bacterias, como Staphylococcus aureus,
pasteurella multocida, Mycobacterium tuberculosis y Escherichia coli necesitan de hierro para su
crecimiento. En el cuerpo, sin embargo, el hierro
en su mayor parte se encuentra secuestrado, asociado a protenas (transferrina, lactoferrina,
haptoglobina y ferritina).
Despus de una invasin bacteriana, cesa
la absorcin intestinal de hierro. La IL-1 liberada de macrfagos causa un aumento en la produccin de transferrina y haptoglobina por los
hepatocitos y aumento de incorporacin de hierro en el hgado. El resultado final es la falta de
disponibilidad (escasez) de fierro para la bacteria invasora. De modo anlogo, la invasin
bacteriana a la glndula mamaria determina la
liberacin del contenido de lactoferrina de los
PMN aumentando, as, el poder bactericida de
la leche.
Las bacterias han desarrollado mecanismos
para la adquisicin de hierro para su sobrevivencia
y su crecimiento. Las enterobacterias secretan
quelantes de fierro denominados siderforos, los
que compiten exitosamente por el hierro libre.
Luego, por receptores proteicos especficos ubicados en la membrana, absorben el siderforo repleto de hierro y lo transportan a receptores de
hierro intracelulares. En seguida, el complejo
siderforo/hierro internalizado es clivado para originar hierro libre para la bacteria.
Algunas bacterias, como Neisseria y
Haemophilus influenzae no producen siderforos
pero, adquieren el hierro directamente de la
lactoferrina o de la transferrina. Otras bacterias,
como Mycobacterium tuberculosis o Escherichia
coli, producen compuestos con una poderosa capacidad quelante (micobactina y enteroquelina),
que retiran el hierro de las protenas sricas, dejndolas disponibles para las bacterias, las que entonces podrn invadir el organismo.
Substancias inhibitorias no inmunolgicas. La

relativa poca frecuencia de infecciones bacterianas
debido a pequeas heridas, indica la capacidad de
los tejidos animales para contener la invasin
bacteriana. Parte de esta resistencia se debe a la
presencia de potentes substancias con propiedades antibacterianas en los tejidos:
Lisozima. La ms importante de estas substancias inhibitorias es la lisozima, encontrada en tejidos y en todos los fluidos corporales con excepcin del lquido cefalorraqudeo (LCR), sudor y
orina. Se encuentra en altas concentraciones en
las lgrimas y en la clara de huevo. Tiene la capacidad de lisar la capa de peptidoglicano de la pared y los acilaminopolisacridos de las cpsulas
de algunas bacterias Gram (+), induciendo su
muerte. En accin sinrgica con la lactoferrina,
en condiciones de baja osmolaridad, mata varias
bacterias Gram (-). Actuando conjuntamente con
el complemento, lisa bacterias Gram (-). La
lisozima es ms eficaz contra las bacterias Gram
(+) porque en las Gram (-) la pared de
peptidoglicano est protegida por la membrana
externa. A pesar que las bacterias as lisadas no
sean patognicas, esta ausencia de patogenicidad
podra deberse, justamente, a su susceptibilidad a
la accin de la lisozima. Esta enzima se encuentra
en alta concentracin dentro de los leucocitos
polimorfonucleares neutrfilos (PMN) y, por tanto, se acumula en los lugares donde existe inflamacin aguda, incluso sitios de invasin
bacteriana. El pH ideal para ejercer su accin (pH
3-6) se alcanza en situaciones fisiolgicas, tanto
en los lugares de invasin bacteriana como dentro
de fagosomas.
Otras substancias inhibitorias. Incluyen la
espermina y la espermidina, que son tetraaminas
presentes en rin, pncreas y prstata las que, en
conjunto con una alfa-globulina srica, forman un
complejo antibacteriano activo contra bacterias
cido-alcohol resistentes y Bacillus anthracis.
Otras substancias inhibitorias, son los pptidos y
protenas bsicas beta-lisina y fagocitina, ricas en
lisina y arginina, originadas de la digestin de protenas por enzimas proteolticas liberadas de PMN
o de plaquetas y que presentan un potente efecto
antibacteriano. Los cidos grasos libres inhiben el
crecimiento bacteriano, mientras que los insaturados
2.2.2. Inmunidad natural a bacterias

extracelulares
Citoquinas inflamatorias. Debido al hecho de
que las bacterias extracelulares son muertas
eficientemente por los mecanismos microbicidas
de los fagocitos, el principal mecanismo de inmu-
535
Sin ttulo-2
535
5/26/06, 10:26 AM
nidad natural a estos microrganismos es la

fagocitosis por PMN, monocitos y macrfagos
tisulares. La resistencia de las bacterias a la
fagocitosis y a la digestin intracelular es, por tanto, una importante determinante de su virulencia.
Las endotoxinas, como el LPS estimulan la
produccin de citoquinas por macrfagos y por otras
clulas, como por ejemplo el endotelio vascular.
Estas citoquinas incluyen TNF-, IL-1, IL-6 y
quimioquinas (ver captulo 11). La funcin fisiolgica principal de las citoquinas derivadas de
macrfagos es la de estimular la inflamacin. Estas
citoquinas inducen la adherencia de neutrfilos y
monocitos al endotelio vascular en los sitios de
infeccin, fenmeno que es seguido por la migracin, acmulo en el lugar afectado y activacin de
clulas inflamatorias. Las clulas inflamatorias tienen la funcin de eliminar las bacterias.
bacterianas en los tractos respiratorio y

gastrointestinal y evita la colonizacin de los tejidos extraluminales.
2.3.2. Efectos directos del sistema del complemento
Varios componentes del sistema del complemento pueden atacar directamente y destruir bacterias. Como los productos intermediarios resultantes de la activacin del sistema tienen accin
quimiotctica, pueden reclutar fagocitos hacia el
sitio de la infeccin.
2.3.3. Efecto conjunto de anticuerpo, complemento y lisozima
El principal mecanismo capaz de conferir inmunidad especfica contra bacterias extracelulares

es la inmunidad humoral. Algunos de los componentes ms inmunognicos de paredes y cpsulas
bacterianas son polisacardicos y constituyen
ejemplos tpicos de antgenos timo independientes, estimulando directamente linfocitos B y originando fuertes respuestas especficas de
anticuerpos IgM. Otros isotipos pueden ser originados debido a la produccin de citoquinas que
inducen cambio de clase (switch isotpico),
como por ejemplo la produccin de IgG2 en humanos en respuesta a la cpsula polisacrida de
Streptococcus pneumoniae, antgeno tpicamente
T-independente.
Tanto la IgM como la IgG activan el sistema

del complemento, llevando a la produccin del
complejo de ataque a membranas bacterianas de
efecto microbicida y a la liberacin de mediadores de la inflamacin aguda. La funcin del complejo de ataque a membranas bacterianas es ejercida slo en algunas infecciones, pues la deficiencia en los componentes tardos C5 a C8 est asociada al aumento de la susceptibilidad a la infeccin por Neisseria, pero no a la de otras bacterias.
El complejo de ataque a membranas no consigue
lisar bacterias Gram (-) pero, al insertarse a la pared bacteriana, provee un substrato a la lisozima,
la cual, actuando en secuencia al complemento,
produce la lisis de la bacteria. Individuos no inmunes pueden lisar bacterias a travs de la activacin de la va alterna del complemento, pues las
clulas bacterianas permiten la produccin de la
convertasa de C3 de la va alterna (C3bBbP) (ver
captulo 18).
2.3.1. Neutralizacin de toxinas o enzimas

bacterianas por anticuerpos
2.3.4. Opsonizacin y facilitacin de la

fagocitosis
Muchos productos agresivos necesitan ligarse a receptores celulares. Esto es evitado por la
molcula de anticuerpo que se liga a eptopes importantes de la toxina, causando impedimento espacial. Este fenmeno puede ser a travs de la molcula completa o solamente por la regin Fab o
F(ab)2. Tanto anticuerpos IgG como IgM neutralizan toxinas bacterianas y evitan su unin a las
clulas blanco. La neutralizacin involucra la competencia entre el anticuerpo y el receptor en la
clula blanco por la molcula de toxina. La IgA
presente en las secreciones neutraliza las toxinas
Opsonizacin por Fc de IgG. La eficiencia de la

fagocitosis aumenta cuando la membrana del fagocito se liga al objeto a ser fagocitado. Los
anticuerpos IgG opsonizan las bacterias y favorecen la unin de macrfagos, monocitos y neutrfilos
a travs de sus receptores para Fc gamma (FcR).

extracelulares
Opsonizacin por C3b. Los fagocitos tambin tienen receptores para C3b. Las personas deficientes en C3 son muy susceptibles a infecciones
bacterianas piognicas.
536
Sin ttulo-2
536
5/26/06, 10:26 AM
Opsonizacin por Fc de IgG y por C3b. Las consecuencias de la opsonizacin con C3b o Fc de
IgG y ms an, su efecto conjunto, son el aumento de la unin de la partcula a ser fagocitada y la
activacin metablica de los fagocitos. Los
anticuerpos IgG e IgM activan el sistema del complemento, generan C3b e iC3b que se ligan a los
receptores CR1 y CR3, respectivamente, y promueven la fagocitosis.
3.
hasta la forma lepromatosa con inmunidad celular deficiente y muchos bacilos. Parasita una gran
variedad de clulas.
Listeria monocytogenes y listeriosis: Es una enfermedad de ovinos y bovinos pero puede afectar
al hombre. La enfermedad experimental en ratones es aguda. Parasita preferentemente clulas
presentadoras no profesionales (endoteliales,
hepatocitos), adems de macrfagos.
Brucella abortus. Cuando penetra al organismo,
es captada y transportada por clulas fagocticas
hacia los rganos del sistema fagoctico
mononuclear estableciendo una infeccin crnica.
En bovinos se ubica en rganos del aparato gnitourinario, posiblemente debido a la presencia de
eritritol en la superficie de las clulas epiteliales.
Respecto a la patogenicidad y virulencia de bacterias intracelulares, stas entran al hospedero a
travs de las mucosas, principalmente por el intestino o por el pulmn. Luego, atraviesan las capas epiteliales. Enseguida, sufren los efectos de
los mecanismos inespecficos de defensa, desde
los fsicos y fsicoqumicos hasta aquellos que
involucran la inmunidad natural. Si son capaces
de sobrevivir, colonizarn los tejidos situados ms
profundamente y van a provocar el establecimiento
de una respuesta inmune especfica. En situaciones ideales, se consigue la erradicacin de las bacterias, o si no, ellas permanecen en nichos poco
accesibles al sistema inmune.
INTRODUCCIN A BACTERIAS
INTRACELULARES
3.1. Caractersticas generales de las bacterias

intracelulares
Las bacterias intracelulares causan enfermedades conocidas desde antiguo (Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium leprae, Salmonella
typhi) que afectan a ms de medio billn de personas, y otras enfermedades, conocidas como emergentes, que afectan a pacientes con SIDA
(Mycobacterium intracellulare). Estas bacterias
viven dentro de las clulas del hospedero vertebrado
durante gran parte de su vida y deben, por tanto,
tener baja toxicidad, lo que tiene consecuencias
sobre la respuesta inmune que ellas desencadenan.
En relacin a su hbitat, las bacterias
intracelulares pueden ser: (a) intracelulares facultativas, que prefieren fagocitos mononucleares,
(Mycobacterias, Salmonella, Brucella, Legionella
y Listeria) pero pueden infectar otras clulas, y (b)
intracelulares estrictas, que no sobreviven fuera
de las clulas y que prefieren clulas presentadoras
no profesionales (endoteliales y epiteliales), a pesar de poder infectar monocitos mononucleares
(Rickettsia y Chlamydia). Algunos ejemplos de
bacterias intracelulares son los siguientes:
3.2. Inmunidad natural

intracelulares
Mycobacterium leprae y lepra: Es una enfermedad muy crnica, espectral, yendo desde la forma
tuberculoide, con fuertes reacciones inmunes celulares y lesiones con pocos microorganismos,
3.2.1. Clulas NK
Las bacterias intracelulares activan clulas
537
537
bacterias
El principal mecanismo de inmunidad natural

contra microorganismos intracelulares es la
fagocitosis, aunque las bacterias intracelulares
patognicas son relativamente resistentes a la lisis
dentro de los fagocitos mononucleares. Por tanto,
no es sorprendente que la inmunidad natural sea,
generalmente, bastante ineficiente en controlar la
colonizacin por estos microorganismos y su consecuente diseminacin. La resistencia a la fagocitosis
es tambin una razn por la cual estas bacterias tienden a causar infecciones crnicas que pueden durar
aos, frecuentemente de difcil erradicacin y recrudeciendo despus de curas aparentes.
Mycobacterium tuberculosis y tuberculosis: M.

tuberculosis es una bacteria aerobia estricta. Por
tener muchos lpidos, glicolpidos y elementos
grasos, es hidrofbico y resistente a la lisis por
complemento, a cidos y lcalis. Es el patgeno
responsable del mayor nmero de muertes e infecta entre 1/3 y 1/2 de la humanidad. Parasita
prcticamente slo a macrfagos.
Sin ttulo-2
5/26/06, 10:26 AM
NK, ya sea directamente o estimulando la produccin de IL-12 por los macrfagos y PMN. Las
clulas NK producen IFN- que, a su vez, activa
macrfagos y promueve la lisis de las bacterias
fagocitadas. As, las clulas NK constituyen una
lnea de defensa en una fase inicial de la infeccin
por este tipo de bacterias, antes del desenvolvimiento de la respuesta inmune especfica. De hecho, ratones con SCID (Inmunodeficiencia combinada severa) que son, deficientes en linfocitos
T y B son capaces de controlar, por lo menos temporalmente, infecciones producidas por Listeria
monocytogenes a travs de la produccin de IFN por clulas NK.
de los macrfagos constituye uno de los pasos fundamentales en la resistencia a bacterias

intracelulares. Muchas de las actividades descritas para estas clulas no son expresadas
constitutivamente en ellas. La expresin plena de
las actividades antibacterianas de estas clulas
depende del estmulo adecuado por citoquinas, de
las cuales la ms importante es el IFN-. Su efecto transforma los macrfagos de clulas que permiten la replicacin microbiana en clulas
efectoras que restringen o eliminan su capacidad
de sobrevivencia. En macrfagos murinos, el IFN es el principal activador de macrfagos, los que
se tornan capaces de lisar L. monocytogenes o
Brucella y de inhibir el crecimiento de M. tuberculosis y de M. bovis.
Los principales efectores de la actividad
antibacteriana de los macrfagos son los intermediarios del metabolismo del nitrgeno. Estos mecanismos aun no estn bien entendidos en los seres humanos, pues todava no ha sido demostrada
la produccin de reactivos del nitrgeno en
macrfagos humanos y el IFN- casi no induce
inhibicin del crecimiento de M. tuberculosis. Sin
embargo, TNF- causa inhibicin del crecimiento de M. intracellulare e IFN-, en conjunto con
TNF-, producen inhibicin del crecimiento de
M. tuberculosis.
3.2.2. Leucocitos polimorfonucleares neutrfilos

Como estas clulas tienen alto potencial
bactericida, pueden matar muchas bacterias
intracelulares. Sin embargo, son de corta vida y las
bacterias intracelulares estn secuestradas en nichos.
En la fase inicial de la infeccin disminuyen la carga infectante como por ejemplo en la listeriosis, en
la que se observa una gran afluencia de PMN.
La muerte de bacterias intracelulares por
macrfagos o por PMN es realizada por molculas txicas, particularmente metabolitos reactivos
del oxgeno e intermediarios reactivos del nitrgeno (ver captulo 3). Alguna deficiencia en el
anin superxido favorece la susceptibilidad a
muchas infecciones bacterianas (enfermedad
granulomatosa crnica).
3.3.2. Linfocitos T
La resistencia adquirida a infecciones por
bacterias intracelulares depende crucialmente de
linfocitos T, que promueven la erradicacin estril de las bacterias susceptibles (L. monocytogenes)
y clearence parcial y contencin, a travs de lesiones granulomatosas de las bacterias resistentes
(M. tuberculosis). La formacin y la mantencin
de los granulomas es gobernada por los linfocitos
T y la coordinacin entre linfocitos T, macrfagos
y otras clulas es promovida por las citoquinas.
La necesidad de linfocitos T se ilustra y queda en
evidencia en pacientes deficientes en linfocitos T
(enfermos de SIDA) y en animales atmicos.

intracelulares
La inmunidad mediada por clulas es la principal respuesta inmune protectora a infecciones
por bacterias intracelulares. Individuos que presentan deficiencias en la inmunidad celular son
extremadamente susceptibles a estas infecciones,
como lo son, por ejemplo, los pacientes con SIDA.
Las principales respuestas inmunes protectoras son de dos tipos. Uno es la lisis de las bacterias intracelulares fagocitadas como resultado de
la activacin de macrfagos por citoquinas derivadas de linfocitos T, principalmente IFN- y, el
otro, es la lisis de las clulas infectadas, por
linfocitos T CD8+ citolticos.
a) Linfocitos T CD4+. Las bacterias intracelulares

residen dentro de endosomas de macrfagos, pudiendo ser procesada como antgeno endgeno y
ser presentada en el contexto de molculas clase
II. Los linfocitos CD4+ pueden responder tambin a antgenos de las bacterias, los que son
internalizados y presentados en molculas clase
II, como por ejemplo el ppd de M. tuberculosis.
3.3.1. Macrfagos activados

La activacin de las funciones antibacterianas
538
Sin ttulo-2
538
5/26/06, 10:26 AM
Las infecciones por bacterias intracelulares,

incluyendo la tuberculosis, la listeriosis y la
brucelosis experimentales, se caracterizan por una
preponderancia de efectos de linfocitos Th1. Aparentemente las bacterias intracelulares estimulan
la produccin de IL-12 y de IFN- por clulas de
la respuesta inmune natural. Solamente en la fase
lepromatosa de la lepra ocurren fenmenos Th2,
los que parecen contribuir a la inmunosupresin.
intrafagosomal de M. tuberculosis, lo que resultara en la presentacin del antgeno restringida por

molculas MHC clase II. La explicacin para la
presentacin en el contexto de molculas MHC
clase I sera por drenaje de protenas secretadas
por las bacterias viables al citoplasma a partir del
fagosoma, o por la presencia de M. tuberculosis
libre en el citoplasma, de acuerdo a lo establecido
en recientes estudios realizados con microscopa
electrnica. En la tuberculosis, la enfermedad se
exacerba en ratones depletados de una de las dos
poblaciones de linfocitos T y la enfermedad se
torna fatal (M. tuberculosis) o ms grave (M. bovis)
en animales que no expresan molculas clase I.
En la lepra y la tuberculosis, los granulomas
estn constituidos por linfocitos T CD4+ rodeados por linfocitos T CD8+.
b) Linfocitos T CD8+. Adems de linfocitos T

CD4+ restringidos por MHC clase II, tambin los
linfocitos T CD8+ restringidos por MHC clase I
participan en la resistencia adquirida a infecciones por bacterias intracelulares.
Listeria, al ser capaz de dejar el endosoma y
entrar al citoplasma puede ser procesada a travs
de la va de presentacin de antgeno endgeno,
interactuar con MHC clase I y promover la activacin de linfocitos T CD8+. Deben existir otros
mecanismos de presentacin en el contexto de clase I, ya que otras bacterias, que no van al citoplasma (M. bovis, S. typhimurium) tambin producen
respuesta de linfocitos T CD8+, tal vez por
translocacin al citoplasma de algunos pptidos
bacterianos durante la replicacin bacteriana.
La importancia de la poblacin de linfocitos
T CD8 + en el control de la brucelosis se ha
demostrado en experimentos realizados con
ratones "knock out" en molculas clase I, en los
que observ una aumentada susceptibilidad a la
brucelosis. Estas clulas tienen potencialmente dos
funciones: pueden lisar clulas infectadas y pueden
tambin producir INF-.
3.3.4. Linfocitos T-
Existen evidencias circunstanciales del papel de la LT en la inmunidad a bacterias
intracelulares. Este tipo de linfocitos de individuos
sanos o inmunes son muy estimulados por los componentes de las mycobacterias.
Han sido identificados muchos linfocitos T
en los sitios donde existen lesiones en las cuales
ocurre una rpida replicacin de L. monocytogenes
y M. bovis, en estadios reactivos de lepra y en lugares de hipersensibilidad de tipo tarda (HTT)
contra lepromina y en los centros necrticos de
las lesiones de la tuberculosis y muy pocos en lesiones crnicas de la tuberculosis o de lepra
tuberculoide.
3.3.3. Efecto conjunto de linfocitos T CD4+ y

CD8+
3.3.5. Citoquinas
El estudio del papel de varias citoquinas en
la inmunidad a bacterias intracelulares experiment un enorme impulso con el uso de citoquinas
recombinantes, de anticuerpos monoclonales para
su neutralizacin y de ratones knock-out para
establecer su expresin gnica.
Por ejemplo, el tratamiento con anticuerpos
anti-IFN- o anti-TNF- produce un agravamiento en la listeriosis hacindola fatal as como tambin con anti-receptor de IL-1. Por otro lado, la administracin de IFN-, TNF-, IL-1 o IL-6
recombinantes, aumenta la resistencia a la listeriosis.
El tratamiento con anti-IFN- o anti-TNF- empeora un poco la tuberculosis y, en cambio, el tratamiento con anti-IL-4 tiende a mejorarla. Ratones
sin receptores para IFN- son mucho ms suscepti-
Estas dos poblaciones de clulas efectoras

actan complementariamente. En la listeriosis, los
linfocitos T CD4+ producen IFN- que activa los
macrfagos para destruir las bacterias fagocitadas.
Sin embargo, L. monocytogenes escapa al citoplasma, protegindose de los productos del metabolismo del oxgeno que actan en los fagolisosomas.
Los linfocitos CD8+, entonces, lisarn esta clula
que contiene bacterias en su citoplasma.
En la tuberculosis existe consenso que los
linfocitos T CD8+ son cruciales para la proteccin, ya que animales carentes de beta-2
microglobina o de T CD8+ mueren de tuberculosis experimental. Este importante papel protector
est en aparente conflicto con el hbitat
539
Sin ttulo-2
539
5/26/06, 10:26 AM
bles a la infeccin por Listeria que sus controles.

En infecciones experimentales por B. abortus se
ha observado que IL-12 se produce in vivo slo
durante la infeccin con bacterias vivas, tambin
se ha observado que ratones "knock-out" en receptor para TNF son severamente deficientes en la
produccin de IL-12, la cual regula positivamente la produccin de INF- de linfocitos T.
La cantidad de informacin acumulada en los
ltimos aos hace imposible enumerar, en este captulo, los efectos producidos por la gran cantidad
de citoquinas existentes (ver captulo 11). Sin
embargo, es indiscutible el importante papel del
IFN- en la defensa contra infecciones causadas
por bacterias intracelulares, as como el de otras
citoquinas que favorecen la respuesta Th1. En
general, el papel de las citoquinas Th2 es actuar
ante el agravamiento de la enfermedad. Sin embargo, en algunas situaciones, es necesaria la presencia de IL-10 para controlar una respuesta inmune excesiva.
4. ANLISIS COMPARATIVO DEL DESARROLLO DE INMUNIDAD EN INFECCIONES POR BACTERIAS EXTRACELULARES E INTRACELULARES
Tanto las bacterias extracelulares como las
intracelulares infectan, transitoriamente, las clulas
epiteliales como parte de sus mecanismos invasivos.
Los mediadores de la respuesta inmune a bacterias intracelulares son los linfocitos T que no
interactan directamente con ellas pero s con la
clula infectada del hospedero. Los principales
mediadores de la respuesta inmune contra las bacterias extracelulares son los anticuerpos.
Las bacterias intracelulares son de baja o de
ninguna toxicidad, siendo la patologa la resultante
de las reacciones inmunes. Las bacterias
extracelulares producen varias toxinas responsables directamente de la lesin tisular.
Las bacterias intracelulares coexisten con su
hbitat intracelular por mucho tiempo, dando como
resultado perodos de incubacin prolongados y
enfermedad crnica. Las bacterias extracelulares
causan enfermedad aguda que desaparece cuando
se establece la respuesta inmune.
Las reacciones tisulares contra bacterias
intracelulares son granulomatosas y tanto la respuesta inmune protectora como la patologa se
centran en esta caracterstica. La ruptura del
granuloma promueve la diseminacin bacteriana
y nuevas lesiones en otras zonas. Las reacciones
tisulares contra las bacterias extracelulares son
purulentas y llevan a la formacin de abscesos o
reacciones sistmicas.
Las infecciones por bacterias intracelulares
se acompaan de reacciones de hipersensibilidad
de tipo tardo que pueden expresarse despus de
la administracin local de antgeno soluble como
una reaccin tisular tarda mediada por linfocitos
T y llevada a cabo por macrfagos.
3.3.6. Granulomas
El encuentro entre las bacterias intracelulares
y los mecanismos de defensa del hospedero es un
evento local, que se verifica en la lesin
granulomatosa, la cual constituye el ncleo de la
proteccin antibacteriana.
La ausencia de desarrollo de un granuloma o
la destruccin de un granuloma organizado, lleva
a la exacerbacin de la enfermedad, pudiendo ser,
entonces, fatal. Por otro lado, los granulomas
expansivos impiden las funciones fisiolgicas de
los tejidos, lo que es crucial para la patognesis.
De hecho, los granulomas tienen efecto protector
contra M. tuberculosis y M. bovis pero no contra
L. monocytogenes, donde las lesiones excesivas
son perjudiciales.
Los mecanismos por los cuales los
granulomas restringen el crecimiento bacteriano
y confinan la infeccin, confiriendo proteccin,
se deben a diversos factores como macrfagos
activados que inhiben el crecimiento bacteriano,
la encapsulacin promovida por la fibrosis asla
las bacterias y la necrosis reduce la oferta de
nutrientes y de oxgeno.
Existen varias citoquinas involucradas en la
formacin y/o mantencin de los granulomas, entre ellas, TNF-, IFN- e IL-4.
5. ESTRATEGIAS DE INTERVENCIN INMUNE EN RELACIN A BACTERIAS

INTRACELULARES
Un conocimiento detallado acerca de la biologa de las infecciones por bacterias intracelulares
y de la respuesta inmune inducida por ellas, nos
permite entender no slo la compleja relacin entre patgeno y el husped, sino que tambin desarrollar medidas preventivas y estrategias de intervencin teraputicas.
540
Sin ttulo-2
540
5/26/06, 10:26 AM
Aunque en general, la vacunacin es la medida profilctica ms exitosa contra las enfermedades infecciosas, la mayora de las vacunas (ver
captulo 36) en uso estn dirigidas contra
microorganismos extracelulares. El xito de estas
vacunas est basado principalmente en la formacin de anticuerpos que actan impidiendo la invasin del patgeno o neutralizando toxinas o factores de virulencia.
Que incluya antgenos expresados por la bacteria en el husped y por varias otras cepas
similares prevalentes.
Inmunogenicidad para todos los haplotipos
del Complejo Principal de Histocompatibilidad (HLA en humanos) dentro de la poblacin.
5.2.1. Identificacin de antgenos protectores

5.1. Tipos de vacunas para bacterias
intracelulares en uso
Es importante primero definir los antgenos

que son protectores. Una vacuna contra una bacteria intracelular debera contener aquellos
antgenos capaces de inducir la combinacin apropiada de clulas T CD4+ y CD8+ que produzcan
IFN- para, subsecuentemente, activar macrfagos
para eliminar la bacteria.
Actualmente existen slo dos vacunas contra bacterias intracelulares y en ambos casos con
limitado xito. El BCG, es una cepa atenuada derivada de la cepa virulenta M. bovis. Desde su primer uso en 1921, ha sido administrado con pocos
efectos colaterales pero, su eficacia protectora
contra la tuberculosis pulmonar es muy variable
(0 a 80%). La otra vacuna contra bacterias
intracelulares corresponde a la cepa atenuada de
Salmonella typhi Ty21. Por su baja proteccin y
poca duracin, se administra slo a viajeros que
visitan reas donde existe alto riesgo de contraer
fiebre tifoidea.
5.2.2. Cepas vaccinales atenuadas y recombinantes

El uso de bacterias vivas atenuadas como vacunas tiene la ventaja de que los microorganismos
se replican en el husped, al menos por un tiempo, con lo cual generalmente inducen inmunidad
especfica duradera. Adems, por su gran
homologa con el patgeno virulento pueden inducir una respuesta inmune similar. Tal es el caso
para las vacunas en humanos contra la tuberculosis (M. bovis BCG) y fiebre tifodea (S. typhi Ty21)
y para las vacunas utilizadas en el ganado (B.
abortus RB51 B. melitensis Rev-1).
La identificacin de factores de virulencia ha
permitido la generacin de cepas mutantes por
delecin gentica creando cepas atenuadas que no
producen dao en el hospedero y retienen su potencial inmunognico. La cepa de S. typhimurium
Aro A- fue creada por mutagnesis, es una mutante
auxotrfica que tiene un defecto en la biosntesis
aromtica. Puede conferir proteccin en ratones.
Otra aproximacin, es el uso de bacterias vivas atenuadas como transportadoras de antgenos
recombinantes, los cuales pueden ser expresados
solos o junto con las citoquinas que son importantes en el control de los microorganismos
intracelulares (IL-12, GM-CSF e IFN-).
5.2. Desarrollo de nuevas vacunas

Existe la necesidad de disponer de formas de
vacunas ms efectivas, baratas y fciles de aplicar, no slo contra TBC y fiebre tifoidea, sino que
tambin contra otras bacterias intracelulares de
importancia en salud pblica.
El desarrollo racional de una nueva generacin de vacunas debe considerar el carcter particular que tiene la respuesta inmune efectiva contra el respectivo patgeno. Los requerimientos para
tal vacuna incluyen:
Induccin de la poblacin de clulas T adecuada y secrecin rpida de las citoquinas

apropiadas que medien inmunidad protectora y al mismo tiempo dejen memoria
inmunolgica.
Activacin de los mecanismos efectores ms
apropiados que impidan que la infeccin se
establezca o permitan eliminar el agente infeccioso.
Especificidad frente al patgeno responsable
para evitar el riesgo de una enfermedad
autoimune a travs de antgenos de reaccin
cruzada.
5.2.3. Vacunas de subunidades y empleo de

adyuvantes
El uso de protenas nativas o recombinantes
como antgenos vacunales tiene ventajas y des-
541
Sin ttulo-2
541
5/26/06, 10:26 AM
ventajas: Son vacunas altamente especficas y tienen bajo riesgo de efectos colaterales. Sin embargo, cuando se administran solas, su eficacia
inmunoestimulatoria y protectora es generalmente dbil y de corta vida. La administracin de
subunidades bacterianas como vacunas depende,
fuertemente, de adyuvantes inmunoestimulatorios
que simultneamente generen el medio requerido
para la estimulacin de clulas T protectoras y
adems un reservorio para la liberacin lenta de
antgeno en el lugar de la administracin para facilitar proteccin duradera. El nico adyuvante
aprobado para uso en humanos es el aluminio, que
favorece respuestas de tipo Th2. El uso de
adyuvantes capaces de estimular una respuesta
Th1, que es lo que se requiere para vacunar contra bacterias intracelulares, presenta dificultades
por la severa inflamacin que acompaa su administracin. Algunos glicolpidos y oligonucletidos, por sus propiedades proinflamatorias,
pueden ser considerados adyuvantes naturales para
microorganismos intracelulares
Las vacunas basadas en pptidos, escogidos
entre eptopes protectores pueden disminuir el riesgo de reactividad cruzada por su especificidad nica pero, tienen la desventaja de ser menos
inmunognicos. Debido a la existencia de distintos
haplotipos de HLA, una vacuna basada en pptidos
antignicos tendra que cubrir la mayora de las
posibilidades del repertorio de eptopes de clulas
T presentes en una poblacin susceptible.
El plsmido es fabricado sin su origen de

replicacin funcional en clulas eucariontes, por
lo tanto no se replica ni se integra al DNA
cromosomal de la clula husped transfectada. La
integracin de una secuencia lder en el plsmido
permite la exportacin del antgeno por la clula.
El gen codificado por el plsmido se expresa hasta que ste es expulsado a travs de la divisin
celular. El plsmido puede ser administrado en la
piel dentro de partculas, o a travs de transportadores bacterianos. Posteriormente el antgeno puede ser fagocitado por monocitos y clulas
dendrticas las cuales estimularn clulas T
"helper". La vacunacin por cidos nucleicos induce tanto la inmunidad humoral como la inmunidad mediada por clulas. Se observa una reaccin inflamatoria inducida por secuencias DNA
bacteriano tales como los motivos CpG, que promueve la infiltracin de monocitos, estimulacin
de clulas B para producir anticuerpos especficos contra el antgeno soluble, estimulacin de
clulas T CD8+ para diferenciarse a linfocitos T
citotxicos y tambin de clulas T CD4+ para diferenciarse a clulas Th1 y secretar citoquinas
como IL-2 e INF-. En distinta medida todas estas vas de activacin son importantes en la proteccin contra microorganismos de vida
intracelular, adems la inclusin de genes codificando citoquinas y molculas coestimulatorias en
el mismo plsmido puede promover una respuesta inmune ms apropiada. Este tipo de vacuna es
seguro y fcil de producir, mantener y administrar. La facilidad de construir y manipular los insertos de los genes, el bajo costo, la estabilidad
del DNA, representan caractersticas deseables
para una vacuna. Adems la inmunizacin con
cidos nucleicos presenta como ventaja la capacidad de inducir mayores respuestas inmunolgicas
celulares que las vacunas de cepas vivas atenuadas, asociado a inmunidad a largo plazo.
La inmunizacin con inyeccin directa de
plasmidios DNA codificando genes para antgenos
proteicos especficos, se ha evaluado experimentalmente en varios modelos de infeccin, tales
como virus de influenza, virus de la
inmunodeficiecia adquirida (HIV), Mycoplasma
pulmoniae, L. mayor, B. burgdorferi, as como con
varios antgenos de M. tuberculosis.
La vacunacin con DNA representa un avance promisorio e importante en el control de las
infecciones por bacterias intracelulares.
5.2.4. Vacunas DNA

En los ltimos aos, han aparecido mtodos de
vacunacin con cidos nucleicos (ver captulo 36),
los cuales constituyen un nuevo medio de expresin
in situ de un antgeno seleccionado para la generacin de una respuesta inmune humoral y celular que,
eventualmente, puede inducir una respuesta inmune
protectora. La inmunizacin con DNA ha sido usada para virus, bacterias y parsitos.
La vacunacin con un plsmido bacteriano
que tiene un gen que codifica para un antgeno
seleccionado, se basa en la expresin del gen bajo
control de un promotor viral fuerte como por ejemplo, el promotor de citomegalovirus (CMV), lo
cual permite la expresin de genes codificados por
las clulas eucariontes transfectadas. El plsmido
se replica en una bacteria (E. coli), se purifica y
luego se inyecta va intramuscular en el husped.
Las clulas del husped son capaces de sintetizar,
procesar y presentar el antgeno a los linfocitos.
542
Sin ttulo-2
542
5/26/06, 10:26 AM
LECTURAS SUGERIDAS
Schaible, E., Collins, H. y Kaufmann, S., Confrontation between Intracellular Bacteria and the
Immune System, Adv. Immunol. 71:267-377,
1999.
Splitter, G.; Oliveira, S.; Carey, M.; Miller, C.; Ko,
J. and Covert, J., T lymphocyte mediated protection against facultative intracellular bacteria, Vet.
Immun. Immunopath. 54:309-319, 1996.
Ulmer, J., Donnelly, J.; Parker, S.; Rhodes, G.;
Felgner, P.; Dwarki, V.; Gromkowski, S.; Deck,
R.; Dewitt, C.; Fridman, A. y cols, Heterologous
protection against influenza by injection of DNA
encoding a viral protein, Science, 259: 17451749, 1993.
Young, E.J., An Overview of Human
Brucellosis, Clin. Infect. Dis. 21:283-290, 1995.
Zhan, Y.F. y Cheers, C., Endogenous interferong mediates the resistance to Brucella abortus
infection, Infect. Immun. 61:4899-4901, 1993.
Zhan, Y.F. y Cheers, C., Endogenous interleukin12 is involved in resistance to Brucella abortus
infection. Infect. Immun. 63:1387-1390, 1995.
543
Sin ttulo-2
543
5/26/06, 10:26 AM
544
Sin ttulo-2
544
5/26/06, 10:26 AM

Captulo 33
INMUNIDAD FRENTE A HONGOS
Eva Burger, Luiz Zaror C., y Heriberto Fernndez J.
1. Introduccin
1.1. Consideraciones histricas
1.2. Caractersticas generales de algunos hongos oportunistas
1.3. Caractersticas generales de algunos hongos patognicos
1.4. Caractersticas generales de los
dermatofitos
1.5. Conceptos sobre inmunidad a
hongos patognicos
2. Inmunidad natural
2.1. Factores hormonales
2.2. Concentracin de hierro
2.3. Sistema del complemento
2.4. Clulas natural killer (NK)
2.5. Leucocitos polimorfonucleares
neutrfilos (PMN)
2.6. Macrfagos
3. Inmunidad humoral a hongos
3.1. Papel de la inmunidad humoral
3.2. Mecanismos protectores de la inmunidad humoral
4. Inmunidad celular a hongos
4.1. Macrfagos
4.2. Linfocitos T
4.3. Citoquinas
4.4. Granulomas
5. Mecanismos de inmunidad protectora
5.1. Mecanismo principal
5.2. Otros mecanismos
545
Sin ttulo-2
545
5/26/06, 10:26 AM
546
Sin ttulo-2
546
5/26/06, 10:26 AM
RESUMEN
En este captulo se presentan algunas caractersticas de los hongos oportunistas, de los
hongos patgenos primarios agentes de micosis sistmicas y de los dermatofitos. Se introduce y
analiza el concepto de que no existe un mecanismo protector especfico capaz de conferir inmunidad protectora contra las micosis, haciendo nfasis en la participacin y accin conjunta de
varios mecanismos inmunolgicos, los que tambin son efectivos en diferentes infecciones determinadas por otros agentes infecciosos.
Tambin se describen los diferentes componentes de la respuesta inmune innata o natural,
tales como factores inespecficos (hormonios, concentracin de hierro), factores solubles (componentes del sistema del complemento) y clulas efectoras (clulas killer (NK), leucocitos
polimorfonucleares neutrfilos (PMN) y macrfagos alveolares y residentes).
Igualmente, se discute la participacin de la respuesta inmune adquirida. Se analiza el papel protector o no protector de la inmunidad humoral como tambin los mecanismos efectores
activos, tales como la opsonizacin de hongos por anticuerpos, citotoxicidad dependiente de
anticuerpos (ADCC) y la opsonizacin y/o lisis de hongos por complemento. Se estudia la participacin preponderante de la inmunidad celular en la proteccin a infecciones fngicas y el rol
de las poblaciones celulares responsables de ella, como los macrfagos y sus productos
antifngicos, los linfocitos T CD4+ y T CD8+ y las subpoblaciones de linfocitos T CD4+ y sus
productos de secrecin (citoquinas). Finalmente, se discute tambin el papel de los granulomas
en la infeccin por hongos.
tes con deficiencias en la respuesta inmune y con

tiempos de sobrevida ms prolongados. Estos individuos constituyen una poblacin extremadamente susceptible a las infecciones fngicas.
En la historia natural de los hongos y en su
relacin con el hombre y los animales, su estado
de parasitismo es un accidente o una necesidad
poco apremiante y, por este motivo, hasta hace
poco tiempo, eran considerados por muchos investigadores como organismos con poca capacidad invasiva y poca adaptacin para el parasitismo. A la luz de lo expuesto precedentemente, estos conceptos deben ser necesariamente revisados.
1. INTRODUCCIN
1.1. Consideraciones histricas
En la mayora de los textos de Inmunologa,
cuando se trata el tema Inmunidad a Infecciones, el asunto Inmunidad frente a Hongos o
est ausente o es de escasa extensin. Esto se debe
a que, hasta hace poco, exista considerablemente
menos informacin sobre la respuesta inmune
frente a hongos que frente a las bacterias, virus e,
incluso, protozoos y helmintos. Esto se deba a
que las infecciones por hongos representaban un
flagelo de mucho menor importancia para la humanidad que las infecciones de origen bacteriano.
Actualmente, con el infortunado advenimiento del
Sndrome de la Inmunodeficiencia Adquirida
(SIDA), este cuadro ha sido completamente modificado.
Con la introduccin de tratamientos
inmunosupresivos en oncologa y en trasplantes,
el perfil inmunolgico de la humanidad viene siendo drsticamente alterado, propiciando la aparicin de un contingente cada vez mayor de pacien-
1.2. Caractersticas generales de algunos hongos oportunistas

Los hongos oportunistas expresan capacidades patognicas slo en hospederos inmunocomprometidos. Algunos ejemplos de estos hongos se
muestra en la tabla 33-1.
547
Sin ttulo-2
547
5/26/06, 10:26 AM
Tabla 33-1. Hongos oportunistas

Hongo
Caractersticas
Candida albicans
Forma parte de la flora normal (organismo endgeno).

Infeccin mucocutnea por prdida de la resistencia; en los
tejidos infectados aparece formando pseudohifas.
Cryptococcus neoformans
Hongo capsulado, el tamao de la cpsula vara de acuerdo

con la virulencia de cada cepa.
Diseminacin hematgena al cerebro y a las meninges; en
casos graves compromete el sistema nervioso central.
Grupo de riesgo: portadores de neoplasias malignas, pacientes con SIDA y trasplantados renales.
1.3. Caractersticas generales de algunos hongos patognicos
parasitismo. En la tabla 33-2, se muestra algunos

ejemplos.
Los hongos patognicos, hongos considerados patgenos primarios, o sea, capaces de inducir infeccin y enfermedad en hospederos
inmunocompetentes. Son todos hongos dimrficos, lo que ha inducido a algunos autores a considerar esta caracterstica como una adaptacin al
1.4. Caractersticas generales de los dermatofitos

En la tabla 33-3 se muestra algunos ejemplos de dermatofitos
Tabla 33-2. Hongos patognicos

Hongo
Caractersticas
Coccidioides immitis
Presente en suelo de regiones ridas. La infeccin se produce por

inhalacin de esporas (artroconidias).
En los tejidos ocurre crecimiento (esfrulas) y fragmentacin
(endosporo).
La enfermedad vara desde asintomtica a diseminada (articulaciones, huesos, meninges y tracto gnitourinario).
Histoplasma capsulatum
Infeccin por inhalacin de conidias.

Infeccin subclnica o leve; a veces produce epidemias.
Enfermedad pulmonar progresiva; diseminacin hematgena fatal
en individuos inmunosuprimidos.
Parsito intracelular facultativo de macrfagos.
Blastomyces dermatitidis
La infeccin se inicia en los pulmones.

Forma progresiva: diseminacin hematgena hacia el tracto
gnitourinario, huesos.
Paracoccidioides brasiliensis
Enfermedad granulomatosa progresiva crnica.

Infeccin primaria del pulmn, diseminacin hacia las mucosas oral,
nasal, tracto gastrointestinal, rganos viscerales, linfonodos.
548
Sin ttulo-2
548
5/26/06, 10:26 AM
Tabla 33-3. Dermatofitos

Hongo
Caractersticas
Epidermophyton
Representan las micosis superficiales ms frecuentes en Chile.
Microsporun
Atacan las reas queratinizadas (piel, pelos y uas).
Trichophyton
No forman parte de la biota de estas estructuras.

Adaptados para utilizar la queratina como nutriente.
El grado de inflamacin producido depende del tipo de dermatofito (geoflico,
zooflico o antropoflico) y tambin del estado inmunolgico del paciente.
bres que en mujeres. La transicin de la fase

miceliar a la fase levaduriforme es inhibida por el
17-beta estradiol, a travs de la interaccin con
un receptor presente en el hongo.
1.5. Conceptos sobre inmunidad a hongos

patognicos
El reino Fungi comprende una gran variedad
de especies que causan un amplio espectro de enfermedades de diferentes tipos. Los hongos
patognicos no causan un nmero elevado de
muertes, considerando que muchos de ellos son
controlados eficientemente mientras el sistema
inmune mantenga su integridad. La produccin de
enfermedad, y particularmente de enfermedad grave, ocurre en determinadas circunstancias, las que
sern descritas a continuacin.
El sistema inmune, como un todo, es necesario para dar combate efectivo a las infecciones
micticas. La inmunidad protectora frente a infecciones producidas por hongos exige la participacin eficiente de diversos mecanismos, los que
incluyen diferentes clulas y molculas.
A continuacin se describen aspectos de la
inmunidad natural o innata e inmunidad especfica o adquirida (humoral y celular) asociada a infecciones micticas.
Candida albicans. La candidiasis vaginal aumenta en mujeres hacia el final de la gestacin y al

final de la fase ltea del ciclo menstrual. Los
estrgenos y los receptores de esta hormona
influencian la conversin levadura/hifa. Al final
del ciclo menstrual, cuando existen altos niveles
de progesterona y bajos niveles de estradiol, se
produce una disminucin de la proliferacin de
linfocitos T frente a antgenos de C. albicans, lo
que estimula el crecimiento de esta levadura.
Dermatofitos. Los dermatofitos presentan una
distribucin por edad, observndose Microsporun
principalmente en nios. En cambio, los
Trichophyton se observan preferentemente en
adultos, lo que tiene que ver con la presencia de
distintos cidos grasos en la infancia y la pubertad, los que presentan diferentes espectros de accin sobre estos hongos. En las inmunodeficiencias como el SIDA, hay un notorio aumento
de las dermatofitosis. En cambio, en la diabetes,
el aumento de las dermatofitosis es levemente
mayor, sin que ste sea estadsticamente significativo .
2. INMUNIDAD NATURAL
2.1. Factores hormonales
Coccidioides immitis. Existe una mayor predisposicin para la coccidioidomicosis durante el embarazo. La maduracin de la fase tisular de C.
immitis (esfrulas/endosporos) se ve acelerada por
efecto de esteroides, como por ejemplo del 17beta estradiol presente en el suero durante el embarazo.
2.2. Concentracin de hierro

Histoplasma capsulatum y Paracoccidioides
brasiliensis necesitan de hierro para su crecimiento. En el organismo, el hierro est asociado a
transferrina (protenas transportadora) y ferritina
(protena de almacenamiento). Los hongos tienen,
tambin, capacidad para secuestrar hierro para su
crecimiento. Por tanto, existe una competencia
Paracoccidioides brasiliensis. La paracoccidioidomicosis es 20/90 veces ms frecuente en hom-
549
Sin ttulo-2
549
5/26/06, 10:26 AM
entre el hospedero y el hongo por este elemento,

especialmente en su forma libre. As, el aumento
de hierro srico aumenta la susceptibilidad las infecciones fngicas.
En los dermatofitos, la transferrina no saturada puede prevenir el desarrollo de stos en las
capas profundas de la piel, por competencia por
el hierro.
cientes con paracoccidioidomicosis tienen un

mayor nmero de clulas NK que los individuos
normales pero, stas, son de menor actividad.
2.5. Leucocitos polimorfonucleares neutrfilos
(PMN)
Los PMN destruyen eficientemente los hongos siendo, incluso, ms eficaces que otras clulas de la inmunidad natural pero, como tienen corta
vida y las infecciones fngicas son crnicas, su
efecto es limitado. As, en la fase inicial de las
infecciones fngicas los pmn diminuyen la carga
infectante. Por otro lado, el papel de los pmn y su
influencia en el tipo y la magnitud de la respuesta
inmune adquirida debe ser estudiado con mayor
profundidad.
2.3. Sistema del complemento

El sistema del complemento puede ser activado
por la va clsica y alterna.
Activacin por la va alterna. Esta va es activada
por las paredes de P. brasiliensis, B. dermatitidis,
C. albicans, F. pedrosoi, C. immitis, y H. capsulatun
y por la cpsula de C. neoformans. Como resultado, se genera C3b, que opsoniza los hongos y favorece su fagocitosis. Tambin aparecen diversos productos quimiotcticos que reclutan y activan
leucocitos y, finalmente, aparece el complejo de
ataque a membranas (MAC) con actividad ltica
sobre los hongos. En el caso de los dermatofitos, al
gatillar el sistema del complemento, se produce la
atraccin quimiotctica de los neutrfilos.
PMN frente a hongos oportunistas. Los PMN son

esenciales en la resistencia a la aspergilosis y a la
candidiasis sistmica. De hecho, la susceptibilidad
a la Candida sp. y a Aspergillus sp. aumenta en casos de neutropenia grave, enfermedad granulomatosa crnica en la cual existe una deficiencia
de anin superxido, la que lleva a una alteracin
en los niveles de mieloperoxidasa. Estas clulas son
competentes para lisar extracelularmente hifas grandes de C. albicans y de A. fumigatus y tienen una
significativa presencia en las fases iniciales de la
candidiasis y de la criptococosis.
Activacin por la va clsica. Los hongos

patognicos son inmunognicos e inducen la sntesis de anticuerpos especficos, favoreciendo la activacin tambin por esta va. An sin la participacin de anticuerpos, esta va puede ser activada
pues, en la composicin de su pared, muchos hongos presentan manosa, la cual se une a un receptor
especfico semejante al primer componente de la
va clsica (C1q).
PMN frente a hongos patognicos. Los efectos

antifngicos de los PMN dependen de la especie
de hongo patognico. En la tabla 33-4 se menciona algunos casos especficos.
2.6. Macrfagos
2.4. Clulas natural killer (NK)

Macrfagos alveolares. Estas clulas fagocitan
partculas infectantes de H. capsulatun, C. immitis,
C. neoformans, A. funigatus, C. albicans y B.
dermatitidis. Fagocitan y matan hongos oportunistas y fagocitan, pero no matan, hongos
patognicos primarios.
Mecanismos. El mecanismo de accin de las

clulas NK se puede expresar tanto por un efecto
fungicida directo o un efecto indirecto, a travs
de la produccin de citoquinas, principalmente
IFN-gama pero, tambin, de TNF- y de GM-CSF.
Efectos de las clulas NK sobre algunos
hongos. Los efectos antifngicos de las clulas
NK dependen de la especie de hongo de que se
trate. As, estas clulas presentan actividad anti
H. capsulatun y juegan un papel en su clearence.
Tambin ha sido verificado que las clulas NK
inhiben C. immitis y C. albicans y son fungistticas
para C. neoformans y P. brasiliensis.
En otros estudios se ha observado que los pa-
Macrfagos residentes. Cuando no son estimulados por citoquinas presentes durante la respuesta inmune adquirida, permiten la proliferacin de
H. capsulatun, P. brasiliensis y C. immitis.
Producen xido nitroso que inhibe el crecimiento de hongos patgenos fagocitados y seran
activos contra hongos superficiales, como los
dermatofitos.
550
Sin ttulo-2
550
5/26/06, 10:26 AM
Tabla 33-4. PMN y hongos patognicos

Hongo
Papel de los PMN
C. immitis
Lisan alrededor del 20% de las artroconidias fagocitadas, digieren la pared

de esfrulas y no lisan endosporos.
H. capsulatun
Son poco eficaces en humanos y tienen importancia relativa en la respuesta

primaria de animales.
B. dermatitidis
Pueden lisar clulas levaduriformes cuando son estimulados por IFN-.
P. brasiliensis
En pacientes, su capacidad fagoctica es normal pero su efecto fungicida es

deficiente.
In vitro son fungistticos y cuando son estimulados por IFN- se tornan
fungicidas.
Dermatofitos
Los neutrfilos y los monocitos/macrfagos aparecen como un importante

mecanismo de defensa contra los dermatofitos a travs de procesos
microbicidas: oxidantes microbicidas (superxidos, agua oxigenada, cido
hipocloroso) y monocloramina.
Por muerte de los neutrfilos se producen substancias microbicidas no
oxidativas: catepsinas, defensinas, lactoferrina, lisozima, azuricidina, protenas microbicidas que incrementan la permeabilidad. Los PMN tienen grnulos de Ca y Zn ligados a calprotectina.
Otras Clulas. Las clulas de la capa basal de la

piel producen el crecimiento continuo de la epidermis hacia su derivacin en queratinocitos. stos, representan una barrera estructural contra
antgenos externos y son importantes por mediar
la respuesta inmune cutnea, secretando factores
solubles capaces de estimular o disminuir la respuesta inmune. Producen marcadores de superficie, molculas de adhesin, citoquinas
quimiotcticas que seran responsables de la inflamacin en las lesiones cutneas, eicosanoides
(PGE2), factores de crecimiento e interleuquinas.
Papel no protector. Altos ttulos de anticuerpos

especficos se presentan en las formas clnicas
graves de coccidioidomicosis y paracoccidioidomicosis. La activacin policlonal de linfocitos
B ocurre en formas clnicas graves de
coccidioidomicosis y paracoccidioidomicosis. En
estas micosis, una respuesta inmune humoral exacerbada representa un mal pronstico.
En las dermatofitosis las precipitinas son producidas infrecuentemente encontrndose bajos niveles de anticuerpos contra T. rubrum, los que podran determinar reacciones cruzadas con otros
organismos.
3. INMUNIDAD HUMORAL A HONGOS
3.2. Mecanismos protectores de la inmunidad

humoral
3.1. Papel de la inmunidad humoral

Opsonizacin de hongos por anticuerpos. El papel de las clulas fagocticas que presentan receptores para la regin Fc IgG (FcR), se ve facilitado por la opsonizacin producida por los mismos
anticuerpos. As, PMN y monocitos humanos lisan
C. neoformans opsonizados por anticuerpos,
macrfagos de roedores o monocitos humanos
ingieren C. neoformans encapsulados opsonizados
por anticuerpos y los PMN se adhieren ms a H.
Papel protector. Las infecciones fngicas determinan la formacin de anticuerpos especficos.

Estos tienen efecto protector, pero su funcin es
auxiliar. Sin embargo, la respuesta inmune humoral es importante en la fase inicial de la infeccin
por S. schenkii y para evitar la candidiasis diseminada.
551
Sin ttulo-2
551
5/26/06, 10:26 AM
dimrficos patognicos. Formas clnicas graves de

algunas micosis estn asociadas a la anergia de
las respuestas mediadas por linfocitos T. Ciertas
deficiencias en los linfocitos T, como aquella observada en pacientes con SIDA o en ratones
atmicos, determinan formas infecciosas graves.
De hecho, a travs de modelos experimentales fue posible comprobar un aumento en la gravedad de la infeccin por H. capsulatun en animales atmicos o depletados de linfocitos T, as
como su incapacidad para eliminar C. neoformans
y controlar su diseminacin al sistema nervioso
central. Sin embargo, no fue posible demostrar
aumento de carga fngica o exacerbacin de la
enfermedad causada por C. albicans.
capsulatum opsonizado por anticuerpos que a

aquellos no opsonizados.
Citotoxicidad dependiente de anticuerpos
(ADCC). Este mecanismo fue descrito contra C.
neoformans, promoviendo un efecto fungisttico.
Opsonizacin de hongos por complemento. Los
PMN y monocitos humanos lisan C. neoformans,
H. capsulatun, S. schenkii opsonizados por complemento. Los macrfagos no activados no fagocitan
C. neoformans opsonizado por complemento.
Lisis de hongos por complemento. El complejo
de ataque a las membranas tienen efecto fungicida
sobre C. neoformans. Un fenmeno interesante es
que una deficiencia en el componente C5 de la
va efectora del sistema del complemento no implica en aumento de susceptibilidad a varias micosis profundas.
Linfocitos T CD4+
Todos los hongos patognicos causan reacciones de hipersensibilidad de tipo tardo (HTT).
El desarrollo de fuertes reacciones de HTT est
asociado a formas clnicas benignas en pacientes
con paracoccidioidomicosis y coccidioidomicosis.
En modelos experimentales de varias micosis profundas se observ un paralelismo entre HTT y la
cura o una buena evolucin de la enfermedad,
muchas veces precediendo al clearence de los
hongos.
Muchos pacientes con dermatofitosis presentan HTT a antgenos de dermatofitos y tambin
una vigorosa transformacin de linfocitos como
respuesta al antgeno pudiendo, stos, acceder a
la epidermis junto con neutrfilos.
Las respuestas de HTT participan en la lisis
de los hongos de menor patogenicidad y del
clearence parcial y la contencin de hongos de
mayor patogenicidad, incluyendo la formacin de
granulomas, se muestra en la tabla 33-5.
A continuacin se describe el papel de
subpoblaciones de clulas T CD4+ (LTh1 y LTh2)
en la inmunidad clulas frente a algunos hongos.
4. INMUNIDAD CELULAR A HONGOS

La inmunidad celular tiene importancia decisiva en la proteccin contra micosis profundas
y en la candidiasis mucocutnea. Repetidamente
ha sido verificado que los hongos patognicos tienen un efecto supresor sobre su induccin y/o sobre su expresin.
4.1. Macrfagos
Como ya fue visto, al contrario de los
macrfagos residentes, que no lisan hongos
patognicos, los macrfagos activados por IFN-
son competentes fungicidas. Los efectos
antifngicos de estos macrfagos dependen tanto
del hongo (especie, virulencia de la cepa) como
de las caractersticas del macrfago (tipo, lugar
de origen, especie del hospedero).
C. albicans y C. neoformans. En la respuesta

inmune que se establece frente a estos hongos
existe una asociacin entre patrn de curacin
de la infeccin sistmica y respuesta predominantemente Th1 y entre patrn de no curacin y
el establecimiento de una respuesta predominantemente Th2, constituyendo, as, un perfil claramente dicotmico de produccin de citoquinas
Th1 y Th2.
Substancias fngicas relevantes. Los fagocitos

lisan hongos a travs de metabolitos txicos dependientes de NO (P. brasiliensis, H. capsulatun, B.
dermatitidis, C. neoformans), dependientes de O2
(H. capsulatun, C. immitis, C. albicans) y tambin
por medio de protenas catinicas (C. immitis).
4.2. Linfocitos T
Esta poblacin celular es esencial para la resistencia a las infecciones causadas por hongos
552
Sin ttulo-2
552
5/26/06, 10:26 AM
Tabla 33-5. Papel de linfocitos T CD4(+) en la inmunidad celular a algunos hongos

Hongo
Papel de los linfocitos T CD4 (+)
C. immitis
Son necesarios para la inmunidad protectora en los pulmones, lo que fue

confirmado por experimentos de transferencia de clulas.
H. capsulatun
Su ausencia determina un notorio aumento de la susceptibilidad y muerte

por dosis menor del hongo que las usualmente conocidas.
C. neoformans
Son necesarios para el clearence de los hongos del pulmn.
involucradas en la exacerbacin de infecciones

fngicas, en la anergia de reacciones de HTT y en
la desactivacin de macrfagos.
TNF- y GM-CSF estimulan la actividad
antifngica de PMN, monocitos y macrfagos.
En la tabla 33-7 se muestra la participacin
de algunas citoquinas en la inmunidad celular de
algunos hongos.
P. brasiliensis, B. dermatitidis, C. immitis. En

las infecciones por estos hongos existe una respuesta Th1 inicial seguida de una respuesta Th2,
lo que se correlaciona con el agravamiento de la
enfermedad. El patrn de produccin de citoquinas
Th1 y Th2 difiere entre los diferentes hongos, tanto
en cuanto a su cintica como a los niveles producidos.
Linfocitos T CD8+. Los LT citotxicos (LT
CD8+) participan, en conjunto con linfocitos t
CD4+, en la inmunidad protectora contra varios
hongos patognicos, como H. capsulatun y C.
neoformans. Los mecanismos por los cuales esta
proteccin se produce pueden ser varios: lisis de
macrfagos infectados (H. capsulatun), efecto
fungicida directo (C. neoformans) o secuestro en
granulomas (C. neoformans).
En la tabla 33-6 se describe la participacin
de las clulas T CD8+ en algunas infecciones
micticas.
4.4. Granulomas
La formacin de granulomas tiene el propsito de restringir el crecimiento fngico y confinar la infeccin.
Los macrfagos activados inhiben el crecimiento fngico. Cuando esto no es posible,
ocurre la fusin de macrfagos formndose clulas gigantes multinucleadas para contener el
desarrollo fngico. La encapsulacin promovida por la fibrosis tambin tiene efecto de contencin sobre los hongos. Como ocurre
necrosis, se reduce la oferta de nutrientes y de
oxgeno necesarios para la proliferacin de los
hongos.
Los principales tipos celulares encontradas
en varias micosis, como las causadas por B.
dermatitidis, C. immitis, S. schenkii, H.
4.3. Citoquinas. Las citoquinas Th1 (IFN-, IL2) tienen un papel importante en la proteccin
contra infecciones fngicas, en el desarrollo de
reacciones de HTT y en la activacin de
macrfagos.
Las citoquinas Th2 (IL-4, IL-10) estn
Tabla 33-6. Linfocitos T CD8+ y algunos hongos

Hongo
Papel de los linfocitos T CD8 (+)
C. immitis
Son necesarios para la inmunidad protectora en el pulmn.
H. capsulatun
Su ausencia determina un relativo aumento de la susceptibilidad pero no

causa la muerte.
C. neoformans
Son necesarios para el clearence de estos hongos de los pulmones.
553
Sin ttulo-2
553
5/26/06, 10:26 AM
Tabla 33-7. Citoquinas e infecciones micticas

Hongo
Papel de las citoquinas
C. albicans
IFN est asociada con el patrn de curacin de la infeccin y, en contrapartida, IL-4 e IL-10 con el desarrollo de enfermedad crnica.
IL-12 presenta efecto protector contra la diseminacin del hongo, adems
de ser un poderoso inductor de la respuesta Th1 IFN-, GM-CSF y TNF-
son mediadores de la lisis intracelular.
C. immitis
TNF-, IL-1 y IL-6 estn involucrados en el sndrome respiratorio agudo y

choque sptico, importantes en la patognesis.
IFN- y IL-12 son mediadores de la lisi intracelular de artroconidias.
IL-12 tienen efecto protector tambin por induccin de la expresin de
citoquinas Th1.
H. capsulatun
IL-12 tienen efecto protector indirecto, por la produccin de IFN y relevancia en la respuesta inmune primaria.
TNF en conjunto con IL-12 aumentan la produccin de IFN es el principal mediador de la lisis intracelular.
TNF en conjunto con IFN determinan la exacerbacin del efecto protector.
IL-4 modula la inmunidad protectora mediada por IFN
C. neoformans
TNF, IL-12, IL-1, IFN son producidos al inicio de la infeccin, con un

importante papel en la induccin de inmunidad celular protectora.
IL-12 presenta efecto protector contra la diseminacin.
IFN, GM-CSF y TNF son mediadores de la lisis intracelular.
Dermatofitos
El IFN est involucrado en gatillar la HTT y es responsable de las manifestaciones cutneas y en la defensa del husped contra la infeccin. Es
producido por linfocitos perifricos en la dermatofitosis inflamatoria aguda, siendo baja su concentracin en las formas crnicas.
Liberan IL-8 por efecto de antgenos de dermatofitos iniciando la inflamacin como defensa.
Los niveles de IL-1 inducidos por T. mentagrophytes son ms altos que los
producidos por el hongo antropoflico T.
rubrum, lo que se relaciona con una respuesta inflamatoria ms severa en el
caso del hongo geoflico.
Las clulas de Langerhans (2-5% de las clulas de la epidermis) producen
marcadores de superficie y molculas de adhesin (LFA-3, ICAM-1, B7) y
citoquinas (IL-1B, IL-6, TNF-), actan como procesadoras y presentadoras del antgeno para activar los linfocitos T, adems de fagocitosis de
antgenos.
capsulatun y C. neoformans, son PMN,

linfocitos, clulas epiteliales y clulas gigantes
multinucleadas.
Los granulomas se presentan circunscritos en
la enfermedad controlada y diseminados en las enfermedades graves.
5. MECANISMOS DE INMUNIDAD PROTECTORA

5.1. Mecanismo principal
El principal mecanismo protector que acta
en las micosis profundas es la produccin de
554
Sin ttulo-2
554
5/26/06, 10:26 AM
citoquinas como el IFN por linfocitos T, llevando a la activacin de macrfagos, con el consiguiente aumento de su capacidad fungicida.
5.2. Otros mecanismos
Adems de ste, existen otros mecanismos
capaces de conferir inmunidad protectora en infecciones fngicas. De estos otros es necesario
citar el desarrollo primordial o preferencial de una
fuerte respuesta del tipo Th1, el efecto conjunto
de linfocitos T CD4+ y T CD8+ adems del efecto de otras poblaciones celulares y del efecto individual o sinrgico de varias citoquinas.
LECTURAS SUGERIDAS
Kwon-Chong, K.J. & Bennet, J.E., Medical Mycology, Lea & Febiger Ed., Philadelphia, 1992.
Journal of Medical and Veterinary Mycology,
Volume 30, Supplement 1, 1992 (Proceeding of
the XI Congress of ISHAM).
Medical Mycology, Volume 36, Supplement 1,
1998 (Proceedings of the XIII Congress of
ISHAM).
Medical Mycology, Volume 38, Supplement 1,
2000 (Proceedings of the XIV Congress of
ISHAM).
Sarosi, G.A & Davies, S.F., Doenas Fngicas
do pulmo. Revinter Ed., 2001.
555
Sin ttulo-2
555
5/26/06, 10:26 AM
556
Sin ttulo-2
556
5/26/06, 10:26 AM

Captulo 34
RESPUESTA INMUNE FRENTE A VIRUS
Jos M. Ojeda F. y Jorge A. Fernndez V.
1. Introduccin
2. Infeccin viral
2.1. Interaccin virus-husped
3. Respuesta inmune en infecciones
virales
3.1. Inmunidad antiviral natural
3.1.1. Produccin de IFN tipo I y
otras citoquinas
3.1.2. Clulas NK
3.1.3. Activacin del complemento y fagocitosis
3.2. Inmunidad antiviral especfica
3.3. Evasin de la respuesta inmune

por virus
3.3.3. Interaccin con componentes
del sistema inmune
3.3.4. Interferencia con la presentacin antignica
3.3.6. Inmunosupresin
557
Sin ttulo-2
557
5/26/06, 10:26 AM
558
Sin ttulo-2
558
5/26/06, 10:26 AM
RESUMEN
An cuando en su mayora las infecciones virales son de tipo subclnico o asintomticas, en
general inducen respuesta inmune.
En este captulo se revisa, brevemente, cmo ocurren las infecciones virales, indicando el
tipo de interacciones ligando-receptor que se requieren para que estos parsitos intracelulares
infecten las clulas blanco.
La mayor parte del captulo se refiere a la respuesta inmune que se puede generar en las
infecciones virales. En lo que se refiere a la inmunidad antiviral natural o innata, participan el
interfern (IFN) tipo I, clulas NK y el sistema del complemento. Respecto a la inmunidad antiviral
especfica o adquirida, se describe la participacin de los anticuerpos (inmunidad humoral) y de
linfocitos T citotxicos (inmunidad celular).
Finalmente, en el captulo se explican las diferentes estrategias que utilizan los virus para
evadir la respuesta inmune: persistencia intracelular, variacin antignica, interaccin con componentes del sistema inmune, interferencia con la presentacin antignica, simulacin molecular
e inmunosupresin.
sus enfermedades comprende una secuencia de

interacciones entre los virus y sus hospederos.
stas incluyen la entrada de los virus al organismo, su diseminacin y localizacin en los tejidos
u rganos blancos, evadiendo al mismo tiempo los
mecanismos inmunes del hospedero.
La respuesta inmune frente a virus se caracteriza por:
1. INTRODUCCIN
Los virus, son agentes infecciosos capaces
de ejercer diversas interacciones con los hospederos que infectan, algunas de las cuales afectan a
clulas, tejidos y rganos manifestando su poder
patgeno. En estas interacciones, que conducen
al desarrollo de enfermedad, participan factores
propios del agente infeccioso, del hospedero y del
ambiente. La patogenia de las enfermedades infecciosas involucra etapas que son determinadas
por la accin de estos factores. Los factores dependientes del hospedero ejercen su accin a travs de mecanismos de inmunidad natural o
inespecfica y de los mecanismos especficos o de
inmunidad adquirida (ver captulo 3). Entre los
mecanismos de inmunidad natural, que tienen importancia en el control de las infecciones, estn:
la fagocitosis, la accin del sistema complemento, clulas NK, las barreras cutneas y de las superficies epiteliales, el pH gstrico, los movimientos ciliares, las secreciones en las mucosas, la flora gastrointestinal normal y otros. Los mecanismos de inmunidad especfica (Linfocitos B, T,
anticuerpos), seran de escasa o nula utilidad si no
contaran con los mecanismos de inmunidad natural.
La evolucin de las infecciones virales y de
a) Estar mediada por ambos tipos de inmunidad,

tanto innata, como adquirida, aunque en una
primoinfeccin predominan los mecanismos innatos, cuya respuesta aislada se caracteriza por ser
siempre de igual magnitud frente al mismo estmulo antignico y carecer de memoria.
b) Diferentes tipos de virus estimulan distintas
respuestas y mecanismos efectores inmunes, ya
que los virus difieren en sus patrones de infeccin, inmunogenicidad y por tanto su eliminacin
implica diversos sistemas efectores.
c) La sobrevivencia y patogenicidad de los virus
en el hospedero dependen de su habilidad para
evadir o resistir los mecanismos inmunes. Los virus en su evolucin han desarrollado una variedad de estrategias y eficientes mecanismos para
su sobrevivencia, evadiendo la respuesta inmune.
559
Sin ttulo-2
559
5/26/06, 10:26 AM
d) El dao tisular y enfermedades derivadas de

las infecciones por virus patgenos pueden ser
causadas por la respuesta del hospedero contra
el agente infeccioso, ms que por la accin directa de l. La inmunidad, al igual que muchos otros
mecanismos homeostticos, es fundamental en la
proteccin del hospedero ante las agresiones externas, pero tambin tiene la capacidad de provocarle dao.
plique y exprese, generando nuevas copias de cido nucleico y protenas o antgenos virales.
La replicacin viral produce inhibicin de la
sntesis de cidos nucleicos y protenas celulares,
lo que conduce a alteraciones celulares que se manifiestan de diversas formas denominadas efectos
citopticos y que suelen concluir con la lisis o
muerte celular. Algunos virus producen infecciones sin generar efectos citopatolgicos evidentes,
estableciendo infecciones a nivel celular de carcter latente o persistente. En algunos casos las
clulas, as infectadas expresan protenas o
antgenos virales que pueden estimular la inmunidad especfica, la que acta a travs de reacciones de hipersensibilidad produciendo el dao celular. Este tipo de reacciones suele observarse en
infecciones por el virus de la Coriomeningitis
linfocitaria en ratones y por virus de la Hepatitis
B en los seres humanos.
2. INFECCIN VIRAL
Los virus pueden infectar a los individuos y
causar enfermedad, si poseen capacidad o poder
patgeno en dicho husped. Sin embargo, las infecciones virales son en su mayora de tipo
subclnico o asintomticas, sin generar procesos
patolgicos, pero s una respuesta inmune.
2.1. Interaccin virus-husped
3. RESPUESTA INMUNE FRENTE A VIRUS
Los virus son organizaciones macromoleculares constituidas por cido nucleico y protenas. Slo algunos virus poseen adems una envoltura o membrana lipdica con glicoprotenas
insertas. Las partculas virales poseen capacidad
infectiva y por carecer de maquinaria de biosntesis
de sus macromolculas, aprovechan la maquinaria metablica de la clula hospedera, ejerciendo
el carcter de parsitos estrictamente intracelulares. La utilizacin de los sistemas de biosntesis
celulares le permiten a los virus replicarse en el
interior de las clulas infectadas.
Los virus animales entran a las clulas unindose a receptores moleculares presentes en la superficie celular y que corresponden a entidades
que son fisiolgicamente activas. Algunos ejemplos son: (i) Virus de la inmunodeficiencia humana-1 (VIH-1), el cual se une a la molcula CD4
presentes en las clulas T "helper" humanas, (ii)
Virus Epstein-Barr (VEB), que se une al receptor
tipo 2 del complemento en los linfocitos B humanos, y (iii) Los Rinovirus, agentes causantes del
resfro comn, que se unen a la molcula de adhesin intercelular (ICAM-1), expresada en el epitelio de la va erea.
Despus del proceso de unin a los receptores los virus son internalizados a la clula por
fagocitosis (viropexia) o por fusin de las membranas viral y celular. En el interior de las clulas
infectadas los virus se liberan de su cubierta
proteica, permitiendo que el genoma viral se re-
La inmunidad contra los virus opera en dos

etapas: En la fase inicial de infeccin, antes de
que un virus haya entrado en las clulas (virus
extracelular) y despus de su penetracin, cuando
el virus se encuentra en el interior de las clulas
infectadas y es inaccesible para los mecanismos
de inmunidad humoral (anticuerpos y complemento) y los fagocitos.
La estimulacin misma del sistema inmune
en una infeccin viral puede tener tres consecuencias generales:
Activacin de componentes del sistema inmune no especficos para antgenos virales, lo que
puede significar la induccin de un proceso inflamatorio que favorece la eliminacin del virus, pero
que tambin pude causar dao en las clulas y tejidos del husped. Tambin la activacin puede
conducir al desarrollo de un estado patolgico que
tienda a persistir en el tiempo, independiente de
la presencia del virus.
Activacin de componentes del sistema inmune que exhiban especificidad para interactuar
con estructuras virales. La interaccin de mecanismos efectores especficos del sistema inmune
con antgenos virales promueve la eliminacin
progresiva de virus.
Modificaciones en componentes del sistema
inmune, algunas de ellas irreversibles, que perduran despus de la eliminacin del virus, que pueden conducir a variaciones en el repertorio de receptores de clulas T (TCR) (ver captulo 7), ge-
560
Sin ttulo-2
560
5/26/06, 10:26 AM
neracin de poblaciones celulares de memoria

inmunolgica y tolerancia.
puestas celulares similares.

El IFN producido por las clulas infectadas
es secretado al exterior, donde se une a receptores
presentes en la superficie de las clulas vecinas.
Esta interaccin IFN-receptor provoca una cascada de eventos moleculares similar a otra
transduccin de seales, que culmina con la activacin de genes e induccin de protenas
antivirales como son: una protena quinasa y una
2',5'-oligoadenilato sintetasa. La protena quinasa
inactiva por fosforilacin al factor proteico de iniciacin (eIF-2) necesario para la sntesis de protenas virales. La sintetasa genera oligoadenilatos
que activan una endorribonucleasa que degrada
los cidos ribonucleicos virales. El efecto antiviral
de estos IFNs es por tanto paracrino, dado que la
clula infectada secreta IFNs para proteger a las
clulas vecinas an no infectadas, produciendo el
estado antiviral.
3.1. Inmunidad antiviral natural

Hay dos mecanismos principales de inmunidad antiviral natural:
(i) produccin de Interfern (IFN) tipo I ( y
) y otras citoquinas, que generan un estado
antiviral, y (ii) participacin de clulas NK ("Natural Killer") en la destruccin de las clulas infectadas. El (IFN) I puede aumentar la actividad
citoltica de las clulas NK. Ambos mecanismos
operan en la fase temprana de las infecciones
virales, antes de que acten los mecanismos de
inmunidad especfica.
Por otra parte, la activacin del sistema del
Complemento y la fagocitosis participan en la eliminacin de virus extracelular presente en los fluidos corporales y constituyen tambin formas de
inmunidad antiviral natural.
3.1.2. Clulas NK
3.1.1. Produccin de IFN tipo I y otras

citoquinas
Las clulas NK (ver captulo 19) destruyen

una gran variedad de clulas infectadas por virus.
La actividad ltica de las clulas NK pueden ser
uno de los principales mecanismos de inmunidad
en contra de los virus, tempranamente o durante
el curso de la infeccin, antes de que las respuestas inmunes especficas se hayan desarrollado. Los
IFNs tipo I ejercen un efecto sinrgico aumentando la capacidad de las clulas NK para lisar las
clulas infectadas. Las clulas NK destruyen o
lisan estas clulas liberando el contenido de sus
grnulos que consiste en perforinas o protenas que
generan canales en las membranas celulares, produciendo lisis osmtica y granzimas, que son
endonucleasas que degradan DNA. Tambin las
clulas NK inducen Apoptosis (muerte celular programada) de la clula infectada.
La infeccin viral estimula la produccin de

IFN tipo I y citoquinas en ciertos tipos de clulas
(ver captulo 10). Los interferones son protenas
que ejercen sus efectos antivirales a travs de diversos efectos como: (i) mayor expresin de las
molculas MHC clase I y II, lo que facilita el reconocimiento de los antgenos virales por parte
del sistema inmune, (ii) activacin de las clulas
NK y macrfagos con capacidad de destruir las
clulas infectadas por los virus. El IFN- estimula tambin a los linfocitos B, (iii) inhibicin directa de la replicacin viral. Diversos mecanismos
contribuyen a producir este efecto.
Los IFN- corresponden a una familia de 20
polipptidos (18 kDa) relacionados estructuralmente entre s y codificados por genes separados,
en cambio el IFN- es un polipptido (20 kDa)
codificado por un solo gen. Las principales clulas productoras de IFN- son los fagocitos
mononucleares y en el caso de IFN- son los
fibroblastos y las clulas infectadas por virus. La
seal natural ms potente para la sntesis de IFNs
tipo I es la infeccin viral. Ambos tipos de IFNs
son secretados tambin durante la respuesta inmune a antgenos, al ser estimulados los fagocitos
mononucleares por los linfocitos T. Aunque los
IFNs y muestran poca similitud estructural,
se unen al mismo receptor celular e induciran res-
3.1.3. Activacin del Complemento y

Fagocitosis
El Complemento y la Fagocitosis pueden eliminar virus desde sitios extracelulares y desde la
circulacin y fluidos corporales. La activacin del
complemento, como mecanismo de inmunidad
natural, sera a travs de la va alterna. Constantemente se est formando en el plasma C3b a partir
de C3. Si este C3b se deposita covalentemente
sobre una membrana biolgica (como puede ser
la de los virus con envoltura), o sobre una superficie proteica (virus desnudos), y si es que estas
561
Sin ttulo-2
561
5/26/06, 10:26 AM
superficies, a diferencia de las membranas celulares, no poseen protenas regulatorias como: H,

CR1, MCP o CD59 puede producirse, en el caso
de los virus envueltos, virolisis por ruptura de su
envoltura lipdica al formarse MAC, o bien por
opsonizacin y fagocitosis por las clulas del sistema fagoctico mononuclear que poseen receptores para C3b (CR1, CR3 y CR4).
anticuerpo capaces de activar el sistema complemento, generando destruccin de la partcula viral

(virolisis) o promoviendo la fagocitosis.
Los anticuerpos que no son opsonizantes ni
activan complemento, como IgA, IgE e IgG4 desempean funciones neutralizantes importantes a
nivel de inmunidad local, especialmente en infecciones del tracto respiratorio e intestinal.
La manipulacin de la inmunidad humoral
ha sido fundamental en el establecimiento de la
vacunas antivirales a virus atenuado o inactivado,
ya que el xito de la funcin protectora de una
vacuna est relacionada con la capacidad de inducir una respuesta inmune de anticuerpos especficos contra determinados antgenos virales que son
determinantes de la infeccin y poder patgeno.
La inmunidad humoral desempea su funcin
protectora, en gran parte por la funcin
neutralizante de los anticuerpos. Sin embargo es
importante considerar que esta proteccin es efectiva slo en la fase temprana de la infeccin, es
decir antes que el virus entre a la clula. Por otro
lado, es difcil transferir inmunidad antiviral mediante anticuerpos purificados y la capacidad
neutralizadora de un anticuerpo in vitro, generalmente muestra poca o ninguna correlacin con su
capacidad protectora in vivo. Estas consideraciones muestran que los anticuerpos son un componente importante de la inmunidad antiviral, pero
que no son suficientes para eliminar muchas infecciones virales. Estos hechos se evidencian tambin en que determinadas deficiencias de la inmunidad humoral aumenta la susceptibilidad de
determinadas infecciones virales.
3.2. Inmunidad antiviral especfica

La inmunidad especfica contra las infecciones virales es mediada por una combinacin de
mecanismos celulares y humorales. Ambos mecanismos participan en el control de la infeccin,
ya sea actuando directamente sobre las partculas
virales o bien sobre las clulas infectadas.
Durante la infeccin viral se estimulan los
linfocitos B, haciendo que stos proliferen y se
diferencien en clulas plasmticas capaces de sintetizar anticuerpos especficos que reconocen y
reaccionan contra diferentes antgenos virales, ya
sea estructurales (que forman parte de la partcula
viral) o no estructurales (protenas virales que se
generan durante la infeccin viral, pero que no
forman parte de la partcula viral).
Anticuerpos neutralizantes. Estos anticuerpos
especficos son importantes por su accin protectora, ya que su funcin es la neutralizacin de la
capacidad infectiva. Se unen a las protenas de
infectividad, que son aquellas que permiten la
unin del virus a sus receptores celulares, impidiendo as su entrada y replicacin.

La respuesta inmune celular especfica est
dada por complejas interacciones entre la clula
infectada y clulas del sistema inmune. La
interaccin ms importante, referente al control
de la infeccin es la que se establece entre los
linfocitos T citotxicos (LTc) y la clula infectada. En esta interaccin se produce un reconocimiento por parte de ambas clulas, en la que es
crucial la expresin de ciertos polipptidos virales,
que dan la especificidad de la respuesta y la accin citotxica en s, que es respuesta a este reconocimiento.
La principal poblacin celular que ejerce esta
accin citotxica son las clulas CD8+, las que
reconocen pptidos o antgenos virales sintetizados en la clula infectada, en asociacin con mo-
Anticuerpos opsonizantes. Los anticuerpos

subclase IgG1 e IgG3 tienen propiedades
opsonizantes, se unen a los antgenos virales aumentando la fagocitosis de las partculas virales
por clulas fagocticas que poseen receptores Fc.
Sin embargo, estos anticuerpos pueden en algunos casos facilitar la entrada de las partculas
virales a estas clulas donde ciertos virus inician
procesos infectivos y replicativos, como es el caso
de la infeccin de fagocitos mononucleares por
VIH.
Anticuerpos activadores del complemento.
Otros anticuerpos son aptos para unirse a las
particulas virales formando complejos antgeno-
562
Sin ttulo-2
562
5/26/06, 10:26 AM
lculas MHC de clase I. Una proporcin menor,

pero detectable de linfocitos citotxicos de humanos y de ratones, corresponde a linfocitos CD4+
que reconocen pptidos virales en asociacin con
molculas MHC de clase II. Esta accin citotxica
de las clulas CD4+ se ejerce sobre clulas infectadas que expresan tanto MHC-II, como pptidos
virales. La diferenciacin de los LTC de tipo CD8+
requiere de citoquinas producidas por clulas las
clulas CD4+.
El efecto antiviral de los LTc conduce a la
lisis de la clula infectada, la que se debe a diversas acciones como: produccin de perforinas,
estimulacin de enzimas intracelulares que degradan genomas y protenas virales, secrecin de
citoquinas como IFN, induccin de apoptosis y
otros (ver captulo 19).
La importancia de los LTc en el control de
las infecciones virales ha sido demostrada en
sistemas experimentales. Los ratones pueden
ser protegidos contra el virus de influenza, a travs de la transferencia de LTc especficos para
el virus y del mismo tipo de MHC del animal.
Sin embargo, una gran proporcin de LTc especficos para virus influenza, no son serotipos
especficos, porque ellos reconocen pptidos derivados de las protenas virales como son las
protenas internas de la partcula viral, y que no
se relacionan antignicamente con las
glicoprotenas de la envoltura proteicas
(hemaglutinina y neuroaminidasa) que son las
que determinan el serotipo. Por otra parte, la
inmunidad adquirida activamente en el caso de
infecciones por virus influenza es serotipo especfica, lo indica que tanto los anticuerpos
como los LTc participan en la respuesta inmune
para proteger la clula hospedera, bloqueando
la entrada del virus a la clula o inhibiendo la
replicacin viral.
las de la meninge, expresando pptidos y

antgenos virales, pero sin destruirlas. Adems
el VCML estimula el desarrollo de LTc especficos que son los que reconocen las clulas infectadas y las destruyen. Los ratones infectados con
VCML, pero deficientes en clulas T, son portadores crnicos del virus, pero no desarrollan
meningitis, mientras que s se desarrolla en los
ratones normales infectados.
La infeccin del virus de la hepatitis B en
humanos muestra algunas similitudes con la infeccin por VCML en ratones. Las personas
inmunodeficientes que llegan a infectarse no desarrollan la enfermedad, pero pueden ser portadores del virus y transmitir la infeccin a personas
sanas. Por otra parte, el hgado de pacientes con
hepatitis aguda contiene gran cantidad de clulas
T CD8+.
La respuesta inmune a infecciones virales,
puede estar tambin relacionada a procesos de desarrollo de enfermedad, ya que como consecuencia de infecciones persistentes por algunos virus
se forman complejos inmunes circulantes de
antgenos virales con anticuerpos especficos.
Estos complejos antgeno-anticuerpo se depositan
en los vasos sanguneos y suelen conducir a procesos inflamatorios de vasculitis y destruccin
vascular.
Algunos virus contienen protenas
antignicas, cuyas secuencias de aminocidos poseen cierta homologa con protenas celulares.
Algunas de estas protenas virales, se expresan
en la superficie celular de ciertos tejidos. Se ha
postulado que debido a esta similitud molecular,
la inmunidad antiviral puede conducir a respuestas de dao tisular. La tabla 34-1 muestra algunas protenas virales homlogas a protenas celulares y que poseen funciones biolgicas determinantes en las propiedades patognicas de ciertos virus. Algunas de estas protenas pueden
interactuar directamente con componentes del
sistema inmune, como son las protenas gVC-1
y gE de los virus HSV, que se unen a C3b del
complemento y Fc de las inmunoglobulinas respectivamente. Otras de protenas virales son
homlogas a interleuquinas, como la protena
codificada por el gen K2 del virus HHV-8 que es
similar estructural y funcionalmente con IL-6.
Tambin existen protenas virales que actan en
forma similar a protenas celulares, como es el
caso de la protena VGF de los virus Vaccinia
que acta igual que EGF, estimulando el crecimiento de clulas epiteliales.
Respuesta inmune antiviral y dao celular

En la mayora de las infecciones virales agudas se produce destruccin celular y tisular por
accin directa del virus sobre las clulas (citolisis)
como consecuencia de sus efectos citopticos.
La respuesta inmune de los LTc puede ser
el factor ms importante en producir dao celular en los tejidos infectados por virus no
citopticos. El mejor ejemplo son las infecciones por virus de la coriomeningitis linfocitaria
(VCML), el cual induce inflamacin de las
meninges en ratones. El VCML infecta las clu-
563
Sin ttulo-2
563
5/26/06, 10:26 AM
Tabla 34-1. Protenas virales homlogas a protenas celulares

Virus
Protena viral
Adenovirus
E3
Funcin
E1b
Impide translocacin de MHC-I

Interfiere con seal de
transduccin de TNF
Herpes simplex 1 y 2 (HSV)
g C-1
gE
Se une a C3b
Se une a Fc de Ig
Citomegalovirus (CMV)
UL 18
Se une a 2 MG
Epstein Barr (EBV)
BHRF 1
BCRF 1
Homlogo a Bcl 2
Homlogo a IL 10
Herpes Humano 8 (HHV-8)
K2
ORF 4
ORF 16
ORF 72
Homlogo IL-6
Se une a Complemento
Homlogo Bcl 2
Homlogo Ciclina D
Vaccinia
VGF
VCP
Homlogo a EGF/TGF
Se une a C4b
El establecimiento de la secuencia gnica de

varios virus ha permitido establecer y comprobar
la homologa de genes y protenas virales con sus
contrapartes celulares. Se postula que estos genes
virales han sido secuestrados o capturados de los
genomas celulares durante los procesos evolutivos y que han sido parcialmente modificados, con
el fin de permitir obtener ventajas selectivas a los
virus para su existencia, replicacin y transmisin.
infecciones virales a nivel celular. Si un virus es

capaz de expresar funciones inhibitorias para los
MHC clase I o su presentacin antignica, se har
indetectable para los linfocitos T y podr permanecer y replicarse en las clulas infectadas.
Existen diversos mecanismos por los cuales
las infecciones virales escapan al control de la
respuesta inmune, estableciendo infecciones de carcter crnico, ya sea con persistencia de partculas virales infectivas o por estados de latencia y
transformacin viral.
3.3. Evasin de la respuesta inmune en las infecciones virales
Los virus han desarrollado diversos mecanismos para evadir los mecanismos de defensa
antiviral del sistema inmune, los que han permitido su supervivencia. Se han identificado varios
genes virales y sus protenas que modulan la respuesta inmune y posiblemente existan muchos
otros genes y protenas virales con estas propiedades.
Varios virus son capaces de inhibir la presentacin de sus propios antgenos a los linfocitos
T citotxicos. Estos linfocitos CD8+ con actividad citoltica restringida a MHC clase I, constituyen el principal mecanismo de defensa contra las
La permanencia intracelular de los virus, sin

expresin de antgenos de reconocimiento y
reactividad inmunolgica, es el mecanismo ms
obvio por el cual ellos pueden escapar de las clulas y molculas de la respuesta inmune, como es
el caso de las infecciones de ciertas neuronas por
los virus Herpes simplex, donde se encuentran latentes.
Existen virus capaces de presentar gran variacin antignica, especialmente en sus prote-
564
Sin ttulo-2
564
5/26/06, 10:26 AM
nas de infectividad, como es el caso de los virus

influenza (Hemaglutinina y Neuroaminidasa).
Estas variaciones ocurren por mutaciones puntuales, recombinaciones y reordenamientos genticos
entre cepas virales diferentes. Como resultado, los
nuevos virus no son susceptibles a la inmunidad
generada en la poblacin por infecciones previas.
Existen muchos tipos antignicos de rinovirus
(ms de un centenar) por lo que la inmunidad especfica contra un tipo antignico no protege de la
infeccin por otro tipo. Ciertos virus RNA como
VIH acumulan mutaciones durante su replicacin
por carecer de maquinaria de reparacin de sntesis de cidos nucleicos, de aqu que a su alta variacin gentica se asocia la variacin antignica.
b) Los virus Herpes simplex, ya sea tipo 1 2,

expresan una protena viral no estructural
ICP-47, en las clulas infectadas, que se une
al sitio de unin del pptido del transportador
asociado con la presentacin antignica TAP
e impide que los pptidos virales citoslicos
se unan al TAP y sean transportados al retculo endoplsmico para unirse al MHC clase I
(ver captulo 9).
c) La protena E3 de algunos Adenovirus (19
kDa) se une y retiene a los MHC clase I en el
retculo endoplsmico.
d) La protena US3 (codificada por un gen localizado en la secuencia nica 3) del
Citomegalovirus (CMV) humano es capaz de
secuestrar molculas de MHC clase I en el
retculo endoplsmico y una protena del
CMV murino retiene MHC clase I en el cis
Golgi.
e) Las protenas US2 y US11 del CMV se unen
a molculas de MHC clase I en el retculo
endoplsmico y las llevan o descargan en el
citosol, donde no pueden unirse a los pptidos
de presentacin y son degradadas.
f) Las protenas Vpu y Nef del virus de la
inmunodeficiencia humana tambin inhiben
la expresin de molculas MHC clase I en
3.3.3. Interaccin con componentes del sistema

inmune
Ciertos virus como Epstein Barr infectan a
clulas del sistema inmune como son los LB. Por
otra parte, VIH infecta LT CD4+ y otros virus infectan secundariamente a otras clulas del sistema inmune incluyendo macrfagos. La infeccin
de las clulas del sistema inmune por estos virus
provoca un desbalance que conduce a formas de
evasin de la respuesta inmune antiviral.
3.3.4. Interferencia con la presentacin
antignica
La consecuencia del bloqueo de MHC clase

I y su asociacin con los pptidos de presentacin
en todos estos casos es que las clulas infectadas
muestran una reducida expresin de molculas
estables de MHC clase I en la superficie celular y
no presentan los pptidos virales para el reconocimiento y accin citoltica de los linfocitos T
CD8+. Sin embargo, es difcil de demostrar que
estos genes virales que codifican para las protenas que inhiben la presentacin de MHC clase I
son genes de virulencia o patogenicidad de dichos
virus.
Un ejemplo de esta compleja interaccin es
la adaptacin del sistema inmune de los mamferos para reconocer clulas deficientes en MHC
clase I, de esta manera los virus tratan de evadir
la respuesta inmune de los LTc inhibiendo MHC
clase I, pero los linfocitos NK han desarrollado
la capacidad para responder ante la ausencia de
MHC clase I en las clulas infectadas por virus.
El resultado de este continuo evolutivo determina si los virus o sus huspedes logran el control
celular.
Existen ciertos virus que durante la infeccin

viral expresan protenas que interfieren con la presentacin antignica, especialmente la relacionada con los MHC, que es fundamental en el reconocimiento y destruccin de la clula infectada
por los LT.
Varios virus son capaces de inhibir la presentacin de sus propios antgenos a los linfocitos
T citotxicos. Estos linfocitos CD8+ con actividad citoltica restringida a MHC clase I, constituyen el principal mecanismo de defensa contra las
infecciones virales a nivel celular. Si un virus es
capaz de expresar funciones inhibitorias para los
MHC clase I o su presentacin antignica, se har
indetectable para los linfocitos T y podr permanecer y replicarse en las clulas infectadas. Cada
una de las etapas de la presentacin antignica
puede ser inhibida por productos virales:
a)
La transcripcin de los genes de MHC clase I

es inhibida por la protena E1A de cepas
patognicas de ciertos Adenovirus.
565
Sin ttulo-2
565
5/26/06, 10:26 AM

Debido a la homologa que poseen ciertos
genes y protenas virales con genes y protenas
celulares, estas protenas virales pueden interactuar
con elementos de la respuesta inmune bloqueando su efectividad y permitiendo la evasin y muchas veces provocando enfermedad. Ejemplos son
la modulacin de la presentacin y reconocimiento
en el caso de la protena viral CMV que se une a
la beta 2 microglobulina por poseer un dominio
homlogo al MHC.
3.3.6. Inmunosupresin e infeccin viral
Algunos virus infectan clulas del sistema inmune, impidiendo su funcin y dando como resultado la inhibicin de la respuesta inmune especfica. El ejemplo ms representativo son las infecciones por VIH, en las que se produce severa
inmunodeficiencia por destruccin de las clulas
CD4+ infectadas, lo que se manifiesta clnicamente en el sndrome de la inmunodeficiencia
humana (SIDA). Tambin se ha descrito
inmunosupresin en infecciones virus EpsteinBarr, en las que la expresin de un gen viral homlogo al gen celular que codifica para la IL-10,
sera responsable de los efectos inhibitorios de la
respuesta inmune, los que son similares a los de
esta citoquina.
LECTURAS SUGERIDAS
Abbas, A. K.; Liehtman, A.H.; Pober, J. S.,
Cellular and molecular Immunology, Chapter
15, Editorial W.B. SAUNDERS, 2001.
Dietz, M., Viral Cytokines, The Oncologist 5:
77-80, 2000.
Gianani, R., Savetnik, N., Viruses, Cytokines,
Antigens and autoimmunity, Proc. Natl. Acad.
Sci., U.S.A.; 93:2257-2259, 1996.
Roitt, I.; Brostoff, J.; Male, D., Inmunologa,
Captulo 16: Inmunidad frente a virus, bacterias
y hongos, Tercera edicin, 1991.
Stites, D.P., Abba, L.T., Basic and Clinical
Immunology, Chapter 50, Sptima edicin, 1991.
566
Sin ttulo-2
566
5/26/06, 10:26 AM

Captulo 35
INMUNIDAD FRENTE A PARSITOS
Ulises Vergara C. y Jorge Gonzlez C.
1. Introduccin
2. Respuesta inmune frente a protozoos
2.1. Desarrollo de inmunidad protectora
2.2. Activacin de macrfagos infectados
2.3. Activacin de linfocitos T CD8+
2.4. Rol de los anticuerpos en el control de protozoos
3. Respuesta inmune frente a nemtodos intestinales
3.1. Aspectos generales de la respuesta inmune
3.1.1. Enterocitos
3.1.3. Linfocitos
3.2. Respuesta Th2 y proteccin

inmunolgica
3.2.1. Mecanismos efectores y resistencia a la infeccin
3.3. Respuesta Th1 y susceptibilidad
a la infeccin
4. Respuesta inmune frente a tremtodos intestinales
4.1. Inmunidad protectora frente a
Schistosoma
4.1.1. Eosinfilos
4.1.2. Macrfagos
4.2. Inmunidad en la rata
4.3. Inmunidad en el ratn
4.4. Interferencia con la inmunidad
567
Sin ttulo-2
567
5/26/06, 10:26 AM
568
Sin ttulo-2
568
5/26/06, 10:26 AM
RESUMEN
En este captulo se describe los mecanismos efectores asociados con resistencia a un grupo
selecto de parsitos y se ha enfocado particularmente en parsitos que ilustran la diversidad de
los mecanismos efectores que contribuyen a inmunidad protectora. La respuesta inmune requerida para eliminar protozoos intracelulares es bastante distinta de aqulla requerida para controlar nemtodos intestinales y pueden dividirse en respuestas tipo Th1 y Th2. Sin embargo, mientras la respuesta de tipo Th1 controla las infecciones por protozoos intracelulares, la respuesta
Th2 controla infecciones por nemtodos intestinales.
pular en su propio beneficio, la respuesta inmune

del hospedero. Un individuo infectado, debe a su
vez poner en marcha mecanismos de regulacin
de la respuesta inmune que le permitan controlar
el curso de la infeccin y /o de la enfermedad y
limitar el eventual dao de una respuesta
incontrolada.
Como consecuencia de las complejas
interacciones hospedero-parsito, las infecciones
parasitarias pueden convertirse en cuadros crnicos y progresivos que debilitan de manera severa
la salud del hospedero, o en infecciones latentes
que, luego de la resolucin de la fase aguda, persisten durante la vida del individuo sin causar sntomas o signos clnicos de enfermedad (a menos
que el hospedero haga un cuadro de inmunodeficiencia o inmunodepresin).
El conocimiento, tanto de las caractersticas
del ciclo de vida y la variabilidad biolgica del
parsito, como de sus distintas formas de
interaccin con el organismo hospedador, son
esenciales para establecer mtodos de control y
eventual erradicacin de las enfermedades parasitarias. Sin embargo cualquier intento de control
y eventual erradicacin de las infecciones de origen parasitario, deber siempre considerar la utilizacin de estrategias mltiples y complementarias como:
1. INTRODUCCIN
Los organismos cuya forma de vida depende
de la colonizacin de otro individuo, deben vencer diversos obstculos para lograr su objetivo de
instalacin en un rgano o tejido que le proporcione las condiciones necesarias para reproducirse y completar su ciclo biolgico. De esta manera, la evolucin del parasitismo como forma de
vida, ha requerido el desarrollo de una gran variedad de adaptaciones biolgicas que permiten que
la fisiologa del parsito coincida, al menos en
parte, con la fisiologa del hospedero del cual obtendr los metabolitos que le son indispensables
para completar su ciclo biolgico. As, los parsitos han desarrollado nuevas y complejas vas
metablicas pero al mismo tiempo han perdido
otras y, aunque en muchos casos se desconocen
las ventajas o desventajas de estos cambios, su
conocimiento es fundamental para el desarrollo
de nuevas estrategias quimioteraputicas que permitan bloquear el desarrollo del parsito.
La sobrevida de un parsito depende de un
delicado equilibrio entre sus propiedades
inmunognicas y los mecanismos efectores de respuesta inmune del hospedero. Un parsito exitoso
debe ser inmunognico y, por lo tanto, capaz de
inducir una respuesta inmune que mantenga el nmero de parsitos en niveles compatibles con la
sobrevida del hospedero Al mismo tiempo, el parsito debe ser capaz de evadir los mecanismos de
defensa del individuo colonizado y, durante los
millones de aos de coevolucin con el sistema
inmune, los parsitos han desarrollado diversas
estrategias para evadir, desviar, suprimir o mani-
1. Reduccin o eliminacin del agente parasitario por farmacoterapia

2. Reduccin de la contaminacin ambiental mediante educacin sanitaria y mejoramiento de
la vivienda y de las condiciones nutricionales
y sanitarias de la poblacin
569
Sin ttulo-2
569
5/26/06, 10:26 AM
3. Reduccin de los hospederos intermediarios y

modificacin de su hbitat
4. Reduccin de la exposicin al riesgo de contaminacin o infeccin
5. Desarrollo de estrategias inmunolgicas que
permitan controlar el curso de la infeccin
y/o de la enfermedad.
2. RESPUESTA
PROTOZOOS
INMUNE FRENTE A
Aunque Leishmania, Trypanosoma cruzi,

Toxoplasma gondii y Cryptosporidium, son todos
protozoos intracelulares, ellos difieren substancialmente en sus ciclos de vida.
Leishmania existe en dos estadios distintos,
los promastigotes metacclicos y los amastigotes.
Los promastigotes son formas alargadas, flageladas
y extracelulares que se multiplican en el intestino
de las hembras del insecto vector (de los gneros
Phlebotomus y Lutzomya) para migrar luego a la
parte anterior del insecto, donde permanecern hasta
ser inoculados en un nuevo hospedero vertebrado.
Una vez inoculados en un hospedero mamfero, los
promastigotes invaden rpidamente macrfagos y
otras clulas del linaje monocito-macrofgico,
transformndose en amastigotes ovalados e inmviles, que se multiplican en el citoplasma de la clula infectada (figura 35-1)
Los mecanismos efectores innatos y adquiridos, necesarios para la proteccin inmunolgica

contra cualquier infeccin parasitaria, son bastante
variados y dependen de las caractersticas especficas de cada parsito, como son su forma de entrada y localizacin en el hospedero, su ciclo biolgico, los estadios infectantes y las diferentes
estrategias de evasin de la respuesta inmune.
La respuesta inmune innata, que reconoce patrones moleculares parsito-especficos, rara vez
proporciona proteccin contra la infeccin pero
desempea un importante papel, tanto en la puesta en marcha de seales tempranas de alarma que
alertan al hospedero respecto de la presencia de
un organismo invasor, como en el subsecuente
desarrollo y regulacin de una respuesta inmune
especfica. La regulacin de los distintos mecanismos efectores especficos permitir que ellos
puedan luego operar simultneamente en el curso
de la infeccin o de manera restringida en funcin
de las diferentes fases del ciclo de vida del parsito, de sus distintas formas infectantes o de sus diferentes localizaciones tisulares.
Entender la complejidad de los mecanismos
efectores que se ponen en marcha durante una infeccin parasitaria y determinar cul de ellos resulta crucial para el control de la infeccin, es
fundamental para el desarrollo de terapias eficaces que conduzcan al control de las enfermedades parasitarias.
En el presente captulo, se describen los aspectos ms relevantes de la respuesta inmune frente a protozoos y helmintos parsitos. Se analiza
primero la respuesta inmune frente a protozoos
intracelulares como Leishmania, Toxoplasma, y
Trypanosoma cruzi, que aunque pueden encontrarse fuera de las clulas, desarrollan una parte sustancial de su vida dentro de las clulas del hospedero mamfero, y gatillan una respuesta inmune
polarizada de tipo Th1, que resulta crucial para el
control de la infeccin. Se discute luego la respuesta inmune frente a la infeccin por helmintos
y el repertorio de mecanismos efectores necesarios para la eliminacin de estos parsitos
multicelulares.
Figura 35-1. Ciclo biolgico de Leishmania. Leishmania es un

protozoo parsito, que tiene un ciclo de vida dimrfico que incluye
promastigotes flagelados y extracelulares , que se multiplican en el
intestino del insecto vector (de los gneros Phlebotomus y Lutzomya)
y amastigotes inmviles eintracelulares que residen y se multiplican en macrfagos y otras clulas del hospedero mamfero.
570
Sin ttulo-2
570
5/26/06, 10:26 AM
En Trypanosoma cruzi, las formas infectantes

(tripomastigotes metacclicos) son transmitidas
por las deyecciones de insectos vectores
reduviideos (Triatoma, Rhodnius y Panstrongylus
y pueden introducirse al organismo a travs del
orificio de la picadura, heridas o escoriaciones de
la piel o atravesando directamente la mucosa ocular, nasal o bucal y de manera anloga a
Leishmania, los parsitos invaden macrfagos
transformndose en amastigotes intracelulares que
se multiplican activamente por fisin binaria. Sin
embargo, a diferencia de Leishmania, T. cruzi
pueden invadir todas las clulas nucleadas y despus de varios ciclos de divisin intracelular, los
organismos se transforman en tripomastigotes
flagelados, que abandonan las clulas infectadas
y circulan libres en la sangre. Los tripomastigotes
pueden reinvadir otras clulas, repitiendo as varias veces el ciclo de divisin intracelular (figura
35-2).
Toxoplasma gondii, tiene por su parte un ciclo de vida ms complejo que Leishmania o T.
cruzi. En el citoplasma de clulas del epitelio intestinal del gato, los parsitos desarrollan procesos de reproduccin sexual que culminan con la
produccin de ooquistes, que se vuelven
infectivos despus ser expulsados al medio con
las deposiciones del hospedero. Toxoplasma puede multiplicarse sexualmente slo en el intestino
del gato y otros felinos, pero sus ooquistes pueden infectar una gran variedad de especies
vertebradas en las cuales los parsitos invaden el
epitelio intestinal y se transforman en taquizoitos,
que entran en rpida multiplicacin. Los parsitos pueden entonces diseminarse siendo capaces
de invadir cualquier clula nucleada del organismo. Una vez que una respuesta inmune eficaz se
ha establecido, un estadio parasitario de lenta divisin, el bradizoto, puede sobrevivir dentro de
los quistes. As, la infeccin por Toxoplasma presenta a menudo una fase aguda, asociada con rpida multiplicacin de taquizotos, y una fase crnica, donde quistes que contienen bradizotos persisten en el husped, generalmente de por vida (figura 35-3).
Cryptosporidium sp., infecta a diferentes especies de animales incluyendo el hombre, que
adquiere la infeccin al ingerir alimentos o aguas
contaminadas con ooquistes del parsito. A nivel
del epitelio intestinal los parsitos desarrollan
procesos de reproduccin asexual y luego de reproduccin sexual que culminan con la produccin y liberacin de ooquistes maduros que se
Figura 35-2. Ciclo de vida de Trypanosoma cruzi. En el intestino de insectos reduviideos (Triatoma, Rhodnius y
Panstrongylus), el parsito se multiplica en forma de
epimastigotes que dan luego origen a numerosos
tripomastigotes metacclicos que constituyen las formas
infectantes para el hospedero vertebrado. Los tripomastigotes
son transmitidos por las deyecciones del insecto vector y
pueden introducirse en el hospedero a travs del orificio de la
picadura, a travs de heridas y escoriaciones en la piel o directamente a travs de la mucosa ocular, nasal o bucal. Los
parsitos invaden macrfagos y clulas de diversos tejidos,
transformndose en amastigotes intracelulares que se multiplican activamente para dar luego origen a tripomastigotes
flagelados que abandonan la clula infectada y pueden circular libres en la sangre para invadir nuevas clulas.
eliminan con las deposiciones del hospedero infectado.

Adems de las obvias diferencias en sus ciclos de vida, estos parsitos utilizan diferentes
estrategias para sobrevivir dentro de las clulas
del hospedero. Por ejemplo, T. cruzi secreta una
hemolisina, que asociada a la accin de una
transialidasa, facilita el escape del parsito desde
el fagolisosoma al citoplasma, evitando as el
ambiente txico producto de la fusin de lisosomas
571
Sin ttulo-2
571
5/26/06, 10:26 AM
Figura 35-3. Ciclo biolgico de Toxoplasma gondii. En las clulas epiteliales del intestino del hospedero definitivo, las formas
infectantes (quistes, ooquistes y taquizoitos) se multiplican primero asexualmente por esquizogonia y luego sexualmente por
esporogonia, para generar ooquistes que son eliminados con las heces del gato. El hombre y diversos mamferos ingieren el
parsito por va oral y a partir de ooqistes se generan taquizoitos que invaden las clulas del hospedero para reproducirse y generar
numerosos taquizoitos o quistes con bradizoitos.
al fagosoma. Toxoplasma crea su propia vacuola

parasitfora, que impide la fusin con lisosomas.
En contraste, Leishmania ha desarrollado mecanismos de resistencia que le permiten sobrevivir
incluso despus que el fagosoma se ha fusionado
con los lisosomas. Por su parte, Cryptosporidium,
a diferencia de otros patgenos intracelulares no
se localiza en el citoplasma, puesto que invade
las clulas localizndose justo entre la membrana
celular y el citoplasma.
Las consecuencias inmunolgicas de estas diferencias se traducen en que protenas de T. cruzi
y Toxoplasma parecen entrar ms rpidamente en
la va de presentacin antignica por molculas
MHC de clase I, generando as una respuesta inmune protectora que involucra la participacin de
linfocitos T citotxicos. En la leishmaniasis, tambin opera la va de presentacin MHC de clase
I, sin embargo, no est claramente definido el rol
que clulas T CD8+ parsito-especficas, juegan

en la proteccin contra la infeccin por
Leishmania. En el caso de Cryptosporidium, la
respuesta inmune del hospedero no es del todo
conocida, pero parece involucrar mecanismos de
presentacin antignica tanto en el contexto de
molculas MHC de clase I como de clase II. Por
ltimo es necesario sealar que la resistencia contra todas estas infecciones parasitarias, requiere
la participacin de clulas T CD4+.
2.1. Desarrollo de inmunidad protectora
La IL-12 juega un papel central en el desarrollo de inmunidad protectora contra estos
protozoos intracelulares, promoviendo la polarizacin hacia una respuesta Th1 y la produccin
de IL-2 e IFN-. Los macrfagos y las clulas
dendrticas (CDs) son las principales fuentes de
572
Sin ttulo-2
572
5/26/06, 10:26 AM
IL-12, y se piensa que la infeccin o la exposicin

a productos moleculares de los parsitos inducen
la produccin de estas citoquinas. Sin embargo,
la infeccin in vitro de macrfagos con
promastigotes metacclicos o con amastigotes de
Leishmania no induce la produccin de IL-12,
aunque DCs s puede producir IL-12 despus de
la infeccin con el parsito. Es ms, la infeccin
de macrfagos puede suprimir la produccin de
IL-12 estimulada por algunos productos
moleculares de Leishmania. La bsqueda de una
explicacin para este fenmeno permiti establecer que la unin de CD40 con linfocitos T que
expresan el ligando CD40L, constituye una seal
crtica de coestimulacin que conduce a la produccin de IL-12, como lo sugiere el hallazgo que
ratones deficientes en CD40 o CD40L son susceptibles a infeccin y que esta susceptibilidad
puede ser revertida mediante el tratamiento con
IL-12.
Ms recientemente, otra va crtica que lleva
a la produccin IL-12, parece involucrar la participacin de quimioquinas. As, se ha observado
que lisados de Toxoplasma son capaces de estimular la produccin de MIPla y MIP1b que constituyen ligandos para el receptor de quimioquinas
CCR5 y que la unin de CCR5 a clulas
dendrticas, conduce a la produccin de IL-12. La
importancia de esta va de activacin en iniciar el
desarrollo de una respuesta inmune protectora fue
demostrada por la observacin que ratones deficientes en CCR5 son ms susceptibles a infeccin por Toxoplasma gondii.
Cryptosporidium parvum, causa inflamacin
de la mucosa intestinal con numerosos neutrfilos
intraepiteliales e importantes infiltrados de
neutrfilos y clulas mononucleares en la lmina
propia. Las clulas epiteliales humanas son capaces de secretar y expresar IL-8 y la quimioquina
del tipo CXC denominada GRO- (Growthrelated oncogene ) y se ha observado que en la
infeccin por C. parvum la respuesta de
quimioquina CXC es ms tarda que la observada
en la infeccin con otros protozoos intestinales y
no parece participar como un mecanismo efector
sino ms bien en el reclutamiento y activacin de
diversas poblaciones celulares.
De igual manera, la actividad de quimioquinas del tipo CC parece ser importante para el
hospedero, en las infecciones por T. cruzi. As,
estudios in vitro han mostrado que quimioquinas
como RANTES, MIP-1 y MIP-1 aumentan la
captura y destruccin intracelular de tripomasti-
gotes por macrfagos humanos. Resultados similares se han obtenido, tanto in vivo como in vitro
utilizando el modelo murino. Las quimioquinas
parecen inducir actividad tripanocida mediante
la produccin de xido ntrico (NO).
Considerando que todos estos parsitos
intracelulares pueden infectar clulas presentadoras de antgeno, la activacin de clulas de T CD4
+ pueden explicarse por interaccin con macrfagos o CDs que han sido infectadas o que han
tomado contacto con parsitos muertos. Las
quimioquinas parecen jugar un papel importante
en la migracin de CDs que han capturado parsitos o antgenos parasitarios en los sitios perifricos
de infeccin y los llevan a los ganglios linfticos
para su presentacin a linfocitos T CD4+. As, la
protena quimiotctica MCP-1 (Monocyte
Chemoattractant Protein-1) se produce tempranamente en la infeccin por Leishmania y parece
contribuir a la migracin de CDs, puesto que en
ratones deficientes en CCR2, la migracin de CDs
se encuentra afectada y este deterioro contribuye
a aumentar la susceptibilidad de los ratones a la
infeccin por Leishmania major. Por otro lado,
luego de una inyeccin intravenosa con antgeno
de Toxoplasma, las CDs se movilizan desde la
pulpa roja y las zonas marginales del bazo a las
regiones de clulas T de los linfondulos
periarteriales, y esta migracin depende de la expresin del receptor de quimioquinas CCR5.
Existe consenso que en las infecciones por
Cryptosporidium, los mecanismos responsables de
la eliminacin del parsito del tracto intestinal
requieren la participacin IFN- puesto que ratones knockout para IFN- desarrollan un parasitismo masivo de todo el intestino y mueren en dos
a tres semanas luego de una infeccin experimental con C. parvum mientras los controles se muestran libres de la infeccin hasta por treinta das.
Adems, distintas cepas de ratones presentan diferencias significativas en la sobrevida a la infeccin con el parsito y estas diferencias se asocian
a su habilidad en producir IFN-. Estudios utilizando ratones con insuficiencia severa combinada (ratones SCID), mostraron que estos ratones
permanecen infectados por largo tiempo sin muestras de enfermedad, mientras los ejemplares incapaces de producir IFN- mueren rpidamente.
De igual manera, clulas T CD4+ participan en la
resolucin tanto de las formas agudas como crnicas de la infeccin en ratones, puesto que la inmunidad es dependiente del aumento en el nmero de clulas T CD4+ en la poblacin de linfocitos
573
Sin ttulo-2
573
5/26/06, 10:26 AM
intraepiteliales del intestino y la subsecuente generacin de IFN-.
depletados de IFN- por administracin de anticuerpo monoclonal anti-IFN- o lratones

knockout para IFN- son altamente susceptibles a la infeccin con Leishmania, Toxoplasma,
y T. cruzi.
La importancia de TNF en el control de la
infeccin por parsitos intracelulares, se estableci al observar que ratones deficientes en el receptor de TNF (ratones TNFR), son altamente
susceptibles a la infeccin con Leishmania o
Toxoplasma. Sin embargo, ratones knockout
TNFRp55 y TNFRp55p75 infectados con L.
major son capaces de controlar y eliminar la mayora de los parsitos, sugiriendo que seales accesorias como la interaccin CD40/CD40L, podran compensar la ausencia de TNF. Un papel
crtico para TNF en el control de parsitos
intracelulares se observ luego de la infeccin
con L donovani de ratones deficientes en IFN-,
los cuales resultaron inicialmente mucho ms susceptibles a la infeccin con el parsito. Sin embargo, despus de 8 semanas de infeccin, la
replicacin del parsito fue parcialmente controlada. En estos ratones knockout para IFN-, el
control temprano de la infeccin, puede ser inducido mediante la administracin de IL-12, pero
no mediante la administracin de IL-12 ms
anticuerpos anti-TNF.
Mientras la mayora de los estudios de parsitos intracelulares se han centrado en los
macrfagos, es evidente que Toxoplasma y T. cruzi
infectan adems otras clulas distintas de los
fagocitos, pero que igualmente requieren eliminar los parsitos para controlar la infeccin. Se ha
sugerido que xido ntrico proveniente de
macrfagos activados situados en la vecindad de
las clulas infectadas, puede matar parsitos en
clulas no hematopoyticas. La creacin de quimeras de mdula sea entre ratones normales y
ratones deficientes en el receptor para IFN- (IFNR), permiti establecer que la resistencia a la infeccin con Toxoplasma, es dependiente de la expresin del receptor para IFN-, tanto en clulas
hematopoyticas como en clulas no hematopoyticas. Sin embargo, el mecanismo mediante el
cual IFN- ejerce sus efectos en clulas no
hematopoyticas no est claro. Se ha mostrado que
IFN- puede aumentar la actividad de la
dioxigenasa de indoleamina en fibroblastos infectados con Toxoplasma, lo que conduce a la degradacin de triptofano necesario para la replicacin
de los parsitos. No obstante, esta va no opera en
macrfagos humanos ni tampoco en la infeccin
2.2. Activacin de macrfagos infectados

La actividad microbicida de macrfagos es
un mecanismo efector primario que lleva al control de patgenos intracelulares. Los macrfagos
activados muestran cambios importantes que incluyen el aumento en la expresin de molculas
MHC de clase II, aumento en la actividad
fagoctica y generacin de radicales libres altamente txicos. Mientras los reactivos intermediarios de oxgenos (ROls) y los reactivos intermediarios de nitrgeno (RNIs), son efectivos agentes microbicidas, el xido ntrico parece particularmente importante en el control de parsitos
intracelulares.
El xido ntrico se genera a partir L-arginina
en una reaccin catalizada por la forma inducible
de la enzima xido ntrico sintetasa (iNOS). Ratones deficientes en la enzima (iNOS - /-) son altamente susceptibles a la infeccin con L. mayor
o T. cruzi. Ms an, una comparacin directa de
la importancia relativa de ROIs y RNIs en el control de la infeccin por L. donovani, mostr que
aunque ROIs puede contribuir al control del parsito en etapas tempranas de la infeccin, xido
ntrico es la molcula efectora de central importancia en el control de L. donovani.
En contraste, la infeccin de ratones iNOS / - por Toxoplasma, muestra un cuadro ms complejo, dado que la resistencia a estas infecciones
se asocia tanto con mecanismos iNOS dependientes como con mecanismos iNOS independientes.
As, los ratones knockout para iNOS son capaces de controlar Toxoplasma durante la fase aguda de la infeccin, pero mueren durante la fase
crnica. Sin embargo, luego de la vacunacin con
cepas avirulentas de Toxoplasma, los ratones
knockout para iNOS resultan tan resistentes
como los ratones normales en el control de la infeccin con formas virulentas del parsito. La
importancia de xido ntrico en la resistencia a la
infeccin con protozoos intracelulares es, por lo
tanto, relativa y depende del parsito intracelular
que se examina y de la fase de la infeccin que se
analiza.
El modelo actualmente aceptado para explicar la activacin de macrfagos, sugiere que IFN es una citoquina fundamental en la activacin
de estas clulas, an cuando otras citoquinas como
TNF pueden facilitar este proceso. Ratones
574
Sin ttulo-2
574
5/26/06, 10:26 AM
por T. cruzi. As, los mecanismos independientes

de iNOS que operan en el control de Toxoplasma
o T. cruzi, permanecen sin definir. Sin embargo,
algunas respuestas a este problema podran provenir de los estudios con ratones carentes de protenas ligadoras de GTP (IGTP) que es regulada
por IFN-. En efecto, ratones que no poseen esta
molcula pueden controlar infecciones por
patgenos intracelulares como Listeria
monocytogenes y Citomegalovirus, pero son incapaces de controlar infecciones por Toxoplasma.
El papel que las clulas de T CD8+ juegan

en leishmaniasis es menos claro, puesto que ratones deficientes en clulas T CD8+ pueden resistir la infeccin primaria con L. mayor. Como
Leishmania reside dentro del fagolisosoma, podra predecirse que clulas de T CD8+ no se activan durante infeccin. Sin embargo, tanto en infecciones humanas como en infecciones experimentales, por Leishmania las clulas T CD8+
antgeno-especficas se encuentran aumentadas y
estudios in vitro muestran que clulas infectadas
pueden presentar antgenos a clulas de T CD8+.
La importancia de las clulas de T CD8+ en
leishmaniasis ha sido demostrada mediante estudios que indican que ellas contribuyen a la resistencia a la infeccin o el desafo secundario y a la
resistencia inducida por vacunacin. La manera
cmo las clulas de T CD8+ influencian la infeccin por Leishmania no est bien establecida. Sin
embargo, estudios in vitro indican que macrfagos
infectados no actan como blancos para el citolisis
por las clulas T CD8+, sugiriendo que su funcin protectora se asocia ms a la produccin IFN, en lugar de actuar como clulas citotxicas.
En Cryptosporidium spp el papel de las clulas T CD8+ no est claro, no obstante parecen
jugar algn papel en el control de la infeccin en
ratones.
2.3. Activacin de linfocitos T CD8+

La importancia de las clulas T CD8+ en la
resistencia a T. cruzi y Toxoplasma ha sido bien
establecida, observndose un aumento en la susceptibilidad a la infeccin en ratones deficientes
en clulas T CD8+.
Las clulas de T CD8+ reconocen antgenos
presentados en el contexto de molculas MHC de
clase I, lo que facilita la deteccin de infecciones
por patgenos intracelulares en cualquier clula
del organismo, aspecto que resulta particularmente
importante en el control de infecciones por T. cruzi
y Toxoplasma. Los linfocitos T CD8+ secretan
citoquinas como IFN- que activa macrfagos,
pero son tambin capaces de lisar clulas infectadas, mediante la liberacin de perforina. Ratones
knockout para perforina, muestran una significativa mayor susceptibilidad a la infeccin por
Toxoplasma durante la fase crnica de infeccin.
Sin embargo, los ratones deficientes en perforina,
pero vacunados con una cepa avirulenta de
Toxoplasma son tan resistentes como ratones controles, a la infeccin con cepas virulentas del parsito. Lo anterior hace pensar que las clulas T
citolticas pueden ser importantes para el control
de la fase crnica de toxoplasmosis (cuando los
quistes estn presentes en el cerebro), pero menos
importante durante la fase aguda, cuando los
taquizotos se multiplican rpidamente.
Un resultado diferente se observa en la infeccin con T. cruzi, donde se encontr que an
en las infecciones con cepas avirulentas, se requieren linfocitos T CD8+ para la proteccin contra el parsito. Sin embargo, ratones knockout
para perforina y granzima B, son tan resistentes a
la infeccin por T. cruzi, como los ratones controles, indicando que las clulas T CD8+ que protegen contra T. cruzi, no requieren de mecanismos de citotoxicidad que involucren perforina o
granzima B.
2.4. Rol de los anticuerpos en el control de

protozoos
La infeccin con T. cruzi, Toxoplasma, o
Leishmania se asocia a la produccin de
anticuerpos especficos que parecen tener una variedad de funciones, eventualmente involucradas
en el control de estos parsitos. Los anticuerpos
pueden, por ejemplo, unirse a las formas
infectantes que se movilizan de una clula a otra
o que circulan libremente circulan en la sangre.
Adems pueden neutralizar o modular la invasin
de nuevas clulas, de promover la fagocitosis de
estas formas parasitarias (opsonizacin), o bien
producir su lisis por activacin del sistema del
complemento y/o mediante mecanismos de
citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos
(ADCC). Mientras muchos estudios in vitro han
sugerido algn rol de los mecanismos efectores
que involucran la participacin de anticuerpos, su
importancia en el control de la infeccin, ha sido
ms difcil de establecer in vivo.
El uso de animales deficientes en clulas B
o en receptores Fc (ratones FcR), ha permitido
575
Sin ttulo-2
575
5/26/06, 10:26 AM
mostrar inequvocamente que clulas B y

anticuerpos son requeridos para la proteccin contra T. cruzi y Toxoplasma. As, ratones deficientes
en clulas B infectados con Toxoplasma, mueren
durante la fase crnica de infeccin, mostrando
un elevado nmero tanto de taquizoitos, como de
quistes en cerebro y pulmones. Los anticuerpos
no son, por lo tanto, necesarios para la proteccin
durante la fase aguda de la infeccin.
Ratones deficientes en linfocitos B, inoculados con Toxoplasma son mucho ms susceptibles
a la infeccin que los controles normales. No obstante, el uso de ratones deficientes en FcR y C5
ha permitido establecer que aunque clulas B son
esenciales para la resistencia a la infeccin por
Toxoplasma, ni la activacin de mecanismos
efectores Fc-dependientes o de lisis mediada
por complemento, son requeridos para el efecto
protector de los anticuerpos.
En la infeccin por T. cruzi, los ratones deficientes en linfocitos B sobreviven ms tiempo
que los ratones deficientes en clulas T CD4+ o
que los deficientes en clulas T CD8+. Sin embargo, los anticuerpos y particularmente aqullos
denominados anticuerpos lticos, parecen importantes en el control de la infeccin. Estos
anticuerpos, que estn presentes en el suero de
pacientes humanos, y en ratones crnicamente
infectados, corresponden a IgG de las subclases
IgG2a e IgG2b y son generalmente inducidos por
parsitos vivos pero no por aqullos que han sido
fijados o lisados. De esta forma, cuando
tripomastigotes que son habitualmente resistentes a la accin del complemento, se incuban con
suero de infectados crnicos que contiene
anticuerpos lticos, la IgG se une especficamente
a los parsitos hacindolos sensibles a la lisis por
complemento.
Estudios recientes utilizando ratones deficientes en linfocitos B, indican que estas clulas no
participan en la susceptibilidad o resistencia a la
infeccin con L. mayor. Sin embargo, estudios con
L. amazonensis indican que en ausencia de clulas
de B o de FcR, la infeccin por L. amazonensis es
menos severa. Estos resultados sugieren que la
unin de anticuerpos a los FcR aumenta la captura
y sobrevida de los parsitos o que los FcR activan
seales de alarma que modulan la respuesta del
hospedero frente a la infeccin. Por otro lado, se ha
observado que la activacin va FcR conduce a un
aumento en la produccin de IL-10, la cual podra
regular negativamente el desarrollo de una respuesta
inmune protectora.
En infecciones por Cryptosporidium spp., no

se han observado diferencias entre ratones normales y aquellos depletados de clulas B, sugiriendo que la sntesis de anticuerpos no cumple
un rol en el control de la infeccin.
3. RESPUESTA INMUNE FRENTE A

NEMTODOS INTESTINALES
El intestino de vertebrados es, para los parsitos nemtodos, uno de los principales sitios
ancestrales de invasin, dado que en el curso de
la evolucin, la ingestin accidental de vermes o
de sus formas infectantes, result un mecanismo
simple de acceso a los hospederos vertebrados. La
sobrevida de los parsitos en el intestino fue favorecida por la existencia de una oferta nutritiva ilimitada, mientras el desarrollo de su ciclo evolutivo result facilitado por la posibilidad de salida y
escape fcil desde el hospedero. De esta manera,
an cuando diversos helmintos pueden invadir
distintos rganos y tejidos, la mayor parte de ellos
residen en el intestino. El intestino se ha mantenido como el sitio ideal para el desarrollo de los
parsitos adultos, an cuando el ingreso al hospedero se produzca a travs de la piel y complejos
mecanismos de migracin deban ponerse en marcha antes de llegar al intestino.
Muchos estudios han demostrado que el intestino no es un simple hbitat para los helmintos.
Nemtodos grandes como Ascaris lumbricoides
viven en el lumen, mientras especies de menor
tamao como las uncinarias y Trichostrogylus,
entran en estrecha relacin con la mucosa y por
ello se encuentran en condiciones microambientales muy diferentes. Mientras algunas especies
viven en la mucosa durante la mayor parte de su
desarrollo y slo emergen al lumen como formas
maduras, otras permanecen en la mucosa durante
todo su ciclo de vida intestinal.
Los nemtodos presentan problemas particulares para el desarrollo de una respuesta inmune
en el hospedero. Su cutcula es relativamente gruesa y sus movimientos son muy activos y, aunque
no son inertes desde el punto de vista inmunolgico ni metablico, su cutcula los protege de la
respuesta inmune y slo pueden ser atacados por
los orificios naturales. La cutcula es altamente
inmunognica y puede ser daada por mecanismos efectores de la respuesta inmune, sin embargo no est claro si esta respuesta desempea algn papel importante en la inmunidad contra pa-
576
Sin ttulo-2
576
5/26/06, 10:26 AM
rsitos intestinales. Adems, es muy probable el

desarrollo de una respuesta efectora contra
antgenos secretados o excretados por los
helmintos.
En humanos, se conoce poco respecto a la
respuesta frente a helmintos. Datos epidemiolgicos sugieren la existencia de inmunidad adquirida frente a la infeccin; no obstante algunos
nemtodos como Trichuris persisten por largo
tiempo y la reinfeccin es muy frecuente.
Sin embargo, los nemtodos gastrointestinales constituyen uno de los grupos parasitarios
ms exitosos, estimndose que en la poblacin humana actual una de cada cinco personas alberga,
a lo menos, una de estas especies. La infeccin
por estos patgenos generalmente no es fatal, pero
constituyen cuadros insidiosos, a menudo con un
grado alto de morbilidad, particularmente en nios. Un rasgo particularmente importante de este
tipo de infecciones parasitarias (y que la distingue de otras infecciones) es que el grado de infeccin o la carga parasitaria del hospedero, es un
reflejo del nmero de eventos de invasin. Los
nemtodos intestinales, generalmente no se multiplican dentro del hospedero y la carga parasitaria se adquiere por eventos de infeccin mltiples,
y no a travs de un nico contacto con las formas
infectantes.
La respuesta inmune frente a helmintos difiere claramente de aqulla inducida por protozoos.
Los helmintos son organismos pluricelulares de
mayor tamao, que no se replican dentro del hospedero. La diferencia en tamao limita los mecanismos efectores de respuesta inmune y la carencia de replicacin tiene repercusiones importantes en las estrategias de sobrevida desarrolladas
tanto por el hospedero como por el parsito.
Debido a la dificultad para estudiar la infeccin en condiciones naturales, la mayor parte de
nuestro conocimiento actual sobre la infeccin por
nemtodos intestinales proviene de las investigaciones realizadas en roedores de laboratorio infectados experimentalmente con parsitos tan diversos como Nippostrongy1us brasiliensis, Trichinella
spiralis, Trichuris muris, Heligmosomoides, y
Polygyrus Strongyloides spp. La mayor parte del
trabajo se ha concentrado en modelos en los que
luego de la infeccin primaria, ocurre expulsin
natural de los parsitos del tracto gastrointestinal
(N. brasiliensis de T. spiralis y Strongyloides), aunque interesantes resultados se estn generando en
sistemas en los cuales puede ocurrir una infeccin
crnica natural (T. muris y de H. polygyrus).
3.1. Aspectos generales de la respuesta inmune

La respuesta inmune frente a nemtodos intestinales, tiene relacin inevitable con las condiciones y arquitectura particular del sistema digestivo. De esta manera en la generacin de esta respuesta participan distintas clulas y mecanismos
efectores.
3.1.1. Enterocitos
El intestino es la principal va de entrada de
antgenos al organismo, no slo de aquellos derivados de eventuales parsitos, sino tambin los
que son aportados por los alimentos, los contaminantes ambientales y la flora bacteriana. Los
enterocitos que forman el epitelio de la mucosa
intestinal, constituyen una barrera fsica que adems puede capturar antgenos desde el lumen. Este
proceso es an ms activo y eficiente cuando como
producto de una inflamacin aumenta la permeabilidad de la capa epitelial. Citoquinas liberadas
durante la inflamacin inducen un aumento en la
expresin de molculas MHC en los enterocitos,
permitiendo que puedan de esta manera participar como clulas presentadoras de antgeno. La
captura y transcitosis de antgenos es adems claramente facilitada por la existencia de clulas M,
asociadas al epitelio que tapiza las placas de Payer.
Los antgenos tambin pueden ser capturados
mediante mecanismos que involucran la participacin de anticuerpos presentes en la superficie
de la mucosa.
El principal isotipo de anticuerpos que se encuentran en la mucosa intestinal corresponde a IgA
dimrica, la cual puede ser secretada a travs de
los enterocitos o junto a la bilis luego de pasar por
el epitelio del ducto biliar como ocurre en roedores. Las molculas de IgA permanecen intactas y
actan a nivel del lumen intestinal debido a la
presencia de la porcin secretora que la protege
de la degradacin por proteasas intestinales. La
IgM es tambin transportada a travs del epitelio
y permanece activa en el lumen intestinal. Por otra
parte, IgG es producida localmente por clulas
plasmticas localizadas en la lmina propia. A diferencia de IgA, los anticuerpos IgM e IgG son
rpidamente degradados por proteasas, no obstante
sus fragmentos Fab pueden permanecer funcionales por algn tiempo.
577
Sin ttulo-2
577
5/26/06, 10:26 AM
activacin de linfocitos Th2, y mastocitos y la produccin de citoquinas como IL-4, IL-9, IL-10, IL13 e IL-18. Ratones knockout para IL-18 son
altamente resistentes a la infeccin con T. spiralis,
expulsan ms rpidamente los gusanos adultos y
desarrollan niveles ms bajos de enquistamiento
larval en el msculo esqueltico. La expulsin de
los gusanos se asocia a un alto nmero de
mastocitos en la mucosa intestinal y secrecin
aumentada de IL-10 e IL-13
Ratones knockout para IL-4 muestran slo
pequeas alteraciones en la cintica de expulsin
de T. spiralis, en comparacin con los ratones normales no deficientes, sugiriendo que la expresin
de IL-4 no es esencial para la expulsin de los
gusanos.
No obstante, se ha demostrado que la IL-13
3.1.3. Linfocitos
Una cantidad apreciable de linfocitos T y B
estn presentes en la lmina propia del intestino.
Las clulas B contribuyen fundamentalmente a la
generacin de clulas plasmticas secretoras de
las inmunoglobulinas que estarn presentes en el
epitelio y el lumen intestinal. Subpoblaciones
linfocitarias T CD4+ y T CD8+ se encuentran en
la lmina propia, no obstante las clulas T CD4+
parecen ms importantes en trminos de una respuesta antiparasitaria.
En la mucosa normal existen diversas clulas efectoras linfoides y no linfoides, que aumentan durante las infecciones parasitarias. Entre ellas
se encuentran clulas natural killer, macrfagos,
eosinfilos, neutrofilos y adems basfilos y
mastocitos. Estas ltimas poseen aminas y otros
mediadores as como tambin receptores de alta
afinidad para IgE (FcRI). La infiltracin de la
mucosa por mastocitos, basfilos y eosinfilos,
durante la infeccin es dependiente de la liberacin de citoquinas por parte de linfocitos T especficos. Estas citoquinas y otros mediadores solubles son responsables de la inflamacin intestinal, que tiene obvias consecuencias en la estructura y funcin intestinal, alterando la cantidad y
propiedades del mucus intestinal.
3.2. Respuesta Th2 y proteccin inmunolgica
Distintos estudios han sugerido que la expulsin de nemtodos intestinales, es principalmente consecuencia de una respuesta asociada a la secrecin de citoquinas TCD4 del tipo Th2. As, en
el modelo murino la IL-4 parece desempear un
rol importante en la respuesta inmune que permite la expulsin de H. polygyrus y T. muris del
intestino delgado de los ratones experimentalmente infectados.
Linfocitos T activados en los ndulos
linfticos mesentricos durante el curso de la infeccin, resultan fundamentales en la inmunidad
protectora contra muchos nemtodos intestinales,
incluyendo Trichinella spiralis. Este parsito infecta el intestino y los gusanos adultos liberan larvas que penetran la pared intestinal y se enquistan
luego en los msculos esquelticos (figura 35-4).
El mecanismo de expulsin del parsito adulto del
intestino es un proceso complejo que involucra la
Figura 35-4. Ciclo de vida de Trichinella spiralis. El parsito desarrolla su ciclo biolgico en un nico hospedero que
puede ser omnvoro o carnvoro. El hombre se infecta al ingerir carne mal cocida, que contiene larvas enquistadas en los
msculos esquelticos. La larvas liberadas en el intestino,
maduran rpidamente y las hembras fecundadas darn origen
a larvas jvenes que va sangunea o linftica migran a los
tejidos para enquistarse en los msculos estriados.
578
Sin ttulo-2
578
5/26/06, 10:26 AM
(una citoquina estrechamente relacionada con IL4), parece desempear un rol importante en la expulsin de muchos nemtodos intestinales. Ratones knockout para IL-13, por ejemplo, tardan
bastante ms tiempo en expulsar los gusanos del
intestino, cuando se les infecta experimentalmente con N. brasiliensis. De la misma manera, ratones doble knockout para IL-4/IL-13 tardan
mucho ms en la expulsin de los parsitos, que
los ratones con knockout nico.
Una situacin similar ocurre en las infecciones experimentales con T. spiralis, puesto que ratones doble deficientes en IL-4/IL-13, muestran
un marcado retraso en la expulsin del parsito,
lo que no ocurre en ratones normales o en ratones
deficientes slo en IL-13.
La importancia relativa de IL-4 e IL-13 en la
resistencia a nemtodos intestinales es tambin
influenciada por el repertorio gentico del hospedero. As, ratones C57BL/6 deficientes en IL-4,
son uniformemente susceptibles y desarrollan infecciones crnicas a T. muris, mientras los ratones de tipo silvestre expelen su carga de gusanos.
Por otro lado, ratones BALB/c deficientes en Il4, muestran una sensibilidad sexo-dependiente
puesto que, mientras los machos desarrollan infeccin crnica, las hembras expulsan sus parsitos. La expulsin de parsitos en estas hembras es
mediada por IL-13, como lo muestran experimentos en que se administra la protena de fusin IL13Ra2.
La importancia de IL-4/IL-13 y de IL-4Ra
en la respuesta a nemtodos intestinales, sugiere
una importante funcin para la molcula STAT6
en la generacin de una respuesta protectora. Ratones deficientes en STAT6 son ms susceptibles
a T. spiralis que los ratones normales y muestran
una deprimida respuesta de mastocitos intestinales y de citoquinas del tipo Th2 y supresin de
la sntesis de IgG parsito-especficas. Estos mismos ratones knockout para STAT6 muestran
una expulsin retardada de N. brasiliensis, pero
en este caso la respuesta de citoquinas y
mastocitos no estn deprimida.
Adems de IL-4 e IL-13, otras citoquinas
(como IL-3 e IL-9) parecen estar tambin
involucradas en la proteccin a helmintos intestinales. IL-3 parece importante en la proteccin
contra infecciones por Strongyloides y T. spiralis
y la utilizacin de ratones transgnicos ha permitido demostrar que IL-9 induce un aumento en la
expulsin de parsitos tales como T. spiralis, T.
muris, N. brasiliensis y H. polygyrus. En infec-
ciones experimentales con T. spiralis, la resistencia inducida por IL-9 se expresa fundamentalmente mediante la induccin de mastocitosis intestinal, y en modelos de infeccin T. muris, la neutralizacin de IL-9 mediante anticuerpos especficos,
induce infeccin crnica en ratones normalmente
resistentes.
3.2.1. Mecanismos efectores y resistencia a la
infeccin.
El rol de las citoquinas producidas por
linfocitos Th2 en la expulsin de nemtodos intestinales est bien establecida; sin embargo, permanecen todava sin definir, los mecanismos
efectores que conducen a la expulsin de los parsitos. Muchas infecciones parasitarias inducen
aumento en el nmero de eosinfilos de los individuos afectados, pero no existe evidencia que
sugiera que estas clulas estn de alguna manera
involucradas en la proteccin del hospedero. Por
otro lado la participacin de mastocitos en la resistencia a los helmintos intestinales, ha sido tambin controversial. La evidencia ms convincente
ha surgido de modelos murinos de infeccin experimental con T. spiralis, que demuestran que la
supresin de mastocitos, produce un retraso significativo en la expulsin de los parsitos desde el
intestino. Por otro lado, ratones deficientes en una
proteasa especfica de mastocitos, denominada
MMCP1, muestran un retardo significativo en la
expulsin de T. spiralis del intestino. Aunque la
funcin de MMCP1 permanece sin definir, se ha
sugerido que proteasas de mastocitos, podran
tener como blanco las uniones firmes existentes
entre las clulas del epitelio intestinal. Cambios
en la contractibilidad de la musculatura lisa intestinal y cambios asociados al aumento de la permeabilidad intestinal y la disminucin de la absorcin de fluidos, se producen a menudo durante la expulsin de H. polygyrus y T. spiralis.
3.3. Respuesta Th1 y susceptibilidad a la infeccin
Las infecciones naturales por nemtodos intestinales tienden a ser cuadros de tipo crnico y
muy pocos estudios han investigado los mecanismos responsables de la cronicidad y susceptibilidad a estas infecciones, aunque es cierto que cuando la respuesta de tipo 2 est deprimida, la expulsin de los gusanos est claramente retardada.
En condiciones naturales, hay factores como
579
Sin ttulo-2
579
5/26/06, 10:26 AM
la coinfeccin y el estado nutricional del hospedero, que pueden estar involucrados en el desarrollo de resistencia. As por ejemplo, un estudio
reciente de infeccin experimental por H.
polygyrus, sugiere la importancia de la dieta
proteica en la resistencia a la infeccin, puesto que
hospederos expuestos a dietas pobres en protena
muestran una depresin en la respuesta Th2 y un
marcado retardo en la expulsin de los gusanos
en comparacin con aquellos animales que recibieron dietas ricas en protenas.
Algunos modelos de infeccin experimental inducen de manera natural un cuadro crnico,
lo que ha permitido identificar importantes factores asociados a la susceptibilidad a la infeccin.
En el modelo T. muris, mientras la mayor parte de
las cepas de puras o inbred de ratones expulsan
una moderada o alta carga parasitaria, unas pocas
cepas fallan en expulsar los gusanos y muestran
altos niveles de parasitismo que evoluciona hacia
una infeccin crnica. Est ahora claro, que en
estos animales, se desarrolla una respuesta dominante de tipo Th1, mediada por IFN-. La neutralizacin de IFN- o IL-12 en cepas susceptibles
de ratones induce la expulsin de los gusanos, con
un coincidente aumento en la respuesta de tipo
Th2. Sin embargo, la administracin de IL-12 a
los animales resistentes induce susceptibilidad, la
cual es dependiente de IFN-. Ratones knockout
para IL-12 son altamente resistentes a la infeccin, como lo son tambin los ratones deficientes
en el receptor de IFN-. RKO. Trabajos ms recientes han identificado a IL-18 como el principal factor involucrado en la induccin de susceptibilidad. Las cepas de ratones susceptibles
muestran una fuerte y temprana regulacin positiva de los mRNA para IL-18 en el intestino infectado y esto es seguido por una regulacin positiva de IL-12 y IFN-. Ratones deficientes en
IL-18 son altamente resistentes a la infeccin, y
la administracin de IL-18 induce cronicidad. En
este caso, pareciera ser que ms que inducir altos
niveles de IFN- la IL-18 podra regular la produccin de IL-13 . La accin de IL-18 podra ser
muy sensible a la influencia del medio, ya que
datos recientes muestran que IL-18 tambin pueden promover la sntesis de IL-4 y el desarrollo
de respuesta Th2.
En el modelo H. polygyrus, la mayora de las
cepas de ratones desarrollan infecciones primarias crnicas, aunque algunas cepas empiezan a
eliminar vermes varias semanas despus de la infeccin. La infeccin primaria crnica est aso-
ciada con una respuesta Th2 y no con un cambio

significativo a una respuesta dominante de
citoquinas Th1. Sin embargo, es importante notar
que la infeccin crnica puede asociarse con una
regulacin negativa de ciertas citoquinas Th2,
como IL-9 e IL-10 y una regulacin negativa de
la mastocitosis intestinal. La base para la regulacin negativa de la respuesta de citoquinas tanto
para T. muris como H polygyrus permanece sin
definir, pero se piensa que involucra la participacin de factores inmunomoduladores producidos por el parsito. En el modelo de T. muris, hay
evidencias que sugieren que el parsito puede
producir una citoquina semejante a IFN-. El concepto que los nemtodos del intestino producen y
secretan molculas inmunomoduladoras se
refuerza mediante la observacin que extractos de
N. brasiliensis pueden inducir una fuerte respuesta Th2 en ausencia de infeccin.
El modelo de T. muris agrega otra faceta interesante a la induccin de infeccin crnica luego de la exposicin a diferentes niveles de infeccin. En cepas de ratones resistentes, que normalmente expelen una moderada o alta cantidad de
gusanos, ello no ocurre en infecciones producidas
por bajas cargas parasitarias (10 a 20 gusanos) y
tienden a desarrollar cuadros crnicos. El hospedero genera en estos casos una respuesta dominante de tipo Th1, mientras las infecciones con
alta carga parasitaria se genera una fuerte respuesta
Th2 y resistencia al desafo parasitario. Esta respuesta es adems difcil de alterar an despus del
tratamiento con IL-12, que normalmente induce
una fuerte respuesta Th1 y por lo tanto susceptibilidad. Tomando estos datos en su conjunto, especialmente aquellos derivados de experimentos con
bajos niveles de infeccin y que ms estrechamente reflejan lo que ocurre en infecciones naturales,
es posible sugerir que bajos niveles de infeccin
llevan a susceptibilidad mientras que repetidos
desafos con bajos inculos pueden llevar a resistencia. Esta condicin de resistencia es difcil de alterar una vez que es adquirida.
4. Respuesta inmune frente a tremtodos intestinales
Un paradigma en el estudio de la respuesta
inmune a tremtodos es el modelo de infeccin
por ejemplares del gnero Schistosoma. Los
esquistosomas son platelmintos tremtodos que
viven en los vasos sanguneos tanto en hospederos mamferos como en aves. La mayora de los
580
Sin ttulo-2
580
5/26/06, 10:26 AM
tremtodos son hermafroditas, pero los

esquistosomas presentan dimorfismo sexual. Su
ciclo evolutivo es indirecto e involucra la participacin de caracoles como hospederos intermediarios (figura 35-5). Los huevos son liberados por
las hembras hacia las deposiciones o la orina, dependiendo de la especie de esquistosoma. En contacto con el agua, se libera el miracidio mvil que
debe entrar en contacto con un caracol para continuar su ciclo biolgico. En el caracol se desarrolla el esporocisto, que genera una segunda generacin de esporocistos y luego las cercarias. Durante este proceso de reproduccin asexuada, el
parsito aumenta en nmero y en potencial
reproductivo. Por ejemplo, en Schistosoma
mansoni, un esporocisto es capaz de generar
200.000 cercarias. Las cercarias abandonan el caracol y constituyen las formas infectantes que
penetran activamente la piel de su hospedero definitivo. Esta fase del ciclo de vida va acompaada de profundos cambios en la estructura y fisiologa de la cercaria, que se transforma en un estadio denominado esquistosmula. La esquistosmula migra va vasos sanguneos hacia los pulmones y desde all al hgado, donde alcanza el
estado adulto. Los vermes adultos se aparean y
migran a las venas mesentricas o hacia aquellas
localizadas en las cercanas de la vejiga. Los adultos viven 5 a 6 aos liberando entre 300 (S.
mansoni) y 3000 (S. japonicum) huevos por da.
Los huevos son depositados en vasos de pequeo
dimetro donde quedan atrapados. El miracidio
se desarrolla precozmente dentro del huevo, de
manera que enzimas secretadas por este estadio
facilitan el pasaje del huevo a travs de los tejidos
hasta el intestino o la vejiga.
Los hospederos son infectados por un elevado
nmero de vermes y por un largo perodo de tiempo,
de esta forma la infeccin est asociada a una respuesta inmune amplia y variada. La penetracin inicial de las cercarias produce escasa respuesta, no
obstante en infecciones masivas puede existir respuestas de hipersensibilidad local. Entonces, aunque
el desarrollo inicial puede estar asociado a reacciones alrgicas, generalmente la primera respuesta evidente es aquella derivada de la produccin y liberacin de los huevos. La liberacin constante de estos,
induce una fuerte respuesta de tipo celular y lleva
tambin a procesos inmunopatolgicos. Los gusanos adultos no son directamente patognicos pero
son fuertemente inmunognicos, al liberar antgenos
de su tegumento, de su intestino y aquellos derivados de su metabolismo.
Figura 35-5. Ciclo biolgico de Schistosoma. Las formas

larvales o cercarias que nadan libremente en aguas infectadas,
pueden penetrar a travs de la piel humana, convirtindose en
equistosmulas que va circulatoria viajan a los pulmones y
luego al hgado, donde se convertirn en gusanos adultos y
maduros. Desde el hgado los parsitos migran hasta los vasos
sanguneos del intestino, donde luego de reproducirse
sexualmente, darn origen a numerosos huevos que son expulsados a travs de las deposiciones u orina del hospedero.
En el agua, los huevos dan origen a larvas ciliadas o miracidios
que al entrar en un caracol, que acta como hospedero intermediario, se reproducen asexualmente generando esporoquistes
a partir de los cuales se originan finalmente las cercarias
infectantes para diversos hospederos mamferos.
4.1. Inmunidad protectora frente a Schistosoma

En el hombre, existen claras evidencias acerca de la existencia de inmunidad adquirida y resistencia a la infeccin. El hecho que los individuos sobreviven en reas endmicas con elevada
transmisin y la observacin de que los niveles de
infeccin llegan a un equilibrio despus de la segunda dcada de vida, se consideran evidencias
de tal inmunidad. De igual manera se acepta que
la habilidad para expresar esa resistencia se desarrolla de manera paulatina y que los niveles de
581
Sin ttulo-2
581
5/26/06, 10:26 AM
resistencia varan de un individuo a otro. Estudios

en diferentes poblaciones humanas han mostrado
que la resistencia a la infeccin aumenta con la
edad y que la respuesta inmune especfica incluye
la participacin de IgE, eosinfilos, IL-4 e IL-5,
lo que se asocia adems a bajos niveles de
reinfeccin luego de la quimioterapia.
En modelos animales existe clara evidencia
que la inmunidad depende del tipo de hospedero
utilizado. Frente a la infeccin experimental por
S. mansoni, monos y ratones desarrollan una fuerte
respuesta inmune y aunque la infeccin primaria
persiste por varios meses, los individuos se hacen
resistentes a las reinfecciones. En ratas se desarrolla una respuesta inmune capaz de erradicar la
infeccin primaria y de inducir una fuerte resistencia a la reinfeccin. Los monos Rhesus son
capaces de destruir la mayora de los vermes de
S. mansoni producidos en la reinfeccin, pero son
incapaces de eliminar aquellos establecidos en la
infeccin inicial. De igual manera, la inmunidad
a la infeccin puede estimularse por exposicin
de los monos a cercarias irradiadas o por trasplante de vermes adultos al sistema vascular. As la
inmunidad a la reinfeccin puede ser estimulada
por los gusanos adultos para actuar contra los estadios larvales, sin afectar a los adultos (fenmeno de inmunidad concomitante). Hoy se acepta que
la inmunidad concomitante frente a esquistosomas
se manifiesta en diferentes hospederos y resulta
por lo tanto particularmente interesante establecer los mecanismos que permiten a los vermes
adultos evadir la respuesta inmune y los mecanismos efectores que conducen a la destruccin de
las cercarias.
Estudios in vitro han mostrado que una variedad de mecanismos efectores que involucran
clulas y anticuerpos, pueden actuar contra las larvas de equistosomas. As, las esquistosmulas
pueden ser destruidas por lisis mediada por complemento. La interaccin de las clulas efectoras
con las larvas opsonizadas ocurre por medio de
receptores para Fc y/o C3b. Aunque varias clulas actan contra las esquistosmulas in vitro, los
tipos celulares ms importantes son macrfagos y
eosinfilos
Los eosinfilos unen molculas de IgE mediante

receptores de baja afinidad FcII, lo que les permite adherirse a la larva reconociendo la porcin
Fc de las IgE que se han unido a antgenos larvales
especficos. En la rata, se han descrito reacciones
ADCC con participacin de eosinfilos e IgG2a
que se producen durante las primeras 6 semanas
de la infeccin, puesto que ms tarde IgE ser el
anticuerpo predominante. Las IgG reconocen
antgenos presentes en el tegumento tanto en larvas como en parsitos adultos, y esto explica por
qu los gusanos adultos generan inmunidad contra las larvas. Los anticuerpos IgG2a pueden tambin unirse a mastocitos y la destruccin de
esquistosmulas por eosinfilos y anticuerpos es
estimulada en presencia de mastocitos Este fenmeno que se asocia a la liberacin de tetrapptidos
como el factor eosinoflico quimiotctico de anafilaxis (ECF-A). La participacin de IgA en reacciones de ADCC con participacin de eosinfilos
tambin ha sido descrita y luego de adherirse a la
larva, estas clulas quedan en estrecho contacto
con el tegumento del parsito, y sus grnulos de
secrecin de la clula se localizan adyacentes a la
zona de contacto, se fusionan con la membrana
celular y su contenido se vierte sobre el verme.
Estos grnulos contienen una variedad de mediadores incluyendo enzimas como peroxidasa y
fosfolipasa B y la llamada protena bsica principal, todas las cuales tienen efecto deletreo para
el tegumento. As la permeabilidad del tegumento
parasitario es seriamente alterada y los eosinfilos
pueden tambin invadir activamente el tegumento. Se ha demostrado adems que los eosinfilos
pueden expresar molculas coestimulatorias como
CD28 y CD86 y participan en la secrecin selectiva de citoquinas Th1 como IL-2 y IFN-.
Estudios inmunoepidemiolgicos han mostrado, que en el hombre existe correlacin entre
niveles de anticuerpos IgE y resistencia a la
reinfeccin. Se ha mostrado que eosinfilos,
macrfagos y plaquetas son capaces de matar
esquistosmulas en presencia de IgE. Existe una
fuerte evidencia de que reacciones de ADCC mediadas por IgE pueden ser un componente importante de la inmunidad protectora aunque otros
mecanismos tambin podran participar y la mayor o menor participacin de un determinado mecanismo puede depender del modelo utilizado.
4.1.1. Eosinfilos
Cuando las larvas se exponen a anticuerpos
especficos y se activa el sistema del complemento, la adherencia de eosinfilos a la larva puede
ocurrir por medio de receptores para Fc o C3b.
4.1.2. Macrfagos
La muerte de esquistosmulas por macr-
582
Sin ttulo-2
582
5/26/06, 10:26 AM
fagos parece operar de dos maneras distintas. Por

un lado, linfocitos T activados liberan IFN- que
va a estimular macrfagos con la consiguiente
produccin de metabolitos txicos y xido ntrico. El segundo mecanismo es especfico y requiere la participacin de anticuerpos IgE, los cuales
no son opsonisantes pero permiten la adhesin del
macrfago y la liberacin de enzimas sobre el tegumento del parsito.
Entre los mecanismos efectores contra
esquistosmulas se encuentra la citotoxicidad dependiente de anticuerpos (DAC) que resulta muy
eficiente contra larvas jvenes. Esta susceptibilidad de las larvas decrece con el tiempo, puesto
que el rpido desarrollo de resistencia a la ADCC
es fundamental en la sobrevida del parsito, an
en infecciones primarias. Aunque anticuerpos no
estn presentes en las etapas iniciales de la infeccin, la activacin de la ruta alterna del sistema
del complemento resulta en la adherencia de C3b.
La prdida de la susceptibilidad se correlaciona
con alteraciones en la antigenicidad de la superficie de las esquistosmulas, que conducen a disminuir la unin de anticuerpos y de factores del
complemento y el tegumento del parsito muestra una mayor resistencia a los mecanismos
efectores de inmunidad. Aunque esquistosmulas
son el principal blanco de la respuesta protectora,
estadios posteriores (postpulmonares) e incluso
adultos pueden ser afectados por la inmunidad.
4.3. Inmunidad en el ratn

El ratn es un hospedero permisivo, en el que
se produce la sobrevida y establecimiento de poblaciones reproductivas del verme. La infeccin
primaria, lleva al desarrollo de patologa heptica, seguida de la formacin de granulomas alrededor de los huevos que quedan atrapados en los
capilares mesentricos. Las infecciones secundarias producen bajo nmero de vermes adultos, pero
este fenmeno resulta en parte por la formacin
de anastomosis portal y cava que permite una
menor poblacin de vermes en el hgado. Los ratones pueden sin embargo ser inmunizados con
cercarias y esquistosmulas irradiadas las cuales
no maduran a adultos productores de huevos permitiendo el estudio de la inmunidad en ausencia
de patologa.
En el ratn, la inmunidad inducida por vacunacin es generalmente T-dependiente con participacin de subpoblaciones T CD4+. Las reacciones de ADCC (con participacin de IgG) y la activacin de macrfagos por linfocitos T seran los
principales mecanismos efectores, pero es posible que la relevancia de los distintos mecanismos
efectores dependa de la localizacin tisular del
parsito. Eosinfilos y neutrfilos han sido implicados en la respuesta a nivel de la piel mientras
que macrfagos juegan un papel central en el hgado. Estudios de respuesta inmune frente a estadios pulmonares sugieren que la respuesta Th1 es
de fundamental importancia. Luego de la
estimulacin antignica, estas clulas liberan IFN que activa macrfagos los que interactan con
esquistosmulas y otras citoquinas, para iniciar el
desarrollo de un foco inflamatorio en el cual la
larva es atrapada. El mecanismo de dao mediado
por macrfagos involucra intermediarios reactivos
de oxgeno, nitrgeno y TNF. La inmunidad es
reducida si los ratones infectados se tratan con
anticuerpos anti-IFN-.
Estudios de inmunoproteccin han mostrado que en el hombre y la rata la proteccin estara
dada por mecanismos efectores mediados por
subpoblaciones Th2, mientras que en el ratn la
inmunidad protectora estara dada por Th1 con la
participacin de IFN- e IL-12. Estudios in vitro
utilizando tanto clulas humanas como de ratn,
sugieren que reacciones ADCC participan en la
muerte de las larvas de esquistosoma. Este mecanismo parece mediado por IgE con la participacin de clulas efectoras como eosinfilos y
plaquetas. Dado la importante contribucin de IL-
4.2. Inmunidad en la rata

La rata es un hospedero relativamente no permisivo, que desarrolla una fuerte respuesta inmune a la infeccin primaria, de manera que los gusanos adultos no se reproducen y son rpidamente eliminados. De igual modo, la infeccin primaria confiere inmunidad al desafo o a la reinfeccin
y los pulmones parecen ser el principal sitio de
destruccin de parsitos. Esta inmunidad es dependiente de clulas T, pero se ha mostrado la participacin de anticuerpos y la actividad protectora de sueros inmunes est asociada a los isotipos
IgG2a e IgE. Datos obtenidos in vitro muestran
que estos anticuerpos participan en reacciones de
tipo ADCC en las cuales los eosinfilos juegan un
papel central. Estudios de vacunacin utilizando
el antgeno recombinante Sm28GST, han confirmado la participacin de IgE en la inmunidad pero
han mostrado tambin que IgA pueden participar
en la proteccin citotxica dependiente de
eosinfilos
583
Sin ttulo-2
583
5/26/06, 10:26 AM
4 e IL-5 en la induccin de anticuerpos IgE y de

eosinofilia, parece claro que una respuesta Th 2
es un respuesta protectora en estas especies.
Estudios de proteccin con cercarias irradiadas muestran claramente la importancia de clulas T CD4+ en la resistencia, la cual es claramente dependiente de IFN-. De igual manera, la inmunidad es reducida en ratones deficientes en clulas CD4+, clulas B, IFN- o IL-12, sugiriendo
que linfocitos Th1 son particularmente importantes en el desarrollo de una respuesta efectiva contra el parsito. De hecho, ratones vacunados que
desarrollan una respuesta Th1 y altos niveles de
IL-12 resultan fuertemente protegidos. Aunque los
mecanismos que operan en esta proteccin mediada por Th 1, no estn definidos, existe fuerte
evidencia que sugiere que podra estar mediada
por IFN-, TNF-, macrfagos activados y clulas endoteliales. No obstante, cuando ratones reciben una vacunacin de refuerzo mediante
cercarias irradiadas, se desarrolla una mezcla de
respuestas Th1/Th 2 con produccin de
anticuerpos parsito-especficos y capaces de proteger mediante transferencia pasiva a ratones no
inmunizados. Estas observaciones, sugieren que
respuestas efectoras Th1 y Th 2 podran contribuir a la inmunidad protectora de ratones vacunados con mltiples dosis. Caractersticas importantes de la respuesta inmune frente a esquistosomas
se han conocido mediante el uso de ratones doble
knockout que muestran respuestas altamente
polarizadas para Th 1 (ratones deficientes en IL10/IL-4) o Th 2 (ratones deficientes en IL-10/IL12). Los hallazgos ms significativos se observaron en animales deficientes en IL-10, los cuales
desarrollaron respuesta protectora tanto Th1 como
Th 2, con altos ttulos de anticuerpos especficos,
alta proliferacin de linfocitos, elevada respuesta
inflamatoria pulmonar y aumento en el nmero
de clulas productoras de IFN- e IL-4. Estos
resultados sugieren que, en esquistosoma, una
ptima respuesta inmune no se basa en una respuesta polarizada Th1 o Th2, sino ms bien en la
induccin de ambas. Estos hallazgos son semejantes a los obtenidos en animales tratados con
IL-12, los cuales al ser expuestos a cercarias irradiadas, muestran un aumento significativo de las
respuestas humoral y celular, aunque a diferencia
de lo que ocurre con ratones deficientes en IL-10,
la IL-12 induce una respuesta polarizada de tipo
Th1.
4.4. Interferencia con la inmunidad

En las poblaciones humanas expuestas a la
infeccin, el desarrollo de inmunidad es lento y
depende de la intensidad de la transmisin. Estudios serolgicos de reinfectacin realizados en escolares tratados en reas endmicas, sugieren que
el estado de inmunidad es determinado por el balance entre los anticuerpos IgG4 e IgE. La
reinfeccin est significativamente reducida en los
nios con altos niveles de IgE contra gusanos adultos y mucho ms reducida en aqullos con altos
niveles de IgG4. La explicacin para este fenmeno se asocia al hecho que IgG4 bloquea las
reacciones ADCC en que participan los eosinfilos
y podra adems interferir con otros mecanismos
efectores (degranulacin de mastocitos, por ejemplo). El concepto de anticuerpos bloqueadores est
bien documentada en la relacin esquistosomahospedero, y en humanos se ha mostrado que
anticuerpos IgM dirigidos contra eptopos particulares de la superficie de esquistosoma, bloquean
efectivamente la unin de IgG dirigidas contra el
mismo eptopo. En ratas el monoclonal IgG2c
bloquea la muerte por eosinfilos dependiente del
monoclonal IgG2b mientras que en el ratn
monoclonales IgM bloquean la ADCC mediada
por IgG. Estos anticuerpos bloqueadores muestran especificidad por eptopos de carbohidratos
presentes tanto en la larva como en los huevos.
Estos anticuerpos originados en respuesta a la infeccin por adultos productores de huevos, interfieren cruzadamente la inmunidad contra las larvas invasivas.
La sntesis de un particular isotipo de
anticuerpos es regulada por citoquinas producidas por clulas T. Trabajos de infeccin por
esquistosoma en el ratn, han mostrado que el
comienzo de la producccin de huevos esta asociada a un cambio desde una respuesta predominantemente Th1 a una de tipo Th2, una regulacin negativa de las citoquinas IFN- e IL-2 y
un aumento en la produccin de IL-4, IL-5 e IL10. Muchos de los eventos inflamatorios que ocurren en ese momento se pueden asociar al patrn
de citoquinas secretado y el balance de citoquinas
tambin determina la produccin de determinados isotipos de anticuerpos.
La esquistosomiasis es una de las pocas
parasitosis en las que la patologa asociada a la
infeccin es causada no por la presencia directa
del gusano sino por la respuesta inmune e
inflamatoria del hospedero. En el dao
584
Sin ttulo-2
584
5/26/06, 10:26 AM
inmunopatolgico, destacan la dermatitis que sigue a la penetracin de las cercarias, la alergia

aguda causada por la migracin a travs del pulmn, la fase alrgica tarda observada en infecciones por S. mansoni y las enfermedades por
inmunocomplejos. No obstante la entidad mejor
estudiada son las reacciones asociadas a la infeccin crnica con S. mansoni la cual es responsable de los importantes cambios que se observan
en el hgado. Aunque algunos huevos son eliminados por las heces del hospedero, otros, aunque
no permanecen en las venas y capilares mesentricos son capaces de pasar a la vena porta y
llegar al hgado donde quedan atrapados en las
vnulas presinusoidales. En huspedes crnicamente infectados, los miracidios secretan potentes inmungenos (Antgenos solubles del huevo,
ASH), estimulando hipersensibilidad retardada,
por lo que cada huevo es foco de produccin del
granuloma. Los ASH son liberados por los poros
del huevo y corresponden a estructuras complejas
de protenas, lipoprotenas, carbohidratos y
glicolpidos. Algunos de estos componentes son
reconocidos por linfocitos TCD4 que participan
en la iniciacin, desarrollo y modulacin del
granuloma. Los linfocitos T helper y sus
citoquinas al aumento local de macrfagos,
eosinfilos y otras clulas inflamatorias, que se
localizan alrededor de cada huevo produciendo un
foco de inflamacin. Los ASH parecen promover
una selectiva respuesta Th2 con liberacin de IL5 responsable de la acumulacin de eosinfilos.
La respuesta inmune lleva entonces a la formacin de granulomas, pero tambin protege del dao
por hepatotoxinas liberadas por los miracidios. El
ataque inmunolgico consigue destruir los
miracidios y ratones deficientes en linfocitos T
aunque no forman granulomas sufren severo dao
heptico, caracterizado por necrosis en las reas
inmediatamente vecinas a los huevos atrapados.
Carruthers, V. B., Host cell invasion by opportunistic pathogen Toxoplasma gondii, Acta Tropica
81: 111-122, 2002.
Helmby, H., Grencis, R.K. IL-18 regulates intestinal mastocytosis and Th2 cytokine production
independently of IFN- during Trichinella spiralis
infection, J. Immunol. 169: 2553-2560, 2002.
Kaufmann, S.H.E., Sher, A., Ahmed, R. Immunology of Infectious Diseases, American Society
of Microbiology, 2002; 495.
Theodos, C.M., Innate and cell-mediated immune
response to Cryptosporidium parvum, Adv.
Parasitol. 40:87-119, 1998.
Wakelin, D., Immunity to parasites. How parasitic infections are controlled, Second edition.
Cambridge University Press, 1996; 204.
LECTURAS SUGERIDAS
Bogdan, C., Rollinghoff, M. How do protozoan
parasites sirvive inside macrophages?, Parasitol.
Today 15: 22-28, 1999.
Brenier-Pinchard, M,P. et al., Chemokines in
host-protozoan-parasite interactions, Trends in
Parasitol. 17: 292-296, 2001.
585
Sin ttulo-2
585
5/26/06, 10:26 AM
586
Sin ttulo-2
586
5/26/06, 10:26 AM

Captulo 36
VACUNAS
Ulises Vergara y Rosario Billetta
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
Introduccin
Vacunas naturales o tradicionales
Vacunas recombinantes
Vacunas anti-idiotpicas
Vacunas sintticas
Vacunas de DNA
Vacunas Genmicas
Adyuvantes, inmunomoduladores e
inmunogenicidad
587
Sin ttulo-2
587
5/26/06, 10:26 AM
588
Sin ttulo-2
588
5/26/06, 10:26 AM
RESUMEN
La vacunacin contra diversas enfermedades infecciosas ha sido uno de los mayores xitos
en el campo de la inmunologa desde los tiempos de Jenner. Bacterias y virus vivos atenuados
que conservan su capacidad de replicacin y su inmunogenicidad pero no su patogenicidad;
bacterias y virus muertos que slo conservan su inmunogenicidad; fraccciones antignicas purificadas; protenas, subunidades proteicas y toxinas bacterianas se han utilizado como vacunas
para controlar diversos agentes infecciosos. Sin embargo, an cuando estas vacunas han logrado
disminuir la incidencia, morbilidad y mortalidad de un gran nmero de enfermedades infecciosas, existen todava enfermedades que son difciles de prevenir y controlar por medios profilcticos, porque no existe una vacuna disponible, o las que existen son menos seguras o menos
efectivas de lo deseado. Carencia de suficiente material a partir de fuentes naturales de material
biolgico, efectos colaterales adversos, inestabilidad de la vacuna en su forma atenuada, material
biolgico contaminante, baja inmunogenicidad de sus componentes y dificultades en su produccin, almacenamiento transporte y forma de administracin, son algunas de las causas que explican la ausencia o baja efectividad de algunas de nuestras vacunas. Los recientes avances en
biotecnologa ofrecen hoy en da nuevas posibilidades para el desarrollo de vacunas efectivas
basadas en antgenos recombinantes altamente purificados, bacterias o virus recombinantes vivos, anticuerpos anti-idiotpicos que representan imgenes internas de eptopes protectores, fragmentos peptdicos qumicamente sintetizados y vacunas gnicas y genmicas de DNA, que codifican respectivamente, la expresin de antgenos protectores individuales o del repertorio antignico
completo en forma de genes
200 aos y el proceso ha sido bastante conservador desde los tiempos de Jenner, manteniendo
el objetivo de inducir una respuesta inmune humoral y/o celular que proporcione proteccin frente a la infeccin natural con el patgeno. El
inmungeno de eleccin ha sido siempre el agente infeccioso muerto o atenuado y slo en los ltimos 15 aos se han hecho esfuerzos para reemplazar las vacunas que utilizan el patgeno completo por vacunas basadas en subunidades o porciones no viables o no infecciosas que contengan
fraccciones antignicas altamente purificadas y
todava capaces de inducir una respuesta inmune
protectora. El uso de vacunas de subunidades del
agente infeccioso ha resultado atractiva porque
evita los problemas asociados a la inactivacin
o atenuacin incompleta del patgeno y la
posibilidad de contaminacin biolgica durante
el cultivo del agente infeccioso a gran escala.
Inmungenos especficos pueden ahora producirse a travs de la purificacin de protenas individuales, el uso de anticuerpos anti-idiotpicos que
representan imgenes internas de ciertos deter-
1. INTRODUCCIN
La vacunacin contra diversas enfermedades
infecciosas ha sido uno de los mayores logros en
el campo de la inmunologa desde 1798 cuando
Edward Jenner demostr que la inoculacin de
virus vivos provenientes del ganado (poxavirus
del gnero vaccinia) proporcionaba inmunidad
contra la viruela en la especie humana. Este importante hallazgo se bas en la observacin, durante una epidemia de viruela, de la ausencia de
la enfermedad en ordeadoras que haban permanecido en contacto con el ganado bovino. Hoy
da estos virus estn siendo genticamente
manipulados in vitro y utilizados como vectores
para la introduccin de diversos determinantes
antignicos de manera que su expresin, en las
clulas infectadas con el virus recombinante, conduzca al desarrollo de una respuesta inmune protectora contra el agente infeccioso del cual derivan esos antgenos.
La vacunacin para prevenir diversas enfermedades infecciosas ha sido practicada por casi
589
Sin ttulo-2
589
5/26/06, 10:26 AM
minantes antgenos del agente infeccioso o

mediante la utilizacin de la tecnologa del DNA
recombinante y la sntesis qumica de pptidos.
Una vez aislado e identificado un agente infeccioso, cualquier intento de generacin de una
vacuna contra la enfermedad debe considerar una
serie de factores que pueden favorecer o complicar el desarrollo de la misma. Estos factores pueden estar relacionados con el agente infeccioso,
con la enfermedad y con sus posibilidades de control o erradicacin (tablas 36-1 y 36-2). Adems,
la induccin de una respuesta inmune protectora
humoral y/o celular en los individuos vacunados,
depender en ltimo trmino de la naturaleza y
forma fisicoqumica de los antgenos utilizados,
de su forma de administracin, del destino
metablico de los mismos y del repertorio gentico
del individuo y los diversos mecanismos de regulacin de la respuesta inmune. La edad del individuo es tambien un factor a considerar en la induccin de respuesta inmune a una vacuna, puesto
que existen diferencias en la capacidad de respuesta en los primeros meses de vida y durante la
senescencia. La presencia de altos niveles de
anticuerpos maternos adquiridos en forma pasiva
en los primeros meses de vida, dificultan o alteran la respuesta inicial a algunas vacunas. En los
ancianos existe una disminucin en la capacidad
de respuesta a la estimulacin antignica y se requiere, muchas veces, una mayor cantidad de

antgeno para lograr la respuesta inmune deseada.
Luego de identificados los inmungenos que
pueden servir de base para la generacin de una
vacuna contra un agente infeccioso, el desarrollo
de la misma debe cumplir 3 rigurosas etapas o fases, que ponen a prueba su eficacia, seguridad y
estabilidad, antes de su uso masivo para el control
de la enfermedad (tabla 36-3)
2. VACUNAS NATURALES O TRADICIONALES

La defensa contra una gran variedad de agentes infecciosos depende de la habilidad del sistema inmune para reconocer, neutralizar y eliminar
antgenos del agente patgeno y el objetivo de la
vacunacin es inducir una adecuada respuesta inmune protectora contra la infeccin natural. As,
bacterias y virus vivos atenuados que conservan
su capacidad de replicacin y su inmunogenicidad,
pero no su patogenicidad; bacterias y virus muertos que slo conservan su inmunogenicidad; fracciones antignicas purificadas; protenas,
subunidades proteicas y toxinas bacterianas, se
han utilizado como vacunas para controlar diver-
Tabla 36-1. Factores que favorecen el desarrollo de vacunas efectivas
Del agente infeccioso
Slo uno o pocos serotipos, con poca variacin antignica

Patgeno moderada o escasamente infeccioso
Antgenos con eptopos B y T fcilmente identificables
Inmunidad sistmica de fcil induccin.
De la enfermedad
Infeccin induce respuesta inmune protectora

Existencia de un modelo animal que reproduce la evolucin de la infeccin y/o la enfermedad.
De la erradicacin
La infeccin est limitada a humanos y no existen otros reservorios naturales

La infeccin induce un cuadro clnico caracterstico y no existen infecciones subclnicas o portadores sanos.
Existencia de un marcador simple de vacunacin exitosa
590
Sin ttulo-2
590
5/26/06, 10:26 AM
Tabla 36-2. Factores que complican el desarrollo de vacunas efectivas

Del agente infeccioso
Existencia de variacin antignica y por lo tanto mltiples serotipos

El patgeno es altamente infeccioso
Eventual variacin en el tropismo del patgeno
Patgeno provisto de mecanismos de evasin de la respuesta inmune
De la infeccin
Infeccin puede ser transmitida por clulas infectadas que no expresan antgenos del patgeno
Integracin de genes del patgeno en el genoma del hospedero
La infeccin no induce una respuesta inmune protectora
Induccin de mecanismos de supresin de la respuesta inmune
Infeccin y/o destruccin de subpoblaciones linfocitarias
Ausencia de un modelo animal que simule la infeccin o la enfermedad en humanos
De la erradicacin
Existencia de reservorios naturales

Distintas manifestaciones clnicas de la infeccin o enfermedad y existencia de formas subclnicas
y de portadores sanos.
Tabla 36-3. Fases en el desarrollo de una vacuna
Fase I :
Corresponde a la fase de seguridad que determina la ausencia de reacciones adversas en voluntarios inoculados
Fase II:
Corresponde al desafo, de los voluntarios inmunizados, con el agente infeccioso en condiciones restringidas. Esta fase requiere la disponibilidad de drogas para control del patgeno y
eventual tratamiento de los voluntarios.
Fase III: Exposicin de los voluntarios inmunizados, a la infeccin natural con el patgeno en una
regin en la que la infeccin o la enfermedad es endmica. Requiere tambien drogas para el
control del patgeno y eventual tratamiento de los voluntarios
sos agentes infecciosos. Sin embargo, an cuando estas vacunas convencionales han ciertamente
disminuido la incidencia, morbilidad y mortalidad de un gran nmero de enfermedades infecciosas, existen todava enfermedades que son difciles de controlar y prevenir por medios profilcticos, ya que no existe una vacuna disponible
o las que existen son menos seguras o menos efectivas que lo deseado. Las razones que explican
la ausencia de estas vacunas son desde luego diversas y entre ellas podemos mencionar la caren-
cia de suficiente material biolgico a partir de

fuentes naturales, efectos colaterales no deseados,
efectos nocivos por insuficiente atenuacin o inestabilidad de la vacuna en su forma atenuada, baja
inmunogenicidad de sus componentes, presencia
de material biolgico contaminante y dificultades
en la produccin, almacenamiento, transporte y
forma de administracin de la vacuna. Una vacuna ideal debe desde luego reproducir la respuesta
inmune protectora inducida por la infeccin natural, debe ser estable y carecer de efectos colatera-
591
Sin ttulo-2
591
5/26/06, 10:26 AM
les adversos, pero adems debe ser de bajo costo, sin dificultades de produccin, almacenamiento
o transporte y debe ser fcil de administrar en los
distintos individuos. Muchas de las vacunas convencionales actualmente disponibles no son ideales debido a su alto costo de produccin (hepatitis
B, rabia), por sus potenciales efectos txicos o
virulentos (pertussis, rubola) o por la inadecuada proteccin inducida (clera, tifus).
Ahora bien, la preparacin de una vacuna a
partir de fuentes naturales de material biolgico,
requiere la obtencin del agente patgeno a partir
de fuentes humanas o de animales infectados, su
identificacin y caracterizacin, su mantencin en
cultivo de tejidos o diversos medios de cultivo in
vitro y los variados procesos de atenuacin o
inactivacin.
Prevenir la replicacin del agente infeccioso (mediante tratamiento con luz ultravioleta,
fenol, formaldehido, beta propiolactona, imina) parece la forma ms simple de destruir su caracter
patognico, pero el proceso de inactivacin no debe
alterar la estructura antignica necesaria para la induccin de una respuesta inmune protectora. La
inmunidad conferida por microorganismos muertos (difteria, ttanos, tifoidea, influenza, rabia, virus polio Salk) no induce inmunidad permanente
con una nica dosis y requiere dosis repetidas y
refuerzos para mantener la respuesta inmune protectora. La inmunidad conferida por las vacunas
inactivadas o muertas es en muchos casos menor
que la conferida por las vacunas vivas, ya que la
replicacin del agente infeccioso permite la exposicin a una dosis mayor y sostenida de antgeno,
al tiempo que favorece el procesamiento y la presentacin de los mismos. Este fenmeno es particularmente importante en las enfermedades virales,
que requieren de la infeccin celular para la expresin de ciertos antgenos y una adecuada induccin
de respuesta inmune celular. Las vacunas naturales
inactivadas o no infecciosas entonces, son en general bastante estables y seguras pero requieren habitualmente de altas dosis de inoculacin por va
parenteral, lo que puede provocar reacciones de hipersensibilidad.
El proceso de atenuacin de un patgeno pretende producir un agente infeccioso modificado
que mantenga o imite la conducta natural del microorganismo original, pero sin causar enfermedad. As ha ocurrido con las vacunas contra sarampin, rubola, fiebre amarilla, poliomielitis
(Sabin) y parotiditis que confieren inmunidad de
por vida o permanente con una sola dosis, puesto
que no slo simulan la infeccin natural, sino que

adems se multiplican en el receptor produciendo gran cantidad de antgenos.
La atenuacin del agente infecioso puede
obtenerse por modificacin de las condiciones de
crecimiento o de cultivo del patgeno (como por
ejemplo bacilo de Calmette y Gurin de
Mycobacterium tuberculosis), pero una vacuna
atenuada puede tambien generarse mediante la
utilizacin de especies o variantes distintas del
patgeno y que son virulentas para hospederos
heterlogos, distintos de aqul que se pretende
proteger con la vacuna. El ejemplo ms conocido
es el del virus vaccinia (cowpox de bovinos) que
protege contra la viruela humana y representa uno
de los xitos ms espectaculares en el control de
una enfermedad infecciosa, la que se considerada
erradicada desde 1980. En este grupo de vacunas
atenuadas se encuentran tambin las vacunas contra sarampin, rubola, parotiditis, fiebre amarilla y la vacuna Sabin contra poliomielitis.
Algunas bacterias producen enfermedad no
por efecto directo sino por la liberacin de toxinas
que pueden tener enormes efectos destructivos en
rganos o tejidos distintos del sitio de infeccin.
As, exotoxinas bacterianas inactivadas por calor o
qumicamente modificadas por tratamiento cido,
tratamiento con formaldehido o con enzimas
proteolticas, han dado origen a vacunas basadas
en este producto detoxificado denominado toxoide.
Vacunas basadas en toxoides de diphteria y tetanus
inducen una respuesta de anticuerpos protectores
que neutralizan la toxina y facilitan su fagocitosis.
Las vacunas naturales o tradicionales pueden,
en general, agruparse en:
Aqullas que utilizan microorganismos

inactivados o muertos, por ejemplo clera
(Vibrio cholerae), fiebre tifoidea (Salmonella
tiphi), tos convulsiva (Bordetella pertussis)
y antrax.
Las que utilizan patgenos atenuados como

poliomielitis, parotiditis, fiebre amarilla, influenza, varicela, adenovirus, viruela y tuberculosis
Las que utilizan toxinas detoxificadas

(toxoide) ya sea solas o unidas a un carrier
proteico. En este grupo se encuentran las vacunas contra botulismo (Clostridium
botulinum), difteria (Corynebacterium
diphteriae) y ttanos (Clostridium tetani)
592
Sin ttulo-2
592
5/26/06, 10:26 AM
Las que utilizan material capsular soluble

(como polisacridos de Streptococcus
pneumoniae, Neisseria meningitidis,
Salmonella typhi y Haemophilus influenzae)
3. VACUNAS RECOMBINANTES
La preparacin de cualquier vacuna contra
un agente infeccioso requiere la obtencin del
patgeno a partir de fuentes humanas o animales
de material biolgico, y su mantencion en cultivo
para la produccin de los antgenos implicados en
la induccin de una respuesta inmune protectora.
Sin embargo, muchos agentes infecciosos son difciles o imposibles de cultivar y otros ofrecen un
muy bajo rendimiento, an despues de cultivos masivos a gran escala. Este es el contexto en el que
los recientes avances en biotecnologa ofrecen sorprendentes y atractivas posibilidades para la produccin de una nueva generacin de vacunas efectivas contra diversos agentes infecciosos.
Una aproximacin para generar grandes cantidades de un inmungeno proteico especfico, es
la utilizacin de la tecnologa del DNA recombinante que involucra el aislamiento del DNA que
codifica la expresin del antgeno protector, su
insercin en un vector de clonamiento
autorreplicante (plsmido o virus) y su amplificacin en bacterias (E. coli), levaduras o clulas de
mamfero (figura 36-1). Si el DNA no est disponible, se purifica el RNA mensajero del agente
infeccioso y se le utiliza como molde para generar por transcripcin inversa un DNA complementario (cDNA) que se insertar en el vector de
clonamiento.
En general, las estrategias utilizadas para la
introduccin de DNA extrao en un vector de
clonamiento autorreplicante pueden conducir a la
la construccin de una biblioteca genmica
(genoteca) a partir del DNA del agente infeccioso
(figura 36-1), o la generacin de una genoteca de
cDNA a partir del RNA mensajero del mismo patgeno.
Las que utilizan fracciones antignicas purificadas, como por ejemplo influenza y
antgeno de superficie de hepatitis B.
Ahora bien, cuando se inocula un agente infeccioso, ya sea vivo o muerto o partes substanciales
de l, se est introduciendo en los individuos
material biolgico que es, en gran parte, desconocido y altamente mutable. Si el agente infeccioso
ha crecido en cultivo de tejidos, es imposible garantizar la ausencia de contaminacin biolgica
y mientras ms aprendemos sobre mutabilidad y
latencia viral, mayor debe ser la preocupacin
por los efectos a largo plazo de nuestras vacunas.
El hecho es que junto a los determinantes
antignicos indispensables para la induccin de una
respuesta inmune protectora, estamos tambien introduciendo al vacunar, molculas innecesarias e
irrelevantes que pueden ser inmunognicas y por
lo tanto capaces de activar linfocitos T supresores
o de inducir la sntesis de anticuerpos que participan en la formacin de complejos inmunes que
pueden tener algn efecto patognico al fijarse en
diversos rganos o tejidos.
Partiendo del supuesto que la respuesta inmune contra un agente infeccioso est en su mayor parte dirigida contra molculas de la superficie del agente patgeno, los esfuerzos de los
investigadores se han concentrado en la identificacin y caracterizacin de estos antgenos con
el objeto de reemplazar las vacunas que utilizan
agentes infecciosos vivos o muertos, por fracciones antignicas altamente purificadas, por
antgenos recombinantes, por fragmentos
peptdicos qumicamente sintetizados o por la
inoculacin directa del DNA o RNA que codifica la expresin de un antgeno protector. Adems algunos virus estn siendo genticamente
manipulados para eliminar del genoma aquellas
regiones que codifican la expresin de los factores responsables de su virulencia, y de esta
manera desarrollar vacunas efectivas, de virus
vivos que conserven intacta su capacidad de
replicacin y su capacidad para inducir una respuesta inmune protectora, al tiempo que carecen de la posibilidad de revertir a una forma
patognica.
La construccin de una genoteca implica:

a) Eleccin y purificacin del vector de
clonamiento, plsmido o virus, ms adecuado.
b) Purificacin de DNA total, del agente infeccioso
c) Tratamiento, bajo condiciones apropiadas, del
vector de clonamiento y del DNA del agente
infeccioso (DNA forneo o extrao) con la
misma enzima o nucleasa de restriccin. De
esta manera el DNA circular del vector de
clonamiento se convierte en una estructura lineal, mientras el DNA del agente infeccioso
593
Sin ttulo-2
593
5/26/06, 10:26 AM
Figura 36.1. Estrategia general utilizada en la tecnologa del DNA recombinante. El vector de clonamiento elegido es el
plsmido pBR322 que confiere resistencia a los antibiticos ampicilina y tratraciclina, a las bacterias que lo poseen o lo incorporan. Tanto el plsmido como el DNA del agente infeccioso se tratan con la misma enzima de restriccin para convertir el DNA
circular del plsmido en una estructura abierta y lineal, mientras en el DNA del agente infeccioso se generan diversos fragmentos
de restriccin. El vector de clonamiento y los fragmentos de DNA se mezclan y unen luego en presencia de la enzima DNA ligasa,
para generar vectores recombinantes que incorporan algn fragmento de DNA (gen) extrao del agente infeccioso (la insercin del
DNA extrao, en el gen de resistencia a ampicilina, determina la inactivacin del mismo). La amplificacin de los plsmidos en
cultivos de E. coli, permitir seleccionar bacterias tetracilina resistentes por incorporacin de un plsmido recombinante.
se convierte en pequeos "fragmentos de restriccin", algunos de los cuales contendrn el

gen de inters. Como alternativa, la fragmentacin del DNA del agente infeccioso se puede obtener por metodos fsicos como ruptura
de las molculas de DNA por pasaje a travs
de una jeringa o por sonicacin, entre otros.
Finalmente se puede tratar enzimticamente el
DNA total mediante digestin parcial con
DNAsa, esto evita el uso de enzimas de restriccin que pueden cortar en medio de la secuencia codificante de los genes.
d) Mezcla y unin de la forma lineal del vector

de clonamiento y con los fragmentos de DNA
extrao, y tratamiento con la enzima DNA
ligasa para generar vectores recombinantes
(clonamiento del DNA).
e) Introduccin y amplificacin de cada vector
de clonamiento en bacterias, levaduras o clulas de mamfero en cultivo, en condiciones que
slo permiten el crecimiento de los vectores
recombinantes que han incorporado algn gen
o fragmento gnico del DNA extrao (selec-
594
Sin ttulo-2
594
5/26/06, 10:26 AM
cin positiva). De esta manera se genera una

genoteca, que contiene fragmentos de todo el
genoma del agente infeccioso y est por lo tanto constituida por la coleccin completa de
vectores recombinantes generados durante el
proceso de clonamiento.
DNA o RNA, mediante una sonda marcada (por

ejemplo un anticuerpo o un ligando especfico
radiactivamente marcado), que permitan detectar
la expresin del antgeno mismo en cultivos de
bacterias, levaduras o clulas de mamfero transfectadas con los clones o vectores recombinantes
(ver captulo 30).
La produccin de antgenos mediante tcnicas de biologa molecular ofrece un alto rendimiento del inmungeno en cuestin, el que ser
similar, si no idntico a la protena original expresada por el agente infeccioso. Regiones seleccionadas del genoma del agente infeccioso (que codifican la expresin de protenas involucradas en
la induccin de una respuesta inmune protectora)
pueden, luego de su insercin en el vector de
clonamiento, ser amplificadas y expresadas en
cultivos de bacterias, levaduras o clulas de mamfero, a partir de los cuales se purificar el
"antgeno recombinante". El crecimiento de
plsmidos o virus recombinantes en estos cultivos a gran escala, ofrece un gran potencial, tanto
para el desarrollo de vacunas recombinantes no
infecciosas que reemplacen las vacunas tradicionales ya existentes, (B. pertussis, H. influenzae,
pneumococcus, meningococcus, hepatitis B, sarampin, polio), como para la generacin de vacunas contra agentes infecciosos que son difciles
o imposibles de cultivar en el laboratorio.
Una alternativa adicional en la generacin de
vacunas recombinantes es la utilizacin de bacterias o virus recombinantes vivos como inmungeno. La estrategia de preparacin de estas vacunas consiste en escoger el DNA del agente patgeno que codifica la expresin de una protena
capaz de inducir una respuesta inmune protectora, e insertarlo en el genoma de un virus o bacteria de reconocida seguridad y eficacia como vacuna viva. Virus como vaccinia, herpes, varicela,
adenovirus, papiloma, SV40 y polio y bacterias
como Salmonella, BCG y Escherichia coli estn
siendo utilizados como vectores de clonamiento
para el desarrollo de estas vacunas recombinantes
vivas. El segmento gnico protector es insertado
en el genoma viral o bacteriano de manera tal que
la replicacin del vector recombinante desencadene en los individuos inoculados, una respuesta
mixta contra el vector y contra el producto gnico
del DNA extrao del agente infeccioso. Este DNA
extrao del patgeno debe ser insertado en un lugar tal del genoma del vector recombinante, que
no se alteren los mecanismos de replicacin ni la
sobrevida del vector en el hospedero. Al incorpo-
La estrategia alternativa de clonamiento a

partir de RNA mensajero del agente infeccioso y
la consiguiente construccin de una genoteca de
cDNA implica:
a) Purificacin del RNA mensajero total o de una
fraccin del RNA mensajero del patgeno.
b) Transcripcin inversa del RNA mensajero, para
generar una copia de DNA complementario
(cDNA). La reaccin es catalizada por la enzima transcriptasa inversa, que utiliza la molcula de mRNA como molde para la sntesis
de una molcula de cDNA.
c) La hebra simple de cDNA es convertida en una
doble hlice de DNA en una reaccin
catalizada por la enzima DNA polimerasa.
d) Corte del vector de clonamiento con enzima
de restriccin y agregado de pequeas secuencias nucleotdicas homopolimricas en los extremos abiertos del vector y de secuencias
homopolimricas complementarias en los extremos del cDNA.
e) Insercin de las molculas de cDNA en el
vector de clonamiento, en presencia de la enzima DNA-ligasa. Se generan as vectores
recombinantes de cDNA
f) Introduccin y amplificacin de cada vector
de clonamiento en bacterias, levaduras o clulas de mamfero en cultivo, en condiciones que
slo permitan el crecimiento de vectores
recombinantes. Se genera as una genoteca de
cDNA que contiene slo las regiones que se
transcriben del genoma del patgeno y est
constituida por la coleccin completa de
vectores recombinantes generados a partir del
mRNA del agente infeccioso.
Una vez construida una biblioteca genmica
o una biblioteca de cDNA, debe realizarse la identificacin de los clones recombinantes que contienen el gen que codifica la expresin del antgeno
de inters. Esta identificacin y seleccin de clones
recombinantes especficos puede hacerse por
hibridizacin in situ con una sonda radiactiva de
595
Sin ttulo-2
595
5/26/06, 10:26 AM
rarse en la clula del individuo vacunado, el vector

recombinante dirigir la sntesis de sus propias
molculas incluyendo la protena codificada por
el gen extrao del patgeno. Esta protena ser
luego adecuadamente procesada, glicosilada e insertada en la membrana de la clula infectada o
bien procesada y presentada al sistema inmune del
hospedero, en asociacin con una molcula MHC
en la superficie de la misma clula.
La estrategia de virus o bacterias recombinantes ha sido utilizada con xito para el antgeno
de superficie de la hepatitis B, glicoprotena D del
virus Herpes simplex, hemoaglutinina del virus
influenza, glicoprotena del virus rabia,
glicoprotena gp 160 y otra protenas de HIV, virus Epstein-Barr, cytomegalovirus, parainfluenza,
sarampin y virus respiratorio sincicial.
Finalmente es importante sealar que una limitacin de la tecnologa del DNA recombinante
es que ella no es aplicable a la sntesis de antgenos
hidrocarbonados o lipidicos o pptidos glicosilados en los que epitopo inductor de la respuesta
inmune protectora reside en la porcin hidrocarbonada de la molcula. Pero anticuerpos antiidiotpicas que imiten o representen imgenes internas de estas estructuras epitpicas, pueden constituir una alternativa para el desarrollo de vacunas
protectoras.
desarrollar una respuesta inmune contra un

antgeno al cual nunca ha estado expuesto.
Los antgenos de muchos agentes infecciosos son de naturaleza hidrocarbonada o lipdica y
no pueden prepararse por DNA recombinante o
sntesis qumica, pero anticuerpos anti-idiotpicos
que representen imgenes internas de tales
antgenos pueden constituir excelentes vacunas,
las que pueden adems prepararse a travs de la
produccin de anticuerpos monoclonales antiidiotpicos.
Existen numerosos ejemplos de infecciones
experimentales en las que se ha demostrado induccin de una efectiva repuesta inmune protectora mediante la inmunizacin anti-idiotpica.
Entre ellas podemos mencionar infecciones virales
por virus Sendai, virus rabia, herpes simplex, polio hepatitis B y el virus de la inmunodeficiencia
humana (VIH) para el cual se ha preparado un anticuerpo anti-idiotpico que representa la imagen
interna de CD4 y por lo tanto compite en la unin
con el virus; bacterias como Streptococcus
pneumoniae, Lysteria monocytogenes, E. coli; infecciones parasitarias como malaria, schistosomiasis, trypanosomiasis africana y leishmaniasis.
5. VACUNAS SINTTICAS
Un tercer camino para la preparacin de vacunas distintas de las vacunas tradicionales lo
constituye la utilizacin de pptidos sintticos que
contienen o representan la secuencia aminoacdica
de eptopos protectores derivados de antgenos
proteicos.
Aunque la respuesta inmune contra una protena extraa es bastante compleja, se ha demostrado que pequeos pptidos derivados de la protena original reaccionan con anticuerpos producidos contra la protena completa. Adems la frecuencia con la cual anticuerpos contra pequeos
pptidos de menos de 20 aminocidos reaccionan
o reconocen la protena de la cual derivan, es bastante ms elevada de lo que se esperaba y algunos
pptidos han sido tan efectivos como inmungenos
que muchos investigadores han centrado su inters en la sntesis de pptidos que, presentados y
administrados de manera apropiada, puedan estimular una respuesta inmune protectora efectiva
contra antgenos de agentes infecciosos. En la
bsqueda de eptopos individuales, la atencin se
ha centrado en los eptopos estructurales o continuos, que estn confinados a una corta secuencia
4. VACUNAS ANTI-IDIOTPICAS
Un camino alternativo para la produccin de
vacunas efectivas es la utilizacin de anticuerpos
anti-idiotpicos que reconocen el sitio de combinacin o paratopo, de un anticuerpo especfico para
un agente infeccioso.
Por definicin un suero anti-idiotpico producido contra inmunoglobulinas especficas para
un eptopo determinado, contendr anticuerpos
que reconocen determinantes antignicos
idiotpicos presentes en la porcin variable del
anticuerpo que reconoce al eptopo original (ver
captulo 13). Algunos de estos anticuerpos antiidiotpicos poseen un sitio de combinacin que se
asemeja o representa al determinante antignico
original contra el cual est dirigido el idiotipo.
La inoculacin de anticuerpos anti-idiotpicos
que poseen tal imagen interna de un eptopo, puede inducir una respuesta inmune contra ese
determiante antignico o ms ampliamente contra el antgeno o el agente infeccioso que posea
tal eptopo. De esta manera un individuo puede
596
Sin ttulo-2
596
5/26/06, 10:26 AM
aminoacdica de la protena y que pueden ser fcilmente sintetizados.

El atractivo de los pptidos sintticos como
vacunas parece bastante claro: ellos evitaran la
necesidad de vacunas compuestas de preparados
inactivos o de cepas no patgenas del agente infeccioso. Evitaran adems la necesidad de una
fuente de material biolgico o la sangre de individuos afectados a partir de los cuales se preparan
las fracciones antignicas que sirven de base para
las vacunas tradicionales. No requieren del cultivo y manipulacin de organismos patgenos y
evitan el complejo proceso biotecnolgico implicado en la manipulacin gentica de virus, bacterias, levaduras o clulas eucariontes para la produccin masiva de protenas antignicas
recombinantes. Todo esto es reemplazado por un
proceso de sintesis qumica de pptidos, de bastante menor costo que el de las vacunas tradicionales o de las vacunas recombinantes. Las vacunas basadas en pptidos sintticos son uniformes,
especficas y su contenido perfectamente conocido y libre de los innecesarios e indeseables componentes del husped o del agente infeccioso.
Para sintetizar un pptido antignico es necesario determinar la secuencia aminoacdica del
eptopo reconocido por el sistema inmune del individuo. Luego debe ser administrado en la forma, dosis y ruta ms apropiada para la induccin
de una respuesta inmune protectora.
La identificacin y aislamiento de antgenos
protectores mediante las tcnicas de biologa
molecular, permite determinar la secuencia
nucleotdica de los respectivos genes y deducir la
secuencia aminoacdica de las protenas que codifican. Analizando luego la secuencia aminoacdica de una protena, es posible predecir qu regiones o segmentos de la molcula estarn expuestos en la superficie de la protena en solucin y,
por lo tanto, disponibles para interactuar o ser reconocidos por el sistema inmune del individuo.
La tcnica de difraccin de rayos X de protenas, purificadas y cristalizadas, puede detectar
las regiones que protruyen o sobresalen en la superficie de la molcula permitiendo predecir
eptopos que estimulen linfocitos B o linfocitos T.
Existen adems programas computacionales que
partiendo de la secuencia aminoacdica de una protena pueden combinar la deteccin de estructuras beta con la hidropaticidad o anfipaticidad de
las distintas regiones de la molcula (existencia
de dominios hidroflicos o hidrofbicos) para predecir qu dominios estarn expuestos en la super-
ficie de la molcula en solucin. Pptidos sintticos pueden entonces sintetizarse para identificar
eptopos protectores los que sern acoplados ms
tarde a un carrier adecuado para generar un preparado antignico eventualmente seguro y eficaz
como vacuna sinttica.
Por otro lado, conociendo la secuencia
aminoacdica de una protena es posible establecer o confeccionar una biblioteca peptdica constituida por todos los pequeos pptidos de secuencia aminoacdica superpuesta que puedan
sintetizarse cubriendo toda la secuencia desde el
extremo amino al extremo carboxilo de la molcula. As, si la biblioteca se construye en base a
pptidos de 10 aminocidos, el primer pptido incluir desde el aminocido 1 al 10, el segundo incluir los aminocidos 2 al 11, el tercero ir del
aminocido 3 al aminocido 12 y as sucesivamente hasta el ltimo residuo en el extremo carboxilo
de la protena. Los distintos pptidos se prueban
luego para determinar su habilidad para ser reconocidos por la respuesta inmune protectora contra
la protena original y para inducirla bajo condiciones adecuadas. De esta manera se logra identificar
los pptidos sintticos que contienen o imitan
(mimotopos) la estructura de eptopos antignicos
y que pueden por lo tanto utilizarse como base
para el desarrollo de una vacuna sinttica.
Diferentes modelos experimentales han mostrado que pptidos sintticos pueden inducir inmunidad protectora contra diversos agentes infecciosos: tetradecapptido 188-201 de toxina
diftrica, pptido 135-155 de antgeno de superficie de hepatitis B; pptido 91-108 de
hemaglutinina del virus influenza, pptido 134160 de protena VP1 del virus aftosa y diversos
pptidos de txina del clera, glicoprotena D del
virus herpes, protena M de Streptococcus
pyogenes, Mycobacterium tuberculosis, pilina de
E. coli, pilina de Neisseria gonorrohoeae, protena circumsporozotica de Plasmodium falciparum
y otros plasmodios de la malaria, etc. En la mayora de los casos los pptidos han sido administrados con un adyuvante y covalentemente acoplados a un carrier proteico para hacerlos
inmunognicos. La eleccin de un adyuvante y de
un carrier apropiado es por lo tanto de primera
importancia para el desarrollo de vacunas sintticas de uso humano.
Finalmente debe sealarse que un aspecto importante a considerar en el desarrollo de vacunas
sintticas es la calidad e intensidad de la respuesta inmune protectora y la induccin o no de me-
597
Sin ttulo-2
597
5/26/06, 10:26 AM
moria inmunolgica por un tiempo prolongado,

en comparacin con la respuesta inmune inducida por la protena original o por el agente infeccioso completo. La induccin de una respuesta
inmune requiere de un cierto grado de complejidad antignica para estimular las necesarias
interacciones celulares entre macrfagos, clulas
presentadoras de antgeno, linfocitos T y linfocitos
B que conducen al desarrollo de una efectiva respuesta protectora. La omisin de cualquiera de
estos eptopos funcionales limitar la eficacia de
una vacuna sinttica.
Como es difcil estabilizar una estructura
peptdica en el caso de un pptido que representa
un eptopo B de tipo conformacional, se han empleado estrategias alternativas para preservar la
estructura antignica de una secuencia peptdica.
En general, se han usado regiones beta-loops
de varias protenas andamio donde se ha expresado el pptido de inters. As, se han utilizado entre otras, las regiones hipervariables de
inmunoglobulinas, regiones beta-loops de protena de superficie de virus filamentosos de E. coli,
de la protena gp120 del virus VIH y la protena
srica humana transferrina.
El desarrollo de una eventual vacuna sinttica contra un agente infeccioso no es entonces una
tarea fcil. Requiere un conocimiento de la secuencia aminoacdica de la protena protectora, requiere
la identificacin de eptopos T y eptopos B y
muchas veces los eptopos B son eptopos
conformacionales que no son fcilmente imitados
por pptidos sintticos. Los pptidos, por lo general, no inducen sntesis de anticuerpos y deben
conjugarse a un carrier que contenga eptopos T y
administrarse junto a un adyuvante para hacerlos
inmunognicos. Surge entonces el problema de
seleccionar carriers y adyuvantes apropiados para
uso humano. La toxina tetnica por ejemplo, ha
sido usada para vacunacin humana por muchos
aos sin efectos colaterales adversos y ha funcionado muy bien como adyuvante en modelos experimentales con diversos animales, pero su utilizacin como adyuvante en humanos induce la activacin de linfocitos T supresores que inhiben la
respuesta inmune contra el pptido (supresin
epitpica). Este fenmeno de "supresin epitpica"
es similar pero opuesto, al "efecto carrier" descrito para los conjugados carrier hapteno. En el efecto
carrier, la respuesta secundaria de anticuerpos contra un hapteno especfico requiere la inoculacin
de un complejo carrier-hapteno formado con el
mismo carrier utilizado en la inmunizacin pri-
maria; la respuesta requiere entonces sensibilizacin previa con el carrier, para la activacin de
linfocitos T helper carrier especficos. En el fenmeno de supresin epitpica, en cambio, la sensibilizacin previa con el carrier, estimula la activacin de linfocitos T supresores carrier especficos que inhiben la respuesta contra el pptido
(hapteno) en el encuentro secundario con el mismo carrier.
6. VACUNAS DE DNA
Al inicio de la dcada de los 90, evidencias
experimentales demostraron que inoculaciones directas in vivo de genes incluidos en vectores de
expresin eucariticos en animales de laboratorio
pueden facilitar una fuerte respuesta inmune contra los antgeno expresados. Este mtodo se ha
denominado Inmunizacin Gentica o Vacunas de DNA y ha sido utilizado para promover
una efectiva respuesta inmunoprotectora de tipo
humoral y celular en una amplia variedad de modelos animales pre-clnicos para enfermedades
infecciosas, alergia, cncer y cuadros autoinmunes.
La vacunacin de DNA es particularmente
efectiva para la induccin de clulas T
citotxicas. Recientemente, se ha reportado la
primera vacuna en una ensayo clnico contra
linfoma y malaria y existen resultados preliminares en ensayos clnicos humanos en infeccin
por VIH, lo que ha confirmado el valor e inters
por esta estrategia de inmunizacin en el modelo humano. Efectivamente, la vacuna de DNA
es el mtodo ms cercano para imitar la inmunidad natural y puede ser utilizado como una estrategia para programar el sistema inmune a responder contra una gran variedad de antgenos, e
inducir de esta manera proteccin contra diversas enfermedades.
Las vacunas de DNA consisten en un
plasmidio bacterial que contiene un promotor viral
fuerte como Cytomegalovirus (CMV), Rous Sarcoma Virus (RSV), Simian Virus 40 (SV40), el
gen de inters, una secuencia de terminacin
transcripcional y de polyadenylation, y finalmente un Intron. El plasmidio es cultivado en E. coli,
purificado y posteriormente inyectado en el husped usando una solucin salina o con la ayuda de
un adyuvante. El plasmidio inyectado es adsorbido
por las clulas del hospedero y producirn luego
la protena codificada por el DNA incluido en el
vector. La expresin de plasmidios usados para
598
Sin ttulo-2
598
5/26/06, 10:26 AM
nerar una respuesta inmune sin necesidad de un

vector vivo autorreplicante. La expresin del gen
extrao, por las clulas del hospedero, puede conducir a la sntesis de una protena mucho ms cercana a la protena original del agente infeccioso y
puede ser ms adecuadamente procesada y presentada al sistema inmune. Las vacunas de DNA
tendran adems, un menor costo de produccin
que cualquier otro tipo de vacunas y podran se
convertidas en un "pellet" seco, estable a temperatura ambiente, de fcil almacenamiento y transporte y, de fcil reconstitucin ya que slo requerira de agua antes de su administracin.
Sin embargo, es importante sealar que el
uso de vacunas de DNA conlleva tambin una
serie de riesgos como las eventuales consecuencias a largo plazo, de la de existencia de un
plsmido u otro vector de clonamiento en las
clulas del hospedero y la expresin constitutiva
de un gen extrao en las clulas de los individuos inmunizados. El DNA del vector puede adems incorporarse en el genoma del hospedero con
el consiguiente riesgo de transformacin celular
por integracin de un oncogen, activacin de un
proto-oncogen o inactivacin de un gen supresor de oncogenes.
En respuesta a esta preocupacin, se han establecido desde la mitad de los aos 90, una serie
de normas y reglamentacines que regulan el uso
de las vacunas de DNA Diversas normas han sido
establecidas por agencias Norteamericanas y Europeas basadas en las experiencias obtenidas a
partir de estudios preclnicos y clnicos. Entre los
varios requerimientos de seguridad se incluyen
conocimiento sobre la distribucin en tejidos, la
persistencia en el organismo y la eventual integracin en el genoma del hospedero, del DNA inoculado.
En conclusin, la Inmunizacin Gentica,
ciertamente, ofrece potenciales soluciones a algunos de los desafos asociados al desarrollo de vacunas: brinda una amplia proteccin contra diferentes cepas virales debido a la respuesta T
citotxica mediada por linfocitos T que reconocen eptopos de protenas conservadas e inducen
una respuesta inmune duradera. La respuesta de
clulas T helper facilita la combinacin de diferentes inmungenos y adyuvantes moleculares en
una preparacin nica, induciendo una fuerte e
inmunomodulada respuesta inmune con la opcin
de inmunizacin simultnea para varias enfermedades.
la Inmunizacin Gentica no es replicada en el

husped mamfero y no se integra al DNA
cromosomal del individuo, aunque recientemente
se han reportado dos casos de integracin
cromosomal del gen inyectado.
El xito logrado en la inmunizacin
intramuscular de animales de experimentacin con
vacunas que contienen DNA, ha proporcionado
un sorprendente y revolucionario mtodo para la
generacin de anticuerpos y la activacin de
linfocitos T citotxicos especficos contra la protena codificada por ese DNA. La eficacia de estas vacunas gnicas parece depender de la eficiencia de la transfeccin (o incorporacin y expresin del DNA) y la eficiencia con que las clulas
transfectadas presentan al sistema inmune las
protenas codificadas por el DNA.
La eficacia de la inmunizacin con DNA, fue
inicialmente demostrada usando la inoculacin
intramuscular de ratones con un plasmidio de DNA
que codifica la hemoaglutinina (HA), una
glicoprotna de superficie del virus influenza A.
El experimento demostr la posibilidad de generar altos niveles de anticuerpos anti-HA que protegen a los ratones inmunizados, en experimentos
de desafio con cepas homlogas del virus de la
influenza.
Este modelo de vacunacin en animales, ha
sido usado tambin ocupando el gen que codifica
una protena interna conservada (la nucleoprotena) del virus influenza A. Los animales as
inmunizados desarrollaron tanto anticuerpos
nucleoprotena-especficos, como una respuesta
celular de tipo citotxico. La inyeccin
intramuscular de 100 microgramos de plsmido,
que contiene el DNA codificante de la
nucleoprotena del virus influenza, induce en ratones la expresin citoslica de la protena y un
adecuado procesamiento y presentacin al sistema inmune, de fragmentos peptdicos asociacidos
con molculas del Complejo Principal de
Histocompatibilidad. Se genera as una buena respuesta inmune contra la protena, pero sta es an
mayor si la vacuna gnica se co-inyecta con, o
contiene plsmidos que codifican citoquinas como
GM-CSF (factor estimulador de colonias de
granulocitos y macrfagos). El mtodo ha sido
utilizado tambien con xito para la generacin de
una eficiente respuesta inmune contra la
glicoprotena del virus rabia y contra
Mycobacterium tuberculosis.
Las ventajas de las vacunas gnicas sobre
otros tipos de vacunas son mltiples: pueden ge-
599
Sin ttulo-2
599
5/26/06, 10:26 AM
con patgenos con genomas mayores tales como

las bacterias y parsitos. Expression Library
Immunization usado con genotecas de espresin
de cDNA e Inmunizacin Gentica pueden bsicamente identificar los genes protectores dentro
de un genoma ofreciendo un sistema imparcial
para descubrir candidatas para vacunas en varios
modelos de enfermedad.
7. VACUNAS GENMICAS
Un nuevo mtodo para el desarrollo de vacunas, llamado Inmunizacin Genmica o
Expresion Library Immunization (ELI), hace
uso de tcnicas de Inmunizacin con DNA partiendo de la suposicn o del conocimiento que la
coleccin completa de antgenos de un patgeno,
debe estar necesariamente codificada en su
genoma. Utilizando entonces como inmungeno
gentico, toda la Genoteca de Expresin del
DNA de un agente patgeno (o toda la coleccin
gnica o genmica de cualquier patgeno) pueden obtenerse resultados efectivos de presentacin
antignica y de proteccin inmunolgica en forma de una vacuna viva sin riesgo. La evidencia
experimental en modelo murino ha demostrado
que an una Genoteca de Espresin parcial hecha a partir del DNA de Mycoplasma pulmonis,
Leishmania major, Trypanosoma cruzi y
Plasmodium chabaudi son capaces de proporcionar proteccin contra la agresin por el agente
patgeno.
El reciente desarrollo de la Inmunizacin
Genmica se ha perfeccionado en base a la disponibilidad de la informacin de las secuencias
genmicas de varios patgenos. Esta tecnologa
est basada en las sorprendentes evidencias recin
encontradas que fragmentos amplificado por PCR,
pueden ser hechos transcripcionalmente activos
simplemente cruzndolos con secuencias activas
de tipo promotor y terminador. Cuando se mezclan secuencias codificante, promotora y
terminadora se cruzaron por hibridacin espontneamente para formar "Elementos de Expresin
Linear" (LEE). Ademas, cuando estas LEE fueron transfectadas en cultivo celular o inyectadas
en animales se obtuvo un considerable nivel de
expresin de la secuencia codificada. Significativamente, cuando genes/antgenos del genoma del
patgeno humano, Mycobacterium tuberculosis,
fueron utilizados como secuencias codificadas y
las secuencias LEE transcripcionalmente activas
fueron administradas por Inmunizacin del DNA
intradrmica por gene gun o inyectadas
intramuscularmente, los animales inyectados desarrollaron anticuerpos contra el antgeno de la
tuberculosis.
Estas dos nuevas tecnologas, cuando propiamente asociadas a un mtodo de screening, pueden proporcionar una solucin al dificil problema
de descubrir qu gen del patgeno incluir en el
vector gentico de inmunizacin especialmente
8. ADYUVANTES, INMUNOMODULADORES E INMUNOGENICIDAD

Los adyuvantes, a diferencia de los carriers
proteicos son substancias que no forman enlaces
covalentes con los antgenos con que administran y estn destinados a aumentar la inmunogenicidad de molculas como protenas, pptidos
e hidratos de carbono, que son muy poco inmunognicas.
La asociacin de protenas con adyuvantes
tradicionales como hidrxido de aluminio (almina) o su emulsin con adyuvantes que contienen
aceites minerales y productos bacterianos (tabla
36-4), permiten convertir molculas solubles en
un complejo particulado que ser ms fcilmente
ingerido por fagocitos profesionales y adecuadamente procesado y presentado para la induccin
de una respuesta efectiva. En general los diversos
adyuvantes retardan la liberacin de los antgenos
en el sitio de inculacin, facilitan su ingestin por
macrfagos y otros fagocitos profesionales e inducen la activacin de los mismos, lo que favorece el procesamiento y presentacin de antgenos
en asociacin con molculas del complejo principal de histocompatibilidad.
Los complejos inmunoestimuladores
(ISCOM= immune stimulating complex) son
glicsidos que pueden formar complejos
multimricos con diversos antgenos y pueden
atravesar las membranas celulares, como hacen
los liposomas. Esto permite el ingreso de antgenos
al citoplasma celular facilitando su adecuado procesamiento y presentacin.
Por ltimo es importante sealar que
citoquinas como interleuquina- 12 (IL-12), que
estimula la induccin de una respuesta celular Th1
dependiente e inhibe el desarrollo de una respuesta Th2, pueden constituirse en coadyuvantes o
inmunomoduladores importantes para el desarrollo de vacunas efectivas contra una enfermedad
infecciosa.
El rol adyuvante de ciertas secuencias
600
Sin ttulo-2
600
5/26/06, 10:26 AM
inmunoestimuladoras (ISSs)de DNA bacterianos,

ha sido recientemente propuesto en funcin de sus
habilidades estimulatodoras de respuesta T
helper-1 (Th1) en animales vacunados con genes
o protenas. Se trata de motivos de secuencia que
contienen dinucletidos demetilado CpG y que
comnmente se encuentran en DNA bacteriano.
Regiones no codificantes de plsmido de DNA
enriquecido en ISS o ISS oligonucletidos (ISSODNs), estimulan una potente respuesta inmune
al ser coadministrado con antgenos. Estas secuencias ISS activan directamente macrfagos, clulas NK y linfocitos, induciendo sntesis y secrecin de citoquinas, quimioquinas e inmunoglobulinas como parte de la respuesta inmune innata inducida por interacin de las secuencias CpG
con receptores especficos de la familia de receptores Toll-like, en la superficie de estas clulas.
Se ha demostrado que ISS-DNAs juegan un papel
supresor en la sntesis de IgE, pero promueven la

sntesis de IgG2a y la produccin de IFN-.
Adicionalmente, la secuencia ISS promueve la
secrecin de un particular patrn de citoquinas,
como IFN-, IFN-, IFN-, IL-12 e IL-18, que
favorecen la respuesta humoral TH1 y la inmunidad celular. La adicin de la secuencia ISS como
adyuvante molecular o como subunidad en vacunas con virus inactivados, pouede conducir a la
generacin de una respuesta inmune efectiva a
las infecciones virales, tanto en la inmunizacin
con DNA como en la inmunizacin con antgeno
proteico tradicional.
El desarrollo entonces de adyuvantes e
inmunoduladores apropiados es una necesidad
evidente para la administracin de vacunas en una
forma inmunognicamente adecuada para la induccin de una respuesta inmune protectora efectiva un agente infeccioso.
Tabla 36-4. Adyuvantes que aumentan la inmunogenicidad de diversos antgenos e inducen una
respuesta inmune efectiva
Adyuvante
Composicin
Mecanismo de accin
Adyuvante Incompleto
de Freund
Emulsin de aceite
mineral y agua
Retarda la liberacin de
antgenos y facilita su
ingestin por fagocitos
Adyuvante Completo
de Freund`s
Emulsin de aceite
mineral , agua y
mycobacterias muertas
Retarda liberacin de Ag.

facilita su ingestin y
activa macrfagos
Adyuvante de Freund`s
con pptidoglicano
muramil dipptido
(MDP= N-acetyl-muramyl
L-alanil.D isoglutamine)
Emulsin de aceite
mineral, agua y MDP
de mycobacterias

facilita su ingestin
activa macrfagos
Almina o Hidrxido
de Aluminio
Gel de hidrxido de
aluminio

facilita su ingestin y
activa macrfagos
Polinucletidos de
doble hlice
Poli-inosina y cido
policitidlico (poli-IC)
o cido poliadenlicopoliuridlico (poli-AU)
Activacin de linfocitos
T antgeno especficos y
activacin de macrfagos
Complejos Inmunoestimulantes (ISCOMs)
Matriz de Quail A,
componente activo de
la saponina
Entrega antgenos en el
citosol y activa
linfocitos T citotxicos
601
Sin ttulo-2
601
5/26/06, 10:26 AM
Gerloni, M.; Billetta, R.; Xiong, S. and Zanetti,

M., Somatic transgene immunization with DNA
encoding an immunoglobulin heavy chain, DNA
Cell Biol 16:611, 1997.
LECTURAS SUGERIDAS
Ada, Gordon L. Vaccines in Fundamental
Immunology, Edited by William Paul, Third
Edition, Raven Press Limited, New York, 1993,
pp. 1309-1352,.
Hemmi, H.; Takeuchi, O.; Kawai, T.; Kaisho, T.;

Sato, S.; Sanjo, H.; Matsumoto, M.; Hoshino, K.;
Wagner, H.; Takeda, K. and Akira, S., A Tolllike receptor recognizes bacterial DNA, Nature
408:740, 2000.
Aggarwal, A. et al., Oral salmonella: Malaria

circumsporozoite recombinants induce specific
CD8+ cytotoxic T cells. J. Exptl. Med., 172:
1083.1090, 1990.
Milich, D.R., Synthetic T and B cell ercognition

sites:Implications for vaccine development, Adv.
Immunol. 45: 195-282, 1987.
Audibert, F.M.. and Lise, L.D., Adjuvants: current status, clinical perspectives and future prospects, Immunol. Today, 14: 281-284, 1993.
Nussenzweig, V., and Nussenzweig, R.S., Rationale for thedevelopment of an engineered sporozoite malaria vaccine. Adv. Immunol. 45: 283305, 1989.
Barry, M.A., Lai, W.C. and Johnston, S.A., Protection against mycoplasma infection using expression-library immunization, Nature 377:632,
1995.
Nussenzweig, R.S. and Long, C.A., Malaria vaccines: multiple targets, Science 265: 1381-1383,
1994.
Brown, F., The potential of peptides as vaccines,

Semin. Virol. 1: 67-74, 1990.
Brown, F., Schild, G.C. and Ada, G.L., Recombinant vaccinia viruses as vaccines, Nature 319:
549-552, 1986.
Piedrafita, D.; Xu, D.; Hunter, D.; Harrison, R.A.;

and Liew, F.Y., Protectiveimmune responses induced by vaccination with an expression genomic
library of Leishmania major, J Immunol
163:1467, 1999.
Cease, K.B. and Berzofsky, J.A.. Toward a vaccine for

AIDS: The emergence of
Immunobiology-Based vaccine development,
Annu. Rev. Immunol. 12: 923-989, 1994.
Roman, M.E.; Martin-Orozco, J.S.; Goodman,

M.D.; Nguyen, Y.; Sato, A.; Ronaghy, R.S.;
Kornbluth, D.,; Richman, D.,; Carson, D.A., and
Raz, E., Immunostimulatory DNA sequences
function as T helper-1-promoting adjuvants, Nat
Med 3:849, 1997.
Darji, A.; Guzman, C.A.; Gerstel, B.; Wachholz,

P.; Timmis, K.N.; Wehland, J.; Chakraborty, T.;
and Weiss, S., Oral somatic transgene vaccination using attenuated typhimurium, Cell 91:765,
1997.
Smith, H.A. and Klinman, D.M., The regulation

of DNA vaccines, Current Opinion in Biotechnology, 12: 299303, 2001.
Dietrich, G.; Bubert, A.; Gentschev, I.; Sokolovic,

Z.; Simm, A.; Catic, A.; Kaufmann, S.H.; Hess,
J.; Szalay, A.A.; and Goebel, W., Delivery of
antigen- encoding plasmid DNA into the cytosol
of macrophages by attenuated suicide Listeria
monocytogenes [see comments], Nat Biotechnol
16:181, 1998.
Smooker, P.M.; Steeper, K.R.; Drew, D.R.;

Strugnell, R.A.; and Spithill, T.W., Humoral responses in mice following vaccination with DNA
encoding glutathione S-transferase of Fasciola
hepatica: effects of mode of vaccination and the
cellular compartment of antigen expression,
Parasite Immunol 21:357, 1999.
Fynan, E.F. et al., DNA vaccines: Protective

immunizatios by parenteral, mucosal, and genegun inoculations, Proc. Nat. Acad.Sci. USA. 90:
11478-11482, 1993.
Staats, H.F. et al., Mucosal immunity to infection with implications for vaccine development,
602
Sin ttulo-2
602
5/26/06, 10:26 AM
Stover, C.K., Recombinant vaccine delivery systems and encoded vaccines, Curr. Opin.
Immunol. 6: 568-571, 1994.
Sykes, K.F., and Johnston, S. A., Linear expression elements: a rapid, in vivo, method to screen
for gene functions [see comments], Nat
Biotechnol 17:355, 1999.
Tang, D.C., De Vit, M. and Johnston, S.A., Genetic immunization is a simple method for eliciting an immune response, Nature 356:152, 1992.
Tanner, M., Teuscher, T. and Alonso, P.L., The
first malaria vaccine, Parasitol. Today 11: 1013, 1995.
Ulmer, J.B., Hetrologous protection against influenza by injection of DNA encoding a viral protein, Science 259: 1745-1749, 1993.
Vergara, U. et al., Multiple non-repeated epitopes
on the circumsporozoite protein of Plasmodium
knowlesi, Mol. Biochem. Parasitol. 14: 283-292,
1985.
Vergara, U. et al., Conserved group-specific
epitopes of the circumsporozoite proteins revealed
by antibodies to synthetic peptides, J. Immunol
134: 3445-3448, 1985.
Vergara, U. and Tam. J., A novel design of peptide Immunogens: Synthetic peptide with a reversible handle for attachment to protein carriers,
Peptide Research 2: 134-139, 1989.
Waine, G.J. and McManus, D.P., Nuclei acids:
Vaccines of the future, Parasitol Today 11: 113116, 1995.
Williams, R. S.; Johnston, S.A.; Riedy, M.; De Vit,
M.J.; McElligott, S.G. and Sanford, J.C., Introduction of foreign genes into tissues of living mice
by DNA-coated microprojectiles, Proc Natl Acad
Sci U S A 88:2726, 1991.
Xiang, Z. and Ertl, H.C.J., Manipulation of the
immune response to a plasmid-encoded viral antigen by co-inoculation with plasmids expressing
cytokines, Immunity 2: 129-138, 1995.
603
Sin ttulo-2
603
5/26/06, 10:26 AM
604
Sin ttulo-2
604
5/26/06, 10:26 AM

Captulo 37
MECANISMOS DE INMUNIDAD ANTITUMORAL
Flavio Salazar O. y Javier Puente P.
1. Introduccin
2. Defensa inmunolgica contra el
cncer
2.1. La hiptesis de vigilancia inmunolgica antitumoral
2.2. Componentes de la respuesta inmune antitumoral
3. Antgenos asociados a tumores
3.1. Clasificacin de AAT reconocidos por LT
4. Estrategias tumorales de evasin

inmunolgica
4.1. Disminucin de la expansin de
las molculas MHC
4.2. Factores inmunosupresores producidos por los tumores
5. Terapia inmunolgica contra el
cncer
5.1. Anticuerpos monoclonales
5.2. Terapia biolgica contra el cncer
5.2.1. Utilizacin de citoquinas
5.3. Inmunizacin activa contra tumores
605
Sin ttulo-2
605
5/26/06, 10:26 AM
606
Sin ttulo-2
606
5/26/06, 10:26 AM
RESUMEN
Una de las funciones asignadas al sistema inmune es la inmuno-vigilancia, propiedad que
le permitira controlar el desarrollo de clulas tumorales. Sin embargo, la gran mayora de las
clulas tumorales son dbilmente inmunognicas, hecho sumado a que individuos
inmunosuprimidos, ya sea por tratamiento farmacolgico o por inmunodeficiencias genticas no
presentan una mayor incidencia de tumores. Las clulas tumorales presentan adems diversas
estrategias de evasin de la respuesta inmunolgica; disminucin de la expresin de las MHC y
la produccin de molculas inmunosupresoras. La especificidad de los LT, especialmente los LT
CD8+, ha permitido ir conociendo un gran conjunto de antgenos asociados a tumores (AAT),
muchos de los cuales corresponden a protenas normalmente expresadas y una muy pequea
fraccin a antgenos tumorales propiamente tales. Adems, en algunos casos, han podido utilizarse anticuerpos monoclonales que reconozcan a antgenos tumorales en diagnstico y terapia.
La inmunoterapia antitumoral (terapia celular adoptiva) ha emergido de forma tal de estimular los mecanismos defensivos del individuo y se basan en la estimulacin in vitro de LT
especficos (clulas TIL) o de clulas NK (clulas LAK) del paciente las que una vez activadas
son readministradas al paciente. En este mismo sentido se han utilizado citoquinas estimuladoras
de la respuesta inmunolgica como tratamiento en forma individual y en conjunto con la terapia
celular adoptiva. Entre las estrategias ms recientes se encuentra la utilizacin de clulas tumorales
modificadas genticamente, pptidos antignicos tumorales y DNA que exprese a los pptidos
antignicos y a molculas co-activadoras. Todos estos casos son representativos de la denominada vacuna contra el cncer, vacuna de caractersticas teraputicas diseada para estimular la
respuesta inmunolgica del paciente. Este conocimiento tambin ha permitido utilizar clulas
dendrticas a las que se les incorpora in vitro el pptido antignico, y se le inserta el gen de
molculas co-activadoras transformndolas en clulas presentadoras de antgenos tumorales y de
las seales coactivadoras necesarias para una interaccin eficiente con los LT especficos.
qumicas, como las producidas por el humo del

tabaco, la irradiacin de rayos ultravioleta, algunas infecciones virales y mutaciones genticas
heredadas son algunos de estos factores. Junto con
la proliferacin celular descontrolada, estos cambios genticos dan origen a cambios en la expresin de protenas en la clula maligna, lo que se
manifiesta en la sobre-expresin de algunos genes
o en la activacin de genes que generalmente no
se expresan en ciertos tejidos normales. Estos
genes dan lugar a protenas que pueden ser reconocidas como aberrantes por el sistema inmune y
propiciar una respuesta antitumoral.
Aunque esta respuesta inmunolgica puede
ser humoral, a travs de anticuerpos que reconocen protenas expresadas en la membrana de las
clulas tumorales, experimentos realizados en animales y estudios recientes en humanos demuestran que el papel principal en la reaccin inmune
1. INTRODUCCIN
Las neoplasias son tejidos formados por clulas que debido a mutaciones en su material
gentico, ven alterada la regulacin de su ciclo
celular y comienzan a proliferar descontroladamente. La acumulacin de clulas neoplsicas
asociadas a clulas infiltradas del sistema inmune
forman los tumores. Las clulas tumorales a su
vez, adquieren mediante un proceso de acumulacin de mutaciones, la capacidad de invadir otros
tejidos distantes formando las denominadas metstasis. Las neoplasias con capacidad de producir metstasis constituyen los tumores malignos
y producen un grupo de enfermedades llamadas
cncer.
Existen ciertos factores que permiten a algunas clulas liberarse paulatinamente de las condiciones que regulan la divisin celular. Sustancias
607
Sin ttulo-2
607
5/26/06, 10:26 AM
antitumoral est dado por la respuesta celular, principalmente los linfocitos T (LT), los que reconocen antgenos procesados y presentados en asociacin con las molculas del Complejo Principal
de Histocompatibilidad (MHC).
La paradoja existente entre la existencia de clulas antitumorales en los pacientes con cncer y la
progresin sistemtica de la enfermedad, sugieren
la existencia de mecanismos mediados por el tumor para evadir la respuesta del sistema inmune.
Una de las mayores preocupaciones de la medicina a lo largo del tiempo, lo representa el conocimiento del cncer, hecho que se ha transformado en una verdadera lucha contra esta enfermedad. Entre las numerosas alternativas de tratamiento del cncer, estn obviamente las ms convencionales: la erradicacin del tumor mediante ciruga, procedimiento que sigue siendo una de las
mejores alternativas; la quimioterapia y radioterapia, las que en su conjunto apuntan hacia la
destruccin de las clulas tumorales, aprovechando especialmente la propiedad de activa divisin
de estas clulas. Considerando el papel propuesto
para el sistema inmune, de reconocimiento de los
antgenos tumorales y la eliminacin de las clulas que los presentan, ha emergido la
inmunoterapia del cncer. Esta se basa en la
posibilidad de uso de anticuerpos monoclonales
contra antgenos tumorales especficos, los que
tambin van con el objetivo de la destruccin del
tumor, y en la denominada terapia biolgica contra el cncer, que utiliza principios diferentes a
los anteriormente mencionados en la accin
antitumoral. La terapia biolgica contra el cncer,
no va dirigida a destruir por s misma al tumor,
sino que a provocar la activacin de los propios
mecanismos inmunolgicos del paciente para que
puedan actuar efectivamente contra el tumor.
En este captulo se revisarn los mecanismos
efectores de inmunidad antitumoral, las caractersticas de los antgenos tumorales, las estrategias
de evasin utilizada por los tumores y los mtodos inmunoteraputicos para tratar el cncer.
pueden ser reconocidos por el sistema inmune y

pueden generar una respuesta contra las clulas
neoplsicas. Experimentos realizados en ratones
singnicos, en la dcada del 40, demostraron que
tumores inducidos qumicamente y luego extirpados conferan resistencia contra un desafo con el
mismo tumor en otro ratn de la misma cepa. Esta
resistencia estaba principalmente mediada por los
linfocitos, ya que al ser estos trasplantados desde
un animal resistente a uno no resistente transmitan la inmunidad.
Estas y otras observaciones posteriores llevaron al cientfico australiano Sir Frank
Macfarlane Burnet (1899-1985) a elaborar, en
1970, la hiptesis de vigilancia inmunolgica
antitumoral. En ella se postula que una de las
principales funciones del sistema inmune sera la
de reconocer a las clulas neoplsicas y eliminarlas antes de que formen tumores. Esta afirmacin
implica que, en ausencia del sistema inmune, la
incidencia de tumores sera enormemente mayor.
Sin embargo, observaciones realizadas en ratones
inmunosuprimidos por alteraciones genticas o por
manipulacin experimental, no concuerdan plenamente con esta hiptesis ya que la incidencia de
tumores en stos no se ve, significativamente, alterada. En humanos, excepto por algunos tumores del
sistema linforreticular, como el linfoma asociado a
Epstein Barr virus, con una incidencia aumentada
en pacientes postrasplantados y por lo tanto
inmunosuprimidos, o el Sarcoma de Kaposi frecuente en pacientes con Sndrome de
Inmunodeficiencia Adquirida, no existen evidencias de un aumento significativo de la incidencia
de tumores por inmunosupresin que avalen la hiptesis. De todas formas, los avances en la comprensin celular y molecular de los procesos de
presentacin y reconocimiento de antgenos asociados a las molculas MHC y la manipulacin teraputica del sistema inmune en la lucha contra el
cncer, le ha conferido nuevamente validez al concepto de escape de la inmunovigilancia antitumoral
pero ahora con relacin a la inmunoterapia.
2.2. Componentes de la respuesta inmune
antitumoral
2. DEFENSA INMUNOLGICA CONTRA

EL CNCER
El sistema inmune consiste en una serie de

estrategias complejas desarrolladas durante la evolucin para combatir la invasin de
microorganismos y para detectar, eliminando, clulas anmalas propias que puedan poner en peligro la supervivencia del organismo. Ambos bra-
2.1. La hiptesis de vigilancia inmunolgica

antitumoral
La inmunologa antitumoral est basada en
la premisa de que existen antgenos tumorales que
608
Sin ttulo-2
608
5/26/06, 10:26 AM
zos del sistema inmune, el de la inmunidad innata y el del sistema inmune adquirido participan
en la defensa inmunolgica antitumoral. El primero tiene uno de sus principales exponentes en
las clulas NK (ver captulos 10 y 19). Las clulas NK han sido identificadas por su capacidad
de reconocer espontneamente ciertas lneas celulares tumorales in vitro, clulas infectadas por
virus y clulas alognicas. Estudios realizados,
in vivo e in vitro, han establecido la capacidad de
las clulas NK de reconocer clulas tumorales
deficientes en la expresin de molculas MHC
clase I. Tumores deficientes en molculas MHC
clase I son ms eficientemente eliminados por
ratones no inmunizados, efecto que desaparece
totalmente con la neutralizacin de las clulas
NK. Sin embargo, el papel fisiolgico de las
clulas NK en la respuesta inmunolgica
antitumoral no est lo suficiente bien clarificado, aunque existen indicios que permiten deducir una funcin relacionada con el control de las
metstasis.

Sin duda, la actividad inmunolgica
antitumoral ms importante est dada por la respuesta celular. Durante las ltimas tres dcadas
se ha experimentado un enorme avance en la
comprensin del funcionamiento del sistema inmune especialmente con relacin al reconocimiento antignico. Esta acumulacin de conocimientos, sumados al gran impulso de tcnicas de
biologa molecular que facilitan el clonamiento
de genes y la produccin de protenas
recombinantes, han permitido la identificacin
de antgenos asociados a tumores y su posterior
caracterizacin.
Experimentos pioneros demostraron que el
crecimiento de tumores singnicos poda ser prevenido en ratones inmunizados con el mismo tumor irradiado para evitar su proliferacin. Guiados por estudios en modelos animales, los
linfocitos T humanos han mostrado ser capaces
de lisar especficamente tumores autlogos in
vitro. Las clulas T son tambin capaces de secretar citoquinas como IL-2, IFN-, GM-CSF y TNF, y proliferar en respuesta a la estimulacin con
clulas tumorales autlogas. Las clulas T
antitumorales pueden ser expandidas in vitro y
transferidas adoptivamente para tratar incluso
grandes cargas tumorales en ratones y humanos.
En conjunto, estos resultados proveen evidencias
innegables de que una respuesta mediada por
linfocitos T puede ocurrir contra los tumores
autlogos.
Las clulas presentadoras de antgenos
(CPA) juegan un papel fundamental en la generacin de una respuesta antitumoral mediada por
linfocitos T. Estas clulas especializadas, entre
las que se incluyen los macrfagos, los
linfocitos B y las clulas dendrticas (DC),
poseen la capacidad de capturar antgenos
tumorales y presentarlos asociados a las molculas MHC. Adems expresan gran cantidad de
molculas coestimuladoras, las que proveen seales cruciales que garantizan la efectividad de
la respuesta mediada por linfocitos T. Destacan
en este aspecto las DC, tambin llamadas CPA
profesionales, ya que se encuentran estratgicamente localizadas en los sitios de concentracin antignica, internalizan, procesan y presentan eficientemente antgenos solubles en el contexto de MHC clase I y II, siendo las ms eficientes en la induccin de una respuesta primaria de LT.

Durante varios aos la atencin de los
inmunlogos del cncer estuvo enfocada al brazo
humoral de la respuesta antitumoral. Se parta de
la hiptesis de que existiran protenas de membrana especficas de los tumores o sobreexpresadas
en stos, que permitiran una discriminacin entre la neoplasia y el tejido normal. Si bien varias
protenas han sido identificadas como antgenos
asociados al tumor (AAT), con presencia de
anticuerpos especficos en el suero de los pacientes con cncer, estos anticuerpos tienen una importancia menor en los mecanismos de rechazo
de los tumores y ms bien adquieren relevancia
con relacin al diagnstico y a terapias
inmunolgicas. Debido a que muchos antgenos
tumorales no son necesariamente inmunognicos
en el hospedero del tumor, su identificacin se ha
realizado con anticuerpos xenogenicos, o sea a
travs de la inmunizacin de otras especies con el
tumor. Desde el punto de vista prctico, son ms
bien marcadores tumorales aunque, a veces, se
encuentran en pequeas cantidades en clulas normales o en tumores benignos. Ejemplos de estos
antgenos son la -fetoprotena (-FP), el
Antgeno Carcinoembrionario (CEA) y el
Antgeno asociado a la Prstata (PSA).
609
Sin ttulo-2
609
5/26/06, 10:26 AM
las cancergenas.
Pptidos derivados de estas protenas, normales o mutadas, pueden ser reconocidos por LT.
Existe una clara relacin entre algunos tipos de
cncer e infecciones virales. El virus papiloma
humano (HPV) ha sido asociado a ciertos tumores cervicales y el virus Epstein Barr (EBV) a algunos linfomas tipo B. Las clulas tumorales infectadas con estos virus presentaran antgenos
virales en el contexto de molculas MHC, los que
seran reconocidos por las clulas LT.
3. ANTGENOS ASOCIADOS A TUMORES

Los linfocitos T citotxicos (LTc) CD8+ tienen la capacidad de reconocer tumores a travs de
fragmentos peptdicos de 8-10 aminocidos derivados de protenas citoplasmticas o nucleares que
estn asociados al MHC clase I. Los LTc
melanoma-especficos, transferidos adoptivamente o activados in vivo por eptopos de antgenos
asociados a melanoma, poseen capacidad teraputica, pudiendo inducir la regresin de tumores y
sus micrometstasis. Durante los ltimos aos
varios antgenos melanoma-asociados reconocidos por LTc han sido identificados y sus eptopos
peptdicos caracterizados utilizando mtodos
genticos y bioqumicos.
A la luz de las investigaciones llevadas hasta

ahora resulta cada vez ms clara la casi inexistencia de antgenos tumorales propiamente tales, excepto los de origen embrionario, que se expresan
nica o especialmente en los tumores. El reconocimiento de AAT por parte del sistema inmune se
debera principalmente a la sobreexpresin o a la
expresin inadecuada de algunas protenas en ciertos tejidos, lo que relaciona a la respuesta inmune
antitumoral con fenmenos de autoinmunidad.
3.1. Clasificacin de AAT reconocidos por LT

Los AAT reconocidos por linfocitos T pueden ser agrupados de acuerdo al origen de las protenas de las cuales derivan, de los niveles de su
expresin y de su distribucin en distintos tejidos. El primer grupo est conformado por los llamados Antgenos tumor-especficos. Los genes
de estos antgenos codifican protenas de origen
embrionario, silentes en clulas adultas y solamente expresados en el tejido tumoral. El cientfico
belga Thierry Boon y colaboradores han definido
varios antgenos de este tipo tales como MAGE1, MAGE-3, BAGE y GAGE entre otros. Clulas
tumorales que expresan estos antgenos han sido
encontradas en tumores de distinto origen (tabla
37-1). Entre los llamados Antgenos de diferenciacin tisular o tejido-especficos se agrupan la
mayora de los antgenos reconocidos por los
linfocitos infiltrantes de tumor (TIL) de pacientes
con cncer. Estas protenas se expresan no slo en
el tumor sino que tambin en los tejidos normales
de los cuales stos derivan. Tambin pueden ser
encontrados en otros tejidos normales aunque en
niveles de expresin mucho menores. En
melanoma, uno de los tumores ms caracterizados, existen varias protenas asociadas a la sntesis y control de la melanina como MART-1/MelanA; gp100, tirosinasa y MC1R que son AAT. Un
tercer grupo lo conforman los Antgenos derivados de Oncogenes y Proto-Oncogenes. P53, pRas, y HER2/neu son genes que codifican protenas relacionadas directamente con el control del
ciclo celular. Ha sido demostrado que muchos tumores poseen mutaciones en estos genes o bien
stos se encuentran sobreexpresados en las clu-
4. ESTRATEGIAS TUMORALES DE EVASIN INMUNOLGICA

Los tratamientos inmunoteraputicos utilizados hasta hoy para combatir el cncer no han
sido del todo exitosos, produciendo una respuesta
positiva solamente en una parte de los pacientes.
Varias razones incidiran en las dificultades para
activar ptimamente al sistema inmune de los pacientes con cncer. Algunos se deberan a la
inmunosupresin propia de estos enfermos, aunque la mayora est ms relacionada con alteraciones del sistema inmune inducidas por el propio tumor. Los mecanismos de evasin tumoral
han sido resumidos en la tabla 37-2 y algunos de
ellos discutidos ms abajo.
4.1. Disminucin de la expresin de las molculas MHC
La mayora de los pptidos asociados al MHC
clase I derivan de protenas propias intracelulares
o de microorganismos infecciosos (ver captulo
9). Estas protenas son cortadas en segmentos
polipeptdicos y transportadas por distintas protenas chaperonas hasta asociarse a molculas
MHC y ser presentadas en la superficie celular a
los linfocitos T. Defectos en el funcionamiento de
cualquiera de los componentes del procesamiento
610
Sin ttulo-2
610
5/26/06, 10:26 AM
Tabla 37-1. Antgenos tumorales humanos reconocidos por clulas T MHC clase I restringidas
Tipo de antgeno tumoral
Productos de oncogenes
activados
Ras
Producto p210 del reorDenamiento de bcr/abl
HER-2/neu/c-erb/p185
Neoplasias que
presentan el pptido
10 % de tumores
humanos
Leucemia mieloide
crnica, leucemia
linfoblstica aguda
Carcinomas pancretico,
mamario, ovrico,
gstrico, colorectal y
melanoma
Pptido
CLLDILDTAGL
VVVGAVGVG
SSKALQRPV
ATGFKQSSK
KQSSKALQR
ATGFKQSSK
GFKQSSKAL
KIFGSLAFL
IISAVVGIL
VMAGVGSPYV
ELVSEFSRM
QLFEDNYAL
RLLQETELV
ILHNGAYSL
ALCRWGLLL
VLRENTSPK
Molcula MHC-I
presentadora
A2
B35
A2
A3
A3
A11
B8
A2
A2
A2
A2
A2
A2
A2
A2
A3
Productos de genes
supresores de tumor
p53 mutada
Producto de genes
embrionarios reactivados
MAGE-1
50% de tumores humanos LLPENNVLSPL

GLAPPQHLIRV
RMPEAAPPV
KTCPVQLWV
A2
A2
A2
A2
Melanomas, carcinomas,
sarcomas y otros
EADPTGHSY
SAYGEPRKL
KMVELVHFL
YLQLVFGIEF
EVDPIGHLY
FLWGPRALV
KVAELVHFL
MEVDPIGHLY
AARAVFLAL
YRPRPRRY
SPSSNRIRNT
A1
CW*1601
A2
A2
A1
A2
A2
B44
CW*1606
CW6
B7
Melanomas y otros
AAGIGILTV
ILTVILGVL
ITDQVPFSV
LLDGTATLRL
VLYRYGSFSV
A2
A2
A2
A2
A2
MAGE-2
MAGE-3
BAGE
GAGE
RAGE
Antgenos de diferenciacin
tejido-especficos
MART-1/Melan-A
gp100/Pmel 17
611
Sin ttulo-2
611
5/26/06, 10:26 AM
Tirosinasa
MC1R
Antgeno especfico prosttico
Antgeno especfico prosttico Carcinomas prostticos

de membrana
Protenas propias
ampliamente expresadas
Antgeno carcinoembrionario
MUC-1
Productos de genes virales

Protenas E6 y E7 del virus
papiloma humano
Protenas del virus EpsteinBarr
Protenas del virus hepatitis B

Protenas del virus-1 de la
Leucemia de clulas T
Humana
Antgenos mutados
CDK4-R24C-1 mutada
KTWGQYWQV
YLEPGPVTA
YMDGTMSQV
MLLAVLYLL
AFLPWHRLF
SEIWRDIDF
TILLGIFEL
FLALIICNA
AIIDPLIYA
A2
A2
A2
A2
A24
B44
A2
A2
KLQCVDHLV
FLTPKKLCQV
VISNDVCAQV
LLHETDASV
ALFDIESKV
A2
A2
A2
A2
A2
A2
A2
Variados carcinomas
mamarios, ovricos y
carcinomas pancreticos
YLSGANLNL
IMIGVLVGV
STAPPAHGV
Carcinoma cervical
FAFRDLCIV
LLMGTLGIV
YMLDLQPETT
TLGIVCPI
AVFDRKSVAK
IVTDFSVIK
CGLGLLTMV
RLRAEAGVK
FLPSDFFPSV
YVNVNMGLK
LLFGYPVYV
VPYKRIEEL
A2
A2
A2
A11
A11
A2
A3
A2
A11
A2
B14
EEKLIVVLF
ACDPHSGHFV
SYLDSGIHF
B-44
A2
A24
Enfermedad de Hodgkin
Linfoma de Burkitt y
carcinomas
nasofarngeos,
Carcinoma hepatocelular
Leucemia de clulas T
Melanoma
b-catenina
A2
A2
A11
A2
Tabla adaptada de Salazar-Onfray et al. Med Oncol, 1999.
y presentacin antignica incide en una incapacidad de los linfocitos T de reconocer a la clula

presentadora, en este caso la clula tumoral. La
prdida de uno o varios alelos de HLA ("Human
Leukocyte antigen", MHC en humanos) es un
evento comn en varios tipos de tumores especialmente en las metstasis. Estos defectos han
sido atribuidos a mutaciones puntuales en la 2-
microglobulina o en otros genes del complejo

MHC. Recientemente defectos en otras protenas
relacionadas con la presentacin antignica como
los proteosomas y las TAP han sido tambin descritos en melanomas y otros carcinomas.
612
Sin ttulo-2
612
5/26/06, 10:26 AM
alta afinidad inactivando los LT, clulas NK y a

las clulas LAK (clulas NK activadas por
linfoquinas). En humanos el TGF- ha sido
involucrado en el aumentado potencial metastsico
de melanomas y otros carcinomas. La IL-10 es
una citoquina del tipo Th2, la que favorece una
respuesta de tipo humoral ms que celular, siendo
esta ltima la ms efectiva contra los tumores. La
IL-10 inhibe adems la produccin de citoquinas
pro-inflamatorias en monocitos y macrfagos y
reduce la expresin de MHC clase I y II en las
clulas presentadoras de antgenos. Esto redunda
directamente en la inhibicin del crecimiento y
activacin de linfocitos T y clulas NK y por lo
tanto en el escape de los tumores. La IL-10, que
es producida por una gran variedad de tumores,
inhibe la expresin de MHC clase I y II en stos a
travs de la inhibicin de componentes del procesamiento y presentacin antignica como las TAP
y los proteosomas.
Tabla 37-2. Mecanismos de escape a la vigilancia del sistema inmune utilizada por los tumores
Prdida de la expresin de MHC para evitar el

reconocimiento por los LT.
Disminucin o prdida en el tumor de la expresin de antgenos asociados al tumor.
Disminucin o prdida de la expresin de
molculas coestimuladoras, en el tumor o en
las clulas dendrticas, requeridas para una eficiente interaccin con los LT.
Neutralizacin de la respuesta inmune a travs de la induccin de anergia o debido a la
eliminacin clonal de los LT especficos.
Activacin, mediada por el tumor, de clulas
supresoras o clulas del sistema inmune que
secretan citoquinas inhibidoras.
Cambios, inducidos por el tumor, en las molculas transductoras de seales en los LT.
Utilizacin de factores estimulantes, que favorecen el crecimiento tumoral, producidos
luego de la activacin del sistema inmune
(TGF-).
Secrecin de factores inmunosupresores por
los tumores (Prostaglandina E2 e IL-10).
5. TERAPIA INMUNOLGICA CONTRA

EL CNCER
La utilizacin del sistema inmune para combatir el cncer es una antigua idea, extensamente
investigada durante varias dcadas. Algunos perodos de la historia de la inmunologa antitumoral
han estado marcados por un excepcional entusiasmo y optimismo respecto de los beneficios que
estas terapias proporcionaran a los pacientes con
cncer, mientras que otros son acompaados por
la frustracin y el escepticismo. De todas formas,
ciertas terapias inmunolgicas han dado resultados esperanzadores, lo que unido con una comprensin ms profunda del funcionamiento del sistema inmune abre buenas perspectivas para el tratamiento generalizado de cierto tipo de tumores.
Tabla adaptada de Salazar-Onfray et al. Med

Oncol, 1999.
4.2. Factores inmunosupresores producidos

por los tumores
Numerosos factores inmunosupresores producidos por las clulas tumorales han sido identificados y estudiados en relacin al escape tumoral.
Un ejemplo clsico es la Prostaglandina E2
(PGE 2 ). La PGE 2 ha sido implicada en la
patognesis del cncer actuando a travs de la
inmunorregulacin. Evidencias indirectas que indican que el tratamiento profilctico con cido
acetil-saliclico, un inhibidor de la sntesis de
PGE2, reduce la incidencia de cncer colo-rectal,
respalda el rol de la PGE22 en la progresin de los
tumores. El Factor de Crecimiento Transformante- (TGF-) y la Interleuquina-10 (IL-10)
son las citoquinas con mayor efecto inmunosupresor. Experimentos en animales indican que la
mayor actividad de la TGF- in vivo es la promocin de la invasin y la metstasis. In vitro el TGF inhibe la expansin de las LTc y de los linfocitos
B, inhibe la expresin de receptores de IL-2 de
5.1 Anticuerpos monoclonales. La capacidad de

los anticuerpos de reconocer protenas aberrantes
en la membrana celular y el desarrollo de la tcnica de produccin de anticuerpos monoclonales
(AcMo), ha permitido la utilizacin de estos ltimos en tratamientos contra algunos tipos de cncer con buenos resultados. Recientemente se ha
demostrado un aumento en la sobrevida de pacientes con carcinomas colo-rectales tratados con
AcMo contra CEA. Otros AcMo, actualmente en
uso clnico o en las ltimas fases de desarrollo son:
anti-Her2/Neu en el caso de cncer mamario y antiCD20 en linfoma (tabla 37-3). Existiran varios
613
Sin ttulo-2
613
5/26/06, 10:26 AM
cos para la clula como radionuclidos o toxinas,

estos conjugados se denominan inmunotoxinas.
El mecanismo general de estos agentes se basa en
la interaccin especfica con la clula tumoral y
en su posterior internacin. La toxina una vez en
el interior celular puede ejercer su accin txica.
mecanismos por los cuales los AcMo pueden destruir a los tumores. Uno, es la activacin del sistema de complemento, esto determinado por el
isotipo del AcMo. Los AcMo pueden tambin inducir citotoxicidad celular dependiente de Ac
(ADCC) contra los tumores. La ADCC es
eficientemente mediada por las clulas NK, pero
adems puede ser mediada por monocitos,
macrfagos y granulocitos. Estas clulas contienen receptores para los Fc que activan la
citotoxicidad. Finalmente los AcMo podran ser
directamente letales para las clulas tumorales por
la induccin de apoptosis, a travs del bloqueo de
receptores de membrana esenciales para algn factor de crecimiento o la inhibicin del contacto
intercelular. Otra estrategia basada en los AcMO
pero tambin con pocos exponentes en uso clnico son los anticuerpos unidos a compuestos txi-
5.2 Terapia biolgica contra el cncer. Esta

inmunoterapia conceptualmente corresponde a la
activacin de los mecanismos defensivos del paciente, en este caso dirigidos contra el tumor. El
creciente conocimiento acerca de las diversas
citoquinas, historia que comenz a fines de la dcada del 50 con la descripcin de la molcula de
interfern, cre grandes expectativas de
inmunoterapia contra el cncer y otras enfermedades, especialmente infecciosas. Entre muchos
intentos fallidos, al inicio de la dcada de los 80
Tabla 37-3. Inmunoterapia del Cncer1

Clulas activadas o modificadas genticamente2
a) Clulas LAK
b) Clulas TIL
Clulas TIL CD4+ o CD8+
Clulas TIL modificadas genticamente. Introduccin de genes de citoquinas
o de factores de crecimiento.
c) Clulas tumorales modificadas genticamente
Introduccin de genes de citoquinas, factores de crecimiento y otros MHC, B7.
d) Clulas dendrticas modificadas.
Presentacin de antgenos tumorales (incorporados in vitro)
Introduccin de genes de molculas co-activadoras.
Anticuerpos y citoquinas2
Citoquinas: IL-2, IFN-, IFN-.
Anticuerpos monoclonales contra los antgenos CEA (cncer colo-rectal),
Her-2Neu (cncer mamario), CD20 (linfoma).
Antgenos tumorales2
Pptidos antignicos
DNA: con informacin para la expresin del antgeno tumoral
y para la expresin de molculas co-activadoras.
1
Estos tratamientos se aplican, en general, de forma mixta y tambin en conjunto con los tratamientos
convencionales: quimioterapia, radioterapia, hormonoterapia.
2
Muchos de estos tratamientos se encuentran an en fases clnicas de desarrollo.
LAK, clulas NK activadas por linfoquinas; TIL, linfocitos infiltrantes de tumor
614
Sin ttulo-2
614
5/26/06, 10:26 AM
inducir la presentacin antignica en las CPA incluyendo las clulas tumorales. Hasta ahora, el principio utilizado ha sido el uso de una citoquina
estimuladora en altas concentraciones. Tomando en
cuenta la amplia variedad de estos compuestos y
de otros mediadores endgenos que modulan la
comenz la visin de una terapia basada en el uso

de clulas citotxicas del propio paciente:
inmunoterapia adoptiva primero inespecfica, clulas LAK, y posteriormente especfica, clulas
TIL, pptidos antignicos y clulas dendrticas
(figura 37-1).
Figura. 37-1. Esquema general de obtencin de linfocitos activados o de clulas tumorales modificadas genticamente
utilizados en la terapia biolgica contra el cncer.
respuesta inmune en un delicado balance, no parece ser la mejor de las opciones. Este punto se ha
visto reforzado por una observacin que cada vez
se hace ms general en la respuesta inmune: los
mecanismos de activacin celular pueden culminar en la destruccin de la clula activada por mecanismos de muerte celular programada o apotosis.
En el caso de las clulas NK este tipo de mecanismo ya est claramente establecido, la estimulacin
simultnea por ejemplo por IL-2 e IL-12 o IL-12 e
IL-15, provoca inicialmente estimulacin celular y
posteriormente apoptosis. Por lo tanto, es posible
que la toxicidad de los tratamientos en base a
citoquinas podra deberse, en parte a este fenmeno. Estos tratamientos tienen un efecto parcial y
varios efectos colaterales si se utilizan dosis altas,
tales como nuseas, fiebre y dolores musculares
intensos. Su efecto en todo caso, es lo suficientemente importante como para ser un tratamiento alternativo en algunos tipos de cncer.
5.2.1 Utilizacin de citoquinas. En el caso de

citoquinas nicamente como inmunoterapia, se han
utilizado IFN-, IFN-, IL-2 y GM-CSF, entre
muchas otras. Tambin se ha intentado mezclas de
citoquinas y citoquinas ms tratamientos convencionales (tabla 37-3). La base del uso de las
citoquinas es la accin estimuladora de la respuesta inmune del hospedero y no necesariamente una
accin directa sobre las clulas tumorales. La
citoquina IL-2 ha sido una de las ms estudiadas;
de 15,5 kDa, es producida por los linfocitos T activados, presenta un t1/2 de 8 horas en la circulacin
y se la ha utilizado en protocolos de altas y bajas
dosis. El efecto antitumoral de esta citoquina parece derivar de al menos dos acciones diferentes: La
IL-2 puede mediar la generacin de clulas
citotxicas inespecficas, a partir de linfocitos precursores en reposo, que pueden destruir las clulas
tumorales. Adems de esta accin antitumoral, esta
citoquina puede expandir a las clulas T que reconocen especficamente antgenos tumorales, provocando una respuesta especfica. Este tipo de tratamientos ha tenido una respuesta objetiva (remisin completa y/o parcial) del orden del 20%. Otra
citoquina muy utilizada, especialmente en
melanomas, es el IFN- cuyo efecto principal es

a) Precursores clulas NK. Se basa en la activacin general in vitro de linfocitos sanguneos
perifricos, con altas dosis de las citoquinas IL-2,
615
Sin ttulo-2
615
5/26/06, 10:26 AM
IL-7 o IL-12. Bajo estas condiciones de cultivo,

se genera una nueva estirpe celular inespecfica
(clulas LAK) cuyos precursores son las clulas
NK circulantes, y que se caracteriza por adquirir
una mayor agresividad y una accin ltica ms
amplia. La clave de su utilizacin como
inmunoterapia la dio la observacin que estas clulas eran capaces de lisar muy eficientemente in
vitro las clulas del tumor autlogo; accin de la
que las clulas NK precursoras carecan. Una vez
obtenidos los linfocitos a travs de un procedimiento denominado leucofresis, que permite
obtenerlos en grandes cantidades, se tratan in vitro
con la citoquina, principalmente IL-2 y posteriormente se readministran al paciente, generalmente
en protocolos mixtos: clulas activadas ms la
citoquina activadora. En los seres humanos normales, la mayora de las clulas NK circulantes
se encuentra en reposo, por lo tanto, la generacin de las clulas LAK, se puede seguir, adems
de su citotoxicidad, por el aumento de las proporciones de clulas CD56+, CD25+ (IL-2R; indicador de activacin de los linfocitos). Han sido
ampliamente utilizados en cncer renal
metastsico y melanomas malignos, con un mximo de respuesta objetiva (remisiones completas
y parciales) de un 30-40 %. La distribucin de
las clulas LAK in vivo en modelos animales y en
algunos pocos casos de tratamiento en la patologa humana, ha demostrado que se distribuyen
primeramente en los pulmones y posteriormente
en hgado y bazo y no necesariamente en el sitio
del tumor. Por ello tambin se han administrado
localmente en el sitio del tumor o sitios adyacentes. Si bien constituyen una alternativa real, existen riesgos como la toxicidad del tratamiento, lo
que implica un riguroso control del paciente en
todas las etapas del tratamiento. Las clulas LAK
se utilizan tambin en conjunto con tratamientos
convencionales, quimio y radioterapia en donde
se ha observado una potenciacin de su accin.
Tambin se han utilizado clulas A-NK, una
subpoblacin de clulas NK activadas por IL-2 y
adherentes, ambas caractersticas necesarias para
su aislamiento desde la sangre perifrica o del
bazo. Las clulas A-NK, expresan CD11a/CD18,
son muy eficientes en la produccin de citoquinas,
migracin e ingreso a rganos slidos y muy eficientes tambin en la eliminacin de las metstasis. La utilizacin de anticuerpos monoclonales
(ver captulo 43) unidos a soportes magnticos y
la citometra de flujo (ver captulo 42) han sido
contribuciones fundamentales para la obtencin
de fracciones celulares altamente purificadas para

su uso potencial en terapia.
b) Precursores clulas T. Se basa en la activacin de los linfocitos que han infiltrado el tumor,
es decir que ya han reconocido antgenos
tumorales, pero que obviamente, en su totalidad,
la respuesta no ha sido suficiente para erradicar el
tumor. El proceso por lo tanto requiere la extirpacin quirrgica del tumor o bien el manejo de una
biopsia, la que debe ser disgregada por tratamientos enzimticos convencionales para la obtencin
de clulas a partir de un tejido, separacin de los
linfocitos infiltrantes del tumor (TIL) y cultivo
de stos en el laboratorio en presencia de IL-2 para
lograr una densidad celular que permita
readministrarlos al paciente, generalmente tambin
en forma mixta: clulas infiltrantes ms la
citoquina utilizada. Este tipo de linfocitos es
CD4+, CD8+; principalmente CD8, que ha demostrado actividad citoltica especfica in vitro
contra las clulas del tumor autlogo y adems
una efectividad, en modelos animales, de uno a
dos rdenes de magnitud mayor a las clulas LAK
en lo que se refiere a reduccin de las metstasis.
La mayora de las clulas TIL expresan los marcadores de activacin CD25 y CD28 (el ligando
de B7). Han sido utilizadas tambin preferentemente como tratamiento de cncer renal
metastsico y melanoma maligno y con resultados porcentuales no mayores a los obtenidos con
las clulas LAK. Un hecho de gran relevancia de
estas clulas fue que se demostr que debido a su
especificidad, una vez administradas podan ser
detectadas en el sitio del tumor, es decir pueden
volver al tumor original. La figura. 37-1
esquematiza la obtencin de estos tipos celulares
para la utilizacin clnica.
Si bien no son del todo conocidos los mecanismos por los cuales estas clulas citotxicas
(LAK y TIL) median sus efectos teraputicos, obviamente la destruccin del tumor mismo o de sus
metstasis y la eliminacin de las clulas tumorales
debera ser uno de los ms importantes. Las clulas TIL son principalmente LTc CD8+ y por lo
tanto capaces de reconocer y lisar a clulas que
presenten antgenos tumorales. De hecho las clulas TIL se han utilizado como precursores para
identificar nuevos antgenos principalmente de
melanoma. Tanto las clulas LAK y TIL median
sus efectos citotxicos a travs del mecanismo
membranoltico y dependiente de FasL-Fas. Sin
embargo, adems de la citotoxicidad el contacto
616
Sin ttulo-2
616
5/26/06, 10:26 AM
de las clulas LAK y TIL con las clulas tumorales

provoca la liberacin de diversas citoquinas y factores de crecimiento. Este ltimo mecanismo, es
de especial importancia, pues la liberacin en el
sitio del tumor, de citoquinas como TNF-, GMCSF, IFN-, que poseen propiedades citotxicas
y de reclutamiento y activacin de otras clulas
inmunocompetentes, se encamina justamente al
objetivo de destruccin del tumor por los propios
mecanismos inmunolgicos del paciente. Adems,
se ha intentado purificar la poblacin celular
efectora; es necesario enfatizar que estas poblaciones celulares son altamente heterogneas y que
adems su rendimiento va a depender del estado
del paciente del cual se obtienen, lo que por s mismo constituye un proceso altamente complejo.
Una alternativa que resume varias caractersticas teraputicas importantes la constituye el
uso de clulas TIL modificadas genticamente.
Considerando las propiedades de estas clulas, especialmente su localizacin en el sitio del tumor,
la posibilidad de insercin de un gen,
especficamente de alguna citoquina, que permita
su secrecin en el mismo sitio del tumor apareca
como una posibilidad muy interesante. En modelos animales el esquema de tratamiento con clulas TIL modificadas genticamente ha funcionado muy bien; en el caso de inmunoterapia para el
cncer humano, se han insertado a clulas TIL los
genes de IL-2, TNF-, IFN-, alternativas que se
encuentran en estudio.
Actualmente, se utilizan adems tratamientos de terapia biolgica en conjunto con tratamientos convencionales de quimioterapia o radioterapia. La tabla 37-3, resume algunas de las alternativas ms utilizadas hasta ahora en esta rea de la
biomedicina.
actualidad uno de los ltimos y ms esperanzadores enfoques teraputicos. Actualmente el

enfoque de terapia del cncer de Coley, se puede
considerar como de activacin no especfica del
sistema inmune. Ese enfoque se sigue aplicando,
siendo uno de los ejemplos ms representativos el
tratamiento del cncer a la vejiga por tratamiento
a nivel local con el bacilo Calmette-Gurin o BCG,
el cual genera una respuesta inflamatoria. Por lo
tanto, son los mediadores de la inflamacin los
activadores de la respuesta que ataca al tumor.
En contraste con las vacunas contra agentes
infecciosos extracelulares, en las cuales la estrategia ms importante es la activacin del sistema
inmune humoral y la generacin de anticuerpos
neutralizantes, el foco de las vacunas contra el cncer est dirigido a la generacin de la respuesta
celular especfica mediada por linfocitos T. Hasta
ahora, las vacunas contra el cncer no son preventivas, sino ms bien teraputicas. stas intentan la activacin del sistema inmune contra molculas sobreexpresadas o mutadas, presentes en las
clulas tumorales, con el fin de eliminar tumores
preexistentes en el hospedero.
Las clulas tumorales por lo general son poco
inmunognicas y adems capaces de inducir tolerancia activamente. Esto principalmente debido
a la carencia de molculas co-estimuladoras y a la
secrecin de factores inmunosupresores. La estrategia de las vacunas antitumorales es quebrar este
estado de tolerancia aumentando la densidad de
los antgenos expresados en las molculas MHC
acompaada de un incremento de las molculas
co-estimuladoras.
La forma ms simple de intentar inmunizar
pacientes con cncer, consiste en utilizar clulas
tumorales autlogas irradiadas o tratadas qumicamente para evitar su proliferacin una vez
reinyectadas en el paciente. Estas clulas tumorales
pueden ser genticamente modificadas con el fn
de que expresen molculas co-estimuladoras y/o
citoquinas proinflamatorias como IL-2, IL-4, IFN o GM-CSF, (ver figura. 37-1) lo que eleva la
inmunogenicidad de los tumores generando una
respuesta ms eficiente contra las metstasis.
Nuevamente en base a modelos animales se ha
podido formar el siguiente escenario que permite
explicar esta accin: las clulas tumorales
genticamente modificadas, deben secretar in vivo
la citoquina que expresan, lo que a su vez debe
traer como consecuencia la activacin y/o reclutamiento de linfocitos CD4, CD8, clulas NK y
de CPA. Como resultado de esta accin deberan
5. 3. Inmunizacin activa contra tumores

El comienzo de la historia basada en la idea
que el sistema inmune puede detener el desarrollo
de un tumor, comienza a fines del siglo pasado,
cuando se observ la regresin de esta enfermedad en algunos pacientes que contraan enfermedades infecciosas bacterianas. Uno de los hitos importantes fue el logrado por el mdico William B.
Coley, quien lleg a utilizar bacterias atenuadas
como tratamiento de pacientes con cncer. Desde
luego, este tipo de enfoque inespecfico, corresponde a lo que actualmente conocemos como
inmunoterapia, y ms an a un intento de vacuna
contra el cncer, que justamente representa en la
617
Sin ttulo-2
617
5/26/06, 10:26 AM
destruirse las clulas tumorales, favorecindose

adems la presentacin de los antgenos tumorales
por las clulas presentadoras. Finalmente entonces, el tumor debera ser rechazado mediante la
accin de clulas efectoras especficas. Una de
las posibilidades ms interesantes de este tipo de
tratamientos ha sido la utilizacin de clulas
tumorales (melanoma, cncer prosttico, cncer
renal) modificadas genticamente por la insercin
del gen de GM-CSF. Esta citoquina es un factor
de crecimiento muy importante para las DC, de
modo que estas clulas pueden activarse en estas
condiciones y por lo tanto capturar y procesar
antgenos tumorales. Bajo estas condiciones, las
DC tambin pueden expresar la molcula coestimuladora B7, necesaria para la respuesta mediada por los LT.
La identificacin de eptopos de AAT ha permitido explorar la inmunizacin con pptidos
recombinantes derivados de los antgenos gp100
y MART-1 en melanoma y Her2/Neu en cncer
ovrico. Estos intentos no han sido del todo
exitosos, pero han permitido mejorar los protocolos de inmunizacin. Durante los ltimos dos aos,
ha adquirido mayor relevancia el papel de las clulas presentadoras de antgeno profesionales
como las clulas dendrticas, en la induccin de
la respuesta inmune contra los tumores. Las DC,
derivadas de monocitos de sangre perifrica, pueden ser activados in vitro utilizando IL-4 y GMCSF y expandidas en cantidades suficientes para
inmunizar. Previo a la inmunizacin, las DC son
cargadas exgenamente con pptidos antignicos
o transfectadas con genes que codifican estos
antgenos. Las respuestas a estos tratamientos son
las ms promisorias y pareciera que sera la estrategia a seguir. La combinacin in vitro de DC con
clulas tumorales apoptticas, permite la presentacin de mltiples antgenos tumorales en una
misma clula presentadora, en un contexto adecuado para la induccin de respuesta.
Una de las tcnicas ms modernas de inmunizacin, consiste en la utilizacin de DNA desnudo conteniendo los genes codificadores de
antgenos tumorales, generalmente asociado a
genes que inducen la inflamacin, citoquinas, protenas bacterianas etc. Las vacunas de ADN,
sorprendentemente eficientes, estn siendo exploradas no solamente en el contexto de la
inmunologa antitumoral, sino que adems como
estrategia antiviral o contra otros patgenos, (ver
captulo 35).
En resumen, el desarrollo de la inmunologa
antitumoral, si bien no ha sido lo suficientemente

exitosa desde el punto de vista teraputico, ha permitido avanzar enormemente en la comprensin
del sistema inmune y contina abriendo perspectivas en la utilizacin de las defensas naturales de
nuestro organismo en el combate contra el cncer,
uno de los enemigos ms enconados de la especie
humana.
LECTURAS SUGERIDAS
Greten, T.F. y Jaffee, E.M., Cancer vaccines, J
Clin Oncol 17:1047-1060, 1999.
Rosenberg, S.A., A new era for cancer immunotherapy based on the genes that encode tumor antigens. Immunity 10: 281-287, 1999.
Salazar-Onfray, F., Interleukin-10: a strategy used
by tumors to escape from the immune system (Review). Med Oncol 16: 86-94, 1999.
Van den Eynde, B.J. y van der Bruggen, P., T
cell defined tumor antigens, Curr Opin Immunol
9: 684- 693, 1997.
618
Sin ttulo-2
618
5/26/06, 10:26 AM

Captulo 38
MECANISMOS INMUNOLGICOS
DEL RECHAZO DE ALOINJERTOS
Cecilia Seplveda C.
1. Introduccin
2. Rechazo de aloinjertos
2.1. Presentacin directa de aloantgenos
2.2. Presentacin indirecta de aloantgenos
2.3. Clulas que participan en el rechazo
3. Mecanismos efectores del rechazo
3.1. Rechazo hiperagudo
3.2. Rechazo agudo
3.3. Rechazo crnico
4. Prevencin y tratamiento del rechazo
4.1. Inmunosupresin
4.2. Seleccin de donantes
4.3. Induccin de tolerancia
619
Sin ttulo-2
619
5/26/06, 10:26 AM
620
Sin ttulo-2
620
5/26/06, 10:26 AM
RESUMEN
En la actualidad los trasplantes son cada vez ms frecuentes. Muchas personas requieren
ser sometidas a este tipo de tratamiento en el cual se reemplazan clulas, tejidos u rganos enfermos, por otros, provenientes de un donante sano. Una barrera importante al xito de los trasplantes es, sin embargo, la barrera inmunolgica, lo que conocemos como rechazo. En este captulo
se presenta y discute los principales mecanismos de rechazo, sus caractersticas y componentes.
Asimismo se discute las estrategias ms importantes para lograr un mayor xito en la sobrevida
y funcionamiento de los trasplantes, ya sea efectuando trasplantes entre individuos con la mayor
semejanza posible o a travs del uso de terapias inmunosupresoras.
La respuesta inmune del receptor a los

aloantgenos del donante presentes en el injerto
es muy intensa y se denomina rechazo. Esta respuesta de rechazo es una de las principales barreras al xito de los trasplantes, por lo que su estudio y comprensin es de la mayor importancia.
1. INTRODUCCIN
Trasplante es el proceso de tomar clulas,
tejidos u rganos (el trasplante o injerto) de un
individuo y colocarlo (generalmente) en otro individuo. El individuo que proporciona el injerto
es el donante y el que lo recibe es el receptor.
Un injerto trasplantado en el mismo individuo del cual se obtuvo se denomina trasplante
autlogo o autotrasplante. Un injerto trasplantado entre individuos genticamente idnticos o
singeneicos se denomina trasplante singeneico.
Un trasplante efectuado entre individuos
genticamente diferentes pero que pertenecen a
la misma especie se llama trasplante alogeneico o
alotrasplante. Un injerto entre individuos de especies diferentes es un trasplante xenogeneico o
xenotrasplante.
Las molculas que son reconocidas como extraas por el sistema inmune del receptor en los
alotrasplantes son los aloantgenos y las de los
xenotrasplantes son los xenoantgenos. Los
linfocitos y anticuerpos que reconocen aloantgenos o xenoantgenos se denominan alorreactivos o xenorreactivos, respectivamente.
La mayor parte de los trasplantes que se efectan en la actualidad son alotrasplantes. Los ms
comunes son los de rin, corazn e hgado, pero
es cada vez ms frecuente el injerto de otros rganos como pncreas, intestino y pulmn. La transfusin de sangre, trasplante de clulas sanguneas
circulantes y/o plasma de un individuo a otro, es
tambin muy frecuente, as como el trasplante de
mdula sea.
2. RECHAZO DE ALOINJERTOS
La respuesta inmune a los aloantgenos puede ser tanto humoral como celular, siendo en
general, la respuesta inmune celular la de mayor
importancia.
El reconocimiento del mosaico antignico
que significa el injerto, ya sea como propio o extrao, est determinado principalmente por las molculas codificadas por el Complejo Principal de
Histocompatibilidad (MHC), presentes en las membranas celulares. Como es conocido, las molculas
MHC juegan un rol crtico en la respuesta inmune
a antgenos extraos, principalmente en la presentacin de pptidos derivados de antgenos proteicos
de una forma que ellos puedan ser reconocidos por
las clulas T. Por ello, el rol de las molculas MHC
como aloantgenos es incidental.
Las molculas MHC alognicas pueden ser
presentadas para el reconocimiento de las clulas
T del receptor por dos vas fundamentalmente diferentes. La primera es la llamada presentacin
directa e involucra el reconocimiento de molculas MHC intactas expresadas en la membrana de
clulas presentadoras de antgenos (CPA) del donante en el injerto y es una consecuencia de la
621
Sin ttulo-2
621
5/26/06, 10:26 AM
expresadas en las membranas celulares normalmente tienen pptidos unidos. Como durante el
proceso de tolerancia central se eliminan o
inactivan slo las clulas T que reconocen pptidos
propios unidos a MHC propios, las clulas T especficas para reconocer pptidos propios unidas
a MHC alognicos persisten a este proceso de
seleccin y son capaces de responder a los
aloinjertos. Se ha calculado que hasta un 2% de
las clulas T son capaces de reconocer y responder directamente a una sola molcula MHC extraa y esta alta frecuencia de clulas T reactivas
similitud entre molculas MHC intactas del injerto y las del receptor. La segunda va, llamada presentacin indirecta, involucra el procesamiento
de las molculas MHC del donante por CPA del
receptor y la presentacin de los pptidos derivados de estas MHC alognicas asociadas con las
MHC propias del receptor. En este caso, las molculas MHC del injerto son procesadas y presentadas como cualquier antgeno extrao, siendo los
mecanismos de la presentacin indirecta
indistinguibles de los que normalmente utiliza el
sistema inmune (figura 38-1).
Figura 38-1. Vas de presentacin de Ag de trasplante: directa e indirecta.
con molculas MHC alognicas es una de las razones del por qu los aloinjertos generan respuestas inmunes intensas in vivo.
2.1. Presentacin directa de aloantgenos

El reconocimiento directo de molculas
MHC extraas se debe a que los receptores de
clulas T normales presentes en el receptor, seleccionadas para reconocer molculas MHC propias
asociadas a pptidos extraos, reconocen las molculas MHC alognicas del injerto asociadas a
pptidos, debido a la similitud estructural entre
stas (reaccin cruzada).
Las molculas MHC alognicas con un
pptido unido pueden imitar el determinante formado por una molcula MHC propia ms un determinado pptido extrao. Las molculas MHC
2.2. Presentacin indirecta de aloantgenos

Molculas MHC alognicas pueden tambin
ser reconocidas como molculas extraas convencionales. Como las molculas MHC extraas difieren estructuralmente de las del receptor, ellas
pueden ser procesadas y presentadas de la misma
manera que cualquier antgeno extrao, esto es,
como pptidos asociados con las molculas MHC
propias del receptor. La presentacin indirecta
622
Sin ttulo-2
622
5/26/06, 10:26 AM
usualmente implica el alorreconocimiento por clulas T CD4+ ya que los aloantgenos usualmente
son procesados por las CPA del receptor por la va
vesicular endosmica y requiere la presentacin
por molculas MHC clase II. Es posible, sin embargo, que algunos aloantgenos sean reconocidos
por clulas T CD8+ y presentados va molculas
MHC clase I.
Tambin otros aloantgenos polimrficos
pueden causar reacciones de rechazo
inmunolgico, habitualmente ms dbiles y lentas, y se los conoce como antgenos menores de
histocompatibilidad.
molculas MHC alognicas. Se presume que las

clulas B especficas para los aloantgenos son estimuladas por mecanismos similares a los que
operan frente a protenas extraas.
3. MECANISMOS EFECTORES DEL RECHAZO

Tanto clulas T CD4+ como CD8+ y
aloanticuerpos participan en el rechazo del
aloinjerto, a travs de diferentes mecanismos
efectores. Estos mecanismos se clasifican segn
la histopatologa que los caracteriza, y segn el
tiempo despus del trasplante en que se manifiestan. De acuerdo a la experiencia de los trasplantes
renales, estos son: rechazo hiperagudo, agudo y
crnico.
2.3. Clulas que participan en el rechazo

Pueden participar tanto clulas T CD4+ como
CD8+, que reconocen las molculas MHC del injerto presentadas tanto en forma directa como indirecta. Las CPA del receptor y del donante estn
involucradas en el proceso de rechazo, siendo tal
vez las ms importantes las clulas dendrticas.
Estas CPA presentan los antgenos a las clulas T
del receptor presentes en el injerto y tambin CPA
del donante podran migrar a los ganglios linfticos
donde activaran clulas T naive en forma directa.
Por otra parte, CPA del receptor pueden entrar al
injerto y transportar los aloantgenos a los ganglios
linfticos y presentarlos a los linfocitos por la va
indirecta. Estas CPA tambin proveen molculas
coestimuladoras que contribuyen a la expansin
y diferenciacin de las clulas T alorreactivas.
3.1. Rechazo hiperagudo

El rechazo hiperagudo se caracteriza por hemorragia y oclusin trombtica de la circulacin
del injerto y ocurre en minutos u horas de colocado ste. Est mediado por anticuerpos preexistentes que se encuentran en la circulacin del receptor y que se unen a antgenos del endotelio
vascular del injerto. Esta unin activa al sistema
del complemento causando dao endotelial y promoviendo la trombosis intravascular del injerto.
Este tipo de rechazo puede ser provocado por
aloanticuerpos dirigidos contra antgenos de grupo sanguneo ABO u otros, que se expresan tambin en las clulas del endotelio vascular. En la
prctica esto no sucede o no debiera suceder, ya
que donantes y receptores se seleccionan considerando que deben tener grupo sanguneo compatible.
El rechazo hiperagudo puede ocurrir por
aloanticuerpos de la clase IgG dirigidos contra
molculas MHC o contra otros antgenos que no
son de grupo sanguneo presentes en las paredes
endoteliales. Estos aloanticuerpos se generan en
exposiciones previas a aloantgenos, por ej., por
transfusiones, embarazos mltiples, trasplantes
anteriores. Si el ttulo de anticuerpos es bajo el
rechazo puede producirse en el transcurso de varios das, siendo entonces denominado "acelerado ".
En los pacientes que van a recibir un
aloinjerto se investiga rutinariamente la posible
presencia de aloanticuerpos preexistentes contra
el posible donante, con el fin de seleccionar el re-
La reaccin mixta linfocitaria (RLM) es un

modelo in vitro muy til del reconocimiento directo de las molculas MHC alognicas y se utiliza como predictor del rechazo de aloinjertos. Esta
reaccin es inducida cultivando in vitro clulas
mononucleares provenientes de dos individuos
diferentes, esto determina que se produzca una
respuesta proliferativa a los 4-7 das de cultivo,
denominada RLM alognica. Puede ser
bidireccional o unidireccional, en este ltimo caso
se procesa una de las dos poblaciones linfocitarias
para que no prolifere. Durante este proceso son
estimuladas tanto clulas T CD4+ como CD8+.
Las CD8+ se diferencian a clulas citolticas y las
clulas CD4+ en clulas productoras de citoquinas,
tal cual ocurre en una reaccin inmune contra
antgenos proteicos restringida por molculas
MHC clase I o II, respectivamente.
Menos conocidos son los mecanismos que
llevan a la produccin de aloanticuerpos contra
623
Sin ttulo-2
623
5/26/06, 10:26 AM
ceptor ms adecuado, con mayores probabilidades de xito del injerto, y evitar la prdida de ste
por un rechazo hiperagudo.
estrategias posibles son: minimizar la intensidad

de la respuesta inmune alognica efectuando trasplantes entre individuos con la mayor semejanza
posible y, por otro lado, a travs del uso de
inmunosupresores.
3.2. Rechazo agudo

El rechazo agudo se caracteriza por injuria
vascular y parenquimatosa del injerto, mediada por
clulas T, macrfagos y anticuerpos, que se presenta usualmente despus de la primera semana
de efectuado el trasplante. Las clulas T CD8+
activadas causan lisis directa de las clulas del
injerto y las clulas T CD4+ a travs de la produccin de citoquinas que reclutan y activan clulas
inflamatorias, las cuales causan necrosis. En injertos vascularizados, un hallazgo frecuente en los
episodios de rechazo agudo es una endotelialitis
microvascular, indicando que las clulas
endoteliales son un blanco importante en el rechazo agudo. Tambin los anticuerpos pueden
participar en el rechazo agudo.
4.1. Inmunosupresin
Existen varios grupos de frmacos
inmunosupresores que se utilizan en clnica, entre
ellos se encuentran los inmunosupresores tradicionales, como la azatioprina y la ciclofosfamida
y aquellos ms selectivos, que no deprimen todas
las respuestas inmunes sino que principalmente a
las clulas estimuladas por los antgenos alognicos. Entre estas ltimas se encuentran la
ciclosporina, el mofetil micofenilato, la rapamicina
y la llamada FK-506.
Una de las ms usadas es la ciclosporina, cuyo
principal mecanismo de accin es inhibir la transcripcin de ciertos genes, especialmente los que
codifican IL-2. El resultado es que la ciclosporina
bloquea la proliferacin y diferenciacin de las
clulas T dependientes de esta citoquina, por la
tanto, bloquea las clulas T que estn siendo activadas por los aloantgenos y es por esto que esta
droga acta "selectivamente". Adems, la
ciclosporina induce la sntesis de una citoquina
inmunosupresora, el factor transformante beta
(TGF-).
Tambin se utilizan anticuerpos dirigidos
contra molculas de membrana de las clulas T,
especialmente en el tratamiento de los episodios
de rechazo agudo. Entre estos estn los anticuerpos
monoclonales anti-CD3 (OKT3) y anti-CD25; el
primero se une a la molcula CD3 de las clulas
T bloqueando su funcionamiento, causando lisis
directa por activacin del complemento y aumentando su remocin por fagocitosis, y el anti-CD25
que bloquea la activacin de las clulas T bloqueando la unin de la IL-2 a su receptor y favoreciendo tambin la lisis y remocin de estas clulas.
Tambin tiene un rol importante el uso de
agentes antiinflamatorios como los corticoides,
que bloquean la sntesis y secrecin de diferentes
factores solubles por los macrfagos, tales como
citoquinas (TNF e IL-1), generacin de prostaglandinas, metabolitos del oxgeno, y xido ntrico.
El uso de los inmunosupresores, especialmente de la ciclosporina y ms recientemente del
mofetil micofenilato, ha permitido un dramtico
aumento de la sobrevida de los aloinjertos, espe-
3.3. Rechazo crnico

El rechazo crnico se caracteriza por fibrosis
con prdida de las estructuras normales de los rganos la cual ocurre en un perodo de tiempo
prolongado, entre 6 meses a un ao despus del
trasplante. En la medida que el tratamiento del rechazo agudo ha ido permitiendo su mejor control,
el rechazo crnico ha emergido como la principal
causa de la prdida de los aloinjertos. No se conoce bien la patogenia de este tipo de rechazo pero
en muchos casos se ha observado una
arterioesclerosis acelerada o de injerto, con proliferacin de las clulas musculares lisas de la ntima. sta puede representar una forma especializada de hipersensibilidad retardada en la cual los
linfocitos activados inducen a los macrfagos a
secretar factores de crecimiento de las clulas
musculares. Es frecuente en trasplantes cardacos
y de rin. En modelos experimentales se ha demostrado participacin importante de clulas T
CD4+ y de clulas B en este tipo de rechazo.
4. PREVENCIN Y TRATAMIENTO DEL

RECHAZO
Si el receptor tiene un sistema inmune competente, siempre se producir alguna forma de rechazo. Para lograr un mayor xito en la sobrevida
de los trasplantes y el menor rechazo posible, las
624
Sin ttulo-2
624
5/26/06, 10:26 AM
cialmente de aquellos que provienen de donantecadver. Previamente al uso de estas drogas, la

sobrevida a un ao de los injertos provenientes de
donante-cadver era de un 50-60%, aumentando
a un 90% gracias al uso de ellas. En el caso de
usar donante vivo relacionado (familiar) la
sobrevida es de un 90%.
La inmunosupresin mantenida en el tiempo
es responsable de un aumento de la susceptibilidad a infecciones y tumores oportunistas en estos
pacientes. Esto es particularmente notorio en el
trasplante de mdula sea, el cual requiere de una
intensa inmunosupresin preparatoria. Adems, en
este tipo de trasplante, puede producirse una respuesta de los linfocitos de la mdula sea contra
los aloantgenos del receptor, causando la llamada enfermedad de injerto versus husped (Graft
Versus Host Disease, GVHD).
4.3. Induccin de tolerancia

La tolerancia especfica frente a los
aloantgenos del donante sera el mtodo ideal para
prevenir el rechazo de los aloinjertos. No sera
necesaria la inmunosupresin, no habra riesgo de
rechazo ni de complicaciones derivadas de la
inmunosupresin crnica. Experimentalmente se
ha podido inducir tolerancia, tanto central como
perifrica. Un ejemplo de ello es la anergia
perifrica que se induce bloqueando la interaccin
de seales coestimuladoras necesarias para la activacin de las clulas T.
LECTURAS SUGERIDAS
Abbas, A., Litchman, A., Pober, J., Cellular and
Molecular Immunology, Edition WB Saunders,
chapter 16, 2000.
4.2. Seleccin de donantes

Para evitar el rechazo hiperagudo, deben
seleccionarse donantes que compartan antgenos
de grupo sanguneo ABO con el receptor. Asimismo, que no posean anticuerpos preformados contra antgenos del donante. Esto ltimo se realiza a
travs de la tcnica del "cross matching", que consiste en colocar en contacto suero del receptor (que
contiene los posibles anticuerpos) con clulas del
donante, en presencia de complemento. En caso
de haber anticuerpos preexistentes se va a producir una lisis celular, cuya intensidad va a ser proporcional a la cantidad de anticuerpos presentes
en el receptor. Adems, se realiza el estudio de
tipificacin HLA utilizando una tcnica de
microlinfocitotoxicidad en placa (tcnica de
Terasaki), buscando la mayor identidad entre las
molculas MHC del donante y las del receptor (ver
captulo 42).
En el trasplante renal, se ha constatado que,
a mayor nmero de alelos MHC compartidos entre donante y receptor, mejor es la sobrevida del
aloinjerto, especialmente en el primer ao despus
del trasplante. La experiencia clnica demuestra
que los de mayor relevancia son los antgenos HLA
A, B y DR.
Los estudios de tipificacin HLA requieren
tiempo y no son posibles de realizar en todos los
trasplantes, algunos rganos, como corazn e hgado, no pueden preservarse por muchas horas sin
sufrir deterioro y deben ser trasplantados lo ms
pronto posible.
Denton, M.D., Magee, C.C., Sayegh M.H.

Immunosuppressive strategies in transplantation.
Lancet 353:1083-1991, 1999.
Gould, D.S., Auchincloss, A. Jr., Direct and
indirect recognition: the role of MHC antigens in
graft rejection, Immunology Today 20:77-82,
1999.
Kahan, B., Clark, J., Transplantation of sdolid
organs in Samter's Immunological Diseases, ed.
5, Boston, Little Brown, 1994.
Sherman, L.A., Chattopadhyay, S., The molecular
basis of allorecognition, Annual Review of
Immunology 11:385-402, 1993.
625
Sin ttulo-2
625
5/26/06, 10:26 AM
626
Sin ttulo-2
626
5/26/06, 10:26 AM

Captulo 39
INMUNOMODULADORES
Cecilia Seplveda C. y Mara Antonieta Guzmn M.
1. Introduccin
2. Principales Inmunomoduladores
2.1. Antiproliferativos
2.2. Antagonistas de las Inmunofilinas
2.3. Glucocorticoides
2.4. Agentes biolgicos
2.5. Citoquinas
2.6. Trasplante de mdula sea
2.7. Clulas autlogas modificadas
2.8. Isoprinosine
3. Efectos Adversos de los Inmunomoduladores
627
Sin ttulo-2
627
5/26/06, 10:26 AM
628
Sin ttulo-2
628
5/26/06, 10:26 AM
RESUMEN
Existen numerosas enfermedades de base inmunolgica: autoinmunes e inflamatorias,
inmunodeficiencias, alrgicas y de hipersensibilidad, cuyo tratamiento se basa en el uso de frmacos
y agentes biolgicos inmunomoduladores, ya sea capaces de aumentar (inmunoestimuladores) o
de suprimir (inmunosupresores) las respuestas del sistema inmune alterado o deficiente. Algunos
de estos frmacos tambin se utilizan en la prevencin y tratamiento del rechazo de trasplantes,
situacin en la cual el sistema inmune reacciona frente a la agresin causada por los antgenos
extraos del trasplante. En este captulo se har mencin a algunos de los inmunomoduladores de
mayor aplicacin clnica actual.
origen biolgico, estn actualmente disponibles en

cantidades ilimitadas, y en formas extraordinariamente puras gracias a las tecnologas de DNA
recombinante, de hibridomas y de clonacin celular. Los ms conocidos y en uso clnico se sealan en la tabla 39-1.
1. INTRODUCCIN
Un inmunomodulador puede definirse como
una sustancia biolgica o no biolgica que influencia directamente una funcin inmune especfica,
o indirectamente al modificar uno o ms de los
componentes del sistema inmune. As, por ejemplo, los inmunomoduladores pueden participar en:
(a) la reconstitucin de un sistema inmune
globalmente deficiente, (b) la reconstitucin selectiva de un defecto inmune especfico, (c) la
estimulacin de una funcin normal, por ejemplo
de clulas supresoras o citotxicas y (d) la eliminacin o supresin selectiva de un tipo celular o
de una funcin inmune especfica, por ejemplo,
de clulas tumorales o de clulas supresoras activadas.
Pese a los enormes avances en la obtencin
de inmunomoduladores selectivos y especficos,
la principal limitacin de su uso clnico reside en
la complejidad del sistema inmune, que hace prcticamente imposible modular un componente aislado de esta red sin perturbar la homeostasis de
todo el sistema.
2.1. Antiproliferativos
En este grupo se encuentran los agentes
alquilantes y los inhibidores del metabolismo de
las purinas y pirimidinas, incluidos varios nuevos
inhibidores.
a) Agentes Alquilantes
Estos agentes forman uniones covalentes
con el DNA, y cuando se administran a altas dosis, conducen a la muerte celular. La mayora de
las drogas de este grupo fueron originalmente
aplicadas en dosis altas en el tratamiento del cncer. Sin embargo, en dosis ms bajas o en forma
de "pulsos" intravenosos de aplicacin peridica
se han demostrado tiles como agentes
inmunosupresores y antinflamatorios. Su accin
se ejerce, principalmente, sobre los linfocitos B
pudiendo llegar a causar la supresin de la produccin de anticuerpos e hipogammaglobulinemia, los linfocitos T CD8 a bajas dosis y
los linfocitos T CD4 a altas dosis.
Actan principalmente en clulas en divisin
y su uso implica riesgos como el desarrollo de
aplasia medular, alopeca, esterilidad, cistitis
hemorrgica. Usados a largo plazo puede llegar a
2. PRINCIPALES INMUNOMODULADORES
Aunque la experiencia con inmunomoduladores en estudios clnicos controlados es an limitada, algunos de estos agentes constituyen las
modalidades teraputicas de eleccin en ciertas patologas, habiendo sido aprobados para su uso clnico. Algunos de estos agentes, originalmente de
629
Sin ttulo-2
629
5/26/06, 10:26 AM
ce, principalmente, sobre los linfocitos T CD4 y

CD8 y sobre las clulas NK, pero tambin sobre
el conjunto de clulas hematopoyticas, por lo cual
se requiere un ajuste muy preciso de sus dosis. La
administracin concomitante de inhibidores de la
sntesis de cido rico (alopurinol), debe evitarse
debido al riesgo de aplasia medular. La sobredosis
puede producir pancitopenia, macrocitosis aislada y lesiones hepticas. Este frmaco es utilizado
principalmente en la prevencin del rechazo de
trasplantes de rganos, con frecuencia asociado a
corticoides. Una vez que el esquema teraputico
se establece, la dosis se mantiene salvo la ocurrencia de una patologa infecciosa. La azatioprina
ha sido utilizada en forma prolongada en trasplantes dada la ausencia de nefrotoxicidad a dosis
habituales, y que en todo caso, requiere ajuste de
dosis si existe insuficiencia renal. La tioguanosina,
uno de sus metabolitos, es capaz de producir rupturas cromosmicas, pero el riesgo oncognico de
la azatioprina en monoterapia no est bien establecido. En las enfermedades autoinmunes, la
azatioprina se utiliza principalmente en las formas corticorresistentes o corticodependientes con
el fin de reducir la dosis de stos y sus efectos
indeseables.
Tabla 39-1. Inmunomoduladores
Antiproliferativos
Alquilantes
Inhibidores del metabolismo de las purinas
y de las pirimidinas
Antagonistas de las Inmunofilinas
Glucocorticoides
Agentes biolgicos
Globulinas antilinfocito y antitimocito
Gammaglobulina endovenosa
Anticuerpos monoclonales
Citoquinas
Clulas autlogas modificadas
Inmunoestimuladores sintticos
desarrollarse tumores, como cncer vesical y

leucemia mieloide.
Uno de los ms usados es la ciclofosfamida,
de gran utilidad en el tratamiento de formas severas de enfermedades reumatolgicas autoinmunes
e inflamatorias.
c)
b) Inhibidores del metabolismo de las purinas
y pirimidinas
Nuevos inhibidores de la biosntesis de

nucletidos
Estos frmacos que inhiben en forma similar

las respuestas linfocitarias T y B, pero con una
menor incidencia de mielosupresin que los agentes anteriormente analizados. La mizobirina y el
cido micofenlico inhiben la accin de la
inosinmonofosfatodehidrogenasa, suprimiendo la
sntesis de nucletidos guannicos. Su uso es creciente en la prevencin del rechazo de alotrasplantes, con muy buenos resultados. Brequinar
inhibe la enzima dihidroorotato dehidrogenasa,
requerida para la sntesis de novo de pirimidinas.
Metotrexato. Es un inhibidor de la tetrahidrofolato

reductasa bloqueando as la sntesis de timidilato,
la sntesis de novo de purinas y la divisin celular.
En dosis altas, produce una fuerte toxicidad
hematolgica y digestiva, aunque este efecto puede neutralizarse con la administracin preventiva
de cido flico. A dosis bajas inhibe la funcin de
las clulas B, suprime la funcin macrofgica, la
quimiotaxis de los neutrfilos, la produccin de
ciertos leucotrienos, y la produccin de citoquinas
como la IL-1 (IL: Interleuquina). No se asocia con
mayor riesgo de mutagenicidad ni teratogenicidad,
pero posee toxicidad heptica y puede producir
fibrosis pulmonar. Se utiliza en el tratamiento de
enfermedades reumatolgicas autoinmunes e
inflamatorias.
2.2. Antagonistas de las Inmunofilinas

Ciclosporina A. Es un derivado de origen fngico,
descubierto en 1976, que acta selectivamente
frente a linfocitos T activados. Se une a receptores intracitoplasmticos, las ciclofilinas A, B, C y
D de la familia de las inmunofilinas; el complejo
formado inhibe la accin de la fosfatasa 2B o
calcineurina. Este efecto conduce a un bloqueo
de la transcripcin, calcio dependiente, del gen de
IL-2 y de otras citoquinas como IL-3, IL-4 e
Azatioprina. Es un derivado de la 6-mercaptopurina; no es activo por s mismo, sino por sus

derivados. Bloquea la transformacin del cido
inosnico en cido adenlico, precursor de bases
purnicas (guanina, hipoxantina). Su accin se ejer-
630
Sin ttulo-2
630
5/26/06, 10:26 AM
interfern gamma (IFN-). Al contrario de los

frmacos ya analizados, que actan sobre todas
las clulas que sintetizan activamente DNA, este
frmaco acta exclusivamente sobre los
linfocitos activados, principalmente sobre los
linfocitos T CD4. No tiene efectos adversos sobre la hematopoyesis y no modifica la poblacin de linfocitos T de memoria. Su accin
inmunosupresora es rpidamente reversible despus de suspender la terapia.
Por su gran potencia inmunosupresora y su
relativa mayor selectividad de accin este agente
farmacolgico ha revolucionado la era de los trasplantes, mejorando muy significativamente la
sobrevida y la calidad de vida de los pacientes.
Tambin se utiliza en formas severas de enfermedades autoinmunes e inflamatorias.
Entre sus efectos secundarios podemos mencionar: nefrotoxicidad, con hipertensin arterial
secundaria, hipertrofia gingival, hipertricosis,
parestesias distales, sndromes del tipo hemolticourmico, y raramente, hepatitis con patrn
colestsico.
en particular, genes que codifican para citoquinas.

Tambin tienen efectos sobre la traduccin del
RNA, la sntesis y la secrecin de citoquinas ( IL2 e IFN-)
In vivo, los glucocorticoides inhiben el acceso de los leucocitos a focos inflamatorios. A dosis
altas, inducen una leucocitosis por movilizacin
del "pool" marginal y una linfopenia que afecta
principalmente a linfocitos T CD4, por redistribucin de stos. Tienen por lo tanto su mayor efecto sobre la inmunidad celular.
Su accin antinflamatoria se explica, principalmente, por los efectos que poseen sobre
macrfagos y neutrfilos. Ellos inhiben la sntesis de IL-1, IL-6 y en menor grado, de TNF. Tambin disminuyen la sntesis de prostaglandinas y
de leucotrienos, y la actividad de la fosfolipasa
A2, adems de inhibir la cicloxigenasa de los
macrfagos. Inhiben la xido ntrico sintetasa y
as la produccin del vasodilatador local, xido
ntrico (NO). Tambin son inhibidores de distintas proteasas: colagenasa, elastasa y activador del
plasmingeno y de la produccin de derivados del
NO. Actan sobre las clulas endoteliales e inhiben
la permeabilidad vascular inhibiendo la expresin
de los genes MHC de clase II y de las molculas
de adhesin ELAM-1 e ICAM-1. En el hombre,
slo los timocitos y los linfocitos T activados son
susceptibles a la lisis por apoptosis.
Los corticoides de sntesis ms utilizados
como inmunosupresores son la prednisona y la
metilprednisolona. Los efectos secundarios son
mltiples: sndrome Cushingoide, hipertensin
arterial, osteoporosis, cataratas, diabetes, alteracin del crecimiento, acn, defectos de cicatrizacin, entre otros.
FK506. Es un macrlido de origen fngico, que

acta a menores dosis que la ciclosporina A. Este
frmaco se liga a una inmunofilina citoplasmtica,
la FKBP, y este complejo tambin inhibe, a nivel
transcripcional, la sntesis de IL-2 y otras
citoquinas.
Rapamicina. Es otro macrlido que se une al
mismo receptor citoplasmtico que FK506 pero
sus efectos son distintos. Este frmaco bloquea la
actividad de una serintreoninquinasa y su asociacin con la ciclina D1, que controla la entrada de
las clulas a la fase S del ciclo celular. Por ello, la
rapamicina no disminuye la sntesis de citoquinas
pero impide la expansin clonal de linfocitos T
estimulados por antgenos.
2.4. Agentes biolgicos

Globulinas antitimocitos o antilinfocitos. Se
obtienen inmunizando conejos o caballos con estas clulas de origen humano y se utilizan, principalmente, en la prevencin y tratamiento de los
rechazos de trasplante. Tienen el severo riesgo de
inducir el desarrollo de la enfermedad del suero,
debido a la produccin de anticuerpos contra estos anticuerpos heterlogos (de otra especie), que
se manifiesta clnicamente en 10 a 30% de los
pacientes, alrededor del dcimo da de tratamiento, con la aparicin de fiebre, artritis, adenopatas
dolorosas, y leucocitosis con trombocitopenia y
cada del nivel plasmtico del frmaco administrado. Esta patologa implica la detencin de la
2.3. Glucocorticoides
Los glucocorticoides constituyen uno de los
grupos de drogas ms importantes en el tratamiento de enfermedades mediadas inmunolgicamente.
Son adems, los ms potentes antinflamatorios
conocidos. Estos frmacos son capaces de unirse
a receptores intracitoplasmticos y son traslocados
al ncleo celular, donde el complejo se fija a secuencias reguladoras especficas, los elementos de
respuesta a glucocorticoides, modulando positiva
o negativamente la transcripcin de ciertos genes,
631
Sin ttulo-2
631
5/26/06, 10:26 AM
terapia o el cambio por un anticuerpo de otro origen.
tienen el potencial de inducir anticuerpos en el individuo y desencadenar una enfermedad del suero y otros sndromes de hipersensibilidad, pero esto
es raro.
La modificacin de este tipo de frmacos sustituyendo la regin Fc de la inmunoglobulina por
una secuencia aminoacdica de anticuerpo humano, puede colaborar en producir anticuerpos
monoclonales menos sensibilizantes y con mejor
cintica in vivo.
Actualmente su produccin in vitro en sistema de produccin industrial, est llevando a un
requerimiento cada vez menor del uso de animales. A travs de la ingeniera gentica se estn generando anticuerpos monoclonales quimricos,
humanizados e incluso humanos.
Inmunoglobulinas intravenosas: Se utilizan

inmunoglobulinas intravenosas como terapia de
reemplazo en pacientes con inmunodeficiencias
primarias de anticuerpos (ver captulo 30), y tambin en algunas inmunodeficiencias secundarias
con dficit de inmunoglobulinas.
Existen variadas inmunoglobulinas intravenosas comerciales. Estas deben estar libres de agregados, y provenir de un "pool" de ms de 1.000
donantes en los cuales se ha descartado la presencia de infecciones trasmisibles como la causada
por el VIH y otros virus.
La terapia de reemplazo con inmunoglobulinas est indicada en pacientes con niveles de
IgG significativamente disminuidos y que tienen
una deficiencia de anticuerpos documentada, de
significado clnico. Su propsito es proveer cantidades suficientes de anticuerpos especficos, para
disminuir la frecuencia y severidad de las infecciones que presentan estos pacientes y mejorar su
calidad de vida.
2.5. Citoquinas
Interferones. Comprenden una familia de protenas (glicoprotenas en el estado natural y protenas no glicosiladas producidas por tecnologa de
DNA recombinante) clasificadas como alfa, beta
y gamma (ver captulo 11). El IFN- es producido por los leucocitos polinucleares, el IFN- por
los fibroblastos, y el IFN- por los linfocitos T.
Adems de sus conocidas propiedades
antivirales, los interferones tienen efectos
antiproliferativos contra clulas tumorales, y efectos especficos sobre las funciones inmunolgicas.
El IFN- est estructuralmente relacionado al IFN y ambos son producidos en respuesta a la
estimulacin con virus y polirribonucletidos. En
cambio, el IFN- no est relacionado estructuralmente con ellos, y es producido por los
linfocitos T en respuesta a estmulos especficos,
mitgenos e IL-2. Adems, tiene importantes propiedades inmunomoduladoras que no poseen los
otros interferones.
Los IFNs que estn actualmente en uso clnico son IFNs naturales parcial o altamente purificados, e IFNs altamente purificados producidos
por ingeniera gentica o recombinantes. Su uso y
eficacia han sido difciles de probar, tanto por sus
variadas preparaciones, vas de administracin y
dosis, como por la heterogeneidad de las situaciones clnicas en las que se han evaluado.
Slo recientemente han surgido algunas indicaciones precisas en el uso de estos agentes. Fundamentalmente stas se refieren al uso del IFN-
en el tratamiento de las hepatitis virales crnicas
por virus B y virus C, IFN- en la esclerosis mltiple e IFN- en la enfermedad granulomatosa cr-
Anticuerpos monoclonales. Producidos por un

solo clon de clulas B, son monoespecficos y
homogneos. Los anticuerpos monoclonales se
utilizan como agentes teraputicos principalmente en el tratamiento del rechazo agudo de
alotrasplantes, in vitro en la eliminacin de clulas de la mdula sea, como agentes anti-tumorales
y en el tratamiento de ciertas enfermedades
inflamatorias crnicas.
Entre los anticuerpos monoclonales ms usados, especialmente en el tratamiento del rechazo
agudo de trasplantes se encuentra el anticuerpo
monoclonal anti-CD3 (OKT3), con poderoso efecto inmunosupresor. El sitio probable de accin de
este frmaco es la interferencia con seales de
transduccin que siguen al reconocimiento del
receptor T al antgeno presentado por clulas presentadoras de antgeno. Adems existira un efecto de lisis directa de los linfocitos T CD3 debido a
que se produce una rpida cada de los recuentos
linfocitarios.
Existen otros anticuerpos monoclonales aprobados para su uso clnico, utilizados tambin en
la prevencin y manejo de rechazos de trasplantes, algunos tumores y en enfermedades
inflamatorias como la artritis reumatoidea y la
enfermedad de Crohn.
Como estos frmacos son de origen murino,
632
Sin ttulo-2
632
5/26/06, 10:26 AM
nica, una inmunodeficiencia primaria que se caracteriza por un defecto del metabolismo oxidativo
de los leucocitos (ver captulo 30).
En la actualidad se dispone de algunos IFNs
"pegilados"; esto es, unidos a polietilenglicol, lo
que facilita su utilizacin permitiendo su administracin semanal, con menos efectos adversos.
las LAK. Mtodo descrito en 1980, ha sido extensamente estudiado en una variedad de tumores
metastsicos y en la actualidad se evalan varias
modificaciones del mtodo original: clulas LAK
alognicas, infusin arterial directa de clulas LAK
y de IL-2 en los rganos afectados, clulas
infiltrantes del tumor activadas (clulas TIL), etc.
Interleuquina-2. Esta citoquina producida por los

linfocitos T activados, facilita y permite la expansin clonal de estas clulas. Adems, estimula la
produccin de clulas NK, clulas killer activadas con linfoquinas (clulas LAK) (ver captulo
37), y de linfocitos B. Estimula la actividad NK
directamente y quizs tambin indirectamente estimulando la produccin de IFN-. Puede tambin
estimular a los linfocitos T a producir otras
linfoquinas activadoras de los linfocitos B.
La IL-2 se ha estudiado en pacientes con cncer y en la infeccin VIH/SIDA. En la actualidad
se utiliza, combinada con IFN-, en el tratamiento del cncer renal metastsico, y asociada con terapia antirretroviral especfica, en ciertos casos de
SIDA.
Tambin se est evaluando la administracin
intratumoral de genes de citoquina para lograr una
secrecin paracrina de citoquinas inmunoestimuladoras, por ejemplo, del gen de la IL-2 en cncer renal metastsico.
2.8. Isoprinosine
3. EFECTOS ADVERSOS DE LOS INMUNOMODULADORES
Isoprinosine es un complejo que contiene

inosina y paracetaminobenzoato de dimetilamino2-propanol. Gracias a su componente inosina, este
frmaco estimula a los linfocitos T lo que puede
ser verificado por un aumento de la respuesta de
estas clulas a los mitgenos. Adems de este efecto sobre los linfocitos T, parece aumentar su nmero as como el nmero y funcin de las clulas
NK. Tambin aumenta la funcin de los linfocitos
B activados por el Ag.
Isoprinosine estimula la sntesis de RNA en
linfocitos activados, a travs de la activacin de
la va "salvaje" de las purinas.
Muchas infecciones virales frecuentemente
disminuyen la inmunidad celular en forma transitoria, en muchos casos esta forma de inmunosupresin puede corregirse con el uso de
isoprinosine.
El objetivo del trasplante de mdula sea es

el reemplazo de las clulas defectuosas o ausentes del receptor, con clulas inmunocompetentes
normales capaces de autorreplicarse. La mdula
sea normal contiene clulas pluripotenciales que
pueden dar origen a eritrocitos, granulocitos, clulas de la lnea monocito-macrofgica,
megacariocitos, y clulas T y B inmunocompetentes. Constituye actualmente la nica forma
de terapia adecuada para pacientes con
inmunodeficiencias severas, celulares y combinadas. En trasplantes HLA-idnticos la sobrevida es
de un 80%, con evidencias de injerto exitoso de
clulas T y clulas pluripotenciales del donante.
En trasplantes HLA-haploidnticos, aproximadamente el 54% de los pacientes sobrevive.
Los tratamientos inmunosupresores producen

un dficit inmunitario que puede traducirse en patologas infecciosas o tumorales, por lo cual estas
terapias deben ser cuidadosamente vigiladas del
punto de vista clnico y de laboratorio.
La inmunosupresin intensa acarrea el riesgo de infecciones oportunistas, particularmente
pneumocystosis, toxoplasmosis, listeriosis,
legionellosis, aspergillosis y criptosporidiosis.
Las infecciones virales son frecuentes en los
inmunodeprimidos, especialmente por citomegalovirus, herpes simplex 1 y 2, virus de EpsteinBarr, virus varicella zoster, papilomavirus e incluso, por virus de Hepatitis B y C.
La mayor parte de las infecciones virales crnicas pueden conducir al desarrollo de cnceres,
especialmente despus de terapias inmunosupresoras prolongadas: epiteliomas espinocelulares,
cncer de cuello uterino, linfomas, hepatocarcinomas, entre otros.
2.7. Clulas autlogas modificadas

Son linfocitos T y clulas NK activadas por
incubacin con IL-2, a las que se denomina clu-
633
Sin ttulo-2
633
5/26/06, 10:26 AM
Existen distintos protocolos teraputicos en

trasplantes y en enfermedades autoinmunes, y actualmente estn en ensayo diferentes metodologas
de manipulacin de la respuesta inmune, que pretenden minimizar las consecuencias negativas de
estas terapias.
LECTURAS SUGERIDAS
Bounpas, D., "Glucocorticoid Therapy for
Immune-mediated Diseases: Basic and Clinical
Correlates", Ann Int Med., 119:1198,1993.
Buckley, R., "Bone marrow reconstitution in
primary immunodeficiency" en Clinical
Immunology (Rich R., editor), Mosby-Year Book,
Inc St Louis, Nissouri, 1996.
Calabresi, P., Chabner B., "Antineoplastic agents"
in Goodman and Gillman's, The Pharmacologic
Basis of Therapeutics, 8va. Edicin, McGraw
Hill, New York, 1993.
Hong J.C., Kahan B.D. "Immunosuppressive
agents in organ transplantation: past, present, and
future", Sem nephrol 20; 108, 2000.
International Chronic Granulomatous Disease
Cooperative Study Group, "A controlled trial of
interferon gamma to prevent infection in chronic
granulomatous disease", N Eng J Med,
324:509,1991.
Rosenberg, S.; Yannelli, J.; Yang, J. et al.,
"Treatment of patients with metastasic melanoma
using autologous tumor infiltrting lymphocytes
and interleukin-2, J Natl Cancer Inst, 86: 1159,
1994.
Rovira P.; Mascarell, L.; Truffa-Bachi, P., "The
impact of immunosuppressive drugs on the
analysis of T cell activation", Curr Medicin Chem
7: 673; 2000.
634
Sin ttulo-2
634
5/26/06, 10:26 AM

SECCIN
MTODOS INMUNOLGICOS Y DE
BIOLOGA MOLECULAR
635
Sin ttulo-2
635
5/26/06, 10:26 AM
636
Sin ttulo-2
636
5/26/06, 10:26 AM

Captulo 40
MTODOS INMUNOQUMICOS
Darwins Castillo A. y Carolina Valenzuela B.
1. Introduccin
2. Inmunoanlisis
2.1.Inmunoanlisis con reactivos no marcados
2.1.1.1. Reaccin de precipitacin
en medio lquido
a) Precipitacin en tubo
b) Floculacin
c) Turbidimetra
d) Nefelometra
e) Precipitacin de complejos inmunes solubles
2.1.1.2. Reaccin de precipitacin
en gel
a) Inmunodifusin doble
b) Inmunodifusin radial
c) Inmunoelectroforesis
d) Inmunofijacin
e) Contrainmunoelectroforesis
f) Rocket inmunoelectroforesis
g) Inmunoelectroforesis cruzada o
bidimensional de Laurell
a) Aglutinacin directa
b) Aglutinacin indirecta
c) Aglutinacin pasiva
2.1.3. Reaccin con participacin del
complemento
a) Fijacin del complemento
2.2. Inmunoanlisis con reactivos marcados
a) Microscopa inmunofluorescente
b) Inmunoanlisis de fluorescencia
polarizada
c) Inmunoanlisis de fluorescencia
unida a enzima
d) Citometra de flujo
2.2.2. Enzimainmunoanlisis (EIA)
a) EIA homogneo
b) EIA heterogneo
c) Electroinmunotransferencia o
Western blot o Immunoblotting
2.2.3. Radioinmunoanlisis (RIA)
a) RIA en fase soluble
b) RIA en fase slida
c) Deteccin inmunorradiomtrica
para antgeno
2.2.4. Quimiluminiscencia
2.2.5. Bioluminiscencia
637
Sin ttulo-2
637
5/26/06, 10:26 AM
638
Sin ttulo-2
638
5/26/06, 10:26 AM
RESUMEN
La base de los mtodos inmunoqumicos es la unin del antgeno y/o hapteno con el anticuerpo, es una reaccin especfica, de alta afinidad y reversible. Est definida por una constante
de equilibrio o de asociacin intrnseca (K) que es una medida de fuerza de la interaccin de la
reaccin para formar complejos estables.
Los anticuerpos son protenas relativamente estables, y sus reacciones con haptenos o
antgenos pueden ser estudiados en un amplio rango de condiciones. Las modificaciones en la
constante de asociacin inciden en las fuerzas que estabilizan los complejos antgeno-anticuerpo
(Ag-Ac). La reaccin es dependiente de algunos parmetros como: temperatura, pH y fuerza
inica del medio que deben considerarse al llevar a cabo un inmunoanlisis.
Los inmunoanlisis pueden ser divididos en mtodos que requieren de sistemas Ag-Ac no
marcados y marcados. La mayora de los inmunoanlisis no marcados se basan en reacciones
inmunes secundarias (precipitacin). Los inmunoanlisis marcados se basan en reacciones inmunes primarias (inmunoanlisis fluorescentes).
En el inmunoanlisis con reactivos no marcados, la interaccin de antgenos solubles
macromoleculares y anticuerpos especficos llevan a la formacin de complejos, que en una
relacin molar equivalente precipitan en solucin (precipitacin). Existe una reaccin anmala
llamada floculacin, en que la precipitacin se observa slo en un rango muy estrecho de la
proporcin Ag/Ac. La interaccin de antgenos particulados con sus anticuerpos especficos producen aglutinacin. La turbidimetra y nefelometra determina niveles de antgeno o de anticuerpo en baja concentracin, formando pequeos agregados que producen una turbidez que
puede ser medida por disminucin y dispersin de la luz incidente, respectivamente.
Los mtodos de precipitacin en gel detectan la presencia y/o concentracin de antgenos
y/o anticuerpos por la formacin de bandas, anillos o arcos de precipitado que corresponden a
complejos antgeno-anticuerpo en la zona de equivalencia (inmunodifusin doble,
inmunodifusin radial, inmunoelectroforesis, inmunofijacin, contrainmunoelectroforesis,
rocket inmunoelectroforesis e inmunoelectroforesis cruzada).
El inmunoanlisis con reactivos marcados se clasifica en homogneo o heterogneo y
puede ser de dos tipos competitivo y no competitivo. El inmunoanlisis fluorescente incluye la
microscopa inmunofluorescente que corresponde a la tradicional inmunofluorescencia (IF)
que es una tcnica inmunohistoqumica o inmunocitoqumica que permite la localizacin de
antgenos en clulas tejidos, y la deteccin y titulacin de anticuerpos especficos; el
inmunoanlisis de fluorescencia polarizada (FPIA) que es homogneo y competitivo; el
inmunoanlisis de fluorescencia unida a enzima (ELFIA) que es heterogneo y puede ser
competitivo o no competitivo; y la citometra de flujo que permite medir la cantidad de anticuerpo monoclonal fluorescente unido en cada clula que atraviesa un lser e identificarla segn
su tamao y granularidad de acuerdo a la forma que deflecta o dispersa la luz del lser.
El enzimainmunoanlisis (EIA) se basa en dos fenmenos biolgicos: reaccin
inmunolgica (unin Ag-Ac) y la amplificacin por reacciones qumicas (enzima que acta sobre el sustrato). Se dispone de EIA homogneo representado por el enzyme-multiplied
immunoassay technique (EMIT) que adems es competitivo y de EIA heterogneo, como el
"enzyme-linked inmunosorbent assay" (ELISA) y el "microparticle enzyme immunoassay"
(MEIA) que adems son no competitivos. La electroinmunotransferencia combina la
electroforesis en gel SDS-poliacrilaminada y el enzimainmunoanlisis. El radioinmunoanlisis
(RIA) utiliza antgeno o anticuerpo, generalmente marcados con istopos como 125I o, eventualmente, 131I y este inmunoanlisis puede llevarse a cabo en fase soluble o slida.
Finalmente existe el inmunoanlisis quimiluminiscente que utiliza la emisin de luz producida en ciertas reacciones qumicas de oxidacin, como por ejemplo, la oxidacin del luminol
y el inmunoanlisis bioluminiscente que se basa en un sistema natural la D-luciferina/luciferasa,
en que la luciferasa cataliza la oxidacin de la D-luciferina en presencia de ATP y Mg+2 a
oxiluciferina, con emisin de luz a 546 nm.
639
Sin ttulo-2
639
5/26/06, 10:26 AM
como ultracentrifugacin, "quenching" fluorescentes, y otros. Pero, el mtodo que se utiliza

corrientemente es el equilibrio de dilisis.
En forma prctica, en el laboratorio se calcula
la constante de asociacin intrnseca promedio
(Ko) obtenida a travs de la ecuacin de Scatchard,
que se define por la concentracin de hapteno o
ligando libre requerida para ocupar la mitad de
los sitios activos o de unin de los anticuerpos.
De acuerdo a esta premisa, en la ecuacin 2:
1. INTRODUCCIN
La unin del antgeno (Ag) con el anticuerpo (Ac) es una reaccin fundamental en la metodologa inmunoqumica. En general, la mayora
de los antgenos son macromolculas, especialmente protenas con una estructura completamente
establecida en que regularmente no conocemos la
identidad, ni la conformacin del determinante
antgnico que reacciona con el anticuerpo, ni el
nmero por molcula de Ag. Para comprender la
reaccin Ag-Ac y evitar reacciones complicadas
con Ags macromoculares, en adelante se van a
considerar reacciones de Acs especficos con molculas de haptenos (Hp) simples.
La produccin de Acs contra Hp se obtiene
generalmente inmunizando animales con el Hp
unido covalentemente a una protena. La formacin de complejos especficos Hp-Ac puede ser
examinados en detalle con sistemas relativamente simples y los anticuerpos que reaccionan son
fcilmente aislados e identificados.
Como se ha sealado, la base de los mtodos
inmunoqumicos es la unin del antgeno y/o
hapteno con el anticuerpo. Esta reaccin se caracteriza por ser especfica, de alta afinidad y reversible. Est definida por una constante de equilibrio o de asociacin intrnseca (K) que es una
medida de la fuerza de interaccin de la reaccin
para formar un complejo estable.
[Hp Ac] = [Ac], por lo tanto,
1
Ko=
[Hp]
La unidad de Ko es el recproco de la concentracin, es decir, litro/moles.

Los anticuerpos son protenas relativamente
estables y sus reacciones con haptenos o antgenos
pueden ser estudiados en un amplio rango de
condiciones. Las modificaciones que se producen
en la constante de asociacin inciden en las fuerzas
que estabilizan los complejos Ag-Ac. Por lo tanto,
las caractersticas de la reaccin es dependiente
de varios parmetros como: temperatura, pH y
fuerza inica del medio. Por ejemplo, un aumento
de la temperatura puede afectar la interaccin del
anticuerpo con hapteno o antgeno que puede
disminuir o no la constante de asociacin y, por lo
tanto, modificar la afinidad. Sin embargo, la
prctica general es incubar la mezcla de
anticuerpos y antgenos a 37C o a temperatura
ambiente (aproximadamente 22 C).
La unin del hapteno p-aminobenzoato con
el anticuerpo anti-p-aminobenzoato disminuye
tanto con la reduccin de pH de 7 a 4, como con el
aumento de la concentracin de cloruro de sodio
(NaC1) desde 0,1 a 1 M. Sin embargo, idnticos
cambios no afectan a la unin del hapteno 2,4dinitroanilina (DNP) a su anticuerpo anti-DNP. La
explicacin se debera probablemente a que el
grupo COO- del benzoato interacta con un grupo
cargado positivamente del sitio de combinacin
de los anticuerpos y que en cambio, en el grupo
DNP las interacciones inicas no son importantes
para la unin con el sitio de su anticuerpo.
k
Hp + Ac
[Hp Ac]
(1)
k'
k
K=
[Hp Ac]
=
(2)
k'
[Hp] [Ac]
k : constante de asociacin
k': constante de disociacin
K representa la afinidad intrnseca de un sitio

activo representativo del anticuerpo por un hapteno
o ligando en trmino de concentracin en
equilibrio, que puede calcularse midiendo la
concentracin de hapteno o ligando libre.
Existen varios mtodos para distinguir
hapteno libre (Hp) de hapteno unido (Hp-Ac),
640
Sin ttulo-2
640
5/26/06, 10:26 AM
(Ag-Ac) con relacin variable de Ag o de Ac, que

frecuentemente llegan a ser insolubles y precipitan
en solucin. Esta se conoce como reaccin de
precipitacin que es dependiente de la relacin
molar Ag y Ac. La formacin de complejos de
haptenos o de pequeos antgenos univalente con
sus anticuerpos son solubles. La interaccin de
antgenos particulados, como microorganismo o
clulas con sus anticuerpos especficos producen
la reaccin de aglutinacin. En la tabla 40-1 se
muestran los mtodos de inmunoanlisis con
reactivos no marcados.
2. INMUNOANLISIS
Los inmunoanlisis son actualmente
herramientas de amplio uso en los laboratorios
para medir diferentes analitos biolgicos, debido
a su facilidad de trabajo, como en la obtencin de
resultados sensibles y especficos.
Los inmunoanlisis pueden ser divididos en
mtodos que requieren de sistemas Ag-Ac no
marcados y marcados. La mayora de los
inmunoanlisis no marcados se basan en
reacciones inmunes secundarias, como por
ejemplo, precipitacin y aglutinacin. Se miden
por mtodos cuya base es la dispersin de la luz o
por recuento de partculas o clulas Los
inmunoanlisis marcados se basan en reacciones
inmunes primarias, como por ejemplo, inmunoanlisis fluorescente y enzimainmunoanlisis.

2.1.1.1. Reaccin de precipitacin en medio
lquido
a) Precipitacin en tubo. La precipitacin en tubo
es un procedimiento que no se usa corrientemente
en el laboratorio, pero que es necesario conocer
para apreciar las caractersticas generales de la
reaccin de anticuerpo con antgeno de alto peso
molecular en medio lquido. En forma prctica se
2.1. Inmunoanlisis con reactivos no marcados

La interaccin de antgenos solubles
macromoleculares (polivalentes) y anticuerpos
especficos llevan a la formacin de complejos
Tabla 40-1. Inmunoanlisis con reactivos no marcados

Reaccin de precipitacin
En medio lquido
Precipitacin en tubo
Floculacin
Turbidimetra
Nefelometra
Precipitacin de complejos inmunes solubles
En gel
Inmunodifusin doble
Inmunodifusin radial
Inmunoelectroforesis
Inmunofijacin
Contrainmunoelectroforesis
Rocket inmunoelectroforesis
Inmunoelectroforesis cruzada o bidimensional de Laurell
Reaccin de aglutinacin
Aglutinacin directa
Aglutinacin indirecta
Aglutinacin pasiva
Reaccin con participacin del complemento
Fijacin del complemento
Actividad hemoltica del complemento
641
Sin ttulo-2
641
5/26/06, 10:26 AM
acuerdo a la teora del enrejado (lattice theory)

de Heidelberger, Kendall y Marrack. Ellos
sugirieron que la precipitacin puede ser
consecuencia del crecimiento del agregado
antgeno-anticuerpo de tal manera que la molcula
del antgeno se une a ms de una molcula de
anticuerpo y cada molcula de anticuerpo se une
a ms de una de antgeno en que participan
activamente interacciones Fc-Fc, de manera que
cuando el agregado excede un volumen crtico,
precipita espontneamente.
El precipitado formado puede disociarse y
volver al equilibrio con adicin de Ag fresco. Cuando
se produce un exceso suficiente se forman pequeos
realiza en una batera de tubos que contienen un

volumen fijo de antisuero (concentracin fija de
anticuerpo) a los que se les aade diferentes
concentraciones de antgeno, midiendo la protena
total del precipitado formado y detectando el
excedente de Ac o de Ag en el sobrenadante.
Como se muestra en la figura 40-1, a una
concentracin definida de anticuerpos, la cantidad
de complejo Ag-Ac precipitado aumenta con la
cantidad de antgeno aadido hasta un valor
mximo, que sobrepasndolo lleva a una
disminucin progresiva de la precipitacin. Se
produce precipitacin de una cantidad mxima de
anticuerpos por una cantidad ptima de antgeno.
Figura 40-1. Curva de precipitacin para un complejo especfico Ag-Ac.
complejos solubles y el precipitado se solubiliza.
En la curva de precipitacin se encuentra una

zona de exceso de anticuerpos, el sobrenadante
contiene anticuerpo libre, una zona de exceso de
antgeno, el sobrenadante contiene antgeno libre
y una zona de equivalencia o punto de equivalencia, el sobrenadante est libre de anticuerpo y
antgeno libre.
Es importante tener presente que en las zonas de exceso de anticuerpos y de antgenos se
detectan complejos inmunes solubles. En la zona
de exceso de antgeno los sobrenadantes contienen
complejos solubles de varias composiciones como
Ag4 Ac3, Ag3 Ac2 y Ag2 Ac. En el extremo de
esta zona los complejos que principalmente se
forman son Ag2 Ac que se atribuye a los dos sitios
activos o a la divalencia de la molcula de anticuerpo IgG. Este fenmeno es explicado de
b) Floculacin. La floculacin es una reaccin de

precipitacin anmala, donde la precipitacin se
observa solamente en un rango muy estrecho de la
proporcin Ag/Ac. Los agregados insolubles se
forman en una relativa gran cantidad de Ag. Estas
reacciones se dan slo con algunos antisueros, como
por ejemplo, sueros de caballos antitoxina diftrica,
antitoxina tetnica y antitoxinas estreptoccicas y
suero humano anti-tiroglobulina. Es posible que los
antisueros que floculan contengan algunos
anticuerpos no precipitantes de alta afinidad que
deben ser previamente saturados con el antgeno.
c) Turbidimetra. La turbidimetra cuantifica la
nubosidad o turbidez de una solucin en que
642
Sin ttulo-2
642
5/26/06, 10:26 AM
reacciona el antgeno con el anticuerpo en baja

concentracin. El fotodetector est en lnea a la
luz incidente y la solucin, en ngulo de 0 o 180
y mide una disminucin de la seal o reduccin
en la intensidad de la luz que ocurre como
resultado de la combinacin de la reflexin,
absorcin o dispersin de la luz incidente.
2.1.1.2. Reaccin de precipitacin en gel

Los mtodos de precipitacin en gel
permiten detectar la presencia y/o concentracin
de antgenos y/o anticuerpos presente, por la
formacin de bandas opacas de precipitado que
corresponden a complejos antgenos-anticuerpos
en la zona de equivalencia.
d) Nefelometra. La nefelometria es una tcnica

que permite determinar niveles de antgeno o de
anticuerpo en soluciones a muy baja concentracin. La nubosidad o turbidez que producen los
pequeos inmunocomplejos es medida por la luz
que se dispersa (scattered light), a travs de un
fotodetector que est en un ngulo diferente a la
fuente de luz incidente (30 a 90). Se puede
obtener una gran sensibilidad usando luz
monocromtica de un rayo lser y por adicin de
polietilenglicol que aumenta el tamao de los
agregados. En el laboratorio clnico se est usando
masivamente por sus ventajas en la cuantificacin
de protenas, como: rpido, altamente automatizado, simple de operar, usa pequeos volmenes
de muestra y reactivo, alta sensibilidad (menor que
1 ng/litro) y excelente precisin.
a) Inmunodifusin doble. La inmunodifusin

doble fue desarrollada principalmente por
Ouchterlony en Suecia. Se basa en la difusin del
Ag y el Ac en un medio semislido (gel de agar),
formando bandas de precipitacin donde los
reactantes estn en proporciones equivalentes.
Estos complejos son insolubles y pueden ser
analizados visualmente.
La tcnica se basa en preparar un gel uniforme
de agar en una placa Petri o portaobjeto. En el agar
se practica perforaciones de un dimetro y esquema
previamente establecidos. Las soluciones que
contiene el antgeno y el anticuerpo se colocan en
perforaciones adyacentes y se deja difundir hasta
formar lneas o bandas de precipitacin. La
intensidad, nitidez y posicin de estas bandas es
dependiente de la concentracin del Ag y Ac.
La inmunodifusin doble se utiliza para anlisis
de antgenos y anticuerpos. Permite determinar la
relacin inmunoqumica entre dos antgenos a travs
de componentes idnticos o de reactividad cruzada.
Se distinguen tres patrones de reactividad: reaccin
de identidad, de no identidad y de identidad parcial
o cruzada (figura 40-2). Tambin, puede utilizarse
para determinar monoespecificidad de un antisuero
y para conocer el ttulo de los anticuerpos.
e) Precipitacin de complejos inmunes solubles.

Existen algunas situaciones que hacen necesario
precipitar complejos inmunes solubles para
identificar el antgeno o determinar el contenido de
anticuerpos, que se lleva a cabo modificando la
solubilidad del complejo con polietilenglicol al 2%
o sulfato de amonio al 50% o por adicin de un
reactivo anti-inmunoglobulinas (anticuerpos antiinmunoglobulinas o protena A de estafilococo).
Figura 40-2. Inmunodifusin doble. Reacciones de precipitacin en agar que ilustran reacciones de identidad, identidad parcial
y no identidad.
643
Sin ttulo-2
643
5/26/06, 10:26 AM
La figura 40-3 muestra la utilidad de la

inmunodifusin doble en la deteccin de antgenos
proteicos en orina.
hmeda y temperatura constante, se leen los

dimetros del halo de precipitacin. Se construye
un grfico o se obtiene la ecuacin de la recta con
las concentraciones de referencias versus rea o
dimetro del anillo y se interpola la lectura de la
muestra problema.
Este procedimientos ha sido ampliamente
adaptado para medir muchos antgenos, como por
ejemplo, inmunoglobulinas en diversos lquidos
biolgicos y su sensibilidad puede llegar a 0,1 mg/
ml y su coeficiente de variacin es menor al 20%
(figura 40-4).
b) Inmunodifusion radial. La inmunodifusin

radial es una tcnica de precipitacin en gel, en
que el agar se ha mezclado con un antisuero monoespecfico sobre un portaobjeto o placa de Petri.
Se hacen perforaciones cilndricas que se llenan
con volmenes fijos de soluciones de referencia
de antgeno para el cual el antisuero es especfico
y con soluciones o muestras problemas. La
difusin del Ag en el agar permite la formacin
de anillos de precipitacin, cuya rea es
proporcional a la concentracin inicial del Ag. Al
trmino de 16 a 48 horas de difusin en cmara
c) Inmunoelectroforesis. La inmunoelectroforesis
(IEF) desarrollada por Grabar y Williams, es una
tcnica cualitativa que permite la identificacin
Figura 40-3. Inmunodifusin doble de una muestra de orina. Se observa un elevado nivel de albmina y ausencia de IgG, lo
que indica un posible dao inicial del glomrulo.
Figura 40-4. Cuantificacin de IgG humana por Inmunodifusin radial. Curva de referencia IgG (pocillos 1 al 4) y muestras
de suero de pacientes (pocillos 5 al 8).
644
Sin ttulo-2
644
5/26/06, 10:26 AM
de diferentes antgenos en mezclas complejas, que

pueden tener semejante movilidad electrofortica
y peso molecular, pero diferentes determinantes
antignicos.
Esta tcnica se realiza en geles de agar o
agarosa y se distinguen dos etapas: (1) la solucin
de protenas se somete a separacin electrofortica
y (2) terminada la electroforesis, las protenas son
analizadas con antisueros poli o monoespecficos
en el agar en un canal paralelo al eje de migracin.
Luego de un perodo de difusin en cmara
hmeda, se observan arcos de precipitacin cuya
forma y posicin dependen de las caractersticas
inmunoqumicas y de la concentracin de cada
antgeno.
La IEF es de gran utilidad para el anlisis e
identificacin de componentes monoclonales que
caracterizan las enfermedades asociadas con
gammapatas monoclonales (figura 40-5).
electroforesis se aplican antisueros monoespecficos y la presencia del antgeno complementario

forma complejos antgeno-anticuerpo que
precipitan. La formacin de un precipitado estable
antgeno-anticuerpo fija la protena en el gel
(figura 40-6). Se utiliza esencialmente en la
caracterizacin de inmunoglobulinas monoclonales.
La inmunofijacin y la inmunoelectroforesis
son tcnicas complementarias en la identificacin
de una gamapata monoclonal. La inmunofijacin
debiera ser utilizada frente a protenas anmalas
que son difciles de caracterizar por inmunoelectroforesis.
e) Contrainmunoelectroforesis. La contrainmunoelectroforesis se realiza en gel agar, donde
el pH del tampn de electroforesis permite que el
anticuerpo de cargue positivamente y el antgeno
negativamente. La sensibilidad del mtodo es
aproximadamente 20 veces mayor que la doble
difusin. Actualmente el uso ms importante es
en el diagnstico de enfermedades infecciosas
cuyos antgenos migran hacia el polo positivo en
el agar (figura 40-7).
d) Inmunofijacin. La inmunofijacin es un
procedimiento que utiliza, en una primera etapa,
la electroforesis de protena en gel de agarosa y
luego, la inmunoprecipitacin. Sobre la placa de
agarosa en que se han separado las protenas por
Figura 40-5. Electroforesis e inmunoelectroforesis del suero de un paciente (p) con gammapata monoclonal IgG, . Suero
control (c), suero anti-IgG (), suero anti IgA humana (), suero anti-IgM humana (), suero anti-kappa libre humana () y suero
anti-lambda libre humana ().
645
Sin ttulo-2
645
5/26/06, 10:26 AM
Figura 40-6. Electroforesis e inmunofijacin del suero de un paciente (p) con gammapata monoclonal IgG, . Suero antiIgG humana (), suero anti-IgA humana (), suero anti-IgM humana (), suero anti-kappa libre humana () y suero anti-lamdda
libre humana ().
Figura 40-7. Contrainmunoelectroforesis para la determinacin de antgeno de superficie del virus de la hepatitis B. Pocillos
a: Suero de conejo anti-antgeno de superficie del virus de la hepatitis B. Pocillos b: Sueros humanos positivos y negativos a
antgeno de superficie del virus de la hepatitis B.
f) Rocket Inmunoelectroforesis. El rocket

inmunoelectroforesis es la combinacin de la
electroforesis y la inmunodifusion radial que han
proporcionado un mtodo rpido para medir
concentracin de antgenos. El Ag migra por
electroforesis (aplicado en un pequeo pozo) en un
agar que contiene antisuero (anticuerpos en exceso).
El tiempo requerido para la precipitacin es de
aproximadamente 2 horas. La altura de la zona de

precipitacin que tiene la forma de un rocket es
proporcional a la concentracin de antgeno.
El antgeno debe migrar hacia el polo positivo
en la electroforesis, por tanto, es conveniente para
albmina, transferrina y ceruloplasmina, pero para
inmunoglobulina es ms conveniente la
inmunodifusin radial (figura 40-8).
646
Sin ttulo-2
646
5/26/06, 10:26 AM
Figura 40-8. "Rocket" inmunoelectroforesis para la determinacin de albmina humana. Concentraciones de referencia
de albmina (pocillos 1 al 3) y muestras de pacientes (pocillos 4 al 7).
g) Inmunoelectroforesis cruzada o bidimensional de Laurell. La inmunoelectroforesis cruzada

requiere inicialmente la separacin electrofortica
de una mezcla de antgeno en una direccin perpendicular al fenmeno final de precipitacin o
de etapa rocket. Esta es capaz de resolver mezcla
de antgenos altamente complejas y cuantificar
cada uno de ellos (figura 40-9). Por ejemplo, se
ha utilizado para estimar el grado de conversin
de tercer componente del complementario (C3) a
la forma inactivada C3c.

Los antgenos particulados, como microorganismos y suspensiones celulares son corrientemente
aglutinados cuando se mezclan con sus antisueros.
Los anticuerpos son dirigidos contra determinantes
antignicos de superficie que permiten un adecuado
entrecruzamiento con el Ag particulado permitiendo
la reaccin de aglutinacin. Los principios de la
aglutinacin son los mismos descritos para las
reacciones con antgenos solubles.
Las reacciones de aglutinacin se utilizan
preferentemente para identificar bacteria y tipificar
glbulos rojos, es llevada a cabo, generalmente
en solucin fisiolgica (NaCl 0,15 M; pH 7,0) y
es ampliamente utilizada en determinaciones
semicuantitativas.
En las reacciones de aglutinacin se debe
considerar el fenmeno de prozona que consiste en
que algunos sueros dan una efectiva reaccin de
aglutinacin solamente cuando estn francamente
diluidos. Sueros no diluidos o diluidos levemente no
reaccionan visiblemente con el Ag. Actualmente se
conoce que en la prozona existen anticuerpos
absorbidos en la superficie celular y el fenmeno se
explica por el exceso de anticuerpos y a la presencia
de anticuerpos conocidos como bloqueadores o
incompletos que corresponden a anticuerpos
univalentes (Acs con un solo sitio activo).
Figura 40-9. Inmunoelectroforesis cruzada o bidimensional

de Laurell. Primera dimensin. El pocillo contiene suero
humano. Segunda dimensin: el gel de agar contiene un
antisuero oligoespecfico. Los precipitados o "rocket"
corresponden a las siguientes protenas: (1) transferrina, (2)
alfa 2-macroglobulina, (3) ceruloplasmina, (4) alfa 1antitripsina, (5) alfa 1-glicoprotena cida.
a) Aglutinacin directa. La aglutinacin directa

se utiliza cuando el antgeno particulado posee
647
Sin ttulo-2
647
5/26/06, 10:26 AM
suficientes determinantes antignicos en su

superficie permitiendo que el antisuero (Ac)
correspondiente produzca espontneamente el
fenmeno de aglutinacin. Se usa regularmente
en la serotipificacin bacteriana.
2.2. Inmunoanlisis con reactivos marcados

Los inmunoanlisis con reactivos marcados
se clasifican en: homogneos y heterogneos y
existen dos tipos bsicos: competitivo y no
competitivo.
b) Aglutinacin indirecta. La aglutinacin

indirecta se utiliza para clulas que tienen un
nmero reducido de determinantes antignicos o
que existe una cantidad insuficiente de anticuerpos
que dificultan el procedimientos de aglutinacin,
para lo cual es necesario disponer de otro reactivo
que es el anticuerpo anti-inmunoglobulinas. Por
ejemplo, determinacin del antgeno D (Rh) de
los glbulos rojos.
El inmunoanlisis homogneo no requiere

separacin fsica del antgeno unido, del libre.
Considera las diferencias fisicoqumicas (tamao
o cambios conformacionales) entre el antgeno
libre y el acomplejado al anticuerpo, siendo este
hecho el que caracteriza la seal de respuesta. La
sensibilidad puede verse afectada debido a que no
hay separacin de la muestra del paciente con la
seal de deteccin final, facilitando interferencias.
A veces se recomienda tratamiento previo de la
muestra para eliminar estas interferencias. Su
automatizacin es fcil y se utiliza preferentemente
en la deteccin de drogas y hormonas.
c) Aglutinacin pasiva. La aglutinacin pasiva

se utiliza para antgenos solubles que se absorben
en forma covalente a la superficie de las partculas.
Se han usado partculas como glbulos rojos
(hemaglutinacion pasiva) o polmeros sintticos
tal como el poliestireno o un coloide mineral como
la bentonita. La determinacin del factor
reumatodeo utiliza partculas de poliestireno de
aproximadamente 0.20 a 0.25 m de dimetro
recubiertas con gammaglobulina humana.
La aglutinacin es considerada ms sensible
que la precipitacin para detectar anticuerpos,
debido bsicamente a que grandes partculas
cubiertas con Ag sirven para amplificar la reaccin.
El inmunoanlisis heterogneo contempla la

separacin del antgeno unido del libre, considerando las diferencias fsicas, qumicas o inmunolgicas (tamao, carga, adsorcin a superficie
slida). Permite eliminar la mayora de las interferencias de la muestra, mejorando la sensibilidad
de la determinacin. Su automatizacin es compleja y se aplica en la determinacin de anticuerpos
especficos, marcadores tumorales y hormonas.
El inmunoanlisis competitivo se basa en la
competencia entre el antgeno de inters (analito)
y una cantidad constante del antgeno similar
marcado por una cantidad fija y limitada de
anticuerpo especfico. En este caso esta marcado
el analito.
2.1.3. Reaccin con participacin del complemento

a) Fijacin del complemento. La fijacin del
complemento permite detectar anticuerpos por la
formacin de complejos inmunes que fijan
complemento por la va clsica y que por una
reaccin secundaria, lisis de un sistema indicador
glbulos rojos-anti glbulos rojos permite
determinar la cantidad de antgeno o de anticuerpo
presente en la reaccin.
El inmunoanlisis no competitivo usa un exceso

de anticuerpo especfico marcado contra el
antgeno o analito de inters. En este caso est
marcado el reactivo.
En la tabla 40-2 se muestra los mtodos
inmunoqumicos que utilizan reactivos marcados.

(CH50). La determinacin de la actividad
hemoltica del complemento (CH50) permite
conocer la actividad funcional del sistema
complemento y se basa en determinar la cantidad
mnima de suero (complemento) que lisa el 50%
de glbulos rojos indicadores que han sido
previamente sensibilizados en forma ptima con su
anticuerpo (hemolisina). La hemlisis se produce
por la activacin de la va clsica del complemento.

a) Microscopa inmunofluorescente. La
microscopa inmunofluorescente incorpora el
concepto tradicional de inmunofluorescencia (IF)
que bsicamente es una tcnica inmunohistoqumica o inmunocitoqumica que permite la
localizacin de antgenos en clulas y tejidos y la
648
Sin ttulo-2
648
5/26/06, 10:26 AM
Tabla 40-2. Inmunoanlisis con reactivos marcados

Inmunoanlisis fluorescente
Microscopa inmunofluorescente
Inmunofluorescencia directa
Inmunofluorescencia indirecta
Inmunoanlisis de fluorescencia polarizada (FPIA)
Inmunoanlisis de fluorescencia unida a enzima (ELFIA)
Citometra de flujo
Enzimainmunoanlisis (EIA)
EIA homogneo. EMIT
EIA heterogneo. ELISA, MEIA
Electroinmunotransferencia o Western blot o Immunoblotting
Radioinmunoanlisis (RIA)
RIA en fase soluble
RIA en fase slida
Deteccin inmunorradiomtrica para antgeno
Quimiluminiscencia
Bioluminiscencia
regularmente en el laboratorio: directa e indirecta.
deteccin y titulacin de anticuerpos especficos.

La fluorescencia es un fenmeno producido
por molculas excitadas que emiten radiacin,
energa o luz que cesa inmediatamente despus
que se retira la luz excitante. Las molculas que
tienen esta caracterstica se llaman fluorocromos.
Los fluorocromos o fluorforos son sustancias
coloreadas que absorben radiacin y luego son
excitadas emitiendo mxima energa a una
determinada longitud de onda.
Para obtener un mximo rendimiento de la
IF es necesario conocer los peak de excitacin
y de emisin del fluorocromo en uso que permita
seleccionar adecuadamente la fuente de luz y la
combinacion de filtros (primarios y barrera) del
microscopio de fluorescencia. El peak de
excitacin es la longitud de onda a la que el
fluorocromo absorbe radiacin con una mxima
eficiencia. El peak de emisin es la longitud de
onda a la que la energa fluorescente resultante es
mxima.
Los fluorocromos ms utilizados son el
isotiocianato de fluoresceina (FITC), rodamina B
y ficoeritrina. Los anticuerpos con uno o dos
residuos de fluorocromo por molcula son
intensamente fluorescentes y mantienen su
actividad especfica. Existen dos procedimientos
de inmunofluorescencia que se utilizan
a.1) Inmunofluorescencia directa (IFD) . La IFD

utiliza un anticuerpo especfico conjugado con el
fluorocromo que se aplica directamente sobre el
sustrato (tejido, clula, u otro) permitiendo
identificar la estructura responsable de la
especificidad. Se utiliza preferentemente para
identificar microorganismo y tipificar clulas (por
ejemplo: linfocitos).
a.2) Inmunofluorescencia indirecta (IFI). La IFI
es una tcnica de doble capa, en que un anticuerpos
no marcado se aplica directamente sobre el sustrato
y se visualiza la reactividad con un conjugado antiinmunoglobulinas-fluorocromo. Se utiliza
preferentemente para la deteccin de autoanticuerpos (figura 40-10).
En la inmunofluorescencia se puede aumentar
la sensibilidad con el sistema avidina
(estreptavidina)-biotina que tiene una alta afinidad,
que utiliza primariamente un conjugado
anticuerpo-biotina y luego conjugado avidinafluorocromo.
b) Inmunoanlisis de fluorescencia polarizada.
El inmunoanlisis de fluorescencia polarizada
(fluorescence polarization immunoassay"; FPIA)
649
Sin ttulo-2
649
5/26/06, 10:26 AM
detector (ver captulo 43). La molcula de

fluorocromo unida al anticuerpo monoclonal
absorbe luz del rayo lser y emite luz en otra
longitud de onda, en que su intensidad es captada
por otro detector que est en ngulo recto al rayo.
Ambos fenmenos facilitan la correcta
identificacin de las poblaciones celulares.
2.2.2. Enzimainmunoanlisis
El enzimainmunoanlisis (EIA) ha reemplazado a muchas tcnicas tradicionales en el
diagnstico clnico e investigacin biolgica desde
que se introdujo en 1966 por Avrameas y Uriel.
Este mtodo se basa en dos fenmenos biolgicos:
alta especificidad del anticuerpo por un antgeno
(reaccin inmunolgica) y la amplificacin por
reacciones qumicas llevadas a cabo por enzimas
que actan sobre sustratos que originan productos
coloreados (reaccin indicadora).
La tcnica de EIA es utilizada rutinariamente
para localizacin de antgeno o anticuerpo sobre
tejidos o clulas, para la deteccin de antgeno o
anticuerpos inmovilizados en una fase slida, para
la titulacin de anticuerpo y para la medicin de
antgeno. Los antgenos pueden ser medidos por
procedimientos inmunoenzimticos homogneos
o heterogneos.
Las enzimas que se utilizan corrientemente
para marcar anticuerpo o antgeno son: fosfatasa
alcalina, cuyo sustrato es el p-nitrofenil-fosfato y
la lectura de absorbancia se lleva a cabo a 405
nm; peroxidasa que puede utilizar tres sustratos
diferentes: o-fenilendiamina (oPD)/H202; 3,3',5,5'tetrametilbenzidina (TMB)/H202 y 2,2'-di-azino(3etilbenzotiazolina 6-cido sulfnico (ABTS)/H202
con lecturas de densidad ptica a 492, 450 y 415
nm respectivamente y beta-galactosidasa, cuyo
sustrato es el o-nitrofenil-beta-D-galactopiransido (oNPG) y la lectura se realiza 420 nm.
En los EIA automatizados se usa corrientemente la fosfatasa alcalina como enzima marcadora y como sustrato el 4-metilumbeliferil fosfato
(MUP). El MUP es catalizado a un producto
fluorescente (metilumbeliferona) que es medido
por fluorometra.
El EIA, tambin puede ser amplificado
utilizando la interaccion avidina (estreptavidina)biotina. Se utiliza los conjugados anticuerposbiotina y avidina-enzima.
Figura 40-10. Deteccin de anticuerpos antinucleares por

inmunofluorescencia indirecta. Se usa clulas HEp-2. En este
caso se observa un patrn homogneo.
es un inmunoanlisis homogneo y competitivo

que usa un antgeno marcado con un fluorforo y
polarizado, y su sistema de deteccin est basado
en la fluorometra. Es fcilmente automatizado y
se utiliza para medir pequeas molculas como
drogas y hormonas.
c) Inmunoanlisis de fluorescencia unida a
enzima. El inmunoanlisis de fluorescencia unida
a enzima (enzyme-linked fluorescence immunoassays", ELFIA) es un inmunoanlisis
heterogneo y puede ser de tipo competitivo o no
competitivo, en que el inmunorreactante marcado
con enzima est en combinacin con un sustrato
fluorognico que permite la deteccin por
fluorometra. El ELFIA est automatizado y es uno
de los mtodos ms sensibles hoy en da en el
laboratorio clnico. Utiliza preferentemente como
enzima marcadora fosfatasa alcalina y como
sustrato fluorognico el 4 metil umbeliferona
(4MUP).
d) Citometra de flujo. La citometra de flujo
permite medir la cantidad de anticuerpo monoclonal fluorescente unido a cada clula en forma
individual, facilitando la identificacin y tipificacin de diferentes subgrupos de poblaciones
celulares con una extraordinaria sensibilidad,
eficiencia y rapidez.
En el citmetro de flujo las clulas atraviesan
un rayo lser y son analizadas individualmente.
Las clulas deflectan o dispersan la luz de un lser
de una forma estrechamente relacionada con su
tamao y granularidad que es registrada en un
a) EIA homogneo. El enzyme-multiplied immunoassay technique (EMIT) es un EIA
650
Sin ttulo-2
650
5/26/06, 10:26 AM
homogneo y competitivo que usa una enzima

marcadora y el sistema de deteccin es
espectrofotomtrico. La enzima marcadora es
unida covalentemente al antgeno en una posicin
cercana al sitio activo de la enzima. Durante la
reaccin inmunolgica, cuando el antgeno
marcado con la enzima se une al anticuerpo, el
sitio activo de la enzima es bloqueado fsicamente
y la enzima es inhibida funcionalmente. En la
forma libre del antgeno marcado con la enzima,
la enzima permanece activa funcionalmente y
actuar sobre el sustrato que se aade generando
un producto coloreado. El cambio de color
resultante es proporcional a la cantidad de antgeno
marcado libre disponible y debido a la naturaleza
competitiva del inmunoanlisis, ser proporcional
a la cantidad de analito (antgeno) presente en la
muestra. El EMIT se ha automatizado fcilmente
y es usado principalmente en la deteccin de
drogas.
Figura 40-11. Esquema de enzimainmunoanlisis en fase

slida (ELISA) para deteccin y cuantificacin de
anticuerpos especficos. En el esquema el antgeno se ha unido
a un soporte slido; luego el anticuerpo (Ac primario) a pesquisar
(suero del paciente) reconoce el antgeno. Posteriormente el
conjugado anticuerpo secundario-enzima se une al Ac primario,
evento que es reconocido con la adicin del sustrato que
catalizado por la enzima forma productos coloreados cuya
densidad ptica se lee a una determinada longitud de onda.
b) EIA heterogneo. Los procedimientos EIA

heterogneos son en general ms sensibles que los
homogneos.
El "enzyme-linked inmunosorbent assay"
(ELISA) se realiza sobre una fase slida (placas
de poliestireno u otro similar) y es un EIA
heterogneo, no competitivo y su deteccin
preferentemente es por espectrofotometra (figura
40-11). Es ampliamente utilizado en el laboratorio
clnico en la deteccin y medicin de autoanticuerpos y varias otras protenas. Existe una
variedad que se realiza sobre papel de nitrocelulosa
que se ha llamado inmunofijacion en punto o
"immuno blot, "dotimmunobinding" o "dot"
(figura 40-12).
El "microparticle enzyme immunoassay"
(MEIA) es un mtodo heterogneo, no competitivo
y de tipo sandwich. Utiliza una enzima
marcadora y el sistema de deteccin es por
fluorometra o espectrofotometra. Incorpora
micropartculas que permiten aumentar el rea en
la cual ocurre la reaccin antgeno-anticuerpo
facilitando la cintica de la reaccin y
disminuyendo el tiempo de incubacin. Ha sido
automatizado permitiendo cuantificar una gran
cantidad de molculas, incluyendo hormonas y
marcadores tumorales.
Figura 40-12. Inmunodifusin en punto o "dot

immunobinding". Enzimainmunoanlisis sobre papel de
nitrocelulosa para deteccin de anticuerpos especficos. Los
puntos coloreados indican positividad.
mainmunoanlisis para originar una poderosa

herramienta que permite estudiar cualitativa y
cuantitativamente las reacciones antgenoanticuerpo. Los antgenos son separados en gel
SDS-poliacrilamida y transferidos a una membrana de nitrocelulosa unindose inespecficamente e identificados con procedimientos
inmunoenzimticos. Debido a que existe un
proceso de denaturacin de los antgenos por los
c) Electroinmunotransferencia ("Western blot"

o "Immunoblotting"). La electroinmunotransferencia combina la electroforesis en gel SDSpoliacrilamida y la alta sensibilidad del enzi-
651
Sin ttulo-2
651
5/26/06, 10:26 AM
detergentes utilizados se recomienda utilizar

antisueros policlonales en el anlisis ("blotting")
para aumentar la probabilidad de detectar eptopos
o determinantes antignicos que no se han alterado
por la denaturacin.
La electroinmunotransferencia se utiliza en
el diagnstico viral (confirmacion de anticuerpos
anti-HIV), tipificacin de bacterias (Neisseria
meningitidis), deteccin de autoanticuerpos
(anticuerpos anti-antgenos nucleares extractables), etc.
de IgE especfica unida al soporte es estimada por

la adicin de un anticuerpo anti-IgE radiomarcado.
c) Deteccin inmunorradiomtrica para
antgenos. En las pruebas inmunorradiomtricas
el reactivo marcado es utilizado en exceso. Para
la determinacin de antgeno, los anticuerpos estn
absorbidos sobre un soporte slido al que se le
agrega la solucin de antgeno. Luego el soporte
es lavado y la cantidad de antgeno unido puede
ser estimado por la adicin en exceso de un
anticuerpo radiomarcado. La prueba muestra una
mayor especificidad cuando los anticuerpos
utilizados reconocen diferentes eptopos del
antgeno. La aplicacin clsica de esta prueba es
el RIST ("radioimmunosorbent test") para la
determinacin de IgE total, donde el anticuerpo
anti-IgE se ha unido covalentemente a
microcristales de celulosa y se le adiciona el suero
del paciente y los sueros controles. La IgE total
unida es medida por la adicin de un anticuerpo
anti-IgE radiomarcado.
2.2.3. Radioinmunoanlisis
El radioinmunoanlisis (RIA) utiliza antgeno
o anticuerpo generalmente marcados con istopos
como, 125I o eventualmente 131I. Este inmunoanlisis puede llevarse a cabo en fase soluble o
slida.
a) RIA en fase soluble. El RIA en fase soluble
permite determinar la capacidad de unin de un
anticuerpo, por adicin de un moderado exceso
de antgeno marcado a un antisuero, los
anticuerpos forman complejos solubles y se
precipitan por los procedimientos ya indicados.
En el precipitado se mide la radiactividad dando
una estimacin de la capacidad de unin del
anticuerpo especfico por su antgeno. Este
inmunoanlisis en fase soluble, tambin permite
determinar antgeno (RIA clsico) por adicin de
un antgeno marcado a una cantidad fija y limitada
de anticuerpo, cuya unin puede ser parcialmente
inhibida por la adicin de antgeno no marcado.
La extensin de esta inhibicin puede ser usada
como una medida del antgeno no marcado. Se
debe realizar la medicin de la radiactividad del
antgeno radiomarcado libre, que debe estar
separado de los otros constituyentes del sistema.
2.2.4. Quimiluminiscencia
La quimiluminiscencia es la emisin de luz
producida en ciertas reacciones qumicas de
oxidacin. La mayoria de las reacciones
quimiluminiscente son de oxidacin debido a que
la produccin de luz visible requiere reacciones
altamente energticas. La reaccin quimiluminiscente ms estudiada ha sido la oxidacin del
luminol. Los marcadores ms populares son los
derivados de isoluminol y steres de acridina. Para
detectar un marcado quimiluminiscente se usa una
amplia variedad de luminmetros que miden la
emisin de luz.
En este ltimo tiempo se est usando como
marcador la fosfatasa alcalina que reacciona con
sustratos basados en el adamantil 1,2-dioxetano
aril fosfato, que los desfoforila para producir un
fenxido intermediario y ste al descomponerse
produce emisin de luz a 470 nm. Actualmente,
los inmunoanlisis quimiluminiscentes son
utilizados por varios analizadores automatizados.
En ellos se determinan drogas, hormonas,
marcadores tumorales y otras protenas.
b) RIA en fase slida. El RIA en fase slida

permite medir un anticuerpo a travs de su
capacidad de unin al antgeno que ha sido
insolubilizado por adsorcin fsica a un soporte
plstico. La inmunoglobulina unida puede ser
estimada por la adicin de un anticuerpo antiinmunoglobulinas radiomarcada producida en otra
especie. Este procedimiento se ha utilizado en la
prueba RAST ("radioallergosorbent test") para la
determinacin de IgE especfica en pacientes
alrgicos. En este caso, el alergeno es
covalentemente unido a un soporte y que luego es
incubado con el suero del paciente. La cantidad
2.2.5. Bioluminiscencia
La bioluminiscencia es un fenmeno natural que
se encuentra en muchas formas inferiores de vida.
Un sistema natural es la D-luciferina/luciferasa,
652
Sin ttulo-2
652
5/26/06, 10:26 AM
en que la luciferasa cataliza la oxidacin de la Dluciferina en presencia de ATP y Mg +2 a

oxiluciferina, con emisin de luz a 546 nm. En
los inmunoanlisis bioluminiscentes se est
utilizando conjugado anticuerpo-fosfatasa alcalina
o conjugado analito-fosfatasa alcalina que
reacciona con la D-luciferina-o-fosfato liberando
D-luciferina. La D-luciferina es oxidada por la
luciferasa con emisin de luz. An no est
disponible inmunoanlisis bioluminiscente para
aplicacin rutinaria en el laboratorio.
Wild, D., The Immunoassay Handbook,

Segunda Edicin, CPL Scientific Publishing,
Hardback, U.S.A., 2000.
LECTURAS SUGERIDAS
Avrameas, S., Amplification systems in
immunoenzymatic techniques, J Immunol. Meth.,
150: 23-32, 1992.
Chan, D. and Sokoll, L., Immunoassays automation at the millenium, Editorial, J. Clin. Ligand
Assay , 22(1), 1999.
Diamandis, E. and Christopoulos, T., Immunoassay, Academic Press. U.S.A.,1996.
Eisen, H., Immunology, Harper and Row Publishers, U.S.A., captulo 16, pp. 297-336, 1980.
Kemeny, D., Titration of antibodies, J. Immunol
Meth., 150: 50 76, 1992.
MacCrindle, C., Schwenzer, K. and Jolley, M.,
Particle concentration fluorescence immunoassay: A new immunoassay technique for quantification of human immunoglobulins in serum, Clin.
Chem., 31/9:1487-1490, 1985.
Porstmann, T. and Kiessig, A., Enzymes immunoassay techniques. An overview, J. Immunol.
Meth., 150: 5-21, 1992.
Roitt, I., Essential Immunology, chapter 5,
Blackwell Scientific Publications, London, 1991.
Slagle, K. and Ghosn, S., Immunoassays. Tools
for sensitive, specific and accurate test results,
Lab. Medicine, 27: 177-183. 1996.
Volland, H.; Vulliez Le Normand, B.; Mamas, S.;
Grassi, J.; Crminon, C.; Ezan, E. and Pradelles,
P., Enzyme immunometric assay for leukotriene
C4, J. Immunol. Meth., 175: 97, 1994.
653
Sin ttulo-2
653
5/26/06, 10:26 AM
654
Sin ttulo-2
654
5/26/06, 10:26 AM

Captulo 41
MTODOS DE ESTUDIO DE LA
INMUNIDAD CELULAR
Jorge Gonzlez C. y Pilar Vega C
1. Introduccin
2. Preparacin y aislamiento de diferentes poblaciones celulares
2.1. Mtodos de purificacin tradicionales
2.2. Separacin inmunomagntica
3. Estudio de la respuesta inmune celular especfica
3.1. Estudio de las subpoblaciones de
linfocitos
3.2. Estudio de las funciones de inmunidad celular especfica
3.3. Estudio de la sntesis de citoquinas y sus receptores
3.4. DNA microarrays
3.5. Pruebas para evaluar reacciones
de hipersensibilidad retardada
(RHR)
3.6. Estudios de la especificidad de
clulas T
3.7. Deteccin de clulas T precursoras
4. Estudio de la inmunidad celular

inespecfica
4.1. Ensayos funcionales de neutrfilos
4.2. Ensayos funcionales de eosinfilos
4.3. Ensayos funcionales de monocitos y macrfagos
5. Evaluacin de laboratorios del paciente infectado con el virus de la
inmunodeficiencia humana. Un modelo del estudio de las deficiencias
en la respuesta celular
5.1. Estudio fenotpico de linfocitos
5.2. Estudio de la respuesta proliferativa
5.3. Estudio de la respuesta citotxica
5.4. Evaluacin de los niveles de
citoquinas y subpoblaciones de
linfocitos T
655
Sin ttulo-2
655
5/26/06, 10:26 AM
656
Sin ttulo-2
656
5/26/06, 10:26 AM
RESUMEN
La respuesta inmune celular del hombre debe ser evaluada mediante pruebas de laboratorio, no slo frente a la sospecha de estados inmunes alterados, sino tambin frente a tratamientos
con modificadores biolgicos de la respuesta y en eventuales estudios de vacunacin. Frente a
cualquiera de estas situaciones, la respuesta inmune celular puede ser evaluada tanto in vivo
como in vitro. Las respuestas in vivo, se evalan nicamente mediante pruebas cutneas, llamadas reacciones de hipersensibilidad.
Por otro lado, un vasto arsenal de pruebas in vitro, estn disponibles, para evaluar la respuesta celular y la factibilidad de su uso dependen tanto del nivel de equipamiento de cada
laboratorio como de la formacin de sus recursos humanos. No obstante, de manera general
ningn ensayo aislado es suficiente para un adecuado diagnstico; una visin adecuada del
funcionamiento de la respuesta celular puede obtenerse por la combinacin e interpretacin de
varios mtodos y parmetros.
Especial cuidado debe tenerse en el anlisis, manejo e interpretacin de los resultados.
Debe considerarse que los resultados obtenidos podran variar dependiendo de la metodologa
empleada, del background gentico de los diferentes individuos e incluso dentro de un mismo
individuo. Por ello resulta de especial valor que cada laboratorio determine y maneje con propiedad los parmetros normales para cada prueba, pudiendo as acceder a interpretaciones
laboratoriales ms adecuadas.
El desarrollo de ensayos sensibles para analizar la respuesta inmune celular tanto en el
hombre como en modelos experimentales ha llevado a importantes descubrimientos tanto en
inmunologa bsica como clnica.
En el futuro, el empleo de mtodos ms sensibles y especficos, sumados a la utilizacin de
tecnologas emergentes como los DNA microarrays y el estudio de protenas (proteomica),
permitir mejorar el diagnstico y el pronstico de las diferentes enfermedades infecciosas y de
base inmunlogica
1.
poblaciones celulares. De esta forma, mientras la

respuesta humoral, permite controlar y eliminar
microorganismos extracelulares y neutralizar sus
productos, la respuesta celular es responsable del
control de microorganismos intracelulares, la destruccin de clulas infectadas por virus, clulas
tumorales y el rechazo a injertos. De esta forma
se puede afirmar que la respuesta celular est adaptada para reconocer y eliminar clulas alteradas,
sean stas infectadas por patgenos intracelulares
o que expresen antgenos tumorales.
La importancia de la inmunidad mediada por
clulas, resulta evidente cuando el sistema es defectuoso. Por ejemplo, en nios con sndrome de
Di George, quienes nacen sin timo y por ende son
deficientes en clulas T, generalmente controlan
patgenos extracelulares, pero no as los
intracelulares (ver captulo 29). Esta falla funcional en la respuesta inmune mediada por clulas,
INTRODUCCIN
La rama celular de la respuesta inmune, confiere inmunidad mediante la generacin de clulas efectoras. Aunque en estos mecanismos, pueden adems participar tanto anticuerpos como factores del complemento, stos juegan un papel secundario. Por ello, tanto clulas especficas como
no especficas estimuladas para un mismo antgeno
contribuyen a la respuesta inmune mediada por
clulas.
Las clulas especficas, corresponden a las
diferentes subpoblaciones de linfocitos T CD4+ y
CD8+, mientras que en las clulas no especficas
se incluye a macrfagos, neutrfilos, eosinfilos
y clulas "natural killer" (NK). No obstante, la
actividad de ambos tipos de clulas depende de
las concentraciones locales de citoquinas, que son
mediadores solubles secretados por diferentes
657
Sin ttulo-2
657
5/26/06, 10:26 AM
resulta en infecciones a repeticin por diferentes

patgenos intracelulares, donde incluso vacunas
atenuadas pueden producir estados infecciosos.
La evaluacin de la respuesta inmune celular
permite, en pacientes, conocer de manera cualitativa y cuantitativa la funcionalidad de clulas y mediadores de esta rama de la respuesta inmune, de
manera de determinar en correlacin con los antecedentes clnicos, el estado inmune del paciente.
La deteccin de estados alterados puede corresponder a las llamadas inmunodeficiencias las cuales pueden ser congnitas o adquiridas (ver captulos 29 y 30). Por otro lado, tambin se consideran
estados de inmunidad alterada la reactividad contra antgenos propios conocida como autoinmunidad (ver captulo 23) y la hiperreactividad propia de la alergia (ver captulo 22).
De igual forma, el monitoreo de los niveles
de productos de la funcin celular como citoquinas
y monoquinas, puede ser de utilidad clnica en estudios frente a modificadores de la respuesta biolgica (MRB). En el mbito de la investigacin
biomdica, ya sea en modelos animales, como en
personas, permite conocer y definir de manera
experimental las caractersticas de la respuesta
inmune celular posibilitando la identificacin de
antgenos protectores tanto frente a patgenos
como frente a tumores, en eventuales estudios de
vacunacin.
En este captulo se describe los principales
mtodos diagnsticos que permiten evaluar el estado de la rama celular de la respuesta inmune.
Muchas de las pruebas que permiten la evaluacin de la respuesta inmune celular han sido utilizadas por muchos aos. Otras son de incorporacin ms reciente al arsenal de pruebas de laboratorio. Algunas de ellas son de reciente aplicacin
en el mbito de la inmunologa y aunque no siempre podran ser factibles de aplicar de manera
masiva en los laboratorios, es necesario conocer
la existencia de ellas y sus posibles proyecciones.
2.1. Mtodos de purificacin tradicionales

Utilizan soluciones de ficoll-hipaque o
percoll en diferentes densidades, las que mediante centrifugacin permiten la separacin de las diferentes poblaciones celulares, basndose en sus
diferencias de tamao y densidad.
2.1.1. Separacin de linfocitos
Para ello la sangre total es diluida en buffer
fosfato salino en proporcin 1:1, depositndola
sobre ficoll-hipaque a densidad de 1,077. Luego
de centrifugar, en la interfase entre el plasma diluido y la solucin de ficoll, se forma un anillo
blanco rico en leucocitos, mientras que en el pellet
se encuentran los eritrocitos y los polimorfonucleares (PMN).
2.1.2. Separacin de polimorfonucleares y
linfocitos
La sangre heparinizada se mezcla con una
solucin de dextrano al 6% y se deja sedimentar a
temperatura ambiente. De esta manera, se obtiene
un plasma rico en PMN, monocitos y linfocitos
pero libre de eritrocitos (figura 41-1).
2.1.3. Separacin de linfocitos y PMN
Una buena separacin de linfocitos y PMN
se consigue a partir del plasma obtenido por sedimentacin con dextrano al 6%. Esta se obtiene
mediante centrifugacin diferencial sobre ficollhipaque con densidad 1,077, observndose en la
interfase un anillo blanco que contiene los
linfocitos mientras que el pellet contiene los
eritrocitos (figura 41-1).
En todos los casos los procedimientos de purificacin deben ser monitoreados mediante frotis
y evaluacin morfolgica de las clulas recuperadas. La confirmacin del tipo celular recuperado
se puede realizar mediante inmunofluorescencia
utilizando anticuerpos monoclonales contra marcadores de superficie. El control de la viabilidad
de estas clulas debe realizarse mediante pruebas
de exclusin con azul tripan, o mediante mtodos
fluorescentes utilizando steres de acetoxymetil
calcena (calcena-AM).
2. PREPARACIN Y AISLAMIENTO DE
DIFERENTES POBLACIONES CELULARES
El estudio de la respuesta inmune celular requiere, en algunos casos, disponer de poblaciones
celulares puras o enriquecidas que permitan la evaluacin de diferentes parmetros. Se puede utilizar mtodos de purificacin tradicionales y basados en separacin inmunomagntica.
2.1.4. Aislamiento de monocitos humanos

Gradientes de ficoll-hipaque han sido
658
Sin ttulo-2
658
5/26/06, 10:26 AM
Figura 41-1. Separacin de PMN y linfocitos. Utilizando dextrano 6% se pueden separar los PMN y linfocitos de los glbulos
rojos y a la vez los dos primeros se pueden separar usando ficoll hipaque 1.077 o bien una gradiente doble de ficoll hipaque.
rutinariamente utilizadas para inicialmente aislar

clulas mononucleares, de las cuales entre 10-20%
corresponden a monocitos. Para aislar los
monocitos, se usa su capacidad de adherir al plstico, luego de incubacin por 1 h a 37 C. El procedimiento de aislamiento se desarrolla en esterilidad, a temperatura ambiente, utilizando medios
y material de vidrio o plstico que estn libres de
endotoxinas, debido a que endotoxinas bacterianas
como el lipopolisacrido (LPS) son potentes
activadores de monocitos y macrfagos.
hipodensos. Debe tenerse en mente que diferencias funcionales han sido observadas dependientes del mtodo utilizado en la purificacin. Aparentemente, eosinfilos purificados mediante separacin celular magntica son menos respondedores a lpidos quimiotcticos que las clulas
obtenidas por gradiente.
2.1.6. Aislamiento de basfilos
Los basfilos son los leucocitos de menor
abundancia en sangre humana y por ende su purificacin es relativamente difcil. Los procedimientos basados en centrifugacin por gradiente permiten enriquecer las preparaciones de basfilos
hasta en un 50%, pero contienen una significativa
contaminacin con otros tipos celulares especialmente linfocitos. Durante cualquier procedimiento de enriquecimiento deber tenerse presente en
prevenir su estimulacin y degranulacin.
2.1.5. Aislamiento de eosinfilos

El bajo nmero de eosinfilos en sangre
perifrica de individuos normales ha hecho relativamente difcil obtener preparaciones en nmero
y pureza apropiadas para estudios funcionales.
Para ello, protocolos basados en la separacin de
eosinfilos de neutrfilos la principal clula contaminante, mediante densidad han sido utilizados
por largo tiempo. Estas tcnicas resultan en clulas de alta viabilidad, no obstante posean bajo
rendimiento y grados de pureza variable. Ms an
la mayora de los eosinfilos son de alta densidad
(1095-1100 g/mL), por lo que presumiblemente
representaran poblaciones no activadas. Recientemente, se ha introducido la seleccin negativa,
basada en la remocin de neutrfilos por medio
de separacin celular magntica usando perlas
recubiertas de anticuerpo monoclonal anti-CD16.
Este mtodo aumenta la recuperacin y pureza de
los eosinfilos con respecto a las tcnicas que utilizan gradiente de densidad. No obstante, estas preparaciones difieren de las obtenidas por gradiente,
ya que contienen adems los eosinfilos
2.2. Separacin celular inmunomagntica

Recientemente han sido utilizadas tcnicas
basadas en la separacin inmunomagntica de
neutrfilos, usando perlas magnticas recubiertas
de anticuerpo monoclonal anti-CD16. Aunque el
marcador CD16 no es exclusivamente expresado
por neutrfilos (tambin est presente en algunos
eosinfilos y en algunas clulas mieloides precursoras), el aislamiento inmunomagntico a partir
de sangre perifrica permite obtener preparaciones enriquecidas de neutrfilos con ms de 99%
de pureza (figura 41-2). De igual manera, usando
perlas sensibilizadas con anticuerpos anti-CD14
es posible separar monocitos humanos, mientras
659
Sin ttulo-2
659
5/26/06, 10:26 AM
que perlas magnticas con anticuerpos CD4 y CD8

permiten separar estas poblaciones linfocitarias.
para secretar algunos mediadores biolgicos como

son las citoquinas. Entonces, es necesario conocer los niveles de linfocitos T (LT), tanto CD4+
como CD8+ y sus propiedades funcionales evaluando las principales citoquinas secretadas por
stos. De igual manera es importante ensayar tanto la especificidad de estos linfocitos, basndose
en aspectos estructurales, como tambin detectar
clulas T precursoras en poblaciones que proliferan en respuesta a un antgeno. En todos los casos, la hiptesis diagnstica permite orientar la investigacin de laboratorio, as como los resultados del laboratorio deben ser interpretados a la
luz de los hallazgos clnicos.
3. ESTUDIO DE LA RESPUESTA INMUNE

CELULAR ESPECFICA
La evaluacin de la respuesta inmune celular especfica, requiere conocer tanto el nmero
de clulas como su capacidad funcional. De igual
manera, hoy es necesario conocer su capacidad
3.1. Estudio de las subpoblaciones de linfocitos

El estudio de la competencia celular debe comenzar por determinar los niveles de las clulas
que participan en esta respuesta. Por ello, el nmero y capacidad funcional de los leucocitos circulantes en sangre perifrica refleja el estado general de competencia inmune de un determinado
individuo. De esta manera en una variedad de situaciones clnicas, la evaluacin del nmero y funcin de linfocitos, granulocitos y monocitos han
comenzado a ser rutinarias tanto en el diagnstico
de diferentes patologas como en el monitoreo de
tratamientos con inmunosupresores o inmunorrestauradores.
Inicialmente, la determinacin en el laboratorio de linfocitos T y B, se realiz, mediante la
utilizacin de eritrocitos de cordero y la formacin de rosetas. Los linfocitos T poseen la capacidad de unirse a los eritrocitos de cordero, formando un complejo en el que estas clulas estn rodeadas de eritrocitos, de manera semejante a una
flor, denominada roseta E (eritrocito). La evaluacin de rosetas se realiza mediante lectura microscpica. De igual manera, linfocitos B, polimorfonucleares y macrfagos poseen receptores de
superficie para fragmentos Fc de IgG y para complemento. Por ello, en presencia de anticuerpos y
el factor C3b del complemento, forman las rosetas
EAC (eritrocito, anticuerpo-complemento), las
cuales son tambin evaluadas mediante microscopa ptica (figura 41-3).
3.1.1. Determinacin del fenotipo inmunolgico
mediante citometra de flujo
Figura 41-2. Separacin inmunomagntica de neutrfilos,
utilizando anticuerpo monoclonal CD16 unido a partculas
magnticas.
En los ltimos aos, el uso de las pruebas de

citometra de flujo (ver captulo 42) en la deter-
660
Sin ttulo-2
660
5/26/06, 10:26 AM
Figura 41-3. Determinacin de linfocitos por formacin de Rosetas E y Rosetas EAC. La roseta E se produce por unin del
glbulo rojo al receptor CD2 del LT. La roseta EAC se produce por interconexin entre el receptor para C3b del LB y la unin de
C3B al fragmento Fc de IgG. Tambin pueden haber uniones de Fc al receptor que tiene LB humano.
minacin de las diferentes subpoblaciones de

linfocitos, se ha transformado en un importante
mtodo tanto en el diagnstico como en el pronstico de varias entidades clnicas, incluyendo
la evaluacin de las inmunodeficiencias y los desrdenes inmunolgicos.
La citometra de flujo, permite la enumeracin de diferentes tipos de linfocitos, los cuales
difieren en sus propiedades funcionales, su linaje
y su estado de maduracin. Entonces mediante esta
tcnica es posible determinar los diferentes tipos
de linfocitos mediante el uso de anticuerpos
monoclonales marcados con substancias
fluorescentes, que reconocen sus marcadores de
superficie (figura 41-4). Desde la invencin de
los anticuerpos monoclonales, miles de ellos han
sido generados contra determinantes de superficie de clulas hematopoyticas. Inicialmente, grupos de estos anticuerpos que demostraron propiedades semejantes en cuanto a su ligacin y distribucin tisular fueron designados como "clusters
differentiation" o antgenos CD (ver captulo 45).
La identificacin de estos CD en la superficie celular de los linfocitos, mediante anticuerpos
monoclonales, ha sido esencial en delinear los
componentes del sistema inmune. Estos
anticuerpos son ahora rutinariamente usados en
la identificacin, recuento y separacin de diferentes subpoblaciones de leucocitos y en la clasificacin de afecciones malignas de estos
leucocitos.
Los anticuerpos monoclonales usados para
reconocer LT totales estn dirigidos contra los
antgenos CD45 y CD3, mientras que las

subpoblaciones de LT helper son reconocidos
por los anticuerpos anti-CD3 y anti-CD4. Las
subpoblaciones de LT citotxicos y supresores se
definen con los anticuerpos anti-CD3 y anti-CD8,
mientras que los linfocitos B presentan el marcador CD19. Por otro lado, las clulas NK, se definen por el fenotipo CD3-, CD16+ o CD56+. No
es posible identificar clulas NK mediante un nico antgeno, no obstante, el fenotipo CD3-/CD56+,
incluye la mayora de las clulas NK. Por ello se
requiere marcacin con dos fluorocromos, siendo
que existe un porcentaje de LT que son CD3+/
CD56+. En esta perspectiva, el uso de anti-CD3
marcado con fluorescena y anti-CD16 y antiCD56 marcados con otro fluorocromo (ficoeritrina
o texas red) es recomendable para determinar en
definitiva el fenotipo de las clulas NK.
3.1.2. Determinacin de subpoblaciones de
linfocitos mediante inmunofluorescencia
La determinacin de subpoblaciones
linfocitarias, es tambin posible mediante
microscopa de fluorescencia utilizando
anticuerpos anti-CD, marcados con compuestos
fluorescentes. Para ello, luego de purificar los
linfocitos, se confecciona un frotis con las clulas
fijadas, las que se incuban con los respectivos
anticuerpos. Al microscopio, se cuentan a lo menos 250 clulas, determinando su fenotipo, mediante la marcacin del anticuerpo. Este mtodo
permite calcular el porcentaje de un determinado
661
Sin ttulo-2
661
5/26/06, 10:26 AM
Figura 41-4. Identificacin de clulas natural killer mediante citometra de flujo. Para la identificacin, separacin y recuento de
estas clulas se utilizan anticuerpos monoclonales dirigidos contra sus antgenos marcadores de superficie CD16 y CD56. Uno de estos
anticuerpos est marcado con fluorescena y el otro con rodamina por lo que emiten fluorescencia en diferentes longitudes de onda.
fenotipo. Mediante un procedimiento un tanto ms

sofisticado, como es la microscopa confocal, es
tambin posible utilizar dos o tres diferentes
anticuerpos marcados con diferentes fluorocromos.
dad para as lograr una apropiada interpretacin

de los resultados, resulta importante evaluar estos
parmetros funcionales. La importancia del anlisis funcional resalta porque cada vez son ms
frecuentes sus aplicaciones en el diagnstico y
monitoreo de pacientes con sndrome de
inmunodeficiencia adquirida (SIDA), cncer, enfermedades autoinmunes y en casos de pacientes
que requieren trasplantes de rganos. De igual
manera, el uso de inmunomoduladores y MRBs
en estudios clnicos precisa de un monitoreo
confiable del sistema inmune por parte del laboratorio clnico. Entonces, hoy es posible medir un
amplio espectro de parmetros funcionales que in-
3.2. Estudio de las funciones de inmunidad celular especfica

Es aceptado que las caractersticas fenotpicas
de las clulas del sistema inmune no proveen informacin sobre su actividad. Por ello, aunque el
anlisis funcional es algo ms complejo por requerir experiencia y adecuados controles de cali-
662
Sin ttulo-2
662
5/26/06, 10:26 AM
cluyen desde la activacin, proliferacin y productos de sntesis hasta la funcin de clulas efectoras.
Ms an, considerable progreso se ha obtenido en
la separacin y aislamiento de varias subpoblaciones de clulas del sistema inmune. Sin embargo, no slo los ensayos funcionales pueden ser de
utilidad sino que tambin los estudios estructurales
y la deteccin de clulas T precursoras.
As, con un arsenal considerable de ensayos
de laboratorio y opciones de evaluar diferentes funciones, la eleccin de las pruebas ms apropiadas
permitir al inmunlogo clnico disponer de la
informacin que permita conocer el estado de la
respuesta inmune celular del paciente.
terapias inmunomoduladoras y para detectar la

memoria inmunolgica frente a diferentes
antgenos como: derivado de protena purificada
(PPD), streptoquinasa, Candida, tetanus y difteria.
Ciertos desrdenes inmunolgicos como
Lupus eritematoso sistmico se manifiestan con
mltiples disfunciones de clulas T. Por ello, cuantificar la activacin de clulas T es tambin til
para monitorear el efecto de las terapias
inmunomoduladoras.
Interpretacin de los datos. La capacidad de
linfocitos para proliferar, in vitro, en respuesta a
lectinas mitognicas como fitohemaglutinina
(FHA) y concanavalina A (Con A), es el mtodo
ms comn para evaluar la inmunidad mediada
por clulas. La proliferacin celular es ensayada
72 horas despus, evaluando la incorporacin de
3
H timidina en el DNA recientemente sintetizado
por la clula T. Mtodos de ms reciente aplicacin permiten evaluar eventos tempranos del proceso de activacin, tales como la elevacin de calcio intracelular, la activacin de protena quinasa
C (PKC) o eventos que ocurren en las primeras
24 h, tales como la sntesis de IL-2 y la expresin
de su receptor IL-2R. Estos ltimos son los
abordajes ms directos y presentan varias ventajas tcnicas, como el hecho de requerir un pequeo nmero de clulas mononucleares de sangre
perifrica (CMSP), no necesitan enriquecer los
linfocitos T de CMSP, su ejecucin requiere menos tiempo y realizada en serie resulta de ms bajo
costo. Desde este punto de vista resulta apropiado
evaluar la sntesis de IL-2 y su receptor, IL-2R, ya
que la sntesis de stos muestra adems que las
vas en que participa fosfoinositol/Ca++ y PKC,
estn intactas.
La IL-2 es evaluada en sobrenadantes de cultivo de CMSP, luego de la estimulacin con
mitgenos por 24 h. La cantidad de IL-2 producida por CMSP normales en cultivo, depende del
estmulo, las condiciones de cultivo y del mtodo
empleado en su cuantificacin. La activacin de
clulas T puede ser inducida utilizando diferentes
agonistas tales como lectinas, anticuerpos anti-receptor, ionforos y forbol steres. Lectinas como
FHA y Con A pueden adicionarse directamente a
los cultivos de CMSP. En presencia de monocitos
que secretan IL-1, las clulas T producirn IL-2 y
desarrollarn una enrgica respuesta proliferativa
con "peak" a las 72 h. Las ventajas de usar
mitgenos son su estabilidad, bajo costo y fcil
3.2.1. Activacin de Linfocitos T

La activacin de linfocitos T es un proceso
caracterizado por una compleja cascada de eventos bioqumicos y moleculares, cuyo resultado final es la produccin de citoquinas, la expresin
de receptores, la proliferacin y en algunas clulas la expresin de citotoxicidad. En condiciones
fisiolgicas, este fenmeno se inicia con la presentacin antignica en el contexto de molculas
del Complejo Principal de Histocompatibilidad
(MHC) clase I o II e involucra complejos mecanismos de sealizacin con participacin de
quinasas, fosfatasas y segundos mensajeros (ver
captulo 10).
Indicaciones clnicas. La activacin de clulas T,
debe evaluarse frente a la sospecha de desrdenes
inmunolgicos congnitos o adquiridos. Dentro de
stos se incluyen la inmunodeficiencia combinada
severa (falla en el desarrollo de clulas B y T), el
sndrome de Di George (falla en el desarrollo del
timo), sndrome de Wiskott-Aldrich, sndrome de
Chediak-Higashi (inmunodeficiencia por ataxia
telangiectasia con albinismo parcial), inmunodeficiencias variables comunes y frente a infecciones recurrentes por virus, parsitos y hongos.
Las disfunciones de clulas T, predisponen a
infecciones virales por Herpes simplex, Varicellazoster y Cytomegalovirus. De igual manera la
candidiasis mucocutnea recurrente es frecuentemente asociada con disfuncin de clulas T. Dentro de las infecciones por protozoos, Pneumocystis
carinii y Toxoplasma gondii a menudo complican
el curso de pacientes con SIDA, en los cuales la
subpoblacin de linfocitos CD4+ es deficiente.
La activacin de clulas T, tambin puede
monitorearse, para evaluar el tratamiento mediante
663
Sin ttulo-2
663
5/26/06, 10:26 AM
uso. Agonistas especficos como anticuerpos

monoclonales contra el receptor CD3 pueden usarse para activar clulas T y permiten evaluar la capacidad del receptor para iniciar la traduccin de
seales por la va fosfoinositol/Ca++/PKC.
Una disminucin en la produccin de IL-2
es asociada con una disminucin en la expresin
de IL-2R. La disminucin en la sntesis de IL-2 y
en la expresin de IL-2R sugiere un defecto en la
va fosfatidilinositol/Ca2+/PKC. Entonces para determinar si esta va de sealizacin no es funcional, la medicin de Ca2+ y de la actividad de PKC
pueden ser de utilidad. La determinacin de Ca2+
en clulas T puede realizarse usando algunos
indicadores fluorescentes como Fura 2 o Quin 2.
Por otro lado los ensayos para PKC son sensibles
y especficos, no obstante requieren poblaciones
enriquecidas en clulas T. En este tipo de ensayo
las clulas T deben ser activadas por un agonista,
para luego preparar un extracto celular en el cual
se evala la incorporacin de P 32ATP en un
substrato peptdico sinttico o en histonas. Es claro que ambos ensayos requieren personal entrenado y algunas condiciones del laboratorio por lo
que no se realizan de manera rutinaria.
yen interacciones de membrana con citoesqueleto,

influjos de Ca2+, activacin de fosfolipasa C, liberacin de Ca2+ inducida por inositol-trifosfato y
activacin de genes (ver captulo 10). Las seales
de transmembrana causan cambios significativos
en el linfocito como ser la redistribucin de receptores, secrecin de citoquinas y anticuerpos, movilidad celular, reconocimiento entre clulas o iniciacin de la proliferacin celular. Entonces, la capacidad de un linfocito para responder a un ligando, es utilizada tanto en investigacin bsica como
clnica, evaluando la proliferacin. Como ya se
describi, diferentes lectinas, anticuerpos y compuestos qumicos pueden estimular la proliferacin
de linfocitos. La respuesta proliferativa puede entonces ser evaluada en cultivos de sangre total, o
en clulas mononucleares aisladas y en diferentes
subpoblaciones de linfocitos. No obstante, debe
considerarse que en muchos casos se requiere ms
de un tipo celular para responder a un determinado
ligando. Frecuentemente, adems de las clulas T,
se requiere la participacin de clulas accesorias
que expresen asociadas a su membrana molculas
MHC clase II, como monocitos y macrfagos.
De manera sucinta, un ensayo de proliferacin debera medir el nmero de clulas sobrevivientes y aquellas generadas como consecuencia
del estmulo. Esto comnmente se evala de manera indirecta por medio de la incorporacin de
un nucletido radiactivo (3H-timidina) en el DNA
sintetizado (figura 41-5).
3.2.2. Estudio de proliferacin de linfocitos

El reconocimiento entre receptores de superficie de linfocitos y determinados ligandos, inicia
una cascada de seales intracelulares que inclu-
Figura 41-5. Estudio de la proliferacin de linfocitos T, mediante la incorporacin de 3H-timidina al ADN. Se miden las
cuentas por minuto (cpm) incorporadas al DNA de los linfocitos T que proliferan luego del estmulo mitognico.
664
Sin ttulo-2
664
5/26/06, 10:26 AM
Indicaciones clnicas. Parece claro que los ensayos de proliferacin o blastognesis poseen amplias aplicaciones clnicas. El ensayo es utilizado
para estudiar alteraciones derivadas de
inmunodeficiencias congnitas, as como tambin
aquellas secundarias derivadas de enfermedades
infecciosas, cncer, desnutricin, cirugas y enfermedades autoinmunes. Dentro de las inmunodeficiencias congnitas se incluye la inmunodeficiencia combinada severa, caracterizada por una
marcada deficiencia en las funciones de clulas B
y T (ver captulo 29). Entonces la utilidad clnica
de este ensayo radica en proveer informacin de
la capacidad funcional de linfocitos de sangre
perifrica. Esta informacin es de valor para conocer el estado del sistema inmune del paciente y
como indicador del progreso de una terapia.
La aparicin del SIDA, atrajo nuevamente la
atencin a la investigacin clnica de las
inmunodeficiencias y reafirm la importancia de
las determinaciones in vitro de las funciones de
la inmunidad celular. Por ejemplo, una disminucin en la respuesta proliferativa a Phytolacca
americana (una lectina que acta como
estimulador de clulas B y T) o frente a algunos
antgenos de memoria tales como Cndida
albicans o toxoide tetnico, tiene valor pronstico, por ser la capacidad de proliferar un indicador
precoz del deterioro de la funcin inmune en personas infectadas con el virus de la
inmunodeficiencia humana tipo 1 (HIV-1), en perodos de la infeccin en que los niveles de CD4+
estn an dentro de lmites normales.
De igual manera, el ensayo de proliferacin
puede ser utilizado para definir otras inmunodeficiencias adquiridas, como el sndrome de fatiga
crnica (SFC), que frecuentemente se acompaa
con reactivacin frente a virus de alta prevalencia
como Epstein-Barr o virus Herpes. Por ejemplo,
la respuesta proliferativa a PWM estuvo bajo la
media de los controles normales en el 95% de pacientes con SFC. De igual manera, la habilidad de
linfocitos estimulados con mitgenos a producir
IFN, generalmente se puede correlacionar con respuesta proliferativa.
Los antgenos de potencial uso en clnica son
numerosos y deben ser escogidos con cuidado de
acuerdo al problema a investigar. Para evaluar respuesta frente a antgenos en los cuales altos porcentajes de la poblacin estn expuestos, (marcadores generales de inmunocompetencia celular),
Cndida albicans y toxoide tetnico deberan utilizarse.
La reaccin mixta de linfocitos (RML) es

una respuesta proliferativa a dos poblaciones de
clulas T alognicas cultivadas en conjunto. En
otras palabras, se usa para conocer la reactividad
de la poblacin de linfocitos de un paciente frente
a las clulas de otro individuo. El principal estmulo en este tipo de reacciones son los antgenos
del MHC, presentados en la membrana de los
linfocitos T. Esta es sin duda la tcnica de ms
amplio uso para estudiar la respuesta
inmunolgica de los linfocitos. En esta reaccin
se verifican tres eventos principales: sntesis de
macromolculas, transformacin blstica y proliferacin. Las clulas respondedoras en RML son
principalmente linfocitos CD4+. stas reconocen molculas de MHC clase II por lo que
antgenos de Clase II son sus principales
estimuladores. Adems de poder determinar los
niveles de la respuesta de linfocitos, esta reaccin sirve para demostrar la compatibilidad de
MHC. Se conoce dos tipos de RML, la
unidireccional y la bidireccional. En la
unidireccional, una poblacin celular sirve como
antgeno (tambin conocidas como clulas
estimuladoras) y es usada slo despus de la
inhibicin de su propia proliferacin. Entonces
slo se determina la respuesta proliferativa de la
segunda poblacin celular (tambin llamadas clulas respondedoras). En la RML bidireccional
la respuesta proliferativa de ambas poblaciones
celulares es evaluada ya que ninguna poblacin
celular es inhibida en su divisin. Si existe reconocimiento o reactividad de los linfocitos habr
proliferacin e incorporacin de 3H-timidina (figura 41-6).
Esta reaccin ha sido usada para evaluar los
defectos de la respuesta inmune. No obstante, su
aplicacin ms importante es en el rea de
tipificacin de tejidos y trasplante de rganos y
clulas.
Interpretacin, rangos normales y control de
calidad. La utilidad clnica del ensayo de proliferacin depende de la habilidad del inmunlogo
clnico para interpretar de manera adecuada los
resultados. Esto requiere conocer de manera
exacta la respuesta a esperar en individuos
inmunocompetentes, para poseer los adecuados
controles. Esto implica, adems, que cada laboratorio debiera poseer sus propios rangos de valores normales para la respuesta a cada
inmungeno, tomando en consideracin aspectos como edad, sexo y grupo tnico.
665
Sin ttulo-2
665
5/26/06, 10:26 AM
Figura 41-6. Cultivo mixto de linfocitos. Las clulas no respondedoras (irradiadas) presentan sus antgenos de superficie a las
clulas respondedoras, que como respuesta entran a divisin celular e incorporan 3H-timidina en el DNA.
presar diferentes tipos de estructuras de reconocimiento y mediar ms de un tipo de citotoxicidad.

Las clulas citolticas efectoras humanas comprenden diferentes tipos celulares los cuales dependiendo de su microambiente difieren en nmero,
estado de activacin y en el mecanismo utilizado
en reconocimiento y muerte de la clula blanco.
Luego del reconocimiento y el contacto de superficie, la clula citoltica efectora activa una cascada
de seales, desencadenando una accin irreversible y letal hacia la clula blanco. La clula efectora,
generalmente puede asociarse a nuevas clulas blanco en dos o tres ocasiones sin necesitar de reactivar
su cascada de seales. En el captulo 19 se describen los diferentes mecanismos de citotoxicidad que
presenta los LTc y clulas NK.
3.2.3. Estudio de la citotoxicidad celular

La citotoxicidad celular es una de las funciones ms importantes de esta rama de la respuesta
inmune. La citotoxicidad se entiende como la capacidad de una clula de atacar o ser txica para
otra clula blanco. Esta propiedad la poseen los
LT citotxicos (LTc), las clulas NK y aquellos
tipos celulares que participan de fenmenos de
citotoxicidad dependientes de anticuerpos
(ADCC) (ver captulo 19).
De manera general las clulas citolticas
efectoras se pueden dividir en dos grupos: aquellas
que requieren sensibilizacin previa con un antgeno
y reconocen en el contexto de molculas de HLA y
aquellas que no requieren sensibilizacin previa,
ya que poseen reactividad espontnea, su respuesta
no est restringida a HLA y son activadas por
citoquinas. La mayor parte de las clulas T CD8- y
CD4-, no actan restringidas a HLA, pero las
subpoblaciones (tanto CD4+ como CD8+) pueden
ser restringidas a HLA. De igual manera las clulas T L/B (clulas TCR2+) pueden mediar ambos
tipos de citotoxicidad, donde la expresin de la
molcula CD56 permite separar ambas
subpoblaciones. La restriccin de HLA parece ser
ms bien relativa que una propiedad constante de
los linfocitos T citolticos. Esto podra depender de
la naturaleza y presentacin del antgeno, implicando que una clula efectora tiene potencial para ex-
Significancia clnica e interpretacin de los resultados. La evaluacin de las funciones citolticas

provee una medida eficaz para evaluar la eficiencia de las diferentes subpoblaciones celulares en
estados de salud y de prdida de ella.
Estos ensayos constituyen una parte sustancial de la evaluacin clnica de pacientes
inmunocompetentes. Las clulas citolticas
efectoras parecen jugar un importante papel en una
variedad de enfermedades del hombre. Por un lado,
una funcin citotxica ausente o disminuida, al
anlisis in vitro de clulas citolticas, se observa
en pacientes con inmunodeficiencias como SIDA,
666
Sin ttulo-2
666
5/26/06, 10:26 AM
en pacientes con cncer, en infecciones crnicas

por virus y hongos y en ciertas enfermedades
autoinmunes. Por otro lado, la activacin de la
funcin citoltica se observa en pacientes
inmunodeficientes que reciben una terapia exitosa,
en pacientes que se recuperan de infecciones
virales y en personas con cncer que responden a
la terapia. Las clulas citolticas participan en el
rechazo a trasplantes (entre ellos los de mdula
sea), eliminacin de clulas anormales y en numerosos procesos patolgicos.
intracelulares, en trasplante de rganos y en el control de neoplasias. La actividad antiviral puede ser

detectada directamente en CMSP, slo en perodos
relativamente cortos en la infeccin aguda. Esta respuesta de LTc, se desarrolla dentro de pocas semanas luego de la infeccin viral. Despus de la resolucin de la infeccin aguda, la respuesta de LTc slo
puede detectarse por estimulacin in vitro de CMSP,
cultivando estas clulas durante varios das en presencia del antgeno viral especfico. La CMSP de
dadores normales generalmente contienen cantidades suficientes de clulas presentadoras de antgeno
(monocitos) y clulas ayudadoras (linfocitos T
CD4+) para estimular esta respuesta de LTc de memoria. No obstante citoquinas exgenas como IL-2
y IL-6, pueden adicionarse al cultivo para aumentar
la diferenciacin de LTc precursoras en clulas killer
funcionales. Una excepcin la constituyen los pacientes con SIDA quienes parecen mantener niveles
detectables de clulas circulantes maduras con
fenotipo CD8+ especfico para HIV.
Todas las otras respuestas por LTc pueden ser
evaluadas por medio de una estimulacin in vitro
de las clulas T de memoria mediante incubacin
de CMSP con antgenos relevantes, para as inducir una activacin in vitro y una expansin clonal
de las clulas T reactivas al antgeno. Por ello una
falla en la respuesta para generar respuesta por
LTc in vitro, podra ser indicativo de: a) ausencia
de clula T de memoria; b) falla en las clulas T
de memoria para activarse, proliferar o diferenciarse en respuesta al antgeno; c) fallas en la presentacin del antgeno por parte de las clulas presentadoras de antgeno; d) incapacidad para inducir la muerte de la clula blanco.
Los nuevos abordajes teraputicos como trasplante de mdula sea, transferencia pasiva de
clulas y terapia con citoquinas, estn tornando
cada vez ms importante identificar la causa de la
deficiencia de la respuesta por LTc de manera tan
precisa como sea posible. Debe quedar claro que
una clula citoltica puede ser capaz de reconocer
y matar a una clula blanco por ms de un mecanismo. Entonces la activacin in vitro de LTc puede ser capaz de matar tanto de manera especfica
y restricta a HLA como de manera no restricta a
HLA y semejante a como matan las clulas NK.
Por ello la interpretacin de los ensayos de LTc es
a menudo difcil y requiere una cuidadosa consideracin de la historia clnica del paciente, su estado clnico actual y la interpretacin de los
parmetros de laboratorio en el contexto de los
valores normales establecidos por el laboratorio.
Ensayos en sangre humana. Los estudios clnicos a menudo requieren monitorear la actividad de
clulas NK. Sin embargo, en algunos pacientes incluyendo nios la cantidad de sangre disponible es
escasa. Por ello, ha sido necesario desarrollar protocolos sensibles que usen pequeos volmenes de
sangre total evitando procesos de purificacin. Estos protocolos han proporcionado resultados comparables con los procedimientos tradicionales.
3.2.4. Linfocitos T citolticos
Las clulas T LB+ (TCR2+), que incluyen
aquellas clulas que participan en la respuesta
citoltica restringida por HLA, son la principal
poblacin circulante de clulas T. Una poblacin
significativamente menor, aunque importante, corresponde a los linfocitos T g/d+, los cuales pueden
mediar reacciones citolticas no restringidas por
HLA, o semejantes a NK, despus de cultivarse en
presencia de IL-2, pero podran tambin mostrar
lisis por antgenos que son restringidos por molculas de HLA clase semejante a I. Las clulas LB
TCR2+, de linfocitos citotxicos reconocen segmentos relativamente cortos, de 10-20 aminocidos,
que asociados a molculas de HLA se exponen en
la superficie de la clula. Por ello la susceptibilidad
de una determinada clula blanco al ataque de una
determinada clula citotxica, depende primariamente del tipo de va de procesamiento del antgeno
en la clula blanco. As, antgenos que son
endgenamente procesados y asociados en la superficie celular con molculas de clase I, son reconocidos por LTc, CD8+. Por otro lado, antgenos
procesados por medio de proteasas endosomales se
asocian con molculas de HLA clase II y son reconocidos por LTc, CD4+. Es claro que bajo ciertas
circunstancias, ambos procesamientos pueden ocurrir en la misma clula blanco.
Los LTc, son importantes en la inmunidad del
husped a infecciones por virus y otros patgenos
667
Sin ttulo-2
667
5/26/06, 10:26 AM
Los mtodos que evalan citotoxicidad son

comunes a todas las clulas involucradas en este
tipo de reacciones y se basan en la marcacin previa de las clulas blanco con 51C. Las clulas blanco marcadas son incubadas con las clulas
efectoras citolticas y el 51Cr, liberado por las clulas y presente en el sobrenadante, es un ndice
de la actividad citoltica (figura 41-7).
est significativamente asociada con el desarrollo

de metstasis a distancia. Las clulas NK responden rpidamente a MRB, aumentando la
citotoxicidad, por lo que esta propiedad puede ser
utilizada como un sensible indicador en estudios
in vitro destinados a evaluar la capacidad de las
clulas del paciente en responder frente a la activacin de un determinado agente teraputico. De
Figura 41-7. Medicin de la citotoxicidad mediada por clulas. Clulas blanco marcadas con 51 Cr, son incubadas con clulas
efectoras (LT, clulas NK) HLA idnticas; luego la lisis de las clulas blanco se detecta cuantificando el 51Cr liberado.
igual manera el monitoreo seriado de la actividad

de clulas NK puede ser usado para demostrar
cambios en el estado de activacin de clulas inmunes circulantes durante la terapia con MRB.
El papel de clulas NK como primera lnea
de defensa frente a las infecciones es conocido.
Por ende en pacientes inmunocomprometidos, hay
una estrecha correlacin entre actividad NK y la
presencia de infecciones severas. En el trasplante
de mdula sea, clulas NK parecen ser las primeras en re-colonizar la mdula, por lo que estas
clulas pueden ser importantes para su instalacin
exitosa y control de las infecciones virales
postrasplante. Anormalidades en la respuesta NK
pueden encontrarse tambin en enfermedades
autoinmunes. Por todo lo anterior, la evaluacin
seriada de la actividad NK es necesaria para conocer el estado de la respuesta inmune frente a
varias enfermedades.
3.2.5. Clulas NK
Las clulas NK circulantes, representan entre el 10-15% de las CMSP y son capaces de inducir la lisis espontnea de clulas blanco neoplsicas
o infectadas por patgenos intracelulares, sin una
necesaria sensibilizacin y sin restriccin de HLA.
Evidencias recientes muestran que clulas NK
pueden ser activadas para producir citoquinas tales como TNF, e IFN, factor estimulador de
colonias de granulocitos y macrfagos, IL-3 y probablemente otros factores necesarios para el desarrollo clulas hematopoyticas. Las clulas NK
parecen ser importantes y activos componentes de
varios procesos patolgicos en el ser humano. Por
ello la medicin de la actividad de clulas NK circulantes o en tejidos parece necesaria para definir la contribucin de estas clulas al proceso patolgico. Por ejemplo en cncer, una baja actividad de clulas NK tiene un valor predictivo en el
progreso del tumor, la respuesta pobre al tratamiento y la disminucin en el tiempo de sobrevida sin
metstasis. Una baja en la actividad NK tambin
puede significar un factor de riesgo en la instalacin de procesos malignos. De igual manera, una
baja actividad de NK en la sangre de pacientes
3.2.6. La reaccin de citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos

Los ensayos de ADCC pueden ser clnicamente tiles para valorar la inmunocompetencia
de subpoblaciones de clulas efectoras caracteri-
668
Sin ttulo-2
668
5/26/06, 10:26 AM
zadas por la presencia del receptor FcRII y

FcRIII. En el hombre, las clulas NK CD3CD56+ CD16+ y una pequea fraccin de clulas
T CD3+ CD16+ participan en ADCC. As, en
pacientes con varias enfermedades y especialmente en pacientes con cncer que han sido tratados
con MRB, estas pequeas subpoblaciones pueden
expandirse in vivo y ser responsables por una fuerte respuesta antitumoral y antiviral. Siendo que
las actividades NK y ADCC parecen ser mediadas por diferentes subpoblaciones de CMSP (CD3CD56+CD16- versus CD3- CD56+CD16+ y
CD3+CD56+CD16+, respectivamente), podra ser
necesario monitorear todas ellas en estados de enfermedad. De igual manera, se sabe que estos dos
tipos de citotoxicidad parecen participar en momentos diferentes de una determinada enfermedad. Las clulas NK son la primera lnea de defensa mientras que las reacciones de ADCC asumen un papel importante una vez que las IgG dirigidas contra un patgeno o clula blanco han sido
sintetizadas y se encuentran en la circulacin (figura 41-8).
Otra de las principales aplicaciones de
ADCC es la evaluacin de la reactividad de
anticuerpos contra aloantgenos, clulas
tumorales y virus. La ADCC puede utilizarse para
estudiar el suero de pacientes que recibirn un
injerto o estn desarrollando un rechazo a injerto, en pacientes con cncer que estn siendo tratados con anticuerpos monoclonales dirigidos
contra el tumor y en pacientes con infecciones
virales. Entonces ADCC entrega importante informacin acerca de la funcin de la
citotoxicidad mediada por clulas en dichos pacientes durante la enfermedad.
3.2.7. Clulas killer activadas por linfoquinas

El ensayo de clulas killer activadas por
linfoquinas (LAK) es frecuentemente usado para
monitorear la respuesta a la terapia en pacientes
tratados con citoquinas u otros MRBs. Clulas
efectoras activadas in vivo pueden ser capaces de
matar clulas blanco resistentes a NK. As, CMSP
no son capaces de matar tales clulas en ensayos
de 4 h que miden liberacin de 51Cr, mientras que
algunos linfocitos residentes en tejidos pueden
tener una actividad LAK espontnea. Entonces,
la evaluacin de la actividad LAK en CMSP frescas es una medida de la activacin in vivo de clulas efectoras. Por ello el ensayo de la actividad
de clulas LAK, realizado antes y despus de la
activacin in vitro de CMSP con IL-2 u otra
citoquina es una medida de la capacidad de clulas NK y T para activarse y expresar sus funciones efectoras.
3.2.8. Citotoxicidad por macrfagos
En el ensayo para evaluar la competencia de
monocitos para destruir clulas blanco, el tipo de
clula blanco puede indicar el tipo de mecanismo
involucrado en la destruccin in vitro. Alteraciones de la funcin de monocitos se presentan en
algunas inmunodeficiencias o pueden ser secundarias a episodios infecciosos, as como tambin
en procesos malignos y enfermedades autoinmunes y pueden en general acompaarse de
inmunosupresin. Generalmente otros ensayos son
ms comunes para evaluar la capacidad funcional
de monocitos, no obstante la evaluacin de la
citotoxicidad es una funcin especializada que
Figura 41-8. Reaccin de citotoxicidad mediada por clulas dependiente de anticuerpos. Clulas blanco incubadas en presencia de anticuerpos IgG, son reconocidas por clulas efectoras NK que expresan receptores del tipo FcRII y FcRIII. Como
resultado final, la clula recubierta de anticuerpos es lisada.
669
Sin ttulo-2
669
5/26/06, 10:26 AM
acridina tie de verde el DNA y de naranja el

RNA, ya que este colorante no intercala RNA. Las
clulas muertas son teidas con bromuro de etidio
y se ven naranjas, mientras que las clulas vivas
excluyen este colorante.
podra ser importante en pacientes con cncer y

en aquellos que padecen de enfermedades infecciosas. El ensayo de la citotoxicidad de monocitos
debe ser usado en conjunto con otras pruebas funcionales, para evaluar la regulacin positiva o negativa de la funcin de monocitos luego del tratamiento in vivo o in vitro con MRBs.
c) Cuantificacin de la fragmentacin del DNA.

Estas tcnicas se basan en el hecho que DNA fragmentado no sedimenta junto con el cromosoma
ntegro cuando es centrifugado. Siendo que esta
tcnica es complicada sin ventajas comparativas
sobre las otras tcnicas ya descritas, se recomienda slo para evaluar poblaciones celulares que no
puedan ser fcilmente marcadas en su DNA, como
por ejemplo los linfocitos en reposo.
3.2.9. Nuevos mtodos de evaluacin de la actividad citotxica

a) Ensayos de fragmentacin de DNA. Diferentes observaciones muestran que las clulas sujetas a ataque de linfocitos citotxicos presentan
cambios morfolgicos semejantes a los observados en clulas que desarrollan muerte celular programada, tambin llamada apoptosis. Este proceso es acompaado por prdida de la integridad de
la membrana celular, lo cual la hace ms simple
de cuantificar.
Los mecanismos de esa muerte celular estn
basados en la induccin de fragmentacin del DNA
de la clula blanco, hecho que ocurre pocos minutos luego del contacto con la clula citotxica.
El grado de solubilizacin del DNA depende de la
naturaleza de la clula blanco. Esta afirmacin se
basa en la observacin de que las clulas
citotxicas inducen el mismo tipo de dao en el
envoltorio nuclear de todas las clulas, sin embargo estos daos llevan a la desintegracin celular
slo en algunas clulas. No obstante, evidencias
posteriores no mostraron que el envoltorio nuclear
resulte daado por los LTc en clulas que no desarrollan desintegracin celular.
La verificacin de la fragmentacin del DNA,
requiere de electroforesis en geles de agarosa para
demostrar el clsico patrn en escala. Para cuantificar la fragmentacin del DNA, es necesario evaluar la fraccin soluble. El principio de esta tcnica se basa en que el DNA de doble hebra que ha
sufrido un extensivo dao se mantiene soluble,
mientras que el DNA intacto permanece insoluble. Recientemente el uso de 3H-timidina en vez
de 125I-UdR ha sido propuesto por poseer ventajas
como ser menos txica para el propio DNA.
d) Ensayo de prdida de adhesin de clulas

blanco. Esta tcnica tiene por objetivo evaluar las
consecuencias funcionales resultantes de la
interaccin tumor-clulas T. Por ello la medicin
de la prdida de la adhesin de las clulas
tumorales permite evaluar adems la actividad
ltica de esas clulas T.
e) Aislamiento de grnulos citoplasmticos. El
estudio de grnulos citoplasmticos aislados y
purificados entrega conocimientos ms profundos
acerca de los mecanismos de citotoxicidad celular, ms all de la simple observacin in vitro de
la actividad citotxica.
f) Ensayo de esterasa. Las serino esterasas estn
dentro de las numerosas molculas biolgicas que
participan en los mecanismos de toxicidad celular. El ensayo es simple y confiable y se basa en la
medicin de las esterasas liberadas durante las
reacciones de citotoxicidad en que participan LTc.
Los linfocitos citotxicos pueden ser activados por
diferentes mecanismos como anticuerpos
monoclonales que semejan el efecto de clulas
blanco portadoras de antgeno, por combinacin
de ionforos de calcio y proteno quinasa C (o
forbol ster) o de manera tradicional incubndolos con clulas blanco.
3.3. Estudio de la sntesis de citoquinas y sus
receptores
b) Cuantificacin de apoptosis usando colorantes fluorescentes. El uso de compuestos

fluorescentes que se asocian a DNA es una tcnica simple que nos permite determinar el porcentaje de clulas que estn en proceso apopttico.
La combinacin de bromuro de etidio y naranja
de acridina es ampliamente utilizada. Naranja de
Las citoquinas son glicoprotenas solubles

que desempean funciones reguladoras. Son sintetizadas y secretadas por diferentes clulas, siendo capaces de estimular clulas del sistema
inmunolgico para inducir cambios en su funcin,
670
Sin ttulo-2
670
5/26/06, 10:26 AM
activacin y expresin gnica (ver captulo 11).

Las citoquinas son producidas como resultado de
la activacin celular y se caracterizan porque su
sntesis y secrecin es breve y autolimitada. Por
ello, la evaluacin de ellas en muestras biolgicas puede ser utilizada para monitorear tanto la
respuesta inmunolgica como inflamatoria,
correlacionndose con el estado de activacin de
la respuesta inmune celular.
De igual manera, es conocido que los
linfocitos T helper, pueden subdividirse en dos
subpoblaciones, llamadas Th1 y Th2, las que se
pueden caracterizar por el patrn de secrecin de
citoquinas. El predominio de una determinada
subpoblacin de LT en el hombre, ha sido asociada a la patognesis en algunos desrdenes como
el asma, las enfermedades alrgicas, enfermedades autoinmunes como el lupus eritematoso y artritis reactiva, as como tambin en la resistencia
a enfermedades infecciosas y parasitarias. Por ello
la determinacin de los patrones de citoquinas
secretadas por linfocitos humanos es cada vez de
mayor relevancia.
Aunque las citoquinas pueden ser directamente evaluadas por medio de ensayos biolgicos (evaluando su funcin biolgica sobre clulas
blanco) o por medio de enzima inmunoanlisis
(ELISA) (ver captulo 39), estos mtodos poseen
algunas limitaciones. La primera, se refiere al tipo
de muestra disponible. El ensayo de actividad de
citoquinas es apropiado para muestras lquidas,
tales sobrenadantes de cultivo o fluidos biolgicos, pero no es factible de realizarse en muestras
de tejido slido. El segundo aspecto a considerar
es que la cantidad de citoquina en un determinado
fluido representa un remanente de la cantidad de
citoquina producida con respecto a la utilizada o
degradada. As, los valores de citoquinas como
IL-2 e IL-4 en sobrenadantes de cultivo conteniendo anticuerpos anti-IL-2R o IL-4R que bloquean
su utilizacin, son considerablemente ms altos
que en mediciones realizadas en cultivos en ausencia de estos anticuerpos, sugiriendo que las
concentraciones de citoquinas producidas son generalmente mucho ms altas que lo que las mediciones tradicionales suelen indicar. Entonces, bajo
estas circunstancias la medicin en sobrenadantes
o en fluidos biolgicos, no siempre podra entregar resultados representativos de los reales niveles de sntesis de una determinada citoquina cuando mtodos basados en la captura y posterior identificacin mediante ensayos tipo ELISA son utilizados.
Aunque los mtodos que cuantifican el

mRNA especfico para cada citoquina, resultan
algo ms complejos y demandan ms trabajo, se
han empleado para evitar los problemas derivados de los mtodos basados en la evaluacin de la
protena o de su actividad. La ventaja de este tipo
de ensayos radica en que permiten el anlisis de
la expresin de una citoquina particular o un grupo de citoquinas en un tejido definido, rgano o
grupo de clulas en un perodo de tiempo determinado. Ms an, la alta sensibilidad de estas tcnicas permiten estudiar la expresin de citoquinas
en un pequeo nmero de clulas, lo que resulta
imposible si se utilizan otros ensayos. Varios mtodos han sido propuestos para cuantificar mRNA
de citoquinas. Dentro de los ms usados estn el
Northern blotting, ensayo de proteccin para
ribonucleasa y la reaccin de polimerasa en cadenatranscriptasa reversa (RT-PCR). Estos mtodos, requieren como primer paso del aislamiento
del RNA, previo a evaluar la expresin gnica de
las citoquinas o su receptor. Por ello, errores en
este procedimiento de aislamiento llevan a menudo a errores en los resultados y en la
reproductibilidad del mtodo. Se debe considerar
de manera especial que el RNA aislado es inestable y sensible a la degradacin por ribonucleasas
presentes tanto en la muestra original como en el
material donde se realiza la extraccin. Por ello,
para obtener una buena preparacin de ARN se
debe minimizar la actividad de ribonucleasas durante la lisis de clulas o tejidos, evitando introducir trazas de ribonucleasas en soluciones o material de vidrio. Para evitar en parte este problema, el material debe ser autoclavado, se deben usar
guantes durante todas las fases de la extraccin y
agua tratada con dietilpirocarbonato, que es una
substancia inhibidora de ribonucleasa. De igual
manera, el uso exclusivo de material para la extraccin de RNA es fuertemente recomendado.
Los procedimientos de extraccin de RNA,
utilizan la mezcla de isotiocianato de guanidina y
cloroformo ms agentes reductores como 2mercaptoetanol, los cuales desintegran las estructuras celulares, disocian las nucleoprotenas y al
mismo tiempo inactivan las ribonucleasas
endgenas.
De esta manera, a partir del RNA aislado, se
puede purificar el mRNA mediante cromatografa
de afinidad en columna de oligo(dT) celulosa, para
investigar la expresin de un determinado receptor. No obstante, la mayora de los mtodos utilizados para este propsito, los cuales se describen
671
Sin ttulo-2
671
5/26/06, 10:26 AM
a continuacin, no requieren de este paso de purificacin.
Estos partidores especficos para cada citoquina, permiten su amplificacin a partir de pequeas cantidades del cDNA generado. Los productos de la PCR
pueden ser fcilmente detectados por medio de varias tcnicas como la electroforesis en geles de
agarosa, los cuales son teidos con bromuro de etidio,
el Southern blotting seguido de hibridizacin con
sondas marcadas con 32P o mediante tcnicas
colorimtricas que usan sondas marcadas con substancias fluorescentes. La sensibilidad de estas
metodologas de RT-PCR hacen de ellas mtodos de
eleccin para la deteccin de RNA especfico, especialmente cuando se trabaja con pocas cantidades de
clulas o con RNA, que normalmente son expresados en pequeas cantidades.
3.3.1. Reaccin de polimerasa en cadenatranscriptasa reversa (RT-PCR)

Luego de la descripcin original de esta tcnica orientada a amplificar pequeas cantidades de
DNA, el mtodo fue adaptado para la deteccin de
RNA, incluyendo un paso inicial que utiliza
transcriptasa reversa en el cual el cDNA es sintetizado para ser usado como molde en la amplificacin
posterior (ver captulo 44). La PCR usa partidores
especficos, ya definidos para la mayora de las
citoquinas tanto humanas como murinas (tabla 41-1).
Tabla 41-1. Secuencias de partidores para la deteccin de algunas citoquinas humanas mediante
reaccin de polimerasa en cadena
Citoquina
Partidores
IL-1B
S5-TACGAATCTCCGACCACCACTACAG-3
A5-TGGAGGTGGAGAGCTTTCAGTTCATATG-3
IL-2
S5-ACTCACCAGGATGCTCACAT-3
A5-AGGTAATCCATCTGTTCAGA-3
IL-4
S5-CCTCTGTTCTTCCTGCTAGCATGTGCC-3
A5-CCAACGTACTCTGGTTGGCTTCCTTCA-3
IL-6
S5-AGCTCAGCTATGAACTCCTTCTC-3
A5-GTCTCCTCATTGAATCCAGATTGG-3
IL-10
S5-ATGCCCCAAGCTGAGAACCAAGACCCA-3
A5-TCTCAAGGGGCTGGGTCAGCTATCCCA-3
IL-12p40
S5-CCAAGAACTTGCAGCTGAAG-3
A5-TGGGTCTATTCCGTTGTGTC-3
IL-13
S5-TATGCATCCGCTCCTCAATCCTC-3
A5-CGAAGTTTCAGTTGAACCGTCC-3
TNF
S5-CGGGACGTGGAGCTGGCCGAGGAG-3
A5-CACCAGCTGGTTATCTCTCAGCTC-3
IFN
S5-AGTTATATCTTGGCTTTTCA-3
A5-ACCGAATAATTAGTCAGCTT-3
-actina
S5-ATTGCCGACAGGATGCAGAA-3
A5-GCTGATCCACATCTGCTGGAA-3
P5-CAAGATCATTGCTCCTCCTGAGCGCA-3
672
Sin ttulo-2
672
5/26/06, 10:26 AM
Estas tcnicas se basan en la deteccin

intracelular, previa permeabilizacin de la clula,
de una determinada citoquina mediante el uso de
anticuerpos anti-citoquina marcados con
compuestos fluorescentes, seguida de un corto
perodo de activacin de las clulas en presencia
de un estimulador conocido de la sntesis y en
presencia de bloqueadores del transporte de
protenas como Brefeldina A o Monesina. Estos
inhibidores impiden la secrecin induciendo la
acumulacin citoplasmtica de la citoquina. Las
clulas son tambin teidas con anticuerpos
dirigidos contra marcadores de membrana (CD3,
CD4, CD8, etc.) en atencin a definir la poblacin
celular productora de una determinada citoquina.
Anticuerpos marcados con diferentes fluorocromos estn disponibles comercialmente. No obstante depender de la poblacin celular a estudiar
y de las citoquinas a investigar el tipo de anticuerpo
anti-marcador celular y anti-citoquina a ser
utilizado.
3.3.2. Ensayo de proteccin de ribonucleasa

(EPR)
Es una tcnica sensible y especfica para la
deteccin y cuantificacin de mRNA. Se basa en
la hibridizacin en fase lquida, de una sonda
radiactiva de RNA antisenso con el mRNA,
seguida de la exposicin a RNAasas que degradan
la sonda remanente as como tambin cualquier
RNA no hibridizado. El material remanente
"protegido" es separado mediante electroforesis,
visualizado y cuantificado mediante autorradiograrfa, densitometra o aparatos y "softwares" que
permiten evaluar fosfoimgenes. Entonces la
intensidad de las bandas es comparada con las
cantidades del RNA blanco, originalmente presentes
en la muestra. En los ltimos aos, "kits" comerciales
para esta metodologa estn disponibles, los cuales
permiten el anlisis simultneo de mltiples
citoquinas en una misma muestra.
3.3.3. Tincin intracelular de citoquinas
3.3.4. Evaluacin del interfern

Una eventual limitacin de los mtodos
moleculares radica en la imposibilidad de poder
seleccionar una determinada clula para su estudio
y la imposibilidad de obtener informacin acerca
de la identidad y frecuencia de clulas productoras
de una citoquina particular dentro de una poblacin
celular. Entonces, en ausencia de preparaciones
celulares puras, estas tcnicas no pueden ser
utilizadas para estudiar la produccin de citoquinas
por subpoblaciones definidas de clulas como es
el caso de las subpoblaciones Th1 y Th2 de clulas
T CD4+. Ms aun considerable evidencia muestra
que cambios en la frecuencia de diferentes
subpoblaciones celulares puede ocurrir en
diferentes enfermedades por lo que la capacidad
para detectar la produccin de citoquinas por
clulas individuales y fenotpicamente definidas
resulta hoy de particular importancia.
Inicialmente, mtodos de dilucin limitante y
ELISPOT se utilizaron para determinar la
frecuencia de clulas productoras de una
determinada citoquina. Estos mtodos son
laboriosos y consumen mucho tiempo. Por ello,
tcnicas de reciente introduccin basadas en la
tincin intracelular de citoquinas han simplificado
el estudio de la produccin de citoquinas en clulas
individuales. Aparte de ser tcnicas de gran
sensibilidad y especificidad, no son afectadas por
factores como son la presencia de receptores
solubles y de membrana para la citoquina en estudio.
Aunque esta molcula fue identificada a fines

de la dcada del cincuenta, como una protena antiviral, sus vastos efectos biolgicos la sitan como
una molcula inmunorreguladora capaz de alterar
una amplia variedad de procesos tales como
crecimiento celular, diferenciacin, transcripcin
gnica y traduccin. Los interferones son
producidos por una variedad de clulas en
respuesta a la infeccin, y son por ello sintetizados
como producto de la activacin de la respuesta
inmune (ver captulo 11). Existen tres tipos
conocidos de IFN , y , por lo que tanto el tipo
celular como el agente que acta como inductor
de su sntesis son importantes en determinar el tipo
de IFN producido. De esta manera IFN es
producido por linfocitos T y B, macrfagos, clulas
NK y linfocitos granulares grandes, en respuesta
a variados estmulos como virus, productos
bacterianos, polinucletidos, clulas tumorales y
clulas alognicas. Estos mismos inductores
podran gatillar la sntesis de IFN, al tomar
contacto con fibroblastos, clulas epiteliales y en
menor medida con linfocitos. Por otro lado, el IFN
es producido por linfocitos T CD4+ y CD8+, para
cuya sntesis requieren de la cooperacin de
monocitos y macrfagos. Esta citoquina es
producida de manera especfica cuando clulas T
sensibilizadas actan frente a un antgeno o
complejos antgeno anticuerpo. De igual manera,
673
Sin ttulo-2
673
5/26/06, 10:26 AM
su sntesis es inducida de forma inespecfica por

mitgenos, anticuerpos anti-linfocito o citoquinas
como IL-2.
Todos los IFNs pueden aumentar o disminuir
en una amplia variedad de reacciones inmunes.
Los tipos celulares y las funciones que pueden ser
modificadas por los IFNs son variados. Los IFNs
modifican la reactividad inmune actuando sobre
clulas B, T, NK, macrfagos, basfilos o clulas
germinales de mdula sea. La alteracin
resultante de tales estmulos se traduce en la
produccin de anticuerpos, la citotoxicidad de
clulas T, reacciones de injerto versus husped,
blastognesis mediada por mitgenos y antgenos,
alteracin de varias funciones de los macrfagos,
hipersensibilidad retardada, citotoxicidad por
clulas NK, liberacin de histamina mediada por
IgE y maduracin de clulas germinales de la
mdula sea. Estos estados de inmunidad alterada
pueden ser importantes en la fisiopatologa de la
autoinmunidad, inmunodeficiencia, procesos
linfoides malignos y en infecciones virales.
La sobreproduccin, la subproduccin o la
produccin selectivamente localizada de IFN
puede ser un importante factor en autoinmunidad
y en las inmunodeficiencias.
Los tres IFNs son protenas diferentes desde
el punto de vista antignico, por lo que anticuerpos
pueden utilizarse para su identificacin y
evaluacin mediante mtodos de RIA y ELISA
(ver captulo 39).
mediante algn bioensayo o mediante ELISA.

La produccin in vitro de IFN por clulas
mononucleares de sangre perifrica, seguida de la
estimulacin con mitgenos o antgenos
especficos es una manera efectiva de evaluar la
funcin de clulas T (en lo que respecta a la
produccin de citoquinas) y la interaccin
monocito-clula T. Un defecto en la produccin
de IFN u otras citoquinas puede ser sugestivo de
que el problema de fondo es una aberracin en
las seales regulatorias. La depresin en la
produccin de IFN, en respuesta a mitgenos,
antgenos especficos o a IL-2 puede indicar un
defecto en el nmero y funcin de clulas T y un
defecto en la habilidad de monocitos para
interactuar con clulas T. La alteracion in vitro de
los linfocitos para secretar IFN frente a un
estmulo, se asocia con enfermedades de base
inmune como autoinmunidad, inmunodeficiencia,
procesos linfoides malignos e infecciones con
ciertos virus incluyendo VIH.
a) Ensayos biolgicos
Los ensayos biolgicos para IFNs, permiten
evaluar la extensin en que esta molcula inhibe
una o varias manifestaciones del crecimiento viral
como son, la inhibicin de la produccin de
partculas virales, la inhibicin del efecto citoptico,
la inhibicin de la formacin de placas, la inhibicin
de la formacin de antgenos virales o de la sntesis
de DNA viral. Estos ensayos requieren la incubacin
de clulas con IFN, la remocin del IFN, la infeccin
de las clulas con virus y la evaluacin de la
reduccin del crecimiento viral. La actividad antiviral observada es cuantificada en unidades (U),
donde 1U de IFN corresponde al recproco de la
ms alta dilucin de IFN que inhibe una magnitud
especfica del crecimiento o de la actividad viral
(generalmente el 50%), comparado con un control
no tratado con IFN.
Indicaciones clnicas. Se debe evaluar los

niveles circulantes de IFNs, en pacientes con una
variedad de desrdenes, as como la deteccin in
vitro de la produccin de IFN podra ser un
marcador de la funcin de clulas T. De igual
manera, IFNs pueden ser evaluados en la
circulacin de pacientes con desrdenes
autoinmunes sistmicos como el lupus
eritematoso. En estos pacientes la presencia de
IFN se correlaciona con enfermedad clnica
activa. Adems, las determinaciones de IFNs son
esenciales en el monitoreo de pacientes que
participan en estudios clnicos. Ensayos biolgicos
deberan usarse para asegurar la actividad
biolgica de IFNs que sern administrados a los
pacientes. Tambin, es importante monitorear los
niveles sricos de IFN de pacientes que estn
recibiendo terapia con IFN. La sntesis de
anticuerpos anti-IFN, puede ser detectada en el
suero de pacientes en respuesta a terapias con IFN.
En estos casos, los sueros deberan ser evaluados
b) Inmunoensayos para IFN

Todos los tipos de IFNs, pueden ser
determinados mediante ensayos inmunoenzimticos e inmunorradiomtricos. La principal
ventaja de estos ensayos es la rapidez y la
posibilidad de tamizar muchas muestras. No obstante, los inmunoensayos no siempre reemplazan
a los ensayos biolgicos, especialmente cuando
se requiere identificar una molcula biolgicamente activa, como es el caso de la evaluacin de
674
Sin ttulo-2
674
5/26/06, 10:26 AM
diferentes partidas de IFNs para uso en inmunoterapia.
precozmente en pacientes que desarrollan SIDA

y por ello poseen elevado valor pronstico.
Interpretacin. Los ensayos para IFN en suero

de pacientes con HIV, evalan la respuesta de
clulas linfoides frente a HIV y agentes
oportunistas as como alteraciones en los aspectos
inmunorregulatorios. La replicacin de HIV puede
ser responsable de la presencia de IFN , y ,
mientras que la respuesta T a protenas de HIV,
puede ser responsable de los niveles de IFN. No
obstante, debe quedar claro que en la infeccin
aguda por diferentes patgenos oportunistas se
podra observar sntesis de IFNs. Elevados niveles
de IFN, se asocian con anormalidades en la funcin
inmune tales como hipergamaglobulinemia o
depresin de algunas respuestas celulares. Sin
embargo la produccin de IFNs puede asociarse
con sntesis de otros factores no relacionados
como son produccin de neopterina, aumento de
la expresin de molculas de HLA clases I y II,
expresin de 2 microglobulina y produccin de
2-5 oligoadenilato sintetasa.
Niveles sricos de IFNs son detectados en
personas infectadas con HIV y se observan de
manera precoz en el desarrollo del sndrome de
inmunodeficiencia adquirida. De hecho los niveles
sricos de neopterina y 2 microglobulina, las
cuales son inducidas por IFNs, se elevan
3.4. DNA microarrays

Este tipo de anlisis, denominados genmicos,
se han desarrollado en los ltimos cinco aos y
permiten evaluar en forma simultnea la expresin
de miles de genes. Los genes de un determinado tipo
celular son dispuestos de manera ordenada sobre un
soporte slido. Estos genes estn representados ya
sea por oligonucletidos o por fragmentos de cDNA.
El mRNA de las clulas en que se desea estudiar la
expresin gnica es utilizado para generar las sondas
de cDNA total para hibridizar con el microarray.
Estas sondas estn marcadas con compuestos
fluorescentes, por lo que su eventual hibridizacin
con genes del microarray es cuantificada mediante
fluorescencia, cuya intensidad refleja la abundancia
de un determinado mRNA dentro de la clula en
estudio. La medicin de la expresin gnica mediante
esta tcnica ha mostrado estar en estrecha correlacin
con los resultados obtenidos con otras metodologas
convencionales como northern blot y PCR
cuantitativa. Entonces, es posible mediante este
mtodo estudiar a gran escala la expresin gnica
durante la activacin de clulas T, durante la respuesta
inmune a diferentes agentes infecciosos o durante la
terapia con inmunomoduladores (figura 41-9).
Figura 41-9. DNA microarrays. Representacin esquemtica de la preparacin del material gentico, hibridacin, captura y
anlisis de imgenes.
675
Sin ttulo-2
675
5/26/06, 10:26 AM
moniotorear los resultados de inmunoterapia en

algunas enfermedades malignas o en inmunodeficiencias, para monitorear el curso de enfermedades
como coccidiomicosis y para el diagnstico de
algunas enfermedades infecciosas.
3.5. Pruebas para evaluar reacciones de

hipersensibilidad retardada (RHR)
La inyeccin intradrmica de antgenos,
como tuberculina (PPD), estreptoquinasa y Candida entre otros, puede inducir una o ms de los
cuatro tipos de reacciones cutneas: (a) una
reaccin circular y enrojecida que alcanza su
mxima induracin 15-20 minutos despus de la
inoculacin y es debida a la presencia de IgE
especfica en la piel, (b) una reaccin de fase tarda
mediada por IgE con una mxima induracin entre 12-24 h posteriores a la inyeccin, (c) una
reaccin caracterizada por una vasculitis local,
denominada reaccin de Arthur, que toma lugar
entre 12-24 h luego de la inoculacin y es mediada
por anticuerpos fijadores de complemento
presentes en el sitio de la inoculacin y (d) una
reaccin de hipersensibilidad retardada dependiente de macrfagos y linfocitos, caracterizada
por eritema e induracin en el sitio de la
inoculacin que se produce en 24-48 h posteriores
al contacto con el antgeno. De esta manera las
RHR representan un fenmeno de memoria
inmunolgica, para uno o ms grupos de antgenos
frente a los cuales el individuo se ha sensibilizado.
Esto significa que una exposicin previa caus la
sensibilizacin a un determinado antgeno y la
nueva presencia de ese antgeno recuerda y alerta
al sistema inmunolgico. Ello desencadena una
respuesta inflamatoria especfica al antgeno,
donde el dimetro de la reaccin es un ndice de
la hipersensibilidad cutnea. As, las pruebas de
hipersensibilidad retardada usando inyeccin
intradrmica son an un mtodo vlido, de costo
razonable para detectar hipersensibilidad y evaluar
inmunidad celular en el hombre (nica prueba
funcional in vivo). Respuestas drmicas positivas
generalmente se correlacionan con los ensayos in
vitro para hipersensibilidad retardada, incluyendo
la proliferacin de linfocitos y la medicin de la
sntesis de citoquinas.
Interpretacin. Debe considerarse que algunos

individuos podran no responder a un determinado
antgeno, por no haber tenido contacto previo con
l. No obstante, ciertos antgenos son ubicuos y
por ello la gran mayora de las personas responden
frente a ellos por haber sido sensibilizados un algn
momento de sus vidas. Una revisin de la literatura
extranjera, acerca de la respuesta de personas sanas
a diferentes antgenos, evaluada mediante RHR
mostr que: 75,5% responde a paperas; 53,3% a
Cndida albicans; 43,5% a Trichophyton; 38,3%
a toxoide tetnico; 37,6% a tuberculina (PPD) y
20,4% a coccidina. En base a estos estudios, los
referidos antgenos podran ser utilizados en los
paneles de evaluacin, o al menos ser utilizados
para validar la realidad nacional. En orden a
obtener resultados reproducibles, deber existir
consenso en lo referente a los antgenos a ser
utilizados y establecer criterios uniformes en
cuanto a su preparacin, va y forma de
administracin del antgeno as como tambin
respecto a los criterios a ser utilizados en la
evaluacin de la respuesta drmica.
3.6. Estudios de la especificidad de clulas T
3.6.1. Tetrmeros. Las clulas T reconocen
pequeos pptidos, los que son presentados en el
contexto de molculas de MHC, en asociacin con
el receptor para clulas T (TCR). Entonces, es
posible utilizar complejos MHC-pptido,
marcados con colorantes fluorescentes, los que al
asociarse con el TCR permitan visualizar esta
ligacin y a la vez evaluar la especificidad de esas
clulas T por un determinado antgeno. No obstante, debe considerarse que la asociacin entre
TCR y el complejo pptido-MHC es bastante dbil
como para producir un complejo estable. Esto,
puede ser compensado mediante el uso de
multmeros fluorescentes del complejo pptidoMHC, lo cual aumenta su avidez por la clula T.
As, dmeros y an mejor, tetrmeros de complejos
pptido-MHC clase I, han sido usados en ensayos
de citometra de flujo, para enumerar, caracterizar
y purificar clulas CD8+, especficas para un
determinado pptido. En este tipo de ensayos, tanto
la cadena ligera como la pesada de MHC, son
Indicaciones clnicas de la RHR. Es til en la

evaluacin de pacientes con sndromes de
inmunodeficiencias primarias o adquiridas. Si un
paciente no presenta reaccin despus de la
inoculacin intradrmica de cualquier antgeno,
se dice que es anrgico o presenta un estado de
anergia. Esta condicin debe necesariamente ser
comprobada utilizando concentraciones ms altas
de antgeno.
Las RHR, tambin han sido utilizadas para
676
Sin ttulo-2
676
5/26/06, 10:26 AM
Relevancia clnica. La inmunoscopa provee

informacin acerca del repertorio de clulas T que
ha sido seleccionado durante la respuesta inmune.
En combinacin con la tcnica de tetrmeros es
posible evaluar la diversidad de clones de clulas
T especficos para un epitopo, expandidas luego
de la inmunizacin. De igual manera, el uso
simultneo de ambas tcnicas permite el anlisis
detallado del repertorio de clulas T sin necesidad
de que estas poblaciones celulares sean
amplificadas in vitro.
producidas en Escherichia coli, para luego ser

ensambladas in vitro, en presencia del pptido
antignico. Los complejos as formados son
purificados mediante filtracin en gel. Entonces,
una molcula de biotina es adicionada en el
carboxilo terminal de la cadena pesada de MHC.
Esto permite su incubacin con fluorescena
marcada con streptoavidina, permitiendo que estos
tetrmeros puedan ser utilizados en ensayos de
ligacin.
Relevancia clnica. La frecuencia de clulas T
evaluadas mediante el ensayo de tetrmeros es
generalmente 10 veces ms alta de lo que revelan
las mediciones realizadas con mtodos
convencionales. Considerando que la ligacin del
complejo MHC-tetrmero, requiere la expresin
del TCR apropiado, este ensayo no provee
evidencia acerca de la funcionalidad de la clula
T ya que el ensayo est restringido a epitopos de
clulas T previamente identificados. No obstante
la caracterstica ms interesante del ensayo de
tetrmeros es su capacidad para visualizar todas
las clulas T especficas sean stas precursoras,
efectoras, funcionales o anrgicas.
3.7. Deteccin de clulas T precursoras

Las clulas T precursoras no tienen ninguna
funcin efectora. Sin embargo pueden proliferar
al enfrentarse al estmulo antignico. Esta
proliferacin ha sido ensayada mediante variados
mtodos que utilizan la incorporacin de precursores radiactivos o compuestos fluorescentes. Sin
embargo, ninguno de estos mtodos permite
purificar y caracterizar las clulas precursoras que
proliferan frente a un antgeno. La capacidad de
una clula precursora para proliferar, permite la
amplificacin de una poblacin especfica para
un antgeno, as como tambin determinar la
frecuencia de estas clulas precursoras. Esto es
posible mediante tcnicas de dilucin limitante
y citometra de flujo. Esta ltima, utiliza
colorantes fluorescentes para teir la membrana
de la clula por lo que es ms sensible y de mayor
utilidad. Entonces, las clulas son teidas con
colorantes fluorescentes como carboxifluorescena o PKH26. Despus de cada divisin celular,
las clulas acaban siendo dos veces menos
fluorescentes, producto de la particin del
colorante fluorescente en las dos clulas hijas
resultantes de cada ciclo. Esto permite deducir
el nmero de ciclos celulares a partir de la
intensidad de la fluorescencia. De igual manera,
la frecuencia inicial de clulas T precursoras
puede ser calculada a partir de la fluorescencia
observada al final del experimento (generalmente
entre 4 y 15 das).
3.6.2. Inmunoscopa. La diversidad del

repertorio de clulas T, es creada mediante un
proceso de rearreglo del DNA somtico
denominado recombinacin V(D)J. La tercera
regin hipervariable (CDR3) tanto de las cadenas
como de TCR, son producto de esta
recombinacin. Entonces, mediante PCR
utilizando partidores especficos para V y C, las
diferentes regiones de CDR3 pueden ser
amplificadas y su distribucin de tamaos puede
ser analizada mediante electroforesis en geles de
agarosa. Varias docenas de segmentos de genes
BV y 4 5 de BJ que codifican para la cadena
son conocidos en el ratn y el hombre. Por ello,
las posibilidades de combinacin de los
segmentos V y J con los posibles CDR3
representan ms de 2.000, las que pueden ser
analizadas en una nica muestra. Despus de la
inmunizacin, unos pocos clones de clulas T son
amplificados. Todas las clulas pertenecientes a
un mismo clon presentarn el mismo CDR3. Este
abordaje, ha sido utilizado para visualizar y
cuantificar la expansin clonal tanto en el hombre
como el ratn. Utilizando la tecnologa del PCR,
el mtodo inmunoscpico es altamente sensible
y una nica clula T especfica puede ser
detectada en 2 x 105 clulas.
Relevancia clnica. El ensayo de la respuesta

proliferativa de clulas precursoras mediante
citometra de flujo es un mtodo que presenta
ventajas sobre aquellos que utilizan la incorporacin de precursores radiactivos, ms an si se
considera que se puede utilizar la misma muestra
para determinar en paralelo la asociacin de
tetrmeros.
677
Sin ttulo-2
677
5/26/06, 10:26 AM
como bacterias (Staphylococcus aureus) y

levaduras (Cndida albicans). Los microorganismos fagocitados pueden ser detectados
mediante la tincin con colorantes y lectura
microscpica as como tambin mediante el uso
de clulas microbianas marcadas con substancias
fluorescentes (citometra de flujo; ver captulo 42)
o precursores radiactivos para luego evaluar la
fluorescencia o radiactividad asociada a los PMN.
4. ESTUDIO DE LA INMUNIDAD CELULAR

INESPECFICA
El estudio de este tipo de inmunidad, involucra evaluar las clulas y mediadores que participan
en esta va de la respuesta inmunitaria. Dentro de
ellos debemos considerar los neutrfilos
(leucocitos polimorfonucleares, PMN), monocitos,
eosinfilos y basfilos.
Los defectos en la fagocitosis y muerte celular
llevan a un aumento en la susceptibilidad a
infecciones y pueden asociarse a alteracin de estas
clulas o bien a deficiencias en factores
quimiotcticos como C3a y C5a. stos tambin
pueden deberse a fallas en la opsonizacin sea esta
por dficit de anticuerpos opsonizantes o de factores
opsonizantes del complemento como C3b y C4b.
b) Ensayo de actividad microbicida. Para evaluar

la actividad microbicida de PMN, clulas
purificadas son incubadas con microorganismos
(S. aureus, C. albicans), en una proporcin clula:
microorganismo igual a 1:5, en presencia de
anticuerpos del paciente y de C3b ms controles
apropiados. Los tubos se incuban durante 3 h,
tomndose alcuotas cada 30 minutos. En cada
caso, las alcuotas son centrifugadas, las clulas
lisadas y la suspensin resultante es sembrada en
medios de cultivo apropiados para mediante el
desarrollo bacteriano, evaluar la cantidad de
bacterias fagocitadas que permanecen viables.
4.1. Ensayos funcionales de neutrfilos

Los neutrfilos o leucocitos PMN constituyen el
ms abundante tipo de leucocito en sangre
perifrica normal, donde sus concentraciones
varan entre 2000 y 5000 clulas/l (ver captulo
3). Estas clulas participan en la fase efectora de
la respuesta inmune jugando adems un importante
papel en la inflamacin y en la patognesis de
muchas enfermedades. Su funcin en el control
de microorganismos es potenciada por actuar en
interdependencia con algunos factores del sistema
de complemento y anticuerpos opsonizantes. Los
defectos intrnsecos de los neutrfilos que alteran
su funcionamiento son, generalmente, de base
gentica, como es el caso de la enfermedad
granulomatosa crnica (ver captulo 29). En este
proceso se observa una ingestin normal, pero el
proceso de destruccin intracelular no ocurre. Esto
es debido a la inactivacin de la enzima NADPH
oxidasa, responsable de la sntesis de intermediarios reactivos del oxgeno. Por otro lado, la
deficiencia gentica de mieloperoxidasa y glucosa
6 fosfato deshidrogenasa, es responsable por los
defectos en la capacidad de PMN en inducir la
muerte celular de los microorganismos.
Los neutrfilos en su calidad de clulas
fagocticas, son la principal poblacin celular
involucrada en la respuesta inflamatoria aguda.
Estas clulas pueden ser aisladas en gran nmero
y pureza de la sangre del hombre y animales.
c) Prueba de reduccin del azul de nitrotetrasoliun. La habilidad de neutrfilos para reducir el

azul de nitrotetrasolium (NTB) es una medida de
su actividad de NADPH oxidasa y su capacidad
para generar productos reactivos intermediarios de
oxgeno. El O2- y otros productos del estallido
respiratorio tienen la capacidad de reducir el NTB
a formazn, un precipitado negro azulado que se
determina espectrofotomtricamente. Alternativamente, los neutrfilos se pueden fijar y examinar
al microscopio, despus de la incubacin con NTB,
permitiendo de esta manera determinar el
porcentaje de clulas que contienen el colorante
reducido (formazan).
d) Generacin de anin superxido. La
generacin de anin superxido (O2-) puede ser
evaluada utilizando tanto en clulas estimuladas
como no estimuladas, mediante la medicin de la
inhibicin de la reduccin de ferricitocromo c por
superxido dismutasa.
e) Formacin de perxido de hidrgeno. La
generacin de perxido de hidrgeno (H2O2) por
neutrfilos se produce como consecuencia del
estmulo de membrana y puede medirse mediante el
mtodo basado en la oxidacin del cido
homovainillnico. Esta reaccin es catalizada por
peroxidasa (HPR) y depende del H2O2 generado por
a) Medicin de la actividad fagoctica. La

actividad fagoctica de neutrfilos puede medirse
utilizando una variedad de microorganismos tales
678
Sin ttulo-2
678
5/26/06, 10:26 AM
la clula. Mtodos fluorescentes de reciente

introduccin, permiten medir la produccin de H2O2
usando el 10-acetil-3,7-dihidroxifenoxazima, el cual
en presencia de HPR, reacciona con H2O2, generando
resorufina, compuesto que es altamente fluorescente
con emisin mxima a 563 nm. La lectura se realiza
en microplaca usando un espectrofluormetro.
medida en placas de 96 orificios, detectando los

eosinfilos asociados a clula por medio de la
medicin de la actividad de peroxidasa propia de
los eosinfilos.
4.2. Ensayos funcionales de eosinfilos
Desde los trabajos pioneros de Ellie

Metchnikoff, los macrfagos han sido considerados como las clulas responsables de la
regulacin de la respuesta inmune. Los macrfagos
participan en procesos de recambio celular,
incluyendo el remodelamiento tisular durante
embriognesis, destruccin tisular y reparacin de
los tejidos con posterioridad a injurias e
infecciones y renovacin tisular que permite la
eliminacin de clulas senescentes o malignas. Los
macrfagos son clulas de central importancia en
la respuesta inmune. Una de sus caractersticas
distintivas que avala su papel central en la
inmunidad es su presencia en la mayora de los
tejidos de nuestro cuerpo. Entonces su principal
funcin es monitorear y regular los fluidos
circulantes y reaccionar frente a los cambios. Los
macrfagos participan tanto de las vas aferentes
como eferentes de la respuesta inmune. Sus
funciones son variadas e involucran pinocitosis,
degradacin de material ingerido, quimiotaxis,
actividad antimicrobiana, secrecin de
monoquinas y otros factores, procesamiento y
presentacin de antgenos, cooperacin con clulas
T y B y actividad citoltica.
Los monocitos y los macrfagos son clulas
que se originan en la mdula y son programadas
para madurar y diferenciar de la clula
hematopoytica germinal hasta ser liberada para
circular en la sangre perifrica. La diferenciacin
de monocitos a macrfagos ocurre en diferentes
tejidos, dependiendo de la localizacin tisular y
del microambiente al que los monocitos son
expuestos.
Los monocitos circulantes y los macrfagos
tisulares desempean importantes funciones en la
defensa del husped contra microorganismos
invasores y clulas tumorales. Por otro lado, la
fagocitosis, degradacin y muerte de microorganismos permite a monocitos y macrfagos
participar en la presentacin de antgenos, primer
y esencial paso en el montaje de la respuesta
inmune. De igual manera estas clulas pueden responder a un determinado antgeno secretando
citoquinas (monoquinas) solubles, que permiten
4.3. Ensayos funcionales de monocitos y

macrfagos
Los eosinfilos son granulocitos derivados

de la mdula sea y cuyos grnulos contienen
protenas bsicas que se tien con colorantes
cidos como la eosina. En personas sanas no
alrgicas, estas clulas corresponden al 2-5% de
los leucocitos sanguneos (ver captulo 3). Aunque
son capaces de fagocitar, su funcin est dada
frente a ciertos agentes infecciosos incluyendo los
helmintos. Adems estas clulas juegan un papel
significativo en la inflamacin y la injuria celular
seguida a las reacciones de hipersensibilidad
retardada. La produccin y activacin de
eosinfilos est bajo el control de clulas T CD4+
pertenecientes a la subpoblacin Th2, responsables
por la produccin de IL-5, que es el principal factor activador de eosinfilos. Despus de su
activacin, los eosinfilos aumentan de tamao y
disminuyen su densidad. Eosinfilos activados son
potentes efectores de reacciones de ADCC y
producen una variedad de mediadores inflamatorios incluyendo leucotrienio C4 (LTC4) y O2-.
a) Generacin de LTC4. El leucotrienio C4 es
un mediador derivado de cido araquidnico que
es producido por mastocitos, basfilos y
eosinfilos. LTC4 y sus metabolitos derivados,
LTD4 y LTE4, son poderosos mediadores de
vasocontriccin, jugando un papel central en la
patognesis del asma. La produccin de LTC4
por eosinfilos despus de estimulacin con varios
agentes (IL-5,GM-CSC, Zynosan, ionforo
A23187) puede medirse utilizando diferentes kits
comerciales basados en el radioinmunoanlisis.
b) Ensayo de anin superxido. Al igual que
neutrfilos, los eosinfilos luego de su activacin
pueden generar O2-. ste puede medirse inhibiendo
la reduccin de ferricitocromo c por superxido
dismutasa.
c) Ensayo de adhesin de peroxidasa de
eosinfilos. La adhesin de eosinfilos al colgeno
o a clulas de endotelio vascular humano, es
679
Sin ttulo-2
679
5/26/06, 10:26 AM
activar y reclutar diferentes tipos de clulas

efectoras. La primera monoquina secretada frente
a un estmulo antignico es interleucina 1 (IL-1),
que inicia la respuesta inmune actuando sobre
clulas T CD4+ y CD8+, permitiendo la secrecin
de IL-2 y la expresin de receptores para IL-2,
que permite la proliferacin de estas clulas. Otra
monoquina es IL-6, que posee capacidad para
activar clulas NK, timocitos y linfocitos T.
Monocitos activados tambin producen el
factor estimulador del crecimiento de granulocitos
y macrfagos, el cual induce la maduracin de
monocitos y neutrfilos de la mdula sea y la
activacin funcional de los monocitos circulantes.
Monocitos estimulados por antgenos tambin
producen IL-8. El TNF sintetizado por monocitos
activados posee propiedades antitumorales pero
adems es capaz de activar monocitos, granulocitos y eosinfilos. No obstante monocitos y
macrfagos no slo producen monoquinas capaces
de estimular la respuesta inmune sino que adems
pueden producir factores inmunosupresores como
prostaglandina E2. Entonces el aislamiento de
monocitos de sangre perifrica permite evaluar la
actividad microbicida y antitumoral de estas
clulas as como su funcionalidad en producir
monoquinas y prostaglandinas.
a) Produccin de intermediarios del metabolismo oxidativo. Durante la fagocitosis y la

actividad citotxica, los macrfagos son capaces
de producir varios intermediarios del metabolismo
del oxgeno. Durante las fases iniciales de la
fagocitocis, los macrfagos muestran un aumento
en el consumo de oxgeno, cortocircuito de la
actividad de hexosa monofosfato y produccin de
intermediarios de oxgeno, en un proceso conocido
como estallido respiratorio. La generacin de
radicales superxido es catalizada por una NADPH
oxidasa localizada en la membrana, siendo generado
por una apropiada estimulacin de membrana. Esta
oxidasa transfiere electrones de NADPH citoslica
al oxgeno extracelular, produciendo H2O2, el que
es necesario para la muerte de los microorganismos
invasores, pero al mismo tiempo causa inflamacin
y dao tisular. El estallido respiratorio no
necesariamente depende de la fagocitosis pero
permite caracterizar la actividad fagoctica. La
produccin de O2-, es el paso inicial de la conversin
de oxgeno a perxido de hidrgeno y radicales
hidroxilo, los cuales son potentes metabolitos
microbicidas. Por ello la evaluacin del nivel de
produccin de O2-, es un importante indicador del
potencial microbicida de los macrfagos. En este
aspecto, el mtodo ms apropiado para la medicin
de O2- es evaluar la inhibicin de la reduccin de
citocromo c Fe3+ a Fe2+, la que es dependiente de
superxido dismutasa.
Indicaciones clnicas. La evaluacin in vitro de

la funcin de monocitos se recomienda en
pacientes en los cuales se sospecha deficiencias
en la inmunidad mediada por clulas. Deficiencia
en la funcin de monocitos se puede manifestar
clnicamente como aumento en la frecuencia de
infecciones las que podran ser debidas a fallas
en la capacidad de matar grmenes, en deficiencias
en el procesamiento y la presentacin de antgenos
o en la produccin de monoquinas. En estos casos,
el primer y ms simple ensayo consiste en evaluar
la capacidad antimicrobiana seguida de la
evaluacin de la capacidad de secretar monoquinas
como TNF. En pacientes con cncer, la evaluacin
de la capacidad tumoricida puede entregar valiosa
informacin acerca de las capacidades funcionales
in vivo de estas clulas. Por otro lado la medicin
de la produccin de PGE2 por monocitos permite
conocer el nivel de actividad supresora de los
monocitos. Ciertas enfermedades crnicas como
cirrosis, tuberculosis, sarcoidosis, actinomicosis
y enfermedad de Crohn, pueden asociarse con
disfuncin de monocitos por lo que el monitoreo
de la funcin de estas clulas puede ser informativo
acerca del estado de la enfermedad.
b)Estudio de la fagocitosis. Bajo el trmino de

fagocitosis se describe la capacidad de clulas de
tomar partculas slidas, tales como eritrocitos,
diferentes microorganismos, materiales orgnicos
e inorgnicos. Diferentes eventos celulares han sido
asociados con la internalizacin y subsecuente
procesamiento del material ingerido. Cada fase de
la fagocitosis es un proceso celular complejo, con
caractersticas funcionales propias y diferentes
requerimientos metablicos donde participan
factores intra y extracelulares. Por ello, la fagocitosis
representa uno de los parmetros funcionales usados
para caracterizar la funcin de los macrfagos.
Para obtener una evaluacin ms objetiva de
este proceso biolgico, es importante escoger de
manera cuidadosa la partcula a ser fagocitada.
Adems de eritrocitos y varias cepas de bacterias,
existen partculas comnmente clasificadas como
inertes que son empleadas como reactivos para la
cuantificacin de la actividad fagoctica. Ellas son
slica, metales carboxilados, microcristales y
partculas de ltex. No obstante, la fagocitosis de
680
Sin ttulo-2
680
5/26/06, 10:26 AM
lisis de los monocitos. Por ello slo incorporarn

el istopo aquellas levaduras que permanecen
viables, por lo que la radiactividad incorporada se
compara con un control en que se cultiv idntico
inculo inicial pero en ausencia de monocitos.
Tambin es posible evaluar la actividad
microbicida mediante recuento microscpico del
nmero de clulas infectadas y el nmero de
levaduras por cada 100 clulas infectadas.
bacterias es una de las tcnicas tradicionalmente

usadas por ms de una centuria. Prcticamente todas
las bacterias pueden ser utilizadas. Entonces cultivos
de monocitos se ponen en contacto con los
microorganismos por un perodo de tiempo. Luego,
los cultivos son lavados y se evala tanto el nmero
de bacterias intracelulares por cada 100 monocitos,
como el porcentaje de monocitos que contienen
bacterias intracelulares. El ndice fagoctico que
muestra la relacin entre el porcentaje de
macrfagos con a lo menos una bacteria y la media
del nmero de bacterias por macrfagos positivos,
puede tambin ser considerado. Tradicionalmente,
esta evaluacin se ha realizado mediante
microscopa ptica, aunque protocolos ms
recientes y algunos reactivos comerciales
disponibles utilizan bacterias (Escherichia coli K12)
marcadas con fluorescena, lo que permite evaluar
la fagocitosis por microscopa de fluorescencia,
citometra de flujo y espectrofluorometra. Resulta
interesante destacar, que las metodologas
fluorescentes permiten diferenciar entre
microorganismos localizados extracelularmente y
los microrganismos intracelulares. Estos protocolos
se basan en la observacin de la viabilidad del
microorganismo al ser teido con naranja de
acridina y luego observado en el rango ultravioleta
o con excitacin azul. El microorganismo se
mostrar de color verde si estuviese viable o de
color rojo si estuviese muerto.
Otro posible abordaje, se basa en el uso de
microesferas fluorescentes y efectos de bloqueo,
que permite la fcil diferenciacin entre las
partculas asociadas y aquellas interiorizadas. La
tcnica se basa en la propiedad de algunos
colorantes como el cristal violeta o el azul tripan
de apagar la fluorescencia de partculas fluorescentes libres o asociadas al monocito, mientras que
aquellas interiorizadas permanecen fluorescentes.
El fenmeno responsable por este bloqueo se llama
transferencia de energa de excitacin. La
transferencia ocurre cuando el espectro de
absorcin del agente bloqueador se sobrepone al
espectro de emisin del marcador fluorescente.
d) Evaluacin de la actividad citosttica frente

a tumores. La habilidad de monocitos para
controlar el crecimiento tumoral, puede evaluarse
mediante la incorporacin de 3H- timidina en
clulas tumorales que sobreviven luego de la
incubacin con monocitos y que son comparadas
con la incorporacin de clulas tumorales que
fueron incubadas en ausencia de macrfagos.
e) Evaluacin de la actividad tumoricida. La
evaluacin de la actividad tumoricida es semejante
a la evaluacin de la actividad citosttica, con la
diferencia de que las clulas tumorales son
marcadas antes de la incubacin con los
macrfagos.
f) Estudios de induccin de monoquinas. De
manera general, cultivos de monocitos purificados
son incubados por 24-48 h con algunos inductores
de la produccin de monoquinas como el LPS de
Escherichia coli. Luego los sobrenadantes son
colectados mediante centrifugacin y sometidos
a evaluacin o congelados inmediatamente. Tanto
ELISA como RIA pueden ser usados para la
deteccin de monoquinas. La principal desventaja
de estos mtodos es que tambin detectan
monoquinas biolgicamente inactivas. Por ello, los
mtodos moleculares, principalmente aquellos
basados en PCR, presentan grandes ventajas tanto
en sensibilidad como en especificidad (ver punto
3.3.1 y captulo 44).
c) Evaluacin de la actividad microbicida. La

actividad microbicida y la fagocitosis puede
evaluarse incubando cultivos de monocitos con
levaduras, como C. albicans, a diferentes
relaciones levadura : monocito (1:3; 1:10; 1:30).
Luego de incubacin a 37C por 18 h, las levaduras
son marcadas metablicamente con 14C-glucosa,
adicionando el istopo en agua, lo que permite la
Ensayo de IL-1. Para el ensayo de la

actividad biolgica de IL-1, sobrenadantes
de monocitos estimulados son usados para
estimular la proliferacin dependiente de IL1 de una lnea de clulas T (clon de clulas T
murinas). El ensayo utiliza IL-1 como
control de la proliferacin de las clulas T.
La presencia de esta monoquina puede
ser identificada mediante ensayos de ELISA
utilizando preparados comerciales, los cuales
tienen sensibilidad en el rango de 20-50 pg/
681
Sin ttulo-2
681
5/26/06, 10:26 AM
unidades de TNF son calculadas en base a una

curva estndar. Considerando que tanto TNF
como TNF (tambin llamada linfotoxina) son
detectados en este ensayo, la neutralizacin con
anticuerpos contra cada uno de stos, es
necesaria para conocer cul monoquina est
siendo detectada. No obstante slo TNF es
sintetizado por monocitos, por lo que la
deteccin de TNF sugiere que la preparacin
pudiese estar contaminada con linfocitos. Si no
fuese posible o pertinente marcar las clulas con
51
Cr, el ensayo podra realizarse tiendo las
clulas al final de la incubacin con azul tripan
para as evaluar la viabilidad celular o teir con
cristal violeta que tie las clulas tumorales
residuales. Esta tcnica es particularmente
apropiada cuando se usan como clula blanco
los fibroblastos murinos L929.
mL, sin reacciones cruzadas con otras

monoquinas y citoquinas.
Ensayo de IL-6. Los ensayos biolgicos

miden la habilidad de sobrenadantes de
cultivo de monocitos estimulados en inducir
la proliferacin dependiente de IL-6 en una
lnea celular de plasmocitoma (por ejemplo
T1165 o B9). Diluciones seriadas de IL-6
recombinante son incluidas como control. De
igual manera, "kits" comerciales pueden ser
utilizados para evaluar los niveles de IL-6.
La sensibilidad de estos es de 3.5 pg/mL, de
protena por ml, no presentando reacciones
cruzadas con otras citoquinas. Estos ensayos
son a lo menos tan sensibles como los ensayos
biolgicos con la ventaja de ser ms rpidos
y la desventaja de su relativo alto costo.
Ensayo para GM-CSF. Los ensayos

biolgicos de la actividad de factor
estimulador de colonias granulocito-monocito
(GM-CSF), miden la habilidad de sobrenadantes de cultivo de monocitos estimulados
en inducir la proliferacin dependiente de
GM-CSF en una lnea celular de leucemia
humana (con frecuencia se usan los clones
Mo7e o TALL-101). Diluciones seriadas de
GM-CSF recombinante humano son
utilizados como control. En este caso debe
considerarse que las lneas tumorales
utilizadas son respondedoras tanto a GM-CSF
como a IL-3 por lo que una caracterizacin
definitiva de la actividad de GM-CSF, se
realiza incubando los sobrenadantes de
monocitos esimulados con anticuerpos antiGM-CSF y anti-IL-3, antes de evaluar la
actividad de GM-CSF. De igual manera "kits"
comerciales de ELISA pueden ser utilizados.
g) Ensayo de prostaglandina E2. La prostaglandina E2 es detectada por RIA. El sobrenadante

de monocitos estimulados es ajustado a pH 12,5
con NaOH y luego es hervido, neutralizado y
evaluado. Las concentraciones de PGE 2 son
calculadas en base a una curva de referencia.
5. EVALUACIN DE LABORATORIO DEL

PACIENTE INFECTADO CON EL VIRUS
DE LA INMUNODEFICIENCIA HUMANA: UN MODELO DE ESTUDIO DE LAS
DEFICIENCIAS EN LA RESPUESTA
CELULAR
Frente a la sospecha inicial de encontrarse
frente a un paciente infectado por HIV, el
diagnstico de laboratorio se realiza mediante la
bsqueda de anticuerpos, utilizando ELISA. Las
pruebas de Western blot y PCR se usan como
confirmatorias. Por ello, la evaluacin de la
respuesta inmune celular en estos pacientes, es de
central importancia ya que permite monitorear el
curso de la infeccin, evaluar el tratamiento y sus
resultados poseen valor pronstico (ver captulo
30).
Ensayo de TNF. Para el ensayo biolgico de la

actividad de TNF, se evala la capacidad de
sobrenadantes de cultivo de monocitos
estimulados, en lisar una lnea celular de
fibrosarcoma murino, caracterizado por ser
altamente sensible a TNF (por ejemplo WEHI
164-JD). En este caso las clulas del
fibrosarcoma son marcadas con 51Cr y luego
incubadas con diluciones seriadas del
sobrenadante de cultivo de monocitos. Controles
se realizan con clulas incubadas en ausencia
de sobrenadantes. Diluciones seriadas de TNF
recombinante son incluidas como control y las
5.1 Estudio fenotpico de linfocitos

En base a lo anterior, el estudio inicial del
laboratorio debera incluir el anlisis fenotpico
mediante citometra de flujo, de las diferentes
subpoblaciones de linfocitos T, evaluando
particularmente los marcadores CD3+, CD4+ y
682
Sin ttulo-2
682
5/26/06, 10:26 AM
CD8+. Este examen se orienta particularmente a

conocer el porcentaje y recuento absoluto de LT
CD4+, ya que stos poseen una relacin estricta
con el estado de la infeccin. De acuerdo a la
clasificacin del Centro de Control de las
Enfermedades Infecciosas de los Estados Unidos
(CDC), en relacin a los niveles de clulas T
CD4+, se pueden clasificar a los pacientes en tres
categoras: a) Recuentos mayores 500 clulas/L,
b) Recuentos entre 200-499 clulas/L, c)
Recuentos menores a 200 clulas/L.
No obstante, el avance en las tcnicas de
citometra de flujo, ha permitido proponer nuevos
marcadores con valor predictivo. Entre stos se
incluye evaluar la prevalencia e intensidad del
marcador CD38 de clulas T CD8+, el porcentaje
de clulas CD4+ que muestran prdida de
marcadores CD26 y CD28 y el porcentaje de
clulas CD4+ que expresan el marcador CD95.
La intensidad del marcador CD38 en linfocitos
CD3/CD8+ se ha podido correlacionar de manera
estrecha a la progresin futura de la enfermedad,
de manera ms absoluta que el recuento nico de
linfocitos CD4+. Pruebas adicionales podran ser
realizadas en estudios clnicos orientados a evaluar
efectos teraputicos de una determinada droga o
el efecto protector de una eventual vacuna. En
estos casos podra ser interesante un estudio
fenotpico extensivo a otras poblaciones celulares,
incluyendo marcadores para monocitos, clulas
NK, clulas B y marcadores de la activacin de
clulas T, tales como HLA-DR o el monitoreo de
la expresin de receptor para IL-2.
respuesta por LTc se manifiesta en perodos

tempranos de la infeccin, en personas en que a
pesar de estar infectadas por ms de una dcada
no presentan signos de enfermedad, o en
trabajadoras sexuales y recin nacidos de padres
infectados que no contrajeron la infeccin Aunque
en pacientes infectados con HIV los niveles de
CD8+ son cercanos a los niveles normales, la
habilidad para generar respuesta LTc, la cual
requiere IL-2, est disminuida, ya que se observa
una reduccin en los niveles de IL-2. Por ello,
estudios recientes sugieren la evaluacin de la
respuesta citotxica de clulas T de pacientes
infectados, frente a clulas blanco infectadas con
HIV o que expresan protenas virales. En estos
casos se sugiere colectar CMSP y someterlas in
vitro a estimulacin previa con diferentes
antgenos de HIV tales como nef, gag, po1, vif y
env. Esta estimulacin previa parece ser
indispensable, ya que permite la estimulacin
especfica y la amplificacin de pequeas
poblaciones precursoras de clulas T citotxicas,
que pudieran encontrarse en la sangre perifrica
en el momento de la recoleccin de la muestra.
Por encontrarse en bajo nmero, de no mediar una
estimulacin previa, la actividad citotxica de estas
clulas no sera detectada en ensayos de
citotoxicidad convencionales.
De igual manera pueden ser importantes, la
evaluacin del efecto citotxico de clulas NK.
Aunque el porcentaje de NK en pacientes
infectados con HIV puede permanecer normal, el
nmero absoluto de algunas subpoblaciones de NK
pueden estar disminuidas, por lo que la funcin
NK se deteriora segn progresa la infeccin.
Entonces, la actividad NK puede ser detectada en
CMSP, mediante mtodos que miden la liberacin
de 51Cr por parte de clulas blanco.
Las reacciones de ADCC, especficas para
HIV, pueden tambin ser evaluadas, ya que la
actividad ADCC, mediada por clulas NK, declina
conforme progresa la enfermedad. Dos tipos de
ADCC pueden utilizarse en la evaluacin de
pacientes infectados con HIV. La primera, es
denominada ADCC clsica o indirecta, en la cual
se usa suero de pacientes infectados y linfocitos de
dadores normales. La lisis de las clulas infectadas
es evaluada de mediante la liberacin de 51Cr. Por
otro lado, la ADCC directa, usa clulas NK frescas,
aisladas de pacientes infectados, las que son
cultivadas con anticuerpos citoflicos anti HIV y
luego incubadas con clulas blanco infectadas con
HIV o recubiertas con antgenos del virus.
5.2. Estudio de la respuesta proliferativa

Una de las alteraciones ms tempranas del
paciente infectado con HIV, es una marcada
reduccin en la habilidad de los linfocitos T para
proliferar in vitro, en respuesta a mitgenos,
antgenos solubles y aloantgenos. Es por ello
importante la evaluacin de la respuesta
proliferativa de los linfocitos de pacientes
infectados con HIV. De esta manera, el estudio de
la respuesta proliferativa de clulas T a mitgenos,
antgenos solubles y aloantgenos puede ser de
gran valor.
5.3. Estudio de la respuesta citotxica
Varias evidencias sugieren que LTc podran
ser importantes en la defensa frente a HIV. stas
se basan en la observacin que una fuerte
683
Sin ttulo-2
683
5/26/06, 10:26 AM
5.4. Evaluacin de los niveles de citoquinas y

subpoblaciones de linfocitos T
LECTURAS SUGERIDAS
Abbas A. K., Murphy, K., M, Sher, A., Functional diversity of helper T lymphocytes, Nature
383:787-793, 1996.
Varias observaciones sugieren, que en la

infeccin por HIV, ocurre una alteracin en el
balance de la expresin de citoquinas y sus
receptores, lo que podra contribuir a la
patognesis de la infeccin. Elevados niveles de
IL-1, IL-6, GM-CSF, TNF y TNF se han
reportado en suero y lquido cefalorraqudeo en
pacientes con HIV. De igual manera, segn
progresa el sndrome, se observa una disminucin
en los niveles de IL-2 y IFN, a la vez que
aumentan IL-4 e IL-10. Esta observacin sugiere
que durante el transcurso de la enfermedad, la
actividad de la subpoblacin Th1 disminuye
mientras que la subpoblacin Th2 aumenta. Siendo
que Th1 estn asociados a las RHR y a las
reacciones de citotoxicidad mientras que Th2 se
asocia a la produccin de anticuerpos, este cambio
en el predominio de una determinada subpoblacin
podra contribuir a la progresin de la enfermedad.
La disminucin en la subpoblacin Th1 se puede
asociar al hecho que en pacientes con SIDA, se
observa una significativa reduccin en la
reactividad de las pruebas de sensibilidad cutnea
("skin-test"). De esta manera, la determinacin de
citoquinas y sus receptores mediante mtodos
moleculares parece ser de central importancia en
la evaluacin de la progresin del sndrome.
Los procedimientos de laboratorio propuestos en la evaluacin de pacientes con HIV se
resumen en la figura 41-10.
Abbas A. K., Lichtman, A.H., Pober, J.S., Effector mechanisms of cell-mediated immunity.
Cellular and Molecular Immunology, chapter
13, W.B.Saunders Company, 2000.
Castillo D., Vega, P., Reid, M., Metodologa
inmunidad celular, Manual de Procedimientos
Tcnicos de Laboratorio Clnico, Inst. Salud
Pblica de Chile, 1994, pp. 26-42.
Fernndez-Botran, R. and Vetvicka, V., Advanced
Methods in Cellular Immunology, chapters 2,
3, 4, 5, 8, 9, 10, 11, CRC Press, 2000.
Hagmann, M., Doing Immunology on a Chip,
Science 290: 82-83, 2000.
Kuby, J., Immunology, Chap 3, 10, 11, 12, 13,
15, 21, 23,W.H. Freeman and Company, New
York, 1994.
Michel, N., Kim. J.H., HIV Protocols. Methods
in Molecular Medicine, Humana Press, 1999.
Rose, N.R., De Macario, E.C., Fahey, J.L., Friedman, H., Penn, G.M., Manual of Clinical Laboratory Immunology, chapters 22-24, 30, 31, 3336, 41, 42, 59, 64-66, 115, 1992.
Figura 41-10. Flujograma de la evaluacin inmunolgica del paciente infectado con HIV.
684
Sin ttulo-2
684
5/26/06, 10:26 AM

Captulo 42
LABORATORIO DE HISTOCOMPATIBILIDAD
Y TRASPLANTE DE RGANOS
Susana Elgueta M., Alejandra Arenas C. y Cristina Navarrete
1. Introduccin
2. Nomenclatura HLA
2.1. Gentica
3. Tipificacin HLA
3.1. Tcnica serolgica
3.2. Tcnica celular
3.3. Tcnica molecular
4. Anticuerpos HLA
4.1. Anticuerpos reactivos con panel
4.2. Crossmatch
5. Requerimientos de
histocompatibilidad para trasplante
6. Otras aplicaciones de la tipificacin
HLA
685
Sin ttulo-2
685
5/26/06, 10:26 AM
686
Sin ttulo-2
686
5/26/06, 10:26 AM
RESUMEN
El Complejo Principal de Histocompatibilidad, HLA en el hombre, tiene un rol fundamental en la regulacin de la respuesta inmune. El gran polimorfismo de este sistema asegura la
sobrevida de la especie, al permitir la presentacin de pptidos inmunognicos derivados de
distintos agentes patgenos a los linfocitos T.
Este polimorfismo es reconocido e identificado en el laboratorio clnico a travs de la llamada tipificacin HLA, la cual ha tenido una evolucin importante, desde la tipificacin serolgica
inicial, a las actuales tcnicas moleculares que permiten el reconocimiento de las variantes allicas.
Las tcnicas, cada da ms sensibles, de identificacin de anticuerpos anti-HLA del receptor contra los antgenos del donante, en especial la citometra de flujo, han permitido en el rea de
trasplantes, evitar rechazos hiperagudos que ponen en riesgo la vida del paciente o sirven como
indicador de factor de riesgo para la prdida del injerto
Sin embargo, el uso clnico del conocimiento sobre el MHC es an limitado a slo algunas
reas de la medicina, pero en la medida que se siga profundizando en el conocimiento y comprensin del rol de estas molculas del MHC y junto al desarrollo tecnolgico, no cabe duda que
se ampliarn las fronteras de su aplicacin al paciente.
el tejido o clula trasplantada, o indirecto a travs

de pptidos antignicos derivados de estas molculas de HLA ajenas presente en estos tejidos o
clulas y presentados por molculas HLA propias
del receptor. Estos mecanismos se denominan
alorreconocimiento directo e indirecto, respectivamente.
Es as como estas molculas participan en la
fase de induccin y como blanco de la respuesta
inmune, en la cooperacin entre clulas inmunes,
en la seleccin del repertorio de linfocitos T y en
la induccin de tolerancia.
En el captulo 8 se explic el sistema HLA
en el hombre y se indic sus caractersticas y los
loci correspondientes a las molculas de clase I y
II. Sin embargo, debemos insistir en su organizacin gnica ya que es fundamental para comprender la nomenclatura actualmente en uso, su
polimorfismo y las tcnicas de su determinacin.
Una de las caractersticas importante de los
genes que codifican las molculas clsicas de HLA
clase I (HLA-A,-B,-C) o clase II (HLA-DR,-DQ,
DP) es su alto nivel de polimorfismo, representado por la gran cantidad de alelos presente para cada
uno de los loci de clase I y II.
En las molculas clsicas de clase I (HLAA,-B y -C) el polimorfismo radica en la cadena
1. INTRODUCCIN
Los antgenos del Complejo Principal de
Histocompatibilidad (MHC), llamado Human
Leucocyte Antigen (HLA) en el hombre, es despus de los grupos sanguneos clsicos ABO, la
segunda barrera ms importante para el xito del
trasplante de rganos, clulas y tejidos.
La compatibilidad de los grupos sanguneos
ABO es esencial para el xito de los trasplantes
de rganos slidos y la identidad proporciona
mejores resultados en los trasplantes hepticos y
de clulas hematopoyticas.
El rol fundamental de las molculas de HLA
de clase I y II es la de unir pptidos antignicos, y
presentarlos a los linfocitos T. Los receptores de
antgenos de los linfocitos T (TCR, T cell receptor) slo reconocen antgenos presentados como
fragmentos peptdicos unidos a las molculas HLA
propias. Sin embargo, las molculas de HLA no
slo pueden presentar pptidos antignicos derivados de antgenos nominales al sistema inmune
como por ejemplo de virus o bacterias, sino que
ellas mismas pueden ser reconocidas como
antgenos por los receptores de las clulas T. Este
reconocimiento puede ser directo, vale decir de la
molcula HLA incompatible o ajena presente en
687
Sin ttulo-2
687
5/26/06, 10:26 AM
Figura 42-1. Representacin esquemtica del sistema HLA
riando entre un 50% y 65%. En las molculas DR

el polimorfismo radica en la cadena beta siendo la
cadena alfa esencialmente idntica. Se describen
de 9 a 18 sustituciones de aminocidos entre los
diferentes alelos, en las llamadas zonas de
hipervariabilidad correspondientes a los
aminocidos 9-13, 26-33 y 67-74. Sin embargo,
en las molculas DQ y DP el polimorfismo est
presente en ambas cadenas alfa y beta. Se han descrito 21 alelos DQA1 y 45 alelos en DQB1.
Similarmente, se han descrito 19 alelos en la cadena DP alfa1 y 93 en la DP beta1.
La subregin HLA-DR es la ms compleja
ya que el nmero de molculas expresadas vara
dependiendo del haplotipo. As, el gen DRB1 determina los antgenos HLA-DR1 a DR18, el gen
DRB3 determina el antgeno HLA-DR52, el gen
DRB4 codifica para HLA-DR53 y el DRB5 para
HLA-DR51. Los genes DRB2,6,7,8 y 9 son
pseudogenes.
Los dominios alfa 1 y 2 de la cadena pesada
de las molculas clase I y los dominios alfa 1 y
beta 1 de las molculas clase II forman una hendidura o bolsillo que une el pptido antignico y
pesada o alfa, y el nmero de alelos descritos para

el locus HLA-A es de 209, para HLA-B es de 414
y para HLAC es de 101. La cadena liviana llamada Beta 2 microglobulina, asociada a las cadenas
alfa es constante y est codificada por un gen fuera de la regin del HLA.
La determinacin de la secuencia nucleotdica de los genes clsicos de clase I (HLA-A,-B
y C) demostr que los alelos o variantes difieren
entre s en slo unos pocos aminocidos, presentando una homologa global de 75% a 99%. La
mayor variabilidad la presentan los dominios alfa
1 y alfa 2, con diferencias de 7 a 15 residuos de
los 90 que posee cada dominio, mientras que el
dominio alfa 3 que interacta con la Beta 2
microglobulina es el ms conservado. Existen
eptopos comunes a varias molculas clase I como
los supertpicos Bw4 y Bw6, y donde se demostr
que los aminocidos en las posiciones 79, 80 y 83
son crticos en la definicin de estas especificidades. .
A diferencia de los productos de clase I, la
homologa entre las cadenas alfa y beta de las diferentes molculas de clase II es moderada, va-
688
Sin ttulo-2
688
5/26/06, 10:26 AM
Figura 42-2. Representacin esquemtica de la Regin HLA-DR.
en las reuniones internacionales de trabajo llamadas

workshop, y en aquellos alelos en los que no existe
consenso se agrega una w que precede al nmero,
como por ejemplo HLA-Bw 70. En el caso de los
alelos del locus C siempre se coloca esta w para diferenciarlos de los componentes del complemento.
La identificacin de nuevos alelos por tcnicas moleculares dej en claro que la nomenclatura serolgica no era suficiente para dar cuenta de
todas las especificidades detectadas, de tal forma
que el Comit de Nomenclatura de la OMS acord designar la letra del gen seguido de un asterisco, luego la especificidad serolgica que corresponde a los dos primeros nmeros y luego dos o
ms nmeros que corresponden a la especificidad
molecular. Por ej.:HLA-B*2701 se refiere a la
primera variante descrita para HLA-B27. La nomenclatura incorporando el gen (*) indica que la
designacin se ha hecho por mtodos moleculares.
En las tablas 42-1 y 42-2 se indica algunos
ejemplos de designacin de alelos HLA clase I
(HLA-A y B) y II (HLA-DR y DQ), sealndose
en cada caso la especificidad serolgica, y en el
caso de los HLA clase II la especificidad HLA-D
que corresponde a la estructura de una alfa hlice

con una base de hoja beta plegada. Los residuos
polimrficos, es decir aquellos aminocidos que
varan entre diferentes formas allicas, son localizados en los lados de la alfa hlice del "bolsillo" o
en la hoja beta que forma el piso de este "bolsillo". El polimorfismo entre clase I y II sirve para
crear variacin en la superficie qumica del "bolsillo" que une el pptido. Otros residuos
polimrficos de la molcula MHC contactan con
el receptor para el antgeno del linfocito T.
El polimorfismo de MHC clase I y II determina la superficie qumica del "bolsillo" y es el principal determinante de la especificidad y afinidad de la
unin del pptido y el reconocimiento por clulas T.
2. NOMENCLATURA HLA
Histricamente los antgenos HLA se denominaron con un nmero que sigue a la identificacin
del locus con una letra. Ej.: HLA-A1 es el alelo llamado 1 del locus A del sistema HLA, HLA-A2 es el
alelo 2 del locus A, etc. Esta designacin se acord
689
Sin ttulo-2
689
5/26/06, 10:26 AM
Tabla 42- 1. Ejemplos de designacin de alelos HLA.

Alelo HLA
Especificidad HLA
A*0101
A*0102
A*0201
A*0202
A*0203
A*2301
A*2402
etc
B*0702
B*0703
B*0704
B*1401
B*1402
B*1501
B*1502
Equivalente previo
A1
A1
A2
A2
A203
A23(9)
A24(9)
A2.1
A2.2F
A2.3
-
B7
B703
B7
B64(14)
B65(14)
B62(15)
B75(15)
B7.2
BPOT
B7E
-
Tabla 42-2. Ejemplos de designacin de alelos DR.

Alelo HLA
Especificidad
serolgica
Especificidad HLA-D
asociada
DRA*0101
DRA*0102
DR
DRH
DRB1* 0101
DRB1* 0102
DRB1* 0103
DRB1* 0104
DRB3* 0101
DR 1
DR 1
DR103
DR1
DR52
Dw1
Dw20
Dw"BON"
Dw24
DR1-NASC
DR1 CETUS
DRB1*01New
DR3III,
DQA1*0101
DQA1*01021
DQA1*0201
Dw1
Dw2, w21, w19
Dw7, w11
DQA 1.1, 1.9

DQA 1.2, 1.19
DQA 2, 3.7
cada locus. En la prctica diaria del laboratorio

encontraremos que los individuos heterocigotos
presentan 2 antgenos HLA-A, 2 antgenos HLAB, 2 HLA-C, 2 HLA-DR, 2 HLA-DQ. Otros
antgenos de clase II, como los codificados por el
locus DP, son ms difciles de determinar ya que
no existe serologa disponible y slo son detectados con tcnicas celulares o de DNA.
Otro aspecto importante del sistema HLA, es
la existencia de alelos en diferentes loci HLA cuya
frecuencia de combinacin es mayor a la espera-
2.1. Gentica de los antgenos HLA

Es importante recordar que el sistema HLA
es un sistema gentico codominante, es decir se
expresan tanto los genes heredados de la madre
como del padre y que el alto grado de polimorfismo hace poco frecuente la existencia de individuos homocigotos.
Por lo tanto al determinar (o tipificar) en el
laboratorio las molculas o antgenos HLA encontraremos la expresin de 2 molculas distintas para
690
Sin ttulo-2
Equivalente
previo
690
5/26/06, 10:26 AM
da por la frecuencia gnica individual de cada uno

de ellos, esto es lo que se denomina desequilibrio
de ligamiento (ejemplo A1, B8, DR17)
Este patrn de segregacin ha permitido el
establecimiento de haplotipos, algunos de los cuales son caractersticos de un tipo de poblacin humana, en cambio otros se encuentran presentes en
todos los variados grupos tnicos.
El tipo de herencia mendeliana y la expresin codominante determina que entre hermanos
exista un 50% de probabilidad de ser semiidnticos
en estos antgenos HLA, es decir, compartir un
haplotipo (haplotipo son los genes heredados en
un mismo cromosoma), un 25% de probabilidad
de ser idntico (compartir los 2 haplotipos), y un
25% de probabilidad de no compartir haplotipos.
Sin embargo, la determinacin de haplotipos y
genotipos slo puede ser hecha por estudios familiares. La probabilidad de posibles haplotipos en
individuos no relacionados, debe ser realizada en
base a la frecuencia da haplotipos para el grupo
tnico al que pertenece el individuo.
Los fenotipos y genotipos deben ser expresados de acuerdo a las recomendaciones de la
O.M.S., como en los siguientes ejemplos:
de conejo se produce la muerte celular en aquellos pocillos en los que se produce reaccin
antgeno-anticuerpo. La reaccin se evidencia por
tincin con colorantes vitales o con fluorocromos
y se visualiza generalmente en microscopio de fase
invertida o de fluorescencia.
Figura 42-3. Representacin esquemtica de la tcnica de

microlinfocitotoxicidad dependiente de complemento.
Fenotipo: HLA-A2,30; B7 (Bw6), 44 (Bw4); Cw5;

DR1,4; DQ5,7
Genotipo: HLA-A2, B44(Bw4), Cw5, DR1, DQ5
/ A30, B7(Bw6), Cwx, DR4, DQ7.
Es importante recalcar algunas caractersticas de esta tcnica que son las grandes limitantes:
- Requiere de clulas con viabilidad mayor al
90% y alta pureza
- Es difcil obtener antisueros monoespecficos
contra determinadas especificidades HLA y
ms an contra subtipos.
- Reproducibilidad baja entre baterias comerciales
- Los antgenos HLA as determinados presentan reaccin cruzada entre ellos, por lo que es
aconsejable disponer de dos o ms sueros de
distinta procedencia pero con la misma especificidad para asegurar la identificacin del
antgeno HLA.
- El tipo celular en el que se determinarn los
antgenos HLA deben expresar dichos
antgenos. Es as como para la tipificacin de
molculas clase II (HLA-DR y DQ) se utiliza
preferencialmente linfocitos B los que deben
ser aislados de los linfocitos totales, ya que
representan slo un 15 a 20% de ellos. Para
esto se utiliza separacin por columnas de lana
nailon o perlas magnticas. Estas ltimas aun-
Los antgenos indicados entre parntesis corresponden a antgenos pblicos o supertpicos,

presentes en varios alelos.
3. IDENTIFICACIN DE LOS ANTGENOS

HLA
Las tcnicas utilizadas en la tipificacin HLA
son de tres tipos, bsicamente: Tcnica serolgica,
Tcnica celular y Tcnica de biologa molecular.
3.1 Tcnica serolgica. la tcnica de
microlinfocitotoxicidad dependiente de complemento, desarrollada por Terasaki fue la tcnica
estndar para tipificacin HLA durante muchos
aos. La tcnica serolgica permiti la definicin
de los antgenos HLA presentes sobre la superficie de las clulas. En esta tcnica, sueros de especificidad conocida (de origen policlonal o
monoclonal) se enfrentan con las clulas que se
quieren tipificar, y en presencia de complemento
691
Sin ttulo-2
691
5/26/06, 10:26 AM
que de mayor costo, dan mayor pureza a la

separacin celular. La tipificacin de molculas clase I (HLA-A,B y C) es ms simple ya
que se puede realizar en linfocitos totales.
3.3. Tcnicas de biologa molecular. Al igual que

en otros campos, las tcnicas moleculares han
revolucionado la tipificacin HLA. El extremado
polimorfismo de los genes del MHC y la gran
homologa entre las secuencias, se han convertido en un desafo importante para los bilogos
moleculares. En los ltimos aos, mltiples tcnicas que requieren de DNA se han desarrollado
con el fin de ser aplicadas en el laboratorio de
Histocompatibilidad, de acuerdo a la urgencia clnica de los resultados, al nmero de muestras, sensibilidad de las determinaciones y equipamiento
de cada laboratorio.
Los mtodos moleculares ofrecen mayor flexibilidad en la resolucin, reproducibilidad y exactitud comparada con la serologa tradicional. Las tcnicas basadas en la PCR (reaccin en cadena de la
polimerasa) son las ms utilizadas para la tipificacin
HLA. stas pueden ser clasificadas de acuerdo a la
metodologa que utilizan para detectar los alelos:
Algunos antgenos muestran reactividad cruzada entre ellos, lo que est dado por el hecho que
diferentes determinantes antignicos o eptopos
son compartidos entre diferentes especificidades,
esto debe ser considerado en el momento de la
interpretacin de la tipificacin serolgica
Determinantes antignicos compartidos por
muchos antgenos HLA se les denomin eptopos
pblicos (ejemplo: Bw4 presente en B51, B52,
B44, B49 etc., Bw6 presente en B35, B45, B50
etc). Existen adems eptopos compartidos por un
grupo de antgenos y stos son los llamados CREG
(cross reactive group), por ejemplo el grupo de
los antgenos B5, B35, B51, B52, B53
3.2 Tcnicas celulares. Estas tcnicas permitieron en los primeros aos determinar los antgenos
de clase II DR y DP, para los cuales no se dispona de serologa. Estos antgenos se denominaron
HLA-Dw y hoy se sabe que las especificidades de
los antgenos Dw no tienen correlacin exacta con
los antgenos detectados por serologa o por biologa molecular. La identificacin de estos eptopos
que estimulan el cultivo mixto linfocitario y que
se identifican como alelos Dw se realiza con un
panel de clulas homocigotas previamente caracterizadas para cada uno de los alelos Dw conocidos. Estas clulas irradiadas, se usan para estimular la proliferacin de los linfocitos a tipificar, los
que respondern ante alelos diferentes y no respondern ante alelos idnticos.
Los alelos HLA-DP se identifican por un
cultivo mixto secundario de linfocitos, ya que son
dbiles estimulantes en cultivos primarios. Se debe
disponer de un panel de linfocitos previamente
estimulados, los que respondern al enfrentarse a
las clulas que presenten el mismo alelo HLA-DP
que las estimul primariamente. En este caso la
reactividad celular s se correlaciona con el
polimorfismo de las molculas DP.
Como es obvio estas tcnicas son ms complejas que las serolgicas por lo que su uso est
limitado a slo algunos laboratorios con una adecuada infraestructura. Con la introduccin rutinaria de las tcnicas moleculares para la definicin
de los antgenos de clase I y II , estas tcnicas celulares han quedado prcticamente obsoletas.
Tcnicas de hibridizacin y sondas:

PCR-SSO (oligonucletidos de secuencia especfica)
PCR-Oligocaptura en sndwich
PCR- Oligocaptura de fase dual
Tcnicas basadas en electroforesis
PCR-SSP (secuencias de partidores especficos)
PCR-RFLP (polimorfismo de largos fragmentos de restriccin)
PCR-SBT (tipificacin basada en la secuencia)
Tcnicas de anlisis de conformacin de DNA
PCR-SSPC (polimorfismo conformacional de
hebra simple)
PCR-HA (anlisis de heterodplex)
PCR-UGH (anlisis de heterodplex con un
generador de heterodplex universal).
PCR-RSCA (anlisis conformacional mediado
por hebras de referencias)
Las ms utilizadas, a nivel de laboratorio clnico, son las tcnicas PCR-SSP y PCR-SSO, ya que
son capaces de entregar informacin bsica como
la serologa. Virtualmente las mayores ventajas que
presenta la tipificacin basada en PCR son la flexibilidad de la resolucin que depende del nmero
de partidores o sondas que utilice, lo que permite
tener pruebas de baja resolucin a alta resolucin y
la consistencia en la definicin, ya que siempre se
usan los mismos reactivos (primers o sondas).
692
Sin ttulo-2
692
5/26/06, 10:26 AM
Tabla 42-3. Comparacin de tcnica PCR-SSP Y PCR-SSO

Caracterstica
Partidores
Sondas de oligonucletidos
Visualizacin
Estndares internos de PCR
Resolucin
PCR-SSP
PCR-SSO
Multiples
No
Electroforesis
S
Baja y mediana
nico
Mtiples
Quimioluminiscente
No
Mediana y alta
Una ventaja del PCR-SSP sobre el PCR-SSO

es que el PCR-SSP detecta polimorfismo unido a
un cromosoma individual (cis), mientras que PCRSSO detecta polimorfismo del DNA de ambos
cromosomas (cis y trans). As el PCR-SSP tiene
un mayor poder para discriminar entre
heterocigocidad que involucre dos alelos relacionados fuertemente.
Un DNA de buena calidad es imprescindible
para la PCR-SSP y PCR-SSO. Sangre con citrato
o EDTA como anticoagulante es preferible a la
heparina que inhibe la PCR y especficamente la
PCR-SSP.
La desventaja que se atribuye a trabajar con
mtodos moleculares basados en secuencias conocidas es que variantes allicas nuevas pudieran
no ser detectadas o discriminadas de alelos conocidos. Para eliminar esta posible falla, tanto para
SSO y SSP, se utilizan un gran nmero de
partidores o sondas cuyas combinaciones pudieran, potencialmente, detectar estos nuevos alelos
y aumentar la resolucin del sistema de
tipificacin.
Mtodos utilizados a nivel de investigacin:
polimorfismo ha complicado la aplicacin de mtodos basados en DNA que permite una identificacin de las secuencias para los tipos de genes
HLA. Una alternativa de aproximacin de este
problema es el uso del anlisis conformacional del
DNA sobre la base de electroforesis en gel de
poliacrilamida no denaturante. Se utiliza principalmente para identificar mutaciones.
En resumen, podemos decir que las grandes
ventajas de la biologa molecular sobre la
serologa, dada por su sensibilidad y especificidad, es la identificacin de los verdaderos
homocigotos, la asignacin certera de los alelos y
la identificacin de subtipos, adems del uso de
pequeos volmenes de muestra para la obtencin
de DNA, lo que es muy ventajoso en muestras
peditricas.
4. ANTICUERPOS HLA
Las principales vias de sensibilizacin a los
antgenos HLA son los embarazos, transfusiones
y trasplantes, lo que se traduce en la presencia de
anticuerpos HLA. Esta sensibilizacin se pesquisa en el laboratorio a travs de la determinacin
del PRA (Panel reactive antibodies). En trasplantes no slo es importante definir el grado de sensibilizacin, sino tambin determinar la especificidad de dichos anticuerpos.
Tipificacin basada en la secuencia

Se realiza un secuenciamiento a partir de producto de PCR alelo especfico y su aplicacin est
relacionada con laboratorios de referencia por su
capacidad para detectar alelos nuevos y con laboratorios de tipificacin para trasplante alogeneico
de mdula sea.
4.1. Anticuerpos reactivos con panel

La tcnica tradicional para determinar el grado de sensibilizacin a antgenos HLA consiste
en enfrentar el suero del paciente con un panel de
linfocitos, en base a la tcnica de microlinfocitotoxicidad dependiente de complemento. Se define el porcentaje de clulas con las que dicho suero reacciona, lo que se traduce en porcentaje de
Anlisis conformacional del DNA

La comparacin de secuencias allicas ha permitido comprender que cada alelo individual contiene una nica combinacin de secuencias, cada
una de las cuales tiene su forma. Esta forma de
693
Sin ttulo-2
693
5/26/06, 10:26 AM
PRA. Por ejemplo, si el panel de clulas est constituido por 40 clulas y el suero reacciona con 20,
ese suero tiene un 50% de PRA, si reacciona con
las 40 clulas tiene un 100% de PRA y si no reacciona con ninguna tiene 0% de PRA.
Es importante en la constitucin del panel
celular considerar la distribucin normal de los
antgenos HLA de la poblacin, de tal forma que
estn representados todos estos antgenos en el
panel. Este panel puede ser formado por linfocitos
totales o linfocitos T que identificar principalmente anticuerpos anti-HLA clase I, y tambin se
puede tener panel de linfocitos B y de clulas de
leucemia linfoctica crnica (LLC). Estas clulas
se mantienen criopreservadas en nitrgeno lquido, donde mantienen su viabilidad por muchos
aos. Tambin es posible determinar el PRA utilizando clulas frescas al azar o preferentemente
de individuos previamente tipificados (con
antgenos HLA conocidos)
En esta reactividad hay que considerar la posibilidad de la presencia de autoanticuerpos, los
que darn altos porcentajes de PRA, falsos. Las
clulas de LLC, expresan antgenos HLA clase I
y II, pero prcticamente no expresan
autoantgenos, por lo que son tiles en la interpretacin de esta reactividad. Los autoanticuerpos
se identifican por la presencia de un
autocrossmatch positivo.
Desde hace algunos aos han aparecido nuevas tcnicas para la determinacin de anticuerpos
anti-HLA, entre stas destaca el uso de ELISA comerciales, algunos de los cuales son tiles como
screening para determinar presencia de anticuerpos
anti-clase I y II; detectan anticuerpos no fijadores
de complemento. Estos kits comerciales de
ELISA, utilizan antgenos HLA clase I y II
solubilizados y unidos a las microplacas y el revelado utiliza un conjugado anti IgG o anti IgM
humana unido con enzima, la que convierte un

sustrato en producto coloreado, cuando se ha producido la reaccin antgeno-anticuerpo inicial.
Ms nueva es la aparicin del uso de la
citometra de flujo en la determinacin de PRA, de
alta sensibilidad y con capacidad para detectar
anticuerpos no fijadores de complemento. Esta determinacin se realiza incubando partculas unidas
con antgenos HLA con el suero del paciente, seguido por la adicin de una anti-inmunoglobulina
humana marcada con un fluorocromo, y analizndose las muestras en el citmetro de flujo.
Estas tres tcnicas tambin pueden ser utilizadas en la determinacin de especificidad de estos
anticuerpos anti-HLA. La identificacin de la especificidad puede ser bastante compleja y de alto
costo, pero es muy til para la interpretacin de las
pruebas cruzadas entre donante y receptor
(crossmatch, XM). La determinacin de la especificidad anti-HLA muchas veces requiere contar con
un software de anlisis que permita identificar estas especificidades en el suero de los pacientes.
Se recomienda que la sensibilidad del test escogido para determinar los anticuerpos -HLA sea
similar a la de la tcnica que se utilice en las pruebas cruzadas o crossmatch.
4.2 Crossmatch
El objetivo de esta prueba es pesquisar la presencia de anticuerpos preformados contra
antgenos HLA presentes en el potencial donante.
Esta prueba consiste en enfrentar el suero del paciente con las clulas del donante potencial, lo que
se denomina alocrossmatch. La forma clsica utiliza la tcnica de microlinfocitotoxicidad dependiente de complemento, con variantes que aumentan la sensibilidad de la prueba, como lavados, aumento del tiempo de incubacin, uso de anti-
Tabla 42-4 Expresin de molculas clase I y II en distintas poblaciones celulares.

Clula
MHC-I
MHC-II
autoAntgeno
no MHC
Linfocitos T
slo activados
Linfocitos B
LLC*
LLC* : leucemia linfoctica crnica

+ : molcula presente
- : molcula ausente
694
Sin ttulo-2
694
5/26/06, 10:26 AM
inmunoglobulina humana (AHG, anti human

globulin). Las clulas utilizadas como blancos
son preferencialmente linfocitos totales o linfocitos
T y linfocitos B, a distintas temperaturas de
incubacin. La clase de anticuerpo involucrado en
la reaccin se puede definir utilizando algunos
reductores como el dithiotreitol (DTT), el cual
reduce los puentes disulfuros intermoleculares de
la inmunoglobulina M sin inactivar la inmunoglobulina G.
La presencia de autoanticuerpos se pesquisa
a travs de un autocrossmatch, en el que se enfrenta suero del receptor con sus propias clulas.
Se ha definido que los autoanticuerpos no son
nocivos para los trasplantes de rganos y son generalmente de clase IgM y por lo tanto pueden ser
reducidos con tratamiento con DTT. Hay que tener presente que pueden coexistir auto y
aloanticuerpos.
De mayor sensibilidad es el crossmatch por
citometra de flujo, que permite identificar la clase de anticuerpo de acuerdo al conjugado utilizado (anti-IgG, anti-IgM). En la prctica se usan
protocolos de dos o tres colores . En el protocolo
de dos colores las clulas y suero son incubados y
el complejo antgeno anticuerpo se revela con un
anticuerpo anti inmunoglobulina humana marcado con un fluorocromo ( FITC ), al mismo tiempo
que un anticuerpo monoclonal marcado con otro
fluorocromo ( PE) identifica clulas CD3+ ( LT )
o clulas CD 19+ ( LB )
La interpretacin de los resultados de un
crossmatch es de suma importancia, ya que determina la presencia o ausencia de anticuerpos nocivos para el trasplante. An hoy en da existe controversia frente a algunos resultados de crossmatch
y el riesgo de fracaso del trasplante.
el trasplante de los distintos rganos.

El trasplante de clulas troncales hematopoyticas es uno de los ms exigentes en cuanto a
compatibilidad HLA puesto que el desarrollo de
la enfermedad de injerto contra husped (GVHD,
graft versus host disease), es uno de los riesgos
ms altos que acompaan a este tipo de tratamiento
y est directamente ligado al grado de compatibilidad de los antgenos HLA entre el paciente y el
donante. De tal modo que la mayora de los laboratorios que apoyan a programas de trasplante de
clulas hematopoyticas han adoptado la
tipificacin por DNA. La aplicacin de alta resolucin para alelos HLA han indicado que cerca de
un 20% de los trasplantes que inicialmente no tenan incompatibilidad DR por serologa a nivel
allico presentan incompatibilidades y disminucin de la sobrevida del injerto. Otros grupos han
observado correlacin entre incompatibilidad HLA
clase I y GvHD.
En el trasplante renal la compatibilidad de
HLA si bien es importante no es esencial, de tal
modo que en estos casos la mayora de los trasplantes se realiza con algn nivel de incompatibilidad. En cambio s existe consenso absoluto de
contraindicacin del trasplante frente a un
crossmatch positivo con linfocitos T, especialmente si el suero del paciente es reciente o suero actual. Son numerosos los estudios de la compatibilidad de los diferentes loci HLA entre donante y
receptor y el efecto en el injerto renal, con resultados dismiles. Muchas de estas discordancias son
explicadas por la poblacin analizada, tipo de
mismatch considerados, tipo de tipificacin
(serolgica o molecular), efecto estudiado
(sobrevida, frecuencia de rechazos) etc. Existen
muchos factores, no inmunolgicos, que gravitan
fuertemente en la sobrevida del injerto y que deben ser considerados en los anlisis multivariables
de sobrevida .
Opelz en su estudio colaborativo de trasplante
(CTS) ha demostrado que mientras mejor es la
compatibilidad HLA entre donante y receptor,
mejor es la sobrevida del injerto renal (Opelz et
al, 1991). Este efecto es ms pronunciado en
retrasplantes renales. Las tcnicas de DNA estn
tratando de establecer la relacin que podra tener
DQ en la sobrevida del injerto, lo que ha sido dificultoso debido al fuerte desequilibrio de unin
entre DQ -DR. En el caso de HLA-DP se ha observado que su efecto est claramente relacionado en un segundo trasplante. El uso retrospectivo
de SSO para especificidades AB y RFLP para DR,
5. LABORATORIO DE HISTOCOMPATIBILIDAD Y TRASPLANTE

El mayor uso de la tipificacin HLA es en el
campo del trasplante clnico, principalmente en
trasplante de celulas hematopoyticas y trasplante renal, pero existen otras aplicaciones tiles en
la clnica diaria como por ejemplo en estudios de
asociaciones entre HLA y enfermedades, en proveer plaquetas HLA compatible, en medicina
forense y estudios de paternidad.
Los requerimientos de estudio de histocompatibilidad varan de acuerdo al rgano o tejido
que se trasplante y se discute el efecto de ellos en
695
Sin ttulo-2
695
5/26/06, 10:26 AM
ha permitido establecer una diferencia de un 15%

en la sobrevida del injerto entre aquellos trasplantes con 0 incompatibilidades AB determinados por
PCR-SSP comparados con aquellos con alguna
incompatibilidad al A B.
En trasplante de corazn se ha demostrado
que la compatibilidad HLA sera beneficiosa en
la sobrevida de este injerto, por lo tanto se recomienda efectuar crossmatch si el receptor tiene
anticuerpos HLA previos al trasplante.
En trasplante heptico no se ha demostrado
la utilidad del crossmatch ni de la compatibilidad
HLA.
En trasplante de crnea en pacientes de alto
riesgo, son tiles algunos estudios de histocompatibilidad, dndosele mayor valor a la compatibilidad de antgenos clase I que a los de clase II.
En Chile, los criterios actualmente en uso
para la seleccin de receptores de trasplante renal
de donante cadver considera la compatibilidad
ABO y crossmatch negativo como criterios de exclusin. A la compatibilidad HLA, tiempo de espera en programa y porcentaje de anticuerpos
linfocitotxicos se les asigna un puntaje que define la seleccin. A los receptores menores de 18
aos se le asigna puntaje adicional.
Actualmente las tcnicas moleculares han

permitido encontrar nuevas asociaciones de susceptibilidad o resistencia a una enfermedad, de
evolucin y pronstico de respuesta a tratamiento. Por ejemplo el 70 a 80% de los pacientes con
artritis reumatoidea agresiva, segn la poblacin
estudiada, portan uno o ms de uno de los genes
del grupo de genes DR4 de susceptibilidad:
DRB1*0401, 0404, 0405.
Sin embargo, dado que estas enfermedades
son generalmente multifactoriales, el uso de esta
determinacin tiene utilidad clnica limitada frente a un caso individual
Abortos espontneos a repeticin. Se ha identificado que en un porcentaje de abortos espontneos a repeticin en los que se han descartado causas gineco-obsttricas, existe una mayor compatibilidad en antgenos HLA entre la pareja. En
muchos de estos casos se ha tenido embarazos
exitosos despus de la sensibilizacin de la mujer
a los antgenos HLA mediante inyecciones
intravenosas o subcutneas de clulas mononucleares del esposo o de un tercero.
Medicina forense y pruebas de paternidad.
Gracias al uso de tcnicas de DNA es ahora posible la tipificacin HLA en pequeas cantidades
de clulas o tejido de distintos origen incluidos
folculos, uas etc. Esta determinacin de los
antgenos HLA que permite descartar o identificar a una persona, con un alto grado de probabilidad, utilizando el conocimiento de la frecuencia
de estos antgenos en la poblacin general est
siendo usado en casos de medicina forense y en
casos de pruebas de paternidad.
6. OTRAS APLICACIONES DE LA TIPIFICACIN HLA

Adems de la relevancia del sistema HLA en
el trasplante clnico, existe un nmero de otras
aplicaciones tiles en la clnica diaria como por
ejemplo:
Refractariedad a transfusin de plaquetas. Esta
condicin clnica definida como la incapacidad de
cierto grupo de pacientes de obtener incrementos
luego de una transfusin de plaquetas, es debido a
la presencia de anticuerpos HLA que reaccionan
y destruyen las plaquetas incompatibles transfundidas. En estos pacientes la transfusin de
plaquetas compatibles para los antgenos HLA,
tiene un efecto benfico.
Antropologa. Conocer las frecuencias de

antgenos HLA en las poblaciones indgenas ha
permitido apoyar teoras de migracin poblacional
que se dieron hace miles de aos, al comparar las
frecuencias gnicas de estas poblaciones. Con las
actuales tcnicas moleculares estos estudios han
tomado fuerza ya que es posible la tipificacin
HLA a partir de productos como el pelo, piel etc.
HLA y enfermedad. Como se describi en el captulo 8, existen numerosas enfermedades asociadas a un determinado antgeno o alelo HLA. El
ms utilizado es la determinacin del HLA-B27
que apoya el diagnstico clnico de Espondiloartritis anquilosante prcticamente en todos los grupos tnicos.
LECTURAS SUGERIDAS
A map of the Human Major Histocompatibility
Complex, Immunol Tod 18 (2), 1997.
696
Sin ttulo-2
696
5/26/06, 10:26 AM
American Society for Histocompatibility and Immunogenetics Standards for histocompatibility

testing, 1995.
Navarrete, C., Human leucocyte antigens,

Captulo 4, en Practical Transfusion Medicine,
Murphy, M.F.; Pamphilon, D. H., Blackwell Science, 2001.
Anderson, G.; Anderson, L.; Larhammar, D. et al.,

Simplifying genetic locus assignment of HLADRB genes, Immunol Tod 15 (2) : 58-61, 1994.
Nepom, G.T.; Gersuk ,V., Nepom, B.S., Prognostic implications of HLA genotyping in the early
assessment of patients with rheumatoid arthritis,
J Rheumatol 23 Sup 44: 5-9, 1996.
Bidwell, Jeffrey L., Navarrete, Cristina, Histocompatibility testing, Imperial College Press,
London, 2000.
Olerup, O., Zetterquist, H., HLA-DR typing by

PCR amplification with sequence-specific primers (PCR-SSP) in 2 hours: An alternative to serological DR typing in clinical practice including
donor-recipient matching in cadaveric transplantation, Tissue Antigens 39: 225-235, 1992.
Bodmer, J.G.; Marsh, S.G.; Albert, E.D. et al.,

Nomenclature for factors of the HLA system,
Human Immunol 43:149-164, 1995.
Brodsky, F.M.; Lem, L.; Bresnahan, P.A., Antigen processing and presentation, Tissue Antigens
47: 464-471, 1996.
Opelz, G.; Scherer S.; Mytilineos, J., Collaborative Transplant Study Analysis of HLA-DR splitspecificity matching in cadaver kidney transplantation, Transpl 63:57-59, 1997.
Buc, M., The Major Histocompatibility Complex in man, Folia Biologica (Praha) 39:223242, 1993.
Opelz, G.; Wujciak, T.; Dhler, B.; Scherer, S.;

Mytilineos, J., HLA compatibility and organ
transplant survival, Rev Immunogenetics 1:334342, 1999.
Dyer, P.A.; Jawaheer, D.; Ollier, B. et al., HLA

allele detection using molecular techniques,
Disease Markers 11 : 145-160, 1993.
Piazza, A.; Borrelli, L.; Buonomo, O. y col., Flow

cytometry cross-match and kidney graft outcome,
Transplant Proc 31: 314-316, 1999.
Dyer, P.A.; Martin, S.; Sinnott, P., Histocompatibility testing for kidney transplantation: an update, Nephrol Dial Transplant 10 Supl 1 : 2328, 1995.
Hawkins, B.R., The HLA System: An introductory review Part II Its applications in the '90s
JIFCC 4 :50-56, 1992.
Ichikawa, Y.; Hashimoto, M.; Nojima, M. et al.,
The significant effect of HLA-DRB1 matching
on long-term kidney graft outcome, Transpl 56:
1368-1371, 1993.
Mackay, I.; Rosen, F., The HLA system, N Engl
J Med 343 : 702-709, 2000.
Martin, S., Dyer, P.A., Identification and importance of MHC The definition of HLA specificities
by cytotoxicity, Transplant Immunology
2 : 108-115, 1994.
Navarrete, C.V., The HLA system in blood
transfusion, Baillieres Clinical Haematology
13 : 511-532 , 2000.
697
Sin ttulo-2
697
5/26/06, 10:26 AM
698
Sin ttulo-2
698
5/26/06, 10:26 AM

Captulo 43
CITOMETRA DE FLUJO:
PRINCIPIOS BSICOS Y APLICACIONES
Valeska Simon Z. y Mara Rosa Bono
1. Introduccin
2. Principios generales
2.1. Sistemas de fluidos
2.2. Sistema ptico
2.3. Sistema electrnico
2.4. Reactivos para citometra de flujo
3. Aplicaciones de la citometra de flujo
3.1. Determinacin de poblaciones
celulares
3.2. Fenotipificacin de neoplasias
hematolgicas
3.2.1. Fenotipificacin de leucemias
3.2.2. Fenotipificacin de linfomas
3.3. Enfermedad de Hodgkin
3.5. Anlisis de DNA y ciclo celular
3.6. Anlisis de enfermedad residual
mnima
699
Sin ttulo-2
699
5/26/06, 10:26 AM
700
Sin ttulo-2
700
5/26/06, 10:26 AM
RESUMEN
La citometra de flujo tiene aplicaciones en numerosos campos de la biologa. Una de sus
principales ventajas es la posibilidad de realizar anlisis multiparamtricos los cuales permiten
determinar la presencia de varios marcadores simultneamente, tanto en la membrana como en
el citoplasma o ncleo de las clulas, sean stas de origen animal o vegetal. La identificacin de
marcadores celulares permite evaluar al interior de una muestra heterognea la proporcin relativa
de una poblacin. Gracias a la utilizacin de computadores que poseen una gran capacidad de
memoria, es posible analizar poblaciones celulares presentes en proporciones relativamente bajas.
Existen adems citmetros capaces de aislar una determinada poblacin celular para estudios
posteriores. Finalmente, la cuantificacin de la inmunofluorescencia constituye un avance
importante para los estudios farmacolgicos. Esto permite estudiar in vitro la accin de nuevos
medicamentos y las modificaciones inducidas por los tratamientos in vivo. El desarrollo de nuevos
instrumentos cada vez ms simples en cuanto a la calibracin y alineamiento, capaces de
automatizar la adquisicin de datos y anlisis ha hecho del citmetro de flujo un instrumento
indispensable en los laboratorios clnicos.
En este captulo se describen los principios bsicos de la citometra de flujo y sus aplicaciones,
destacando las que son usadas en el laboratorio clnico.
longitudes de onda la cual puede ser registrada

por fotodetectores ubicados perpendicularmente
al fluido que las transporta. Las componentes de
las emisiones fluorescentes pueden ser separadas
utilizando filtros pticos, la informacin
transformada en pulsos elctricos por el sistema
electrnico y almacenada en la memoria de un
computador para ser posteriormente analizadas
utilizando programas computacionales especializados.
En resumen, una vez comprendidos los
principios de operacin del citmetro de flujo, ste
se transforma en una herramienta muy til y en
continuo desarrollo tanto para la investigacin
bsica como para la medicina y la industria. Por
otra parte, las posibilidades de automatizacin de
esta tecnologa permite su uso en forma rutinaria
en laboratorios clnicos y hospitales.
1. INTRODUCCIN
La historia de la citometra de flujo es
relativamente corta, sin embargo, se ha
popularizado enormemente gracias al desarrollo
de citmetros de flujo de fcil utilizacin, rpidos
y precisos en el anlisis de clulas nicas dentro
de un fluido y al desarrollo de una amplia gama
de sondas fluorescentes. Esta tecnologa permite
medir los ms diversos parmetros celulares tales
como antgenos de superficie, citoplasmticos y
nucleares, contenido de cidos nucleicos, actividad
enzimtica, flujo de calcio, potencial de
membranas y pH entre otras.
Un citmetro de flujo puede considerarse,
muy simplificadamente, como un potente
microscopio que cuenta con un sistema
transportador de partculas y un sistema de
deteccin de la luz. Las partculas suspendidas en
una solucin fisiolgica (clulas u otras entidades
biolgicas como espermios o levaduras), son
inyectadas bajo presin en el sistema de fluidos
que las transporta hacia un haz de luz focalizada
en el cual, al chocar con las clulas, se desva y es
registrado por detectores especiales. Si adems se
acoplan a las clulas anticuerpos conjugados con
un fluorocromo, estas emitirn luz de determinadas
2. PRINCIPIOS GENERALES
Los citmetros de flujo estn constituidos
fundamentalmente por tres sistemas: el sistema de
fluidos, un sistema ptico de iluminacin y
deteccin, y el sistema electrnico (figura 43-1).
701
Sin ttulo-2
701
5/26/06, 10:26 AM
Figura 43-1. Diagrama de un citmetro de flujo junto con el sistema computacional.
2.1. Sistema de fluidos

El sistema de fluidos es el encargado de
transportar las clulas o partculas contenidas en
una solucin hacia un punto interceptado por el
rayo de luz proveniente de un lser. Est
constituido por un fluido transportador, la
suspensin celular y los controles de presin, estos
ltimos necesarios para movilizarlos a ambos hacia
el punto de contacto con el haz de luz. Este sector
es denominado cmara de flujo (figura 43-2). La
suspensin celular es inyectada dentro del caudal
del fluido transportador a travs de la cmara de
flujo, hacia un estrecho orificio en el cual las
clulas adquieren una rpida aceleracin. Esto
focaliza las clulas hidrodinmicamente dentro del
fluido y las dirige hacia un orificio cuyo dimetro
es similar al de una clula. Las clulas as
focalizadas, desfilan una a una frente a la fuente
de excitacin luminosa.
La velocidad y presin con la que son
transportadas las partculas dentro de la cmara
de flujo son fundamentales en la resolucin ptica
Figura 43-2. Cmara de flujo del citmetro.
702
Sin ttulo-2
702
5/26/06, 10:26 AM
de un citmetro de flujo. Por ejemplo, al aumentar

la presin de la muestra, se incrementa la velocidad
del flujo, con lo cual aumenta tambin el dimetro
del caudal de la muestra obtenindose una menor
calidad de anlisis ptico.
la cual est acoplado el fluorocromo. La emisin

de fluorescencia tiene una intensidad de varios
rdenes de magnitud ms pequea que la luz
dirigida hacia el frente (FSC). Esto hace necesario
la utilizacin de fotodectores altamente sensibles
como son los tubos fotomultiplicadores en los
cuales un fotn excita una cascada de electrones
lo que amplifica la seal detectada.
2.2. Sistema ptico

El sistema ptico est constituido fundamentalmente por dos componentes: una fuente de
iluminacin y un sistema de deteccin de la luz.
Generalmente, se utiliza un lser como fuente
de excitacin luminosa ya que se requiere una
intensa iluminacin debido al tamao de las clulas
y a la rpida velocidad a la que estn desfilando
frente a sta. El lser produce una luz de baja
divergencia, monocromtica, unidireccional y de
alta intensidad. La luz lser abarca un amplio rango
de longitudes de onda, que representa una mezcla
de longitudes de onda especficas (lneas lser),
stas pueden ser seleccionadas por espejos que
reflejan slo la longitud de onda de inters. La luz
del lser excita los fluorocromos unidos a las
clulas, los que a su vez emiten luz detectable por
los fotomultiplicadores. El lser ms utilizado en
los citmetros de flujo es el lser de Argn que
emite luz de longitud de onda de 488 nm. Algunos
citmetros poseen ms de un lser lo que les
permite tener otras posibilidades en cuanto a longitudes de onda de excitacin.
El segundo componente del sistema est
constituido por dos tipos de detectores: un
fotodiodo y 4 fotomultiplicadores. El fotodiodo
denominado detector de forward scatter o FSC
est ubicado al lado opuesto de la fuente luminosa
y recolecta la luz dispersada frontalmente por las
partculas al pasar frente al lser. La luz detectada
es aproximadamente proporcional al tamao de
las clulas. FSC es extremadamente til para
discriminar entre diferentes tipos de clulas y
desechos celulares.
Los fotomultiplicadores recogen la luz
difundida perpendicularmente a las partculas al
pasar frente a la fuente luminosa. Este sistema
permite medir la luz dispersada lateralmente, side
scatter o SSC y la luz correspondiente a las
emisiones de fluorescencia en 3 rangos de longitud
de onda diferentes (FL1, FL2, FL3) (figura 43-3).
La luz dispersada lateralmente o SSC entrega
informacin respecto a la estructura interna y
complejidad de de las clulas y la emisin de
fluorescencia determina caractersticas particulares de las clulas dependiendo de la molcula a
Figura 43-3. Configuracin ptica de un citmetro de flujo.

Esta configuracin permite la deteccin simultnea de forward scatter (tamao), side scatter (granulosidad) y tres
colores distintos de fluorescencia.
2.3. Sistema electrnico

La produccin de electrones por los
fotodetectores es proporcional a la intensidad de
la luz que ha incidido en ellos. Esta se convierte
en una seal de voltaje que es procesada por una
serie de amplificadores que la transforman en
pulsos electrnicos. Generalmente existe una
relacin lineal entre el nmero de molculas de
fluorocromo unidas a una clula y la intensidad
703
Sin ttulo-2
703
5/26/06, 10:26 AM
certeza en subtipos, determinar el contenido de

DNA y analizar las propiedades fisiolgicas de las
clulas.
Las seales fluorescentes de cada clula son
detectadas slo unos pocos milisegundos despus
de ser excitadas con la luz. El sistema de deteccin
es muy sensible pudiendo incluso dar una seal
de fluorescencia medida. El sistema electrnico

convierte las seales de los fotodetectores en
valores digitales, los cuales se guardan para su
posterior anlisis. El sistema de coleccin de datos
consiste de un discriminador de eventos, un
convertidor anlogo-digital y una interface donde
se guardan los datos (figura 43-4).
Figura 43-4. Sistema de coleccin y anlisis de datos de un citmetro de flujo.
positiva de fluorescencia en una clula que

contiene 1000 partculas del fluorocromo cuando
se la compara con la fluorescencia basal o
autofluorescencia de las clulas.
El fluorocromo ms utilizado en microscopa
y citometra de flujo es isotiocianato de
fluorescena (FITC). Las ventajas que FITC ofrece
por sobre otros fluorocromos son: su alto
coeficiente de extincin, su eficiencia cuntica y
sus caractersticas de absorcin y emisin mxima,
ptimas para trabajar con lser de Argn y
lmparas de Mercurio. Adems, se pueden obtener
comercialmente una amplia variedad de
2.4. Reactivos para citometra de flujo

Las molculas asociadas a las clulas pueden
ser reconocidas por anticuerpos u otras protenas,
como son lectinas, hormonas, avidina o
estreptoavidina, entre otras. Tambin el DNA o
RNA son susceptibles de ser visualizados con
reactivos fluorescentes. Esto es la base de la
versatilidad de la citometra de flujo. As, aunque
las mediciones de FSC y SSC permiten identificar
tipos celulares dentro de una poblacin
heterognea, son realmente las sondas
fluorescentes las que nos permiten clasificarlas con
704
Sin ttulo-2
704
5/26/06, 10:26 AM
anticuerpos y otras sondas conjugadas con FITC.

Sin embargo, tambin presenta algunos
inconvenientes tales como la transferencia de
energa entre molculas de FITC situadas muy
prximas lo que hace disminuir la intensidad global de fluorescencia obtenida (quenching de
fluorescencia). De este modo, en el caso de utilizar
anticuerpos marcados con FITC, el resultado final en trminos de intensidad de fluorescencia no
depende slo del nmero de partculas
fluorescentes unidos a la clula, sino tambin de
otras caractersticas como la proximidad espacial
entre ellos. Si se requiere un segundo o tercer
anticuerpo para marcajes simultneos, se utilizan
fluorocromos que se exciten a la misma longitud
de onda que la fluorescena, como R-ficoeritrina
(PE) por ejemplo cuyos rangos de emisin son
distinguibles del verde de la fluorescena y por
tratarse de un fluorocromo muy sensible que no
presenta fenmenos de quenching es el elegido
en el caso de buscar antgenos presentes en alta
densidad. La mayora de los restantes fluorocromos empleados, ms que fluorocromos individuales, son grupos de dos fluorocromos unidos entre
ellos de forma natural (por ejemplo, la protena
peridilclorofila o PerCP) o artificialmente (por
ejemplo la ficoeritrina-cianina 5, PE/Ci5, conocida
tambien como Tricolor).
Utilizando sondas capaces de unirse
estequiomtricamente al DNA y RNA de las
clulas, intercalndose en la doble hebra de cidos
nucleicos como Yoduro de Propidio o Bromuro
de Etidio, por ejemplo, es posible evaluar
contenido de DNA y las diferentes fases del ciclo
celular. Tambin es posible medir simultneamente
ciclo celular y antgenos, tanto en la membrana
como en el citoplasma o ncleo de las clulas. En
la tabla 43-1 se muestran ejemplos de
fluorocromos y sus principales caractersticas.
Es importante recordar que las clulas son
entidades vivas y, en consecuencia, cualquier
tratamiento al que se les someta puede provocar
cambios en ellas. Esto hace imprescindible el
uso de controles negativos y positivos que
permitan la adecuada interpretacin de los
resultados.
y cuantificacin de los antgenos expresados tanto

en la membrana como en el citoplasma de las
clulas y en el anlisis del ciclo celular. El
estudio de las poblaciones celulares linfocitarias
identificadas por antgenos de diferenciacin,
forman parte actualmente de los exmenes de
rutina para la evaluacin del estado
inmunolgico de un paciente. En estos estudios
se utiliza una nomenclatura estandarizada que
categoriza los anticuerpos de acuerdo al
antgeno que stos reconocen. Cada categora
se donomina grupo de diferenciacin o CD
("cluster of differentiation") seguida por un
nmero y en ocaciones por una letra, por
ejemplo: CD1, CD1a, CD2, etc. (ver captulo
46). Las aplicaciones ms corrientes estn
destinadas a caracterizar las anomalas
cualitativas y cuantitativas de las
subpoblaciones linfocitarias en las deficiencias
inmunitarias congnitas o adquiridas, en la
vigilancia de los trasplantes de rganos o de
mdula sea y en el estudio del fenotipo de un
clon neoplsico en las proliferaciones linfoides
malignas. En este ltimo campo, la
fenotipificacin por citometra de flujo ha
aportado nuevos criterios de clasificacin,
pronstico, eleccin de la terapia y seguimiento
del tratamiento para evaluar remisin y recada
precoz. La citometra de flujo permite, adems,
estudiar componentes sricos tales como
complejos inmunes circulantes. Si se poseen
anticuerpos contra un determinado virus, es
posible por lo dems determinar qu poblaciones
celulares son infectadas por el virus
Las aplicaciones de la citometra de flujo son
inmumerables y slo se revisarn a continuacin
con ms detalle algunas de las apliciones clnicas
de mayor inters.
3.1. Determinacin de poblaciones celulares
La disponibilidad de una enorme variedad de
anticuerpos monoclonales ha difundido el uso de
la citometra de flujo en investigacin bsica y
clnica. El diseo de instrumentos en los cuales se
ha automatizado la alineacin y calibracin del
citmetro, unido al permanente desarrollo de
programas computacionales automatizados para
la adquisicin y anlisis de datos, ha permitido la
expansin de esta metodologa de trabajo hacia
los laboratorios clnicos los que pueden obtener
resultados rpidos, objetivos y altamente
reproducibles.
3. APLICACIONES DE LA CITOMETRA
DE FLUJO
Las aplicaciones actuales de la citometra de
flujo reposan esencialmente en la identificacin
705
Sin ttulo-2
705
5/26/06, 10:26 AM
Tabla 43-1. Caractersticas de los principales fluorocromos utilizados en citometra de flujo.

Fluorescencia
Marcaje
Excitacin
Mxima (nm)
Emisin
Mxima (nm)
Tipo de
lser
Fluoresceinisothiocyanate
protenas
495
520
488Ar
FITC
R-Phycoerythrin
protenas
565,545,480
575
488ar
R-PE
Texas Red
protenas
595
620
595Dye
R6G
TX
Tamdem PE-TX
protenas
565,545,480
613
488Ar
Allophycocyanin
protenas
650
660
632HeNe
595
Tamdem PE-Cy5
protenas
565,545,480
670
488Ar
Perchlorophyll
protenas
470
680
488Ar
PerCP
Propidium iodide
cidos
nuclicos
495,342
639
488Ar
PI
Ethidium bromide
cidos
nuclicos
493,320
637
488Ar
EB
Acridine orange
cidos
nuclicos
503
530(DNA)
640(ARN)
488Ar
AO
Mithramycin
cidos
nuclicos
445
569
458Ar
Chromomycin A3
cidos
nuclicos
430
580
457Ar
Hoechst 33342
cidos
nuclicos
395
450
UV a oK
H342
4',6-diamidino-2phenylindole
Pyronin Y
cidos
nuclicos
cidos
nuclicos
372
456
UV A o K
DAPI
545
656
530 K
PY
514 A
En el anlisis de subpoblaciones de linfocitos,

provenientes tanto de sangre perifrica como de
mdula sea, ha resultado fundamental la
utilizacin simultnea de anticuerpos conjugados
con fluorocromos diferentes, siendo de gran
utilidad la mezcla de anticuerpos CD45 y CD14
marcados con FITC y PE, que se unen en forma
diferencial a las distintas poblaciones de
leucocitos, permitiendo identificarlas, cuantificarlas y analizarlas separadamente (figura 435). La produccin reciente de anticuerpos
monoclonales conjugados con PerCP permite
706
APC
realizar marcajes en tres colores simultneamente

al utilizarlos junto con anticuerpos marcados con
FITC y PE. Existen adems, citmetros con ms
de un lser y otros dispositivos detectores de luz
que permiten utilizar 4 fluorocromos distintos
simultneamente (FL1, FL2, FL3 y FL4). De esta
manera es posible obtener rpidamente mucha
informacin con una cantidad mnima de muestra.
La co-expresin de molculas de superficie o
intracelulares en una misma clula permite
diferenciar con certeza distintas subpoblaciones
(figura 43-6).
706
Sin ttulo-2
Abreviatura
5/26/06, 10:26 AM
Figura 43-5. Estrategia de anlisis simultneo de subpoblaciones celulares en una muestra de sangre total lisada. Las
distintas poblaciones celulares son claramente distinguibles por su tamao, granulosidad y expresin diferencial de antgenos de
superficie, detectados con anticuerpos monoclonales dirigidos contra CD45 y CD14.
Figura 43-6. Anlisis simultneo de poblaciones linfocitarias en sangre total lisada de un paciente con SIDA. En A se
muestra el grfico de FSC (tamao) versus SSC (granulosidad) de una muestra de sangre total lisada. En ste se distinguen
claramente linfocitos, monocitos y granulocitos. En B, C y D se analiza la expresin de CD3, CD4 y CD8 de la poblacin
correspondiente a los linfocitos.
707
Sin ttulo-2
707
5/26/06, 10:26 AM
Los protocolos de marcaje de clulas

leucocitarias sanguneas y de mdula sea se han
visto favorecidos por el desarrollo de reactivos que
permiten eliminar fcilmente los glbulos rojos,
poblacin mayoritaria en la sangre.
La caracterizacin de subpoblaciones
linfocitarias es una herramienta de gran utilidad
en el seguimiento de la progresin de cuadros de
inmunodeficiencia. Esto permite detectar con alta
sensibilidad subpoblaciones poco representadas
dentro de la poblacin total, como son los
linfocitos T CD4+ en el SIDA (Sndrome de
Inmunodeficiencia Adquirida).
El anlisis de glbulos rojos y plaquetas no
requiere purificacin ya que la contaminacin por
el resto de las clulas leucocitarias no es importante
(menos de 0,1%) y pueden ser fcilmente
eliminadas en la etapa de anlisis.
que deben ser considerados, en conjunto, para

establecer acertadamente un diagnstico y
tratamiento apropiado en cada caso.
3.2.1 Fenotipificacin de leucemias
Las leucemias agudas (LA) son expansiones
clonales de clulas precursoras hematopoyticas
(blastos) en la mdula sea con algunas
caractersticas en comn como son una baja
respuesta a mecanismos regulatorios y una
capacidad de diferenciacin disminuida. Su
expansin se realiza, generalmente, a expensas de
los elementos normales de la mdula sea.
Un proceso se clasifica como maligno por la
presencia de una hematopoyesis disminuida y un
exceso de blastos. Las subclasificaciones se
realizan considerando que los blastos presentes
mantienen algunas de las caractersticas de sus
contrapartes normales.
En el anlisis de leucemias se deben tener en
cuenta el porcentaje de clulas con morfologa de
blastos determinado por histoqumica y/o
citoqumica y el linaje celular de los blastos
determinado por citometra de flujo. Las leucemias
se clasifican en agudas o crnicas dependiendo
del grado de madurez de los blastos. Las clulas
linfoides o mieloides pueden estar involucradas
en la leucemia, incluso simultneamente. Con
menos frecuencia se observan leucemias con
compromiso de megacariocitos o eritrocitos.
Es importante resaltar que no existen
marcadores especficos para leucemia y que lo que
se realiza es la interpretacin de un conjunto de
marcadores celulares comparado con la ontogenia
normal.
3.2. Fenotipificacin de neoplasias hematolgicas

En general la aplicacin de la citometra de
flujo en el diagnstico de patologas neoplsicas
se ha incrementado considerablemente en los
ltimos aos debido a la reproducibilidad de los
datos obtenidos. Esta informacin permite
determinar sin ambigedad las clulas comprometidas en varias neoplasias como es el caso de
las leucemias agudas, linfomas y mielomas entre
otras.
En estos estudios, la informacin del nmero
de clulas neoplsicas presentes, por lo general,
es irrelevante, siendo ms importante determinar
si estas clulas estn o no presentes y a qu tipo
de neoplasia representan. El anlisis multiparamtrico que considera la fluorescencia, el tamao
y la granulosidad de las clulas permite obtener
una excelente informacin de la heterogeneidad
celular (figura 43-7).
Las clulas derivadas de la sangre, mdula
sea o de rganos linfoides son relativamente
fciles de aislar para analizarlas por citometra de
flujo. Sin embargo, cuando se trata de estudiar
clulas provenientes de tejidos u rganos es
recomendable realizar cortes histolgicos antes y
durante la disgregacin del tejido para asegurar
una adecuada representacin de los diversos tipos
celulares que conforman la muestra. La correlacin
del estado clnico del paciente, morfologa celular,
citoqumica e histoqumica, el inmunofenotipo
obtenido por citometra de flujo, el contenido de
DNA y anlisis del ciclo celular son antecedentes
Leucemia aguda linfoblstica (LLA). Es la

leucemia ms frecuente en nios menores de 15
aos, con una incidencia mayor entre los 3 y 5 aos,
sin embargo, tambin se presenta en nios menores
de 1 ao y con menor frecuencia en adultos jvenes.
El pronstico es ms favorable en nios entre 1 y
10 aos de edad que en adultos. La mayor parte
de las LLA son proliferaciones de clulas B (entre
75 a 85%) variando en el grado de maduracin
que presentan las clulas. El fenotipo ms comn
de las LLA de clulas B es la LLA comn o
cALLa: expresan CD10, CD19, CD20, TdT
(transferasa deoxiterminal), HLA-DR y en
ocasiones CD34. No expresan inmunoglobulinas
de superficie ni citoplasmticas. Este es el fenotipo
con mejor pronstico y representa aproximada-
708
Sin ttulo-2
708
5/26/06, 10:26 AM
Figura 43-7. Estrategia de anlisis para una inmunofenotipificacin. La muestra corresponde a una biopsia de ganglio fresca.
La poblacin a analizar se define en base al tamao y granulosidad (A). En (B) se muestra el control negativo utilizando un
anticuerpo irrelevante. En (C) se muestra la expresin del marcador de activacin celular HLA-DR. En (D) y (G) se analiza la
expresin de antgenos especficos de linfocitos B (CD19 y CD20). Puesto que se observa expresin de marcadores de linfocitos
B, se analiza la expresin del antgeno CD10 (F). En (E,K y L) aparece la expresin de marcadores de linfocitos T (CD5, CD3,
CD4 y CD8). Luego se analiza la expresin de cadenas livianas de inmunoglobulinas ( y ) (H, Y y J). El resultado del anlisis
muestra expresin clonal de la cadena liviana kappa en las clulas B, lo cual es caracterstico de un proceso neoplsico.
mente un 50% de los casos. Le siguen en

frecuencia (30% de los casos) la LLA que expresa
los mismos antgenos ya descritos a excepcin de
CD20. Con menor frecuencia, las LLA expresan
slo CD19 o, en otros casos, expresan CD19,
CD20, HLA-DR, CD10 e inmunoglobulinas de
superficie o citoplasmticas. La enzima TdT puede
estar presente tanto en LLA de clulas B como T.
La expresin de HLA-DR es de mayor intensidad
en clulas B ms inmaduras. La leucemia de tipo
Burkitt es la de peor pronstico y presenta clulas

morfolgicamente distintas a las de una LLA de
clulas B. Los blastos se caracterizan por presentar
vacuolas en el citoplasma que se tien con Oil Red
O, tienen un fenotipo de clulas B maduras con
expresin de inmunoglobulinas en la membrana
celular. Las leucemias de clulas T comprenden
aproximadamente el 15-25% de los casos siendo,
por lo general, bastante agresivas y con menor
respuesta al tratamiento. El fenotipo de esta
709
Sin ttulo-2
709
5/26/06, 10:26 AM
patologa es ms complejo que el de LLA de

clulas B. Esto se debe a que no existen
marcadores de clonalidad ni marcadores
especficos frecuentes para las etapas tempranas
de maduracin de linfocitos T. El marcador ms
til es CD7, que se expresa en aproximadamente
95% de las LLA de clulas T. Sin embargo, CD7
tambin se expresa en los linfocitos T normales
en forma aberrante en las LLA de clulas B y en
un porcentaje ms alto (25%) en las leucemias de
estirpe mieloide. Otros marcadores para LLA de
clulas T son CD1a (excepto en el timo ya que los
timocitos expresan normalmente CD1a), CD3,
CD2 y CD5. Estos dos ltimos estn presentes,
con alta frecuencia en este tipo de leucemia. HLADR es frecuentemente negativo en LLA de clulas
T y en ausencia de otros marcadores de linfocitos
T, la presencia de CD3 citoplasmtico es definitiva
para asignar este linaje. En la LLA de clulas T se
busca ms bien expresin aberrante (por ejemplo,
coexpresin de CD4 y CD8) o ausencia de uno o
ms marcadores clsicos de linfocitos T.
diferenciar los monocitos normales, de los blastos

o de los precursores de monocitos. CD11c en
conjunto con CD14 permiten diferenciar entre leucemia mielomonoctica y leucemia aguda
monoctica ya que, por lo general, no se expresan
en otras formas de LLA o LMA. La coexpresin
del antgeno CD15 es muy til ya que ste se va
adquiriendo durante la maduracin de la serie
mieloide granuloctica, a la vez que disminuyen
la expresin de CD45.
Leucemia linfoctica crnica (LLC). Esta es una
patologa asociada a adultos mayores, y ocurre con
mayor frecuencia en hombres que en mujeres. Esta
enfermedad, que involucra la mdula sea, los
ndulos linfticos y/o el bazo, es una expansin
clonal de linfocitos inmunolgicamente
competentes. La enfermedad es prcticamente
indistinguible de un linfoma bien diferenciado y
es denominada LLC si la mdula sea est
extensamente comprometida. Si la enfermedad se
inicia en los ndulos linfticos o en el bazo se
utiliza el trmino linfoma bien diferenciado o
linfoma de linfocitos pequeos. Morfolgicamente, estas clulas son muy similares a los
linfocitos normales, de all la relevancia del
anlisis por citometra de flujo en este tipo de
patologa. La mayor parte de las LLC estn
compuestas por clulas B monoclonales, las que
presentan una expresin monotpica de cadenas
livianas de inmunoglobulinas y coexpresin de
CD5, CD20 y CD19.
Leucemias agudas no-linfocticas (LANL). Este

grupo de patologas est conformado por las
leucemias agudas mieloides (LMA), eritrocticas
y megacariocticas. La fenotipificacin de estas
leucemias ha sido til para diferenciarlas de las
LLA ms que para clasificarlas en subtipos de
LMA ya que, en general, desde el punto de vista
del tratamiento y diagnstico, no establece
diferencias importantes. Las LMA son ms
fecuentes en adultos entre los 15 y 40 aos.
Solamente alrededor del 20% de las leucemias en
nios son LMA. Una caracterstica particular de
los blastos LMA es su homogeneidad en tamao
y granulosidad dentro de la heterogeneidad habitual de las clulas de la mdula sea. Los
marcadores celulares CD13, CD14, CD33 y CD34
nos indican si las clulas son de linaje mieloide y
el grado de diferenciacin monoctico. Aunque
HLA-DR no es un marcador mieloide especfico,
es til para diferenciar las leucemias promielocticas en las que HLA-DR est generalmente
ausente o tiene una expresin dbil. Por otra parte
la ausencia de CD45 en conjunto con la presencia
de otros marcadores como CD71 o glicoforina A
es un indicio de leucemia de linaje eritroide. Si
adems estn presentes marcadores de plaquetas
como CD61 y/o CD41a esto indica una leucemia
megacarioblstica. La expresin de CD14 est
virtualmente restringida a los monocitos ms
maduros, por esto, es de gran ayuda para
Leucemia mieloide crnica (LMC). Es una

patologa de clulas troncales multipotenciales y
puede, por lo mismo, involucrar ms de un linaje
celular. La inmunofenotipificacin de esta
enfermedad no es frecuente, excepto en los casos
de crisis blstica que es la forma progresiva y
agresiva de esta patologa. En este caso, el fenotipo
se utiliza para definir el tipo celular involucrado
en la proliferacin blstica.
3.2.2 Fenotipificacin de linfomas
Los linfomas son tumores del sistema inmune
que se presentan principalmente en los ndulos
linfticos, bazo, mdula sea, en tejidos linfoides
asociados a mucosas y, con menor frecuencia en
la piel u otros rganos. Ocasionalmente los blastos
pueden detectarse en gran cantidad en la
circulacin sangunea.
El mtodo bsico en el diagnstico y
710
Sin ttulo-2
710
5/26/06, 10:26 AM
clasificacin de los linfomas es la microscopa.

En los ltimos aos, se han desarrollado gran
variedad de esquemas histolgicos para la
clasificacin de estos tumores. La clasificacin del
"Intenational Lymphoma Study Group" presentada
en el ao 1994 no categoriza estos tumores
clnicamente como de alto o bajo grado de
malignidad (actualmente se reconoce que cada
entidad tiene sus propias caractersticas
individuales), sino que las agrupa dependiendo
del tipo celular involucrado en la neoplasia,
basndose en las caractersticas antignicas,
citogenticas, morfolgicas y la observacin
clnica.
De este modo, en el caso de los linfomas noHodgkins, existen 10 que son de origen linfoide
B y stas son la leucemia/linfoma linfoblstica
de clulas B precursoras y las neoplasias de clulas
B perifricas llamadas: leucemia linfoctica
crnica de clulas B, inmunocitoma, linfoma del
manto, linfoma folicular, linfoma MALT, leucemia de clulas velludas, plasmocitoma, linfoma
B difuso de clulas grandes y linfoma de Burkitt.
Otra categora importante, aparte de la
enfermedad de Hodgkin, son las neoplasias que
tienen su origen en clulas T y clulas "Natural
Killer" (NK). En este grupo se encuentran la leucemia/linfoma T linfoblstico de clulas
precursoras y las neoplasias de clulas T perifricas
y de clulas NK llamadas: leucemia linfoctica
crnica de clulas T, leucemia de linfocitos grandes
granulares, micosis fungoide / sndrome de Szary,
linfomas de clulas T perifricas inespecficos,
linfoma angioinmunoblstico de clulas T, linfoma
angiocntrico, linfoma intestinal de clulas T, leucemia/linfoma de clulas T del adulto y linfoma
de clulas anaplsticas grandes.
No es la intencin de este captulo hacer un
estudio extenso de cada clasificacin por lo que
nos limitaremos a resaltar las caractersticas
inmunofenotpicas ms relevantes en el estudio
de estas neoplasias por citometra de flujo.
marcador sea negativo. Expresa otros marcadores de

clulas B como son CD19, CD20, CD79a y CD22.
Por lo general, muestra trisoma 12 o anormalidades
13q en algunos casos.
Leucemia/linfoma linfoblstico B. Se presenta tpicamente como una leucemia. Aunque el compromiso de la mdula sea y la sangre es muy comn,
unos pocos casos se localizan como tumores slidos, usualmente en los ndulos linfticos. La enfermedad, aunque es agresiva, puede ser curada, particularmente cuando se trata de nios. Tpicamente
expresa TdT, CD10 (aunque a veces est ausente),
puede expresar cadenas pesadas de inmunoglobulina
en el citoplasma, pero es ms frecuente que este
Linfoma folicular. Esta enfemedad es de progresin lenta, pero esencialmente incurable. Las clulas presentan los marcadores de clulas B CD19,
CD20, CD22 y CD79a. Son CD5 y CD23 negativas y CD10 positivas. Presentan expresin
clonal de cadenas livianas de inmunoglobulina
(kappa con mayor frecuencia). La traslocacin
(14;18) est presente en dos tercios de los casos
acompaada de la expresin de la protena BCL2, sin embargo, los casos que carecen de esta
Inmunocitoma (linfoma linfoplasmoctico). Esta

neoplasia de origen B tiene tendencia a diferenciarse a un estado de clulas plasmticas. Es posible detectar IgM en el citoplasma o como inclusiones intranucleares (cuerpos de Dutcher) en las
clulas de aspecto plasmoctico. Si la IgM tambin aparece en el suero como paraprotena, la
enfermedad corresponde a una Macroglobulinemia
de Waldenstrms. La fuerte positividad para IgM
citoplasmtica y de superficie, en conjunto con la
ausencia de CD5, puede ayudar a distinguir esta
enfermedad de las neoplasias linfocticas pequeas. El resto de los marcadores de clulas B, CD19,
CD20, CD22 y CD79a son positivos. CD10 es
negativo. Es una enfermedad de adultos que suele
seguir un curso indolente aunque puede transformarse en un linfoma de clulas grandes ms agresivo.
Linfoma de clulas del manto. Esta enfermedad
se presenta, por lo general, con linfoadenopatas,
pero puede encontrarse en sitios extranodales,
principalmente en el tracto gastrointestinal. Las
clulas son, en la mayora parte de los casos, pequeas y de alto SSC debido a sus ncleos irregulares. Presentan el marcador CD5 y carecen de
CD23. Existe asociacin con una anormalidad
citogentica caracterstica, la traslocacin recproca (t) (11;14) lo que determina la produccin de
la ciclina D1, la cual puede ser identificada por
citometra de flujo. Expresan tambin los marcadores de clulas B CD19, CD20 CD22 y CD79a,
y tienen expresin clonal de cadenas livianas de
inmunoglobulina, con mayor frecuencia cadenas
lambda. CD10 es frecuentemente negativo. Esta
enfermedad se presenta preferentemente en adultos, siguiendo un curso moderadamente agresivo.
711
Sin ttulo-2
711
5/26/06, 10:26 AM
traslocacin tambin expresan la protena BCL-2

y presentan las mismas caractersticas clnicas de
aquellos que s la tienen.
casos y rearreglamientos (40%) y/o mutacin

(75%) de BCL-6. Es una enfermedad tanto de
nios como de adultos. Sigue un curso agresivo,
pero puede ser curable.
Linfoma de clulas B marginales (tipo MALT).

Este linfoma es tambin conocido como linfoma
de clulas pequeas. Se origina en el ducto
gastrointestinal o en otros sitios extranodales, generalmente en el tejido epitelial glandular. Este
linfoma tiende a mantenerse localizado, por lo
que es en general de buen pronstico, aunque puede transformarse en un linfoma B de clulas grandes. Estas clulas tienen el fenotipo de clulas B
con expresin de CD19, CD20, CD22, CD79a e
inmunoglobulinas de superficie. No expresan
CD5, CD10 ni CD23. El perfil citogentico suele
presentar t (11;18) en muchos casos y trisoma 3
en algunos. Este mismo fenotipo se encuentra en
el linfoma B de la zona marginal del bazo que representa una forma rara de leucemia crnica conocida como linfoma esplnico de linfocitos velludos y se diferencia del linfoma tipo MALT en
la alta incidencia de enfermedad en la mdula sea.
Linfoma de Burkitt. Este tipo de linfoma se presenta con mayor frecuencia en nios que en adultos. Es una enfermedad agresiva pero responde a
una terapia intensa, especialmente en nios. El
fenotipo es de clulas B perifricas: CD19, CD20,
CD22, CD79a e IgM de superficie positivas.
CD10 es siempre positivo. No expresa CD5 ni
CD23. El marcador Ki67 es positivo en 85% de
los casos. La citogentica muestra t(2;8), t(8;14)
o t(8;22), rearreglamiento de c-Myc en el
cromosoma 8 y en el gen para cadenas pesadas de
las inmunoglobulinas. Con menos frecuencia estn involucradas las cadenas livianas.
Leucemia/linfoma T linfoblstico de clulas
precursoras. Esta leucemia es morfolgicamente
indistinguible de las neoplasias de origen B. Se
presenta, por lo general, como leucemia aguda
pero ocasionalmente puede dar origen a tumores
en los ndulos linfticos o timo. Presenta
positividad para antgenos de lnea T, aunque debido a su inmadurez, el CD3 puede ser
citoplasmtico, es positivo para TdT, CD7, CD4
o CD8. CD1a es frecuentemente positivo.
Leucemia de clulas velludas o tricoleucemia.

Es una leucemia de clulas B, las que expresan
todos los marcadores B adems de CD25, CD103
y CD11c. No expresan CD5, CD10 ni CD23. Es,
por lo general, una enfermedad de adultos que sigue un curso indolente pudiendo presentar
esplenomegalia y pancitopenia.
Leucemia linfoctica crnica de clulas T. Esta

patologa involucra la sangre perifrica y se asemeja a la de tipo B en la morfologa. Cuando las
clulas presentan nuclelos ms prominentes y
citoplasma algo ms abundante, se clasifican como
leucemia prolinfoctica de clulas T, siendo menos frecuente y de peor pronstico. Estos linfomas
expresan marcadores de clulas T CD2, CD3,
CD5, CD4 con ms frecuencia que CD8 y siempre son CD7 positivas. La citogentica muestra
trisoma 8q e Inv 14(q11;32) en el 75% de los casos . Es una enfermedad de adultos y ms agresiva que su equivalente de tipo B.
Plasmocitoma / Mieloma de clulas plasmticas.

Las clulas plasmticas son caractersticas del
Mieloma mltiple o plasmocitoma. Por lo general
las clulas no expresan los marcadores B CD19,
CD20 y CD22, pero son positivas para
inmunoglobinas citoplasmticas (clonal para una
cadena liviana) acompaada en aproximadamente un 50% de los casos de CD79a. Expresan CD38,
CD138 y, en un elevado nmero de casos CD56.
Los pacientes son en su mayora adultos (mayores de 50 aos) que responden inicialmente al tratamiento, pero que recaen luego de un perodo de
remisin variable.
Leucemia linfoctica de clulas granulares grandes. Se subdividen fenotpicamente en aquellas

que se originan de clulas T y aquellas que probablemente derivan de clulas NK. La primera, se
presenta como una enfermedad de curso indolente y los pacientes suelen ser asintomticos. El pronstico es por lo general bueno. En cambio en el
segundo tipo, de clulas NK, los pacientes son de
menor edad (40 aos como promedio) y los snto-
Linfoma difuso de clulas B grandes. Es uno de

los linfomas no-Hodgkin ms comunes. Expresan
marcadores B (CD19, CD20, CD22, CD79a) y en
algunos casos CD5 y CD10. Expresan las
inmunoglobulinas con ms frecuencia en la superficie que en el citoplasma. La citogentica
muestra t (14;18) en aproximadamente 30% de los
712
Sin ttulo-2
712
5/26/06, 10:26 AM
mas son ms agudos pudiendio presentar

esplenomegalia masiva, compromiso del tracto
gastrointestinal y coagulopata. Esta patologa tiende a seguir un curso ms agresivo. Fenotpicamente ambas son similares, presentando antgenos
comunes como CD2 y CD56; CD3 es positivo en
el caso de clulas T, CD8 puede ser positivo en
ambas, CD16 y CD57 son positivos en el caso de
ser clulas NK.
virus Epstein Barr est siempre presente en las clulas neoplsicas. Estas clulas se originan, ms
probablemente, en clulas NK que expresan CD2
y CD56. Sin embargo, tambin se puede detectar
marcadores de clulas T como CD5, CD7, CD4 o
CD8. Por lo general se encuentra CD3 citoplasmtico.
Linfoma intestinal de clulas T. Es una enfermedad de adutos que sigue un curso agresivo. Por
lo general, los pacientes presentan una historia
larga de enfermedad celaca, mientras que en otros
se presenta directamente como linfoma. El pronstico es malo debido a que esta neoplasia suele
ser multifocal. Las clulas presentan fenotipo de
clulas T. Son CD3 y CD7 positivas. CD8 es con
frecuencia positivo. En muchos casos las clulas
expresan la integrina CD103.
Micosis fungoide/ Sndrome de Szari. La Micosis fungoide es un linfoma de clulas T que se

ve con ms frecuencia en la piel y se define como
sndrome de Szari cuando las clulas se detectan
tambin en la circulacin. Si la enfermedad progresa, puede involucrar los ganglios linfticos.
Esta enfermedad sigue un curso variable pudiendo extenderse y transformarse en tumores de clulas grandes. Estas clulas expresan antgenos de
clulas T: CD2, CD3, CD5 y CD4. Son CD7, CD8
y CD25 negativos. En muchos casos CD30 es
positivo, lo que es til para diferenciar esta patologa de una dermatitis.
Leucemia/linfoma de clulas T del adulto. Esta

patologa se asocia a la infeccin con el retrovirus
HTLV-1. Los ndulos linfticos son reemplazados difusamente por clulas T neoplsicas y en algunos casos stos se detectan en la sangre perifrica.
La enfermedad se asocia con lesiones seas e
hipercalcemia. Sigue un curso por lo general agresivo, pudiendo ser, en escasas ocasiones, indolente. El fenotipo es de clulas T CD3, CD2, CD4,
CD5 y CD25 positivo. CD7 es negativo.
Linfoma perifrico inespecfico de clulas T.

Tpicamente, esta enfermedad contiene una mezcla de clulas neoplsicas pequeas y grandes, con
una marcada presencia de otros tipos celulares no
neoplsicos, incluido macrfagos y eosinfilos. Es
una enfermedad de adultos, de curso agresivo pero
potencialmente curable. Presenta una variedad de
patrones antignicos de clulas T siendo CD4
positivo con ms frecuencia que CD8. CD3 puede ser positivo o negativo. El resto de los antgenos
de clulas T se presentan en forma variable.
Linfoma anaplstico de clulas grandes. Las

clulas expresan el antgeno CD30 o Ki-1, un
antgeno presente en las clulas de Reed-Sternberg
y suelen ser ms grandes que en otros linfomas.
En algunos casos es dificil hacer diagnstico diferencial con linfoma de Hodgkin. Tpicamente,
el tumor invade los ganglios linfticos y en otros,
se confina en la piel. Con poca frecuencia expresan marcadores de linfocitos, pero cuando los hay
stos indican un origen de clulas T.
Linfoma angioinmunoblstico de clulas T. Es

una enfermedad sistmica con linfoadenopata,
fiebre, prdida de peso y rash cutneo. Presenta
hipergammaglobulinemia policlonal. Es moderadamente agresiva y se consiera un linfoma de alto
grado. Aunque las clulas presentan fenotipo de
clulas T con preferencia CD4 positivas, su caracterstica ms relevante es la presencia de otros tipos celulares como histiocitos, clulas plasmticas,
eosinfilos y clulas dendrticas foliculares. El diagnstico es ms bien morfolgico por presentar una
arquitectura particular.
3.3. Enfermedad de Hodgkin

La utilidad de la citometra de flujo en el diagnstico de esta patologa es escasa ya que se utilizan, con mayor xito, criterios morfolgicos. La
clasificacin es compleja y est mejor definida en
el campo de los patlogos, por lo que no ser descrita en esta ocasin.
Linfoma angiocntrico. Esta patologa se presenta tanto en nios como en adultos. Involucra zonas extranodales como nariz, paladar y piel. El
curso clnico vara de indolente hasta agresivo. El

La citometra de flujo tiene aplicacin en las
713
Sin ttulo-2
713
5/26/06, 10:26 AM
diferentes etapas del trasplante de mdula sea.

Contribuye, en conjunto con otras tcnicas, a la
evaluacin de la enfermedad residual en el
momento de la decisin terapetica as como
tambin en la evaluacin de las clulas
progenitoras CD34+. Las clulas progenitoras
pueden definirse como clulas que tienen la
capacidad de duplicarse y diferenciarse en una
amplia variedad de lineas hematopoyticas que,
al ser trasplantadas en un receptor aplsico
(pancitopenia resultante tanto de una enfermedad
como de una terapia mielosupresora) son capaces
de reconstituir la mdula sea del paciente. Se
considera que el nmero de clulas CD34+
trasplantadas se correlaciona con el xito y rapidez
de la reconstitucin lo cual contribuye a disminuir
el perodo de tiempo en que el paciente se
encuentra inmunosuprimido o bajo los efectos de
una quimioterapia de altas dosis.
La movilizacin de clulas CD34+ desde la
mdula sea hacia la sangre perifrica con factores
de crecimiento de colonias (en pacientes cuya
mdula sea no se encuentra comprometida), ha
permitido recolectar clulas progenitoras desde
la mdula sea o por leucoafresis, evaluarlas y
criopreservarlas para ser utilizadas en trasplantes
alognicos o autotrasplantes de pacientes
sometidos a quimiorradioterapia. Los protocolos
utilizados para incrementar los niveles de clulas
progenitoras en la sangre son muy variados, los
mecanismos de este proceso de movilizacin no
se conocen y la caracterizacin biolgica de las
clulas movilizadas es limitada. Ha sido
demostrado que los trasplantes realizados con
clulas mononucleares enriquecidas en clulas
progenitotras CD34+ permiten la reconstitucin
de la hematopoyesis. En estos casos, es de gran
importancia cuantificar la poblacin responsable
de la reconstitucin rpida y sostenida de la
hematopoyesis del receptor del trasplante. La
medicin de las clulas CD34+ por citometra de
flujo provee de un mtodo rpido y reproducible
para cuantificar esta poblacin. Para esto se realiza
doble marcaje utilizando anticuerpos dirigidos
contra CD45 y CD34 y se utiliza un anlisis
multiparamtrico de la muestra considerando las
caractersticas de tamao y granulosidad de las
clulas progenitoras de manera a analizar
exclusivamente los leucocitos de la muestra y
expresar los resultados en valores absolutos de
clulas CD45+.
3.5. Anlisis de contenido de DNA y ciclo celular

Una de las aplicaciones importantes de la
citometra de flujo es la evaluacin del contenido
de DNA y ciclo celular. Las clulas marcadas con
un fluorocromo, que se une estequiomtricamente
a los cidos nucleicos, emiten una fluorescencia
proporcional al contenido cromosmico global.
Las clulas malignas son con frecuencia afectadas
de una anomala en el contenido de DNA, es decir,
son aneuploides. En muchos tumores humanos la
ploida representa un factor pronstico. La
medicin del contenido de DNA y del ciclo celular
pueden ser combinadas con el estudio simultneo
de la expresin de antgenos de la membrana,
citoplasmticos o nucleares, con lo cual un tipo
particular de clulas puede ser evaluada dentro de
una poblacin heterognea en conjunto con la
ploida y las fases del ciclo celular.
El anlisis por citometra de flujo del ciclo
celular puede reflejarse en una curva que muestre
las variaciones del contenido de DNA versus el
nmero de clulas analizadas (figura 43-8). Las
clulas que no estn creciendo o involucradas en
la divisin celular se denominan en el estado G0.
Cuando se gatilla la divisin, la clula entra
primero en el estado G1 del ciclo celular, luego
comienza a sintetizar DNA y entra a la fase S del
ciclo celular. Durante esta fase el contenido de
DNA de la clula aumenta hasta duplicarse, luego
la clula ingresa a la fase G2 del ciclo y se prepara
finalmente para entrar en mitosis (M) y volver a
dividirse retornando a G1 si la clula es estimulada
o bien mantenerse en G0.
Las clulas somticas son diploides, es decir
tienen un nmero 2n de cromosomas. El nmero
de cromosomas de un tumor es con frecuencia
mayor que 2n (hiperploide) y algunas veces menor
(hipoploide). Un nmero anormal de cromosomas
se denomina aneuploida y refleja cambios en el
contenido de DNA. El contenido de DNA de un
tumor se expresa como el ndice de DNA el cual
se define como la razn entre el contenido de DNA
de las clulas tumorales con respecto a clulas
normales diploides.Utilizando la citometra de
flujo es posible analizar el contenido de DNA tanto
de clulas frescas como de biopsias en parafina.
Para esto es necesario obtener suspensiones de
ncleos o clulas evitando la degradacin del
DNA. Cuando se estudian tejidos neoplsicos,
generalmente stos contienen algn porcentaje de
clulas normales diploides que sirven como control interno de la muestra. Alternativamente, se
714
Sin ttulo-2
714
5/26/06, 10:26 AM
Figura 43-8. Comparacin del contenido de DNA. Se muestran clulas mononucleares de sangre normal (A), clulas
mononucleares de sangre de un paciente con leucemia (B) y mdula sea del mismo paciente (C). En cada grfico se muestra
adems el contenido de DNA de ncleos de eritrocitos de pollo (CEN) los cuales se utilizan para la calibracin del citmetro de
flujo. Se detecta una pequea poblacin aneuploide (hipodiploide) en ambas muestras del paciente siendo sta mayor en la mdula
sea, concordante con el porcentaje de blastos detectados en la inmunofenotipificacin por citometra de flujo.
pueden utilizar otros controles, como linfocitos

aislados, eritrocitos u otra clula cuyo contenido
de DNA sea estable (figura 43-8).
En lneas generales, la cuantificacin de DNA
proporciona dos tipos de informacin biolgica
distinta: por un lado, nos orienta sobre la existencia
o no de anomalas clonales de DNA- aneuploidasy por otra, nos permite conocer la proporcin de
clulas en las distintas fases del ciclo celular. Esta
metodologa permite obtener adems informacin
sobre la dinmica del ciclo celular si se incluye la
incorporacin de anlogos de nucletidos como
la bromodeoxiuridina (BrdU) y as determinar con
exactitud las celulas en fase S. Actualmente se ha
incorporado la utilizacin del compuesto
fluorescente verde 5,6-carboxyfluorescein
diacetate succinimidyl ester (CFSE) que se une
covalentemente a macromolculas intracelulares,
permitiendo realizar cultivos mixtos de linfocitos
y respuesta a mitgenos y aloantgenos en conjunto
con el estudio del ciclo celular. Desde el punto de
vista pronstico, la presencia de aneuploida de
DNA dentro de los tumores malignos, se ha
asociado con una peor respuesta al tratamiento y
con supervivencia ms cortas. No obstante, en
algunas situaciones concretas como en la leucemia linfoblstica aguda del nio, el mieloma
mltiple, el neuroblastoma y el rabdomiosarcoma,
la presencia de aneuploida, y en particular de
hiperploida, se asocia con un mejor pronstico
de la enfermedad. El estudio del ciclo celular
mediante citometra de flujo en lesiones tumorales
ha demostrado poseer una clara utilidad clnica,

tanto en su aplicacin diagnstica como
pronstica. La existencia de una elevada tasa
proliferativa en tumores slidos y en hemopatas
malignas se asocia globalmente con un diagnstico
histopatolgico de malignidad, con caractersticas
clnicas, biolgicas e histolgicas de mal
pronstico y en definitiva con una peor evolucin
de la enfermedad y una supervivencia ms corta.
Sin embargo, en los sndromes mielodisplsicos,
la existencia de una mayor proporcin de clulas
en fase S en la mdula sea se asocia con un mejor
pronstico.
Pese a lo prometedor de los resultados
obtenidos hasta ahora en este campo, el valor
clnico de la deteccin de aneuploida debe ser
tomado con cautela. Un anlisis detallado de la
literatura muestra la existencia de un elevado grado
de discrepancias en relacin tanto, con la
incidencia de aneuploidas para un mismo tumor,
como en sus posibles implicaciones clnicas. Las
causas de estas discrepancias son probablemente
metodolgicas, van desde la calidad de la muestra,
procesamiento y mtodos de tincin del DNA,
hasta la interpretacin de los resultados.
3.6. Anlisis de enfermedad residual mnima
El desarrollo actual de tratamientos de
quimioterapia muy efectiva ha permitido alcanzar
una elevada incidencia de remisiones completas
en pacientes con leucemias agudas. Sin embargo,
715
Sin ttulo-2
715
5/26/06, 10:26 AM
un porcentaje importante de estos pacientes, luego

de alcanzar la remisn completa, recae debido a
la persistencia de clulas tumorales residuales
(enfermedad residual mnima o ERM). En la
actualidad, la confirmacin de la remisin
completa se basa en la existencia de menos de 5%
de blastos en mdula sea y sangre perifrica,
detectables por tcnicas morfolgicas y
citoqumicas convencionales, as como por la
ausencia de estas clulas en el lquido
cefalorraqudeo. De este modo entre los individuos
en remisin completa, se incluye un grupo de
pacientes muy heterogneo cuya masa tumoral
residual puede variar desde 109 a 1011 clulas
leucmicas.
En los ltimos aos, diversos grupos han
volcado sus esfuerzos en la deteccin de ERM en
leucemias agudas. Su inters se ha centrado en el
desarrollo de mtodos que permitan aumentar la
sensibilidad de las tcnicas morfolgicas y
citoqumicas convencionales (1-5%) y en
establecer la posible utilidad clnica de este tipo
de anlisis y sus implicaciones teraputicas. De
entre todos los mtodos investigados para la
deteccin de ERM en leucemias agudas, el
inmunofenotipo obtenido por citometra de flujo,
junto con anlisis de biologa molecular aparecen
como las tcnicas ms atractivas debido a la
rapidez, alta sensibilidad y objetividad de los
resultados. Como ha sido mencionado ampliamente, la citometra de flujo permite analizar
varios parmetros simultneamente en una misma
clula, cuantificar la expresin de un marcador
molecular en un nmero muy grande de clulas
en corto tiempo, analizar una diversidad de
marcadores de superficie o citoplasmticos,
adems del contenido de DNA permitiendo as
acotar con bastante exactitud la poblacin de
clulas neoplsicas.
En general, la eficacia de cualquier mtodo,
cuyo objetivo sea la deteccin de ERM en
leucemias agudas y otras patologas, depende de
su especificidad (capacidad para diferenciar entre
clulas normales y clulas neoplsicas), de su
sensibilidad (lmite de deteccin del mtodo), de
su reproducibilidad (debe ser objetivo y fcil de
estandarizar) y de su aplicabilidad (debe ser rpido
y susceptible de ser utilizado en la rutina de un
laboratorio clnico).
Las clulas leucmicas, salvo raras
excepciones, no presentan antgenos especficos
que permitan diferenciarlas de las clulas
normales. Sin embargo el conocimiento actual
basado en la experiencia de muchos aos ha puesto

de manifiesto la existencia de mltiples
aberraciones antignicas con respecto a los
patrones fenotpicos detectados en las clulas
normales. Este es el eje central para la posterior
deteccin de ERM, el cual necesariamente debe
estar apoyado en el inmunofenotipo del paciente
al momento del diagnstico. Los patrones de
aberracin antignica en conjunto con otras
caractersticas celulares son de gran utilidad en la
deteccin de ERM. No obstante lo ms acertado
es utilizar al menos dos parmetros, para
identificar la poblacin neoplsica en la muestra.
Un atractivo complemento a esta estrategia,
no disponible an, sera el empleo de anticuerpos
monoclonales contra protenas de productos de
fusin de algunos genes implicados en
traslocaciones cromosmicas. Estos anticuerpos
seran marcadores leucmicos especficos,
ausentes en clulas normales, y que conjugaran
dos requisitos importantes para la investigacin
de ERM: especificidad y sencillez. Aunque los
estudios sobre ERM son escasos en nmero y el
seguimiento de los pacientes incluidos en la
mayora de los estudios es relativamente corto, se
ha constatado en forma unnime, que la presencia
de clulas blsticas durante la fase de tratamiento,
de mantenimiento o en remisin completa permite
anticipar, con una elevada probabilidad, la recada.
LECTURAS SUGERIDAS
Braylan, R., Benson N. and Iturraspe J., Analysis of lynphomas by Flow Cytometry: Current and
emerging strategies, Annalas of the News York
academy of sciences. 677: 364-378, 1993.
Braylan, R. Lynphomas en Clinical Flow
Cytometry: Principles and applications, pp.
203-234. De Bauerm, K., Duque, R. and Shankey,
T., 1993.
Duque R. Acute Leukemia en Clinical Flow
Cytometry: Principles and applications, pp.
235-245. De Bauer, K., Duque, R. and Shankey,
T., 1993.
Locken, M., Immunofluorescence techniques en
Clinical flow cytometry: Principles and applications, pp. 341-353. De Bauer, K., Duque, R. and
Shankey, T., 1993.
716
Sin ttulo-2
716
5/26/06, 10:26 AM
Longobardi, A., Flow Cytometry: First principles, Wiey-Liss, Inc., 1992.

Steen, H., Charateristic of Flow Cytometers en
Clinical flow cytometry: Principles and applications, pp. 235-245. De Bauer, K., Duque, R. and
Shankey, T., 1993.
Stewart, C. and Stewart, S. Multiparameter
analysis of leucocyte by flow cytometry en
Methods in cell biology: Flow Cytometry, Vol.
14, pp. 61-78. Ed. Darzynkiewics, Z., Robinson,
J. and Crissman, H., 1994.
Visscher, D. and Crissman, J. Dissociation of
intact cell from tumor and normal tissue en
Methods in cell biology: Flow Cytometry, Vol.
14, pp. 1-13. Ed. Darzynkiewics, Z., Robinson,
J. and Crissman, H., 1994.
717
Sin ttulo-2
717
5/26/06, 10:26 AM
718
Sin ttulo-2
718
5/26/06, 10:26 AM

Captulo 44
ANTICUERPOS MONOCLONALES
Mara Ins Becker C. y Alfredo E. De Ioannes I.
1. Introduccin
2. Fundamentos del desarrollo de hibridomas
2.1. Mielomas
2.2. Fusin celular
2.3. Medio de seleccin
3. Etapas de la produccin de hibridomas murinos
3.1. Inmunizacin
3.2. Fusin
3.3. Seleccin y crecimiento
3.4. Subclonacin y congelacin
3.5. Cultivo masivo
4. Anticuerpos monoclonales versus

anticuerpos policlonales
4.1. Especificidad
4.2. Avidez y afinidad
5. Aplicaciones de los anticuerpos
monoclonales
5.1. Investigacin bsica
5.2. Medicina
5.3. Biotecnologa
6. Otros tipos de hibridomas
6.1. Heterohibridomas
6.2. Hibridomas humanos
719
Sin ttulo-2
719
5/26/06, 10:26 AM
720
Sin ttulo-2
720
5/26/06, 10:26 AM
RESUMEN
Durante dcadas, uno de los grandes anhelos de los inmunlogos fue producir in vitro,
anticuerpos monoespecficos de especificidad predefinida. Sin embargo, su principal problema
era que los medios de cultivo disponibles no eran capaces de sustentar el crecimiento de las
clulas productoras de anticuerpos. No fue hasta 1975 que George Khler y Csar Milstein
publicaron un procedimiento que permita inmortalizar los linfocitos B de ratones previamente
inmunizados mediante su fusin con clulas mielomatosas, constituyndose de esta forma un
hibridoma (o clon de clulas hbridas) capaz de secretar anticuerpos monoespecficos
(monoclonales) al medio de cultivo.
Desde entonces, los anticuerpos monoclonales han sido una poderosa herramienta de anlisis en investigacin bsica y aplicada en diversas reas de la biologa y biotecnologa as como
tambin en medicina, especialmente en el campo del inmunodiagnstico y la inmunoterapia.
Entre las razones de su xito se debe destacar que debido a su monoespecificidad, tienen la
capacidad de interactuar con un solo eptopo del antgeno. Adems, como la clula que los secreta es de naturaleza tumoral, brinda la posibilidad de disponer de un anticuerpo homogneo, que
no cambia sus propiedades en el tiempo, en cantidades ilimitadas.
Entre los aspectos ms relevantes del desarrollo de los hibridomas se encuentra disponer de
un procedimiento que permita crecer slo a los hbridos. Con este propsito, se utilizan lneas
celulares mielomatosas mutantes, con defectos en la produccin de las enzimas envueltas en la
sntesis de novo de nucletidos. En estas condiciones, es posible inducir las vas de rescate de la
sntesis de DNA a partir de nuclesidos exgenos como Timidina e Hipoxantina, slo si estn
presentes la enzima Timidina Kinasa para las pirimidinas, o la enzima Hipoxantina-GuaninaFosforibosil Transferasa para purinas, respectivamente. Habitualmente, para preparar hibridomas,
se utilizan clulas mieloides mutantes para TK o HGPRT que han sido seleccionadas por su sensibilidad a Aminopterina un anlogo del cido flico -inhibidor de la dihidrofolato reductasaque bloquea la sntesis de purinas y pirimidinas. De esta forma, en un medio que contiene
Aminopterina slo es posible el crecimiento de los hbridos, que gracias al aporte del linfocito B,
poseen todo el panel de enzimas que conforman las vas de rescate de sntesis de DNA y, por lo
tanto, pueden utilizar la Hipoxantina y Timidina adicionada al medio de cultivo (medio HAT).
El procedimento bsico en el desarrollo de hibridomas secretores de anticuerpos
monoclonales murinos se puede resumir en las siguientes etapas: (i) Inmunizacin: se debe desarrollar atendiendo cuidadosamente a las propiedades del antgeno y a los propsitos a los cuales
est destinado el anticuerpo; (ii) Fusin: se requiere linfocitos esplnicos de un animal inmunizado y clulas mielomatosas. Como agente fusgeno generalmente se utiliza Polietilnglicol.
(iii) Seleccin en medio HAT, para asegurar que slo los hbridos crezcan. En torno a los 14 das
post-fusin, se inician las pruebas -ya sea mediante ELISA, aglutinacin, inmunofluorescencia o
alguna otra tcnica sencilla- para determinar la especificidad de los sobrenadantes. Posteriormente, todos los microcultivos positivos se expanden a un mayor volumen de medio para continuar con la caracterizacin del anticuerpo; (iv) Subclonacin; procedimiento que se realiza con
los hibridomas de inters para asegurar la monoespecificidad del clon y por ende, del anticuerpo
que ste secreta; (v) Congelacin: Permite preservar por un tiempo indefinido las lneas de
hibridomas en presencia de un medio crioprotector; (vi) Cultivo masivo: permite disponer de
mayores cantidades de anticuerpo monoclonal ya sea creciendo el hibridoma en grandes volmenes de medio de cultivo (en frascos o en biorreactores) y tambin, mediante la induccin de
tumores secretores de lquido asctico, inyectndo las clulas de hibridoma en ratones singnicos.
Por las propiedades de los anticuerpos monoclonales, rpidamente se visualiz su aplicacin en inmunoterapia en humanos, sin embargo, stos, por ser de ratn, son inmunognicos en
humanos, razn que impuls el desarrollo de los hibridomas humanos con algunos problemas
an no resueltos. Entre los ms importantes estn la fuente de linfocitos B y la ausencia de lneas
mielomatosas de humanos con crecimiento estable. Para salvar estos problemas se est utilizando la ingeniera gentica. Es as, como hoy da se dispone de anticuerpos quimricos, anticuerpos
humanizados, anticuerpos que tienen asociadas molculas con funciones no inmunolgicas y
fragmentos que contienen las regiones CDR de un anticuerpo unidas por una molcula ligadora
721
Sin ttulo-2
721
5/26/06, 10:26 AM
flexible. Finalmente, para demostrar una vez ms que la creatividad humana no tiene lmites,
actualmente es posible ensamblar anticuerpos en la superficie de fagos filamentosos, procedimiento que permitir conocer ms profundamente sobre los mecanismos involucrados en la maduracin de la respuesta inmunolgica de los vertebrados.
lares, en adelante denominadas hibridomas, podan mantenerse en cultivo indefinidamente o congelarse y ser luego recuperadas para crecerlas in
vitro o in vivo, inyectndolas intraperitonealmente
en ratones histocompatibles, donde formaban tumores secretores de lquido asctico enriquecido
en el anticuerpo monoclonal original.
Por su trabajo al establecer las bases de la
metodologa para desarrollar hibridomas, en que
se asegura una perpetua fuente de anticuerpos homogneos, Khler y Milstein recibieron el Premio Nobel de Medicina en el ao 1984.
1. INTRODUCCIN
Desde que Burnet en 1959 postul la teora
de la seleccin clonal -donde propone que cada
linfocito B o su progenie terminalmente diferenciada, la clula plasmtica, es capaz de producir
slo un tipo de inmunoglobulina, cuya regin constante puede modificarse durante la diferenciacin
del linfocito pero no as su regin variable, la cual
mantiene su singular especificidad- surge en
Inmunologa el concepto de monoclonalidad y la
idea de producir anticuerpos monoespecficos contra un antgeno conocido. El concepto de
monoclonalidad permiti comprender la naturaleza de la enfermedad conocida como mieloma,
caracterizada por la transformacin neoplsica de
un clon individual del linaje de los linfocitos B,
en que todos secretan la misma inmunoglobulina
constituyendo as, la primera fuente conocida de
anticuerpos monoclonales, aun cuando se desconoce el antgeno.
Durante aos, debido a la imposibilidad de
cultivar in vitro los linfocitos B, numerosos cientficos intentaron modificarlos experimentalmente para lograr su crecimiento estable, asegurando
de esta forma una fuente continua de anticuerpos
homogneos. Aplicaron procedimientos tales
como la induccin de mielomas en ratn y su posterior crecimiento in vivo o in vitro, a pesar de que
no eran antgeno especficos. Tambin ensayaron
procedimientos para transformar linfocitos B, con
virus Epstein Barr o SV40, que permitieron establecer algunas lneas productoras de anticuerpos
monoespecficos, pero con un inconveniente: los
secretaban en muy pequeas cantidades.
Slo en el ao 1975, Khler y Milstein demostraron que la hibridacin o fusin de dos clulas somticas -entre un linfocito B, que posee la
informacin para sintetizar un solo tipo de anticuerpo y una clula de mieloma, que tiene una
capacidad ilimitada de proliferacin celular- poda utilizarse para establecer un cultivo continuo
de clulas secretoras de anticuerpos monoclonales
de especificidad predefinida. Dichas lneas celu-
2. FUNDAMENTOS DEL DESARROLLO

DE HIBRIDOMAS
La preparacin de hibridomas se sustenta en
la aplicacin de tres herramientas metodolgicas
generadas independientemente por bilogos celulares y genetistas: la induccin de mielomas en
ratn, la fusin de clulas somticas y el uso de
medios de cultivo in vitro selectivos.
2.1. Mielomas
Los mielomas de ratn, inducidos experimentalmente con aceite mineral, segn un procedimiento desarrollado por Potter en 1960, constituyeron un modelo decisivo para estudiar la expresin gentica y la regulacin de la sntesis de
inmunoglobulinas, bsicamente, porque estas clulas podan ser trasplantadas in vivo y tambin
porque podan crecer continuamente in vitro. Esta
ltima propiedad permiti clonarlas para obtener
variantes de la secrecin de anticuerpos. Adems,
podan ser manipuladas genticamente para obtener mutantes en la estructura de las inmunoglobulinas. El conocimiento surgido de ambas lneas de investigacin, llev a conocer la gentica
de las clulas productoras de anticuerpos, cuyos
principios se resumen a continuacin:
a) Cuando se fusionan dos clulas mieloides productoras de anticuerpos, la expresin de las
722
Sin ttulo-2
722
5/26/06, 10:26 AM
inmunoglobulinas es codominante; es decir, las

inmunoglobulinas de las dos clulas parentales
son expresadas, lo que sugiere estabilidad en
la expresin de los anticuerpos y un control
independiente de los genes codificadores de
anticuerpos en ambas clulas parentales.
en torno a la membrana plasmtica de las clulas

permitiendo su aglutinacin.
2.3. Medio de seleccin
Para desarrollar hibridomas secretores de
anticuerpos monoclonales, fue fundamental disponer de un procedimiento que slo permitiera
crecer a los hbridos compuestos de un linfocito B
y una clula mieloide. Con este propsito, Khler
y Milstein utilizaron un procedimiento desarrollado en el ao 1963 por Littlefield quien aisl,
con medios selectivos, lneas celulares fusgenas
mutantes, con defectos en la produccin de las
enzimas envueltas en la sntesis de novo de
nucletidos. Como se esquematiza en la figura 441, en estas condiciones, es posible inducir en las
clulas de mamferos las vas de rescate de la sntesis de DNA a partir de nuclesidos exgenos
como Timidina (T) e Hipoxantina (H), slo si estn presentes la enzima Timidina Kinasa (TK) para
las pirimidinas, o la enzima Hipoxantina-GuaninaFosforibosil Transferasa (HGPRT) para purinas,
respectivamente. Para seleccionar lneas mieloides
deficientes en alguna de estas dos enzimas, se cultivan en Bromodeoxiuridina (clulas TK negativas) y en 8-Azaguanina o Tioguanina (clulas
HGPRT negativas): las clulas as seleccionadas
son incapaces de usar la va de rescate en la sntesis de ADN.
Para preparar hibridomas, se utilizan clulas
mieloides mutantes para TK o HGPRT que han sido
seleccionadas por su sensibilidad a Aminopterina
(A), un anlogo del cido flico que bloquea la
sntesis de novo de purinas y pirimidinas,
inhibiendo la enzima dihidrofolato reductasa. De
esta forma, en un medio que contiene
Aminopterina slo es posible el crecimiento de
los hbridos, que gracias al aporte del linfocito B,
poseen todo el panel de enzimas que conforman
las vas de rescate de sntesis de DNA y, por lo
tanto, pueden utilizar la Hipoxantina y Timidina
adicionada al medio de cultivo. Las clulas
mieloides no fusionadas se mueren y los linfocitos
B no fusionados tienen una vida limitada in vitro,
pues al no estar transformados, no proliferan y
eventualmente tambin mueren. Los compuestos
A, H y T componen el medio de seleccin habitual de los hibridomas murinos conocido como
medio HAT.
b) Cuando una lnea mieloide no productora de

anticuerpos se fusiona con una lnea mieloide
que s es productora, la produccin de
inmunoglobulina no cesa, y tampoco se induce produccin en la variante no secretora.
c) Los hbridos producen slo aquellas cadenas
de inmunoglobulinas codificadas en las clulas parentales al momento de la fusin, lo cual
indica que no se producen nuevas cadenas de
inmunoglobulinas.
d) Los hbridos de dos clulas parentales productoras de anticuerpos, pueden ensamblar sus cadenas pesadas y livianas en todas las combinaciones posibles, para constituir un anticuerpo
completo; aunque lo habitual es que las cadenas parentales se asocien preferencialmente.
e) La fusin de clulas de mieloma con otras clulas que no son del linaje de las clulas B,
tales como clulas fibroblsticas o epiteliales,
inhibe la secrecin de inmunoglobulinas.
2.2. Fusin celular

Como se deduce de los antecedentes expuestos anteriormente, otra herramienta fundamental
en el desarrollo de la metodologa de hibridomas
fue la posibilidad de realizar fusin de clulas in
vitro, en presencia de agentes que promueven la
fusin de la membrana plasmtica, para formar
hbridos que poseen una comunin de propiedades de las clulas parentales.
Los primeros hibridomas secretores de
anticuerpos monoclonales se prepararon utilizando como agente fusgeno virus Sendai. Sin embargo, debido a las complicaciones que tiene este
tipo de agente, rpidamente se reemplaz por
fusgenos como la Isolecitina y el Polietilenglicol
(PEG), siendo este ltimo el ms utilizado para
desarrollar hibridomas murinos. Aunque el mecanismo de fusin va PEG no est totalmente entendido, se ha postulado que por ser un compuesto altamente hidroflico, absorbe la capa de agua
723
Sin ttulo-2
723
5/26/06, 10:26 AM
3. ETAPAS DE LA PRODUCCIN DE
HIBRIDOMAS MURINOS
En la figura 44-2 se ilustra las etapas para
preparar hibridomas murinos y, a continuacin, se
resumen los principales pasos a seguir para que el
procedimiento sea exitoso.
3.1. Inmunizacin
La obtencin de anticuerpos monoclonales
tiles a nuestros propsitos slo se logra si el animal de experimentacin presenta un ttulo adecuado de anticuerpos. Los animales ms frecuentemente utilizados para preparar hibridomas son los
ratones, especialmente los de la cepa BALB/c,
aunque tambin se han empleado ratas y hamster.
Dado que el perodo de inmunizacin puede tomar varios meses, los animales deben presentar
buen estado de salud y deben mantenerse en condiciones controladas de higiene, luz, temperatura
y alimentacin.
Figura 44-1. Principales vas de rescate envueltas en la sntesis de DNA: Fundamento del medio HAT (Hipoxantina, H;
Aminopterin, A; Timidina, T) de seleccin de hibridomas.
HGPRT (Hipoxantina-Guanina-Fosforibosil Transferasa), TK
(timidina kinasa), PRPP (5-Fosforibosil-1-Pirofosfato)
Figura 44-2. Procedimiento general para desarrollar hibridomas secretores de anticuerpos monoclonales murinos. PEG
(Polietilenglicol), HGPRT (Hipoxantina-Guanina-Fosforibosil Transferasa), TK (timidina kinasa), HAT (Hipoxantina, Aminopterin,
Timidina)
724
Sin ttulo-2
724
5/26/06, 10:26 AM
Antes de iniciar el perodo de inmunizacin,

es preciso analizar las caractersticas del antgeno;
entre las ms importantes se encuentran su naturaleza qumica y su tamao molecular relativo,
puesto que si se trata de un hapteno, ser necesario acoplarlo qumicamente a una protena transportadora de inmunogenicidad probada. Entre
estas protenas, una de las ms utilizadas es la
Hemocianina cuya funcin es el transporte de
oxgeno en moluscos y artrpodos- extraida de una
lapa californiana llamada Keyhole limpet
(Megathura crenulata) y se conoce como KLH.
Una protena similar, que ha mostrado excelentes
resultados es la Hemocianina que se extrae del
molusco Loco (Concholepas concholepas). Tambin se debe tener presente la especie de origen
del antgeno y su grado de conservacin. Si es una
protena de ratn, difcilmente ser inmunognica
en esta especie, a menos que se trate de un antgeno
de diferenciacin o de antgenos tumorales. La
solubilidad y toxicidad del antgeno deben ser
consideradas.
Debido a la diversidad de antgenos, no es posible definir a priori un protocolo de inmunizacin
comn para todos, siendo lo habitual administrar
al menos dos dosis del antgeno espaciadas por 15
a 30 das. Si el antgeno tiene un alto grado de
pureza y es suficientemente inmunognico, son necesarias dosis en torno a 50 ug. Sin embargo, es
recomendable el uso de coadyuvantes, quienes aportan seales de peligro necesarias para activar vigorosamente la respuesta inmune innata y adaptativa.
El ms utilizado en animales de experimentacin
es el coadyuvante completo de Freunds -consiste
de una emulsin de aceite en agua que adems contiene Micobacterium atenuado- que se emplea en
la primera inyeccin de antgeno. En posteriores
inmunizaciones, se utiliza el mismo coadyuvante
pero incompleto, es decir sin Micobacterium. Unos
diez das despus de cada inmunizacin, es aconsejable tomar una muestra de suero de los animales
de experimentacin y verificar la presencia de
anticuerpos contra el antgeno usando una tcnica
sencilla, como ELISA, IFI o aglutinacin. Si el
ttulo de anticuerpos es bajo, se administra un par
de inyecciones ms con el antgeno en coadyuvante incompleto, en dosis y tiempos similares a los
descritos anteriormente. Si el ttulo de anticuerpos
es adecuado, bastar una inyeccin de refuerzo con
una dosis de unos 100 g de antgeno en solucin
por va endovenosa, 3 a 4 das antes de la fusin
somtica .
3.2. Fusin
Habitualmente, alrededor de una semana antes de
la fusin somtica para preparar hibridomas, se
descongela un inculo de clulas y se mantiene
en crecimiento exponencial (ms o menos 500.000
clulas/ml) para asegurar una alta viabilidad y eficiencia de fusin. En la tabla 44-1 se muestra algunas de las lneas que se han utilizado para preparar hibridomas de diversas especies animales.
En cuanto a la seleccin de la lnea mieloide
parental a utilizar, el ideal es que no sea secretora
de inmunoglobulina. Actualmente para hibridomas
de ratn, las ms usadas son las lneas NSO/2 y
SP2/0 -ambas deficientes en enzima HGPRT- por
su crecimiento estable y buena eficiencia de fusin.
Como se seal anteriormente, la fusin se
realiza entre 3 y 4 das despus de la ltima inyeccin de antgeno, para disponer de suficientes
linfoblastos, que corresponden al estado de diferenciacin en que los linfocitos B presentan la
mejor capacidad de fusin, probablemente por sus
caractersticas de activa proliferacin similares a
las de las clulas mieloides, lo que permitira una
mejor integracin del material nuclear. No se debe
olvidar que los hibridomas son tetraploides y que,
dado que su constitucin ocurre totalmente al azar,
es frecuente la prdida de cromosomas, lo que se
traduce en inestabilidad e incapacidad de crecer;
esto explica en parte el bajo rendimiento de dicha
metodologa. Aproximadamente el 1% de las clulas utilizadas se fusionan y slo 1 de cada 10.000
forma hbridos viables. El bazo es el rgano utilizado de preferencia para las fusiones somticas
por su fcil acceso, menores riesgos de contaminacin en comparacin con los ganglios o placas
de Peyer y por el elevado nmero de linfocitos B
que concentra (en torno a 108 linfocitos/bazo).
Antes de la fusin, las clulas mieloides y
los linfocitos esplnicos se mezclan y se lavan rigurosamente para eliminar el suero fetal que se
adiciona a los medios de cultivo, porque ste inhibe
la accin del PEG. Se debe tener especial cuidado en la eleccin de este compuesto, ya que su
origen y pureza son determinantes para la eficiencia de la fusin. PEG, en un rango de peso entre
4000 y 6000 es el ms aconsejable, ya que el PEG
de bajo peso molecular es altamente txico para
las clulas. En nuestra experiencia, PEG 4.000 a
temperatura ambiente, a pH 7,2 en amortiguador
fosfato glucosado, a una concentracin del 50%,
presenta ptimos resultados, es decir, un rendi-
725
Sin ttulo-2
725
5/26/06, 10:26 AM
Tabla 44-1. Antisueros convencionales versus Anticuerpos Monoclonales

Caracterstica
Antisueros
Monoclonales
Composicin
Heterognea: contiene
anticuerpos diferentes para
diferentes eptopos de un
antgeno.
Homognea: contiene un
solo anticuerpo
Reconocimiento
antgeno
Reconocen varios eptopos

de un antgeno.
Reconocen un solo eptopo

del antgeno.
Especificidad
Variable, depende del animal

y la sangra.
Reacciones cruzadas
parciales.
Estndar
Mnimas reacciones
cruzadas.
Afinidad
Variable, depende del grado

de inmunizacin.
Se selecciona
Pureza del antgeno
Es esencial
Hasta un 20%
Rendimiento de
anticuerpo til
Hasta 1 mg/mL
Hasta 100 g/mL en el

sobrenadante de cultivo.
Hasta 20 mg/mL en asctico
Inmunoglobulinas
contaminantes
Hasta un 100%
Ninguna en cultivo in vitro
Duracin
Hasta que se acaba el

suero del animal
Ilimitada, es producido por

clulas tumorales.
enriquecido en el anticuerpo de inters, para determinar sus propiedades.

Para realizar la seleccin primaria de los
hibridomas las tcnicas ms utilizadas son los ensayos tipo ELISA, ya sea directos, de captura o de
competencia. En nuestra experiencia, se debe tener especial cuidado al elegir la tcnica para realizar la seleccin primaria de los hibridomas, porque si sta no es la adecuada se pierde tiempo,
esfuerzo y recursos. A modo de ejemplo. Si se
quiere obtener anticuerpos de alta afinidad (sobre
108 M-1), lo ms aconsejable ser la seleccin por
ELISA o RIA y no por aglutinacin, en que la avidez de un anticuerpo prima por sobre su afinidad.
Actualmente, existen herramientas ms poderosas y sensibles para seleccionar los hibridomas
secretores de anticuerpos de inters, como por
ejemplo se puede utilizar un equipo separador de
clulas activado por fluorescencia (FACS). En este
caso, el antgeno marcado con un fluorocromo se
agrega a las clulas fusionadas y aquellas que ex-
miento en torno a 2.000 hibridomas cuando se utilizan 108 linfocitos esplnicos y 2,5 x 107 clulas
mieloides.
3.3. Seleccin y crecimiento
La suspensin de clulas resultantes de una
fusin somtica se siembra en placas de
micropozos en medio de seleccin HAT, que permite slo el crecimiento de los hbridos. Dentro
de los 10 a 14 das siguientes, los clones alcanzan
un tamao suficiente -visible a simple vista- para
iniciar la seleccin primaria de los hibridomas de
inters. Debido al escaso volumen de medio de
las placas de multipozos y a la activa proliferacin de los hbridos -con un ciclo celular de alrededor de 10 horas- la seleccin debe hacerse con
una tcnica sencilla y rpida para expandirlos a
un mayor volumen de medio; de este modo, se
asegura que continen su crecimiento y tambin
se dispone de mayor cantidad de medio de cultivo
726
Sin ttulo-2
726
5/26/06, 10:26 AM
en la cavidad peritoneal de ratones histocompatibles o irradiados, previamente tratados con

aceite mineral para inducir la formacin de
plasmacitomas. En estas condiciones, se alcanzan concentraciones de anticuerpo de hasta 20 mg/
ml a diferencia de un sobrenadante de cultivo in
vitro, en que se obtienen concentraciones entre 20
y 50 g/ml. Si se precisa aumentar la concentracin de anticuerpos obtenidos in vitro, los
hibridomas deben crecer en biorreactores, los cuales pueden ser del tipo de los fermentadores, en
que las clulas se crecen en suspensin con agitacin -individuales o formando acmulos,
encapsuladas en microesferas- o sistemas en que
son empacadas e inmovilizadas en columnas de
fibra hueca de material semipermeable.
presen en su superficie el anticuerpo blanco pueden ser separadas desde la mezcla de clulas resultantes de la fusin.
Para un buen crecimiento de los hibridomas
los factores ms crticos son la calidad del medio
de cultivo -que debe ser rico en glucosa, porque
los hbridomas utilizan la va glicoltica como
fuente de energa- y la del suero fetal de bovino,
que se agrega descomplementado. Es aconsejable probar los sueros antes de realizar una fusin.
Con este propsito se utiliza el procedimiento conocido como eficiencia de clonacin, que consiste en sembrar mediante dilucin lmite clulas
mieloides y determinar la capacidad del suero de
sustentar el crecimiento de las clulas en las diluciones mayores (1 a 0,1 clulas /pozo). Para asegurar un mejor crecimiento de los hibridomas, el
medio de cultivo se puede enriquecer con una suspensin de clulas de bazo de un animal
histocompatible no inmune, las que prcticamente no crecen, pero aportan al medio factores de
crecimiento, interleuquinas e intermediarios
metablicos.
4. ANTICUERPOS MONOCLONALES VERSUS ANTICUERPOS POLICLONALES

En la tabla 44-2 se presenta una comparacin de algunas caractersticas de los anticuerpos
monoclonales con respecto a los antisueros convencionales -tambin denominados anticuerpos
policlonales- y a continuacin se comenta los aspectos ms destacables.
3.4. Subclonacin y congelacin

Una vez que se tiene un hibridoma de inters, se debe proceder rpidamente a su reclonacin
por dilucin lmite para asegurar la
monoespecificidad de la lnea celular, puesto que
es probable que al sembrar la suspensin de clulas resultantes de la fusin, caiga por azar ms de
un hbrido por pozo. Si un hbrido secretor de
anticuerpos est mezclado con uno no secretor y
de mayor tasa de proliferacin, se perder en el
tiempo el hibridoma secretor y por lo tanto, se
perder el anticuerpo monoclonal.
Para asegurar la preservacin de una lnea
de hibridomas, es importante congelar inculos
de clulas representativos de cada una de las etapas de su crecimiento, esto es, clulas parentales
(pre-subclonamiento) y de los reclones. Con este
propsito, se preparan inculos con una concentracin de clulas totales en torno a 1 2 millones, en presencia de una mezcla crioprotectora,
siendo ptima la mezcla compuesta por un 10%
de DMSO y un 90% de suero fetal de bovino. Las
clulas as tratadas se mantienen indefinidamente
en estanques con N2 lquido.
4.1. Especificidad
Un anticuerpo monoclonal, por su naturaleza monoespecfica, es capaz de interactuar con un
solo eptopo de un antgeno; en cambio, un
antisuero convencional, debido a su naturaleza
policlonal, contiene no slo anticuerpos que pueden interactuar con varios eptopos de un antgeno,
sino que tambin, contiene una familia de
anticuerpos que difieren en estructura, afinidad y
avidez, los que compiten por unirse a cada eptopo
del antgeno, como se ilustra en la figura 44-3.
Adems, no se puede dejar de mencionar que en
los sueros convencionales tambin estn presentes los anticuerpos que constituyen la inmunidad
humoral natural del animal del cual se obtuvo. Por
lo tanto, es posible que se produzcan reacciones
cruzadas de los anticuerpos, difciles de eliminar,
cuando se trata de antgenos similares que comparten numerosos eptopos o cuando se trata de
antgenos diferentes con un eptopo en comn, o
muy similar. Este problema puede evitarse con el
uso de anticuerpos monoclonales seleccionados
por su capacidad de unirse a un eptopo exclusivo
de un antgeno. Un ejemplo de esta exquisita es-
3.5. Cultivo masivo

Los hibridomas pueden ser cultivados in vivo,
727
Sin ttulo-2
727
5/26/06, 10:26 AM
Tabla 44-2. Lneas celulares inmortales usadas como parentales para constituir hibridomas
Especie
Lnea celular
Fenotipo Celular
Expresin
de Ig
Ratn
X653
NS0/2
SP2/0
NS1
Mieloma
Mieloma
Mieloma
Mieloma
No
No
No
IgG1()
Rata
Y3-Ag 1.2.3.
YB2/0
Mieloma
Mieloma
No
SK007
RH-L4
Mieloma
Linfoblastoide
IgE ()
IgG() no secretor
GM1500
KR4
Linfoblastoide
Linfoblastoide
IgG()
IgG2()
SHM-D33
Mieloma hbrido
IgG2()
Humana
Humana/ratn
pecificidad es el caso de los anticuerpos monoclonales que permiten discriminar entre el grupo
sanguneo A y B de humanos, donde la nica diferencia en el trisacrido que constituye el determinante antignico de cada grupo est constituida por
un azcar, N-acetilgalactosamina y Galactosa, respectivamente.
Sin embargo, existen algunos casos en que

la especificidad de los anticuerpos monoclonales
puede ser cuestionada, por presentar reacciones
cruzadas mayores que las observadas con un
antisuero convencional, lo que enfatiza la importancia de los procedimientos de seleccin y caracterizacin de los anticuerpos monoclonales. Es
Figura 44-3. Heterogeneidad de anticuerpos presentes en el antisuero de un mamfero. El antgeno esquematizado tiene los
eptopos A, B, C y D. En el eptopo A se pueden unir dos anticuerpos de la misma clase pero de diferente especificidad y afinidad.
En el eptopo B se pueden unir dos anticuerpos de diferente clase, especificidad y afinidad. En el eptopo C se pueden unir dos
anticuerpos de diferente clase pero de la misma afinidad y especificidad y, en el eptopo D, se pueden unir dos anticuerpos de
diferente clase pero de la misma especificidad y afinidad.
728
Sin ttulo-2
728
5/26/06, 10:26 AM
posible que un anticuerpo muestre reaccin cruzada con un eptopo presente en un antgeno que
no fue considerado al realizar los estudios de especificidad de dicho anticuerpo. Por ejemplo, en
el caso de dos glicoprotenas que comparten una
secuencia oligosacrida; si el anticuerpo
monoclonal reconoce esta regin, es posible observar un 100% de reaccin cruzada; en cambio,
con el antisuero convencional, que contiene
anticuerpos dirigidos contra los eptopos no comunes de ambas glicoprotenas, la reactividad cruzada ser menor.
Tambin es posible que un anticuerpo
monoclonal totalmente especfico con un antgeno
en un tipo de ensayo dado, muestre reactividad
cruzada con otro al ser utilizado en otro tipo de
ensayo, especialmente si la sensibilidad de las tcnicas es diferente. Un ejemplo de este fenmeno
se observa en algunos anticuerpos monoclonales
dirigidos contra la hormona Gonadotrofina
Corinica humana (hCG), compuesta por dos
subunidades: y . En ensayos de aglutinacin
indirectos, cuando se hace reaccionar a estos
anticuerpos con partculas de ltex recubiertas con
hCG, se produce una reaccin de aglutinacin altamente especfica, ya que, aunque se agreguen
elevadas concentraciones de hormona Luteinizante
humana (hLH) que comparte la subunidad con
hCG, no se observa inhibicin de la aglutinacin,
pero s se observa al agregar las mismas concentraciones de hCG. Sin embargo, los mismos
anticuerpos se unen a ambas hormonas en ensayos tipo ELISA directo.
se logra un nmero significativo de hibridomas

secretores de anticuerpos monoclonales de tipo
IgM cuando se realizan protocolos de inmunizacin cortos, sin estimulaciones reiteradas con el
antgeno para evitar una maduracin de la respuesta hacia IgG. En cuanto a la seleccin, si se desea
anticuerpos aglutinantes, la seleccin por ELISA
no ser apropiada porque el antgeno se presenta
en otra configuracin, lo que se demuestra al constatar que la mayora de los anticuerpos seleccionados por ELISA no presentan caractersticas
aglutinantes.
Finalmente, se pueden preparar mezclas de
dos o ms monoclonales de especificidad conocida, lo que se denomina reactivo oligoclonal. En
ellas es posible combinar y potenciar las caractersticas individuales de avidez y afinidad de cada
uno de los anticuerpos monoclonales que la componen.
5. APLICACIONES DE LOS ANTICUERPOS MONOCLONALES

5.1. Investigacin bsica
La metodologa de hibridomas ha sido una
herramienta insustituible para el avance cientfico -tecnolgico en el campo de la Biologa, bsicamente por su alto grado de especificidad y porque al aislar varios anticuerpos monoclonales especficos para diferentes eptopos de un antgeno,
se puede conocer la estructura y funcin de diferentes partes de una molcula o tipos celulares.
Por ejemplo, se han usado en la purificacin y caracterizacin de receptores de hormonas y factores de crecimiento, con sus respectivos ligandos;
en el estudio de vas metablicas y las enzimas
involucradas; en el estudio de la estructura y funcin de numerosas protenas; en el conocimiento
de la organizacin del citoesqueleto y de la matriz
extracelular; en el desarrollo embrionario de diversos organismos, permitiendo identificar
antgenos de diferenciacin; en la clasificacin y
caracterizacin de numerosas bacterias y sus toxinas; en la caracterizacin de protenas de virus que
infectan humanos; y as, la lista podra extenederse
largamente.
Sin embargo, uno de los campos de la biologa donde los hibridomas secretores de anticuerpos
monoclonales han tenido mayor impacto ha sido
en el estudio del sistema inmune al permitir, por
ejemplo, conocer los mecanismos genticos
4.2. Avidez y Afinidad

La avidez y afinidad de un antisuero es una
propiedad promedio del conjunto de anticuerpos
especficos que lo componen, sin embargo, los
anticuerpos monoclonales responden a las caractersticas de un nico componente, cuya avidez y
afinidad depender del grado de inmunizacin del
animal de experimentacin utilizado como fuente
de linfocitos B y del mtodo de seleccin utilizado durante su preparacin. Un ejemplo ilustrativo de esta informacin se encuentra en el desarrollo de anticuerpos monoclonales para tipificar grupos sanguneos humanos mediante aglutinacin.
Los anticuerpos aglutinantes por excelencia, son
los que se producen masivamente en la respuesta
primaria contra un antgeno y que corresponden a
la clase IgM, cuyas caractersticas fundamentales
son su gran tamao y gran avidez. Pues bien, slo
729
Sin ttulo-2
729
5/26/06, 10:26 AM
involucrados en la generacin de la diversidad de

los anticuerpos, en la caracterizacin del
microambiente tmico y, especialmente, en el anlisis del linaje de las clulas B y T mediante la
identificacin de marcadores de superficie especficos. stos han permitido reconocer, aislar y
cuantificar subpoblaciones celulares, como en el
caso de los anticuerpos monoclonales anti-CD3,
anti-CD4 y anti-CD8, adems de un conjunto de
otros marcadores. Es importante mencionar tambin, el desarrollo de numerosos anticuerpos
monoclonales especficos contra molculas del
Complejo Principal de Histocompatibilidad de
clases I y II.
Entre los aspectos de activa investigacin con
los anticuerpos monoclonales, se encuentra su uso
en la construccin de biosensores y tambin la posibilidad de utilizarlos como enzimas, de ah su
denominacin como anticuerpos catalticos. Se
han producido anticuerpos monoclonales especficos de haptenos, que tienen capacidad cataltica
en ciertas reacciones que son caracterizadas por
estados de transicin semejantes a las formas estables del hapteno, tanto por su geometra
molecular como carcter electrnico. Este tipo
de anticuerpos tienen un potencial ilimitado de
aplicacin en qumica y biomedicina. Por ejemplo, ellos podran proteger clulas normales de
quimiotoxicidad o activar pro-drogas en el sitio
blanco.
y para la prevencin del rechazo de trasplantes.

Entre esta familia de anticuerpos, se destaca el
anticuerpo anti-CD3 denominado OKT3, que ha
sido extensamente utilizado en pacientes trasplantados y que fue uno de los primeros anticuerpos
de ratn humanizado por las razones que explicaremos ms adelante en este captulo. Ms recientemente, se ha desarrollado un anticuerpo
monoclonal murino, denominado anti-Tac, contra un receptor particular de Il-2, Il-2R. Este receptor no se encuentra en clulas normales, se
expresa en una poblacin de clulas T envueltas
en rechazo de trasplantes, en clulas T que median enfermedades autoinmunes y tambin, en
ciertas leucemias y linfomas producidos por el
retrovirus HTVL-I. El monoclonal anti-Tac ha sido
humanizado (Hu-anti-Tac), siendo utilizado
exitosamente en la inmunoterapia de algunas
leucemias adultas muy agresivas producidas por
el virus HTVL-1. Se postula que el anticuerpo
previene la interaccin de Il-2 con Il2R+llevando a una deprivacin de la citoquina
que induce a la muerte de la clula tumoral por
apoptosis.
b) Anticuerpos monoclonales para el tratamiento
de infecciones bacterianas, que inhiben la acumulacin de neutrfilos y as se reduce el dao tisular,
por ejemplo, en la meningitis y la injuria por
reperfusin del miocardio. Recientemente, se han
patentado anticuerpos para la prevencin de la
infeccin respiratoria producida por el virus
sincitial y tambin para prevenir la infeccin por
citomegalovirus en trasplantados renales.
5.2. Medicina
Los anticuerpos monoclonales han permitido un espectacular avance en la medicina a travs
del conocimiento de los mecanismos moleculares
de numerosas patologas. Poco despus de su creacin, los anticuerpos monoclonales murinos fueron utilizados en el diagnstico clnico en humanos, en aspectos como la determinacin de hormonas, enzimas, antgenos de grupos sanguneos
y de histocompatibilidad, monitoreo de drogas
teraputicas, antgenos relacionados con enfermedades infecciosas y tambin en la identificacin
de marcadores tumorales, entre otros.
Por las propiedades de los anticuerpos
monoclonales, muy pronto se visualizaron las
posibles aplicaciones teraputicas de los
anticuerpos monoclonales, que se pueden resumir
bsicamente en:
c) Anticuerpos monoclonales para el tratamiento

del cncer, dirigidos contra antgenos tumorales
especficos. Por ejemplo, en el caso del antgeno
c-erb B-2 (tambin conocido como HER-2/neu)
sobre-expresado en ciertos carcinomas gstricos,
pulmonares, mamarios y de prstata, se ha desarrollado un anticuerpo humanizado que contiene
las regiones determinantes de complementariedad
de un anticuerpo monoclonal murino que se une a
Her-2/neu, mejorando significativamente la eficacia de la quimioteraopia con Taxol y
Doxorubicina
d) Anticuerpos que se pueden utilizar en la forma inmunotoxinas, es decir, anticuerpos a los cuales se les adiciona potentes toxinas de plantas o
bacterias -como la Ricina, presente en Ricinus
communis y Abrus precatorius o la exotoxina
a) Anticuerpos monoclonales inmunosupresivos,

para el tratamiento de enfermedades autoinmunes
730
Sin ttulo-2
730
5/26/06, 10:26 AM
diftrica de Coynebacterium diphtheriae-- para

que destruyan selectivamente las clulas que expresan dichos antgenos.
rosas molculas de inters, con la ventaja de un

mejor rendimiento: a diferencia de muchos procesos qumicos de purificacin, los antgenos separados mediante columnas de afinidad con
anticuerpos monoclonales mantienen mejor su
actividad.
e) Monoclonales como sondas para la localizacin de tumores y metstasis cuando se les acopla
radioistopos de corta vida media, permitiendo una
evaluacin dosimtrica precisa de la radioterapia.
6. OTROS TIPOS DE HIBRIDOMAS
5.3. Biotecnologa
6.1. Heterohibridomas
La incorporacin de la tecnologa de
hibridomas a la investigacin, desarrollo y fabricacin de vacunas y especialmente de reactivos
de inmunodiagnstico -clsicamente preparados
con sueros convencionales- produjo una gran revolucin, al simplificar enormemente los procedimientos de produccin y control de calidad, ya
que las propiedades de un anticuerpo monoclonal
no cambian en el tiempo; adems, porque han permitido desarrollar test de diagnstico de mayor
especificidad. Por otra parte, su incorporacin en
numerosos procesos productivos de la industria
farmacutica, alimenticia y petroqumica, entre
otras, han simplificado y rebajado los costos de
procesos conducentes a la purificacin de nume-
Al fusionar un hibridoma secretor de

anticuerpos contra un antgeno, con otro hibridoma
o con linfocitos B de un animal inmunizado contra otro antgeno, se obtiene un heterohibridoma
que secreta anticuerpos bifuncionales, capaces de
interactuar con dos antgenos diferentes, como se
ilustra en la figura 44-4. Este procedimiento fue
aplicado pioneramente por Cuello y Milstein para
preparar un anticuerpo que se una a Peroxidasa y
a Somatostatina y se utiliz para la deteccin
inmunohistoqumica de Somatostatina. Se prepar fusionando un hibridoma de ratn productor de
un monoclonal anti-peroxidasa y linfocitos
esplnicos de una rata inmunizada con
Somatostatina acoplada a Tiroglobulina.
Figura 44-4. Produccin de anticuerpos bifuncionales. A: Fusin de dos hibridomas o de un hibridoma y un linfocito B. B:
Reasociacin qumica de fragmentos de anticuerpos diferentes. C: agregacin qumica de anticuerpos completos.
731
Sin ttulo-2
731
5/26/06, 10:26 AM
Los anticuerpos bifuncionales se pueden producir

tambin por reasociacin qumica de fragmentos
monovalentes de anticuerpos, con una desventaja, es muy difcil disociar cadenas de inmunoglobulinas sin provocar algn grado de
desnaturacin, con la consiguiente prdida de actividad del anticuerpo. Sin embargo, un mtodo
alternativo para evitar estos problemas, consiste
en acoplar anticuerpos completos, como se muestra en la figura 44-4.
linfocitos B perifricos o drenados desde los

ndulos linfticos. 2. La inmunizacin de humanos con la mayora de los antgenos no es
ticamente posible. 3. Las lneas mieloides humanas no son tan estables como las de ratn.
Muchas de ellas no son verdaderos mielomas y
carecen de suficiente retculo endoplsmico,
mitocondrias y aparato de Golgi para una alta produccin y secrecin de anticuerpos.
Frente a todos los problemas sealados anteriormente, la estrategia bsica de la ingeniera
gentica ha consistido en redisear las partes
inmunognicas de la molcula de anticuerpo y
actualmente, ha llevado a la construccin de los
diversos tipos de anticuerpos que se muestran en
la figura 44-5. stos son: Los anticuerpos de tipo
quimrico, en los cuales la regin variable de ratn es combinada genticamente con una regin
constante humana para conservar las funciones
efectoras del anticuerpo; los anticuerpos de ratn
humanizados, en que se trasplantan las regiones
responsables del reconocimiento antignico del
ratn (regiones CDR) en un anticuerpo humano;
los anticuerpos con funciones adicionales no inmunes, a los cuales se les puede acoplar una droga o una toxina y, finalmente, los fragmentos Fv
en que las regiones variables de la cadena liviana
y pesada del anticuerpo -que conforman el sitio
activo del anticuerpo- son producidas en bacterias y posteriormente se unen mediante una molcula ligadora sinttica, para mantener la conformacin de la regin de reconocimiento antignico.
Estos anticuerpos, son potencialmente los menos
inmunognicos y, por su pequeo tamao, tienen
la capacidad de penetrar los tejidos del cuerpo que
normalmente son restrictivos para molculas de
mayor tamao.
Otra forma de producir anticuerpos monoclonales alternativa a los hibridomas, es mediante
genotecas de expresin en fagos filamentosos denominados anticuerpos coliclonales- como se
ilustra en la figura 44-6. Se preparan a partir de
una genoteca de expresin de mRNA de bazo de
animales normales o inmunes. Utilizando
partidores especficos, se obtiene el cDNA correspondiente a las regiones variables (Fv) de los
anticuerpos representados en el mRNA esplnico,
los que son ligados a un cosmidio que contiene la
informacin gentica del fago filamentoso y permite la expresin de la informacin gentica para
las regiones variables de una cadena liviana y una
pesada insertadas aleatoriamente. Una vez generados los cosmidios, se reconstituyen las partcu-
6.2. Hibridomas humanos

Las principales razones que impulsaron el desarrollo de los hibridomas secretores de
anticuerpos monoclonales humanos fueron las siguientes: En primer lugar, los anticuerpos murinos
no son compatibles con los humanos y por lo tanto, inducen una xenosensibilizacin en los pacientes: estos producen, por una parte, anticuerpos antiidiotpicos que disminuyen la eficiencia teraputica del anticuerpo monoclonal, al neutralizar el
sitio de combinacin con el antgeno; por otra parte, tambin producen anticuerpos anti-isotipo, los
cuales aparentemente neutralizan y eliminan de la
circulacin los anticuerpos teraputicos, especialmente en el caso de las IgG. En segundo lugar, para
algunos antgenos humanos los ratones no tienen
repertorio, lo que provoca la ausencia de respuesta
inmune humoral o la produccin de anticuerpos de
muy baja afinidad. Tal es el caso de los antgenos
del sistema Rh de grupo sanguneo humano. En
tercer lugar, la necesidad de substituir o reforzar
las fracciones globulnicas de uso teraputico rutinario, especialmente debido a la posible contaminacin de las preparaciones convencionales de
anticuerpos humanos con virus como el del SIDA
y de la Hepatitis B y C. Finalmente, los anticuerpos
monoclonales humanos permitirn conocer las particularidades de la respuesta inmune humana y ciertos aspectos de la estructura antignica no percibidos
por otros animales.
Aunque el problema de la xenosensibilizacin se controla en parte con drogas
inmunosupresivas, la aproximacin radical a este
problema surgi gracias al avance de la ingeniera gentica y a las tcnicas de biologa molecular,
puesto que la produccin de hibridomas humanos
presenta serios problemas, entre los que se debe
destacar: 1. La fuente de clulas B; a diferencia
de los ratones, los humanos no pueden ser
inmunizados repetidamente con un antgeno, por
lo tanto, los hibridomas humanos se preparan con
732
Sin ttulo-2
732
5/26/06, 10:26 AM
Figura 44-5.Tipos de anticuerpos construidos mediante ingeniera gentica. A: Anticuerpo quimrico, contiene las regiones
variables de ratn y las regiones constantes de humano. B: Anticuerpo humanizado, se han reemplazado las secuencias gnicas que
codifican para las regiones que unen antgeno (CDR) de un anticuerpo humano, por las regiones CDR de un anticuerpo de ratn.
C: Anticuerpo con funciones adicionales no inmunes, en el cual los dominios CH2 y CH3 de la regin constante se han substituido
por un gen no relacionado con inmunoglobulinas, que puede ser una droga o toxina. D: Fragmento Fv de un anticuerpo producido
por la transformacin de bacterias con un plasmidio que contiene los genes de las regiones variables de la cadena liviana y pesada
(VL y VP) en tndem, separadas por una secuencia codificadora de una molcula ligadora flexible (U), que le permite la formacin
adecuada del sitio de combinacin con el antgeno y le confiere mayor flexilidad al fragmento.
con el solo requisito de disponer de los partidores

adecuados. Sin embargo, una limitante importante
de este procedimiento es que en la genoteca de expresin no ocurre el proceso de hipermutacin
somtica que ocurre naturalmente en los animales
despus de una inmunizacin y que contribuye al
aumento de la afinidad de los anticuerpos en la respuesta inmune humoral secundaria. Este problema
puede ser solucionado utilizando para construir la
genoteca mRNA de animales hiperinmunizados.
Actualmente, se investiga activamente en los mecanismos involucrados en la hipermutacin somtica
de los genes de inmunoglobulinas, con el propsito
de reproducir este proceso a nivel de las genotecas
de expresin para lograr la maduracin de la afinidad de los anticuerpos in vitro.
las virales para su posterior amplificacin en bacterias. Los fagos recombinantes expresan en su
superficie en forma funcional los fragmentos Fv
y de esta manera, es posible seleccionar en forma
rpida y eficiente las especificidades presentes en
la genoteca. Adems, con esta tecnologa es posible disponer de las regiones del DNA que codifica para las partes variables de los anticuerpos presentes en la genoteca, lo que permite reinsertar
los genes que codifican para las partes variables
de los coliclonales seleccionados en plasmidios
que expresan las regiones constantes de cualquier
clase de anticuerpo.
La metodologa sealada anteriormente, a diferencia de la preparacin de hibridomas tradicionales, puede ser aplicada a cualquier especie animal
733
Sin ttulo-2
733
5/26/06, 10:26 AM
Figura 44-6. Anticuerpos monoclonales preparados en bacterias. En la parte superior de la figura se muestra un elemento
representativo de la genoteca recombinante: el vector, que corresponde a la partcula del bacteriofago filamentoso conteniendo una
molcula de DNA circular de simple hebra con informacin para las protenas estructurales del fago y sus elementos de regulacin.
En un extremo de la partcula, se encuentran clonadas copias de la protena menor de la cubierta del fago, codificada por el gen 3
y en su extremo 5 han sido insertados los genes que codifican para las regiones variables del anticuerpo (VH y VL). De esta forma,
la secuencia seal natural del gen 3 es retenida y por lo tanto, la protena de fusin madura tiene el dominio N-terminal del
anticuerpo seguido por la protena completa del gen 3. Esta protena de fusin es ensamblada en la partcula del fago, el cual
presenta los fragmentos de anticuerpo sobre su superficie, de la forma que se muestra en el esquema inferior de la figura. Los
anticuerpos pueden ser expresados en la forma de cadenas simples (Fvs) en que VH y VL se unen va un pptido ligador flexible o
como Fabs, uniendo ya sea VH-CH1 o la cadena liviana al gen 3 y expresando la cadena parental en forma soluble. Los anticuerpos
expresados de esta forma, mantienen las caractersticas de unin del anticuerpo original y debido a la exposicin del sitio de unin
hacia el medio, permiten su seleccin por cromatografa de afinidad con el antgeno de inters.
Blackburn, G. M.; Kang, A, S.; Kingsbury, G.A.;

Burton, D.R., Catalytic antibodies, Biochemical Journal 262: 381 390, 1989.
LECTURAS SUGERIDAS
Bach, J.B.; Fracchia, G.N.; Chatenoud, L. Safety
and efficacy of therapeutic monoclonal antibodies in clinical therapy, Immunology Today 14:
421 425, 1993.
Campbell, A.M., Monoclonal Antibody

Technology. Laboratory Tecniques in Biochemistry and Molecular Biology, Vol. 13.
Editado por R. H. Burdon y P. H. Knippenberg,
Elsevier, 1987.
Becker, M.I.; Juica, F.; Jamett, S.; Tzichinovsky,

S.; Barros, S.; De Ioannes, A.E., Development
of anti-human B blood group monoclonal antibodies suitable for blood typing reagent, Hybridoma
13: 304 310, 1994.
Gavilondo, J.V., Anticuerpos monoclonales de

segunda generacin, Investigacin y Ciencia
169: 72 79, 1990.
734
Sin ttulo-2
734
5/26/06, 10:26 AM
Khler, G., Milstein, C., Continuous cultures of

fused cells secreting antibody of predefined specificity, Nature 256: 495 497, 1975.
Rapley, R., The biotechnology and applications
of antibody engineering, Molecular Biotechnology 3: 139 154, 1995.
Sawyer, L.A, Antibodies for the prevention and
treatment of viral diseases, Antiviral res. 47: 57
77, 2000
Waldman T.A., Monoclonal antibodies in diagnosis and therapy, Science 252: 1657 1662,
1991.
Waldman T.A. Emerging therapies: Spectrum of
applications of monoclonal antibody therapy,
Hematology 394: 1 18, 2000.
Wawrzynczak E.J., Derbyshire, E.J.,
Immunotoxins: the power and the glory, Immunology Today. 13: 381 383, 1992.
Winter G., Milstein C., Man-made antibodies.
Nature 349: 293 299, 1991.
Winter, G., Harris, W.J., Humanized antibodies,
Immunology Today 14: 243 246, 1993.
Yelton, D.E., Scharff, M.D., Monoclonal
Antibodies: A powerful new tool in Biology and
Medicine. M.D. Ann. Rev. Biochem. 50: 657 680 (1981).
735
Sin ttulo-2
735
5/26/06, 10:26 AM
736
Sin ttulo-2
736
5/26/06, 10:26 AM

Captulo 45
MTODOS FUNDAMENTALES DE BIOLOGA
MOLECULAR
Claudio Vsquez G. y Enrique Gonzlez V.
1. Introduccin
2. Bases de la Biologa Molecular
2.1. El DNA es el material gentico
2.2. Componentes del DNA
2.3. Estructura del DNA
3. Las nuevas tecnologas
3.1. Endonucleasas de restriccin
3.2. Clonamiento del DNA
3.3. Transferencia de Southern
3.4. Transformacin de clulas
3.5. Secuenciacin de DNA
3.6. Reaccin de la polimerasa en cadena
3.7. Animales transgnicos y knock
out de genes
4. La expresin gnica en organismos
eucariticos
4.1. Estructura de los genes eucariticos
4.2. El proceso de expresin gnica y

sus etapas
4.3. La expresin diferencial de genes
y su regulacin
5. Mtodos de anlisis de la expresin
gnica
5.1. Hibridacin Northern
5.2. Reaccin de la polimerasa en cadena acoplada a la reaccin de la
transcriptasa reversa (RT-PCR)
5.3. Anlisis del perfil transcripcional
mediante el mtodo de
differential display de mRNAs
5.4. Hibridacin sustractiva
737
Sin ttulo-2
737
5/26/06, 10:26 AM
738
Sin ttulo-2
738
5/26/06, 10:26 AM
RESUMEN
Difcilmente existe una molcula ms importante que el DNA. Ella tiene codificada en su
estructura la informacin hereditaria que determina cmo son, cmo se reproducen y cmo funcionan los organismos vivos. Desde este punto de vista, podemos considerarla la molcula de la
vida.
El desarrollo de tcnicas de DNA recombinante y su aplicacin a la biologa, ha trado
consigo una revolucin de conocimientos que ha hecho que la gente de ciencia se replantee una
serie de conceptos acerca del conocimiento que se tiene de los organismos vivos en general.
Prcticamente no existen hoy reas de la biologa experimental moderna que no descansen de
cierto modo en alguna de estas nuevas tecnologas. Dado que la investigacin cientfica en las
ciencias de la vida est sujeta a una dinmica continua, sin duda que este tipo de aproximaciones
(y con seguridad otras por desarrollar) ayudarn a entender mejor el enigma del fenmeno vital.
1. INTRODUCCIN
codifican la informacin gentica que especifica la

estructura primaria de todas las protenas de un organismo vivo. Desde este punto de vista, la unidad fundamental de informacin de los organismos vivos es
el gen, definido como aquel segmento de DNA que
codifica la informacin necesaria y requerida para producir un producto biolgico funcional. Este ltimo
puede ser tanto una protena como una molcula de
cido ribonucleico particular.
Los procesos ms importantes que dan cuenta
de la utilizacin de la informacin gentica por parte
de la clula, estn enmarcados en el llamado Dogma
Central de la Biologa Molecular, el cual resume las
rutas generales de flujo de informacin a travs de los
complejos procesos celulares de replicacin, transcripcin y traduccin (figura 45-1).
Las Ciencias Biolgicas han sufrido una verdadera revolucin durante las ltimas dcadas.
Esto se ha debido, principalmente, al desarrollo
de una serie de metodologas que han permitido
una mejor aproximacin experimental, para estudiar y comprender los mecanismos y/o estructuras moleculares subyacentes a complejos procesos como el crecimiento, metabolismo, diferenciacin y divisin de la clula. Estas tcnicas adems han posibilitado manipular y modificar in vitro
molculas claves que se encuentran involucradas
en dichos procesos. Esto ltimo es importante,
pues de este modo se puede correlacionar la estructura y funcin de estas molculas al observar
los cambios que ocurren en un organismo particular cuando se han reincorporado a l molculas
que han sido alteradas en el tubo de ensayo.
En forma resumida se describirn los mtodos fundamentales de la Biologa Molecular. Antes se har una breve resea de la molcula de DNA.
2. BASES DE LA BIOLOGA MOLECULAR

Entre los actores macromoleculares ms importantes de la clula se encuentran los cidos nucleicos
(DNA y RNA) y las protenas. Ellos son polmeros
lineales compuestos por subunidades nucleotdicas y
aminoacdicas, respectivamente. Los cidos nucleicos
Figura 45-1. El Dogma Central de la Biologa Molecular. El

DNA se replica obtenindose una copia idntica, se transcribe a
mRNA y se traduce en una protena en los ribosomas.
739
Sin ttulo-2
739
5/26/06, 10:26 AM
2.1. El DNA es el material gentico
do a partir de 4 desoxirribonucletidos precursores, los cuales a su vez se encuentran constituidos

por una base nitrogenada, un azcar de 5 tomos
de carbono (desoxirribosa) y un grupo fosfato.
Las bases nitrogenadas son compuestos
heterocclicos, planares, que derivan de dos compuestos orgnicos parentales, la purina y la
pirimidina. Las bases pricas que se encuentran
en el DNA son la adenina y la guanina, mientras
que las pirimdicas estn representadas por la
timina y la citosina (figura 45-2). Las bases se encuentran unidas covalentemente a travs de enlaces N-glicosdicos (N1 de las pirimidinas y N9 de
las purinas) al carbono 1 de la desoxirribosa. El
grupo fosfato entretanto, se encuentra esterificando
el carbono 5 del azcar.
Los desoxirribonucletidos son as compuestos solubles que, en soluciones acuosas, absorben
fuertemente la luz ultravioleta en la regin de 260
nm. Es esta propiedad, precisamente, la que es explotada para cuantificar la concentracin de ellos
Entre las numerosas propiedades de los organismos vivos, hay una que es esencial para la continuacin de la vida: un organismo debe ser capaz
de replicarse y para hacerlo, debe poseer una descripcin completa de s mismo. Esta descripcin es
una forma de informacin, un conjunto de instrucciones que especifican cada paso necesario para que
la clula construya una rplica idntica de s misma. Como cada generacin engendra la siguiente,
los descendientes han de recibir una copia del conjunto de instrucciones para que a su vez, puedan
replicarse. En una clula, la informacin necesaria
para replicarse se encuentra en el material gentico
como una macromolcula llamada DNA.
2.2. Componentes del DNA
Este material gentico celular, el cido
desoxirribonucleico, es un biopolmero ensambla-
Figura 45-2. Componentes de los cidos nucleicos. Una base nitrogenada (purina o pirimidina) ms un azcar (ribosa o 2
desoxirribosa) forman un nuclesido, que al unrsele una molcula del cido fosfrico forma un nucletido, los cuales estructuran
los cidos nucleicos (DNA y RNA). Se muestran las estructuras de las bases nitrogenadas y azcares.
740
Sin ttulo-2
740
5/26/06, 10:26 AM
(y por ende, de cidos nucleicos en general) en

una fraccin de material biolgico determinada.
sintetizar el cido nucleico en cuestin. sta agrega, normalmente, slo la base correcta, la cual es
especificada por la hebra molde durante la
elongacin de la hebra nueva. Es precisamente la
constancia y especificidad de este apareo de bases complementarias lo que constituye la base de
la funcin del DNA como depositario de la informacin gentica.
Una caracterstica crucial de la estructura
general del DNA es que ella es independiente de
la secuencia particular de los nucletidos constituyentes, la cual a su vez es importante no slo en
el sentido de la estructura per se, sino que ella
define la secuencia de aminocidos que constituye el correspondiente polipptido. La relacin
entre la secuencia del DNA y la secuencia de la
protena correspondiente se conoce como cdigo
gentico.
2.3. Estructura del DNA

En la estructura primaria del cido desoxirribonucleico, los nucletidos se encuentran enlazados entre s a travs de puentes de grupos fosfato
formando largas cadenas. Especficamente, el grupo 5 OH de la desoxirribosa de un residuo est
unido al grupo 3 OH del azcar del nucletido
precedente a travs de un enlace fosfodister. Todos los enlaces de este tipo en el DNA tienen la
misma orientacin a lo largo de la cadena, dndole a sta una polaridad con extremos 5 y 3 bien
definidos. Cadenas de estas subunidades de DNA
existen como dos hebras asociadas en polaridad
opuesta con respecto al esqueleto azcar-fosfato
(antiparalelas), enrolladas una alrededor de la otra
formando una estructura de doble hebra o dplex
(figura 45-3).
3. LAS NUEVAS TECNOLOGAS

Muchos mtodos de amplia utilizacin en laboratorios de Biologa Molecular en general, sacan partido de la relativa simpleza de los sistemas
celulares procariticos como las bacterias. En
procariotes, la secuencia lineal de DNA se corresponde directamente con las secuencias lineales del
RNA y la protena. Sin embargo, en eucariotes la
informacin que determina una protena en el DNA
posee a menudo interrupciones (intrones) en la
secuencia traducible. El DNA eucaritico es as
primero copiado en un transcrito primario (RNA
heteronuclear, ARNhn), el cual es procesado en el
ncleo por escisin de las secuencias que determinan la protena (exones). stos son unidos
linealmente en el RNA maduro, el cual puede seguir siendo procesado antes de ser exportado al
citoplasma para su traduccin en la protena correspondiente.
El conocimiento y la comprensin de la estructura, funcin, regulacin y organizacin de
los genes y/o sus productos dentro de la clula,
resultan claves para la realizacin de un estudio
serio de un sistema biolgico dado. Como punto
de partida para ello, el investigador de hoy debe
ser capaz de obtener y estudiar un gen determinado en forma aislada in vitro.
En este sentido, el desarrollo de tcnicas de
clonamiento molecular del DNA ha provisto de
poderosos mecanismos para aislar segmentos discretos y nicos de DNA desde una poblacin de
genes, purificarlos a homogeneidad y amplificar-
Figura 45-3. Apareamiento especfico entre bases complementarias de las hebras antiparalelas del dplex de DNA.
Adenina (A), timina (T), guanina (G) y citosina (C).
Ambas hebras del dplex se asocian establemente entre s, debido al potencial de formacin de
puentes de hidrgeno entre bases especficas en
una hebra con bases definidas en la hebra opuesta
o complementaria. La base adenina aparea siempre con timina (2 enlaces de hidrgeno) y guanina
siempre lo hace con citosina (3 enlaces de hidrgeno). La fidelidad del correcto apareo de bases
est dada por la maquinaria celular encargada de
741
Sin ttulo-2
741
5/26/06, 10:27 AM
los de modo de producir suficiente material para

realizar anlisis genticos, qumicos y
bioqumicos.
racterizadas para copiar, cortar y unir fragmentos

especficos de DNA. Luego de hacer que formen
parte de crculos de DNA autorreplicativos (generalmente plasmidios bacterianos o algunos virus), estas molculas pueden ser introducidas a
clulas vivas mediante la utilizacin de tcnicas
relativamente simples de practicar, aun cuando no
siempre bien comprendidas. Luego de mltiples
ciclos de duplicacin celular, las molculas
hbridas pueden ser reaisladas y purificadas, generando cantidades suficientes del material
clonado (figura 45-5).
Una vez que se dispone del segmento de DNA
aislado y purificado, se puede determinar rpidamente su secuencia nucleotdica, lo cual lleva a la
prediccin de la secuencia de la protena codificada. La marcacin radiactiva de este fragmento
le permite al experimentador buscar copias de secuencias relacionadas en genomas complejos o
mRNA entre ms de un milln de secuencias no
relacionadas. Un ejemplo de ello ha sido el
clonamiento, expresin y produccin comercial de
interleuquinas.
Haciendo ingeniera del DNA clonado se puede permitir su expresin en bacterias o levaduras u
otras clulas eucariticas, convirtindose en fuentes abundantes de grandes cantidades de protenas
puras, las que pueden tener una gran importancia
mdica y/o econmica y que podran ser difciles
de conseguir por otros medios ms tradicionales.
3.1. Endonucleasas de restriccin

Muchos de los logros de la gentica
molecular en las ltimas dcadas se deben al descubrimiento de un tipo especial de enzimas, denominadas endonucleasas de restriccin. Estas son
enzimas aisladas de bacterias que tienen la habilidad de hidrolizar el cido desoxirribonucleico en
secuencias bien definidas, generando fragmentos
discretos de DNA.
Los segmentos de DNA generados por una
enzima particular, pueden ser separados en base a
sus tamaos relativos por electroforesis en geles
de agarosa o poliacrilamida, desde donde los fragmentos individuales pueden ser aislados y purificados (figura 45-4). Con los datos obtenidos se
puede construir un mapa fsico que representa una
verdadera "huella digital molecular" del cido
nucleico en cuestin.
3.2. Clonamiento del DNA
En general, el proceso de clonamiento se basa
en llevar a cabo determinadas reacciones
enzimticas en el laboratorio, utilizando generalmente enzimas bacterianas especficas y bien ca-
Figura 45-4. Las enzimas de restriccin hidrolizan el DNA en secuencias muy especficas. Aqu se muestra el caso de la
enzima Bst VI, que corta el DNA cada vez que en l est presente la secuencia indicada, generando extremos cohesivos complementarios (a). Esto posibilita la creacin de molculas hbridas de DNA al permitir el apareamiento especfico entre diferentes
ADNs que han sido previamente tratados con la misma enzima (b).
742
Sin ttulo-2
742
5/26/06, 10:27 AM
Figura 45-5. Clonamiento del DNA. El DNA a clonar es unido covalentemente a una molcula portadora llamada vehculo o
vector de clonamiento, la que puede ser un DNA plasmidial o viral. Una vez obtenida la molcula de DNA hbrida, sta es
introducida por transformacin a clulas que han sido preparadas para el efecto, las que luego son presionadas para desarrollarse
en un medio que contiene el antibitico particular. De este modo, slo aquellas clulas que hayan incorporado molculas conteniendo el gen de resistencia (y el DNA clonado) podrn desarrollarse.
Tambin se pueden concebir en el laboratorio versiones alternativas del DNA clonado, ya sea
cambiando su estructura y/o secuencia. Estas construcciones pueden ser reintroducidas en clulas aisladas o en animales vivos para estudiar los resultados de estos cambios (mutaciones) hechos por
el hombre y as tratar de entender ms cabalmente
el complejo fenmeno del funcionamiento y de la
regulacin de la expresin gnica.
ellos) pueden ser fcilmente identificados (figura 45-6).

3.4. Transformacin de clulas
Molculas de DNA que han sido manipuladas in vitro, pueden ser introducidas de una
forma relativamente fcil a clulas que han sido
preparadas para tal efecto. Clsicamente, en el
caso de bacterias esto se logra tratando previamente las clulas con soluciones de cloruro
de calcio. En el caso de eucariotes, el mismo
efecto se consigue depositando sobre una
monocapa de clulas el DNA a introducir, conjuntamente con sales de fosfato de calcio o
mediante el uso de ciertos virus que actan
como vectores.
3.3. Transferencia de Southern

Los fragmentos de DNA que han sido resueltos en un gel de agarosa por ejemplo, pueden
ser desnaturados y transferidos a filtros de nitrocelulosa u otro soporte slido donde quedan inmovilizados. De este modo, mediante
la utilizacin de sondas especficas de DNA
marcadas, genes determinados (o partes de
743
Sin ttulo-2
743
5/26/06, 10:27 AM
Figura 45-6. Mtodo de transferencia (blotting) de Southern. Esta metodologa permite realizar anlisis de hibridacin
DNA-DNA. Para ello, muestras de DNA de un espcimen dado son hidrolizadas utilizando enzimas de restriccin y sometidas a
electroforesis en geles de agarosa. Los fragmentos resueltos en el gel son desnaturados y transferidos a un soporte slido, usualmente membranas de nitrocelulosa, donde los fragmentos de DNA de una hebra quedan inmovilizados. Mediante el uso de sondas
especficas es posible determinar la existencia de secuencias homlogas en el material analizado.
El mtodo ha resultado adems una poderossima herramienta para el anlisis de genomas complejos, como el genoma eucaritico.
Permite determinar con precisin la existencia y el nmero de sitios de reconocimiento para endonucleasas de restriccin en un gen
determinado (los cuales son de mucha utilidad como puntos de referencia moleculares), adems del nmero de copias de se y
otros genes en el genoma. Por otro lado, en combinacin con el uso de varias enzimas de restriccin, el mtodo de transferencia de
Southern resulta muy til para determinar pequeas variaciones o polimorfismos en determinados genes.
3.5. Secuenciacin del DNA
rrollados para alcanzar este objetivo, siendo este

ltimo el de mayor aplicacin. Aun cuando ambos mtodos difieren en su parte operativa, ellos
se basan en el mismo principio: la generacin de
fragmentos discretos de DNA en que cada uno
contiene un desoxirribonucletido ms que el anterior.
En el caso particular del mtodo de Sanger,
se establecen cuatro mezclas de reaccin en que
cada una contiene los 4 desoxirribonucletidos
(uno de ellos marcado radiactivamente), el DNA
a secuenciar, un iniciador de sntesis especfico
(partidor o primer), una DNA polimerasa, adems de un 2-didesoxirribonucletido trifosfato
por tubo. La presencia de estos ltimos causar el
trmino de la elongacin de las cadenas prematuramente y al azar, generando segmentos de distin-
La determinacin del orden (secuencia) de

los desoxirribonucletidos en la cadena del DNA,
resulta de fundamental importancia para conocer
detalles ntimos de la estructura y funcin de esta
biomolcula primordial. A partir de ella se puede
deducir la existencia de marcos de lectura abiertos en una y otra hebra y por lo tanto, de acuerdo
al cdigo gentico, la secuencia aminocida de
la(s) protena(s) codificada(s). Tambin permite
determinar dnde empiezan y dnde terminan procesos como la transcripcin y traduccin, la
existencia de intrones, seales de control y procesamiento, etc.
Dos mtodos, uno qumico (Maxam y
Gilbert) y uno enzimtico (Sanger) han sido desa-
744
Sin ttulo-2
744
5/26/06, 10:27 AM
tos largos de DNA. Las mezclas obtenidas son

posteriormente resueltas por electroforesis en geles
de poliacrilamida en condiciones desnaturantes y
analizadas por autorradiografa (figura 45-7).
desnaturado trmicamente e hibridado a partidores

cortos (20-31 bases) que son complementarios a
las hebras del dplex a ambos lados de la regin
blanco. Utilizando una DNA polimerasa, se pueden extender las cadenas de DNA partiendo de
los extremos 3OH de cada partidor. Si la enzima
utilizada es termoestable, el ciclo completo puede
ser repetido una y otra vez, desnaturando por calor los productos de amplificacin y permitiendo
el apareamiento y reinicio de la sntesis de DNA
(figura 45-8). De este modo, una secuencia cualquiera puede ser amplificada ms de un milln de
veces en unos 25-31 ciclos, lo que constituye una
herramienta de eleccin en el anlisis molecular
de numerosos procesos biolgicos. Manipulando
3.6. Reaccin de la polimerasa en cadena

Una de las tcnicas ms poderosas desarrolladas ltimamente es la reaccin de la polimerasa
en cadena (PCR), la cual permite amplificar segmentos cortos de DNA genmico. Lo nico que
se requiere es conocer la secuencia de desoxirribonucletidos a ambos lados de la regin blanco que
va a ser amplificada.
Brevemente, el DNA a ser amplificado es
Figura 45-7. Determinacin de la secuencia de DNA por el mtodo de los didesoxirribonucletidos de Sanger. El DNA a
secuenciar (generalmente de una hebra) es hibridado a un partidor especfico que se encuentra marcado usualmente con 32P en su
extremo 5. Se adiciona una DNA polimerasa capaz de extender las cadenas y la mezcla se distribuye en cuatro tubos que contienen los 4 dNTPs adems de uno de los ddNTP por tubo. Una vez finalizada la reaccin, las mezclas de fragmentos marcados se
resuelven por electroforesis en geles muy delgados de poliacrilamida y la secuencia es finalmente leda del gel luego de la correspondiente autorradiografa.
745
Sin ttulo-2
745
5/26/06, 10:27 AM
adecuadamente las condiciones de hibridacin de

partidores especficos con el templado, el mtodo
puede ser utilizado para detectar mutaciones en
regiones muy pequeas y, por lo tanto, resulta adecuado para identificar diferencias de secuencia en
posiciones bien definidas del genoma. Una reciente tcnica que utiliza estos principios es la
hibrizacin de oligonucletidos alelo-especfica.
al genoma de una clula viva, es posible mediante

eventos de recombinacin de DNA homloga entre secuencias que residen en el cromosoma y secuencias introducidas a la clula. Si la receptora
es una clula troncal derivada del embrin,
pluripotencial, se puede transferir un gen modificado especficamente por manipulacin en el tubo
de ensayo a la lnea germinal de un organismo vivo
(figura 45-9). Este tipo de clulas ha sido aislado,
a la fecha, de embriones de ratn y de hamster y
se investiga sobre la posibilidad de obtenerlas a
partir de cerdo, ovejas, vacas, etc. Los animales
transgnicos han sido utilizados para un sinnmero de estudios, como por ejemplo: examinar el
efecto de genes que normalmente no se encuentran presentes in vivo, para expresar genes normales en clulas que normalmente no los expresan,
3.7. Animales transgnicos y knock out de

genes
Hoy es posible obtener animales transgnicos
introduciendo secuencias nuevas de material hereditario en clulas de la lnea germinal del organismo.
La transferencia de un gen modificado in vitro
Figura 45-8. Esquema de la reaccin de la polimerasa en cadena (PCR). Esta es una tcnica que representa una manera fcil y
eficiente de amplificar enormemente secuencias definidas de DNA (Ver texto).
746
Sin ttulo-2
746
5/26/06, 10:27 AM
los genes que ella posee.
para suprimir poblaciones de clulas especficas

con transgenes que expresan protenas txicas, etc.
As, los animales transgnicos representan poderosas herramientas (tubos de ensayo vivos) para
expresar genes que pueden ser dirigidos
especficamente a tipos especiales de clulas o
tejidos.
4.1. La estructura de los genes eucariticos

La estructura bsica de un gen consta de tres
elementos: la regin codificadora, la seal control del inicio de la transcripcin o promotor
transcripcional y la seal de trmino de la transcripcin o terminador (figura 45-10).
La regin codificadora contiene la informacin gentica que ser transcrita en una molcula
de RNA. Esta informacin est codificada en una
de las cadenas del DNA (la hebra codognica) en
tanto que la cadena complementaria (hebra molde) acta como templado para la generacin del
RNA respectivo. En el caso de genes que codifican para protenas, la regin codificadora contiene un marco de lectura abierta (ORF) el que corresponde a una sucesin continua de tripletes de
bases nitrogenadas o codones, comprendido entre
un triplete ATG (inicio del ORF) y un triplete sin
sentido (trmino del ORF). Esta sucesin de
codones especifica la estructura primaria de la protena codificada por el gen de acuerdo a la equivalencia codn:aminocido establecida en el cdigo gentico (figura 45-10a). Una caracterstica
importante de algunos genes eucariticos es la presencia de intrones. Ellos corresponden a secuencias de DNA sin codificacin para aminocidos
las que se intercalan en la regin codificadora generando interrupciones dentro del ORF. En consecuencia, los genes que contienen tales secuencias poseen una estructura segmentada en la que
se alternan exones (segmentos que contienen codificacin) e intrones (figura 45-10b). Incluido
dentro de la regin codificadora, se ubica el
terminador transcripcional. Este elemento corresponde a una secuencia particular de bases, las que
al ser transcritas permiten la formacin de una
estructura secundaria en el RNA, la que acta
como seal de trmino de la transcripcin.
En los genes eucariticos que codifican para
protenas, el promotor transcripcional se localiza
previo a la regin codificadora, en lo que se denomina regin ro arriba. Este elemento corresponde a una secuencia particular de bases
nitrogenadas, la cual al ser reconocida por el sistema transcripcional establece el punto de inicio
de la sntesis de RNA. Su presencia es esencial
para la realizacin del proceso de transcripcin.
Figura 45-9. Esquema que representa la obtencin de ratones transgnicos. En este caso, se
muestra la tcnica de microinyeccin de
proncleos. Tambin es posible lograr transferencias de genes mediadas por retrovirus o por clulas troncales de la lnea germinal del animal.
4. LA EXPRESIN GNICA EN ORGANISMOS EUCARITICOS

El trmino "expresin gnica" ha sido acuado para referirse a la sumatoria de eventos que
conducen a la aparicin del producto codificado
por un gen determinado (RNA o protenas), en su
forma activa y en el lugar donde ejercern su rol
biolgico. En eucariotes, este proceso reviste especial complejidad a causa de la organizacin y
estructura tanto de la clula eucaritica como de
747
Sin ttulo-2
747
5/26/06, 10:27 AM
Figura 45-10. Estructura de genes eucariticos. Dos tipos de genes estn presentes en los organismos eucariticos: genes sin
intrones (a) y genes con intrones (b). P: promotor transcripcional, T: terminador de la transcripcin.
4.2 El proceso de expresin gnica y sus

etapas.
son transcritos por el sistema de la RNA

polimerasa II y sus factores de transcripcin
asociados. En un primer evento, los factores
de transcripcin generales (comunes para todos los genes transcritos por la RNA
polimerasa II) reconocen y se unen en forma
secuencial al promotor transcripcional de tales genes generando el complejo de iniciacin.
En un segundo evento la RNA polimerasa II
se une al complejo de iniciacin y comienza
la sntesis de un RNA complementario a la
hebra molde de la regin codificadora, la que
procede hasta la regin del terminador
transcripcional. En el caso de genes sin
intrones, se sintetiza un precursor de mRNA
(pre-mRNA) que contiene un ORF continuo.
Para los genes que contienen intrones se producir un pre-mRNA, tambin denominado
RNA heterogneo nuclear (hnRNA) el que
En los organismos superiores, la expresin gnica

es un proceso de alta complejidad que involucra
una serie de etapas. Si se considera el caso de genes
que codifican para protenas, la aparicin del
polipptido codificado por un gen particular en su
forma tridimensional activa y en la localizacin
intra o extracelular donde ejercer su funcin incluye los siguientes eventos: a) transcripcin, b)
procesamiento postranscripcional, c) traduccin,
d) procesamiento postraduccional, e) transporte de
la protena y f) plegamiento de la protena (figura
45-11).
a) Transcripcin. En el ncleo de la clula
eucaritica, existen tres sistemas transcripcionales. Los genes que codifican protenas
748
Sin ttulo-2
748
5/26/06, 10:27 AM
contiene secuencias provenientes tanto de los

exones como de los intrones y por lo tanto el
ORF se encuentra interrumpido.
algunas protenas mitocondriales y de

cloroplasto en clulas vegetales, las protenas localizadas en los diferentes organelos
celulares son codificadas por genes nucleares, realizndose su traduccin en el citoplasma. En consecuencia, las protenas sintetizadas deben ser dirigidas hacia los diferentes
compartimentos intra o extracelulares donde
ejercern su funcin. Para ello, en la estructura primaria de cada polipptido se incluye
una secuencia de aminocidos que acta como
seal de destinacin. As, por ejemplo, las protenas extracelulares poseen un pptido seal
que indica que ellas deben ser sintetizadas en
ribosomas asociados al RE y, por consiguiente, son dirigidas hacia la ruta de secrecin de
protenas. Por su parte una seal diferente
opera para dirigir protenas hacia el ncleo o
mitocondrias. Estas seales de destinacin son
interpretadas por un complejo sistema de
transporte que determina finalmente el trfico intracelular de protenas.
b) Procesamiento postranscripcional. Previo

a abandonar el ncleo, el pre-mRNA debe ser
procesado a fin de generar el mRNA maduro.
Tal procesamiento implica, la modificacin
de ambos extremos de la molcula a fin de
aumentar su estabilidad. En el extremo 5 se
produce la reaccin de capping que hace al
mRNA refractario a la accin de
ribonucleasas. En el extremo 3 se realiza la
reaccin de poliadenilacin o adicin de una
cola de poliAMP, razn por la cual los mRNA
tambin de denominan RNA poliA+. En el
caso del hnRNA se incluye adems el
"splicing" o remocin de las secuencias de
RNA provenientes de los intrones a fin de
generar un ORF continuo. Una vez concluido el procesamiento, el mRNA maduro es
transferido al citoplasma para su posterior traduccin.
f)
c)
Traduccin. El mRNA maduro generado en

la etapa anterior se une al ribosoma, donde el
mensaje contenido en esta molcula es descifrado para sintetizar la protena codificada.
En este proceso, cada triplete del ORF es interpretado de acuerdo al cdigo gentico para
asignar el aminocido correspondiente en la
estructura primaria del polipptido. Dependiendo del destino final de la protena a sintetizar, la traduccin se verificar en
ribosomas libres (protenas intracelulares) o
en ribosomas unidos al retculo endoplsmico
(protenas de membrana o extracelulares).
d) Procesamiento postraduccional. Un gran

nmero de protenas y polipptidos celulares
son sintetizados como precursores, por lo que
no poseen su estructura tridimensional activa, debiendo ser procesados para cumplir su
funcin biolgica. Las modificaciones
postraduccionales ms comunes son: procesamiento proteoltico, adicin de carbohidratos o glicosilacin (protenas de membrana y extracelulares), fosforilaciones, adicin
de aminocidos al extremo amino o carboxilo
terminal y adicin de grupos prostticos, entre otras.
e)
Plegamiento de protenas. Esta es ltima

etapa del proceso de expresin gnica y se
produce en forma coordinada con los eventos de procesamiento pos traduccional y transporte. La protena expresada adopta finalmente su estructura tridimensional definitiva, lo
que le permite cumplir con su rol funcional
en la localizacin que le corresponde. El plegamiento incluye la adopcin de la estructura terciaria de la protena a travs de la
interaccin entre los grupos laterales de los
aminocidos que la constituyen y, en el caso
de protenas que poseen estructura cuaternaria, la interaccin entre los diferentes
polipptidos o subunidades que la conforman.
4.3. La expresin diferencial de genes y su regulacin

An cuando todas las clulas de un organismo poseen la misma informacin gentica, los distintos tipos celulares que lo componen poseen caractersticas estructurales y funcionales diferentes y por consiguiente poseen un patrn de expresin gnica que les es caracterstico. Cada clula
de un organismo expresa slo aquella fraccin de
la informacin gentica contenida en su genoma
que le permita producir las protenas requeridas
para el desarrollo de la funcin que le es propia,
Transporte de protenas. Con excepcin de
749
Sin ttulo-2
749
5/26/06, 10:27 AM
Figura 45-11. Etapas del proceso de expresin gnica en eucariotes
generando as un perfil de expresin gnica tejido

o clula-especfico. Del mismo modo, tal patrn
de expresin gnica puede ser modificado en respuesta tanto a condiciones o seales exgenas (por
ej. factores medioambientales), como de naturaleza endgena (por ej. programas de desarrollo y
diferenciacin celular, estableciendo de esta manera perfiles de expresin estadio-especficos. La
expresin tejido y/o estadio especfica, es lo que
se denomina expresin diferencial de genes.
En el contexto anterior, y considerando su
modo de expresin, los genes pueden ser clasificados en dos grupos. La primera categora corresponde a los denominados genes "housekeeping",
la que incluye a todos aquellos que codifican para
protenas esenciales para el funcionamiento basal
de la clula por lo que son expresados en forma
constante o constitutiva. La segunda categora in-
cluye a los genes de expresin regulada, esto es,

genes cuya expresin no es permanente sino que
aparece inducida o reprimida en respuesta a condiciones particulares. No obstante que la regulacin de la expresin de estos genes puede ser ejercida a varios niveles dentro de este proceso, la gran
mayora de los mecanismos regulatorios opera a
nivel transcripcional. En forma general, tales mecanismos involucran la interaccin especfica entre dos tipos de elementos regulatorios: elementos cis y elementos trans. Los elementos cis, tambin denominados enhancers, corresponden a
pequeas secuencias especficas de bases
nitrogenadas, generalmente localizadas ro arriba
de la regin codificadora. Tales elementos (adicionales al promotor transcripcional) son caractersticos de los genes de expresin regulada y no
se encuentran presentes en los genes constituti-
750
Sin ttulo-2
750
5/26/06, 10:27 AM
cis presente en todos los genes que respondern a

la accin hormonal (figura. 45-13a). En forma
anloga, otros sistemas de transduccin de seales involucran la participacin de protenas
quinasas especficas, las que al fosforilar un factor de transcripcin determinado producen su activacin, posibilitando su unin a su respectiva secuencia blanco en la regin regulatoria de los genes
bajo su control (figura. 45-13b)
La capacidad de un organismo para responder a una gran variedad de seales externas e internas determina la existencia de una compleja red
de vas de transduccin de seales y de mecanismos moduladores de la expresin gnica. La diversidad de sistemas regulatorios que operan en
un organismo eucaritico requiere de una gran cantidad de elementos cis y trans distintos. Estimaciones para algunas especies indican que aproximadamente el 10% de los genes presentes en su
genoma codifican para factores de transcripcin
especficos.
vos. Por su parte, los elementos trans corresponden a un tipo particular de protenas de unin a
DNA, las que al reconocer y unirse a un elemento
cis particular, actan como factores de transcripcin especficos. La interaccin entre ambos elementos facilita la unin de los factores de transcripcin generales y la RNA polimerasa II al promotor, induciendo la transcripcin del gen sometido a regulacin (figura. 45-12).
La unin de los factores de transcripcin especficos a su respectiva secuencia blanco o
enhancer corresponde generalmente a la etapa
final de una va de transduccin de seales. A
modo ejemplo, en el mecanismo de activacin de
la expresin gnica por hormonas esteroidales del
tipo glucocorticoides la hormona ingresa al citoplasma de la clula blanco donde se une a su receptor especfico, el que corresponde a un elemento trans inactivo. El complejo hormona-receptor constituye el factor de transcripcin activo que
migra al ncleo donde se une al GRE
(glucocorticoid responsive element), elemento
Figura 45-12. Interaccin entre elementos reguladores cis y trans durante la regulacin de la expresin gnica.
751
Sin ttulo-2
751
5/26/06, 10:27 AM
Figura 45-13. Mecanismos de activacin de la expresin gnica en respuesta a seales externas. a) Activacin de la transcripcin inducida por hormonas esteroidales y la secuencia de eventos involucrados (etapas 1-5). b) Activacin en respuesta a otro tipo
de factores exgenos (hormonas peptdicas, seales de estrs, elicitores, etc.). La secuencia de los principales eventos asociados a
este tipo de mecanismos se describe en las etapas 1-7.
5.1. Hibridacin Northern
5. MTODOS DE ANLISIS DE LA EXPRESIN DIFERENCIAL DE GENES
Esta tcnica se deriv de la hibridacin

Southern descrita anteriormente en este captulo (3.). En este mtodo lo que se persigue es detectar la presencia de un transcrito proveniente de
un gen especfico dentro de la poblacin total de
RNAs presentes en una clula o de un tejido determinado. A diferencia de la hibridacin
Southern, el RNA total obtenido desde las clulas de un tejido es sometido a un fraccionamiento
por tamao mediante electroforesis en geles
desnaturantes de agarosa/formaldehdo. Posteriormente el RNA fraccionado es transferido a una
membrana de nailon o un filtro de nitrocelulosa
Dado que la gran mayora de los mecanismos regulatorios de la expresin gnica operan a
nivel de la iniciacin de la transcripcin, los mtodos de anlisis de la expresin gnica ms corrientemente utilizados se dirigen hacia la deteccin de transcritos de RNA especficamente generados en tejidos determinados y/o en condiciones particulares. Las tcnicas a utilizar varan dependiendo del propsito del anlisis: el estudio de
la expresin de un gen especfico o la determinacin del perfil global de expresin gnica en una
muestra determinada.
752
Sin ttulo-2
752
5/26/06, 10:27 AM
en forma anloga a como se describe para la

transferencia Southern. El RNA adherido a la
membrana es sometido a hibridacin con una
sonda molecular la que generalmente corresponde a un fragmento del gen cuya expresin se
desea analizar y que ha sido marcado
radiactivamente. Tal hibridacin es realizada en
condiciones de temperatura y fuerza inica que
permitan el apareo de la sonda slo a molculas
de RNA con las que posea un alto grado de
complementariedad. Tras una serie de lavados
que remueven la sonda adherida en forma
inespecfica la membrana es expuesta a una placa autorradiogrfica que permite detectar la presencia de secuencias de RNA complementarias
a la sonda molecular (figura 45-14). Este mtodo, an cuando posee algunas desventajas, es
ampliamente utilizado. Su sensibilidad, baja si
se compara con otros mtodos de reciente desarrollo, dificulta su aplicacin para la deteccin
de genes dbilmente expresados.
5.2. Reaccin de la polimerasa en cadena acoplada a la reaccin de la transcriptasa

reversa (RT-PCR)
La asociacin de la tecnologa de PCR a la
reaccin catalizada por la enzima transcriptasa
reversa, ha permitido desarrollar una poderosa herramienta para el anlisis de la expresin de un
gen en particular. La transcriptasa reversa es una
DNA polimerasa sintetizada en clulas infectadas
por retrovirus la que se caracteriza por utilizar
mRNA como templado para sintetizar un DNA de
doble cadena complementario al molde (cDNA).
En la primera etapa de este mtodo, el RNA poliA+
(mRNA total) obtenido de las muestras en estudio
es utilizado como molde para sintetizar un cDNA
de cadena simple complementario, utilizando
como partidor oligodT12-18 (polmero de dTMP de
12-18 nucletidos de largo), el que se aparea con
la extensin de poliadeninas presente en los
mRNAs eucariticos. En esta reaccin se obtiene
una coleccin de cDNAs representativa de todos
los genes expresados en la muestra analizada. En
la segunda etapa se determina si en la poblacin
de cDNAs sintetizados por la transcriptasa reversa
est representado el producto de expresin de un
gen determinado. Para ello la coleccin de cDNAs
es utilizada como molde en una reaccin de PCR
estndar, en condiciones similares a las descritas
anteriormente en este captulo. Como partidores
para la amplificacin del DNA se utiliza
oligonucletidos de secuencia complementaria a
regiones especficas del gen cuya expresin se
investiga. Los productos de amplificacin generados son analizados por electroforesis en geles
de agarosa o poliacrilamida. La aparicin de un
fragmento de DNA del tamao esperado es indicativo de la efectiva expresin del gen en estudio
(figura 45-15). Las principales ventajas de la tcnica descrita son su alta sensibilidad y la rapidez
del anlisis.
5.3. Anlisis del perfil transcripcional mediante el mtodo de differential display de
mRNAs.
Esta tcnica corresponde a una variacin del
mtodo de RT-PCR, adaptada para la deteccin
de grupos de genes cuya expresin es inducida o
reprimida en un tejido especfico o en determinadas situaciones. Para ello es necesario establecer
el perfil de mRNAs presentes tanto en la muestra
problema y contrastarlo con el de una muestra
Figura 45-14. Esquema del mtodo para la deteccin de la

expresin especfica de genes mediante hibridacin
"Northern".
753
Sin ttulo-2
753
5/26/06, 10:27 AM
Figura 45-15. Deteccin de la expresin especfica de genes mediante la reaccin de la polimerasa en cadena acoplada a la
transcriptasa reversa (RT-PCR). La deteccin de transcritos especficos en el tejido 2 es verificada mediante el usos de partidores
especficos para el gen en anlisis (GSP1 y GSP2)
control. Ello significa seleccionar dos tejidos diferentes (para el anlisis de expresin tejido-especfica) o bien el mismo tejido sujeto a dos condiciones experimentales distintas (anlisis de expresin inducida por factores exgenos y
endgenos). Dado que la cantidad de transcritos
distintos presentes en una clula (10-20 mil) excede la capacidad de anlisis, la poblacin global
de mRNAs debe ser previamente dividida en
subpoblaciones. Este fraccionamiento se realiza a
nivel de la sntesis de cDNA por la transcriptasa
reversa. Para ello se requiere de partidores cuya
secuencia nucleotdica corresponde a la estructura general 5-TTTTTTTTTTTTMN-3, donde
M:= A, G o C y N=A, G, C, o T. En consecuencia,
existen 12 oligonucletidos posibles, cada uno de
los cuales se aparear slo a una fraccin del RNA
poliA+ y generar una subpoblacin de cDNAs
de cadena simple. A modo de ejemplo, al emplear

el partidor T11CG, se seleccionar como molde
para la sntesis de cDNA slo a los mRNAs que
posean en su extremo 3 la secuencia 5CGAAAAAAAAAAAA-3, por consiguiente
los cDNA obtenidos representarn slo una fraccin
de los mRNAs presentes en la muestra analizada.
En la segunda etapa de este mtodo, la
subpoblacin de cDNAs generada en la reaccin
de la transcriptasa reversa es empleada como
sustrato en una reaccin de PCR. Como partidores
se utilizan el oligonucletido T11MN empleado
para la sntesis de cDNA y un decmero de secuencia arbitraria (AP), el cual se aparear al azar
sobre el cDNA molde. Los parmetros de amplificacin y en particular la temperatura de apareo
se han modificado respecto de una reaccin
estndar a fin de maximizar la unin de los
754
Sin ttulo-2
754
5/26/06, 10:27 AM
tificar grupos de genes expresados diferencialmente en un tejido determinado y en una condicin experimental particular. Existen numerosas variantes de este mtodo, una de las cuales se
describe a continuacin (figura 45-17).
Como en el mtodo anterior se requiere una
muestra de referencia adems de la muestra problema. Ambas muestras son procesadas para la extraccin y purificacin del RNA poliA+. A partir
del RNA poliA+ total de la muestra problema, se
sintetizan los respectivos cDNAs de doble cadena. Tales cDNA son posteriormente ligados a un
vector de clonamiento molecular e introducidos
mediante transformacin en clulas de E. coli, de
acuerdo a los mtodos descritos anteriormente en
este captulo. Se obtiene as lo que se denomina
una genoteca de expresin, esto es, una coleccin
de bacterias que en su conjunto contienen todos
los genes expresados en la muestra en estudio. Una
rplica de esta genoteca es transferida a un filtro
partidores al molde. La reaccin de PCR se realiza

en presencia de S35-a-dATP a fin de generar fragmentos marcados radiactivamente. Los productos de
amplificacin son analizados mediante electroforesis
en geles desnaturantes de poliacrilamida/urea y analizados mediante autorradiografa (figura 45-16). Los
resultados que se generan en este anlisis corresponden a un perfil parcial de los mRNAs presente en un
tejido o tipo celular especfico y en una condicin
experimental determinada. La comparacin del patrn obtenido con aquel determinado para otro tejido o para el mismo tipo celular pero en diferentes
condiciones experimentales, permite identificar los
genes cuya expresin es inducida o reprimida en cada
situacin.
5.4. Hibridacin sustractiva
Esta tcnica es una alternativa al differential
display y como ella se utiliza para detectar e iden-
Figura 45-16. Identificacin de transcritos diferencialmente expresados mediante la tcnica de differential display de
mRNAs.
755
Sin ttulo-2
755
5/26/06, 10:27 AM
de nitrocelulosa y procesada para hibridacin.

Paralelamente, una fraccin del mRNA de la muestra problema es empleada para sintetizar su respectivo cDNA de hebra simple, generando una
coleccin representativa de todos los mRNAs presentes en la muestra problema. Esta coleccin es
hibridada con un gran exceso de RNA poliA+ de
la muestra de referencia. En estas condiciones todos los mRNAs de la muestra de referencia comunes con los de la muestra problema se aparearn
con el respectivo cDNA, formando hbridos
cDNA/mRNA. Los cDNAs correspondientes a
mRNAs especficos de la muestra problema permanecern al estado de hebra simple y pueden ser
separados de los dplex cDNA/mRNA. Tales
cDNA son marcados radiactivamente y utilizados
como sondas moleculares para hibridacin con los
filtros de nitrocelulosa que contienen a la genoteca
de expresin. Tras la exposicin autorradiogrfica,
las seales de hibridacin positiva indican la presencia de clones bacterianos conteniendo genes
de expresin especfica en la muestra problema.
LECTURAS SUGERIDAS
Alberts, A.; Bray, D.; Lewis, J.; Raff, M.; Roberts, K.
y Watson, J.D., Molecular Biology of the cell, 3rd
Edition, Garland Publishing Inc., New York, 1994.
Brown, T.A., Genomes, Bios Scientific Publishers, John Willey & Sons Inc., New York, 1999.
Glick, B. y Pasternak, J., Molecular Biotechnology,
ASM Press, Washington D.C., 1994.
Lewin, B., Genes VII, Oxford University Press,
2000.
Watson, J.D., Gilman, M.; Witkowski, J. y Zoller,
M., Recombinant DNA, 2nd Edition, Scientific
American Books, 1992.
Figura 45-17. Mtodo de hibridacin sustractiva para la deteccin y aislamiento de genes diferencialmente expresados.
756
Sin ttulo-2
756
5/26/06, 10:27 AM

Captulo 46
GRUPOS DE DIFERENCIACIN ANTIGNICA
Ivn Palomo G., Flavio Carrin A. y Cristin Rodrguez G.
1. Introduccin
2. Estructura de los antgenos de
membrana
2.1. Protenas de transmembrana tipo I
2.2. Protenas de transmembrana tipo II
2.3. Protenas de transmembrana tipo
III
2.4. Protenas ancladas a glicofosfatidilinositol
3. Molculas CD asociadas a lneas
celulares
3.1. Molculas CD expresadas principalmente en "stem cell"
3.2. Molculas CD expresadas principalmente en clulas B
3.3. Molculas CD expresadas principalmente en clulas T

3.4. Molculas CD expresadas principalmente en clulas NK
3.5. Molculas CD expresadas principalmente en granulocitos
3.6. Molculas CD expresadas principalmente en monocitos-macrfagos
3.7. Molculas CD expresadas principalmente en plaquetas
4. Familias de molculas CD
5. Algunas aplicaciones de la nomenclatura CD en Inmunologa
757
Sin ttulo-2
757
5/26/06, 10:27 AM
758
Sin ttulo-2
758
5/26/06, 10:27 AM
RESUMEN
En este captulo se muestra los criterios generales utilizados en la clasificacin de las molculas CD. Fundamentalmente fue la produccin de anticuerpos monoclonales por diferentes centros y que reconocan las mismas molculas lo que impuls a los investigadores a realizar talleres
tendientes a universalizar la nomenclatura a usar.
Como una forma de facilitar la comprensin de las caractersticas estructurales de las molculas CD, se describe las cuatro formas en que las protenas de membrana se orientan en ella o se
unen a la membrana: protenas de transmembrana tipos I, II y III, y unidas a Protenas.
Se han descrito ms de 240 molculas CD. De estas molculas, existen algunas que principalmente se expresan en algunas lneas celulares; a modo de ejemplo: CD19 (LB), CD3 (LT),
CD56 (clulas NK), CD66a (granulocitos), CD14 (monocitos-macrfagos) y CD61 (plaquetas).
Algunas molculas CD presentan similitud estructural entre s y en algunos casos con otras
protenas no incluidas en esta clasificacin. As hay molculas CD que integran algunas familias
de protenas, como por ejemplo: Superfamilia de las Ig, Familia de las lectinas, Tetra-span
family", etc.
En los ltimos aos, se ha empezado a usar la nomenclatura CD en clnica, as por ejemplo
se usa en SIDA, inmunodeficiencias primarias, leucemias agudas, etc.
rar la reactividad de los anticuerpos monoclonales

con clulas hematopoyticas de diferentes linajes.
Los organizadores del taller separaron los
anticuerpos en una serie de paneles codificados
sobre la base de especificidad putativa de los
anticuerpos. Los paneles fueron distribuidos a investigadores de 55 laboratorios quienes usaron
los anticuerpos para inmunotipificacin, anlisis
de unin cuantitativo, estudios inmunoqumicos
de las estructuras reconocidas por los anticuerpos
y estudios funcionales. Los datos obtenidos en los
laboratorios fueron tabulados por los organizadores, quienes desarrollaron una nmina tentativa de
especificidades. Los anticuerpos monoclonales
que tienen patrones de reactividad similares con
varios tejidos, tipos de clulas y/o molculas, se
asignaron a un grupo de diferenciacin ("Cluster
of Diferentiation, CD), seguido de un nmero.
Se agrega un sufijo "w" a los CD que estn siendo sometidos a estudio en los talleres o
worshops. La designacin CD tambin se usa
para identificar la molcula que reconoce el anticuerpo monoclonal, y en tal caso es ms adecuado hablar de molcula CD. La posterior determinacin de la funcin y estructura molecular de
estos antgenos ha permitido un mayor entendimiento de las interacciones celulares involucradas
1. INTRODUCCIN
Alrededor de 1980, cinco aos despus que
Kohler y Milstein publicaron un mtodo para obtener anticuerpos monoclonales a partir de la fusin de clulas de ratn y una lnea celular de
mieloma mltiple, se iniciaron los trabajos de produccin de estos anticuerpos en varios centros de
investigacin.
La tecnologa de los anticuerpos monoclonales (ver captulo 44) revolucion la clasificacin de los antgenos celulares de superficie. La
especificidad de estos anticuerpos permiti identificar y estudiar protenas de la membrana de
linfocitos, plaquetas, monocitos y granulocitos,
que usando heteroantisueros preparados en conejos no haban sido descritas.
La produccin de anticuerpos monoclonales
en diferentes centros, condujo a que anticuerpos
con diferente nombre reconocieran una misma molcula, debido a que la denominacin de los
anticuerpos inclua abreviaciones de los nombres
de los investigadores que los producan o de sus
instituciones. Esta situacin motiv a que en 1982
se realizara en Pars el Primer Taller (workshop)
Internacional sobre Antgenos de Diferenciacin
de Leucocitos, que tuvo como propsito compa-
759
Sin ttulo-2
759
5/26/06, 10:27 AM
en la respuesta inmune.
Los workshops sobre CD se organizan en
secciones dedicadas a: a) clulas B, b) clulas T,
c) clulas NK, d) clulas mieloides, e) plaquetas,
f) clulas endoteliales, g) molculas de adhesin
y h) receptores de citoquinas. El VI workshop
realizado en Kobe, Japn en noviembre de 1996
privilegi la clasificacin de las molculas CD
segn participaran en la respuesta inmune y/o res-
puesta inflamatoria. Las bases de datos actualizadas sobre molculas CD se puede obtener desde
Internet a trves de algunas de las siguientes direcciones: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/prow/,
http://www.immunologylink.com/CDantigen.htm,
www.hlda.org o http://members.aol.com/
researchd1/rdicdabs/cdindex.htm. Actualmente
se han descrito ms de 240 molculas CD (tabla 46-1).
Tabla 45-1. Principales caractersticas de los antgenos de grupos de diferenciacin (CD)

Designacin CD (Sinnimo)
Estructura molecular
Principal
expresin celular
CD1a
CD1b
CD1c
CD1d
43-49 kDa; asociada a

2
SFIg
Timocitos
corticales,
clulas
dendrticas
(incluyendo
clulas de
Langerhans); LB
(CD1c); epitelio
intestinal (CD1d)
Molcula MHC clase I

asociada a b2m. Puede
participar en la
presentacin antignica.
CD2 (T11; LFA 2;receptor

de eritrocitos de cordero)
45-58 kDa transmembrana tipo I

SFIg
Timocitos, LT,
clulas NK
Molcula de adhesin,
ligando de CD58(LFA-3);
activacin de LT
CD2R
45-58 kDa
SFIg
LT activados y
algunas clulas NK
Eptopo conformacional de
CD2, dependiente de
activacin.
Complejo de cinco
cadenas ( , , , , ) de
16-28 kDa c/u
LT, Timocitos
(T3; Leu-4)
Transduccin de la seal
como resultado del
reconocimiento antignico
por LT
(T4)
55 kDa; Protenas
transmembrana tipo I
SFIg
LT helper,
macrfagos y
clulas
dendrticas
Se une a molcula MHC

clase II. Transduccin de
seal va lck. Receptor de
gp120 de VIH-1 y VIH-2.
67 kDa; Protenas
LT; subpoblacin
Ligando de CD72
Receptor scavenger
de clulas B y
timocitos
En la activacin celular
y/o adhesin.
(T12)
100-130 kDa; Protenas

Receptor scavenger
Subpoblacin de
LT; timocitos y
algunos LB
Posiblemente juega un rol

en la transduccin de
seales
(Gp40)
40 kDa; Protenas
SFIg
Timocitos, LT,
clulas hematopoyticas pluripotenciales
Desconocida. Marcador para

clulas T en LLA y leucemia
a clulas indiferenciadas.
Compuesto por dos

cadenas de 33-34 kDa
expresado como dmeros
o
SFIg
LT citotxicos y
subpoblacin de
timocitos
monocitos,
Adhesin (se une a

molculas MHC clase I);
transduccin de seales
(T11-3)
CD3
CD4
CD5
involucrado
(T1;Lyt-1)
CD6
CD7
CD8
(T8; Leu-2; Lyt-2)
Funcin
760
Sin ttulo-2
760
5/26/06, 10:27 AM
CD9
22-27 kDa; Protenas

transmembrana tipo III
Molcula tetra-span
Plaquetas,
megacariocitos,
monocitos,
clulas pre-B,
eosinfilos,
basfilos y LT
activados
Participa en la agregacin
y activacin plaquetaria
(Neural endopeptidasa;
Common Acute Lymphocytic
Leukemia Antigen o CALLA)
100 kDa; Protenas

transmembrana tipo II
Clulas pre B, LB
de centros germinales,
algunos neutrfilos,
precursores de LT
y clulas epiteliales
Metaloproteasa dependiente
de Zn que rompe enlaces
peptdicos en el extremo
amino de los aminocidos
hidrofbicos. Marcador de
LLA.
CD11a
180 kDa, asociado con

CD18 forma la
integrina LFA-1;
Protenas
transmembrana tipo I.
Linfocitos,
neutrfilos,
monocitos y
macrfagos
Adhesin: unin a ICAM-1

(CD54), ICAM2 e ICAM-3.
170 kDa, asociado con

CD18 forma la
integrina CR3.
Protenas
ver CD11a
Granulocitos,
monocitos,
clulas NK y
subset de LT y LB
Ligando de CD54, iC3b y

protenas de la matriz
extracelular.
150 kDa, asociado a

CD18 forma integrina
CR4. Protenas
ver CD11a
Monocitos,
macrfagos,
neutrfilos,
clulas NK y
algunos LT y LB
Funcin similar a CD11b.

Une fibringeno
90-120 kDa
Monocitos,
neutrfilos y plaquetas
Desconocida

Granulocitos,
monocitos y
clulas mielomonocticas
Participa en la explosin
oxidativa
53-55 kDa; Protenas,

unida a Protenas I
Monocitos,
macrfagos,
neutrfilos,
algunas LB y
clulas dendrticas
Receptor para
lipopolisacrido (LPS) y
para el complejo LPS-LBP
(LPS-binding protein)
Pentasacrido
ramificado expresado
en glicolpidos y
Protenass de membrana.
Neutrfilos,
eosinfilos y
monocitos
Forma parte del grupo

Sialil Lewis X; ligando
para E-selectina (CD62E)
50-65 kDa
Clulas NK,
granulocitos y macrfagos
Componente del receptor Fc

de baja afinidad: ADCC y
activacin de clulas NK
Eptopo carboxihidratado
Monocitos,
neutrfilos y
plaquetas
Lactosilseramida
(lactosilceramida)
95 kDa; Protenas
La misma
distribucin que
CD11a, CD11b y
CD11c combinado
Ver CD11a, CD11b y CD11c
(2 Integrina)
(p24)
CD10
(cadena de LFA-1)
CD11b
CD11c
(p150,95; CR4)
CDw12
CD13
(gp150, aminopeptidasa
N)
CD14
(Mo2; gp55)
CD15 y CD15S
(Lewis X y Sialil
Lewis X)
CD15u
(Sulphated CD15)
CD16a
CD16b
(FcRIII)
CDw17
CD18
761
Sin ttulo-2
761
5/26/06, 10:27 AM
CD19
95 kDa; Protenas
SFIg
Todos los LB y
sus precursores
Forma complejo con CD21

CR2) y CD81 (TAPA-1).
Molcula accesoria de
transduccin de seales en
LB
Heterodmero de tres
cadenas de 33, 35 y 37
kDa; Protenas
Molcula tetra-span
LB
Posible papel en la
regulacin de la activacin
de LB.
145 kDa; Protenas

SF de protenas de
control del complemento
LB, clulas
dendrticas
foliculares,
farngeas y
clulas epiteliales
cervicales, algunos
timocitos, y
algunas LT
Receptor para C3d, tambin

relacionado con el virus de
Epstein-Barr. Con CD19 y
CD81 forma correceptor de
LB
135 kDa; Protenas

integral de membrana tipo I.
SFIg
LB
Participa en la adhesin
celular y activacin de LB
45 kDa; Protenas
LB maduras,
macrfagos
activados,
clulas dendrticas
foliculares y plaquetas
Receptor de baja afinidad

para IgE. Ligando para los
correceptores CD19,CD21,
CD81.
42 kDa; protena unida

a Protena tipo I
LB y Pre-B,
neutrfilos y al
menos el 2% de
los timocitos
Puede jugar un rol en la

induccin de la
proliferacin y/o
diferenciacin de LB
:55 kDa,SP de control

del complemento;
Protenas de
LT activados, LB
y monocitos
Cadena del receptor para

la IL-2. El receptor de alta
afinidad para la IL-2 est
compuesto por las cadenas
(CD25),y (CD122)
y (CD132)
110 kDa; Protenas

LT y B activados,
macrfagos
Dipeptidilpeptidasa IV,
Proteasa implicada en el
ingreso de VIH a la clula
110 kDa (55 cada

cadena); Protenas
SP de receptor NGF
LT maduros,
timocitos
medulares
Participa como seal

coestimulatoria en la
activacin de LT y LB
(Tp44)
44 kDa; Protenas
SFIg
Subpoblacin de
LT y timocitos.
LB activados
Receptor para seal

coestimuladora (segunda
seal). Ligando de CD80
(B7-1) y CD86 (B7-2)
130 kDa (Integrina 1)
Leucocitos
Subunidad 1 de integrinas.
Asociada a CD49 a forma

VLA-1. Adhesin a las
protenas de la matriz
extracelular, adhesin
clula-clula.
105-120 kDa. Protenas

SP de receptor NGF
LB y T activados
(Ki-1)
Se asocia a proliferacin
celular y muerte celular en
lneas celulares de
linfomas.
(B4)
CD20
(B1; Bp35)
CD21
(CR2; Receptor de C3d;
B2)
CD22
(BL-CAM)
CD23
(FcRII)
CD24
CD25
(TAC; IL-2R)
CD26
(Dipeptidilpeptidasa IV)
CD27
CD28
CD29
CD30
762
Sin ttulo-2
762
5/26/06, 10:27 AM
CD31

SFIg
Granulocitos,
plaquetas,
clulas
endoteliales,
monocitos
leucocito-endotelio
40 kDa
SFIg
Monocitos,
granulocitos, LB,
eosinfilos
Receptor Fc de IgG; papel

en fagocitosis, ADCC
CD33
67 kDa; Protenas
SFIg
Clulas mieloides
y precursores
mieloides
Desconocida
CD34
105-120 kDa
Stem cells y
endotelio capilar
Ligando para CD62 (Lselectina)
250 kDa
SF de protenas de
control del complemento
Monocitos,
granulocitos,
clulas dendrticas,
eritrocitos, LB y
eosinfilos
Unin y fagocitosis de
partculas opsonizadas con
C3b y C4b
58-90 kDa; Protenas

Monocitos,
plaquetas
Adhesin plaquetaria
40-52 kDa; protena

tipo III
Familia tetra-span
LB maduros,
algunos LT
monocitos y
granulocitos
Molcula implicada en la
transduccin de seales
45 kDa; Protenas
Clulas plasmticas,
timocitos, LT y B
activados
activacin y proliferacin
celular. Tambin se le
asocia con el metabolismo
del calcio.
CD39
78 kDa
Macrfagos, clulas
dendrticas, LB maduras
y clulas NK activadas
Puede facilitar la adhesin

de LB
CD40
Heterodmero de cadenas
de 44 y 48 kDa; Protenas
SF de receptor NGF
LB, monocitos,
clulas dendrticas
Receptor para seal

coestimuladora para LB; se
une al ligando de CD40
(CD40L) presente en LT
Heterodmero de 120 y 23 kDa:
Plaquetas, megacariocitos
Activacin y agregacin
plaquetaria: receptor de
fibringeno y fibronectina
17-23 kDa
Plaquetas y megacariocitos
Adhesin plaquetaria, unin

a factor von Willebrand
160kDa (135,23)
Ver CD42a
22 kDa
Ver CD42a
82 kDa
Ver CD42a
115-135 kDa (neutrfilos)

95-115 kDa (linfocitos T)
Leucocitos
(excepto LB en
reposo)
Participa en la adhesin y
activacin de clulas T. Se
une a CD54 (ICAM-1)
80-100 kDa
Leucocitos, eritrocitos
Receptor de cido
hialurnico, involucrado en
metstasis tumoral
85-250 kDa
Leucocitos, eritrocitos
Receptor de cido
hialurnico, involucrado en
metstasis tumoral
(PECAM-1)
CD32
(FcRII)
CD35
(CR1)
CD36
(GPIV)
CD37
CD38
(T10)
CD41
(ProtenasIIb)
CD42a
(GPIX)
CD42b
(GPIb-)
CD42c
(GPIb-b)
CD42d
(GPV)
CD43
(Sialoforina,leuco-sialina)
CD44
(Pgp-1; Hermes)
CD44R
(CD44v; CD44v9)
763
Sin ttulo-2
763
5/26/06, 10:27 AM
CD45
180-240 kDa
Clulas epiteliales,
monocitos y
linfocitos
activados
Molcula asociada a la
adhesin celular de los
leucocitos al endotelio y
sitios de inflamacin
180 kDa
Subpoblacin de
LT y LB, monocitos
y macrofagos
Isoforma de CD45 la cua lno

contiene los exones A,B y C.
205-220 kDa
LB, subgrupo de
LT CD4 y
monocitos.
Subpoblacin de
LT, LB,
monocitos,
macrofagos,
Isoforma de CD45, contiene

exn C. Ver CD45
190-220 kDa
granulocitos
Isoforma de CD45, contiene

exn B.
56-66 kDa
Timocitos, leucocitos,
clulas epiteliales
fibroblastos, plaquetas
Protena cofactor de
membrana, se une a C3b y
C4b para permitir su
degradacin por factor I
47-52 kDa
No tiene tejidos
especficos
Puede participar en el flujo

de cationes en la membrana.
Se asocian a grupo
sanguneo y Rh
Amplia
Desconocida. Denominacin
antigua: CDw149
(T200, B220, antgeno

comn leucocitario o LCA)
CD45RO
CD45RA
(B220)
CD45RB
CD45RC
Isoforma de, contiene exn C.
CD46
(MCP)
CD47
(Protenas47-52; IAP)
CD47R
(MEM-133)
CD48
(BLAST-1)
40-47 kDa; Protenas

unida a Protenas I
Leucocitos,
epitelio bronquial
y glndulas salivares
celular va CD2
(VLA-1),
210 kDa
integrina 1
LT y B activados,
monocitos,
endotelio
neurovascular
Adhesin a colgeno,
laminina. Se asocia a CD29
(VLA-2; gpIa)

transmembrana tipo I. integrina 2
Plaquetas, LT y
B, fibroblastos y
clulas endoteliales
Adhesin a la matriz
extracelular: receptor para
colgeno. Se asocia a CD29,
se une a colgeno y
laminina
125 kDa; Protenas

Integrina 3
membranas basales
LB, glomrulos
renales, tiroides
y algunas
y laminina
Adhesin a fibronectina,
laminina. Se asocia a CD29,
se une a colgeno
150 kDa(integrina 4)
LT, B, NK,
monocitos, eosinfilos,
eritroblastos, timocitos y
cultivos mieloides
Adhesin a fibronectina, se
asocia a CD29, HEV de
placas de Peyer y UCAM-1
Dmero de 125 y 35 kDa,

asociado a CD29.
Integrina 5.
Monocitos, neutrfilos,
leucocitos, fibroblastos,
plaquetas, mieloblastos y LT
de memoria
Adhesin a fibronectina. Se
une a CD29
Dmero de 125 y 25 kDa

asociado a CD29
Integrina 6
Plaquetas, macrfagos,
monocitos, timocitos,
LT de memoria
Adhesin a la matriz
extracelular: receptor para
aminina. Se asocia a CD29
CD49a
CD49b
CD49c
(VLA-3)
CD49d
(VLA-4)
CD49e
(VLA-5)
CD49f
(VLA-6)
764
Sin ttulo-2
764
5/26/06, 10:27 AM
CD50
108-140 kDa; protena

transmembrana tipo Y
Timocitos, LT, B,
monocitos y granulocitos
Ligando para CD11a/CD18

(LFA-1)
Heterodmero de 120 y
24 kDa
monocitos, macrfagos,
plaquetas, algunas
clulas B, osteoclastos
y clulas uterinas
Adhesin: receptor para

vitronectina, fibringeno,
factor von Willebrand y
trombospondina. Se asocia
a CD61
21-28 kDa
Leucocitos
Blanco para inmunoterapia,

mitognico
35-42 kDa; protena

tipo III
Leucocitos, plaquetas,
osteoblastos y osteoclastos
(ICAM-1)

SFIg
Leucocitos y
clulas endoteliales
Adhesin: ligando para

CD11a/CD18 (LFA-1),
CD11b/CD18 (Mac-1).
Receptor para rinovirus
(DAF)
70-73 kDa; Protenas

transmembrana unida a
Protenas I
Todas las clulas

hematoyticas
(incluidos los
eritrocitos)y no
hematopoyticas
Regulacin de la activacin
del complemento, DAF
(decay accelerating
factor), se une a C3b,
desensambla convertasas de
C3 y de C5.
(Leu-19)
Hetrodmero de 135 y
220 kDa
Clulas NK,clulas
embrionarias,
mieloblastos,
astrocitos,
epitelio tirodeo y
subgrupo de LT
Adhesin homotpica:
isoforma de molculas de
adhesin de clulas
neurales (NCAM)
110 kDa. Olgosacarido

presente en glicoprotenas
Clulas NK, algunos LT,

unos pocos LB y monocitos
Desconocida
(HNK-1; Leu-7)
55-70 kDa; protena de

transmembrana tipo I o
unida a Protenas I
Muchas clulas
hematopoyticas y
fibroblastos
Adhesin: ligando de CD2
19 kDa; Protenas unida a

protenas I
Muchas clulas
hematopoyticas
incluidos glbulos rojos,
endotelio vascular, clulas
epiteliales y placenta
Regulacin de la accin del

complemento (formacin
MAC); se une a C8 y C9.
(GD3)
Olgosacarido presente
en glucosidos
Subgrupo de LT, algunos

monocitos y plaquetas
Anticuerpos anti-CD60
proporcionan una Seal
coestimulatoria para LT.
(9-O-acetyl-GD3)
en glucosidos
Subgrupo de LT, algunos

monocitos y plaquetas
(7-O-acetyl-GD3)
en glucosidos
Subgrupo de LT,
algunos monocitos
y plaquetas
105 kDa
Plaquetas, macrfagos
megacariocitos,
clulas endoteliales,
osteoclastos y
clulas uterinas
Desconocida. Se une a
CD51 y CD41
140 kDa, lectina tipo C
Endotelio
Adhesin de leucocitos al
endotelio; se liga a
sialil Lewis x, media el
rolling de los neutrfilos
(ICAM-3)
CD51
(cadena del receptor
de vitronectina)
CD52
(CAMPATH-1)
CD53
(OX-44; MEM-53)
CD54
CD55
CD56
CD57
CD58
(LFA-3)
CD59
(MEM-43; LY6; MIRL)
CD60a
CD60b
CD60c
CD61
(ProtenasIIIa)
CD62E
(ELAM-1; E-selectina)
765
Sin ttulo-2
765
5/26/06, 10:27 AM
CD62L
LB, T, y otros leucocitos
Adhesin de leucocitos al
endotelio; se une a CD34,
glyCAM-1, media rolling
de neutrfilos
Plaquetas activadas,
clulas endoteliales y
megacariocitos
Adhesin de monocitos y
neutrfilos a plaquetas
activadas y clulas
endoteliales, se liga a sialil
Lewis x
53 kDa
Plaquetas activadas,
monocitos, macrfagos,
clulas endoteliales
Facilita la adhesin al
endotelio activado, protena
lisosomal translocada a
superficie post activacin
(FcRI)
72 kDa; Protenas
transmembrana tipo I. SFIg
y neutrfilos activados
Receptor Fc de alta
afinidad: participa en la
fagocitosis, ADCC,
y activacin de macrfagos
(VIM-2)
Carbohidrato, componente
de ceramida dodesacrido
Clulas mieloides, y algunas

clulas monociticas,
granulocitos
Participa en la activacin
de neutrfilos
Clulas mieloides, y algunas

clulas monociticas,
granulocitos
Anticuerpos anti-CD65s
inhiben fagocitosis
(LAM-1; L-selectina)
CD62P
(P-selectina;GMP-140),
PADGEM
CD63
(gp53, PMT)
CD64
CD65
CD65s
(sialil-CD65)
CD66 a,b,c,d,e
220 kDa, Protenas

fosforilada, existen
variantes (CD66a CD 66e)
Granulocitos, neutrofilos.
c y e: carcinoma de colon
e: epitelio de
colon adulto
Participan en la adhesin.
Miembro de la familia
antgeno carcinoembrionario
El CD67 ha sido definido
como CD66b
CD68
(KPI)
110 kDa, protena

intracelular, macrosialina
neutrfilo, linfocitos
grandes, basfilos
Molcula inductora de
activacin.
(AIM)
Homodmeros de 28-34 kDa,

Protenas fosforilada
LT y B activados,
macrfagos y clulas NK
Desconocida. Antgeno de
activacin temprano
70, 95, 170 kDa
LB y T activados.
Macrfagos
Ligando para CD27
Homodmero de 90-95 kDa;

Protenas transmembrana tipo II
LB y T activados,
macrfagos y clulas
proliferativas
Receptor para transferrina:

participa en el metabolismo
de hierro, crecimiento
celular
Homodmero de 42 kDa
LB
Ligando para CD5:

interaccin de LT-LB
(Ecto-5'-nucleotidasa)
69 kDa; Protenas de
membrana unida a Protenas I
Algunos LB, T,
timocitos,
algunas clulas
epiteliales y endoteliales
y clulas dendrticas
Regula el metabolismo de
nucleotidos,
defosforilandolos para
permitir su liberacin
(cadena MHC clase II

invariante (g))
33/35/41 kDa;
Protenas de
LB, monocitos,
clulas dendrticas y
LT activadas,
macrfagos, clulas MHC
clase II.
Asociado con molculas de

MHC clase II recientemente
sintetizadas
53 y 87 kDa
LB maduros y
algunos LT
Adhesin celular. Ligando

para CD22
CD69
CD70
(Ki-24)
CD71
(T9; receptor de
CD72
(Lyb-2 (ratn), lectina
tipo C)
CD73
CD74
CD75
(Lactosaminas)
CD75s
(Alpha-2,6 sialylated
lactosamines)
766
Sin ttulo-2
766
5/26/06, 10:27 AM
CD77
(Gb3, Grupo sanguneo Pk) Eptopo carbohidratado
Clulas B de centro
germinal
Puede actuar como receptor

de verotoxina de E. coli y
toxina Shiga de S.
Dysenteriae
(Ig, MB1)
33-33 kDa; Protenas

LB
Molcula accesoria que

media la expresin de Ig y
la transduccin de seales
CD79b
(Ig, B29, IgSF)
37-39 kDa; Protenas

LB
Ver CD79a
CD80
(B7; B7-1; BB1)
60 kDa; Protenas
Clulas dendrticas,
LB activados y
macrfagos
Coestimulador para la
activacin de linfocitos T;
ligando para CD28 y CTLA-4
(CD152)
(TAPA-1, tetraspasmina)
22 kDa; molcula tipo III
Variados grupos celulares,

incluyendo linfocitos
Asociado a CD19 y CD21.

Participa en la activacin de
LB
(R2)
50-53 kDa; Protenas

Epitelio, endotelio y
linfocitos activados,
leucocitos
(HB15)
40-43 kDa; Protenas

Algunas lneas celulares

B y T activadas, clulas
dendrticas circulantes
Puede participar en la
presentacin antignica
(2G7, Gr6)
73 kDa
Monocitos, linfocitos B
circulantes, plaquetas
Desconocida
(GR4)
120 kDa
Clulas plasmticas y
dendrticas, LB y monocitos
Existe evidencia de que

CD85participa en la
activacion de LT. Pertenece
a la familia ILT/LIR
(FUN-1, GR65,
B7-2, B70)
80 kDa; Protenas
LB activados, clulas
dendrticas y monocitos
Su unin a CD28 presente

en los LT induce una seal
coestimulatoria mientras
que su unin a CD152
(CTLA-4) induce una seal
inhibitoria
(UPA-R)
50-65 kDa; Protenas

unida a ProtenasI
LT activados, monocitos
y neutrfilos activados
Receptor para el activador

del plasmingeno tipo
uroquinasa
(C5a-R)
40 kDa.
SF Rodopsina
Neutrfilos, macrfagos,
eosinfilos, clulas mastoides
Receptor para el componente

del complemento C5a:
participa en la inflamacin
por complemento
50-70 kDa;
Protenas transmembrana tipo I
SFIg
Neutrfilos, monocitos,
macrfagos, y algunos
LT y B
Citotoxicidad dependiente
de IgA (receptor de IgA)
25-35 kDa; protena unida a

ProtenasI
SFIg
Timocitos, LT perifricas
(ratn), neuronas,
protimocitos CD34+
Marcador para LT;

rol en la activacin de LT
600/G kDa (515/85)
Monocitos
Receptor para 2macroglobulina
CD79a
CD81
CD82
CD83
CD84
CD85
CD86
CD87
CD88
CD89
(FcR)
CD90
(Thy-1)
CD91
(2M-R)
767
Sin ttulo-2
767
5/26/06, 10:27 AM
CD92
70 kDa
Neutrfilos, plaquetas
y monocitos
Desconocida
120 kDa
Neutrfilos, monocitos
y clulas endoteliales
Desconocida
Dmero de 43 kDa cada unidad
Clulas NK y unas
pocas LT
El CD94 est implicado en

la inhibicin de la clula
NK
(APO-1; Antgeno FAS)
42 kDa; protena de
LT y lneas
celulares mieloides
Participa en la muerte
celular programada,
ligando tipo TNF
Formas de 160 kDa;

protena transmembrana tipo I
LT activados
Desconocida
(Tactile)
Formas de 74, 80, 90 kDa
Monocitos y granulocitos
maduros clulas activadas
Niveles altos de expresin

de CD97 han sido encontrados
en sitios de inflamacin como
piel y pulmones.
Dmero de 40 y 80 kDa
cada subunidad; Protenas
Monocitos,
LT, B, NK
Involucrado en la activacin
celular. Potencial
transportador
de aminocidos
33 kDa; Protenas
Timocitos, linfocitos
perifricos y clulas
mieloides
Desconocida
150 kDa
LT, B, NK, macrfagos,

monocitos, avisa la
expresin en clulas
hematopoyticas
Asociada a actividad
AT Pasa y serina quinasa.
Coestimula con PMA, CD3
y CD2 para inducir
proliferacin de LT
Dmero de subunidades
de 140 kDa
Granulocitos, monocitos
y algunos LT
inhiben la respuesta T
alognica
55-65 kDa; Protenas

monocitos y otros leucocitos
Ligando para integrina

CD11a/CD18 (LFA-1)
pero no para CD11b/CD18
(Mac-1)
Dmero de subunidades de
150 y 25 kDa; Protenas
Linfocitos intra-epiteliales
2-6% linfocitos perfericos,
y otros tipos celulares
Junto con la integrina 7,

forma un receptor que
facilita la adhesin al
endotelio
220 kDa; Protenas

Epitelio, timocitos,
unas pocas clulas
neuronales, linfocitos,
clulas tumorales
Forma parte de un receptor

para laminina, facilitando
la adhesin de clulas
a la matriz extracelular
Dmero de 95 kDa;
Protenas transmembrana
tipo II
Clulas epiteliales,
macrfagos activados in
vitro, clulas endoteliales
subset de clulas
de mdula sea
Jugara un papel en la
adhesin.
(VCAM-1, IgSF)

Clulas endoteliales
activadas, macrfagos,
clulas dendrticas,
estroma medular
Receptor para la integrina

VLA-4: rol en la adhesin,
activacin linfoctica,
hematopoyesis
110 kDa; Protenas

Plaquetas activadas
(LAMP-1)
Protena lisosomal de
funcin desconocida
(GR9)
CD93
(GR11)
CD94
(Kp43)
CD95
CD96
CD97
(GR1)
CD98
(4F2, 2F3)
CD99
(E2; MIC2)
CD100
(BB188, CrR3)
CD101
(BB27; BA27, BPC#4)
CD102
(ICAM-2)
CD103
(HLM-1)
CD104
(Integrina 4)
CD105
(Endoglina)
CD106
CD107a
768
Sin ttulo-2
768
5/26/06, 10:27 AM
CD107b
(LAMP-2)
120 kDa; Protenas

Plaquetas activadas
Protena lisosomal de
funcin desconocida
75-83 kDa; Protenas de

membrana unida a Protenas I
LT activados,
algunas clulas
estromales
Posible funcin en la
adhesin celular
170/150 KDa; Protenas

de membrana unida
a Protenas I
LT activados,
plaquetas activadas y
clulas endoteliales
Desconocida
70-95 KDa
stem cells,
plaquetas y megacariocitos
Clulas mieloides
Receptores para la
eritropoyetina
64-72 kDa
Clulas mieloides,
neuronales, epiteliales
y endoteliales
Molcula de adhesin
intercelular. Receptor 2
relacionado con el
poliovirus (PRR2)
130 kDa
Monocitos, granulocitos,
plaquetas y clulas
endoteliales
Receptor del factor

estimulador de colonias
de granulocitos (G-CSF)
150 kDa; Protenas

SFIg
Placenta, macrfagos,
monocitos y sus
precursores
Receptor del factor

estimulador de colonias
de monocitos (M-CSF)
70-85 kDa
Monocitos, granulocitos,
clulas dendrticas
y fibroblastos
Cadena del receptor

de GM-CSF (CSF-R)
145 kDa; Protenas

Transmembrana tipo I
SFIg
Progenitores
hematopoyticos,
clulas mastoides,
melanocitos y algunas
clulas NK
Receptor de factor
stem cell (SCF)
Amplio espectro celular
Receptor del interfern

y

Macrfagos, monocitos,
LB, clulas epiteliales,
endotelio y fibroblastos
Receptor de IFN-
50-60 kDa
Muchos tipos celulares,

mayor expresin en
clulas epiteliales
Receptor de TNF y
75 kDa; Protenas
Muchos tipos celulares,

mayor expresin en
clulas mieloides
Receptor de TNF y
(TNFRII)
(IL-1R, tipo I)
80 kDa; Protenas
LT, timociots, condrocitos,

clulas sinoviales,
hepatocitos, fubroblastos
Receptor para IL-1 Tipo I,

se une a IL-1 y
(IL-1R, tipo II)
68 kDa; Protenas
LB, monocitos y
macrfagos
Receptor para IL-1 Tipo II,

se une a IL-1 y
(IL-2R)
75 kDa; protena
LT en reposo, LB
(algunas lneas),
monocitos, y
clulas NK
Cadena del receptor de

IL-2
70 kDa
Clulas troncales
de mdula sea,
granulocitos,
monocitos,
megacariocitos
cadena + del receptor

de la IL-3
CD108
(GR2)
CD109
(GR56)
CD110
(MPL, TPO R)
CD111
(PRR1/Nectin1)
CD112
(PRR2)
CD114
(G-CSFR, CSF3R,
HG-CSFR)
CD115
(c-fms)
CD116
(GM-CSFR)
CD117
(c-kit)
CD118
(INF , R)
CD119
(IFN-R)
CD120a
(TNFRI)
CD120b
CD121a
CDw121b
CD122
CD123
(IL-3R)
769
Sin ttulo-2
769
5/26/06, 10:27 AM
CD124
(IL-4R)
CDw125

LB maduras, LT,
epitelio, endotelio,
precursores hemopoyticos
y fibroblastos
Receptor de IL-4
55-60 kDa
Eosinfilos y
basfilos
Receptor de IL-5
80 kDa; protena
Clulas plasmticas,
leucocitos, clulas
epiteliales, fibroblastos,
clulas nerviosas
y hepatocitos
Receptor de IL-6,
subunidad
75 kDa; Protenas
Precursores de LB,
timocitos, LT
maduros y monocitos
Receptor de IL-7
58-67 kDa
Neutrfilos, basfilos,
Monocitos y algunos LT
Receptor A de IL-8
58-67 kDa
Neutrfilos, basfilos,
monocitos, y algunos LT
Receptor B de IL-8

La mayora de los
leucocitos, clulas
epiteliales, fibroblastos,
hepatocitos y
clulas nerviosas,
LB activados y
plasmocitos
Receptor de IL-6,
subunidad
120 kDa
Clulas mieloides
Cadena comn de para

receptor IL-3, IL-5 y GMCSF
(IL-5R)
CD126
(IL-6R)
CD127
(IL-7R, superfamilias
de fibronectina tipo II)
CDw128a
(IL-8RA, CXCR1)
CDw128b
(IL-8RB, CXCR2)
CD130
(gp130, IL-6R)
CDw131
CD132
Cadena comn de
receptores para IL-2,IL-4,
IL-7, IL-9 e IL-15
64 kDa
(Cadena comn)
LT, LB, clulas NK,

monocitos y granulocitos
stem cells
CD133
(AC133)
CD134
48-50 kDa
Subpoblacin de
LT activados
Adhesin de LT activados.
Ligando de gp34
130-150 kDa
Subpoblacin de
clulas progenitoras
Receptor de tirosina
quinasa y factor
de crecimiento
180 kDa
Tejidos epiteliales
Receptor de protena
estimulante de macrfagos
30 kDa
Subpoblacin de LT
Participa como molcula

coestimulatoria en la
activacin de LT.
20 kDa
Plasmocitos,
clulas epiteliales
Ligando para colgeno tipo I
CD139
209,228 kDa
LB de centros germinales
Desconocida
CD140a
180 kDa
Indetectable en la mayora
de las clulas normales
Receptor de PDGF
CD140b
180 kDa
Subpoblacin de clulas
endoteliales, clulas
estromales,
Receptor de PDGF
100 kDa
Clulas endoteliales
Participa en la regulacin
de la coagulacin
CD135
(F1t3/Flk2)
CDw136
(MSP-R)
Cdw137
(4-1BB)
CD138
(SYNDECAN-1)
CD141
(Trombomodulina)
770
Sin ttulo-2
770
5/26/06, 10:27 AM
CD142
45 kDa
Monocitos activados,
clulas endoteliales
activados
El complejo CD142:VIIa
inicia la cascada de
coagulacin
170 kDa
Subpoblacin de
clulas endoteliales
Enzima convertidora de
angiotensina (ACE)
135 kDa
Clulas endoteliales
Molcula de Adhesin
25,90,110 kDa
algunas clulas estromales
Desconocida
118 kDa
LT activados
Participa en la adhesin de
LT activados
50-60 kDa
monocitos, subpoblacin
de LT, plaquetas,
eritrocitos
Potencial molcula de
adhesin
Clulas hematopoyticas
Desconocida. Tyrosina
phosphatasa RPTPasa,
tipo III
75-95 kDa
LT,LB, timocitos
Molcula coestimulatoria
para LB y clulas dendrticas.
27 kDa
Plaquetas, clulas
endoteliales
Desconocida
44 kDa
LT activados, algunos
LB activados
Ligando de CD80 y CD86.

Regulacdor negativo de la
activacin de los LT
40 kDa
LT activados
Ligando de CD30 (CD30L).

Funcin desconocida
33 kDa
LT activados, mastocitos,
basfilos
Ligando de CD40 (CD40L).
80-90 kDa
timocitos
Receptor del virus polio

(PVR)
60 kDa
granulocitos
Desconocida
100-120 kDa
Amplia expresin celular
Proteasa dependiente de Zn.

Libera las formas solubles de
TNF y TGF-
42-45 kDa
Monocitos, neutrfilos,
clulas endoteliales
Esta molcula tiene

actividad de ADP-ribosil
ciclasa y ADP-ribosa
hidrolasa cclica
Clulas NK
Protena perteneciente a la
familia KIR (Killer cell
immunoglobulin (Ig)-like
receptors) presente en las
clulas NK
50-58 kDa
Clulas NK, subpoblacin

de LT
Regulacin de actividad
de las clulas NK
50-58 kDa

de LT
de las clulas NK
50-58 kDa

de LT
de las clulas NK
(Factor tisular)
CD143
(ACE)
CD144
(VE-Cadhesina)
CDw145
CD146
(MUC18/S-endo)
CD147
(Neurotelina/Basigina)
CD148
(HPTP-ETA/DEP-1)
CD150
(IPO-3/SLAM)
CD151
(PETA-3)
CD152
(Protena-4 asociada a
LT citotxicos o CTLA-4)
CD153
(CD30L)
CD154
(CD40L)
CD155
CD156a
(ADAM-8)
CD156b
(TACE/ADAM17)
CD157
(BST-1)
CD158
CD158a
(p58.1, p50.1)
CD158b
(p58.2, p50.2)
CD158c
(p58.3, p50.3)
CD159a
Clulas NK
(NKG2A)
771
Sin ttulo-2
771
5/26/06, 10:27 AM
CD160
27 kDa. Glicoptotena
Clulas NK y LT
CD8+ citotoxicos
Funcin desconocida. Se
encuentra alterada en
Hemoglobinuria
nocturna paroxistica
60 kDa

de LT
Regulacin de citotoxicidad
mediada por clulas NK
110 kDa
LT, subpoblacin de LB,

granulocitos, monocitos
Molcula de adhesin.
Ligando de la P-selectina
Clulas NK
Desconocida
130 kDa
Monocitos
Desconocida
CD164
(MGC-24)
80 kDa
LT, monocitos,
granulocitos,
subpoblacin de
LB, clulas
progenitoras
Molcula de adhesin
CD165
37 kDa
Clulas epiteliales tmicas
adhesin timocito-epitelio
tmico
100 kDa
Linfocitos T y B activados,
fibroblastos
Clulas epiteliales
Molcula de adhesin.
Ligando de CD6
(BY55)
CD161
(NKR-P1)
CD162
(PSGL-1)
CD162R
(PEN5)
CD163
(KiM4)
(AD2/gp37)
CD166
(ALCAM)
CD167a
(DDR1)
Receptor tirosina quinasa.

Es activado por colgeno
Adhesin
CD168
(RHAMM)
CD169
Adhesin
(Sialoadhesina)
CD170
Adhesin
(Siglec-5)
CD171
140-230 kDa
Clulas epiteliales
y mielomonociticas
y subsets de LT y LB
(L1)
CD172a
Molcula de adhesin
implicada en la
neurohistogenesis
Adhesin
(SIRP alpha)
CD173
Desconocida
(Grupo de sangre H tipo 2)
CD174
Desconocida
(Lewis y)
CD175
Desconocida
(Tn)
CD175s
(Sialyl-Tn)
Desconocida
CD176
(TF)
Clulas
mieloides
Linfocitos
CD177
(NB1)
Desconocida
muerte celular programada
CD178
(Ligando del Fas)
CD179a
(Vpre-B)
16-18 kDa
Linfocitos pro-B y pre-B
772
Sin ttulo-2
772
5/26/06, 10:27 AM
Se une a CD179b para

conformar la cadena liviana
necesaria para la
constitucin del receptor de
la clula B (BCR)
CD179b
22 kDa
Linfocitos pro-B y pre-B
Se une a CD179a para

conformar la cadena liviana
necesaria para la
constitucin del receptor de
la clula B (BCR)
95-105 kDa
Linfocitos B, monocitos
y clulas dendriticas
Participa en el
reconocimiento de LPS
41 kDa
LT y subsets de LB y NK
Receptor para quimoquinas

CXC como IP10, Mig y ITAC. Se expresa en LT
presentes en los sitios de
inflamacin. Efecto
quimiotctico
LT y subsets de LB y NK

CXC.
LT
LT

CC
CC
Desconocida
Clulas endoteliales
Clulas endoteliales
Desconocida
Desconocida
Clulas mieloides
basofilos
Enzima que cataliza la

hidrolosis de
oligonucleotidos.
(Lambda 5)
CD180
(RP105)
CD183
(CXCR3)
CD184
(CXCR4)
CD195
(CCR5)
CDw197
(CCR7)
CD200
(OX2)
CD201
(EPC R)
CD202b
(Tie2, Tek)
CD203c
(NPP3, PDNP3)
270 kDa
CD204
Clulas mieloides
(Macrophage scavenger R)
CD205
Clulas dendrticas
(DEC205)
CD206
Clulas dendrticas
(Macrophage mannose R)
CD207
Clulas dendrticas
(Langerin)
CD208
Clulas dendrticas
(DC-LAMP)
CD209
Clulas dendrticas
(DC-SIGN)
CDw210
Receptor de la IL-10
(IL-10 R)
CD212
(IL-12 R)
Receptor 1 de la IL-13
CD213a1
(IL-13 R 1)
Receptor 2 de la IL-13
CD213a2
(IL-13 R 2)
CDw217
(IL-17 R)
CD220
Receptor de la insulina
(Insulina R)
CD221
Receptor de IGF1
(IGF1 R)
CD222
250-300 kDa
Molcula involucrada en la
internalizacin de protenas
y enzimas hacia los
lisosomas.
(Mannose-6-phosphate,
IGF2 R)
CD223
(LAG-3)
CD224
(Gamma-glutamil transferasa)
773
Sin ttulo-2
773
5/26/06, 10:27 AM
CD225
(Leu13)
CD226
65 kDa. Glicoprotena
Clulas NK, plaquetas,

monocitos y un subset
de LT
Adhesin celular
220-350 kDa
Clulas epiteliales
Adhesin y sealizacin
celular
LT de la LLA-T
Funcin desconocida. Es un
marcador especfico para la
LLA-T
(DNAM-1, PTA1)
CD227
(MUC.1)
CD228
(Melanotransferrina)
CD229
(Ly9)
CD230
(Protena Prion)
CD231
(TALLA-1/A15)
CD232
(VESP R)
CD233
Clulas eritroides
(Band 3)
CD234
Clulas eritroides
(Fy-glycoprotein o DARC)
CD235a
Clulas eritroides
(Glicoforina A)
CD235b
Clulas eritroides
(Glicoforina B)
CD235ab
Clulas eritroides
(Glicoforina A/B
CD236
Clulas eritroides
(Glicoforina C/D
CD236R
Clulas eritroides
(Glicoforina C)
CD238
Clulas eritroides
(Kell)
CD239
Clulas eritroides
(B-CAM)
CD240CE
Clulas eritroides
(Rh30CE)
CD240D
Clulas eritroides
(Rh30D)
CD240DCE
(Rh30D/CE)
CD241
(RhAg)
CD242
(ICAM-4)
CD243
(MDR-1)
CD244
(2B4)
CD245
(p220/240)
CD246
(Anaplastic lymphoma kinase)
CD247
(Zeta chain)
Clulas eritroides
Clulas eritroides
Clulas eritroides
Stem cells
Clulas NK
Linfocitos T
Linfocitos T
Linfocitos T
AcMo, anticuerpo monoclonal; ADCC, citotoxicidad dependiente de anticuerpo; 2m, Beta 2

microglobulina; CFS, factor estimulador de colonias; , cromosoma; GM, granulocito-monocito; Protenas, glicoprotena;ProtenasI, glicofosfatidilinositol; HEV, vnula de endotelio columnar; INF g, interfern
gama;+IL, interleuquina; LB, linfocito B; LT, linfocito T; MAC, complejo de ataque a membrana; M,
monocito; SF, superfamlia; SFIg, superfamilia de las inmunoglobulinas; TNF, factor de necrosis tumoral.
774
Sin ttulo-2
774
5/26/06, 10:27 AM
tenas generalmente participan como receptores de

superficie celular y/o ligandos. Varias de ellas pertenecen a la superfamilia de las inmunoglobulinas
(SFIg), como por ejemplo las molculas CD2,
CD4, CD8 y CD19.
Las protenas de transmembrana tipo I, generalmente presentan un dominio de transmembrana de aproximadamente 25 aminocidos
hidrofbicos, seguido por un grupo de aminocidos bsicos. Estos aminocidos con carga positiva permiten la unin de estas protenas a las cargas negativas de los fosfolpidos aninicos ubicados en la capa interna de la membrana celular.
El dominio de transmembrana no contiene algunos aminocidos como arginina, asparragina, cido asprtico, cido glutmico, glutamina, histidina
o lisina, excepto cuando est asociado con el dominio de transmembrana de otras protenas de membrana, formando un complejo multimrico. Por
ejemplo, las protenas del complejo CD3 y las dos
protenas del TCR (ver captulo 7).
Actualmente se sabe que la mayora de las

molculas CD reconocidas por anticuerpos
monoclonales murinos se expresan en ms de una
lnea celular hematopoytica. Otras molculas CD
tambin son expresadas por clulas no
hematopoyticas (ej. clulas endoteliales, clulas
estromales) que son fundamentales en las respuestas inmune y/o inflamatoria.
2. ESTRUCTURA DE LOS ANTGENOS DE

MEMBRANA
Las protenas de membrana se clasifican en cuatro grupos, dependiendo de la orientacin de la molcula en la membrana plasmtica o de su unin a ella.
2.1. Protenas de transmembrana tipo I
Las protenas de transmembrana tipo I tienen el extremo carboxilo en el interior de la clula y el extremo amino en el exterior de la misma
(figura 46-1).
Generalmente estas protenas tienen una secuencia seal en el extremo amino, la que es removida luego que la molcula entra al retculo
endoplsmico. Posteriormente, si presenta sitios
de glicosilacin, puede ser glicosilada en el aparato de Golgi y expresada en la superficie celular.
La mayora de las molculas CD son
glicoprotenas de transmembrana tipo I. Estas pro-
2.2. Protenas de transmembrana tipo II

Las protenas de transmembrana tipo II tienen una orientacin opuesta a las protenas de
transmembrana tipo I. El extremo amino se encuentra en el interior de la clula y el extremo
carboxilo en el exterior de la misma (figura 46-2).
Entre las molculas CD que presentan esta estructura se encuentran CD10, CD13, CD23 y CD26.
Figura 46-1. Esquema de una protena de transmembrana

tipo I. Estas protenas tienen el extremo carboxilo orientado
hacia el interior y el extremo amno hacia el exterior de la
clula. Como ejemplo se muestra la molcula CD4.
Figura 46-2. Esquema de las protenas de transmembrana

tipo II. Estas protenas presentan su extremo amino orientado
hacia el interior de la clula y el extremo carboxilo hacia el
exterior de la misma, respectivamente.
775
Sin ttulo-2
775
5/26/06, 10:27 AM
Estas protenas a menudo presentan secuencias seal para dominios de transmembrana que no han sido removidas lo que
permite su remocin y liberacin de la superficie celular. As, estas protenas se pueden
comportar tanto como antgenos de superficie
y protenas plasmticas.
nales a travs de la bicapa lipdica, para transporte de iones o molculas pequeas.

Un subgrupo de este tipo de protenas de
transmembrana es la denominada tetra-span
family las cuales se caracterizan por cruzar cuatro veces la membrana y presentar ambos extremos de la molcula hacia el interior de la clula.
Un ejemplo de esta familia de molculas es el CD9.
2.3. Protenas de transmembrana tipo III

2.4. Protenas unidas a glicofosfatidilinositol
Las protenas de transmembrana tipo III cruzan la membrana celular ms de una vez, pudiendo presentar el extremo carboxilo en el interior de
la clula y el extremo amino en el exterior de la
misma, o bien ambos extremos en el interior de
la clula (figura 46-3). Entre las molculas CD
que presentan esta estructura estn: CD9, CD20,
CD36, CD37, CD53, CD63 y CD81.
La caracterstica de cruzar ms de una vez la
membrana, permite a estas protenas formar ca-
Este tipo de protenas est totamente expuesto en el exterior de la clula y se une a la bicapa
lipdica a travs de una unin covalente (va un
oligosacrido especfico) a fosfatidilinositol ubicado
en la cara externa de la membrana. A esta unin se
le llama glicofosfatidilinositol (figura 46-4). Entre
las protenas que presentan esta estructura se encuentran las molculas CD14, CD24, CD48, CD58
y CD87.
Figura 46-3. Esquema de protena de transmembrana tipo III. Estas protenas cruzan la membrana celular ms de una vez y
pueden presentar sus extremos carboxilo y amino en dos orientaciones: a) El extremo carboxilo en el interior de la clula y el
extremo amino en el exterior de la misma, y b) ambos extremos en el interior de la clula.
Figura 46-4. Esquema de protenas ancladas a glicofosfatidilinositol. Este tipo de protenas se une a la bicapa lipdica de la
membrana celular a travs de glicofosfatidilinositol (GPI).
776
Sin ttulo-2
776
5/26/06, 10:27 AM
Inmediatamente despus de finalizada la sntesis proteica, la protena precursora permanece

unida a la membrana del retculo endoplsmico a
travs de una secuencia de 15-20 aminocidos
hidrofbicos en su extremo carboxilo mientras que
el resto de la protena se ubica en el lumen del
organelo. Inmediatamente, una enzima corta la
protena liberndola del segmento hidrofbico
unido a la membrana mientras que el nuevo extremo carboxilo se une a un grupo amino de una
molcula GPI previamente formada.
tal. Actualmente, estas clulas son utilizadas en

trasplantes las cuales son obtenidas a partir de
sangre perifrica, realizando leucofresis y seleccionando las clulas CD34+.
3.2. Molculas CD expresadas principalmente en linfocitos B
Molcula CD10. La molcula CD10, tambin
conocida como CALLA (common acute
lymphocytic leukemia antigen) tiene un peso
molecular de 10 kDa y es miembro de una familia de peptidasas de superficie celular.
3. MOLCULAS CD ASOCIADAS A LNEAS

CELULARES
Molcula CD19. La molcula CD19 es una

glicoprotena de transmembrana tipo I de 95 kDa
(reducida). Es miembro de la SFIg; los dos
dominios extracelulares que presenta son del tipo
inmunoglobulinas.
Su expresin est restringida a las clulas B
normales y neoplsicas. Se expresa desde el
estadio de clula pre-B a clula plasmtica.
Se asocia no covalentemente con CD21,
CD81 y Leu-3, formando un complejo que en
forma independiente del BCR (ver captulo 6)
participa en la transduccin de seales.
Una de las utilidades de las molculas CD ha

sido el reconocimiento del linaje celular y el
estadio madurativo de las clulas hematopoyticas,
particularmente de los leucocitos. As por ejemplo el antgeno CD3 identifica a los LT, CD20 a
los LB, CD66 de los granulocitos y CD61 a las
plaquetas. Sin embargo, la mayora de los
antgenos son expresados en diferente cantidad por
varios tipos de clulas; para la identificacin de
algunos tipos celulares se requiere la identificacin de dos o ms antgenos, lo que actualmente
se realiza por citometra de flujo (ver captulo 31).
En el captulo 12 se describe las molculas CD
asociadas a la ontogenia de las clulas B y T. En el
estudio de las leucemias agudas, linfomas, e
inmunodeficiencias, es particularmente importante conocer la lnea celular afectada.
Adems de las molculas CD asociadas, preferentemente, a ciertas lneas celulares en particular, se han identificado molculas CD asociadas a
la activacin de LB, LT y plaquetas.
Molcula CD20. La molcula CD20 se encuentra

en todas las clulas B y en algunos precursores de
LT. Es una fosfoprotena que se expresa en tres
isoformas (33, 35 y 37 kDa) como consecuencia
de una diferente fosforilacin de las serinas y
treoninas existentes en los extremos de la
molcula. Esta molcula presenta cuatro dominios
transmembrana y los extremos amino y carboxilo
se encuentran en el citoplasma. A pesar de su
disposicin en la membrana, esta molcula no
integra la familia "tetra-spans". Su estructura
sugiere que podra actuar como canal inico,
particularmente de Ca2+.
3.1. Molculas CD expresadas principalmente

en "stem cells"
Molcula CD34. La molcula CD34 es el principal marcador utilizado en el reconocimiento de las
clulas progenitoras hematopoyticas o stem
cells. Se trata de una sialoglicoprotena de
transmembrana de 105-120 kDa (reducida). Forma parte de la familia cell surface mucin junto a
las molculas CD43 y CD68. La molcula CD34
es potencialmente adhesiva y probablemente
interacta con CD62E (E-selectina) y CD62L (Lselectina).
Las stem cells representan un pequeo porcentaje de las clulas de la mdula sea y sangre
perifrica. Tambin se encuentran en el hgado fe-
Molcula CD21. La molcula CD21 se expresa

en una subpoblacin de clulas B. Es una
glicoprotena de transmembrana tipo I (140 kDa)
que presenta 15 16 dominios de 60-70
aminocidos (extracelular), seguido por un
dominio de transmembrana y 34 aminocidos
intracitoplasmticos.
La molcula CD21 es el receptor de los
fragmentos C3d (CR2), C3dg e iC3b del
complemento. A trves de un dominio de unin
diferente acta como receptor del virus EpsteinBarr. Es miembro de la familia gnica de
777
Sin ttulo-2
777
5/26/06, 10:27 AM
reguladores de la activacin del complemento,

integrada tambin por las molculas CD35, CD46
y CD55. Tambin participa como ligando de
CD23. Junto con CD19, CD81 y Leu-3, forma
parte de un complejo que transduce seales al interior de los LB.
igual que las molculas CD27, CD30, CD95,

CD120a y CD120b.
El dominio extracelular presenta cuatro
repeticiones ricas en cisteina. Es contrareceptor
de CD40L (CD154) que se expresa en los LT
activados, por lo que est involucrada en la
interaccin LB-LT durante el cambio de clase de
inmunoglobulinas.

glicoprotena de transmembrana tipo I de 140 kDa.
Es miembro de la familia sialoadhesina
(sialoadhesina, CD33, glicoprotena asociada a
mielina). Se conocen dos isoformas ( y ); la
forma tiene siete dominios tipo Ig (dos ms que
la forma ) y una cola citoplasmtica 23
aminocidos ms larga que la forma .
La molcula CD22 se expresa en una
subpoblacin de las clulas B y acta como una
molcula de adhesin con capacidad de unin para
cido silico de carbohidratos que presentan por
ejemplo las molculas CD45RO, CDw75 y
CDw76.

protena de transmembrana tipo II que tiene la
estructura de un homodmero de 39 y 42 kDa
(reducida). Junto con las molculas CD23, CD69
y CD94 integra la familia de lectinas dependiente
de calcio. Puede actuar como ligando de la
molcula CD5 expresada en todos los LT y en una
subpoblacin de LB.
Se expresa en todos los estadios madurativos
de las clulas B, excepto en las clulas plasmticas.
protena de transmembrana tipo I de 60 kDa
(reducida). La regin extracelular consiste en un
dominio tipo variable y un dominio tipo constante
de Ig; la cola citoplasmtica presenta 16
aminocidos.
Se expresa en LB en reposo y activados,
monocitos, clulas dendrticas y LT activados.
Acta como ligando de molculas accesorias
de LT, como son CD28 y CTLA-4 (CD152),
regulando as el desarrollo de la respuesta inmune.

glicoprotena de transmembrana tipo II de 45-50
kDa (reducida). Dado que presenta hacia su
extremo carboxilo un dominio tipo lectina,
pertenece a la familia de lectinas dependiente de
calcio, al igual que las molculas CD69, CD72 y
CD94.
subpoblacin de LB. Existen dos formas, FcRIIa
y FcRIIb las que difieren slo en el extremo
amino. Continuamente el CD23 est siendo
liberado de la superficie celular como un
polipptido de 33 kDa que se ha visto acta como
factor de crecimiento de LB.

en linfocitos T
Molcula CD3. La molcula CD3 es un
heteropentmero formado por las cadenas, , , ,
y , que se encuentra asociado al TCR (ver
captulo 7). Se expresa exclusivamente en las
clulas T.
La mayora de los anticuerpos CD3
reconocen la cadena del complejo CD3.

glicoprotena unida a GPI. Tiene aproximadamente
42 kDa (reducida) y est marcadamente
glicosilada.
Se expresa en clulas B (desde clula pre-B
hasta clula plasmtica) y en granulocitos.
Varias protenas unidas a la membrana a
travs de ProtenasI, entre ellas CD24, se han
encontrado asociadas con protenas tirosinas
kinasas, fundamentales en la transduccin de
seales y activacin celular.

glicoprotena de transmembrana tipo I de 50 kDa.
La regin extracelular consiste en un dominio tipo
variable y un dominio tipo constante de Ig;
presenta una larga cola citoplasmtica rica en
prolina y aminocidos bsicos.
La molcula CD2 se expresa en todas las
clulas T incluyendo timocitos inmaduros y clulas
de memoria. Adems, se expresa en una
subpoblacin de clulas NK.

glicoprotena de transmembrana tipo I de 44-48
kDa (reducida). Integra la familia de receptores
TNF/NGF (factor de crecimiento de nervio), al
778
Sin ttulo-2
778
5/26/06, 10:27 AM
CD2 es el receptor que une eritrocitos de

cordero alrededor de los LT formando las
denominadas rosetas E, fenmeno que dio origen
a uno de los primeros mtodos utilizados para
reconocer y aislar linfocitos T.
Es una molcula de adhesin que se une a las
molculas CD58 (LFA-3), CD48 y probablemente
CD59. Participa en la transduccin de seales en
las clulas T, representando una va alternativa de
activacin de estas clulas.
una regin bisagra. El segmento citoplasmtico

de la cadena presenta un dominio para unin
de la tirosina kinasa p56lck.
subpoblacin de las clulas T, los LTc, y se une a
las molculas MHC clase I de las clulas blanco,
estabilizando la interaccin celular.
Molcula CD27. La molcula CD27 es una protena
de transmembrana tipo I de 55 kDa (reducida) que
forma homodmeros unidos por puentes disulfuro.
Es miembro de la familia de receptores TNF/NGF,
al igual que las molculas CD30, CD40, CD95,
CD120a y CD120b. El segmento extracelular
presenta dos regiones ricas en cistena.
La molcula CD27 es ligando para la
molcula CD70 que pertenece a la familia TNF
(CD30L, CD40L, CD70 y CD95L; L, ligando).
Se ha propuesto que esta interaccin CD27/CD70
podra ser importante en la regulacin de los LT y
en facilitar la diferenciacin a LTc.
Se expresa en una subpoblacin de clulas T
maduras y de timocitos.

glicoprotena tipo I de 59 kDa (reducida) que
pertenece a la superfamilia gnica de las Ig. La
regin extracelular presenta cuatro dominios tipo
Ig y el segmento intracitoplasmtico tiene un
dominio que une la tirosina kinasa p56lck
subpoblacin de clulas T, la mayora LTh.
Tambin puede expresarse en bajas concentraciones en monocitos y macrfagos.
Las molculas CD4 de los LTh se unen a
regiones no polimrficas de las molculas MHC
clase II, estabilizando la interaccin entre las
clulas T CD4+ y las clulas presentadoras de
antgenos (CPA). La molcula CD4 adems es el
ligando para la gp120 del virus de la
inmunodeficiencia humana (VIH).

(reducida) que forma homodmeros por puentes
disulfuro. Presenta en la regin extracelular un
dominio tipo Ig, por lo que pertenece a la SFIg.
Se expresa en una subpoblacin de
linfocitos T.
Esta molcula participa como ligando de las
molculas CD80, CD86 y B7-3. Es una de las
molculas que participan como seales coestimuladoras en la activacin de clulas T.

(reducida). Al igual que la molcula CD6 pertenece
a la "scavenger receptor family". La regin
extracelular consiste en tres dominios "scavenger
receptor" ricos en cistena.
La molcula CD5 se expresa en las clulas T
y en una poblacin de LB asociada a enfermedades
autoinmunes.

en clulas NK

(reducida). La regin extracelular consiste en un
dominio tipo Ig, seguido hacia la membrana de
una regin O-glicosilada.
subpoblacin de LT inmaduros que corresponden
a precursores pretmicos en la mdula sea.
Molcula CD16. La molcula CD16 tambin llamada FcRIIIa es una protena de transmembrana
tipo I de 50-65 kDa (reducida). El segmento
extracelular presenta dos dominios tipo Ig. Acta
como receptor de baja afinidad para IgG. Tambin se expresa en monocitos activados y
granulocitos.
glicoprotena de 175-185 kDa. El segmento
extracelular presenta cinco dominios tipo Ig y dos
dominios tipo fibronectina tipo III. Acta como
una molcula de adhesin homotpica. Tambien
se expresa en LT activados.
Molcula CD8. La molcula CD8 es un

homodmero (/) o heterodmero (/, CD8b)
unido por un puente disulfuro. La regin
extracelular (amino terminal) presenta un dominio
tipo Ig separado del dominio transmembrana por
779
Sin ttulo-2
779
5/26/06, 10:27 AM
Molcula CD57. La molcula CD57 tiene estructura de carbohidrato, probablemente unida a varias protenas y lpidos. Tiene un peso molecular
de 110 kDa (reducida). Se expresa tambin en LT
y una subpoblacin de LB.
plaquetas activadas. La molcula CD68 es una

protena asociada a lisosomas, que se traslada a la
membrana celular durante la activacin.
glicoprotena que sufre una ruptura en el aparato
de Golgi en dos cadenas polipeptdicas, la cadena (85 kDa) y la cadena (515 kDa), las cuales
no estn unidas covalentemente. La cadena presenta varias copias de varios tipos de dominios:
rico en cistena, factor de crecimiento epidermal
y repeticiones de YWTD. Acta como receptor
de varias molculas, entre otras 2-macroglobulina y activadores del plasmingeno.

en granulocitos
fosfoprotena de aproximadamente 220 kDa
(reducida) marcadamente glicosilada. Integra la
familia gnica de antgeno carcinoembrionario
(ACE). El segmento extracelular presenta cuatro
dominios tipo inmunoglobulina, uno variable y
tres constantes. Como consecuencia de un
procesamiento (splicing) alternativo del mRNA
se obtienen varias isoformas (CD66a - CD66e).
La molcula CD66 presenta caractersticas
de una molcula de adhesin y puede unirse a bacterias.

en plaquetas
Molcula CD41. La molcula CD41, tambin llamada GPIIb (GP: glicoprotena), es un
heterodmero de 140 kDa formado por protenas
de transmembrana. El heterodmero (cadena
120 kDa y cadena 22 kDa), unido por puente
disulfuro, se origina en una ruptura postraduccional de la protena.
La molcula CD41 forma un complejo dependiente de calcio con la molcula CD61
(GPIIIa). Este complejo une protenas adhesivas
importantes en la hemostasia: fibringeno, factor
von Willebrand y fibronectina.

en monocitos-macrfagos
Molcula CD11b. Las molculas CD11b tienen
un peso molecular de 170 kDa y estructuralmente
son protenas de transmembrana tipo I.
Adems de las clulas monocito-macrfagos,
se expresa en las clulas NK. Junto con CD18 forma una molcula de adhesin (CR3) de la familia
de las Integrinas.
Molcula CD42a. La molcula CD42a, tambin

denominada GPIX, es una glicoprotena de
transmembrana de 23 kDa (reducida). Esta
molcula forma una complejo no covalente
(complejo CD42) con las molculas CD42a y CD
42b (unidas covalentemente forman la GPIb) o con
la molcula CD42d (GPV). La molcula CD42a
se expresa slo en las plaquetas. El complejo CD42
es responsable de la unin al factor von
Willebrand.
Molcula CD14. La molcula CD14 tiene 53-55

kDa y se une a la membrana a travs de GPI. Adems de los monocitos y macrfagos se expresa en
neutrfilos, algunos linfocitos B y clulas
dendrticas.
Molcula CD64. La molcula CD64 tiene 75 kDa
y estructuralmente corresponde a una protena de
transmembrana tipo I. Pertenece a la SFIg y se
expresa en monocitos, macrfagos y neutrfilos
activados.
Su funcin es la de actuar como receptor de
alta afinidad de IgG (FcRI).
Molcula CD42b. La molcula CD42b (GPIb-)

es una protena de transmembrana de 135 kDa.
En su extremo amino presenta el sitio de unin
para el factor von Willebrand. Unida covalentemente a la molcula CD42c (GPIb-) forma la
GPIb. La molcula CD42b se expresa slo en las
plaquetas.
Molcula CD68. La molcula CD68 es una protena de transmembrana de 110 kDA (reducida) y
que se encuentra marcadamente glicosilada. Junto a las molculas CD34 y CD43 integran la familia cell surface mucin. Adems, al igual que las
molculas CD107a y CD107b caractersticas de
Molcula CD42c. La molcula CD42c (GPIb-)

es una glicoprotena de transmembrana de 22 kDa.
Al unirse covalentemente a la molcula CD42b
780
Sin ttulo-2
780
5/26/06, 10:27 AM
(GPIb-) forma la GPIb. La molcula CD42c se

expresa slo en las plaquetas.
"Tetra-span family". Estas molculas presentan

cuatro dominios transmembrana y ambos
extremos, amino y carboxilo, estn en el interior
de la clula. Integran esta familia las molculas
CD9, CD37, CD53, CD63, CD81 y CD82.
Molcula CD42d. La molcula CD42d, tambin

denominada GPV es una protena de transmembrana de 85 kDa (reducida) que al igual que la
molcula CD42a (GPIX) se puede unir a la GPIb
(CD42b-CD42c) y formar el complejo CD42. La
molcula CD42d se expresa slo en las plaquetas.
"Scanaver receptor family". Las molculas de

esta familia se caracterizan por presentar en la
regin extracelular tres dominios ricos en cistena.
Entre otras molculas, se incluyen en esta familia
las molculas CD5 y CD6.

llamada cadena del receptor de vitronectina
(VnR) es un heterodmero de 125 y 25 kDa
(reducida) unido por puente disulfuro. El
heterodmero se produce por ruptura postraduccional de la glicoprotena. Puede asociarse no
covalentemente con las integrinas 1 (CD29), 3
(CD61), 5, 6 o 8. El complejo v1 une
vitronectina, fibronectina y colgeno tipo I; el
complejo v3 (GPIIb-IIIa) une vitronectina,
fibronectina, fibringeno, factor von Willebrand,
trombospondina, osteopontina y colgeno; el
complejo v5 une vitronectina y v6 une
fibringeno.
Familia de receptores de TNF y NGF. Esta familia la integran CD27, CD30, CD40, CD95,
CD120a, CD120b.
Familia de reguladores del complemento.
Forman esta familia las molculas CD21, CD35,
CD46 y CD55.
Superfamilia rodopsina. Las molculas de esta
familia se caracterizan por presentar siete dominios
de transmembrana y unirse a protenas que unen
GTP. Las molculas CD incluidas en la familia
rodopsina son CD88, CDw128a y CDw128b.

denominada cadena 3 de las integrinas y GPIIIa,
es una glicoprotena de transmembrana tipo I de
110 kDa (reducida). La molcula CD61 se puede
asociar a la molcula CD41 (GPIIb) formando un
complejo dependiente de calcio (GPIIb-IIIa) y con
la molcula CD51 (integrina v) formando el receptor de vitronectina (v3).
Familia cell surface mucin. Estas molculas

se caracterizan por ser protenas de transmembrana
tipo I que estn marcadamente O-sialitizadas
(cido sialico). Son miembros de esta familia las
molculas CD34, CD43 y CD68
Familia sialoadhesina. Las molculas que
integran esta familia son: sialoadhesina, CD33 y
gp asociada a mielina.
4. FAMILIAS DE MOLCULAS CD
Las molculas CD se pueden agrupar
independientemente de los anticuerpos monoclonales que las reconocen, en base a su estructura
molecular y/o funcin. As, se han descrito entre
otras, las siguientes familias:
5. ALGUNAS APLICACIONES DE LA
NOMENCLATURA CD EN INMUNOLOGA
El advenimiento de la nomenclatura CD,
gracias al desarrollo de los anticuerpos
monoclonales y tcnicas de la citometra de flujo,
la inmunohistoqumica y la biologa molecular, se
ha acompaado de una acelerada aplicacin de
estos marcadores en el campo de la investigacin
bsica y la inmunologa clnica. Como se describi
antes, desde un punto de vista conceptual, la
expresin de estas molculas en clulas del sistema
inmune se puede resumir en la presencia de
molculas de linaje (lnea celular), de activacin
y de madurez.
Superfamilia de las Ig. Estas molculas se

caracterizan por presentar en la regin extracelular,
uno o ms dominios tipo Ig. Entre otras molculas,
integran esta familia: CD4, CD8, CD28, CD54
y CD64.
Familia de las lectinas. Las molculas de esta
familia presentan en la regin extracelular uno o
ms dominios tipo lectina. Integran esta familia
las molculas CD23, CD69, CD72 y CD94.
781
Sin ttulo-2
781
5/26/06, 10:27 AM
Las molculas de linaje son aquellas que definen

en forma mayoritaria y ocasionalmente excluyente, un tipo celular; por ejemplo CD4 para LT
helper y CD8 para LT citotxicos. Estas
molculas pueden aparecer en algn momento del
desarrollo y a su vez cumplen funciones biolgicas
definidas, pueden compartirse con otras clulas
(ej. CD4 expresada en macrfagos/monocitos) si
bien con expresin ms baja o en un fenotipo
morfolgico o inmune muy distinto.
Sndrome de la Inmunodeficiencia Adquirida

(SIDA). Uno de los elementos clsicos en el
diagnstico y seguimiento de pacientes con SIDA
ha sido la cuantificacin de LT CD4+ y LT CD8+.
Los valores absolutos de estas subpoblaciones al
igual que su relacin o ndice CD4/CD8, han sido
utilizados en la determinacin de conductas
teraputicas como inicio de tratamiento antiretroviral o profilaxis antibitica. Sin embargo,
estudios de seguimiento de series grandes de
pacientes han detectado que estos valores en
ocasiones anticipan lo suficiente para ser tiles.
Durante los ltimos aos, al ir dilucidndose la
patogenia del SIDA donde la activacin inmune
ha sido revelada como factor esencial en la
progresin de la enfermedad, se han detectado
cambios precoces en la expresin de marcadores
de activacin linfocitarios en adultos y nios
infectados por VIH (Ej. CD38 y HLA-DR en LT
CD8+ y CD62L y CD23 en linfocitos B,
disminucin de expresin de CD25 en LT CD4+
cambio de expresin de CD45RA a CD45RO tanto
en LT CD4+ y LT CD8+) (tabla 46-2).
Las molculas de activacin suelen expresarse

frente a estimulacin celular y no en forma
excluyente de un tipo celular (ej. CD25, CD38,
CD71). Algunas de estas molculas suelen
disminuir su expresin en la superficie celular
frente a un estado de activacin celular ya que son
escindidas y pueden detectarse en forma soluble
(ej. molculas de adhesin como la L-selectina
(CD62L), o CD23 en linfocitos B. Existe
finalmente un conjunto de molculas que se
expresan mayoritariamente durante algunas etapas
del desarrollo de las clulas inmunes, lo que ayuda
a definir estadios de madurez celular (ej. CD10,
CD34). Sin embargo, debido al estado biolgico
de las clulas inmaduras, es factible detectar con
mayor frecuencia o intensidad algunos marcadores
de activacin (ej. CD71).
Finalmente, existen molculas CD que se
asocian a la respuesta inmune especfica y son
expresadas en los linfocitos, y aquellas que
participan en la inflamacin, fundamentalmente
expresadas en granulocitos, monocitos/macrfagos y clulas endoteliales.
Algunos usos de las molculas CD en clnica
son los siguientes:
Inmunodeficiencias Primarias. El uso de las

molculas CD ha permitido clasificar en forma
ms precisa las diversas inmunodeficiencias
primarias, tanto celulares como humorales (tabla
46-3). La asociacin entre la presencia o ausencia
de alguna molcula CD ha permitido en ocasiones
dilucidar la funcin de tal molcula, si sta se
desconoca, o bien si sta se conoca, explicar el
mecanismo subyacente de una inmunodeficiencia
en particular.
Leucemias y Linfomas. Las leucemias son un
grupo heterogneo de enfermedades resultantes de
Tabla 46-2. Marcadores inmunofenotpicos utilizados en el estudio

y seguimiento de pacientes VIH positivos
Clula
Marcadores de
linaje celular
Marcadores de
activacin
Linfocitos T
CD3, CD4, CD8
CD25, CD38, CD28, CD69

CD45 RA/RO, HL-DR
Linfocitos B
CD19, CD20, CD10
CD23, CD62L, CD69, CD71
Clulas NK
CD16, CD56
CD57
782
Sin ttulo-2
782
5/26/06, 10:27 AM
Tabla 46-3. Marcadores CD usados en Inmunodeficiencias Primarias

Disgenesia Reticular
CD34
Defecto de LT: Inmunodeficiencia Combinada

Severa, Anomala de Di George, otros
CD3, CD4, CD8; CD25; CD152

TCR /, TCR/, CD69, CD132
Deficiencia de LB o Anticuerpos: Agamaglobulinemia

ligada a X, Inmunodeficiencia Comn Variable
CD19, CD20, CD5.
Sndrome de Hiper IgM
CD19/CD40, CD3/CD154
Deficiencias de Clulas NK
CD16/CD56
Sndrome de Wiskott Aldrich
CD43
Sndrome de Leucocito Desnudo
HLA clase I y II en LT CD4 y LT CD8; CD74
Defecto de Molculas de Adhesin
CD11a,b,c; CD18
esta clasificacin es la definicin de subgrupos

de leucemias linfoides, ej. diferenciacin T y B, y
requiere de un observador entrenado, siendo
adems de interpretacin subjetiva. El uso de una
inmunotipificacin en su mayora con marcadores
CD de superficie aporta criterios descriptivos ms
objetivos de las clulas leucmicas, en especial si
son evaluados por citometra de flujo (ver captulo
31), que puede analizar dos o ms marcadores por
clula en forma simultnea (tabla 46-4).
una proliferacin descontrolada de uno o ms tipos

de clulas hematopoyticas. La importancia de
clasificar este grupo de enfermedades en distintas
categoras radica en que existen modalidades
teraputicas distintas en cada grupo. Igualmente,
el pronstico clnico de las distintas categoras sea
esta aguda o crnica, linfoide o mieloide es
distinto. Por lo tanto, el propsito de la
caracterizacin de las leucemias es agrupar
pacientes con enfermedades similares para
optimizar la terapia o identificar aquellos pacientes
con peor pronstico frente a los tratamientos
actuales. La forma clsica de clasificar las
leucemias es la Franco-Americana-Britnica
(FAB) que utiliza morfologa, histoqumica y
algunos marcadores de superficie para clasificar
las leucemias mieloides en M0 a M7, y las
linfoides en L1 a L3. Sin embargo, la limitante de
Patologa Inflamatoria. En enfermedades

inflamatorias como las vasculitis, artrtis
reumatodea, lupus eritematoso sistmico, sepsis
o rechazo de trasplantes, la pesquisa de la
expresin de molculas de activacin (CD25,
integrinas, ICAMs, CD64, etc.) tanto en la
superficie celular de leucocitos perifricos como
Tabla 46-4. Marcadores CD de linaje y no linaje, usados en la inmunofenotipificacin de

leucemias agudas
Linfocitos B
CD19
CD20
CD22
CD39
CD79a,b
Linfocitos T
Clula mieloide
No-linaje
CD3
CD5
CD7
CD13
CD33
HLA-DR
CD10
CD73
CD38
* Las leucemias monoblsticas presentan la molcula CD14.
783
Sin ttulo-2
783
5/26/06, 10:27 AM
de tejido, adems de la forma soluble en el suero

u otros fluidos, se est incorporando como mtodo
til y precoz, y posiblemente especfico, para
determinar reactivacin o respuesta a tratamiento
de estas patologas. Estos estudios an se
encuentran en desarrollo, pero es factible postular
que a futuro la determinacin de estas molculas
sern incluidas en el estudio de todo cuadro
inflamatorio.
Trasplantes: En esta rea, actualmente se
monitorea la efectividad de drogas como
anticuerpos anti-CD3, midiendo los niveles de
linfocitos CD3 perifricos, con el fin de controlar
rechazo agudo de trasplantes.
Otra aplicacin es la obtencin, desde sangre
perifrica, de stem cells usando como marcador
la molcula CD34 que expresan estas clulas. Las
stem cells son utilizadas en pacientes a los que
debe repoblarse la mdula sea.
Sin duda son numerosas las otras aplicaciones
de estas molculas en investigacin y clnica y
muchas ms estn por desarrollarse.
Ochs, H.D., Smith, C.I.E., Puck, J.M., Primary

Immunodeficiency Diseases- A Molecular Approach, Editorial Oxford University Press, 1999.
Plaeger-Marshall, S. et al., T cell activation in
pediatric AIDS pathogenesis: Three-color
immunophenotyping,
Clin
Immunol
Immunopahtol. 71, 19-26. 1994.
Rich, R., Clinical Immunology. Principles and
Practice, Editorial Mosby, 1996.
Rodrguez, C. et al., HIV disease in children is
associated with a selective decrease in CD23+ and
CD2L+B cells, Clin Immunol Immuopatol 81 (2):
191-199. 1996.
Stiehm, E., Immunologic. disorders in Infants
and Children, 4th Edition, WB Saunders, 1996.
Stockinger, H., Majdic, O. and Knapp, W., Directory for the human leukocyte clusters of differentiation, Transfusion 36:268-285, 1996.
LECTURAS SUGERIDAS
Alberts, B., Bray, D., Lewis, J., Raff, M., Roberts,
K. and Watson, J., Molecular Biology of cell,
Chap.10 and 12, Third edition, Garland Publishing Inc., USA, 1994.
Anti-human CD clustered (CD) antibodies. Disponible en http://members.aol.com/researchd1/

rdicdabs/cdindex.htm
Bower, K., Duque, R., Sharkey, T.V., Clinical

Flow Cytometry. Principles and Application,
Williams & Wilkins, 1993.
CD antigens. Disponible en http://

www.immunologylink.com/CDantigen.htm
Kipps, T.J., The cluster of differentiation (CD)

antigens en Hematology, Eds. Beuther, E.,
Lichtman, M., Coller, B. and Kipps, T., Fifth
edition, McGraw-Hill Inc., New York, 1995.
Protein Reviews on the Web. Disponible en http:/

/www.ncbi.nlm.nih.gov/prow/
Landay, A. et al., Application of Flow Cytometry

to the Study of HIV infection, AIDS, 4:479-497,
1990.
Workshops and Conferences on Human Leucocyte

Differentiation Antigens. 7th Workshop and
Conference. Disponible en www.hlda.org
LeBien, T.W., A little bit of CD history,

Transfusion. 36(3):197-199, 1996.
Loken, M., et al., A Selected 12-Reagen
Immunophenotyping Panel Facilitates
Assignement of Lineage in Acute Leukemia.
Clinical Monogragh N 3. Becton Dickinson
Immunocytometry Systems.
784
Sin ttulo-2
784
5/26/06, 10:27 AM
GLOSARIO
Aglutinacin indirecta: Aglutinacin de partculas o de eritrocitos recubiertos con un antgeno

(adsorbido o acoplado qumicamente) por
anticuerpos.
ADCC (Antibody Dependent Cell Mediated

Citotoxicity"): Citotoxicidad mediada por clulas dependiente de anticuerpos. Reaccin
citotxica en la que clulas con capacidad ltica,
portadoras de receptores para Fc, reconocen las
clulas blanco a travs de los anticuerpos especficos que recubren a estas ltimas.
Aglutininas fras: Anticuerpos que aglutinan bacterias o eritrocitos ms eficientemente a temperaturas inferiores a 37C.
Adyuvante: Sustancia que intensifica inespecficamente la respuesta inmunitaria frente a un

antgeno.
Agretopo: Porcin de un antgeno o fragmento

antignico, que interacta con una molcula MHC.
Adyuvante completo de Freunds: Emulsin

leo-acuosa que contiene micobacterias muertas
y aumenta la respuesta inmune cuando se mezcla
en una emulsin que contiene un antgeno.
Alelo: Uno de los dos genes presente en un locus,

que controlan una caracterstica particular.
Alergeno: Agente que provoca una serie de reacciones mediadas por inmunoglobulina E. Ej.: polen, polvo, caspa animal, etc.; o por clulas T como
es el caso de algunos haptenos. Ej.: el compuesto
exudado por el litre o compuestos qumicos como
el dinitrofluorbenceno.
Afinidad: Expresin termodinmica de la fuerza

de unin entre un determinante antignico
(eptopo) y el sitio de combinacin del anticuerpo
(paratopo) y as, de la compatibilidad
estereoqumica entre ellos.
Alergia (Hipersensibilidad tipo I): Enfermedad

o reaccin causada por una respuesta inmune a
uno o ms antgenos ambientales, resultando en
inflamacin tisular y disfuncin orgnica.
Agammaglobulinemia Ausencia de protenas

plasmticas en la regin gamma de una
electroforesis de suero sanguneo.
Aglutinacin: Reaccin antgeno-anticuerpo, en
la cual un antgeno slido o particulado forma una
malla de interacciones con un anticuerpo que se
encuentra en solucin. Como la aglutinacin es
visible fcilmente, es la reaccin bsica de numerosas pruebas serolgicas.
Aloanticuerpos: Anticuerpos dirigidos contra

antgenos presentes en algunos miembros de la
misma especie (aloantgenos).
Aloantgenos: Diferentes formas (allico) de un
antgeno codificado por el mismo locus gentico,
en todos los individuos de una especie.
Aglutinacin directa: Aglutinacin de eritrocitos,

microorganismos u otras sustancias, directamente
por anticuerpos.
Alognico: Se refiere a las variaciones que puede

tener un antgeno codificado por un mismo locus
de una misma especie.
785
Sin ttulo-2
785
5/26/06, 10:27 AM
Aminas vasoactivas: Productos, como la

histamina y la 5-hidroxitriptamina, liberados por
los basfilos, los mastocitos y las plaquetas, que
actan sobre el endotelio y la musculatura lisa de
vasos locales.
constante de anticuerpos humanos.
Anafilaxia: Reaccin inmune aguda y severa,

antgeno especfica, mediada por IgE, que da lugar a vasodilatacin y contraccin de los msculos
lisos, incluidos los bronquiales, y que puede originar la muerte del animal.
Antgeno: Molcula que puede ser reconocida por

un anticuerpo o receptor de clulas T. Si es capaz
de estimular la respuesta inmune se le denomina
inmungeno.
Antigenicidad: Reactividad de un antgeno, es

decir, capacidad de unirse en forma especfica a
los anticuerpos.
Antgeno de diferenciacin: Antgeno que permite distinguir un tipo celular de otro.
Anafilotoxina: Pptidos del complemento (C3a

y C5a) que originan la desgranulacin de los
mastocitos y la contraccin de la musculatura lisa.
Antgeno homlogo: Antgeno que reacciona con

anticuerpos que l mismo ha inducido.
Anemia hemoltica autoinmune: Destruccin de

eritrocitos, mediada por autoanticuerpos.
Antgeno heterlogo: Antgeno que reacciona con

anticuerpos que l no ha inducido.
Anergia: Un estado de disminucin o ausencia

de inmunidad mediada por clulas, mostrado por
una ausencia de reaccin a varios antgenos diferentes inoculados subcutneamente.
Antgenos T: Antgenos tumorales presentes slo

en clulas neoplsicas; probablemente protenas
producidas por genoma viral.
Anticuerpo: Molcula de inmunoglobulina producida en los vertebrados por las clulas

plasmticas (estadio final de la diferenciacin de
los linfocitos B) en respuesta a un antgeno; tiene
la propiedad de combinarse especficamente con
el antgeno que indujo su formacin.
Antgenos timo dependientes: Antgenos que

dependen de la interaccin de las clulas B con
las clulas T para estimular la sntesis de
anticuerpos.
Antgenos timo independientes: Antgenos que
pueden inducir una respuesta inmune sin la
participacin de linfocitos T, aparentemente.
Anticuerpo anti-idiotpico: anticuerpo dirigido

contra eptopos (idiotopos) de la regin variable
de una inmunoglobulina o un receptor linfocitario.
Antisuero: Conjunto de anticuerpos presentes en

el suero de un animal que ha sido inmunizado con
un antgeno.
Anticuerpo bifuncional: Anticuerpo preparado

a partir de dos anticuerpos, cuya caracterstica es
que se une a dos antgenos diferentes.
Antitoxinas: Anticuerpos que neutralizan las toxinas solubles producidas por las bacterias.
Anticuerpo cataltico: Anticuerpos con propiedades similares a una enzima.
Asociacin gentica: Trmino usado para describir la condicin en la que determinados genotipos
se asocian con ciertos fenmenos, tales como
determinadas enfermedades.
Anticuerpo humanizado: Anticuerpo de ratn en

el cual todas las regiones de las cadenas pesadas y
livianas no involucradas en la unin del antgeno,
han sido reemplazadas por secuencias humanas.
Atopia: Manifestacin clnica de las reacciones

de hipersensibilidad tipo I, incluyendo eccema,
asma y rinitis.
Anticuerpo natural: Anticuerpo presente en el

suero del que se desconoce el antgeno.
Autoanticuerpo: Anticuerpo con especificidad para

antgenos propios. In vitro, tales anticuerpos son detectados por sus reacciones con antgenos similares
obtenidos de otros individuos de la misma especie.
Anticuerpo quimrico: Anticuerpo de ratn en

el cual las regiones constantes han sido reemplazadas, mediante ingeniera gentica, por la regin
786
Sin ttulo-2
786
5/26/06, 10:27 AM
Autoantgenos: Molculas que son constituyentes normales de un individuo y contra las cuales
ste desarrolla una respuesta inmune.
Cadena kappa (): Uno de los isotipos de las

cadenas livianas de las inmunoglobulinas.
Cadena lambda (): Uno de los isotipos de cadenas livianas de las inmunoglobulinas.
Autlogo: Perteneciente al mismo individuo.

Autorradiografa: Tcnica para detectar cidos
nucleicos o protenas en secciones de tejido o geles
con istopos radiactivos, cuya emisin es grabada en una pelcula fotogrfica.
Cadenas livianas (L, light): Cadenas

polipeptdicas presentes en todas las
inmunoglobulinas. Existen dos tipos y en cada
especie se ha observado la predominancia de una
de ellas; se denominan kappa () y lambda ().
Autosomas: Cromosomas distintos a los

cromosomas sexuales X e Y.
Cadenas pesadas (H, heavy): Par de cadenas

polipetdicas idnticas que forman parte de las
inmunoglobulinas. La cadena pesada contiene
aproximadamente el doble del nmero de
aminocidos de la cadena liviana.
Avidez: Fuerza de la unin anticuerpo-antgeno,

la cual depende de la afinidad entre eptopo y
paratopo, y de las valencias del anticuerpo y del
antgeno.
Calnexina: Protena de 88 kDa que acta como

chaperonina en el correcto ensamblaje y transporte de molculas MHC y otras protenas.
BCG (Bacillus Calmette-Gurin): Cepa atenuada de Mycobacterium tuberculosis, usada como

vacuna, adyuvante o modificadora de la respuesta
inmune.
Cambio de clase: Proceso por el cual una clula

B individual puede unir nuevos genes C (constante) de cadena pesada a su gen V (variable)
recombinado, y producir as una clase de
inmunoglobulina diferente con la misma especificidad. Este proceso se refleja tambin en el cambio global de clase que tiene lugar durante la maduracin de una respuesta inmune.
Beta2-microglobulina: Polipptido monomrfico

codificado fuera del MHC, que se asocia de modo
no covalente con la cadena codificada por el
MHC, formando las molculas de clase I.
Bolsa (Bursa) equivalente: rgano anlogo a la
bolsa de Fabricio existente en aves. En el hombre
corresponde a la mdula sea.
Cariotipo: Constitucin cromosmica de una clula, que puede variar entre los individuos de una
misma especie, dependiendo de la presencia o ausencia de cromosomas sexuales particulares o de
la incidencia de traslocaciones entre secciones de
cromosomas diferentes.
Bolsa (Bursa) de Fabricio: rgano linfoepitelial

situado entre el intestino posterior y la cloaca de
las aves. Constituye el lugar donde maduran las
clulas B.
Bradiquinina: Nonapptido vasoactivo; es el
mediador de la inflamacin ms importante generado por el sistema de las quininas.
Carrier: Protena transportadora de alta

inmunogenicidad utilizada para inducir respuesta
inmune contra haptenos que le han sido acoplados qumicamente. Uno de los ms utilizados es
la hemocianina, protena que transporta el oxgeno en la mayora de los moluscos y artrpodos.
C1-C9: Componentes de las vas clsica y ltica

del complemento responsables de mediar las reacciones inflamatorias, la opsonizacin de las partculas y la lisis de las membranas celulares.
Cadena Invariante (Ii): Glicoprotena de membrana asociada al correcto ensamblaje, transporte
y expresin de las molculas MHC de clase II.
Clulas accesorias: Incluyen eosinfilos,

basfilos, clulas cebadas, plaquetas y clulas presentadoras de antgeno. Tienen un rol importante
tanto en la respuesta inmune innata como adquirida.
Cadena J: Glicopptido monomrfico, presente

en la IgA e IgM polimricas.
Clulas de Microglia: Son las clulas fagocticas

que residen en el cerebro. Migran a este rgano
787
Sin ttulo-2
787
5/26/06, 10:27 AM
antes del nacimiento y durante el perodo neonatal.
celular CD8+, que participan en la inmunidad celular.
Clulas de Kupffer: Macrfagos que tapizan los

sinusoides hepticos.
Clula T : Clulas T cuyo receptor de clulas T

est formado por cadenas gamma y delta en el
receptor de clulas T.
Clulas de Langerhans: Clulas dendrticas de

la piel que actan como clulas presentadoras del
antgeno.
Clulas T "helper" (Cooperadoras):

Subpoblacin funcional de clulas T que pueden
ayudar a la generacin de clulas T citotxicas y
cooperar con las clulas B en la produccin de
una respuesta de anticuerpos.
Clulas dendrticas: Clulas mononucleares presentadoras de antgeno en tejido linfoide, pero distintas de la lnea monocito-macrfago.
Clulas efectoras: Trmino que generalmente se
refiere a clulas T capaces de mediar citotoxicidad,
supresin, o funcin de ayuda ("helper").
Clulas T supresoras: Subpoblacin de linfocitos

T que suprimen la sntesis de anticuerpos por las
clulas B o inhiben otras reacciones inmunes celulares de clulas T efectoras.
Clulas formadoras de placa: Son clulas

secretoras de anticuerpos que se miden en un ensayo en que cada una produce una clara zona de
lisis (placa) en una capa de eritrocitos sensibilizados con el antgeno. Es una reaccin de una extrema sensibilidad.
Centros germinales: Grupo especializado de

linfoblastos B, macrfagos y clulas plasmticas
que aparecen en los folculos primarios de los tejidos linfoides seguido en respuesta a un estmulo
antignico.
Clulas LAK: (Clulas asesinas activadas por

linfoquinas). Son linfocitos T singnicos generados in vitro mediante tratamiento con citoquinas
tales como IL-2 e IFN.
Cepa inbred: Son animales obtenidos por cruzamientos sucesivos entre hermanos, dando una
cepa con idnticos sets de autosomas.
Cepa congnica: Son razas idnticas excepto por
un cambio en un locus determinado.
Clula mastoide (clula cebada o mastocito):

Clula tisular que posee receptores de alta afinidad para IgE y genera mediadores inflamatorios
en la alergia.
Cepas transgnicas: Son derivadas desde animales que han recibido genes que han sido insertados cuando ocurre la fecundacin. Todas las clulas del animal transgnico llevan el nuevo gen,
aunque l pueda ser expresado en algunos o en un
linaje celular.
Clulas NK ("Natural Killer"): Clulas del linaje linfoide con capacidad intrnseca para reconocer y destruir algunas clulas tumorales o infectadas por virus.
Cepas Knockout: Son animales transgnicos

que han sufrido una delecin o mutacin de genes
especficos.
Clulas plasmticas: Clulas sintetizadoras de

anticuerpos. Se diferencian a partir de los linfocitos
B.
CDR ("Complementary Determining

Regions"): Partes de la regin variable (V) de las
inmunoglobulinas o de los receptores de clulas
T, responsables de la unin con el antgeno.
Clulas pluripotenciales: Clulas capaces de

autorrenovacin y de diferenciacin hacia progenitores celulares hematopoyticos y
linfopoyticos.
Ciclofosfamida: Frmaco citotxico usado

frecuentemente como inmunosupresor.
Clulas T : Clulas T que reordenan y expresan receptor de clulas T con cadenas alfa y beta.
La mayora de las clulas T son de este tipo.
Ciclosporina: Frmaco inmunosupresor

particularmente til para suprimir el rechazo del
injerto.
Clulas T citotxicas: Linfocitos con marcador
788
Sin ttulo-2
788
5/26/06, 10:27 AM
Citometra de Flujo: Es una tcnica que mide en

un citmetro equipo especfico para este propsito- las caractersticas individuales de una poblacin de clulas, incluyendo tamao, granularidad
y fluorescencia si es que se les ha incorporado una
sonda fluorescente.
Concanavalina A (Con A): Es una lectina obtenida del poroto Conavalia eusiformis, que se une
a glicopiransidos, manopiransidos y fructopiransidos. Como stos son constituyentes habituales de las glicoprotenas de la membrana celular, la Con A se une a ellas. Aglutina clulas de
muchos tipos y acta como mitgeno para las clulas T.
Citoquinas: Trmino genrico para designar las

molculas solubles que median las interacciones
celulares.
Congnico: Animales derivados genticamente y

que difieren slo en un locus particular.
Citosttico: Que tiene la capacidad de detener el

crecimiento celular.
Conjugado: Reactivo formado por el acoplamiento covalente de dos molculas diferentes. Ej.:
fluorescena unida a una molcula de inmunoglobulina.
Citotxico: Que tiene la capacidad de destruir

clulas.
Clases de inmunoglobulinas: Subdivisin de las
inmunoglobulinas, basada en el determinante
antignico de la regin Fc de la cadena pesada (H).
En humanos son cinco clases de inmunoglobulinas: IgG, IgA, IgM, IgD e IgE.
CPA, (Clula presentadora de antgenos): Clula que procesa una protena antignica,
fragmentndola a pptidos que se presentan en la
superficie celular en conjunto con molculas MHC
de clase II, para interactuar con el receptor de clulas T apropiado. Las clulas B, clulas
dendrticas, monocitos y macrfagos pueden cumplir esta funcin.
Clon: Grupo de clulas que forman parte de la

progenie de una sola clula.
Complejo de ataque a membrana: Componentes terminales del sistema del complemento (C5bC9) que, cuando son activados, causan lisis de la
clula blanco.
CR1, CR2, CR3: Receptores para los fragmentos activados del componente C3 del complemento.
Cromatografa de afinidad: Mtodo de purificacin en el cual una sustancia con una selectiva
afinidad de unin es unida covalentemente a una
matriz insoluble como agarosa. As una sustancia
puede ser purificada desde una mezcla.
Complejo inmune: Producto de la unin producida por un anticuerpo con un antgeno. Tambin
se le denomina complejo antgeno-anticuerpo.
(MHC): Regin gentica presente en todos los
mamferos, cuyos productos son responsables del
rechazo rpido de los injertos entre individuos y
que actan como seales entre los linfocitos y las
clulas que expresan antgenos.
CSF ("Colony Stimulating Factors"): Grupo de

citoquinas que controlan la diferenciacin de las
clulas hematopoyticas.
Chaperoninas: Protenas que participan en el plegamiento, ensamblaje y/o transporte de otras protenas.
Complemento: Grupo de protenas sricas que intervienen en el control de la inflamacin, en la

activacin de los fagocitos y en el ataque ltico
sobre las membranas celulares. El sistema puede
activarse por interaccin con el sistema inmunitario.
Delecin clonal: Un concepto relacionado con la

teora de la seleccin clonal de Burnet, la cual sugiere que la tolerancia a un autoantgeno resulta
de la delecin de clones de linfocitos
autorreactivos en la vida embrionaria.
Componente secretor: Molcula de 95 kDa presente en las clulas epiteliales y que se asocia a
inmunoglobulinas secretoras, particularmente IgA
e IgM.
Determinante antignico: Regin del antgeno

donde se une un anticuerpo, tambin se denomina
eptopo.
789
Sin ttulo-2
789
5/26/06, 10:27 AM
Electroinmunodifusin: Mtodo de inmunodifusin en el cual un antgeno y un anticuerpo son

guiados uno contra el otro en un campo elctrico.
La reaccin antgeno-anticuerpo se visualiza como
un arco o banda de precipitacin.
Determinante conformacional: Corresponde a

eptopos derivados del arreglo espacial o plegamiento de la cadena peptdica de una protena, que
generalmente se destruyen al desnaturalizarla.
Determinante lineal: Corresponde a eptopos
formados por aminocidos adyacentes (estructura primaria) en la secuencia polipeptdica de una
protena.
ELISA (Enzime Linked Immunosorbent

assay): Tcnica de laboratorio, que permite la
deteccin y cuantificacin de inmunoglobulinas
contra diferentes antgenos. Es un mtodo muy
verstil que permite numerosas variaciones, razn
por la cual se ha transformado en el ensayo ms
utilizado en la deteccin y cuantificacin de numerosos antgenos no slo de inters clnico, sino
que tambin otros compuestos tales como residuos
de alimentos y contaminantes ambientales.
Desetopo: Parte de la molcula MHC que se une

con el antgeno ya procesado.
Desgranulacin: Exocitosis de grnulos a partir
de clulas, tales como mastocitos y basfilos.
Determinante antignico: Ver eptopo.
Endocitosis: Proceso por el cual material externo

a la clula es internalizado. Puede tomar la forma
de pinocitosis (lquidos) y fagocitosis (partculas).
DNP (Dinitrofenol): Es un hapteno que se puede

unir a los grupos amino de las protenas.
Endgeno: Originado dentro del organismo o

dentro de una clula.
Domicilinas o Adresinas: Ligandos en las clulas de la mucosa endotelial para receptores especficos presentes en linfocitos derivados desde las
Placas de Peyer.
Endotelio: Clulas que tapizan el lumen de los

vasos sanguneos y linfticos.
Dominio: Regin de un pptido que tiene una estructura terciaria particular. Las inmunoglobulinas, las molculas MHC de clases I y II, y otras
molculas de la llamada "superfamilia de las
inmunoglobulinas" tienen dominios similares.
Endotoxinas: Lipopolisacridos derivados desde

la pared celular de microorganismos Gram negativos. Tienen un efecto txico y pirognico cuando son inyectados in vivo.
Dominios C: Dominios constantes de los

anticuerpos y de los receptores de clulas T. Estos
dominios no contribuyen al sitio de unin para el
antgeno y presentan una escasa variabilidad.
Enfermedad de cadenas pesadas: Grupo

heterogneo de desrdenes paraprotecos caracterizado por la presencia de cadenas pesadas
monoclonales incompletas, sin cadenas livianas
en suero u orina.
Dominios V: Dominios N-terminal de las cadenas pesadas y ligeras de los anticuerpos, y de las
cadenas , , de los receptores de clulas T.
Varan entre los distintos clones y forman el sitio
de unin con el antgeno.
Enlaces disulfuro: Enlace qumico S-S entre aminocidos que contienen grupos sulfidrilos, los cuales unen las cadenas H y L, intra-cadenas H-H y
L-L, contribuyendo en este caso a la formacin
de los dominios.
DTH ("Delayed Type Hypersensitivity"):

Hipersensibilidad de tipo retardada. Trmino que
incluye las reacciones cutneas retardadas asociadas con la hipersensibilidad tipo IV.
Eptopo: Determinante antignico presente en una

molcula. Es la regin del antgeno que se combina con el paratopo del anticuerpo o del receptor
de clulas T.
Duplicados en tndem: Copias adyacentes de

genes relacionados, unidos en un cromosoma.
Exclusin allica: Es el proceso por el cual una

clula usa un gen de su cromosoma materno o uno
paterno, pero no ambos. Ocurre en linfocitos B
para constituir la cadena pesada y liviana de la
Electroforesis: Separacin de molculas en un

campo elctrico.
790
Sin ttulo-2
790
5/26/06, 10:27 AM
inmunoglobulina y tambin en linfocitos T, para

constituir los dmeros .
receptores celulares para inmunoglobulinas y al

componente C1q del complemento.
Exocitosis: Proceso por el cual material

intracelular es llevado al exterior de la clula.
GALT ("Gut Associated Lymphoid Tissue"):

Tejido linfoide de la mucosa gastrointestinal.
Exn: Segmento del gen que codifica para parte

de una protena.
Gammaglobulinas: Protenas sricas con movilidad electrofortica en la regin gamma. La mayora de las inmunoglobulinas migran en esta regin.
Fab: Parte de la molcula de inmunoglobulina que

contiene el sitio de combinacin con el antgeno.
Est compuesto por una cadena liviana y parte de
la cadena pesada y se obtiene por digestin
enzimtica (papana) de las inmunoglobulinas.
Gammapatas monoclonales: Desrdenes que se

caracterizan por presentar inmunoglobulinas
monoclonales. Un ejemplo de estas enfermedades es el Mieloma mltiple.
Factor activador plaquetario: Mediador inflamatorio que activa plaquetas y clulas inflamatorias.
Generacin de diversidad: Se refiere al proceso

mediante el cual se produce un gran nmero de
regiones V de los anticuerpos.
Factor inhibidor de la migracin (MIF): Grupo

de pptidos producidos por los linfocitos que tienen la capacidad de inhibir la migracin de los
macrfagos.
Genes C: Segmentos gnicos que codifican la regin

constante de las cadenas pesadas y ligeras de las
inmunoglobulinas y de las cadenas alfa, beta, gamma
y delta de los receptores de clulas T.
Factor quimiotctico de macrfagos (MCF):

Linfoquina que atrae selectivamente monocitos o
macrfagos al rea donde se produjo el factor.
Genes D: Segmentos gnicos situados entre los

genes V y J en las cadenas pesadas de las
inmunoglobulinas, y en los genes de las cadenas
beta y gamma de los receptores de las clulas T,
que se recombinan con V y J durante la ontogenia.
Factores B, P, D, H e I: Componentes de la va
alternativa del complemento.
Fagocitosis: Proceso por el cual las clulas engloban una partcula y la encierran dentro de una
vacuola (fagosoma) citoplasmtica.
Genes J: Segmentos gnicos en los genes de las cadenas pesadas y ligeras de inmunoglobulinas, y en los
genes para las cadenas de receptores de clulas T, que
se combinan durante la diferenciacin linfocitaria.
Codifican parte de los dominios variables.
Fagocitos: Incluyen monocitos sanguneos,

macrfagos y neutrfilos. Su funcin es incorporar patgenos, antgenos y restos celulares para
reducirlos a pequeas molculas.
Genes V: Genes que codifican la mayor parte de

los dominios V de las cadenas pesadas y ligeras
de los anticuerpos, y de las cadenas alfa, beta,
gamma y delta de los receptores de clulas T.
Fagolisosoma: Producto de la fusin de un

fagosoma y un lisosoma.
Genoma: Todo material gentico contenido dentro de la clula.
Fenotipo: Caractersticas expresadas en un individuo.
Genotipo: Material gentico heredado de los padres. El individuo no expresa necesariamente todo
este material.
Fluorescencia: Emisin de luz de un color, cuando una sustancia es irradiada con una luz de un
color diferente.
Gradiente de Ficoll: Es utilizado para aislar clulas de diferente densidad. En particular es muy
utilizado para separar linfocitos. El Ficoll es un
polmero sinttico.
Fragmento Fc: Regin de las inmunoglobulinas

que contiene los dominios CH2 y CH3 de las cadenas pesadas. Es responsable de la unin a los
791
Sin ttulo-2
791
5/26/06, 10:27 AM
Grupo inmunodominante: Elemento estructural

de un eptopo que aporta la mayor energa para la
interaccin con un anticuerpo.
Histamina: Amina vasoactiva contenida en los

grnulos de mastocitos y basfilos, que causa contraccin de la musculatura lisa de bronquiolos
humanos y vasos sanguneos pequeos. Aumenta
la permeabilidad capilar y la secrecin de glndulas de las mucosas bronquial y nasal.
GVH ("Graft Versus Host"): Proceso causado

por linfocitos donantes alognicos que reaccionan
contra los tejidos del husped en un receptor
inmunolgicamente comprometido.
Hipergammaglobulinemia monoclonal: Incremento de las inmunoglobulinas producidas por un

solo clon de clulas B. Contiene una clase de cadenas H y un tipo de cadenas L.
H-2: Complejo Principal de Histocompatibilidad

del ratn.
Haplotipo: Conjunto de determinantes genticos
situados en un solo cromosoma.
Hipergammaglobulinemia policlonal: Incremento de las gammaglobulinas de varias clases.

Contiene diferentes cadenas H y L.
Hapteno: Molcula pequea que puede actuar

como eptopo, pero es incapaz de provocar por s
misma una respuesta de anticuerpos.
Hipersensibilidad: Ver alergia.

Histocompatibilidad: Situacin que permite que
se acepten injertos entre individuos.
Hematopoyesis: Proceso por el cual se forman,

diferencian y maduran las clulas sanguneas.
HLA (Human Leukocyte Antigen): Complejo Principal de Histocompatibilidad humano.
Hemolisina: Un anticuerpo u otra sustancia capaz de producir lisis eritrocitaria.
Homlogo: De la misma especie.

HEV (High Endothelial Venule): Vnula de
endotelio columnar (alto). rea especializada de
las vnulas post-capilares, a travs de las cuales
los linfocitos migran hacia los ganglios linfticos.
Humoral: Relativo a los lquidos extracelulares

incluyendo el suero y la linfa.
Heterohibridoma: Clula hbrida -constituida por

dos hibridomas diferentes- que secreta un anticuerpo bifuncional.
ICAM-1 (Intercellular Adhesion Molecule1): Molcula de la superficie celular, que se encuentra en varios tipos de leucocitos y en clulas
no hematopoyticas, que interacta con LFA-1 e
interviene en el trnsito celular.
Heterlogo: Se refiere a las diferencias

antignicas intraespecies.
Idiotipo: Antigenicidad de la regin V de un receptor linfocitario T o B. Corresponde al conjunto de idiotopos de ese receptor.
Hibridoma: Lnea celular creada in vitro mediante

fusin de dos tipos de clulas linfoides, uno de los
cuales es tumoral. Los hibridomas ms conocidos
son aquellos constituidos con un linfocito B, confirindoles la propiedad de secretar anticuerpos
monoclonales.
Idiotopo: Determinante antignico nico de la

regin V de un anticuerpo o de un receptor
linfocitario.
IgA: Inmunoglobulina predominante en las secreciones. Se caracteriza por la presencia de cadenas
pesadas alfa ().
Hipersensibilidad inmediata: Sensibilidad

inmunolgica mediada por anticuerpos que se
manifiesta por reacciones tisulares pocos minutos despus de la unin antgeno-anticuerpo.
IgA secretora: Dmero de molculas de IgA unidas por una cadena J y que presenta un componente secretor.
Hipogammaglobulinemia: Deficiencia de las clases mayores de inmunoglobulinas sricas (IgG,

IgM, IgA).
IgD: Inmunoglobulinas de 185 kDa y glicosilada

en 9-14% . Se encuentra en la membrana de los
792
Sin ttulo-2
792
5/26/06, 10:27 AM
linfocitos B circulantes. Tiene cadenas pesadas

delta ()
Inmunizacin: Administracin natural o artificial

de un antgeno, para provocar una respuesta inmune; particularmente cuando sta conlleva a la
proteccin del husped contra alguna enfermedad
como es el caso de las vacunas.
IgE: Inmunoglobulina involucrada en reacciones

de hipersensibilidad inmediata. Caracterizada por
cadenas pesadas de tipo psilon ().
Inmunocomplejo: Complejo antgeno-anticuerpo, que puede contener tambin componentes del

sistema del complemento.
IgG: Inmunoglobulina de aproximadamente 150

kDa con capacidad de fijar complemento y atravesar la placenta. Se encuentra predominante en
el suero. Presenta cadenas pesadas de tipo gamma
().
Inmunodeficiencias primarias: Son defectos

genticos del sistema inmune y se manifiestan
generalmente en la infancia.
IgM: Inmunoglobulina pentamrica de 900 kDa

que representa aproximadamente el 10% de las
inmunoglobulinas presentes en el suero. Sus cadenas pesadas son de tipo mu ().
Inmunodeficiencias secundarias: Procesos desarrollados por una variedad de condiciones patolgicas, drogas inmunosupresoras o infecciones
de las clulas del sistema inmune.
Imagen interna: Anticuerpo anti-idiotpico cuyo

sitio de combinacin se asemeja o representa al
eptopo de un antgeno.
Inmunodifusin radial: Mtodo para cuantificar

antgenos por inmunodifusin, en el cual un
antgeno se pone en un gel para que difunda por el
agar que contiene el anticuerpo. Los crculos de
precipitacin resultantes reflejan la concentracin
del antgeno.
Infeccin oportunista: Infeccin producida en

individuos
inmunodeprimidos,
por
microorganismos de baja virulencia en individuos
inmunocompetentes.
Inmunoelectroforesis: Mtodo que combina una

separacin electrofortica inicial de protenas seguidas por una inmunodifusin con el resultado
de formacin de arcos de precipitacin.
Inflamacin: Es la respuesta de un tejido a la injuria, la cual es funcin de la llegada de molculas del suero y clulas del sistema inmune al sitio
del dao. La reaccin consiste de tres componentes locales: Incremento de la circulacin, incremento de la permeabilidad capilar y salida de clulas desde los vasos sanguneos al tejido daado
Inmunofluorescencia: Mtodo que permite la

identificacin microscpica mediante el microscopio de luz o citometra de flujo, de antgenos
localizados en tejidos o clulas, utilizando
anticuerpos conjugados con fluorocromos.
Inmunidad adquirida o especfica: Respuesta

inmune mediada por anticuerpos y clulas T caracterizada por ser especfica y presentar memoria.
Inmunogenicidad: Capacidad de generar una respuesta inmune especfica, que produce anticuerpos
y/o linfocitos T-activados.
Inmunidad innata o inespecfica: Mecanismos

de defensa presentes desde el nacimiento, los cuales no presentan especificidad ni memoria
inmunolgica.
Inmungeno: Sustancia que cuando es introducida en un animal, estimula la respuesta inmune.
Inmunidad mediada por clulas: Inmunidad en

la que predomina la participacin de linfocitos y
macrfagos.
Inmunoglobulina: Glicoprotena compuesta por

cadenas H y L, que acta como anticuerpo. Los
anticuerpos son inmunoglobulinas.
Inmunidad pasiva: Proteccin adquirida por la

introduccin de anticuerpos preformados o clulas inmunes en individuos no inmunizados.
Inoculacin: Introduccin de un antgeno o

antisuero en un animal para conferir inmunidad.
793
Sin ttulo-2
793
5/26/06, 10:27 AM
Integrinas: Familia de glicoprotenas dimricas

de transmembrana que promueven la adhesin
celular. Son un tipo de molculas de adhesin.
clulas K y NK. Poseen marcadores linfocitarios

y de monocitos/macrfagos.
Ligamiento: Condicin en la que dos genes se
hallan muy prximos en un cromosoma y suelen
heredarse juntos.
Interferones: Grupo heterogneo de protenas de

bajo peso molecular, elaboradas por clulas infectadas. Son un tipo de citoquinas.
Ligando: Cualquier molcula que forma un complejo con cualquier otra molcula. A esta ltima
se le llama receptor.
Interleuquinas (IL): Grupo de molculas, tambin denominadas citoquinas que intervienen en

la sealizacin entre las clulas del sistema inmune.
Lnea celular: Clulas producidas por crecimiento

continuo in vitro de un determinado cultivo celular. Las lneas celulares suelen contener varios
clones.
Intrn: Segmento del gen, ubicado entre los

exones, que no codifica ninguna secuencia
proteica.
Lnea germinal: Material gentico transmitido a

travs de los gametos, antes de que sea modificado por recombinaciones somticas o mutaciones.
Isoelectroenfoque: Separacin de molculas sobre la base de su carga. A lo largo de un gradiente

de pH, cada molcula migra hasta alcanzar una
carga neta nula.
Linfoblasto: Precursor inmaduro de los linfocitos,

presente normalmente en mdula sea.
Islogo: De constitucin gentica idntica.

Linfoquinas: Trmino genrico para designar
molculas que transmiten seales entre las clulas del sistema inmune, es decir son citoquinas y
son producidas por los linfocitos.
Isotipo: Se refiere a la variacin gentica dentro

de una familia de protenas o pptidos, de forma
que cada miembro de la especie tendr todos los
isotipos de la familia representados en su genoma.
Ej.: las clases de inmunoglobulinas.
Linfocito: Son las clulas fundamentales en una

respuesta inmune porque reconocen el antgeno
en forma especfica va un receptor localizado en
su membrana. Pueden ser de tipo B o T. Clula
mononuclear de 7-12 m de dimetro, que presenta un ncleo con cromatina densamente compacta y escaso citoplasma.
Lectinas: Sustancias derivadas de plantas. Se unen

especficamente a azcares y oligosacridos, y tienen actividad de pan-aglutinina para eritrocitos.
Las lectinas tambin son comnmente mitgenos.
LES (Lupus Eritematoso Sistmico): Enfermedad autoinmune del ser humano, en la que
habitualmente intervienen anticuerpos
antinucleares.
Linfocito activado: Linfocito que ha sido estimulado por un antgeno especfico o por un
mitgeno no especfico, como por ejemplo una
lectina.
Leucotrienos: Grupo de metabolitos del cido

araquidnico que tienen potentes efectos
farmacolgicos.
Linfocito B (Clula B): Clulas precursoras de

las clulas plasmticas, productoras de
anticuerpos.
LFA (Leucocyte Functional Antigens): Grupo de tres molculas que median en la adherencia
intercelular entre los leucocitos y otras clulas, de
un modo antgeno-inespecfico. Son un tipo de
molculas de adhesin.
Linfocito T (Clula T): Clulas derivadas del

Timo que participan en una variedad de reacciones inmunes mediadas por clulas.
Lisosoma: Organelo que contiene enzimas hidrolticas y que est presente en el citoplasma de
algunas clulas, como por ejemplo monocitos y
macrfagos.
LGL (Large Granular Lymphocytes): Grupo de linfocitos morfolgicamente definidos que

contienen la mayor parte de la actividad de las
794
Sin ttulo-2
794
5/26/06, 10:27 AM
LPS (Lipopolisacrido): Producto de las paredes

celulares de algunas bacterias Gram negativas, capaz de actuar como mitgeno para las clulas B.
las alognicas, por parte de las clulas T. La respuesta se mide por la proliferacin que se produce en presencia de las clulas estimulantes.
Locus: Sitio del cromosoma en el que se encuentra un determinado gen.
Molculas MHC clases I, II, III: Tres clases

principales de molculas codificadas dentro del
MHC. Las molculas de clase I poseen un pptido
MHC, asociado con la Beta2-microglobulina; las
molculas de clase II poseen dos pptidos codificados por el MHC, asociados de forma no
covalente.
Macrfago: Clulas fagocticas mononucleares

que se encuentran en algunos tejidos y que derivan de los monocitos. Presentan funciones accesorias en la inmunidad celular.
Maduracin de la afinidad: Aumento de la afinidad de los anticuerpos. Se presenta con frecuencia durante una respuesta inmune secundaria.
Monoclonal: Derivado de un solo clon, por ejemplo, los anticuerpos monoclonales que son producidos por un nico clon de clulas B y tienen carcter homogneo.
MALT (Mucosa Associated Lymphoid

Tissue): Trmino genrico con que se denomina
al tejido linfoide del tubo gastrointestinal, rbol
bronquial y otras mucosas.
Mutacin gentica: Cambio, delecin, insercin

o inversin de una base o secuencia nucleotdica
en la molcula de DNA.
Mutacin somtica: Proceso que ocurre durante
la maduracin de las clulas B y que afecta la regin V de los anticuerpos, aumentando la afinidad del anticuerpo por el antgeno.
Marcadores CD (Cluster of Diferentiation):

Molculas de la superficie celular que pueden
distinguirse con la ayuda de anticuerpos especficos. Se utilizan generalmente para diferenciar las
distintas poblaciones celulares y estadios de maduracin de las clulas del Sistema Inmune.
Oligoclonal: Conjunto de anticuerpos de especificidad restringida.
Medio HAT: Medio de cultivo utilizado para seleccionar los hbridos de una fusin entre linfocitos
B y clulas mieloides. Contiene Hipoxantina,
Aminopterina y Timidina.
Opsonizacin: Proceso por el cual se facilita la

fagocitosis mediante depsito de opsoninas (un
Ej.: anticuerpos y C3 b) sobre el antgeno.
Memoria inmunolgica: Mayor respuesta de un

animal inmune a la segunda o subsecuente administracin de un antgeno.
rganos linfoides primarios: rganos linfoides

que son esenciales para la diferenciacin de los
linfocitos. Estos rganos son el Timo para los
linfocitos T y la Mdula sea, bolsa de Fabricio
en las aves, para los linfocitos B.
Mieloma mltiple: Tumor de clulas plasmticas.

Las clulas del mieloma producen una
inmunoglobulina
monoclonal
llamada
paraprotena, la cual es detectable en el suero del
paciente (componente monoclonal).
rganos linfoides secundarios: rganos

linfoides perifricos en los cuales se producen las
respuestas inmunes adquiridas. Estos rganos son
el bazo, los ganglios linfticos y el tejido linfoide
asociado a mucosas.
Mimotopo: Pptido sinttico que imita o contiene la estructura de un eptopo. Eptopo sinttico.
PAF (Platelet Activating Factor): Factor

activador de las plaquetas. Factor liberado por los
basfilos que causa agregacin plaquetaria.
Mitgeno: Sustancia que estimula la sntesis del

DNA, transformacin blstica y finalmente divisin de linfocitos.
Paraproteinemia: Condicin presente en un grupo heterogneo de enfermedades caracterizada por

la presencia de inmunoglobulina monoclonal en
el suero u orina.
MLR/MLC (Mixed Lymphocyte Reaction/

Mixed Lymphocyte Culture): Sistema analtico para observar el reconocimiento de las clu-
795
Sin ttulo-2
795
5/26/06, 10:27 AM
Paratopo: Parte de la molcula del anticuerpo que

se une al eptopo.
Prostaglandinas: Derivados farmacolgicamente

activos del cido araquidnico. Las diferentes
prostaglandinas son capaces de modular la movilidad de las clulas y las respuestas inmunes.
Patgeno: Microorganismo que causa enfermedad.
Protena bsica mayor: Protena txica de la

membrana de los eosinfilos que produce dao
tisular en alergias y enfermedades inflamatorias.
PHA (Phitohemaglutinin): Mitgeno para clulas, principalmente linfocitos T. Estimula la sntesis de DNA y la transformacin blstica de los
linfocitos.
Protena de Bence-Jones: Cadena liviana

monoclonal presente en la orina de pacientes con
gammapatas monoclonales.
Pinocitosis: Proceso mediante el cual la clula

capta lquidos o partculas muy pequeas.
Protenas de fase aguda: Protenas sricas cuyos

niveles aumentan durante la infeccin o las reacciones inflamatorias.
Placas de Peyer: Tejido linfoide ubicado en la

mucosa del intestino delgado. Contienen todos los
elementos involucrados en una respuesta inmune:
linfocitos B, clulas plasmticas, centros
germinales, macrfagos y reas dependientes de
clulas T, entre otros.
Protenas G: Protenas regulatorias que ligan

guanidn-nucletidos, y que acoplan la seal desde el receptor a una activacin de enzimas asociadas a la membrana o a la actividad de canales
inicos.
Plsmido: Pequeo DNA circular de origen

bacteriano que contiene resistencia a antibiticos.
Se utiliza como vector de clonamiento.
Prueba Coombs: Mtodo para detectar

inmunoglobulinas unidas a glbulos rojos. En la
Prueba de Coombs directa, los eritrocitos de un
individuo sensibilizado son aglutinados por
anticuerpos anti-gammaglobulinas (Suero de
Coombs). En la Prueba de Coombs indirecta, el
suero del paciente es incubado con eritrocitos normales y las clulas sensibilizadas son aglutinadas
con una anti-inmunoglobulina.
Plasmina: Enzima fibrinoltica capaz de digerir

proteolticamente la protena C1 del complemento.
Policlonal: Se refiere a la activacin policlonal y
mitosis de clulas T o B que tienen diferentes receptores en su superficie, es decir, en una respuesta
policlonal participan mltiples clones de diferente especificidad.
Prpura trombocitopnico inmune: Sndrome

clnico, en el cual existe trombocitopenia persistente asociada a la presencia de autoanticuerpos
circulantes.
Presentacin antignica: Proceso por el cual las

clulas presentadoras de antgeno expresan el
antgeno en molculas MHC en su superficie; de
esta manera el antgeno es reconocible por los
linfocitos T.
Quimiotaxis: Aumento de la migracin

direccional de las clulas, particularmente en respuesta a gradientes de concentracin de ciertos
factores quimioatractantes o quimiotcticos.
Procesamiento antignico: Modificacin del

antgeno en una forma que puede ser reconocido
por los linfocitos T.
Quininas: Grupo de mediadores vasoactivos que

se producen tras la lesin tisular.
Proteasoma: Es un complejo de proteasas

multicatalticas que rompe protenas citoslicas en
pequeos fragmentos. Dos de sus componentes
(LMP-2 y LMP-7) son codificados dentro del MHC.
El proteasoma produce trocitos de antgeno que pueden ser cargados sobre molculas MHC de clase I.
Radioinmunoensayo: Mtodo analtico cuantitativo en el cual un istopo radiactivo es usado para

detectar antgenos o anticuerpos en alguna forma
de inmunoensayo.
Reaccin en Cadena de la Polimerasa (PCR):
Mtodo de amplificacin de segmentos de DNA
796
Sin ttulo-2
796
5/26/06, 10:27 AM
o RNA de composicin conocida, usando

partidores para iniciar la polimerizacin por las
DNA o RNA polimerasas termoestables.
mente en el suero, las que pueden activar el sistema del complemento.

Respuesta primaria: Es la respuesta inmune
(celular o humoral) que se produce despus de un
encuentro inicial con un determinado antgeno.
Reaccin cruzada: La reaccin de un anticuerpo

con un antgeno diferente del que estimul su secrecin.
Respuesta secundaria: Respuesta inmunitaria

que sigue a un segundo o subsiguiente encuentro
con un determinado antgeno.
Receptor: Molcula de la superficie celular que

se une especficamente a su ligando (protenas o
pptidos).
Respuesta tipo Th1 y tipo Th2: El sub-set de

linfocitos Th1 promueve las respuesta de tipo celular, mientras que el sub-set Th2 promueve respuestas mediadas por anticuerpos. Cada modo de
respuesta modula a la otra. Por ejemplo, el IFN
producido por linfocitos Th1 limita la proliferacin de clulas Th2.
Receptor Fc: Receptor para los fragmentos Fc de

inmunoglobulinas, presente en varias clulas.
Receptor de clulas T: Receptor antignico de
las clulas T que consta de un dmero alfa/beta
(TCR-2) o gamma/delta (TCR-1), asociado al
complejo CD3.
Restriccin MHC: Los linfocitos T reconocen

antgenos asociados con ciertas molculas MHC.
Por ejemplo, un linfocito T que reconoce un
antgeno asociado con H-2Kb no lo reconoce si
est asociado con H-2Db H-2Kk. La base de esta
observacin, es que los linfocitos T pueden
interactuar con molculas MHC propias que han
sido selectivamente expandidas en el timo, y que
estn preparadas para responder a antgenos sobre clulas presentadoras de antgeno que tienen
estos mismos MHC.
Recombinacin: Proceso por el cual la informacin gentica se redistribuye durante la meiosis.

Este proceso tiene lugar tambin durante la
redistribucin somtica del DNA, que ocurre en
la formacin de los genes que codifican las molculas de anticuerpo y los receptores antignicos
de las clulas T.
Regin constante: Regin carboxilo terminal,
relativamente invariable de las cadenas pesadas y
livianas de las inmunoglobulinas, y las cadenas
alfa, beta, gamma y delta de los receptores de clulas T.
Retrovirus: Virus que contiene y utiliza una

transcriptasa inversa.
Roseta E: Formacin de un grupo (roseta) de clulas consistente en eritrocitos y linfocitos T humanos.
Regin hipervariable: Se refiere a las tres zonas

ms variables de la regin V en las cadenas de
inmunoglobulinas y de los receptores de clulas
T. Estas regiones contribuyen al sitio de unin con
el antgeno.
Roseta EAC: Grupo de eritrocitos sensibilizados

con anticuerpo y complemento, alrededor de
linfocitos B humanos.
Repertorio: Es la suma total de receptores para

antgeno producido en el sistema inmune de una
especie dada. El repertorio inicial est parcialmente determinado por los genes del TCR y por las
cadenas H y L de las inmunoglobulinas.
Segmentos de andamiaje: Secciones de las regiones V del anticuerpo, situadas entre las regiones hipervariables.
Respuesta inmune celular: Proceso en el cual,

la actividad inmune es llevada a cabo por linfocitos
T citotxicos y clulas NK principalmente.
Seudogenes: Genes con estructuras homlogas a

las de otros genes, pero que no pueden ser expresados.
Respuesta inmune humoral: Proceso en el cual,

la actividad inmune es mediada por
inmunoglobulinas que se encuentran principal-
S.I.D.A.: Inmunodeficiencia, causada por el virus de inmunodeficiencia humana (VIH).
797
Sin ttulo-2
797
5/26/06, 10:27 AM
Tolerancia: Falta de respuesta inmune especfica.
Sinergismo: Interaccin cooperativa.

Singnico: Animal perteciente a cepas obtenidas
mediante procreacin endogmica, de forma que
las parejas de autosomas dentro de un individuo
son idnticas.
Toxoide: Derivado antignico no txico

proveniente de una toxina.
Transcriptasa reversa: Enzima que cataliza la
transcripcin del RNA a DNA.
Sistema fagoctico mononuclear (SFM): Incluye monocitos y macrfagos.
Transferencia pasiva: Tratamiento basado en la

transferencia de anticuerpos o clulas inmunes
extrados de un individuo sensibilizado a un
antgeno, a otro individuo.
Sistema linftico: Es el sistema de vasos que recorre el cuerpo y recibe el exudado de los tejidos
llevndolo a la sangre. Este lquido transparente
recibe el nombre de linfa. Este sistema tambin
acta como una ruta importante en el movimiento
de antgenos desde la periferia a los ndulos
linfticos y en la re-circulacin de linfocitos y clulas dendrticas.
Vacunacin: Inmunizacin con antgenos administrados para la prevencin de enfermedades infecciosas.

Vacuna anti-idiotpica: Vacuna que contiene un
anticuerpo anti-idiotpico como inmungeno. El
anticuerpo anti-idiotpico es una imagen interna
de un antgeno.
Subclases de inmunoglobulinas: Subdivisin de

las clases de inmunoglobulinas basado en diferencias antignicas y estructurales en las cadenas pesadas (H). En humanos existen cuatro subclases
de IgG: IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4.
Vacuna recombinante: Vacuna que contiene un

antgeno preparado mediante tecnologa del DNA
recombinante o un virus recombinante como
inmungeno.
Superfamilia de las inmunoglobulinas: Grupos

de genes relacionados estructuralmente que codifican a las inmunoglobulinas, receptor de clulas
T, molculas MHC y otras molculas.
Vacuna gnica: Contiene DNA que codifica un

antgeno.
Supresin: Una subpoblacin de linfocitos T (T

supresores o Ts) modula la actividad de otros
linfocitos.
Vacuna sinttica: Vacuna que contiene pptidos

sintticos como inmungeno.
TAP-1 y TAP-2: (Protenas transportadoras de

antgeno) Son miembros de la familia de transportadores ABC codificados en el MHC. Ellas
transfieren pptidos a travs de la membrana del
retculo endoplsmico, para ser presentados a
molculas MHC de clase I.
Va alternativa del complemento: Va de activacin del sistema del complemento en que interviene C3 y los factores B, D, P, H e I. Interactan
en la vecindad de una superficie activadora para
constituir una va alternativa en la formacin de
la C3-convertasa.
Timo: rgano linfoide primario habitualmente

ubicado en la parte superior del trax, en el cual
se produce el desarrollo y maduracin de las clulas T.
Va clsica del complemento: Va por la cual los

complejos antgeno-anticuerpo pueden activar el
sistema del complemento; en la generacin de C3
convertasa participan los componentes C1, C2 y
C4.
Ttulo de anticuerpos: Concentracin relativa de

los anticuerpos presentes en una muestra de suero
u otro fluido.
Va de la lipoxigenasa: Metabolismo enzimtico

de la membrana celular. A partir del cido araquidnico se generan leucotrienos.
TNF (Tumor Necrosis Factor): Citoquina liberada por los macrfagos activados.
Va ltica: Participan los componentes C5-C9

(Complejo de ataque a membrana), responsable
798
Sin ttulo-2
798
5/26/06, 10:27 AM
de la lisis de las membranas en las clulas

sensibilizadas.
Xenognico: Dcese de las diferencias antignicas
interespecies.
Xenosensibilizacin: Respuesta inmune de una
especie animal contra antgenos de otra especie.
Referencia
Palomo I., Ferreira A., Seplveda C., Rosemblatt
M., Vergara U., (Eds.), Fundamentos de
Inmunologa, Editorial Universidad de Talca,
1998. Modificado por Palomo I., Carrin F.,
Becker M. I.
799
Sin ttulo-2
799
5/26/06, 10:27 AM
800
Sin ttulo-2
800
5/26/06, 10:27 AM
NDICE ALFABTICO GENERAL DE MATERIAS
Antgeno 105
asociacin MHC 185, 187
clasificacin 113
caractersticas 113
de diferenciacin 759
determinante antignico 106
eptopo (ver en E)
eritrocitario 111, 439
hapteno 108
histocompatibilidad 174
neutrfilos 453
plaquetas 446
procesamiento y presentacin
endgena 185
exgena 187
Anti-idiotipo 283
Antihistamnicos 381
Apoptosis 271
Artritis Reumatodea 411
Asma bronquial 381, 395
Atpico 380
Autoanticuerpo 404
Autoantgeno 404
Autotrasplante 621
Autoinmune 404
Autotolerancia 404
A
ABO (ver Sistema ABO) 111, 440
Activacin 65, 195, 202, 205
Adenina 740
Adenosin deaminasa 499
ADN 739
Adyuvante de Freund`s 600
Afinidad 136
Agammaglobulinemia 499
Alelos, exclusin 142
Alergeno 114
Alergia 381
Aloinjerto 621
Aloinmunidad 442, 447
Alognico 621
Anafilctico, shock 393
Anemia hemoltica inmune 439
Anergia clonal 272
Anticuerpo (ver adems Inmunoglobulina)
afinidad 136
anti-citoplasma de neutrfilos 455
antiespermticos 321
antifosfolpidos 425
anti-idiotipo 283
anti-injerto 623
avidez 136
biosntesis 146
biotecnologa (usos) 731
cadenas
livianas 127
pesadas 127
clases 130
diversidad 136
estructura 120
monoclonal 721
Antigenicidad 106
B
2-microglobulina 171
Bacteria, inmunidad frente a
Basfilo 74
Bazo 82
801
Sin ttulo-2
801
5/26/06, 10:27 AM
533
clase II 172
clase III 173
Complejo inmune 383
Complejo multicataltico (ver proteasoma)
Complemento
va
alterna 341
clsica 337
C1 333
C2 333
C3 333
C4 333
C5 333
C6 333
C7 333
C8 333
C9 333
C
C, regin
inmunoglobulina 127
receptor clula T 152
Cadena
MHC clase I 174

MHC clase II 174
MHC clase II 174

clula T 152
anticuerpo 133
anticuerpo 131
Invariante (Ii) 188
127
127
Calnexina 188
CD, molculas 759
CDR 136
Clula
de Langerhans 65
endotelial columnar (CEC) 81
M 304
mtodos de separacin 658
leucocito (ver en L)
presentadora de antgenos (CPA) 183
Centro germinal 80
CSF 56
CFU 56
Chaperonina 187
Citolisis
complemento 344
linfocitos Tc 352
natural killer 358
Citopenia
inmune 439
Citoquina (ver Interleuquina)
Citosina 740
Citotoxicidad
anlisis de 658
mediada por clula 349
Clonamiento 742
Colgeno 55
Complejo ataque membrana 344
Complejo Principal de Histocompatibilidad ( MHC)
antgeno (o molcula) 169
clase I 171
D
D, regin
genes cadenas H de Ig 137
Deficiencia inmunitaria combinada grave
(SCID) 498
Dficit
adenosin desaminasa 498
adhesin leucocitaria 498
mieloperoxidasa 498
purn-nuclesido-fosforilasa 499
Delecin clonal 272
Desoxirribosa 740
Dermatitis por contacto 385
Determinante antignico (ver Eptopo)
Diacilglicerol 194
Difusin en gel agarosa 643
Di George, anomala de 507
Disociacin, constante de 136
Disgenesia reticular 505
Dominios de inmunoglobulinas
dominios constantes 130
dominios variables 128
Donante 621
E
Efecto carrier 598
Electroforesis 462
ELISA 650
Endotelio columnar 81
Enzimas de restriccin 742
Eosinfilo 73
802
Sin ttulo-2
802
5/26/06, 10:27 AM
Hipersensibilidad
manifestaciones orales 749
tipo I 381
tipo II 382
tipo III 383
tipo IV 384
Hipogammaglobulinemia 498
Histamina 75, 380, 390
Homing linfocitario 253
Eptopo 106
Exon 747
F
Fab 128
Factor
B (Complemento) 332
D (Complemento) 332
estimulante de colonias granulocito/macrfago
(ver GM-CSF)
H (Complemento) 332
I (Complemento) 332
necrosis tumoral (TNF) 217
quimiotctico 67
Fagocitosis 70
fagosoma 70
opsonizacin 70, 330
Fibronectina 55
Fluorescencia 649, 701
Fluorocromos 706
Fusin 725
I
Idiotipo 130
Idiotopo 130
IgA secretora 133, 305
Inflamacin 96
Inmunidad
adquirida 58, 100
innata 87
Immunoblotting 651
Inmunodeficiencia
manifestaciones orales 480
primaria 497
secundaria 513
Inmunodifusin 643
Inmunoelectroforesis 463, 644
Inmunofluorescencia 649
Inmungeno 590
Inmunogenicidad 106
Inmunoglobulina (ver adems Anticuerpo)
IgA 132
IgD 133
IgE 134
IgG 131
IgM 132
BCR 120
Inmunomodulador 629
Inmunoprecipitacin 641
Inmunosupresin 624
Inmunoterapia 613, 629
Inmunotoxinas 614
Infeccin 533, 547, 559, 569
Inositol 1,4,5-trisfosfato (IP3) 199
Integrinas 245
Interleuquinas 211
Intron 747
Isotipo 130
G
Gammaglobulinas 461
Ganglios linfticos 80
Gen 739
Glucocorticoides 631
GM-CSF 56
G-CSF 56
Granulocito 65
Guanina 740
H
Hapteno 108
Haplotipo 176, 691
HAT (medio seleccin) 723
Hemaglutinacin 647
Hematopoyesis 55
Heterohibridomas 731
Hibridomas 722
HLA 171, 687
803
Sin ttulo-2
803
5/26/06, 10:27 AM
J, cadena
IgA 132
IgM 132
Macrfago 63
MALT (Mucosal Associated Lymphoid
Tissue) 83
Mastocito 75, 381, 389
M-CSF 56
Mdula sea 75
Megacariocito 56
MHC (ver Complejo Principal de
Histocompatibilidad)
Mieloma mltiple 467
Molculas de adhesin
Integrinas 245
Superfamilia de las Ig 246
Selectinas 248
Molculas CD (ver CD, molculas)
Monocito 62
Monoclonal (ver anticuerpo monoclonal)
K
Ka (constante de
asociacin o afinidad) 136
(cadena Kappa) 127
Kd (constante de disociacin) 136
L
(cadena Lambda) 127
Laminina 55
Leucocito
basfilo 74
eosinfilo 73
linfocito 57
monocito 62
neutrfilo 65
Leucoplasia pilosa 481
Leucotrieno 90
Linfocito
B
activacin 62
de memoria 60
diferenciacin 266
funcin 59
marcadores 777
receptor antignico (BCR) 120
T
activacin 62
citotxico 59, 352
de memoria 60, 352
diferenciacin 59, 269
helper 59
molculas accesorias 163
MHC 181
receptor (TCR) 152
CD3 154
Th1, Th2, Th0 226, 282
Linfoquinas (ver Interleuquina)
LMP 185
Lisozima 93
Litre 114
Lupus Eritematoso Sistmico 402, 416
N
Natural killer 58, 351
Neutrfilo 65
Neutropenia inmune 453
O
Opsonizacin 330
rganos linfoides
primarios 75
secundarios 80
P
Papana 128
Parsito, respuesta inmune a 569
Paratopo 127
Pptidos
reconocimiento por TCR 181
unin a molculas MHC 184
vacunas sintticas 596
Perforina 355
Plaqueta 56, 445
Plasma
protenas, inflamacin 98
Plasmacitoma 470
804
Sin ttulo-2
804
5/26/06, 10:27 AM
Shock anafilctico (ver, Anafilctico shock)

SIDA 513
Sndrome
antifosfolpido 425
de Good Pasture 402, 382
de Sjgren 432
de Wiskott-Aldrich 507
Hiper-IgM 501
Inmunodeficiencia adquirida o secundaria 511
Sistema antgeno leucocitario
humano (HLA) 169, 687
Sistema
ABO (grupo sanguneo) (ver ABO)
complemento 329
endocrino 292
fagoctico-mononuclear 62
inmune, clula 55
linftico 57
quininas 94
Southern blot 743
Superantgeno 114
Superfamilia de las Inmunoglobulinas 246
Polimorfismo
molculas MHC 170, 687
Polimorfonuclear
separacin de 658
evaluacin de funcin 678
Properdina 332
Prostaglandinas 96
Proteasoma 185
Protena de Bence-Jones 461
Protena Kinasa 196
Q
Quimioquinas 237
Quimiotaxis 67
R
Radioinmunoanlisis 652
Reaccin de la polimerasa en cadena 745
Receptor
de clulas B (BCR) 120
de clulas T (TCR) 152
citoquinas 219
Fc 68, 127
fracciones del Complemento 332
molculas de adhesin 244
Respuesta inmune
clulas que intervienen 55
funciones efectoras 329, 351, 367
regulacin 277
seleccin clonal 62
Rinitis alrgica 381
Ribosa 740
RNA 739
T
Timina 740
Timo
desarrollo clula T 269
estructura 78
Timocito 270
Tiroiditis Hashimoto 402
Tirosina kinasa (ver Protena Kinasa)
Tolerancia
oral 309
Transgnico 746
Transmigracin linfocitaria 250
Trasplante (Inmunologa) 621
Trombocitopenia inmune 445
Tumor (Inmunologa) 607
S, protena 332
Segundo mensajero 199
Seleccin
clonal
62
negativa 272
positiva 271
Selectinas
E-Selectina 248
L-Selectina 248
P-Selectina 248
lcera oral recurrente (aftas) 484

Unin, antgeno-anticuerpo 640
Uracilo 740
805
Sin ttulo-2
805
5/26/06, 10:27 AM
V
V (regin variable)
inmunoglobulinas 128
receptor de clulas T 152
Vacunas
adyuvantes 600
anti-idiotpicas 596
efecto carrier (ver efecto carrier)
naturales (tradicionales) 590
recombinantes 593
sintticas 596
Virus, inmunidad frente a 559
W
Western blot (ver Immunoblotting)
X
Xenoantgeno 621
Xenotrasplante 621
Z
Zona
exceso 642
equivalencia 642
806
Sin ttulo-2
806
5/26/06, 10:27 AM
807
Sin ttulo-2
807
5/26/06, 10:27 AM
Este libro se termin de imprimir en

Impresora Gutenberg-Talca, en una tirada de
450 ejemplares en Octubre de 2002.
808
Sin ttulo-2
808
5/26/06, 10:27 AM

Inmunologia

Cargado por

Información del documento

Título original

Derechos de autor

Formatos disponibles

Compartir este documento

Compartir o incrustar documentos

Opciones para compartir

¿Le pareció útil este documento?

¿Este contenido es inapropiado?

Copyright:

Formatos disponibles

Inmunologia

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

Fundamentos

EDITORIAL UNIVERSIDAD DE TALCA

Registro de propiedad intelectual N 128.873

Registro de propiedad intelectual N 128.873

EDITORIAL UNIVERSIDAD DE TALCA

Ivn Palomo G., Arturo Ferreira V., Cecilia Seplveda C.,

Dra. Luz P. Blanco Palma

Prof. Dra. Edilia Andrews Garca

Prof. Dra. Eva Burger

Prof. Dra. Adriana Ardiles Sandoval

Prof. Dr. Antonio Cabral

BQ. Alejandra Arenas Celf

Prof. Dr. Flavio Carrin Arriagada

Dr. Miguel Barra Maldonado

Dr. Darwins Castillo Alvarez

Prof. Dra. Mara Ins Becker Contreras

Prof. Dr. Edgardo Carrasco Caldern

Prof. Dr. Rosario Billetta Daquila

Prof. Dra. Mnica Cornejo De Luigi

Prof. Dra. Mara Rosa Bono Merino

Prof. Dr. Alfredo De Ioannes Ilis

Prof. Dr. Ricardo Forastiero Valcarcel

Prof. Dra. Patricia Daz Amor

Prof. Dr. Enrique Gonzlez Villanueva

Dra. Susana Elgueta Miranda

Prof. Dr. Jorge Gonzlez Corts

Prof. Dr. Patricio Esquivel Snchez

Dra. Mara Antonieta Guzmn Melndez

Prof. Dr. Heriberto Fernndez

Prof. Dr. Gustavo Hoecker Salas

Prof. Dr. Jorge A. Fernndez Vargas

Prof. Dra. Mnica Imarai Bahamonde

Prof. Dr. Arturo Ferreira Vigouroux

Prof. Dr. Sergio Jacobelli Gabrielli

Prof. Dr. Hugo Folch Vilches

Prof. Dra. Cecilia Koenig Samohod

Dra. Mara Anglica Marinovich

Prof. Dr. Ivn Palomo Gonzlez

Prof. Dr. Benjamn Martnez

Prof. Dr. Jaime Pereira Garcs

Dr. Rodrigo Mora Sanhueza

Prof. Dra. Silvia Pierangeli

Prof. Dra. Cristina Navarrete

Prof. Dr. Javier Puente Piccardo

Dr. Rodrigo Naves Pichuante

Prof. Dr. Arnoldo Quezada Lagos

Dra. Ximena Norambuena Rodrguez

Dr. Santiago Rivero Daz

Prof. Dr. Jos M. Ojeda Fernndez

Prof. Dr. Cristin Rodrguez Guiraldes

Prof. Dr. Mario Rosemblatt Silber

Prof. MgCs. Marcela Vsquez Rojas

Prof. Dr. Flavio Salazar-Onfray

Dra. Pilar Vega Covarrubias

Prof. Dra. Cecilia Seplveda Carvajal

Prof. Dra. Juana Villegas Moraga

Prof. Dra. Mireya Silva Batista

Prof. Dr. Luis Zaror Cornejo

Prof. Dr. Julio Sharfstein

Prof. Dra. Marta Zelazko de

BQ. Carolina Valenzuela Barros

Dr. Claudio Ziga Marti

Prof. Dr. Claudio Vsquez Guzmn