UNIVERSIDAD VERACRUZANA

FACULTAD DE BIONALISIS
LABORATORIO DE PARASITOLOGIA







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ALUMNAS:

MAGDA ELENA HERNANDEZ HERNANDEZ
SANDRA LUZ HERNANDEZ LOPEZ




* * T TO OM MA A D DE E M MU UE ES ST TR RA A P PA AR RA A E EX XA AM ME EN N
C CO OP PR RO OP PA AR RA AS SI IT TO OS SC CO OP PI IC CO O



I IN NT TR RO OD DU UC CC CI IO ON N : :

Regularmente en el rea de Parasitologia , las muestras ms analizadas para
demostrar la presencia de parasitos intestinales del hombre son las heces fecales
; sin embargo , existen otros parsitos cuya presencia se puede evidenciar en
muestras biolgicas como : bilis, jugo duodenal, esputo, secrecin , biopsia o
frotis perianal , no obstante estas pruebas se harn tomando en cuenta los
antecedentes clnicos especficos del paciente.

A continuacin , se har referencia a los diversos aspectos con los cuales
debern proceder las muestras a analizar con fines parasitologicos para obtener
resultados reproducibles y de esta manera ayudar eficazmente al mdico en el
diagnostico, pronostico , y tratamiento del paciente.

H HE EC CE ES S F FE EC CA AL LE ES S S SO OL LI ID DA AS S: :


Condiciones del paciente :

Durante al menos tres das previos a la prueba el paciente deber evitar
tomar medicamentos (antiparasitarios , antibiticos, antidiarreicos ,
laxantes o purgantes en caso de ser necesario debern emplearse un
purgante salino, como sulfato de sodio o fosfato y carbonato de sodio. Por
ningn motivo debern emplearse aceites minerales o compuestos de
bismuto o magnesio, ya que las gotas o cristales procedentes de ellos
pueden confundirse con algunos parsitos o enmascarar
su presencia.

Recipiente de recoleccin :

Frasco estril de boca ancha , con tapa de rosca.

Cantidad de muestra requerida : 3-6 grs

Toma de muestra :

La muestra deber ser recolectada de la siguiente manera :

Con una abatelenguas tome directamente de la cavidad anal un
volumen de heces aprox. entre 3 -6 grs (equivalente al tamao de
una nuez )
NOTA: Evite la contaminacin de la muestra con orina , papel higinico. jabn , aguao
tierra.
Transfiera las heces obtenidas al contenedor estril.
Cierre el envase hermticamente de forma inmediata para evitar
contaminaciones bacterianas
. A continuacin identifique. el frasco con una etiqueta autoadhesiva
llenndola claramente con su nombre, apellidos, edad y fecha y hr de
recoleccin.
NOTA : Pegue la etiqueta al frasco NUNCA en la tapadera .
Finalmente lleve la muestra al laboratorio lo ms pronto posible.
NOTA : Cuando la muestra va a demorar en llegar al laboratorio varias horas o das ,
se recomienda adicionarle liquido fijador y/o conservador ( formalina al 10 % , por
ejemplo )
NOTA : Para aumentar la eficacia de la prueba se recomienda que para estudios
parasitoscoscopicos se recolecten un total de tres muestras en 3 dias consecutivos
ya que la expulsin de parsitos puede ser intermitente .

Criterios de rechazo :

Que el paciente no haya tomado la muestra respectivamente de forma
adecuada .
Que la muestra haya sido llevada al laboratorio con mas de 1 hr de
haber sido tomada o no haya sido adecuadamente conservada.
Que el paciente este recibiendo tratamiento antiparasitario.


H HE EC CE ES S F FE EC CA AL LE ES S D DI IA AR RR RE EI IC CA AS S : :
Cantidad de muestra requerida : 10 ml (un volumen similar al de un cuchara
sopera )

NOTA : Estas muestras deben procesarse de inmediato (30 minutos como mximo
despus de la deposicin) en caso contrario se debe adicionarse algun conservador e
indicarlo en la etiqueta de identificacin pues de no rexaminarse dentro de un margen de
tiempo prudencial pues al acidificarse muchos grmenes patgenos se lisan .

R RA AS SP PA AD DO O P PE ER RI IA AN NA AL L : :

Condiciones del paciente :

La toma de muestras deber realizarse preferentemente por la noche o a
primera hora de la maana antes de que el paciente orine, defeque o se bae
(lo ideal es hacer la toma antes de levantarse de la cama).

NOTA : Es imprescindible el uso de guantes desechables durante la toma de la muestra y el
avado cuidadoso de las manos tras su realizacin.

Recipiente de recoleccin :

Portaobjetos con cinta adhesiva.

Toma de muestra :

1. Se toma un abatelenguas cubierto de cinta
adhesiva transparente, de manera que la
superficie engomada quede expuesta hacia
fuera.
2. A continuacin , se coloca al paciente en
posicin genupectoral donde la regin
perianal quedara ampliamente expuesta
para realizar varias aplicaciones con el
abatelenguas alrededor de esta zona ; con
la fianlidad , de que los huevos qque se
encontrarab presentes queden adheridos a la superficie engomada.
3. Finalmente se pega la muestra la cinta adhesiva sobre una de las caras del
porta objetos (con lo que se recolecto hacia abajo ) y se observa al
microscopio.
J J U UG GO O D DU UO OD DE EN NA AL L Y Y Y YE EY YU UN NA AL L: :

Algunos parsitos colonizan el intestino delgado durante alguno de sus estadios,
permaneciendo habitualmente en el rea yeyunal y siendo infrecuentemente
detectados en las heces durante estas fases. Este es el caso de los trofozoitos de
Giardia lamblia y las larvas de Strongyloides sp.

NOTA : Los conductos biliares desembocan en duodeno, por lo que tambin pueden
hallarse huevos de parsitos procedentes del hgado o del rbol biliar en el jugo duodenal
y yeyunal.

Toma de muestra :

Las muestras de jugo duodenal y yeyunal suelen obtenerse mediante sonda
gastrica o bien durante un procedimiento endoscpico, por el medico tratante , las
cuales tras unas adecuada identificacin, debern ser enviadas rpidamente al
laboratorio y procesadas inmediatamente .

Recipiente de recoleccin :

Frasco estril de boca ancha , con tapa de rosca.

Cantidad de muestra requerida : 1-2 ml











E ES SP PU UT TO O : :

Condiciones del paciente :

El paciente deber recolectar la muestra de esputo en ayunas a primera hora de
la maana ; para lo cual , deber enjuagarse previamente la boca solamente con
agua para eliminar bacterias que se encuentren en boca y lengua que pudieran
ser parte de la flora normal.
NOTA : Se recomienda que el paciente no este ingiriendo
medicamentos.
Recipiente de recoleccin :

Frasco estril de boca ancha , con tapa de rosca.
Toma de muestra :

Para recolectar la muestra el paciente deber toser profundamente (lo mas
que pueda) y depositar el esputo obtenido en un recipiente estril .

NOTA: Si el paciente no puede expectorar , existen diversas tcnicas encaminadas a
favorecer la obtencin del esputo;

La induccin de la tos por inhalacin con vaporizador.
Lavado bronquial, aspiracin mediante aguja transtorcica, o biopsia de pulmn.


Cantidad de muestra requerida : 1- 2 ml

Criterios de rechazo :

Que la muestra sea saliva.
Que la muestra tenga menos de 25 leucocitos, y mas de 10 clulas
epiteliales por campo (aumento X 100) .(ya que indicara que la muestra no
fue adecuadamente tomada



ENVIO Y TRANSPORTE DE MUESTRAS

Las muestras deben mantenerse en un ambiente fresco y lejos de la luz solar , se
deben evitar las temperaturas extremas o el desecamiento , deben contener
cantidades optimas y estar en frascos o contenedores rotulados y en algunos casos
necesarios en soluciones conservadoras.

Condiciones de envio de la muestra segn el tipo y tiempo de demora en llegar al
laboratorio para el diagnostico parasitologico presuntivo de :


TIEMPO QUE DEMORA EN
LLEGAR AL LABORATORIO

TIPO DE
MUESTRA

<24 HRS > 24 HRS
AGENTES PARASITARIOS
HECES
FORMADAS
T
ambiente

Formalina 10 %
PAF; PVA
Medio de transp :
Cary blair
E. histoltyca, Giardia ,
Quistes de Balantidium coli.
Criptosporidium , Isospora belli. ,
(no muy comnes en personas inmunocompetentes)
Trichuris.Ascaris,Necator,Ancylostoma etc
HECES
DIARREICAS
T
ambiente
Formalina 10 % Trofozoito de Balantidium coli etc.
ESPUTO ,
SECRECIN
BILIAR .
T
ambiente
Formalina 10 %
Pneumocistis ,
Paragonimus, Fasciola hepatica, ,Giardia.
CONTENIDO
DUODENAL
T
ambiente
Formalina 10 %
Giardia,
Strongyloides,Paragonimus,Fasciola,Ancylostoma
, Necator etc.
FROTIS PERIANAL
T
ambiente
T ambiente

Huevos de :
Enterobius vermicularis
Ascaris lumbricoides,
Taenia sp.
Hymenolepis nana.
SECRECION
VAGINAL
T
ambiente
Frotis en
lamina
Trichomona vaginalis.
LCR. Naegleria, Acanthamoeba yBalamuthia
SANGRE Tripanosoma,Plasmodium,Leishmania
BIOPSIA DE
TEJIDOS
4C Formol 10 % Trichinella spiralis (triquinoscopia)
P PR RO OC CE ED DI IM MI IE EN NT TO OS S D DE E L LA AB BO OR RA AT TO OR RI IO O P PA AR RA A E EL L D DI IA AG GN NO OS ST TI IC CO O
P PA AR RA AS SI IT TO OL LO OG GI IC CO O- -H HE EC CE ES S, ,

I I. . E EX XA AM ME EN N D DI IR RE EC CT TO O M MA AC CR RO OS SC CO OP PI IC CO O: :

F FU UN ND DA AM ME EN NT TO O : : Permite observar directamente las caractersticas morfolgicas
de los parasitos adultos, enteros o fraccionados , asi como los cambios en las
caractersticas organolpticas de las heces eliminadas(color, presencia de sangre
y/o moco, consistencia etc).






P PR RO OC CE ED DI IM MI IE EN NT TO O : :


1. Observar cuidadosamente las caractersticas organolpticas de la muestra
a analizar con la finalidad de determinar su :

C CO ON NS SI IS ST TE EN NC CI IA A: : Deber ser pastosa y dura
C CO OL LO OR R: :
Marrn oscuro ( *Ver Anexo)
O OL LO OR R: :
Caracterstico ,puede mostrarse ftido (anomala)

M MO OC CO O: :
La presencia de moco nos indica gastritis, ulcera o
amibiasis.
S SA AN NG GR RE E
La sangre nos indica hemorragia intestinal por
ulceras perforadas intoxicacin con medicamentos
o cidos, hemorroides y en ocasiones amibiasis




MATERIAL
Suero fisiolgico
Aplicador
Pinza de metal
Coladera de plstico o malla metalica.
2. Despus de ello, es necesario agregar suero fisiolgico a la muestra (en
cantidad suficiente ) para homogeneizarla.
3. Finalmente las heces debern ser cuidadosamente pasadas a travs de un
tamiz con la finalidad de aislar gusanos cilndricos, anillados o aplanados
que pudieran encontrarse en las heces,

R RE ES SU UL LT TA AD DO OS S . .

Se informar detalladamente aquellas caractersticas macroscpicas observadas
durante el anlisis coproparasitoscopico as como se deber hacer referencia en
su caso el aislamiento de algn gusano durante el tamizado especificando su
especie .




















T TI IP PO OS S D DE E E EX XA AM ME EN NE ES S P PA AR RA AS SI IT TO OL LO OG GI IC CO OS S: :
TIEMPO QUE DEMORA EN
LLEGAR AL LABORATORIO


TIPOS DE
EXAMNES
MUESTRA
<24 HRS > 24 HRS
TECNICA AGENTES PARASITARIOS
COPRO
HECES
FORMADAS
T
ambiente

Formalina 10 %
PAF; PVA
Medio de transp :
Cary blair
EXAMEN DIRECTO EN FRESCO
FAUST (FLOTACION)
RITCHIE (SEDIMENTACION)
DEMOSTRACION DE LARVAS:
KATO
STOLL
E. histoltyca, Giardia ,
Quistes de Balantidium coli.
Criptosporidium , Isospora belli. ,
(no muy comnes en personas inmunocompetentes)
Trichuris.Ascaris,Strongyloides,Necator,Ancylostoma etc
HECES
DIARREICAS
T
ambiente
Formalina 10 % EXAMEN DIRECTO EN FRESCO
Trofozoito de Balantidium coli etc.
Trofozoitos

SECRECIONES
SECRECION
VAGINAL
T
ambiente
Frotis en lamina
EXAMEN DIRECTO EN FRESCO
TINCION DE GRAM Y GIEMSA
Trichomona vaginalis.
ESPUTO
T
ambiente
Formalina 10 %
TINCION DE GRAM Y GIEMSA Pneumocistis ,
SECRECIN
BILIAR .
EXAMEN DIRECTO EN FRESCO
FAUST Y RITCHIE
CAPSULA DUODENAL DE BEAL
Fasciola hepatica, ,Giardia. Paragonimus,
CONTENIDO
DUODENAL
T
ambiente
Formalina 10 % CAPSULA DUODENAL DE BEAL
Giardia,
(Strongyloides,Paragonimus,Fasciola,Ancylostoma,
Necator etc.
SANGRE SANGRE


FROTIS DIRECTO DE SANGRE, HEMOCULTIVO
FROTE EN GOTA GRUESA DE SANGRE
TINCION DE GIEMSA
Hemoprotozooarios
Tripanosoma,(xenodiagnostico)
Plasmodium, (Frote grueso)
Leishmania
TEJIDOS BIOPSIA 4C Formalina 10 % TRIQUINOSCOPIA Trichinella spiralis
EXAMENES
ESPECIALES
FROTIS
PERIANAL
T
ambiente
T ambiente
METODO DE GRAHAM
(Raspado perianal)
Huevos de :
Enterobius vermicularis
Ascaris lumbricoides,
Taenia sp.
Hymenolepis nana.
S SI IG GN NI IF FI IC CA AD DO O C CL LI IN NI IC CO O D DE EL L C CO OL LO OR R D DE E L LA AS S H HE EC CE ES S: :

El color de las heces proporciona una significativa informacin al qumico clnico ,
ya que con solo realizar un detallado anlisis macroscpico de estas , le puede
orientar en gran parte para detectar alguna patologa, disfuncion orgnica,
hemorragia, o bien hacer de su conocimiento el tipo de alimentacin o ingestin
de algn medicamento que este presentando el paciente en ese momento .

El color anormal ayuda al mdico a seleccionar las pruebas tanto qumicas como
microbiolgicas necesarias para llegar finalmente a extender un buen diagnostico
, pronostico y plan de tratamiento adecuados para el paciente.

A A c co on nt ti in nu ua ac ci i n n s se e h ha ar r r re ef fe er re en nc ci ia a a a l lo os s c co ol lo or re es s m m s s c co om mu un ne es s q qu ue e p pu ue ed de en n
p pr re es se en nt ta ar r l la as s h he ec ce es s f fe ec ca al le es s y ya a s se ea a p po or r a al lg gu un na a p pa at to ol lo og g a a o o b bi ie en n p po or r a al lg g n n o ot tr ro o
f fa ac ct to or r e ex xt te er rn no o : :

C CO OL LO OR R S SI IG GN NI IF FI IC CA AD DO O
A AM MA AR RI IL LL LO O V VE ER RD DO OS SO O Diarrea abundante.
A AM MA AR RI IL LL LE EN NT TA AS S
S Se e p pr re es se en nt ta an n e en n l la as s " "d di ia ar rr re ea as s d de e f fe er rm me en nt ta ac ci i n n" "
y y e en n l la as s e es st te ea at to or rr re ea as s . .
Y YE EM MA A D DE E H HU UE EV VO O
Heces procedentes de un trnsito acelerado a
partir de las partes ms altas del
intestino delgado.
B BL LA AN NQ QU UE EC CI IN NA AS S O O G GR RI IS SA AC CE EA AS S
( (A AC CO OL LI IA A) )
Heces caractersticas de las ictericias
obstructivas y de la fase aguda de las
hepticas,.
NOTA : La ingestin de papilla de bario puede
producir el mismo efecto.
V VE ER RD DO OS SA AS S
Diarrea abundante.
Tambien se presentan en las diarreas
duodenales .
Por otra parte se pueden presentar por una
ingestin excesiva de vegetales cloroflicos
los cuales darn un tono verdoso a las heces,
En los lactantes son frecuentes las diarreas
verdes, pero es normal que en los nios
criados al pecho las deposiciones se tornen
verdes al contacto del aire.
N NE EG GR RO O
Heces que proceden generalmente de una
hemorragia del aparto gastrointestinal alto
(>100 ml de sangre).
Sin embargo tambin se pueden presentar
cuando se ingiri una elevada proporcin de
carnes en la dieta , cerezas, o alimentos con
colorante artificial.
A AR RC CI IL LL LA A
Heces caractersticas de un bloqueo del
conducto biliar comn.
M MA AR RR RO ON N I IN NT TE EN NS SO O
Probable hemorragia del aparato
gastrointestinal bajo ( por ejemplo: tumores,
hemorroides, fisuras, procesos inflamatorios).
R RO OJ JI IZ ZA A
( (M ME EL LE EN NA A) )
Rojizas, irregularmente, son las deposiciones
que contienen sangre no transformada, de
origen bajo (hemorroides, tumores de colon
distal, etc.).
Unas heces rojizas tambin pueden
presentarse por la ingestin abundante de
betabel o tomate .


MEDICAMENTOS QUE PROVOCAN CAMBIOS EN LA COLORACIN DE LAS
HECES :

Negro: Sales de hierro, Sales de bismuto, carbn.
Verde: cloruro de mercurio, indiometicina, calomel.
Verde a azul: ditiazanina.
Marrn: antraquinonas.
Rojo: fenolftalena, pamoato de pirivino, tetraciclinas em jarabe,
bromosulfalena.
Amarillo: santonina, antibiticos.
Claro a blancuzco: brio, anticidos.
Naranja rojizo: fenazopiridina.
Rosa a rojo a negro: anticoagulantes dosis excesivas, salicilatos.

Como se pude observar la historia clnica del paciente , los antecedentes
dietticos y el tratamiento bajo el cual se encuentre el paciente , son aspedctos
sumamente importantes que debe saber el Qumico clnico para poder distinguir
anormalidades importantes en las heces fecales de simples interferencias.








(til para Uncinarias y Strongyloides)

* EXAMEN M MA AC CR RO OS SC CO OP PI IC CO O : :

TAMIZADO
(Nematodos adultos y huevos de Taenia)


METODO DIRECTO

ideal para buscar trofozoitos mviles larvas


METODOS
DE
CONCENTRACION

FLOTACION

POR SEDIMENTACION -FLOTACION

FAUST (ZnSO4)
RITCHIE

POR DILUCIN

FROTIS GRUESO

STOLL
Ideal para huevos de Ancylostoma y Necator



KATO
Ideal para huevos de helmintos

E EX XA AM ME EN NE ES S E ES SP PE EC CI IA AL LE ES S: :

GRAHAM
CPSULA DUODENAL DE BEAL
HARADA MORI
til para huevos de Enterobius ,Ascaris,Trichuris,Hymenolepis,y Taenia
(til para trofozoitos de Giardia, larvas de Strongyloides
huevos de Uncinarias)

HEMOCULTIVO

(til para quistes y huevos)

(til para quistes ooquistes y
huevos)

CARACT. DE LAS HECES :


M MU UE ES ST TR RA A: :

Heces
Esputo ,
Contenido duodenal
Secrecin biliar


Consistencia
Color
Mucus,
Sangre
Especmenes

* EXAMEN M MI IC CR RO OS SC CO OP PI IC CO O : :

SOLUCION SALINA:


LUGOL :


Trofozoitos y Quistes al natural

Estructuras internas , ncleos y vacuolas .
Huevos y lavas

TUBO


COPA


BAERMAN
(til para larvas de Strongyloides Necator y Ancylostoma)
* EXAMEN C CU UA AN NT TI IT TA AT TI IV VO O
(Recuento de huevos )

: :

Hemoflagelados

Tripanosomiasis.

I

II

III

IV

E EX XA AM ME EN NE ES S P PA AR RA AS SI IT TO OL LO OG GI IC CO OS S : :
* *D DI IA AG GR RA AM MA A D DE E F FL LU UJ JO O D DE E U UN NA A : :








































* MUESTRA FRESCA DE
HECES

**TROFOZOITOS:
E.histolytica
Giardia lamblia
Balantidium coli
QUISTES
Balantidium coli
Giardia lamblia
OOQUISTES:
Cryptosporidium
I. belli
B, hominis
Cyclosporidium
LARVAS:
S, stercolaris
HUEVOS :
H, nana


DIARREICAS

: :

LIQUIDAS

: :

SIN MOCO


CON MOCO


POSITIVO


NEGATIVO


BAERMAN


CENTRIFUGAR


FROTIS DEL SEDIMENTO


EXAMEN EN FRESCO

: :

SIN MOCO


CON MOCO


SEDIMENTO


MEZCLAR
Y
CENTRIFUGAR


SEDIMENTO


NEGATIVO


POSITIVO
**

HEMATOXILINA
FERRICA O
TRICROMICA


Larvas Strongyloides

Z ZI IE EH HL L- -N NE EE EL LS SE EN N


Trofozoito de Entamoeba
Quistes de G,lamblia

Coccidios
til para Ooquistes de
I, belli





































* * TAMIZADO



GENERALIDADES:

La tcnica de tamizado Permite observar directamente las caractersticas
morfolgicas de los parsitos adultos, enteros o fraccionados. tal es el caso de los
helmintos: Taenia solium y T. saginata
Es un parsito importante del hombre en aquellos lugares donde el
consumo frecuente de la carne de cerdo y de res cruda o insuficientemente
cocida, ya que la carne de estos animales puede contener las fases larvarias de
las tenias mencionadas, las cuales se denominan metacstodos o cisticercos.
Fases de desarrollo:

Adulto (de T. solium.) Mide de 2 a 7 metros de longitud y posee esclex o
cabeza cuadrangular de aproximadamente 1 mm de dimetro, con cuatro
ventosas musculares grandes en forma de copa que miden 0.5 mm de dimetro y
rostelo prominente, redondeado y armado con una doble corona de ganchos en
nmero de 22 a 32. Luego sigue el cuello y la cadena estrobilar compuesta por
unos 1,000 a 2,000 segmentos o progltidos.
Metacstodo, cisticerco, etc. Existen dos tipos fundamentales el de T.
solium, tambin denominado Cysticercus cellulosae, el cual es una vescula
blanquecina de 0.5 a 1.5 cm de ancho, con esclex invaginado y armado con
doble corona de ganchos, al igual que el adulto, y el de T. saginata, denominado
Cysticercus bovis, ms o menos con las mismas caractersticas que el anterior,
pero sin corona de ganchos en el esclex.
Huevos: Los huevos que producen los adultos de ambas especies de
Taenia son semejantes e indistinguibles al examen microscpico. Son esfricos,
miden de 30 a 45 micras de dimetro y poseen una cpsula gruesa radiada y una
membrana hialina de origen embrionario. En su interior, se encuentra el embrin
(oncosfera o embrin hexacanto) que generalmente posee tres pares de ganchos.




EXAMENES DE LABORATORIO:
Despus de la expulsin espontnea de progltidos, estos se pueden
recuperar por medio de la tcnica de TAMIZADO en heces expulsadas durante 24
horas. En caso de obtenerse progltidos, deben comprimirse entre dos
portaobjetos y observarlos a contraluz o en un microscopio estereoscpico.
Hay que estudiar los progltidos grvidos y contar el nmero de ramas
uterinas, ya que en caso de pertenecer a la especie T. solium son poco
numerosas (8 a 12), y si se trata de T. saginata, generalmente son numerosas
(12 a 24).
Mediante el TAMIZADO de las heces tambin es posible recuperar el
esclex, sobre todo despus de los tratamientos, el cual se observar bajo el
microscopio para determinar sus caractersticas morfolgicas.
Ocasionalmente se pueden encontrar huevos de Taenia sp. por los
exmenes coproparasitoscpicos de flotacin como el Faust, Ferreira, etc, o de
sedimentacin, como el Ritchie, o a buscar huevos de Enterobius vermicularis
mediante el mtodo de Graham.
Es importante decir, que el hallazgo de los huevos de Taenia sp. por
cualquiera de los mtodos empleados de ninguna manera permiten realizar el
diagnstico de una especie de tenia, y slo se informan como
"huevos de Taenia sp."
Recientemente, se ha desarrollado la deteccin de coproantgenos de
Taenia; pero tampoco permiten discriminar la especie.















I II I. . E EX XA AM ME EN N M MI IC CR RO OS SC C P PI IC CO O: :



* * C CO OP PR RO OP PA AR RA AS SI IT TO OS SC CO OP PI IC CO O D DI IR RE EC CT TO O


F FU UN ND DA AM ME EN NT TO O : : Este mtodo permite buscar principalmente en muestras frescas
, la presencia de formas evolutivas mviles de parsitos de tamao microscpico
( trofozoitos, quistes de protozoos: Entamoeba histolytica,Giardia lamblia
(duodenalis) ,Balantidium coli etc, as como larvas o huevos de helmintos:
Strongyloides stercolaris, Ancylostoma duodenale, Necator americanus,
Paragonimus,Fasciola etc)











METODO:

a) En un portaobjetos limpio y desengrasado, se colocan separadamente, una
gota de solucin salina y otra de lugol.
b) Con el aplicador de madera se toma una muestra de 1 a 4 mg de heces 8 en
muestras con sangre y moco elegir esa parte para estudiar) y se mezcla con la
solucin, con el mismo aplicador se retiran las fibras y otros fragmentos
gruesos, procurando hacer una suspensin no un frotis.
c) Colocar el cubreobjetos.
d) Repetir estas operaciones en la gota de lugol.
e) Observar al microscopio con objetivos de 10X y 40X. No es recomendable
usar objetivo de inmersin (100 x) , pues se puede ensuciar el microscopio.
Recorrer la lamina siguiendo un sentido direccional , ejemplo :de derecha a
izquierda , o de arriba abajo.
NOTA: Con el suero fisiolgico, los trofozoitos y quistes de los protozooarios se observan
en forma natural , y con lugol , las estructuras internas , ncleos y vacuolas.

INTERPRETACION DE RESULTADOS:
Se informar detalladamente la presencia de alguna forma parasitaria observada
durante el anlisis coproparasitoscopico , indicando su especie y estado evolutivo
(trofozoito, quiste en caso de un protozoo) (huevo , larva en caso de un
helminto)

MATERIAL y EQUIPO
Aplicadores de madera
Portaobjetos de 25 X 76 mm
Cubreobjetos de 22 X 22 mm
Solucin salina isotnica
Lugol
Microscopio



* * COPROPARASITOSCPICO MEDIATO O INMEDIATO CON
COLORANTES VITALES


FUNDAMENTO: Este mtodo nos permite diferenciar correctamente los diferentes
protozoos basndose en las caractersticas morfolgicas de cada uno de ellos
observando sus ncleos, endosomas, etc .mediante la utilizacin de los
colorantes vitales ( azul de metileno, rojo congo, eosina, verde de malaquita, verde
de Janus, Safranina)















METODO:
a) En un portaobjetos se coloca una gota de azul de metileno al 3.5%
b) Se toma una porcin pequea de heces fecales con un aplicador y se
realiza una suspensin homognea con el colorante.
c) Se deja actuar el colorante por 3 minutos o bien se flamea pero sin que
hierva la muestra, slo hasta la emisin de vapores. Observar al
microscopio con objetivos de 10X y 40X.

INTERPRETACION DE RESULTADOS:
En caso de encontrar algn parasito durante la realizacin de esta prueba se
deber anotar en la hoja de resultados el nombre del parasito as como su estadio
evolutivo (trofozoito o quiste en el caso de los protozoos y huevo o larva en caso
de helmintos)





MATERIAL y EQUIPO
Aplicadores de madera
Portaobjetos de 25 X 76 mm
Puente de tincin
Lmpara de alcohol
Azul de metileno al 3.5%
Agua destilada
Microscopio


* * MTODO DE CONCENTRACIN POR FLOTACION
FAUST



FUNDAMENTO: Se basa en que los quistes y/o huevos de los parsitos flotan en
la superficie por ser de menor densidad que el sulfato de zinc a 33,3%, cuya
densidad es 1180. Es til para la bsqueda de quistesy/o huevos de parsitos y
excepcionalmente se observan larvas. Se recomienda controlar la densidad del
sulfato de zinc y usar agua filtrada para el lavado previo de la muestra.
























MATERIAL y EQUIPO
Vaso de precipitado de 50 ml
Tubos de ensaye de 15 X 100 mm
Gradilla
Embudo de polietileno
Gasa cortada en cuadros de 15 cm por lado
Portaobjetos de 76 X 26 mm
Cubreobjetos de 22 X 22 mm
Aplicadores de madera

Asa de alambre terminada en crculo de 3 a 5 mm
de dimetro y formando ngulo recto con el resto
del alambre.
Solucin de Sulfato de Zinc 1.180 Baum
Lugol
Microscopio
Centrfuga

METODO:

a) Se hace una suspensin homognea con 1 g de materia fecal y 10 ml de
agua.
b) Se filtra la suspensin a travs de la gasa colocada en el embudo,
colectando el filtrado directamente en el tubo.
c) Se centrifugan los tubos a 2000 rpm durante 1 min.
d) Se decanta el sobrenadante y se resuspende el sedimento con agua. Se
centrfuga nuevamente, repitiendo la misma operacin hasta que el
sobrenadante se observe limpio.
e) Se decanta el ltimo sobrenadante, se resuspende el sedimento y se
agrega Sulfato de Zinc 1.180 Baum y se centrfuga a 2000 rpm durante 1
min.
f) Con el asa se recoge la muestra de la pelcula superficial que se encuentra
en el menisco, dos o tres ocasiones y se deposita sobre el portaobjetos; se
aade una gota de lugol, se mezcla con el ngulo del cubreobjetos y se
cubre con el mismo.
g) Se observa la preparacin con objetivos de 10 X y 40 X.


INTERPRETACION DE RESULTADOS:
En caso de encontrar algn parasito durante la realizacin de esta prueba se
deber anotar en la hoja de resultados el nombre del parasito as como su estadio
evolutivo (trofozoito o quiste en el caso de los protozoos y huevo o larva en caso
de helmintos)



















* * METODO DE CONCENTRACION POR SEDIMENTACIN
RITCHIE


FUNDAMENTO: Se basa en la concentracin de los quistes y huevos por
sedimentacin mediante la centrifugacin, con la ayuda de formol y ter para
separar y visualizar los elementos parasitarios.

Unas ventajas que tiene este mtodo es concentrar y no deformar las formas
parasitarias, permite el transporte y almacenamiento de la materia fecal procesada
antes de ser examinada, se usa cuando se necesita una tcnica para evaluacin
de tratamiento y determinacin de frecuencia.
























MATERIAL y EQUIPO
Centrfuga
Tubos de ensaye cnicos de 15 ml

Gasa cortada en cuadros de 15 cm
por lado
Embudos de polietileno
Vasos de precipitado de 50 ml
Aplicadores de madera
Pipetas Pasteur con bulbo
Portaobjetos de 26 X 76 mm
Cubreobjetos de 22 X 22 mm
Solucin salina isotnica
Solucin de formaldehido al 10%
Microscopio

METODO
a) Con el aplicador de madera se coloca aproximadamente 1 gr. de la materia
fecal en el vaso de precipitado, se aaden 10 ml de solucin salina y se
homogeniza.
b) Se filtra la suspensin a travs de la gasa colocada en el embudo,
recogiendo el filtrado en el tubo cnico.
c) Se centrfuga la suspensin durante 1 min a 2000 rpm.
d) Se decanta el sobrenadante y se resuspende el sedimento con solucin
salina, centrifugando, decantando y resuspendiendo las veces necesarias
hasta que el sobrenadante sea claro.
e) Al ltimo sedimento se agregan 10 ml de solucin de formaldehdo al 10%,
se mezcla y se deja reposar durante 10 min.
f) 6.- Se aaden despus 5 ml de ter, se tapan los tubos con tapones de
caucho y se agitan enrgicamente durante 30 segundos.
g) Se centrfuga durante 2 minutos a 1500 rpm.
h) Despus de centrifugar se observan 4 capas:

ter en la superficial,
un tapn de restos fecales,
formaldehdo,
sedimento en el fondo del tubo, conteniendo los elementos parasitarios.

i) Se introduce la pipeta Pasteur hasta la capa d, se extrae con cuidado una
gota del sedimento y se coloca en un portaobjetos.
j) Se le aade una gota de lugol y con uno de los ngulos del cubreobjetos,
se homogeniza, cubrindolo con el mismo.
k) Se observa la preparacin en el microscopio con objetivos de 10X y 40X.



INTERPRETACION DE RESULTADOS:
En caso de encontrar algn parasito durante la realizacin de esta prueba se
deber anotar en la hoja de resultados el nombre del parasito as como su estadio
evolutivo (trofozoito o quiste en el caso de los protozoos y huevo o larva en caso
de helmintos)












I II II I. . E EX XA AM ME EN N C CU UA AL LI IT TA AT TI IV VO O : :


* * MTODO DE DILUCION DE STOLL



FUNDAMENTO: Este mtodo se basa en los principios de saponificacin,
homogenizacin y aclaracin. El NaOH 0.1 N al ponerse en contacto con las
grasas de las heces se saponifica, hace que los huevos de los parsitos sean
menos pegajosos, desinfecta y deodoriza la muestra.











METODO:
a) Se coloca en la probeta Hidrxido de Sodio 0.1 N hasta la marca de 56 ml.
b) Con la varilla de vidrio, se aade materia fecal hasta aforar a 60 ml.
c) Si las heces son duras, se espera un tiempo a que se reblandezcan.
d) Se aaden 15 perlas de vidrio, se tapa la probeta, se agita fuertemente, de
arriba abajo, durante 1 minuto, hasta formarse una suspensin homognea.
e) Los huevos y restos empiezan a precipitar en cuanto cesa la agitacin. Con
la pipeta se toma inmediatamente 0.075 o 0.15 ml del centro de la
suspensin. Se recomienda el segundo volumen, que da una muestra
mayor para el recuento. Llevando la punta de la pipeta al centro del matraz,
el error debido a la precipitacin de los huevos disminuye.
f) Se pasa la totalidad del contenido de la pipeta a un portaobjetos y se cubre
la gota con el cubreobjetos.
MATERIAL y EQUIPO

Probeta graduada de 100 ml con
tapn esmerilado

Pipetas de Stoll o graduadas de 2 ml
en 0.01 ml.
Varilla de vidrio de 20 cm de longitud
Perlas de vidrio
Portaobjetos de 74 X 38 mm
NaOH 0.1 N
Microscopio
g) Se examina la preparacin sistemticamente con el objetivo seco dbil y se
cuentan todos los huevos y larvas presentes cuidando no contar dos veces
la misma estructura.

CALCULOS:
El nmero de huevos y larvas contados se multiplica por:
100, si la materia fecal es dura.
200, si la materia fecal es pastosa.
400, si la materia fecal es lquida.

NOTA:
Estos factores dependen de la cantidad de agua que las muestras
contengan.
El resultado se expresa en huevos o larvas por ml de heces ( H.ml.H)
Los quistes nicamente se reportan, sin cuantificarse.


INTERPRETACION DE RESULTADOS:
En caso de encontrar algn parasito durante la realizacin de esta prueba se
deber anotar en la hoja de resultados el nombre del parasito as como su estadio
evolutivo (trofozoito o quiste en el caso de los protozoos y huevo o larva en caso
de helmintos)















* * METODO CUANTITATIVO DE FROTIS GRUESO KATO


FUNDAMENTO: Es un mtodo cuantitativo de helmintos. El cual se basa en la accin
que tiene la glicerina como aclarador de los huevos de helmintos y el verde de malaquita
como colorante de contraste.















METODO:

a) Con un abatelenguas, pasar 50- 60 mg de materia fecal a un portaobjetos a travs
de la malla metlica.
b) Cubrir la muestra con el cubreobjetos de celofn embebido en la solucin de verde
de malaquita y glicerol. Invertir la preparacin, presionar sobre una hoja de papel
filtro contra la superficie de la mesa de trabajo, para lograr la extensin de la
muestra hasta cubrir un rea de 20 a 25 mm de dimetro.
c) Dejar reposar la preparacin con el cubreobjetos de papel celofn hacia arriba
durante una hora a temperatura ambiente o 30 minutos a 34-40C. Esto motivar
el aclaracin de las heces, sin que se aclaren los huevos de helmintos.
d) Observar al microscopio, hacer el conteo de los huevos que se encuentren en la
preparacin. Para obtener la cifre total, cada cuenta alcanzada, multiplicarla por el
factor correspondiente para expresarla en huevos por gramo de heces (h.g.h) Si
se pesaron 50 mg , multiplicar por 20 que es un factor constante y el producto ser
la cifra a reportar.
e) Debe evitarse exceder el tiempo de aclaracin porque esto dificultara la
observacin de los huevos de helmintos. Si fuese necesario demorar la
observacin puede detenerse el proceso de aclaracin invirtiendo la preparacin
es decir colocarla con el papel celofn hacia abajo hasta el momento que se vaya
a observar.

INTERPRETACION DE RESULTADOS:
En caso de encontrar algn parasito durante la realizacin de esta prueba se deber
anotar en la hoja de resultados el nombre del parasito as como su estadio evolutivo
(trofozoito o quiste en el caso de los protozoos y huevo o larva en caso de helmintos)


MATERIAL y EQUIPO
Aplicadores de madera
Malla de alambre

Papel celofn de grosor medio, no
resistente a la humedad
recortado en cuadros de 22 X 40 22 X
30 mm
Recipiente conteniendo glicerol
Verde de malaquita al 3%
Microscopio
I IV V. . E EX XA AM ME EN NE ES S E ES SP PE EC CI IA AL LE ES S : :


* * METODO DE GRAHAM (RASPADO PERIANAL)


FUNDAMENTO: Esta tcnica se basa en que la hembra adulta de Enterobius
vermicularis habitualmente no deposita sus huevos en el interior del intestino, sino
que por lo general emigra durante la noche, hacia las mrgenes del ano,
depositando los huevos en los pliegues perianales. Es por esto que la toma debe
efectuarse en la maana indicando que debe ir a defecar y no debe baarse.
Ocasionalmente se pueden encontrar huevos de Ascaris 28umbricoides, Trichuris
trichiura, Hymenolepis nana, Taenia sp.








METODO:
a) Sobre un extremo del abatelenguas se coloca la cinta Scotch con la parte
adherente hacia fuera, sujetndola con los dedos pulgar e ndice.
b) Se presiona la superficie sobre la regin perianal hacia uno y otro lado,
finalmente se hace un frote perianal.
c) Separar cuidadosamente la cinta del abatelenguas y adherirlo sobre un
portaobjetos.
d) Observar con objetivo de 10X.


INTERPRETACION DE RESULTADOS:
En caso de encontrar algn parasito durante la realizacin de esta prueba se
deber anotar en la hoja de resultados el nombre del parasito as como su estadio
evolutivo (trofozoito o quiste en el caso de los protozoos y huevo o larva en caso
de helmintos)





MATERIAL y EQUIPO
Portaobjetos De 26 X 76 mm
Abatelenguas
Cinta de celulosa Scotch
Microscopio

* * MTODO DE HARADA MORI


FUNDAMENTO: este mtodo permite Realizar un cultivo de huevos para obtener
desarrollo de larvas y as poder precisar la especie.

MATERIAL Y EQUIPO:
Agua Destilada
Tubos de ensaye de punta cnica de 15 ml
Gradilla
Abatelenguas o aplicadores de madera
Tiras de papel filtro de 13 X 120 mm
Portaobjetos de 26 X 76 mm
Cubreobjetos de 22 X 22 mm
Pipetas Pasteur con bulbo
Sol. De lugol o cido actico al 20%
Microscopio

METODO:

a) Se extiende una fina pelcula de heces ( de 1 a 2 mm) en un lado del tercio medio
de una tira de papel filtro.
b) Se coloca el papel en un tubo de ensaye con 3 ml de agua destilada forzando la
tira hasta aproximadamente el nivel de 1 cm y presionando el lado limpio contra la
pared del tubo.
c) Se conserva el cultivo a temperatura ambiente (24-28C) en la oscuridad durante
un periodo de 1-5 das aadiendo agua segn se vaya necesitando para mantener
el nivel bastante por encima del extremo inferior del papel filtro.
d) El flujo capilar del agua que sube a travs del papel y la pelcula fecal mantiene
hmedas las heces y transporta sus elementos solubles hacia la parte superior del
papel, donde se evaporan o acumulan en un depsito oscuro.
e) Al alcanzar la fase infecciosa, las larvas migran hacia abajo contra la corriente del
flujo del agua, y al alcanzar el nivel de sta se sumergen hacia el fondo, donde
pueden verse con una lupa y tomarse con una pipeta para su examen
microscpico.
f) La tira de papel filtro puede transferirse a un tubo limpio lleno de agua para
recoger las larvas que hayan podido quedar en la pelcula fecal.
g) Algunas especies de larvas tienen tendencia a no migrar hacia abajo. Antes de
retirarlas, las larvas pueden inmovilizarse introduciendo el tubo a bao Mara (50-
60C) o aadiendo una cantidad de cido Actico al 20%.

INTERPRETACION DE RESULTADOS:
En caso de encontrar algn parasito durante la realizacin de esta prueba se deber
anotar en la hoja de resultados el nombre del parasito as como su estadio evolutivo
(trofozoito o quiste en el caso de los protozoos y huevo o larva en caso de helmintos)


* * METODO DE BAERMAN


Fundamento: Se basa en los tropismos positivos: geotropismo, termotropismo e
hidrotropismo de los trofozotos de protozoos y larvas de helmintos. Es til
principalmente para Balantidium coli y larvas de Strongyloides stercoralis.

MATERIAL Y EQUIPO:
Embudo de vidrio
Gasa
Coladera metalica
Pipeta pasteur
Portaobjetos
Solucin salina
Microscopio
Estufa

METODO:

a) Colocar la coladera metlica con la gasa doblada dentro del embudo
b) Colocar dentro de la gasa de 3 a 4 grs de heces
c) Verter solucin salina a 37
0
C en cantidad suficiente
d) Dejar a temperatura o en la estufa a 28
0
C 37
0
C de 30 a 50 minutos.
e) Sacar la coladera o rejilla y con ayuda de una pipeta Pasteur, obtener un
mililitro de sedimento.
f) Colocar dicho sedimento en un portaobjetos y observar al microscopio.
g) Se debern reportar los estadios evolutivos de los parsitos encontrados.


INTERPRETACION DE RESULTADOS:
En caso de encontrar algn parasito durante la realizacin de esta prueba se deber
anotar en la hoja de resultados el nombre del parasito as como su estadio evolutivo
(trofozoito o quiste en el caso de los protozoos y huevo o larva en caso de helmintos)








































* *ESTUDIO DE AMIBAS DE VIDA LIBRE


GENERALIDADES:
Las amebas de vida libre son numerosas y se encuentran en la naturaleza,
en medios como: agua, suelos y vegetacin. Los gneros Naegleria y
Acanthamoeba ; tienen importancia en salud pblica ya que pueden producir
enfermedades de tipo mortal como la meningoencefalitis.

La puerta de entrada para estas amebas al ser humano es a travs de la piel o de
las mucosas, as como tambin la inhalacin de agua o aire contaminados con
estos patgenos. Una vez en el organismo, aparece una lesin y a travs del
sistema circulatorio, las amebas pueden alcanzan el sistema nervioso central. En
este tipo de infeccin las lesiones se caracterizan por formar grnulos o
tumoraciones en los tejidos.

Naegleria fowleri; causa una infeccin llamada meningoencefalitis
amebiana primaria (MEAP). Esta infeccin se adquiere por la inhalacin de agua
con amebas. Una vez en las fosas nasales las amebas viajan rpidamente a
travs de los tejidos olfatorios llegando al cerebro y concentrndose en el
encfalo. Dado que la invasin es muy rpida y las amebas se reproducen
aceleradamente, comienza la destruccin masiva del cerebro y ocurren
numerosas hemorragias en gran parte del sistema nervioso central, y la muerte
sobreviene en el lapso de tres y siete das, dependiendo del manejo y resistencia
del paciente, as como de la virulencia del microorganismo invasor. infeccin se
adquiere por la inhalacin de agua con amebas.

Las amebas del gnero Acanthamoeba son capaces de producir un
padecimiento llamado encefalitis amebiana granulomatosa (EAG) o
acantamebiosis, adems de otras enfermedades en ojo, odos, piel, pulmn,
hgado, prstata y tero entre otros rganos.


DIAGNOSTICO EN EL LABORATORIO:

Para identificar las amebas de Naegleria fowleri; se debern realizar frotes
de LCR y teir con Wright o Giemsa. Es importante decir, que en estas
preparaciones, las amibas muestran abundante citoplasma azulado y un nucleo
pequeo y delicado de color rosa.El LCR en estos casos es purulento o
sanguinolento, con leucocitos, principalmente neutrofilos hasta ms de
20,0007mm
3
, la glucosa es baja y el contenido de protenas alto.

Para la identificacin de Acanthamoeba en LCR se deben Observar de manera
directa de la formas trofozoiticas. En tejido nervioso se deben observar las
formas qusticas.



* * ESTUDIO DE PROTOZOARIOS CILIADOS INTESTINALES



FUNDAMENTO: Este mtodo permite hacer la identificacin por medio de un
examen coproparasitoscpico directo del trofozoito en heces diarreicas y el quiste
en heces formadas del parsito Balantidium coli.
















METODO
a) Colocar en un lado del portaobjetos una gota de solucin salina y del otro
extremo una gota de lugol.
b) Agregar una porcin de materia fecal porcina y homogeneizar.
c) Colocar el cubreobjetos procurando no hacer vacos.
d) Observar al microscopio con objetivos de 10X y 40X.
e) Hacer los dibujos y anotar resultados.

INTERPRETACION DE RESULTADOS:
En caso de encontrar algn parasito durante la realizacin de esta prueba se
deber anotar en la hoja de resultados el nombre del parasito as como su estadio
evolutivo (trofozoito o quiste en el caso de los protozoos y huevo o larva en caso
de helmintos)






MATERIAL Y EQUIPO
Aplicadores de madera
Portaobjetos de 25 X 76 mm
Cubreobjetos de 22 X 22 mm
Solucin Salina isotnica
Lugol
Agua destilada
Microscopio
Materia fecal porcina

* * ESTUDIO DE PROTOZOARIOS CILIADOS EN CAVIDADES


FUNDAMENTO: Este mtodo permite demostrar la presencia de protozoarios flagelados
en exudados vaginales y uretrales y en orina por medio de examen directo. El parasito
ms comnmente encontrado es Trichomonas vaginalis.













METODO:
a) Se coloca a la paciente en posicin ginecolgica.
b) Introducir con cuidado el espejo vaginal.
c) Con un hisopo tomar la muestra del fondo de saco posterior.
d) Depositar la primera toma en un portaobjetos limpio y hacer un extendido.
e) La segunda toma depositarla en un tubo de ensaye con solucin salina
conservando a 37C.
f) Una vez seco el extendido se procede a teir con el colorante de Wright de 1 a 3
min.
g) Se observa al microscopio con objetivos de 10X, 40X y 100X agregando a ste
ltimo aceite de inmersin.
h) Con una pipeta Pasteur se toma una gota del fondo del tubo de ensaye y se
deposita en un portaobjetos y se cubre.
i) Examinar con objetivos de 10X y 40X.

INTERPRETACION DE RESULTADOS:
En caso de encontrar algn parasito durante la realizacin de esta prueba se deber
anotar en la hoja de resultados el nombre del parasito as como su estadio evolutivo
(trofozoito o quiste en el caso de los protozoos y huevo o larva en caso de helmintos).





MATERIAL Y EQUIPO
Microscopio
Hisopo
Portaobjetos
Cubreobjetos
Tubo de ensaye con sol. Isotnica estril
Espejo vaginal
Puente de tincin
Pipeta Pasteur con bulbo
Aceite de inmersin
Colorante de Wright
Secrecin vaginal, uretral u orina
Pizeta con agua destilada

* * ESTUDIO DE EXPECTORACION PARA LA BUSQUEDA DE
PARASITOS PULMONARES


FUNDAMENTO: este mtodo consiste en investigar en secreciones pulmonares,
presencia de protozoarios.

MATERIAL Y EQUIPO
Microscopio
Portaobjetos 25 X 76 mm
Aplicador de madera
Mechero
Puente de tincin
Colorante de Giemsa
Sol. Buffer ph 7.0-7.2
Aceite de inmersin


Frasco con expectoracin o material de aspiracin
bronquial


METODO:

a) En un portaobjetos limpio y desengrasado hacer un frotis de la
expectoracin.
b) Dejar secar 5 minutos.
c) Proceder a teir cubriendo el frotis con sol. colorante de Giemsa por 30
minutos, escurrir y lavar con sol. buffer, escurrir y dejar secar.
d) Observar al microscopio con objetivos de 10X, 40X y 100X agregando a
esta ltima observacin aceite de inmersin.

INTERPRETACION DE RESULTADOS:
En caso de encontrar algn parasito durante la realizacin de esta prueba se
deber anotar en la hoja de resultados el nombre del parasito as como su estadio
evolutivo (trofozoito o quiste en el caso de los protozoos y huevo o larva en caso
de helmintos).











































* * ESTUDIO DE PLASMODIUM



GENERALIDADES:
El procedimiento para el diagnstico de protozoos en sangre circulante es el
estudio al microscopio de preparaciones en portaobjetos las cuales son la
extensin fina y la gruesa. La extensin fina ideal es la que tiene el grosor de una
clula y en la que los elementos celulares aparecen algo aplanados. La extensin
fina es til para estudiar detalles de los hemates y de los parsitos de la sangre,
su principal limitacin es que la cantidad de sangre presente en la muestra es
pequea.La extensin gruesa contiene 6-20 veces ms sangre por unidad de
superficie que la extensin fina. Es fundamental que no se fije antes de la tincin
ya que los hemates tienen que deshemoglobinizarse durante el procedimiento.

La rotura de los hemates y la prdida de su hemoglobina permite la visin
microscpica de las dems estructuras, incluidos los parsitos sanguneos,
aunque se encuentren en la parte ms profunda de la extensin. La extensin
gruesa resulta til para el diagnstico rpido de las parasitemias demasiado leves
para apreciarse en la extensin fina, pero no sirve para estudios anatmicos finos.

La toma de sangre perifrica para Plasmodium vivax y P. Malarie deben
efectuarse cuando el paciente presenta escalofros para la bsqueda de
esquizontes maduros. Para P. Falciparum se debe tomar la muestra despus del
acceso febril para observar los eritrocitos con varios trofozoitos antes que estos
desaparezcan en capilares de rganos internos.

Con el colorante Giemsa las estructuras se tien de la siguiente manera:

Plasmodium: Citoplasma azul o azul grisceo.
Eritrocitos: Azulosos, grisceos y en ocasiones rosados.
Ncleo de los Leucocitos: Violeta o morado.
Plaquetas: Violeta ligero o rosa plido.
















































* * C CO OL LO OR RA AC CI IO ON N D DE E H HE EM MA AT TO OX XI IL LI IN NA A F FE ER RR RI IC CA A D DE E H HE EI ID DE EN NH HA AI IN N


FUNDAMENTO:Esta tincin permite colorear estructuras internas de especmenes
adultos o fragmentadas del mismo . Se usa en casos de cestodos y trematodos.

MATERIAL Y EQUIPO:
portaobjetos
Cubreobjetos
Frasco coplin o placas Petri
Colorante de hematoxilina
Cytoseal o blsamo de Canad
Alcoholes 50%, 70%, 85%, 95%
Solucin Schaudinn
Solucin mordiente de sulfato de fierro y amonio
Tintura de yodo
Solucin fisiolgica
Microscopio binocular

METODO:
a) Preparar un set de placas petri 100 x 150 mm o el frasco Coplin con los reactivos
correspondientes y con ayuda de un estilete o pinza curva hacer un frotis fino en la
lmina o la laminilla, esta ltima sujeta al porta-laminilla.
b) Si la muestra es dura, hacer una emulsin previa en solucin fisiolgica, realizar el
frotis y pasaren solucin Schaudinn por 3 a 5 minutos.
c) Pasar por alcohol 70% ms 1 a 2 gotas de tintura de yodo por 5 minutos
d) Pasar por alcohol 70% y 50% de 5 a 10 minutos cada vez.-Pasar por agua
corriente por 5 a 10 minutos
e) Pasar por la solucin mordiente 2% de 5 a 10 minutos y enjuagar con agua
corriente.
f) Pasar por colorante por 5 a 10 minutos (1 mL de solucin colorante hematoxilina y
9 mL de agua)
g) Lavar con agua y pasar por una segunda solucin de mordiente al 2% para
decolorar, observandola intensidad de la coloracin
h) Lavar con agua corriente a chorro continuo de 10 a 15 minutos
i) Deshidratar pasando por alcohol 70%, 85%, 95% y absoluto, de 10 a 15 minutos
cada uno
j) Aclarar con xilol agitando el frotis, montar con cytoseal o blsamo de Canad y
observar al microscopio.
k) Informar el nombre del parsito y el estadio evolutivo

NOTA:
Observar con objetivo de inmersin 1000x. El citoplasma de los parsitos se observan de
color azul oscuro y los ncleos de color morado intenso a negruzco.

INTERPRETACION DE RESULTADOS :En caso de encontrar algn parasito en la
tincin se deber anotar en la hoja de resultados el nombre del parasito as como su
estadio evolutivo .


* * TCNICA DE ZIEHL NEELSEN
(MODIFICADA PARA OBSERVAR COCCIDIAS:
CRIPTOSPORIDIUM)


FUNDAMENTO: Se basa en el comportamiento acido-resistente de la cubierta de estos
parsitos , los cuales se tien de rojo y destacan sobre un fondo verde o azul ,
dependiendo del colorante de contraste usado.


MATERIAL Y EQUIPO:
Portaobjetos
Cubreobjetos
Puente para tincin
Fucsina fenicada
Verde de malaquita o azul de metileno acuoso
Metanol
Hidrxido de sodio al 4%
Alcohol acido

METODO:
a) Realizar un frote de heces en el portaobjetos y dejar secar.
b) Colocar las laminas sobre el puente de tincin
c) Fijar la lamina con alcohol metlico de 2 a 3 minutos y dejar secar
d) Agregar hidrxido de sodio, sobre el preparado por un minuto y eliminar el
exceso con agua de la llave.
e) Cubrir la lamina con fucsina fenicada (previa agitacin del frasco que
contiene dicho reactivo). Por 5 minutos. Es importante recordar que la
fucsina debe ser diluida previamente con agua al tercio (1 ml de colorante
mas 2 ml de agua)
f) Lavar suavemente la lamina con agua corriente
g) Cubrir el portaobjetos con alcohol acido por unos segundos hasta quitar el
colorante.
h) Lavar suavemente la lamina con agua corriente
i) Colocar el colorante de contraste a la lamina que puede ser verde de
malaquita al 1% o azul de metileno al 1.4%, durante 5 minutos( diluidas
previamente al tercio)
j) Lavar suavemente la lamina con agua corriente y secar a temperatura
ambiente.
k) Realizar el montaje con cytoseal, blsamo de Canad o Permount, cubrir
con un portaobjetos.
l) Observar al microscopio.


NOTA:

Los ooquistes de Cryptosporidium, Isospora y Cyclospora, aparecen de un
color rojo fucsina, sobre un fondo verdoso (verde de malaquita). En algunos no se
colorean bien, pero la refringencia caracterstica permite diferenciarlos.


INTERPRETACION DE RESULTADOS:
En caso de encontrar algn parasito acido alcohol resistente en la tincin se deber
anotar en la hoja de resultados el nombre del parasito as como su estadio evolutivo .












































































* *P PR RO OT TO OZ ZO OO OA AR RI IO OS S I IN NT TE ES ST TI IN NA AL LE ES S: :



ENTAMOEBAS :










































T
R
O
F
O
Z
O
I
T
O

Q
U
I
S
T
E

Entamoeba :



*AMIBAS DE VIDA LIBRE :







AMEBA TROFOZOITO
FLAGELADO
TRANSITORIO


QUISTE






Naegleria fowleri












Acanthamoeba sp..





















Balamuthia mandrillaris..


* *P PR RO OT TO OZ ZO OO OA AR RI IO OS S F FL LA AG GE EL LA AD DO OS S : :



* *P PR RO OT TO OZ ZO OO OA AR RI IO OS S I IN NT TE ES ST TI IN NA AL LE ES S C CI IL LI IA AD DO OS S , , C CO OC CC CI ID DI IO OS S Y Y B BL LA AS ST TO OC CY YI IS ST TI IS S: :

* * H HE EL LM MI IN NT TO OS S : :

HUEVOS DE NEMATODOS Y CESTODOS PRESENTES EN HECES :

















* *P PR RO OT TO OZ ZO OO OA AR RI IO OS S I IN NT TE ES ST TI IN NA AL LE ES S C CI IL LI IA AD DO OS S , , C CO OC CC CI ID DI IO OS S Y Y B BL LA AS ST TO OC CY YI IS ST TI IS S: :
























* * H HE EL LM MI IN NT TO OS S : :

HUEVOS DE NEMATODOS Y CESTODOS PRESENTES EN HECES :





* HUEVOS DE TREMATODOS PRESENTES EN LAS HECES























ETAPAS JUVENILES , DE UNCINARIAS Y STRONGYLOIDES :






* PROGLOTIDOS GRAVIDOS Y ESCOLICES DE CSTODOS.





*ETAPAS RABDITOIDES Y FILARIFORMES DE UNCINARIAS Y STRONGYLOIDES:













































*NOTA :
LARVA RABDITOIDE : Larva de vida libre (viven en el ambiente )
LARVA FILARIFORME : Tipo de forma larvaria en la cual se transforma una larva rabditoide al
encontrar un hospedero a quien parasitar


* TAMAO COMPARATIVO DE HUEVOS DE HELMINTOS :

* HEMOFLAGELADOS :

Tripanosoma y Leishmania :

























A AM MA AS ST TI IG GO OT TE E

L LE EI IS SH HM MA AN NI IA A

P PR RO OM MA AS ST TI IG GO OT TE E

L LE EP PT TO OM MO ON NA A

E EP PI IM MA AS ST TI IG GO OT TE E

C CR RI IT TH HI ID DI IA A
T TR RI IP PO OM MA AS ST TO OG GO OT TE E

T TR RI IP PA AN NO OS SO OM MA A
Cinetoplasto
Ncleo

Cuerpo
Basal
Cinetoplasto
Flagelo
Ncleo
Cinetoplasto
Flagelo
Ncleo
Cinetoplasto
Flagelo
Ncleo
Membrana
ondulante
Membrana
ondulante
Grnulos de
votulina
*Forma transitoria
*Forma infectante al hombre

* Plasmodium

FASE ERITROCITARIA :







JOVEN VIEJO
TROFOZOITOS
INMADURO MADURO
EZQUIZONTES
MASCULINO
GAMETOCITOS
FEMENINO


































* * F FI IJ JA AD DO OR RE ES S y y/ /o o C CO ON NS SE ER RV VA AD DO OR RE ES S


Los fijadores sirven para preservar protozoarios, sin que se modifiquen las
estructuras internas, sobre todo cuando las muestras no pueden ser procesadas
inmediatamente.

El conservador mas utilizado en el laboratorio por econmico y eficaz es la
Solucin de formalina al 10 % tambin conocido como formol , aldehdo frmico
o formaldehido.

Sin embargo a continuacin se har referencia a diversos conservadores que
tambin se utilizan ampliamente dentro del laboratorio de Parasitologia :

I. PAF (phenol-alcohol-formol):

UTILIDAD:
Conserva las estructuras de los parsitos (trofozotos, quistes, huevos y
larvas), pudindose incluso observarse en semanas o meses (6) sin que haya
ocurrido deterioro alguno. Es recomendable mantener el fijador preparado en
frascos color mbar. Adems, permite observar el material al microscopio.

MATERIAL:
Fijador PAF
Tionina o azure A
Agua destilada.
Hisopo.
Tubos de centrfuga de 15 mL.
Aplicadores.
Tritn NE. ter.
Embudo de vidrio.
Solucin fisiolgica


PROCEDIMIENTO:
a) La muestra de heces se mezcla con el fijador en un recipiente en la
proporcin 1:1.
b) Para la observacin microscpica. Mezclar bien la muestra fijada en PAF y
con ayuda de un embudo y una gasa doblada en un tubode 15 mL, colar
de 3 a 4 mL del material fijado
c) Agregar solucin salina hasta un volumen de 12 mL y centrifugar a 1800
r.p.m. por 3 minutos.
d) Decantar el sobrenadante y obtener un sedimento de 0,5 mL; si es menor,
agregar de la muestra filtrada una cantidad suficiente y volver a centrifugar
para obtener el volumen del sedimento deseado.
e) Decantar el sobrenadante y completar 12 mL con solucin fisiolgica,
emulsionar con el aplicador centrifugar a 1800 r.p.m. por 3 minutos.
f) Repetir el centrifugado y lavar de 2 a 3 veces ms.
g) Agregar 2 mL de solucin fisiolgica al sedimento final, emulsionar y
obtener una gota del sedimento con una pipeta Pasteur y colocarla en una
lmina portaobjetos
h) Agregar una gota del colorante tionina o azure A, cubrir con una laminilla
cubreobjetos y examinar al microscopio.
i) Al sedimento emulsionado y sobrante del procedimiento anterior, agregar
10 mL de solucin fisiolgica y una gota de Triton NE.
j) Mezclar, agregar 2 mL de ter, tapar con un tapn de jebe o de corcho,
agitar suavemente y destapar.
k) Centrifugar a 2 000 r.p.m. por 3 minutos, decantar y eliminar los detritus de
las paredes del tubo mediante un aplicador cubierto de algodn.
l) Agregar al sedimento 1 2 gotas de solucin fisiolgica, mezclar y obtener
del fondo del tubo con una pipeta Pasteur una gota que se colocar en una
lmina portaobjeto.
m) Agregar una gota de colorante tionina o azure A, cubrir con una laminilla y
observar al microscopio
NOTA:
Se debern observar los elementos parasitarios: el citoplasma se ve de
color azul y el ncleo azul oscuro.


II. PVA (alcohol polivinlico):

UTILIDAD:
Fija y preserva, principalmente los trofozotos y quistes de protozoarios, por
tiempo muy prolongado sin modificacin importante de su morfologa.

MATERIAL:
Solucin fijadora
Conservador de PVA
Aplicador
Viales de vidrio de 3 a 4 mL.
Portaobjetos




PROCEDIMIENTO:
a) Colocar en una lmina portaobjetos 1 2 mg de muestra,
b) Secar el frotis, agregar 2 3 gotas de PVA y secar o guardar hasta por 3
meses para colorearlos,
c) Agregar al frasco que contiene la muestra v/v 1 a 4 mL. Generalmente se
puede preservar por meses y cuando se considere conveniente se realizar
la coloracin con Trichrome Gomori Wheatley.

III. MIF (merthiolate - yodo - formol):

UTILIDAD:
Fija y colorea simultneamente los quistes y huevos de parsitos,
permitiendo la observacin inmediata de la muestra.
MATERIAL:
Solucin MIF
Viales de vidrio de 3 a 4 mL.
Aplicador



PROCEDIMIENTO:
a) Colocar 1 2 mL de la solucin MIF en el vial con ayuda del una pipeta.
b) Para la observacin microscpica, colocar 1 2 mL o su equivalente de la
muestra fresca de heces.
c) Mezclar y observar al microscopio.

NOTA:
Se debern observar los parsitos teidos de color amarillo oro.

IV. FIJ ADORES PARA PRESERVAR HELMINTOS ADULTOS:

UTILIDAD:

Conserva ejemplares adultos para su estudio morfolgico, su preservacin en
museos o para contar con muestras de referencia.
Los ms usados suelen ser formol al 10%, AFA (cido actico - Formol- Alcohol)
o SAF (Acetato sodio - cido actico - formol)





.











PROCEDIMIENTO:
Coleccin y lavado de los helmintos:

a) Todo espcimen aislado del hospedero debe mantenerse fresco (agua o
suero fisiolgico) en un frasco con tapa.
b) Los adultos colectados son lavados varias veces con solucin fisiolgica,
para eliminar la mucosidad y otras sustancias adheridas al cuerpo del
helminto.
c) Finalmente, se lava con agua para permitir el relajamiento del parsito-
Calentar a 55C de temperatura, alcohol de 70%, formol 10% AFA, para
que con la fijacin los ejemplares queden estirados y pueda observarse sus
estructuras internas.

Fijacin:

d) Para una conservacin apropiada usar formol 10% (para cstodos y
tremtodos) o una mezcla de alcohol 70% (para nemtodos), ambos con
glicerina 5%.
e) Todos los frascos deben ser rotulados, indicando el nombre del parsito,
procedencia, localizacin y fecha de coleccin.
f) Para la identificacin, en ocasiones se requiere hacer el aclaramiento con
lactofenol.

Aplanamiento:

g) til para cstodes y tremtodes, los cuales se colocan entre lminas y se
les ajusta con el pabilo para favorecer su aplanamiento
h) Se sumerge en formol 10% o AFA de 1 a 3 das, luego del cual se puede
colorear o conservar como pieza de museo en formol 10% y glicerina 5%.
i) Los tremtodes como Fasciola y/o Paragonimus pueden prepararse y
conservarse siguiendo los pasos dados para los cstodos.






MATERIAL:
Formol 10%
Solucin AFA
Alcohol 70%
Glicerina 5%
Lminas portaobjetos.
Pabilo o pesas de metal segn modelo
Frascos boca ancha 150 200 mL.
Placas petri 150 x 100 mm y 240 x 200 mm.








































AFA: Fijador conteniendo alcohol, formol y cido actico.
CPSULA OVGERA: Vescula que contiene huevos.
CESTODO: Gusano o helminto platelminto de forma acintada.
COLORANTE VITAL: Colorante que permite ver la estructura interna del
parsito vivo.
COPRO-ANTGENO: Antgeno presente en las heces.
CRISTAL DE CHARCOT - LEYDEN: Cristales de protenas provenientes
de los grnulos de eosinfilos, que se destruyen en el intestino.
DIAFANIZAR: Aclarar para facilitar la visualizacin microscpica
DIAGNSTICO PARASITOLGICO: Demostracin directa o indirecta de
alguna forma o estadio evolutivo del parsito.
ENTEROPARSITO: Parsito que tiene por hbitat el tubo digestivo,
especialmente el intestino.
ESPORA: Esporoquiste aislado.
ESPOROQUISTE: Quiste con cubierta definida que contiene esporozotos.
ESTRBILA: Porcin del cuerpo de las tenias o cstodes formadas por
una cadena de progltidos.
FIJACIN: Conservacin de la estructura del parsito.
HECES: Mezcla de productos de excrecin y secrecin que se eliminan por
el intestino.
HELMINTO: Ser pluricelular con exoesqueleto flexible, ausencia de
apndices y con movimientos reptantes.
HPG: Nmero de huevos por gramo de heces.
HUEVO: Producto de la fecundacin con potencialidad de desarrollar un
nuevo ser.
LARVA: Estadio evolutivo de algunos seres vivos como los helmintos y los
artrpodos en quienes an no se han desarrollado los aparatos genitales.
MIF: Fijador que contiene merthiolate, yodo y formol.
MONTAR: Colocar el espcimen entre lmina y laminilla con blsamo de
Canad para su conservacin permanente.
NEMATODO: Gusano o helminto de forma cilndrica.
OOQUISTE: Quiste que contiene el huevo o cigoto.
PAF: Fijador y/o conservador conteniendo fenol, alcohol y formol para
muestras con parsitos, sobretodo protozoario.
PVA: Alcohol polivinlico, fijador para conservar los parsitos en muestras
fecales.
PARSITO: Ser vivo de escala zoolgica inferior que vive a expensas de
otro de escala superior.
PATOGENICIDAD: Capacidad de producir dao.
PROTOZOARIO: Ser unicelular.
PROGLTIDE: Segmento o anillo de la estrbila de las tenias o cstodes y
que puede ser inmaduro, maduro o grvido, segn el estado de desarrollo
de sus aparatos genitales.
QUISTE: Forma de resistencia de los protozoos, los cuales se rodean de
una membrana dura e impermeable.
SOLUCIN SOBRESATURADA: Solucin en la cual el soluto est en su
mxima concentracin.
TROFOZOTO: Forma vegetativa, libre y en movimiento de los protozoos.
TREMTODE: Gusano aplanado o platelminto, que presenta su cuerpo
indivisible.


BIBLIOGRAFIA:

http://groups.msn.com/parasitologia1
http://www.invdes.com.mx/anteriores/Febrero2002/htm/amebas.html
http://www.drscope.com/privados/pac/generales/parasitologia/teniasis.html
http://www.scribd.com/doc/2362490/Manual-parasitologia-laboratorio-parte-I
http://www.scribd.com/doc/2362916/MANUAL-PARASITOLOGIA-
LABORATORIO-PARTE-II
http://www.scribd.com/doc/995852/165-NT37