Prctica 1

Principios bsicos de laboratorio, uso de pipetas y

clculos de utilidad en Bioqumica
Objetivo: que el estudiante se familiarice con la metodologa, equipo y forma de
trabajo dentro del curso de laboratorio de Bioqumica.

Fundamento
1. Algunos conceptos bsicos utilizados en la bioqumica
experimental
En el ao de 1960 la Conferencia General de Pesas y Medidas y la Oficina
Internacional de Pesas y Medidas con sede en Pars, Francia acordaron crear el
Sistema Internacional de Pesas y Medidas (SIU o SI) con el objetivo de facilitar el
intercambio de informacin cuantificable y universalizar su uso. El SI es
bsicamente una versin ampliada del sistema mtrico decimal y consta de siete
unidades bsicas independientes para cuantificar diferentes magnitudes fsicas. En
el Cuadro 1 se describen estas unidades, adems de los smbolos que se deben
utilizar cuando se hace mencin a stas.
Cuadro 1. Unidades bsicas del SI
Magnitud fsica
Longitud
Masa
Tiempo
Corriente elctrica
Temperatura
Intensidad luminosa
Cantidad de sustancia

Nombre de la unidad Smbolo

metro
kilogramo
segundo
amperio
kelvin
candela
mol

m
kg
s
A
K
cd
mol

Dos o ms unidades bsicas pueden ser combinadas mediante multiplicacin o

divisin para generar unidades SI derivadas. Algunas de estas unidades poseen
nombres particulares en honor a cientficos que contribuyeron al conocimiento de
un tema en particular. En el Cuadro 2 se presentan algunos ejemplos de unidades
SI derivadas.

Cuadro 2. Unidades SI derivadas de uso comn en medicina

Magnitud fsica

Nombre

rea
Metro cuadrado
Volumen
Metro cbico
Velocidad
Metro por segundo
Concentracin de sustancia Mol por metro cbico
Temperatura Celsius
Grado Celsius
Potencia
Watt
Potencial elctrico
Volt
Resistencia
Ohmio

Smbolo

C
W
V

Unidades
m2
m3
m/s o m.s-1
mol/ m3 o mol.m3
K-273.16
J/s o J.s-1
W/A o W.A-1
V/A o V.A-1

Muchas veces las unidades bsicas o derivadas pueden ser muy grandes o muy
pequeas para representar una cantidad en particular. Para esos casos, el SI
admite el uso de una serie de prefijos que permiten formar mltiplos o submltiplos
decimales de las unidades del SI. Estos prefijos se muestran en el Cuadro 3.
Cuadro 3. Prefijos utilizados en el SI.
Prefijo Factor Smbolo Prefijo Factor Smbolo
Ato
10-18
a
Deca
101
da
-15
2
Femto 10
f
Hecto
10
h
-12
3
Pico
10
p
Kilo
10
k
-9
6
Nano
10
n
Mega
10
M
-6
9
Micro
10

Giga
10
G
-3
12
Mili
10
m
Tera
10
T
-2
15
Centi
10
c
Peta
10
P
-1
18
Deci
10
d
Exa
10
E
Los prefijos se anteponen directamente al nombre o smbolo de la unidad en
cuestin, por ejemplo nanogramo o ng y no nano-gramo o n-g.
Si bien es cierto, el uso del SI es la regla hoy en da, existen excepciones que la
Oficina Internacional de Pesas y Medidas debi adoptar debido a su uso
generalizado. Algunas de estas excepciones de uso en ciencias mdicas se
muestran en el Cuadro 4.

Cuadro 4. Algunas unidades de uso comn que no pertenecen al SI.

Magnitud fsica

Unidad

Smbolo

Valor en SI

da

86400 s

hora

3600 s

minuto

min

60 s

litro

loL

10-3 m3

tonelada

1000 kg

dalton

Da

1.66 x 1027 kg

rea

hectrea

ha

10000 m2

Longitud

ngstrm

0.1 nm

Energa

calora

cal

1.1868 J

Tiempo

Volumen
Masa

Debido a su uso rutinario en la bioqumica experimental, vale la pena mencionar

algunas normas sobre la expresin de concentraciones de sustancias. La
concentracin de sustancias cuya masa molecular se conoce, se expresa como
cantidad de sustancia (moles o submltiplos como mmol, nmol) por litro (l).
Ejemplo: concentracin de glucosa en suero humano: 3.6 mmol/l a 6.1 mmol/l. Los
trminos concentracin molar, molaridad o M, normalidad o N son obsoletos y en
su lugar debe usarse el trmino cantidad de sustancia concentracin de X o ms
comnmente, concentracin de X. El trmino molal y su smbolo m no deben ser
ms utilizados y en su lugar se utiliza el trmino cantidad molalidad del soluto X
con las unidades SI mol/kg.
La Conferencia General de Pesas y Medidas no recomienda el uso de la escala
de pH y en su lugar, la concentracin de iones hidronio en una solucin debe ser
reportada como nmol/l. Sin embargo, la eliminacin de la escala de pH no ha sido
aceptada por la mayora de la comunidad cientfica. En el ao 2002, la Unin
Internacional de Qumica Pura y Aplicada elabor una propuesta para que dicha
medida cumpliera con los requisitos solicitados por la Conferencia. A la fecha, esta
propuesta se encuentra en discusin.
A continuacin se enumeran algunas reglas para la consignacin de smbolos y
cifras del SI:
-Los smbolos se escriben siempre en singular. Ejemplo: 2 mm y no 2 mms.
-El nombre completo de una unidad se pluraliza si es necesario. Ejemplo: 35
kilogramos.
-Los prefijos no deben usarse solos, sino siempre acompaados de una unidad.
Ejemplo: 14 gigawatts y no 14 gigas.
-El punto no debe usarse despus de un smbolo, a menos que ste se encuentre
al final de una frase. Ejemplo: 55 kg de masa y no 55 kg. de masa.
-Siempre se deja un espacio entre el nmero que denota la cantidad y el smbolo
de la unidad. Ejemplo: 15 s y no 15s.

-Nmeros muy grandes pueden ser separados en grupos de tres para facilitar su
lectura, sin puntos o comas. Los puntos o comas se utilizan para las notaciones
decimales. Ejemplo: 1 000 257, 35 y no 1.000.257,35.
-Siempre se coloca un cero a la izquierda de la coma o el punto decimal para los
nmeros menores de uno. Ejemplo: 0.38 o 0,38 y no .38 o ,38.
-Los smbolos de las unidades o sus nombres no deben ser modificados mediante
adicin de subndices. Ejemplo: Vmax= 1000 V y no V= 1000 Vmax.
-La redaccin de la informacin no debe ser mezclada con los smbolos de las
unidades o sus nombres. Ejemplo: el contenido de agua es de 20 ml/kg y no 20
ml H2O/kg o 20 ml de agua/kg.
-Debe quedar explcito cul smbolo pertenece a cul valor numrico y qu
operacin matemtica debe ser aplicada a cada valor numrico. Ejemplos:
45 cm X 46 cm y no 45 X 46 cm
20 oC a 30 oC o (20 a 30) oC y no 20 oC-30 oC o 20 a 30 oC
-Los smbolos de las unidades o sus nombres no pueden ser mezclados y las
operaciones matemticas no son aplicadas a los nombres de las unidades sino a
los valores numricos. Ejemplos: pueden ser usadas formas como: kg/l, kg l o
kilogramo por litro y no formas como: kilogramo/l, kg/litro, kilogramo/litro o kg por l.
-Los valores de cantidades son expresados en forma numrica y con los smbolos
de las unidades. Ejemplos: m= 5 kg y no m= cinco kilogramos o m= cinco kg, o la
corriente fue de 15 A y no la corriente fue de 15 amperios.

2. Medicin de volmenes: pipetas y micropipetas.

Las mediciones y transferencias de volmenes exactos y precisos son
requisitos bsicos de la bioqumica experimental. Estos procedimientos son
hechos utilizando instrumentos como las pipetas manuales, las micropipetas, las
buretas, las probetas o los balones de aforar. Cada uno de ellos cumple una
funcin en particular dentro del laboratorio pero en algunos casos estas funciones
pueden sobreponerse. El grado de precisin de los mismos puede variar
considerablemente as que la escogencia del instrumento a utilizar para realizar
una medicin en particular es un paso crtico para obtener el resultado esperado.
Debido al uso rutinario dentro de las prcticas a realizar en este curso, se
introducir el uso apropiado de las pipetas y micropipetas. Sin embargo, es
recomendable que el estudiante realice una revisin de sus cursos de qumica
anteriores para recordar el manejo y uso de otro tipo de instrumentos volumtricos.

2.1. Uso correcto de las pipetas.

Existen bsicamente dos tipos de pipetas manuales: aquellas para contener y
aquellas para verter. Aquellas para contener deben ser enjuagadas con el solvente
despus de haber dispensado la solucin en cuestin. Estas pipetas contienen un
volumen exacto de lquido, el cual debe ser transferido completamente para que la
medida sea precisa. Algunas pipetas de contener de uso comn en el laboratorio
tienen nombres particulares como Micro-Folin, Sahli para medicin de
hemoglobina, Kirk Micro, White-Black Lambda entre otros.

Figura 1. Tipos de pipetas de verter: de soplar (A) y no de soplar (B). Note las
diferentes escalas y dnde terminan las graduaciones de la escala en cada tipo de
pipeta.
Estas pipetas no pueden ser utilizadas para la preparacin de soluciones y por
lo tanto su uso en este curso es limitado. Nuestra atencin se enfocar en las
pipetas para verter que son de utilidad para la preparacin de soluciones y
mediciones durante el curso y de las cuales existen dos tipos. Aquellas pipetas
para verter y que deben soplarse estn calibradas hasta la punta por lo que deben
llenarse con el lquido a medir, dispensarse, y el lquido remanente en la punta
debe soplarse. Son tambin conocidas como pipetas Ostwald-Folin o pipetas
serolgicas (Figura 1). Estas pipetas pueden ser distinguidas fcilmente ya que
sus graduaciones de escala se extienden hasta la punta de la pipeta. Adems,
poseen uno o dos anillos esmerilados cerca de la boquilla. El otro tipo de pipeta
para verter es aquella que no se sopla ya que est calibrada entre dos marcas que
no incluyen la punta. Por lo tanto, estas pipetas nunca deben soplarse sino que el
5

volumen a dispensar debe ser regulado manualmente de forma tal que el lquido a
dispensar se encuentre entre una marca y otra. Algunos nombres comunes que
reciben este tipo de pipetas son: pipeta volumtrica, tipo Mohr o bacteriolgica
(Figura 1).

2.2. Tcnica de pipeteo.

El primer paso de una buena tcnica de pipeteo es seleccionar la pipeta ms
apta para el volumen que se desea medir. Es precisamente este volumen el que
determina la pipeta a utilizar: el volumen a pipetear debe ser lo ms cercano
posible a la capacidad mxima de la pipeta. Adems, debe considerarse que el
volumen mnimo que una pipeta puede dispensar con precisin es
aproximadamente el 10 % de su capacidad. A continuacin se describen algunos
ejemplos.
Usted tiene tres pipetas cuyas capacidades mximas son de 25 ml, 10 ml y 5
ml. Cul pipeta usara para pipetear las siguientes cantidades: a) 10 ml, b) 15 ml
y c) 5.5 ml?
Si se tiene en cuenta el criterio mencionado anteriormente entonces para
dispensar 10 ml se debe utilizar la pipeta de 10 ml, para dispensar 15 ml se debe
utilizar la pipeta de 25 ml y para dispensar 5.5 ml se debe usar la pipeta de 10 ml.
Usted tiene tres pipetas cuyas capacidades mximas son de 0.1 ml, 1 ml y 2 ml.
Cul pipeta usara para pipetear las siguientes cantidades: a) 100 l, b) 200 l y
c) 1.1 ml?
En este caso, es necesario tener claro que 100 l equivalen a 0.1 ml y 200 l
equivalen a 0.2 ml (ver Cuadro 3). Por lo tanto, para dispensar 100 l se utiliza la
pipeta de 0.1 ml, para dispensar 200 l se utiliza la pipeta de 1ml y para dispensar
los 1.1 ml se utiliza la pipeta de 2 ml.
Una vez seleccionada la pipeta, es necesario cerciorarse qu tipo de pipeta es,
si es de soplar o no. Durante las prcticas de laboratorio se utilizarn pipetas con
capacidades mximas que oscilan entre los 0.1 ml a los 25 ml que pueden ser de
soplar o no. Es imperativo que se familiarice con estos tipos de pipetas y sus
escalas.
El siguiente paso es ajustar en la boquilla de la pipeta el dispositivo que se
utilizar para crear vaco y succin. En nuestro caso utilizaremos la pera de hule,
cuyo funcionamiento se describe en la leyenda de la Figura 2.

Figura 2. Dispositivo tipo pera para crear vaco y succin en la pipeta. Esta pera de
hule cuenta con tres puntos rotulados con flechas o A, B y C o 1, 2 y 3. Al ejercer
presin manual en uno de esos puntos, un baln interno permitir la entrada o
salida de aire para que la pipeta pueda succionar (A) o dispensar (B) el lquido que
contiene. El punto C o 3 es til para dispensar la ltima gota en aquellas pipetas
que son de soplar (C). El uso correcto de este dispositivo requiere de prctica para
ajustar la fuerza manual que debe usarse para ejercer presin. Si en algn
momento su pera se humedece con el lquido a dispensar, dejar de funcionar
pues no se podr ejercer vaco. Para proceder, es necesario secar antes bien la
pera.
La pipeta se debe llenar hasta un poco ms arriba del inicio de la graduacin
de la escala y luego poco a poco se ajusta, frente a los ojos y en posicin vertical,
al punto exacto de graduacin de la escala (generalmente 0). Recuerde que para
lquidos transparentes, el fondo del menisco del lquido se ajusta a la graduacin,
mientras que para lquidos no transparentes, los extremos del menisco se ajustan
a la graduacin de la escala. Una vez ajustado el volumen, la pipeta conteniendo
el lquido a dispensar es transferida al recipiente donde se depositar el lquido. En
este momento se presiona la pera suavemente en el punto que permitir la salida
del lquido, manteniendo la pipeta en posicin vertical y con la punta de la misma
descansando en el recipiente. Una vez dispensado el volumen, se retira la pera y
la pipeta se descarta cuidadosamente, con la punta hacia abajo en el recipiente
para descartar pipetas. Si por algn motivo debe volver a utilizar una pipeta en la
misma solucin en la que fue utilizada, es recomendable dejar la pipeta en
posicin horizontal sobre la mesa de trabajo, con la punta de la misma unos
centmetros fuera del borde de la mesa.

2.3. Uso correcto de las micropipetas.

Las micropipetas son dispositivos que permiten medir volmenes pequeos que
van desde 1 l hasta 1 ml o ms. Al igual que las pipetas stas pueden ser para
contener o para verter volmenes. Durante el curso utilizaremos micropipetas para
verter, ya sea un volumen fijo o un volumen variable. En las de volumen variable,
se puede seleccionar un volumen dentro de un rango de valores determinado. La
micropipeta ms comnmente usada en los laboratorios de anlisis fue introducida
por la compaa Eppendorf y este nombre se adopt de forma genrica para estos
dispositivos, aunque hoy en da existen una gran cantidad de compaas y
modelos similares que funcionan bajo un mismo principio de pistones para operar.
Por lo tanto, es aconsejable consultar las instrucciones del fabricante sobre el
empleo correcto de cada modelo. Sin embargo, todas ellas utilizan puntas o tips
descartables plsticos que se ajustan al extremo de la micropipeta. En estas
puntas de plstico es donde se deposita el lquido a medir.

Figura 3. Esquema general de las micropipetas marca BioRad a utilizar durante el

curso. A1: botn pulsador, A2: tornillo del botn pulsador, B: rueda dentada de
graduacin del volumen, C: cono de la pipeta, D: expulsor de punta y E: punta o
tip descartable. Tomado del manual de manejo de micropipetas Biorad, BR/06/05
Para absorber el lquido, el pistn es presionado hasta una primera posicin, el
tip es puesto en contacto con el lquido y luego, lentamente, se permite que el
pistn vuelva a su posicin original. Este paso permite el llenado del tip con el

volumen correspondiente. El tip de plstico generalmente no se seca por fuera ya

que se considera que su superficie no absorbe lquido. A continuacin se
describen las instrucciones especficas para los modelos de micropipetas que se
utilizarn durante el curso (Figura 3).
1. Seleccin de la micropipeta a utilizar segn el volumen a dispensar. Para
este paso, se aplican las mismas reglas que se utilizan para el manejo de
las pipetas. El Cuadro 5 muestra los rangos de volmenes que se pueden
pipetear con cada modelo de micropipeta de la marca Biorad, adems de
los usos ms comunes. La mayora de la micropipetas indican en el botn
pulsador el rango o volumen mximo que pueden pipetear. Para prevenir un
dao en el mecanismo interno de la micropipeta recuerde nunca sobrepasar
los volmenes mximos permitidos para cada micropipeta.
Cuadro 5. Modelo, rango de volmenes y aplicaciones ms comunes
de las micropipetas marca Biorad a utilizar durante el curso
Modelo
BR10

Rango de
volumen (l)
0.5-10

BR20

2-20

BR200
BR1000

20-200
100-1000

Uso ms comn
Medida y transferencia de microvolmenes. Biologa molecular
y ensayos enzimticos
Medida y transferencia de soluciones acuosas en general,
cidos y bases
Igual a BR20
Igual a BR20

2. Debido a que la micropipeta tiene un rango de volumen ajustable, es

necesario seleccionar el volumen a medir. Para ello se debe localizar el
indicador de volumen, compuesto de tres dgitos que se deben leer de
arriba hacia abajo. En la parte ms baja del indicador hay una escala que
permite el ajuste del volumen al ltimo dgito o decimal permitido segn el
caso. En las micropipetas de 2 hasta 200 l, los dgitos negros indican
microlitros y los dgitos rojos representan dcimas de microlitro. En el
Cuadro 6 se muestran ejemplos de cmo debe lucir el indicador de volumen
para medir diferentes volmenes.
3. Ajustar el volumen de la pipeta con el tornillo del botn pulsador (Figura 3,
A2) o la rueda de graduacin del volumen (Figura 3, B), hasta llegar a 1/3
por encima del valor deseado. Luego, lentamente, girando el tornillo o la
rueda, disminuir el ajuste hasta el valor deseado prestando atencin para no
excederlo. Si se excede, es aconsejable repetir el procedimiento de ajuste.

Siempre se debe ajustar el volumen deseado desde un volumen ms alto

disminuyendo las indicaciones del indicador.

Cuadro 6. Disposicin de los dgitos en el indicador segn la micropipeta a usar.

Micropipeta con volumen mximo a dispensar*:
10 l
20 l
100 l 200 l 1000 l

0
7
5 (rojo)
Volumen a dispensar: 7.5 l

1
2
5 (rojo)
12.5 l

0
7
5
75 l

1
2
5
125 l

0
7
5
750 l

* todos los dgitos deben aparecer en negro, excepto cuando se indique lo contrario en
parntesis

4. Seleccionar la punta o tip plstico apropiado para la micropipeta: la punta

debe ajustarse al cono de la micropipeta (Figura 3). Al insertar la punta en el
cuerpo de la pipeta hay que aplicar una fuerte presin con movimiento
giratorio para asegurar la hermeticidad. Nunca usar la pipeta con lquidos
sin la punta colocada. Es posible que la punta plstica se encuentre en una
caja tambin plstica que facilita su uso. Si la punta no queda bien ajustada
o no est en caja, deber ajustarse con la mano sin tocar la superficie que
estar en contacto con la solucin a extraer.
5. Aspiracin: apretar el botn pulsador hasta el primer tope (Figura 4A)
6. Con la pipeta en posicin vertical, sumergir la punta entre 1 mm y 3 mm en
la muestra.
7. Lentamente se aspira el lquido al relajar la presin del dedo sobre el botn
pulsador (Figura 4B). Si este paso no se realiza con atencin, puede entrar
aire en la punta y la cantidad de muestra aspirada no es la adecuada.
8. Esperar un segundo y retirar la punta del lquido.
9. Dosificacin: colocar la parte inferior de la punta contra la pared interior del
recipiente donde se depositar el lquido, con un ngulo entre 10o y 40 o.
10. Apretar el botn pulsador suavemente hasta el primer tope (Figura 4C) y
esperar un segundo.
11. Apretar el botn pulsador hasta el segundo tope para vaciar el resto del
lquido (Figura 4D).
12. Manteniendo apretado el botn pulsador en el segundo tope, retirar la
pipeta deslizando la punta por la pared del recipiente. Soltar luego el botn
pulsador (Figura 4E).
13. Expulsar la punta apretando el botn del expulsor (Figura 4F y Figura 3, D).

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Figura 4. Posiciones de la micropipeta a la hora de medir un volumen especfico.

A: Botn pulsador en el primer tope, B: la punta de la micropipeta es sumergida
entre 1 mm y 3 mm en la muestra para luego liberar el botn pulsador suavemente
hasta su posicin original, C: Forma correcta de dispensar el lquido medido en el
recipiente correspondiente, D: Posicin de la micropipeta al apretar el botn
pulsador hasta el segundo tope, E: Vuelta a la posicin inicial, F: Expulsin de la
punta, la cual debe ser descartada en un recipiente apropiado. Tomado del manual
de manejo de micropipetas Biorad, BR/06/05
Para no daar el sistema interno de pistones que posee la micropipeta:
-el lquido nunca debe entrar en contacto con el cono de la micropipeta
-nunca vuelque la micropipeta con la parte de arriba hacia abajo
-nunca coloque la micropipeta en forma horizontal si la punta tiene lquido
-nunca ajuste el volumen fuera del rango de la micropipeta
Con respecto a la micropipeta multicanal, stas tienen la ventaja de que se
puede pipetear el mismo volumen al mismo tiempo en varios recipientes a la vez.
Estas micropipetas fueron diseadas principalmente para los ensayos en formato
micro, donde se utiliza tambin un plato de plstico de 96 pozos para trabajar esa
cantidad de ensayos de forma simultnea. Las micropipetas multicanal son
dispositivos ms complejos que las micropipetas unicanal ya que bsicamente
pueden repetir varias veces la funcin que realiza esta ltima en un solo momento.
Para ello, poseen un solo mango, botn pulsador, etc pero un cono que permite la
insercin de 4 hasta 12 puntas al mismo tiempo. En el curso se utilizarn
micropipetas multicanales (12 canales) con un rango de volumen de 50 l a 300 l
similares a las de la Figura 5. Para su uso, se deben tener los mismos cuidados
que con las micropipetas unicanal, adems de cerciorarse que todas las puntas
estn bien colocadas, extrayendo la misma cantidad de solucin y que no se
observen burbujas de aire en ninguna.

11

Figura 5. Micropipeta multicanal (8 canales), modelo Biohit de rango de volumen

de 50 l a 300 l. Este tipo de micropipeta es muy til para microensayos semi
automatizados o automatizados en platos descartables de 96 pozos.

3. Clculos bsicos de utilidad en bioqumica experimental.

3.1. Preparacin de soluciones
Una solucin es una mezcla homognea de al menos dos sustancias, una que
se conoce como soluto y otra que se conoce como solvente, disolvente o diluyente
y que generalmente est en mayor proporcin que la primera. El solvente universal
es el agua y por lo tanto no es de extraar que casi todas las soluciones utilizadas
en bioqumica utilicen agua como disolvente.

12

Como se mencion anteriormente, la concentracin de una solucin debe ser

expresada en unidades del SI, es decir en mol/l cuando el peso molecular del
soluto se conoce, o en trminos de peso (masa) por litro si el peso molecular del
soluto se desconoce. Sin embargo, existen todava algunas expresiones que no
pertenecen al SI pero que su uso se ha mantenido, por razones histricas o
prcticas. Aunque el uso de dichas expresiones en este manual no es estimulado,
s es necesario introducirlos ya que muchos de los protocolos a utilizar todava son
descritos con esta nomenclatura. Existen bsicamente dos tipos de expresiones
que prevalecen: aquellas que expresan la concentracin de forma porcentual y
aquellas que la expresan como molaridad. Las concentraciones expresadas de
forma porcentual se refieren a partes de soluto por 100 partes de la solucin, de
ah el trmino porcentaje o por cien. Estas pueden enunciarse como:
-Peso por unidad de peso (o peso en peso o p/p): los dos, el soluto y el solvente
son pesados en gramos y la proporcin de soluto se expresa por 100 g de
solucin. Ejemplo: una solucin de NaCl al 24% (p/p) contiene 24 g de NaCl por
cada 100 g de solucin, o 240 g de NaCl y 760 g de disolvente.
-Volumen por unidad de volumen (o v/v): nmero de ml de soluto en 100 ml de
solucin. Ejemplo: una solucin de HCl al 1% (v/v) contiene 1 ml de HCl puro por
100 ml de solucin.
-Peso por unidad de volumen (o p/v): nmero de g de soluto en 100 ml de solucin.
Si el porcentaje no especifica la forma de expresin, es decir, p/p, v/v o p/v, se
asume que el porcentaje est expresado en peso por unidad de volumen. Ejemplo:
una solucin de MgCl2 al 7% contiene 7 g de MgCl2 por cada 100 ml de solucin.
Cabe destacar que al ser estas relaciones porcentuales, el volumen o peso final
puede ser cualquier cantidad pero lo importante es mantener la relacin entre las
partes. A continuacin algunos ejemplos:
Calcule cuntos gramos de NaOH se pesaron para obtener 300 ml de una solucin
al 10 %
Una solucin al 10 % de NaOH contiene 10 g de NaOH por cada 100 ml de
solucin. Sin embargo el enunciado menciona que se tena tres veces ms
solucin (300 ml). Por lo tanto, conservando la proporcin porcentual, se puede
decir que se pesaron 30 g de NaOH para obtener 300 ml de solucin al 10% o:
100 ml de solucin tienen 10 g de NaOH
300 ml de solucin tienen X g de NaOH
X= 30 g de NaOH.
Con respecto al trmino molaridad, ste expresa la concentracin de una
sustancia en particular en trminos de nmero de moles por litro de solucin y su
smbolo es M. Este trmino tambin debe ser descontinuado y reemplazado por
la expresin mol/l o mol/m3. Ejemplo: calcule cuntos gramos de NaOH se deben
pesar para preparar 2.5 l de una solucin de NaOH 0.1 M.
El primer dato que se requiere para poder obtener lo solicitado es el peso
molecular del NaOH, es decir, 40 g/mol. Posteriormente, es necesario saber que la
expresin 0.1 M quiere decir que la solucin posee 0.1 mol/l. En este caso en
13

particular, se requiere no 1 l sino 2.5 l de solucin, por lo tanto hay que pesar 0.1 X
2.5= 0.25 mol. Esta cantidad corresponde a 0.25 mol X 40 g/mol= 10 g. Entonces
para preparar 2.5 l de una solucin de NaOH 0.1 M se deben pesar 10 g de NaOH
y llevar a 2.5 l con agua.
3.1.1 Clculo y expresin de diluciones.
Una dilucin consiste en preparar una solucin menos concentrada a partir de
una ms concentrada. Esta prctica es muy comn en los laboratorios y de ella
depende en gran parte el resultado final analtico que se obtenga. Por lo tanto es
imperativo el manejo de este tipo de clculos para cualquier persona que trabaje
dentro de un laboratorio. Las diluciones generalmente se expresan como una
razn matemtica, por ejemplo 1:5 (o 1/5), 1:10 (o 1/10), etc. En el caso de una
dilucin 1:5, sta expresa la cantidad, sea volumen o peso de una sustancia en un
volumen total o final de la forma 1 volumen (o peso) en un volumen (o peso) total
de 5 volmenes. Ntese que el volumen total o final estar compuesto de 1
volumen de la sustancia a diluir y 4 volmenes del disolvente. Para calcular la
concentracin final de una solucin diluida, se multiplica la concentracin de la
solucin original por la dilucin expresada como fraccin. Ejemplo: una solucin de
urea cuya concentracin es de 5 mg/ml es diluda 1/10. La concentracin final de la
solucin diluida es 5 X 1/10= 0.5 mg/ml.
La ecuacin ms comnmente utilizada para preparar soluciones es:
V1 X C1 = V2 X C2
donde V1 es el volumen de la solucin concentrada que se debe aadir para
preparar la solucin diluida,
C1 es la concentracin de la solucin concentrada
V2 es el volumen de la solucin diluida
C2 es la concentracin de la solucin diluida.
Al utilizar esta ecuacin debe tomarse en cuenta que tanto las unidades de V1 y
V2 as como las de C1 y C2 deben ser las mismas, preferiblemente ml y mol/l
respectivamente. Ejemplo: prepare 500 ml de una solucin de glucosa 5 mol/l a
partir de una solucin de glucosa a 45 mol/l. Aplicando la ecuacin antes
presentada tenemos:
x X 45 mol/l= 500 ml X 5 mol/l
x= 55.56 ml de glucosa 45 mol/l
Entonces, para preparar 500 ml de una solucin de glucosa 5 mol/l, se
requieren 55.56 ml de glucosa 45 mol/l y llevar a 500 ml con agua. Ntese que la
solucin original fue diluida 1/9 o en otras palabras, se utiliz un factor de dilucin
de 9:
45 X 1/x= 5
x= 9
14

El factor de dilucin representa el nmero de veces que fue diluida la solucin

concentrada. Si se hace no una sino una serie de diluciones, la concentracin de
la solucin final se obtiene al multiplicar la concentracin original por el producto
de los factores de dilucin. Ejemplo: si la solucin de glucosa a 45 mol/l del
ejemplo anterior es primero diluida 1/9 y luego 1/100, la concentracin final de la
solucin ser 45 X 1/9 X 1/100= 0.05 mol/l, con un factor de dilucin de 900.
Las diluciones seriadas son tambin muy tiles. Estas diluciones son aquellas
en las cuales todas las diluciones hechas a partir de la primera o luego de la
primera poseen el mismo factor de dilucin. Ejemplo: para determinar la
concentracin de protenas en un suero animal, la muestra es diluida 1/5 mediante
la adicin de 0.02 ml de suero a 0.08 ml de solucin salina en el tubo nmero 1.
Los tubos 2 al 8 contienen 0.5 ml de solucin salina como diluyente. La dilucin
seriada se realiza al transferir 0.5 ml del tubo 1 al tubo 2, mezclar y transferir 0.5 ml
del tubo 2 al tubo 3 y as sucesivamente hasta el tubo 8. La concentracin de suero
en los tubos 2 al 8 decrece por un factor de 2, siendo cada dilucin: tubo 1:1/5,
tubo 2: 1/10, tubo 3: 1/20, tubo 4: 1/40, tubo 5: 1/80, tubo 6: 1/160, tubo 7: 1/360 y
tubo 8: 1/640.

Materiales y reactivos
-Pipetas serolgicas de varias graduaciones: 25 ml, 10 ml, 5 ml, 1 ml y 0.1 ml
-Una pera de hule con nmero: esta pera ser la que se le asignar y utilizar
durante todo el curso. Asegrese de que funcione correctamente. La pera debe ser
devuelta al finalizar cada prctica en perfecto estado.
-Un erlenmeyer o beaker lleno de agua destilada
-Un erlenmeyer o beaker vaco
-Una micropipeta de una de las siguientes graduaciones: de 100 a 1000 l, de 20
l a 200 l o de 2 l a 20 l unicanal o multicanal de 50 a 300 l. Usted recibir en
custodia una micropipeta para su uso durante todo el curso. Esta micropipeta
deber ser utilizada por sus compaeros tambin. Es su responsabilidad
entregarla al final del curso en perfecto estado.
-Puntas de plstico descartable que se ajusten a las diferentes micropipetas
-Envases para descartar las puntas usadas (habr uno por lado de mesa)
-Envases para descartar las pipetas usadas (habr uno por mesa)
-Equipo general de laboratorio para demostracin: balanza, agitadores, centrfuga,
espectrofotmetro, etc.

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Procedimiento
Conozca el equipo con el que va a trabajar durante el curso: reciba y anote el
nmero de pera que se le asignar. Esta pera deber ser entregada al asistente
al final de cada sesin. Reconozca el tipo de pipetas que le fueron
administradas.
Reciba la micropipeta que se le asignar para su custodia durante el curso.
Anote el nmero de micropipeta asignada. Es importante que se familiarice con
la misma, conozca qu tipo de puntas debe utilizar, qu rango de volumen
puede medir la micropipeta. Ensaye los puntos de tope de la micropipeta y
luego siga el procedimiento para pipetear varios volmenes de agua con la
micropipeta correspondiente. Por ejemplo: 7.5 l, 10 l, 200 l, 450 l, etc.
Conozca el resto del equipo con el que trabajar durante el curso y que se
encuentra dentro del laboratorio como la centrfuga, los agitadores tipo vortex,
el termociclador, el espectrofotmetro, etc.
Realice los clculos para diluir una solucin de NaCl al 0.145 mol/l para obtener:
a)
b)
c)
d)

1.1 ml de una solucin 0.12 mol/l de NaCl

5 ml de una solucin 0.045 mol/l de NaCl
3 ml de una solucin 0.033 mol/l de NaCl
una dilucin seriada de 4 tubos con factor de dilucin de 5.

Describa detalladamente sus clculos en la seccin de resultados, as como el

factor de dilucin utilizado en cada caso y el procedimiento que utilizara para
realizar cada dilucin. Indique cul pipeta, de las que se le suministraron utilizara
para realizar cada medicin

Resultados
1) Escriba o haga un esquema de cmo distinguir los diferentes tipos de pipetas y
micropipetas que se le suministraron. Indique cules pipetas son de soplar y
cules no, adems de cmo distinguir la escala tanto en las pipetas como en las
micropipetas.

16

2) Haga la descripcin de los clculos solicitados en la seccin de procedimiento

aqu:

17

Bibliografa
-Amato M, S y Granados P, F. Manual de Laboratorio. Ctedra de Bioqumica.
Universidad Nacional, 1994
-Angulo Ugalde, Y. Bioqumica Manual de Laboratorio. Universidad de Costa Rica.
1999
-Kaplan, L et al. Clinical Chemistry: theory, analysis and correlation. 2nd edition.
CW. Mosby Company, 1989
-Facultad de Medicina UNAM, Departamento de Bioqumica. Bioqumica y Biologa
Molecular. Objetivos del curso y manual de prcticas de laboratorio. Mc Graw-Hill
Interamericana Editores, Mxico, 2000.
-Schosinsky, K et al. Manual de Tcnicas de Laboratorio en Qumica Clnica. X
Edicin, Universidad de Costa Rica, 1997
-Switzer, R. y L. Garrity. Experimental Biochemistry: Theory and exercises in
fundamental methods. 3rd edition, Freeman and Company, New York 1999
-Manual de uso de micropipetas Biorad, versin BR0605
-http://www.bipm.fr/en/si/ consultado el 10 de enero del 2007

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EJERCICIOS (para ser realizados por el estudiante en horas de estudio

independiente)
1. Calcule las siguientes concentraciones:

10 M NaOH, diluido 1:20 = _____ M

2 M HCl, diluido 1:5 = _____ M
1000 mg/L glucosa, diluido 1:10 y luego 1:2 = _____ mg/L
250 ml de 5% NaCl contienen ____ g de NaCl
Cunto CuSO4 5 H2O debe ser pesado para preparar 100 ml de CuSO4 al
5%? PM del CuSO4 5 H2O: 250 g/mol, PM del CuSO4 : 160 g/mol
Qu porcentaje de CuSO4 5 H2O es agua?

2. Cuntos gramos de MgCl2 hay en 1 g de MgCl2 3 H2O? PM del MgCl2 3 H2O: 149
g/mol, PM del MgCl2: 95 g/mol
3. Cuntos mililitros de NaOH 0.4 M se necesitan para preparar
solucin 0.2M?

20 ml de una

4. Qu porcentaje de Mg contiene el MgCl2 3 H2O?

5. Cunto CuSO4 5 H2O debe ser pesado para preparar 1 L de una solucin que
contenga 80 mg de CuSO4?
6. El peso molecular de CaCO3 es 100 g/mol , cuntos gramos son necesarios para
preparar:

1 L de 0.1 M CaCO3?
50 mg/L de CaCO3?

7. Una solucin estndar de hemoglina contiene 200 g/L. Cuntos ml deben usarse
para preparar 6 ml de las siguientes concentraciones:

200 g/L
150 g/L
100 g/L
50 g/L

8. La solucin salina normal tiene una concentracin de 0.85%. Cul es su

molaridad? (PM NaCl : 58.5 g/mol)
9. Cuntos gramos de Na2HPO4 deben ser pesados para preparar 1 L de una
solucin cuya concentracin es de 50 mg/ml?
10. Cul es la dilucin final de una muestra de suero en un tubo que contiene 200 l de
suero, 500 l de solucin salina y 300 l de reactivo?
11. Cul es la concentracin en mol/l de una solucin que tiene 100 g de NaOH
disueltos en 100 ml de agua? PM NaOH: 40 g/mol

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RESPUESTAS A LOS EJERCICIOS

1. Calcule las siguientes concentraciones:

10 M NaOH, diluido 1:20 = ___0.5__ M

2 M HCl, diluido 1:5 = __0.4___ M
1000 mg/L glucosa, diluido 1:10 y luego 1:2 = __50___ mg/L
250 ml de 5% NaCl contienen __12.5__ g de NaCl
Cunto CuSO4 5 H2O debe ser pesado para preparar 100 ml de CuSO4 al
5%? PM del CuSO4 5 H2O: 250 g/mol, PM del CuSO4 : 160 g/mol R/ 7.82 g
Qu porcentaje de CuSO4 5 H2O es agua? R/ 36 %

2. Cuntos gramos de MgCl2 hay en 1 g de MgCl2 3 H2O? PM del MgCl2 3 H2O: 149
g/mol, PM del MgCl2: 95 g/mol R/ 0.64 g
3. Cuntos mililitros de NaOH 0.4 M se necesitan para preparar
solucin 0.2M? R/ 10 ml

20 ml de una

4. Qu porcentaje de Mg contiene el MgCl2 3 H2O? R/ 16.1%

5. Cunto CuSO4 5 H2O debe ser pesado para preparar 1 L de una solucin que
contenga 80 mg de CuSO4? R/ 125 mg
6. El peso molecular de CaCO3 es 100 g/mol , cuntos gramos son necesarios para
preparar:

1 L de 0.1 M CaCO3? R/ 10 g/l

50 mg/L de CaCO3? R/ 0.05 g

7. Una solucin estndar de hemoglina contiene 200 g/L. Cuntos ml deben usarse
para preparar 6 ml de las siguientes concentraciones:

200 g/L R/ 6 ml
150 g/L R/ 4.5 ml + 1.5 ml de diluyente
100 g/L R/ 3 ml + 3 ml de diluyente
50 g/L R/ 1.5 ml + 4.5 ml de diluyente

8. La solucin salina normal tiene una concentracin de 0.85%. Cul es su

molaridad? (Peso molecular NaCl es 58.5 g/mol) R/ 0.145 mol/l
9. Cuntos gramos de Na2HPO4 deben ser pesados para preparar 1 L de una
solucin cuya concentracin es de 50 mg/ml? R/ 94.4 g
10. Cul es la dilucin final de una muestra de suero en un tubo que contiene 200 l de
suero, 500 l de solucin salina y 300 l de reactivo? R/ 1:5
11. Cul es la concentracin en mol/l de una solucin que tiene 100 g de NaOH
disueltos en 100 ml de agua? PM NaOH: 40 g/mol R/ 25 mol/l

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