Guia de Bioquimica 2009 II

1
Gua de Prcticas
Bioqumica
Lima - Per
2009-II
UNIVERSIDAD RICARD PAL!A
FACULTAD DE MEDICINA Y NUTRICION GUIA DE BIOQUIMICA
"A!URP
Dr. Elio Ivn Rodrguez Chvez
Rector
Dr. Manuel Huamn Guerrero
Decano de la Facultad de Medicina Humana
Aut#res$
Dra. Nancy Jo Vargas
Q.F. Cecilia Rojas uerrero
I NDICE
Pgina
1. Cronograma de Actividades de Practica..4
2. Reglamento Interno del Laboratorio..5
3. Normas de Seguridad en el Laboratorio
4. Interconversi!n de unidades " mane#o de concentraci!n de soluciones.................................$
5. %u&&ers' () " (*.........................................................................................................................+,
6. -s(ectro&otometr.a ' Curvas de Calibraci!n............................................+3
7. /actores 0ue a&ectan la actividad en1im2tica...............................................................+3
Universidad Ricardo Palma Pgina 2
8. 4igesti!n en1im2tica del almid!n............................................................................................2+
9. Prueba de 5olerancia de la 6lucosa............................................................23
10.Acid!sis diab7tica....................................................................................................................2
11.Per&il li(.dico " Riesgo Coronario..........................................................................................28
12.Ictericia e )i(erbilirrubinemia..............................................................................................34
13.5ransaminaci!n......................................................................................................................3
C RNGRA!A DE AC%IVIDADES DE PRAC%ICA
Semestre 200 9-II
Acti&idad Sema'a
!ntercon"ersi#n de unidades y manejo de concentraciones
de disoluciones.
$% al $& 'gosto
Bu((er)
Ca*acidad +u((er en t,rminos de *-a. () A*#st# a+ 0, Setiem-re
.s*ectro(otometra /so de la lu0 "isi+le y /V en Medicina. 0. a+ )) Setiem-re
'cti"idad en0im1tica) .(ecto de (actores en la
trans(ormaci#n del sustrato/ )0 a+ )1 Setiem-re
'cci#n de la amilasa en la digesti#n del almid#n. 2) a+ 2, Setiem-re
Meta+olismo de los C.H y *rue+a de so+recarga de glucosa
2334.
21 Setiem-re a+ 02
ctu-re
Determinaci#n e inter*retaci#n del HC5
6
7
en la 1cidosis
dia+,tica.
0, a+ 09 ctu-re
I E2ame' Practic# )2 a+ )3 ctu-re
'islamiento e identi(icaci#n de li*o*rotenas *lasm1ticas y
su asociaci#n con el riesgo coronario.
)9 a+ 2( ctu-re
Re&isi4' de I E2ame' Practic# 23 a+ (0 ctu-re
!ctericia) Meta+olismo de la +ilirru+ina y *igmentos +iliares. 23 a+ (0 ctu-re
3ransaminaci#n. /so de la cromatogra(a. 02 a+ 03 N#&iem-re
Valoraci#n Nutricional) Balance Nitrogenado 09 a+ )( N#&iem-re
."aluaci#n de la Masa 8roteica Visceral y .squel,tica)
Marasmo7 -9as:ior;or.
)3 a+ 20 N#&iem-re
Medidas 'ntro*om,tricas y signos clnicos que e"idencian
desnutrici#n. Manejo de la 3a+la de com*osici#n de
alimentos.
2( a+ 2. N#&iem-re
II E2ame' Practic# (0 N#&iem-re a+ 00
Diciem-re
Re&isi4' de II E2ame' Practic# 0. a+ )2 Diciem-re
Pu-+icaci4' 5 Re&isi4' de 6r#medi#s )0 Diciem-re
Re*+ame't# I'ter'# de+ La-#rat#ri#
1. La asiste'cia a +as 6racticas de +a-#rat#ri# es de carcter
#-+i*at#ri# 7 c#' u'a t#+era'cia de )0 mi'ut#s/
2. Las i'asiste'cias a +as 6racticas de +a-#rat#ri# '# s#'
recu6era-+es7 +as 8usti9icaci#'es 6#r e'9ermedad se rea+i:a'
de'tr# de +as .2 ;#ras/
3. E+ i'*res# a+ +a-#rat#ri# ser c#' ma'di+ # *uarda6#+&# 5
de-er 6#rtar su *ua de 6rcticas/
4. Se t#mar u' 6as# escrit# a'tes de i'iciar cada 6rctica7 c#' u'
6u'ta8e de 03 c#m# m2im#/
5. Cada a+um'# e'tre*ar u' i'9#rme de +a 6rctica rea+i:ada e'
u' m2im# de , 6*i'as <2!-=7 >ue de-er ser c#+*ada e'
i'tra'et c#m# m2im# a'tes de rea+i:arse +a si*uie'te 6rctica7
si a+*' a+um'# 9a+tase a a+*u'a 6rctica7 '# 6#dr e'tre*ar
i'9#rme/
6. L#s a+um'#s de-e' &e'ir +e5e'd# su *uia de 6rcticas 5 de-er'
te'er e' cue'ta +as i'dicaci#'es de+ 6r#9es#r s#-re e+
6r#cedimie't# a rea+i:ar 5 e+ e>ui6# de +a-#rat4ri# a uti+i:ar/
7. A cada a+um'# se +e asi*'ar u'a mesa de tra-a8#7 5 6#r 'i'*'
m#ti&# tra-a8ar e' u'a mesa disti'ta/
8. L#s a+um'#s ser' res6#'sa-+es 6#r e+ materia+ asi*'ad#7
cuid'd#+# 5 de8'd#+# +im6i# 5 #rde'ad# a+ 9i'a+i:ar +a 6ractica/
9. Si a+*' a+um'# r#m6e materia+ de &idri#7 de-er re6#'er+#7 de
+# c#'trari# '# 6#dr re'dir e+ 6r42im# e2ame'/
)0/E' cas# de deteri#r# de a+*' e>ui6# de +a-#rat#ri# t#da +a
mesa ser res6#'sa-+e de+ da?# causad#/
11.Si 6#rta ce+u+ares 5@# e>ui6#s de s#'id# <radi#s7Aa+Bma'7 !P(7
I6#d7 etc/= ser' a6a*ad#s7 6erma'ecie'd# as dura'te e+
tra'scurs# de +a 6rctica/
)2/N# se 6ermite i'*resar c#' a+ime't#s 5@# -e-idas a+ +a-#rat#ri#/
13.%#d# 6ermis# 6ara sa+ir de+ La-#rat#ri# de-er ser s#+icitad# a
su 6r#9es#r de 6rcticas7 #t#r*'d#se+e 6ermis# s4+# si 9uera
a-s#+utame'te ur*e'te/
Normas de <eguridad en el =a+oratorio
.l tra+ajo en el =a+oratorio requiere la
o+ser"aci#n de una serie de normas de
seguridad que e"iten *osi+les accidentes
de+ido a desconocimiento de lo que se est1
:aciendo o a una *osi+le negligencia de los
alumnos.
>. Cada gru*o de *r1cticas se res*onsa+ili0ar1 de su 0ona de tra+ajo y de su material.
$. .s con"eniente la utili0aci#n de mandil? ya que e"ita *osi+les *royecciones de
sustancias qumicas o +iol#gicas lleguen a la *iel. 8or su*uesto adem1s? e"itar1s
*osi+les deterioros en tus *rendas de "estir.
6. <i tienes el *elo largo? es con"eniente que lo lle"es recogido.
4. @ no :ara (alta decir estoA *ero *or su*uesto e' e+ +a-#rat#ri# est
termi'a'teme'te 6r#;i-id# 9umar7 'i t#mar -e-idas 'i c#midas/
Normas de utili0aci#n de *roductos qumicos yBo material +iol#gico
>. 'ntes de utili0ar un com*uesto? asegurarse +ien de que es el que se necesita? (ijarse
+ien en el r#tulo.
$. Como regla general? no coger ningCn *roducto qumico. 3u *ro(esor o *ro(esora te lo
*ro*orcionar1.
6. No de"ol"er nunca a los (rascos de origen los so+rantes de los *roductos utili0ados sin
consultar con el *ro(esor.
%. .s muy im*ortante que cuando los *roductos qumicos de desec:o se "iertan en la *ila
de desagDe? aunque est,n de+idamente neutrali0ados? de+e dejarse que circule *or la
misma? a+undante agua.
E. No tocar con las manos y menos con la +oca? los *roductos qumicos yBo +iol#gico.
F. No *i*etear con la +oca. /tili0ar la +om+a manual? un *i*eteador o *i*eta autom1tica
que se dis*onga en el =a+oratorio de Bioqumica.
7. =os 1cidos requieren un cuidado es*ecial. Cuando queramos diluirlos? nunca ec:aremos
agua so+re ellosA siem*re al contrario? es decir? 1cido so+re agua.
8. =os *roductos in(lama+les 2gases? alco:ol? ,ter? etc4 no de+en estar cerca de (uentes de
calor. <i :ay que calentar tu+os con estos *roductos? se :ar1 al +aGo Mara? 'u'ca
directame'te a +a ++ama.
&. <i se "ierte so+re ti cualquier 1cido o *roducto corrosi"o? l1"ate inmediatamente con
muc:a agua y a"isa al *ro(esor.
>H. 'l *re*arar cualquier disoluci#n se colocar1 en un (rasco lim*io y rotulado
con"enientemente.
Normas de utili0aci#n de "idrio
>. Cuidado con los +ordes y *untas cortantes de los tu+os u o+jetos de "idrio.
$. .l "idrio caliente no se di(erencia a sim*le "ista del "idrio (ro. 8ara e"itar
quemaduras? dejarlo en(riar antes de tocarlo.
6. =as manos se *roteger1n con guantes o tra*os cuando se introdu0ca un ta*#n
en un tu+o de "idrio.
%. <i tienes que calentar a la llama el contenido de un tu+o de ensayo? o+ser"a
cuidadosamente estas dos normas)
3en sumo cuidado y ten en cuenta que la +oca del tu+o de ensayo no
a*unte a ningCn com*aGero. 8uede :er"ir el lquido y salir dis*arado? *or
lo que *odras ocasionar un accidente.
Calienta *or el lateral del tu+o de ensayo? nunca *or el (ondoA agita
sua"emente.
IN%ERCNVERSICN DE UNIDADES D !ANEE DE CNCEN%RACICN
DE DISLUCINES )
8or muc:os aGos los cient(icos eI*resaron las mediciones en unidades m,tricas? relacionadas
entre s decimalmente? es decir? mediante *otencias de >H. <in em+argo? en >&FH? la
Con(erencia eneral de 8esas y Medidas? la autoridad internacional en unidades? *ro*uso un
sistema m,trico re"isado y actuali0ado al cual se denomin# Sistema I'ter'aci#'a+ de
U'idades <'+re"iado SI? del (ranc,s <yst,me !nternationale d /nites4. .n la ta+la NJ > se
muestran las siete unidades <! (undamentalesA las dem1s unidades de medici#n se *ueden
deri"ar a *artir de estas unidades. Como las unidades m,tricas? las unidades <! cam+ian en
(orma decimal *or medio de una serie de *re(ijos? como se muestra en la ta+la NJ $.
.n Bioqumica se suele usar ,ste sistema el cual signi(ica un am*lio dominio en su manejo toda
"e0 que las concentraciones de los (luidos intra y eItracelulares son generalmente en el orden
de los su+mClti*los.
%a-+a ) /- U'idades SI -sicas
CAN%IDAD
"UNDA!EN%AL
N!FRE
DE LA UNIDAD SG!FL
=ongitud Metro m
Masa -ilogramo ;g
3iem*o <egundo s
Corriente el,ctrica 'm*ere '
3em*eratura -el"in -
Cantidad de sustancia Mol mol
!ntensidad luminosa Candela cd
%a-+a 2/- Pre9i8#s uti+i:ad#s c#' u'idades SI
Pre9i8# Sm-#+# "act#r E>ui&a+e'te
!UL%IPLS tera % )0
)2
) 000 000 000 000
*i*a G )0
9
) 000 000 000
me*a ! )0
3
) 000 000
Bi+# H )0
(
) 000
;ect# I )0
2
)00
deca Da )0 )0
SUF!UL%IPLS deci d )0
-)
07)
ce'ti c )0
-2
070)
mi+i m )0
-(
0700)
micr# u )0
-3
07000 00)
'a'# ' )0
-9
07000 000 00)
6ic# 6 )0
-)2
07000 000 000 00)
9emt# 9 )0
-),
07000 000 000 000 00)
att# a )0
-)1
07000 000 000 000 000 00)
IN"R!E DE LA PRAC%ICA NJ )
Nom+re del 'lumno)777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777
ru*o) 7777777777777777777777777777777777 Fec:a) 777777777777777777777777777
>.7 Realice los siguientes con"ersiones)
K ml L K ul Kg L Kmg
K mg L K ng K*g L Kmg
K ul L K ml KmMolL KnMol
K = L K ml K Hg L K dg
$.7 Descri+a la estructura qumica y calcule el 8eso molecular de los siguientes com*uestos)
a4 lucosa
+4 Cloruro de sodio
c4 Cloruro de *otasio
d4 Cloruro de calcio
e4 =actato de sodio
(4 luconato de calcio
g4 /rea
:4 Manitol
6.7 Descri+a las siguientes eI*resiones)

a4 Molaridad
+4 Normalidad
c4 .qui"alente
d) m7.q
e4 5smolaridad
%.7 Calcule la Molaridad de > =itro de <oluci#n de )
a4 Cloruro de sodio al H.&M
+4 <uero glucosado al >HM
c4 /na am*olla de NaCl al $HM
d) /na am*olla de $Hcc de NaHC56 al >HM
E.7 Calculo los m.q)
a4 Cuantos m.q de Na y de Cl :ay en una am*olla de $Hcc de NaCl al $HM
b) Cuantos m.q de - :ay en una am*olla de $H ml de -Cl al >HM
c) Cuantos m.q de HC56 y cuantos m.q de Na :ay en una am*olla de $Hcc de HC56Na al >HM.
7777777777777777777777777777777777777777777 7777777777777777777777777777777777777777777777777777777 77777777777777
Firma del 'lumno Firma del 8ro(esor Nota
2
FU""ER S$ 6I 5 6Ha
%I%ULACIN DE ACID DEFIL !NPR%IC CN UNA FASE "UER%E
=a cur"a de titulaci#n de un 1cido d,+il como ac,tico re*resenta las "ariaciones de *H con res*ecto a di(erentes
*ro*orciones relati"as entre la sal y el 1cido de una soluci#n tam*#n. 'ntes de adicionar la +ase? el *H se de+e
solamente al 1cido. 3an *ronto como se agregue algo de +ase ,sta reacciona con una cantidad equi"alente de sal y
agua. 8ero el 1cido d,+il ? mas su sal disuelta constituye una soluci#n tam*#n? cuyo *H *uede calcularse mediante el
uso de la ecuaci#n de Henderson 7 Hassel+ac:.
*H L *-a N log
=os "alores de *H re*resentados (rente a los ml de +ase agregados dan una cur"a de titulaci#n *ara el 1cido
FEE%IV
a4 5+tener la cur"a de "aloraci#n de un 1cido d,+il? H'? CH6C55H 5.>N
y una +ase (uerte Na5H H.>N ? *-a L %.OF 2-a L >.PF I >H
7E
4
+4 Calcular el *H :aciendo uso de un *otenci#metro yBo usando la ecuaci#n de Henderson Hassel+ac:
P%ENCI!E%RIA
.l m,todo m1s con(ia+le *ara medir el *H es mediante el uso de un medidor de *H comCnmente denominado
*otenci#metro? que mide la (uer0a electromotri0 2(.e.m.4 de una celda (ormada *or un electrodo de re(erencia? la
soluci#n *ro+lema y un electrodo de "idrio sensi+le a :idrogeniones. .l electrodo de re(erencia *uede ser de calomel
2mercurio? cloruro mercurioso4 sumergido en una soluci#n concentrada de cloruro de *otasio. .l electrodo de medida o
de "idrio? esta constituido *or un tu+o de "idrio grueso con un eItremo en (orma de +om+illa? el cual es selecti"o y
sensi+le al *aso de iones :idr#geno. .st1 conectado a un alam+re de *latino conectado al electrodo de 'g? Cl$'g?
sumergido en HCl H.>M. =a (uer0a electromotri0 generada es leda en un gal"an#metro es unidades de *H.

EKPERI!EN% )
Me0clar los "olCmenes de CH67C55H H.>N e Na5H H.>N indicados en el esquema y medir los "alores de *H usando el
*otenci#metro yBo a*licando la ecuaci#n de Henderson 7 Hassel+ac:.
%u-# NJ CI(-CI 0/)N NaI 0/)N I2 DES%/ 6I
) )0 m+ 0/0 m+ )0 m+
2 )0 )/0 9
( )0 2/0 1
0 )0 (/0 .
, )0 0/0 3
3 )0 ,/0 ,
. )0 3/0 0
1 )0 ./0 (
9 )0 1/0 2
[ ]
[ ] ACI49
SAL
)0 )0 9/0 )
)) )0 )0/0 0
IN"R!E DE LA PRAC%ICA NJ 2
Nom+re del 'lumno)777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777
ru*o) 7777777777777777777777777777777777 Fec:a) 777777777777777777777777777
A. 5+tener la cur"a de "aloraci#n del 1cido d,+il H'
7
H.>N con Na5H H.>N.
B. Calcular el "alor semi"alorado y *untos de equi"alencia.
C. Calcule el "alor del *-a? :aciendo uso del *otenci#metro y la ecuaci#n de Henderson7Hassel+ac:.
D. <eGale la regi#n del +u((er donde tiene la m1Iima ca*acidad de amortiguaci#n.
7777777777777777777777777777777777777777777 7777777777777777777777777777777777777777777777777777777 77777777777777
VALORACION DE UN ACIDO DEBIL MONOPROTICO
! d" N#O$ 0.1N #%#d&d'(
)$
100* ACIDO 100* +AL
3
ESPEC%R"%!E%RIA - CURVA DE CALIFRACIN
Le5 de Lam-ert$
Cuando un rayo de lu0 monocrom1tica incide so+re un medio a+sor"ente? su intensidad decrece en (orma eI*onencial
al es*esor del medio.
Le5 de Feer$
Cuando un rayo de lu0 monocrom1tica incide so+re un medio a+sor"ente su intensidad decrece en (orma eI*onencial
a la concentraci#n.
'm+as leyes se (usionan as)
=ey =am+ert Q Beer
! L !H . >H
7a+c
a L a+sorti"idad molecular
+ L es*esor medio
c L concentraci#n
! L lu0 emergente
!HL lu0 incidente
!B!H L >H
7a+c
log2!B!H4 L 7a+c
log !HB! L a+c
log >HHMBM3 L $7logM3
$7logM3 L a.+.c
'+s L a.+.c
si + L ;
a.; L -
'+s L -.c
=a '+s es directamente *ro*orcional a la concentraci#n . =uego esta+lecemos la siguiente *ro*orcionalidad )
'+s I L '+s desconocido
'+s <t L '+s standard
CI L Concentr. Desconocido
C<t L Concentr. <tandard
CI L
CI L
Concentraci#n L I '+s desconocido
Desconocido
F'C35R C'=!BR'C!5N)
Cuando *re"iamente se :a determinado la linaridad de '+sstL;.c)
L Factor
Factor I '+s desconocido L Concentraci#n desconocido
De9i'ici#'es$
1. '+sor+ancia )
' L log>H3 L 7log L $7log>H M 3
2. '+sorti"idad #
Coe(. .Itin.)
a L '+sor+ancia@/nidad de concentraci#n y
es*esor # a+sor+ancia es*ec(ica
a L ' @ + c Concentraci#n
C:
CSt
=
x Abs
St Abs
:Cst
St Abs
x Abs
o desconocid :Abs _
St Abs
St C
st Abs
st. n Concetraci
st
Abs
st. n Concetraci
T
1
A
;
1
es*esor
3. .nerga Radiante )
!H L =u0 incidente
4. 3ransmitancia )
2emergente4
3 L
2incidente4
5. M 3ransmitancia )
M3 L >HH3

/V Regi#n es*ectral de $HH76PH nm
!R Regi#n es*ectral de H.O 7 6HHum
=u0 Visi+le Regi#n es*ectral de 6PH Q OPHnm
'+sorti"idad molar cm # Coe(iciente de eItinci#n molar o molecular
'+sorti"idad de una soluci#n > MolB=? en > cm es*esor cm
=a relaci#n matem1tica entre ' y concentraci#n)
' L a.+.c L log >HH
*or >HH de 3

=os es*ectro(ot#metros re*ortan sus resultados en a+sor+ancia 2lu0 a+sor+ida *or las *artculas de la soluci#n4 y
transmitancia 2 lu0 a+sor+ida4
A 2 )/0 0/, 0/2, 0/)2, 0/03 0
L % 0 )0 () ,3 ., 1. )00
=a a+sor+ancia o Densidad a*licada se eI*resa en "alores semilogartmicos y la trasmitancia en "alores
al(anum,ricos.
EKPERI!EN% NJ 2
=a *r1ctica consiste en *re*arar soluciones de concentraci#n creciente de un colorante a0ul de Metileno y leer sus D.5.
y M3.
8rocedimiento.7
NR tu+o > $ 6 %
E
F
ml. '0ul de Metileno)$ mgM $ % F P
>H
7
ml. 'gua destilada P F % $
7
P.E
ml. muestra *ro+lema 7 7 7 7
7
>.E
M 3ransmitancia
Calcular '+sor+ancia
Calcular mg M de '0ul de Metileno
Me0clar.
AM 2 N +#* L %
0
I
I.
A
;
1
=eer el M de 3ransmitancia a E%H nm ? colocando a H con agua destilada.
IN"R!E DE LA PRAC%ICA NJ (
Nom+re del 'lumno)777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777
ru*o) 7777777777777777777777777777777777 Fec:a) 777777777777777777777777777777
CURVA DE CALIFRACIN
M3
1) Haciendo uso del es*ectro(ot#metro registrar las ' o D.5. de cada muestra yBo *ro+lema.
2) Calcular los mgM de a0ul de metileno en cada uno de los tu+os.2diluciones4
3) ra(icar en *a*el milimetrado ) concentraci#n "s '. Comentar. Resultados.
4) ra(icar en *a*el semilogartmico ) concentraci#n "s M 3. Comentar. Resultados.
E4 Calcular el Factor de Cali+raci#n.
E4 Calcular la concentraci#n de una muestra *ro+lema :aciendo uso del F.C. y cur"a de cali+raci#n.
777777777777777777777777777777777777777777777 77777777777777777777777777777777777777 77777777777

4"AC%RES OUE A"EC%AN LA AC%IVIDAD ENPI!Q%ICA
=as en0imas son *rotenas que inter"ienen en las reacciones +ioqumicas? acelerando la "elocidad de la reacci#n :asta
su *unto de equili+rio.
C',c",-.#c&/, C',c",-.#c&/,
A
AC%IVIDAD ENPI!A%ICA
.s la ca*acidad de una en0ima de acelerar una reacci#n qumica.
<e *uede eI*resar de di"ersas maneras)
2a4 Desa*arici#n de un sustrato 2<4
2+4 Formaci#n de *roducto 284
2c4 Modi(icaci#n de co(actores 2C4
. N < . < . N 8
cS eSS
. N < . N 8
cS eSS
Di"ersos (actores modi(ican la acti"idad en0im1tica)
>. *H
$. Concentraci#n de la en0ima
6. Concentraci#n del sustrato
%. 3iem*o de incu+aci#n
E. 3em*eratura
F. !n:i+idores y acti"adores.
8ara la *r1ctica +uscamos el e(ecto de la *e*sina? en0ima *roteica? so+re la al+Cmina. =a mayor acti"idad en0im1tica
se demostrar1 *or desa*arici#n del sustrato 2menor tur+ide0 de la al+Cmina *or su trans(ormaci#n en amino1cidos4.
EKPERIENCIA NR/ )
E"EC% DEL 6I
Cada en0ima tiene un *H #*timo de tra+ajo. 8ara demostrar el *H #*timo de la *e*sina ? tra+ajaremos con F tu+os de
acuerdo al siguiente esquema)
%UF Nr#/ > $ 6 % E F B
8H >.H >.E F.H &.E >>.E
'l+Cmina ) ml E.H E.H E.H E.H E.H E.H
HCl >N ) ml $.H H.E
C56Na$ >HM ) ml H.E $.H
'gua dest. ) ml >.E $.H >.E E.H
8e*sina >M ) ml $H
!ncu+ar los 3u+os del > al F a 6ORC I ET
'Gadir r1*idamente del tu+o NRFA 6ml de *e*sina a los tu+os NR >?$?6?% y E. Me0clar? incu+ar 6OR I ES
=eer D.5 en el es*ectro(ot#metro a %$Hnm de los tu+os NR>?$?6?% y E y el tu+o Blanco2B4. =le"ando a cero el
instrumento con un +lanco de agua destilada.
Restar la lectura del tu+o Blanco2B4 menos la lectura de cada uno de los E tu+os. =a di(erencia ser1 asumida como
acti"idad en0im1tica.
EKPERIENCIA NR/ 2
E"EC% DE LA CNCEN%RACIN DE LA ENPI!A
Demostrar que la "elocidad de la reacci#n es directamente *ro*orcional a U.Vcuando la concentraci#n del < es
constante. 8re*arar el eI*erimento de acuerdo al siguiente esquema)
%UF Nr#/ B > $ 6 % E
'l+Cmina ) ml E.H E.H E.H E.H E.H
HCl >N ) ml H.E H.E H.E H.E H.E
'gua dest. ) ml %.E %.H 6.E $.E >.E
8e*sina >M ) ml >H.H
!ncu+ar los 3u+os a 6ORC I ES. 'Gadir la *e*sina del tu+o F a los tu+os > al % segCn el sgte. esquema)
%UF Nr#/) B > $ 6 %
8e*sina incu+ada H.H H.E >.H $.H 6.H
Me0clar? incu+ar a 6ORC I ES.Detener la reacci#n colocando los tu+os en +aGo de :ielo. =eer las D.5 en el
es*ectro(ot#metro a %$Hnm. =le"ando a cero el instrumento con un +lanco de agua destilada.
=a di(erencia de las a+sor+ancias entre el tu+o Blanco y la lecturas de los otros tu+os nos indicar1 la acti"idad
en0im1ticca *ara cada tu+o.W
EKPERIENCIA NR/ (
E"EC% DE LA %J
0
1
0
3
0
2
.l incremento de la tem*eratura acelera la "elocidad de las reacciones qumicas *or un aumento en nXmero de
colisiones e(ecti"as entre los elementos reaccionantes? sin em+argo todo incremento de tem*eratura *or encima de la
"elocidad m1Iima de reacci#n? *roduce una desnaturali0aci#n *rogresi"a de la en0ima.
8ara la eI*eriencia? *re*araremos $ series de E tu+os cada una.
<erie NR>
%UF Nr#/<)J serie= >a $a 6a %a EY Blanco
'l+Cmina ) ml E.H E.H E.H E.H E.H E.H
HCl >N ) ml H.E H.E H.E H.E H.E 7
'gua dest. ) ml 6.E 6.E 6.E 6.E 6.E %.H
<erie NR$
%UF Nr#/<2J serie= >+ $+ 6+ %+ E+
8e*sina >M ) ml >.H >.H >.H >.H >.H
!ncu+ar *or EZlos tu+os de acuerdo al siguiente esquema de tem*eraturas)
%UF Nr#/ >a7>+ $a7$+ 6a76+ %a7%+ Ea E+
3R.CR HRC 3Ram+ 6OR OHR 6OR >HHR
'gregar el contenido de los tu+os >+?$+?6+?%+ y E+ a sus res*ecti"os tu+os >a?$a?6a?%a y Ea .
=uego incu+ar a las 3R corres*ondientes HRC? 3Ram+? 6ORC? OHRC y >HHRC a cada tu+o *or E minutos.
Colocar los tu+os en +aGo de agua :elada *ara detener la reacci#n. =eer D.5. en el es*ectro(ot#metro a %$Hnm.
=le"ando a cero el instrumento con un +lanco de agua destilada.
=a acti"idad en0im1tica se encontrar1 restando la lectura del tu+o +lanco 2B4 menos la lectura de los otros E tu+os.
EKPERIENCIA NR/ 0
E"EC%S DE LA CNCEN%RACIN DEL SUS%RA%
<i aumentamos *rogresi"amente la concentraci#n del sustrato? aumentaremos la "elocidad en0im1tica 2"elocidad
inicial4 :asta un *unto en que la "elocidad llega a una meseta y no se modi(icar1 aunque sigamos aumentando el
sustrato 2saturaci#n4.
8re*arar P tu+os de acuerdo al siguiente esquema)
%UF Nr#/ > $ 6 % E F O P
'l+Cmina ) ml >.H $.H 6.H %.H E.H F.H O.H 7
HCl >N ) ml H.E H.E H.E H.E H.E H.E H.E 7
'gua dest. ) ml P.H O.H F.H E.H %.H 6.H $.H 7
8e*sina >M ) ml E.H
Me0clar. =eer los tu+os >?$?6?%?E?F?O. Considerar las a+sor+ancias como lectura inicial.
=uego incu+ar los P tu+os a 6OR I ES.
'Gadir H.Eml de *e*sina a cada tu+o 2del tu+o P a los tu+os >?$?6?%?E?F yO4Me0clar.
!ncu+ar ES a 6ORC.
Detener la reacci#n en un +aGo de :ielo.
=eer D.5 en el es*ectro(ot#metro a %$H nm. Considerar las a+sor+ancias como lectura (inal.
Hacer la di(erencia)
'cti"idad .n0im1tica L =ectura !nicial Q =ectura Final
.l resultado de ,sta di(erencia se considerar1 como acti"idad .n0im1tica.
IN"R!E DE LA PRAC%ICA NJ 0
Nom+re del 'lumno)777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777
ru*o) 777777777777777777777777777777777 Fec:a) 777777777777777777777777777777777777
E"EC% DEL 6I
'ct. .n0.
[*H
Comentario)\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\
\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\
E"EC% DE LA %J
'ct. .n0.
[3R
Comentario)\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\
\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\
FACULTAD DE MEDICINA Y NUTRICION GUIA DE BIOQUIMICA Y NUTRICIN
E "EC% DE LA CNCEN%RACIN DE LA ENPI!A
'ct. .n0.
U.V
Comentario)\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\
\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\
E"EC% DE LA CNCEN%RACIN DEL SUS%RA%
'ct. .n0.
U<V
Comentario)\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\
\\\\\\\\\\\\\\\\
5DIGES%IN ENPI!A%ICA DEL AL!IDN
IN%RDUCCIN
.l almid#n es un *olmero de glucosa y se caracteri0a *or dar un color a0ul con una soluci#n de yodo. .sta constituido
*or amilosa 2>E7$HM4 y amilo*e*tina 2PH7PEM4 am+os constituyentes son :idroli0adas *or la al(a7amilasa sali"al y *ancre1tica
*roduciendo maltotriosa? maltosa y deItrinas. =a *resencia de a0Ccares reductores se identi(ican *or la (ormaci#n de Cu$5 en
*resencia del reacti"o de Benedict.
FEE%IV
a4 Determinar la acci#n de la amilasa so+re el almid#n.
+4 Determinar sustratos y *roductos *roducidos *or acci#n de la amilasa sali"al.
c4 .(ecto del *H so+re la amilasa sali"al.
IIDRCLISIS DEL AL!IDN <DIGES%IN=
Haciendo uso de cuatro tu+os? seguir el siguiente esquema)
3/B5 NJ > $ 6 %
'=M!D5N >MA ml $.H $.H $.H $.H
B/FF.R F5<F'35 *H F.P)ml >.H >.H >.H 7
HC= 5?6N ) ml 7 7 7 6.%
C= Na H?&M) ml 6.H $.% 7 7
'gua dest.)ml 7 7 $.% 7
BaGo Mara 6OJ I EZ
'milasa <ali"al) ml 7 H.F H.F H.F
Me0clar? !ncu+ar en BaGo Mara 6ORC I $HT
DE%ER!INACIN EL SUS%RA%
3/B5< NJ E F O P
D!.R!D5 D.= 3/B5 >) ml H.E 7 7 7
D!.R!D5 D.= 3/B5 $) ml 7 H.E 7 7
D!.R!D5 D.= 3/B5 6) ml 7 7 H.E 7
D!.R!D5 D.= 3/B5 %) ml 7 7 7 H.E
H C= H.HEN ) ml E E E E
<ol. de =ugol) ml H.E H.E H.E H.E
Me0clar? re*osar >EZ) 5+ser"ar los resultados
DE%ER!INACIN DEL PRDUC%
3/B5< & >H >> >$ >6
D!.R!D5 D.= 3/B5 >) ml H.E 7 7 7 7
D!.R!D5 D.= 3/B5 $) ml 7 H.E 7 7 7
D!.R!D5 D.= 3/B5 6) ml 7 7 H.E 7 7
D!.R!D5 D.= 3/B5 %) ml 7 7 7 H.E
<5=/C!5N D. =/C5<' >M) ml 7 7 7 7 H.E
<5=/C!5N B.N.D!C3 ) ml $ $ $ $ $
Me0clar? !ncu+ar en BaGo Mara a >HHRC I ET
.n(riar en agua :elada e inter*retar.
IN"R!E DE LA PRAC%ICA NJ ,
Nom+re del 'lumno)7777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777
ru*o) 77777777777777777777777777 Fec:a) 7777777777777777777777777777
RESUL%ADS$
'.7 Determinaci#n del sustrato)
3u+o NJ > ...........................................................................!nter*rete el resultado]]]]]]]]]]]...........
3u+o NJ $ .......................................................................... !nter*rete el resultado]]]]]]]]]]]...........
3u+o NJ 6 .......................................................................... !nter*rete el resultado]]]]]]]]]]]...........
3u+o NJ %......................................................................... !nter*rete el resultado]]]]]]]]]]].............
B.7 Determinaci#n del *roducto)
3u+o NJ > ........................................................................ !nter*rete el resultado]]]]]]]]]]]...........
3u+o NJ $ ......................................................................... !nter*rete el resultado]]]]]]]]]]]...........
3u+o NJ 6 .......................................................................... !nter*rete el resultado]]]]]]]]]]]...........
3u+o NJ % .......................................................................... !nter*rete el resultado]]]]]]]]]]]...........
.I*lique? cuales son las condiciones #*timas *ara una :idr#lisis del sustrato almid#n solu+le.
!nter*rete la reacci#n de Benedict.
77777777777777777777777777777777777 7777777777777777777777777777777777777 777777777
6
PRUEFA DE %LERANCIA DE LA GLUCSA
=a *rue+a de tolerancia a la glucosa 2334 es em*leada *ara e"aluar *acientes en quienes se sos*ec:an anormalidades del
meta+olismo de los car+o:idratos. .sto es *articularmente Ctil *ara la dia+etes mellitus. =a *rue+a de tolerancia a la glucosa
*or "a oral es m1s (uncional ? m1s con(ia+le y m1s (1cil de lle"ar a ca+o que la *rue+a de tolerancia a la glucosa *or "a
intra"enosa. =a secreci#n de insulina como res*uesta a la administraci#n de glucosa es mayor de+ido a la estimulaci#n de la
secreci#n de :ormonas ent,ricas? las cuales a su "e0 estimulan la secreci#n de insulina.
FEE%IV$
> Determinar la concentraci#n de glucosa s,rica +asal 2 HS 4 y a los 6HS? FHS? &HS y >$HS des*u,s de una so+recarga oral de
glucosa 2 OE g 4.
$ Determinar el um+ral renal de rea+sorci#n de glucosa
6 8resencia de Cuer*os Cet#nicos
DE%ER!INACIN DE GLUCSA SERICA$
=a glucosa oIidasa catali0a la oIidaci#n de la glucosa de acuerdo con la siguiente ecuaci#n)
Glucosa Acido glucnico !gluconolac"ona
) 9 )9 9 9
C C C
92< )29
) C 9) ) C 9) ) C 9)
)9 C ) )9 C ) )9 C ) 9
6lucosa=o:idasa

) C 9) )292 ) C 9) ) C 9)

) C 9) ) C 9) ) C
)2C 9) )2C 9) )2C 9)
#!a$ino%&na'ona
(#!a$inoan"i)i*ina+ %&nol ,uinonai$ina
(colo*&ada-
$a.
/010n$+
)3C )3C
2)292 4)29
N C)3 N C)3
N N
2 9) (ero:idasa
N)2 N 9
9 9
.l *er#Iido de :idr#geno (ormado reacciona con % amino7anti*irina y (enol en *resencia de *eroIidasa? (ormando una
quinonaimina coloreada? la cual es directamente *ro*orcional a la concentraci#n de glucosa en sangre.
EKPERI!EN% )
Determinar la concentraci#n de glucosa s,rica siguiendo el siguiente esquema)
NR 3u+o > $ 6 % E F O
<3. lucosa) >EH mg W dl) 2ul4 7 $E 7 7 7 7 7
<uero ) HS 2ul4 7 7 $E 7 7 7 7
6HS 2ul4 7 7 7 $E 7 7 7
FHS 2ul4 7 7 7 7 $E 7 7
&HS 2ul4 7 7 7 7 7 $E 7
>$HS 2ul4 7 7 7 7 7 7 $E
Reacti"o de glucosa) ml $.E $.E $.E $.E $.E $.E $.E
1. Me0clar. !ncu+ar 6OR C I >HS o $H minutos a 3R am+iente
$. =eer D.5. en el es*ectro(ot#metro a EHE nm? (rente al B=
CALCUL/- Haciendo uso del (actor de cali+raci#n eI*resar la glucosa en mgBdl
VN M .0 - ))0 m*@d+
EKPERI!EN% 2
8ara determinar la *resencia de glucosa en orina? seguir el siguiente esquema)
3u+o NR >
5rina H.E
React. Benedict. $.H
1. Me0clar. Colocar a >HHR C I ES.
$. .n(riar 2 :ielo4. 5+ser"ar la (ormaci#n de *reci*itado.
IN"R!E PRAC%ICA NJ 3
Nom+re del 'lumno)777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777
ru*o) 777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777 Fec:a) 777777777777777
CURVA DEL %/%/G/
I. ra(icar mgBdl de glucosa "s tiem*o 2min4 de un sujeto normal y un dia+,tico.
II. Correlacionar la cur"a y la *resencia o ausencia de Cu$5 en la orina corres*ondiente? con su tasa m1Iima de
rea+sorci#n renal.
!!!. Comentario
777777777777777777777777777777777777777777777777777777777 7777777777777777777777777777777777777 77777777
Glucosa
mg | dl
Tiempo : minutos
7ACIDSIS DIAFE%ICA
.l sujeto dia+,tico se caracteri0a *or *resentar alteraci#n del meta+olismo de los car+o:idratos? *rotenas y de los l*idos. =a
li*#lisis *roduce una ele"aci#n de los 1cidos grasos li+res y consecuentemente el incremento de cuer*os cet#nicos. =a
cetonemia ocasiona una disminuci#n del *H sanguneo lo cual ocasiona una disminuci#n de la concentraci#n del HC567
sanguneo. 2 acidosis dia+,tica4
DE%ER!INACICN DEL FICARFNA%
"UNDA!EN%$
.l C53H s,rico o *lasm1tico es neutrali0ado con HCl des*rende C5$. .l 1cido que no reacciona se determina a tra",s de una
titulaci#n con Na5H? o+teni,ndose *or di(erencia la concentraci#n de HC53

PRCEDI!IEN%
<e usa suero o *lasma o+tenido en anaero+iosis ? em*leando aceite mineral en el momento de su o+tenci#n.
NEU%RALIPACIN DEL FICARFNA%
Colocar en un +eac;er o matra0 los siguientes com*onentes)
a4 E ml de HCl H.H>N
+4 > ml de suero # *lasma
c4 > gota de alco:ol ca*rlico.
d4 'gitar sua"emente *or rotaci#n *or $T
e4 !ncu+ar >ET a 6ORC
(4 'Gadir $H ml agua destilada :er"ida y (ra.
g4 'Gadir 6 gotas del colorante (enosul(ont:aleina28<84.
%I%ULACIN
/sando una +ureta? agregar soluci#n de Na5H H.H> N :asta que el color del colorante cam+ie de color amarillo2*:
F.P4 al rosado2*: P.$4
EKPRESIN
Calcular los m .qB= del sujeto normal y com*ararla con un sujeto dia+,tico descom*ensado
VNM 23-(2 m E>@L
CE%NURIA
"UNDA!EN%
=a *resencia de cuer*os cet#nicos se determina *or el test de Rot:era? (rente al reacti"o de nitro*rusiato de Na
(orma un anillo *Cr*ura roji0o.
8R5C.D!M!.N35
.n un tu+o de *rue+a colocar
a4 > ml orina
+4 > gr de <5%2NH%4$
c4 6 gotas de nitro*rusiato de Na al >HM
d4 Me0clar
e4 > ml de NH% 25H4 en 0ona
5+ser"ar)
'*arici#n de un anillo *Cr*ura o morado L 2N4
IN"R!E DE PRAC%ICA N/ .
Nom+re del alumno ......................................................................................
ru*o ..............................................
DE%ER!INACICN DE FICARFNA%
a4 Calcule los m.qB= de HC576 del sujeto normal
+4 Calcule los m.qB= de HC576 del sujeto D.M.
c4 Com*are e inter*rete los resultados.
DE%ER!INACIN DE CE%NURIA
C!EN%ARI
a4 Descri+a las sustancias que dan el anillo rojo7"iolaceo.
+4 Correlacione la ci(ra de HC576 con la cetonuria del dia+,tico y *H sanguneo.
777777777777777777777777777777777777777777777777777777777 7777777777777777777777777777777777777 77777777777
3 PER"IL LIPIDIC D RIESG CRNARI
=a en(ermedad cardiaca coronaria 2 ..C.C.4 sigue siendo la *rinci*al causa de mor+ilidad *rematura. /n (actor de riesgo
im*ortante es el incremento del colesterol *lasm1tico. <in em+rago el colesterol *or si mismo no es un elemento de *redicci#n
en el *aciente indi"idual. 5tros *ar1metros li*dicos como el HD= y triglic,rido tam+i,n son necesarios *ara cuanti(icar el riesgo
de .CC con mayor *recisi#n .
'*licando la (ormula de Fride9ald *odemos calcular las otras li*o*rotenas s,ricas V=D= y =D= que com*letan la in(ormaci#n de
*redicci#n de alteraci#n "ascular.
FEE%IV
a4 Determinar la concentraci#n de colesterol total ?triglic,rido ? HD=? =D= y V=D=.
+4 Determinar el RC a tra",s del *er(il li*dico 2 segCn Castelli 4
DE%ER!INACIN DE CLES%ERL %%AL
"u'dame't#
.l colesterol se determina *or acci#n de la en0ima colesterol ,ster :idrolasa y colesterol oIidasa. =a *rimera li+era el colesterol
de los esteres de colesterol? y la segunda oIida el colesterol li+re *roduci,ndose *er#Iido de :idrogeno? el cual en *resencia de
la en0ima *eroIidasa reacciona con el sistema cromog,nico dando origen a un com*uesto coloreado que a+sor+e EHEnm.
Colesterol ester CEI Colesterol N 1cidos grasos
Colesterol N 5$ CID Colest7%7en767ona N H$5$
$H$5$ N %7''8 N *7HB' PAP Com*. Coloreado N %H$5
3u+o NR Blanco <tandard Muestra > Muestra $
<t7Colesterol) $HH mgBdl 7 6H ul 7 7
<uero Q8+ 7 7 6H ul 6H ul
Reacti"o Color 6.H ml 6.H ml 6.H ml 6.H ml
Me0clar. !ncu+ar >H minutos a 6ORC o $H minutos a 3Ram+iente
=eer en es*ectro(ot#metro el <t y 8+ (rente al B= a EHE nm.
E26resi4'
Haciendo uso del (actor de Cali+raci#n? eI*resar el colesterol en mgBdl )
VN M )30 - 200 m* @ d+
DE%ER!INACIN DE %RIGLICERIDS
"u'dame't#
=os triglic,ridos *resentes en la muestra? segCn las reacciones aco*ladas descritas a continuaci#n? son un com*lejo coloreado
que se cuanti(ica *or es*ectro(otometra.
3riglic,ridos N H$H +i6asa licerol N 1cidos grasos
licerol N '38 G+icer#+-Hi'asa licerol7678 N 'D8
licerol Q 6 Q (os(ato N 5$ GP Di:idroIiacetona (os(ato N H$5$
$H$5$ N %7aminoanti*irina N %7cloro(enol Per#2idasa Quinonaimina
Es>uema
3u+o NR Blanco <tandard Muestra > Muestra $
<t73riglic,rido) $HH mgW dl 7 6H ul 7 7
<uero 78+ 7 7 6H ul 6H ul
Reacti"o Color 6.H ml 6.H ml 6.H ml 6.H ml
'gitar. !ncu+ar >H minutos a 6ORC o $H minutos a 3R am+iente
=eer en es*ectro(ot#metro el <t y 8+ (rente al B= a E$H nm.
E26resi4'
Haciendo uso del (actor de Cali+raci#n? eI*resar los triglic,ridos en mgBdl )
VN M 30 - 200 m* @ d+
DE%ER!INACIN DE CLES%ERL - IDL
"u'dame't# de+ !Rt#d#
.l HD= 7 Colesterol es o+tenido *reci*itando selecti"amente las li*o*otrenas =D= y V=D=? quedando el *rimero en soluci#n.
.l HD= 7 Colesterol en soluci#n se determina *or acci#n de las en0imas Colesterol ester :idrolasa y Colesterol oIidasa. =a
*rimera li+era el colesterol de los ,steres de colesterol? y la segunda oIida el colesterol li+re? *roduci,ndose *er#Iido de
:idr#geno? el cual en *resencia de la en0ima *eroIidasa reacciona con el sistema cromog,nico dando origen a un com*uesto
coloreado que a+sor+e a EHE nm.
Colesterol ester C.H Colesterol N 1cidos grasos
Colesterol N5$ CH5D Colest7%7en767ona N H$H$
$H$5$ N %7''8 N *7HB' 8'8 Com*. Coloreado N %H$5
%Rc'ica de Preci6itaci4'$
'gregar en un tu+o de centr(uga H.E ml de reacti"o *reci*itante y H.$ ml de muestra? me0clar y es*erar >E minutos a
tem*eratura am+iente. Centri(ugar >E minutos a 6HHH r.*.m. o 6 minutos a >H.HHH r.*.m
Colorimetra.7
==e"ar el reacti"o colesterol CH5D7 8'8 a la tem*eratura que se reali0ara el ensayo.
3u+o NR Blanco <tandard
Muestra >
Muestra $
<o+renadante 2ml4 7 7
H.6H
H.6H
<tandard 2ml4 7 H.H6
7
7
Reacti"o 2ml4 6.HH 6.HH
6.HH
6.HH
Me0clar e incu+ar >H minutos a 6OR o $H minutos a tem*eratura am+iente 2$H a $ER C4. =eer las a+sor+ancias a EHE nm.
lle"ando a cero el es*ectro(ot#metro con el +lanco del reacti"o. .l color resultante es esta+le *or lo menos 6H minutos.
C+cu+#s/-
HD=7Colesterol ) 2mgM4LF.D. I D.5. 8+
FD LOF.EBD.5 standard
Ecuaci4' de "riedeAa+d )
V=D= 2mgBdl4 L 3
E
.sta (#rmula es "1lida cuando los 3g son menores de %HH mgBdl.
-ser&aci#'es
- Des*u,s de centri(ugar? el so+renadante de+e ser claro.
LDL-C (mg/dl)=C.Tot.(mg/dl)-HDL(mg/dl)-VLDL. (mg/dl)
- <ueros con concentraciones de triglic,ridos su*erior a >HHH 2mgBdl4 de+en diluirse con suero (isiol#gico antes de
*reci*itar. .l resultado o+tenido se multi*lica *or el (actor de diluci#n.
I'ter6retaci4' de+ Per9i+ Li6dic# !'im#
LIPID
<m*@d+=
DESEAFLE RIESG P%ENCIAL AL% RIESG
C% S 200 200-2(9 TM 200
LDL S )(0 )(0-),9 TM )30
IDL $ I#m $ T (, 2,-(, S 2,
!u8 $ T 0, 00-0, S 00
%G S 200 T 200 T 200 <U=
2^4 <i se acom*aGa de HD= _ 6E mgBdl o relaci#n C3BHD= `E
Nom+re del 'lumno)77777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777
ru*o) 77777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777 Fec:a) 777777777777777
'. Calcular ? en el sujeto normal y *atol#gico ? la concentraci#n en mgB dl del )
C 3 )
3 )
H D = )
= D = )
V=D= )
B. Calcular el R. C.)
C3BHD= )
=D=BHD= )
C. Comentario
777777777777777777777777777777777777777 7777777777777777777777777777777777777777777777777777777777 77777777777777
9IC%ERICIA E IIPERFILIRRUFINE!IA
=as alteraciones del Meta+olismo de la +ilirru+ina *ueden e"aluarse :aciendo su dosaje en suero o *lasma sanguneo en (orma
(raccionada. Dic:as alteraciones se de+en a)
>. 7 'umento de la *roducci#n del *igmento 2:em#lisis) incremento de la destrucci#n de los :emates circulantes4
$. 7 Disminuci#n de la ca*taci#n :e*1tica de la +ilirru+ina 2medicamentosa? sndrome de il+ert? d,(icit de glucoronil
trans(erasa4.
6. 7'lteraci#n de la conjugaci#n :e*1tica? disminuci#n de la acti"idad de la glucoronil trans(erasa Q ictericia neonatal 2ictericia
(isiol#gica del reci,n nacido4.
%. 7 .Icreci#n de(iciente 2o+strucci#n intra:e*1tica o eItra:e*1tica Q c1lculos4.
8or Cltimo *ermite el estudio de las en(ermedades :e*atocelulares) :e*atitis o cirrosis? en(ermedades en las cuales suelen
estar inter(eridas todos los *asos del meta+olismo de la +ilirru+ina 2ca*taci#n conjugada y eIcreci#n4.
!Rt#d# de !a++#5 5 E&e+5'
"u'dame't#$
=a +ilirru+ina reacciona es*ec(icamente con el 1cido sul(anlico dia0otado *roduciendo un *igmento color rojo Q "iol1ceo
2a0o+ilirru+ina4 que se mide (otocolorim,tricamente a E6H nm.
<i +ien la +ilirru+ina conjugada 2directa4 reacciona directamente con el dia0orreacti"o? la +ilirru+ina no conjugada 2indirecta4
requiere la *resencia de un desarrollador acuoso que *osi+ilite su reacci#n. De (orma tal que? *ara que reaccione la +ilirru+ina
total 2conjugada y no conjugada4 *resente en la muestra? de+e agregarse +en0oato de ca(ena al medio de reacci#n.
VALRES NR!ALES$
F% M 0/( N )/) m*@d+
FD <C#'8u*ada= M 0/) N 0/0 m*@d+
FI M 0/2 N 0/. m*@d+
PRCEDI!IEN%$
8re*arar <t. $mgM .D.5. st LH.H&
F+a'c# Directa %#ta+
!uestra $HH ul $HH ul $HH ul
A*ua Desti+ada $.% ml $.% ml 7
Desarr#++ad#r 7 7 $.% ml
Reacti&# su+9a'+ic# $HH ul 7 7
Dia:#rreacti&# 7 $HH ul $HH ul
Me0clar *or in"ersi#n sua"e e !ncu+ar *or E minutos a 3R am+iente. =eer las a+sor+ancias a E6Hnm? lle"ando a cero el
instrumento con un +lanco de agua destilada. =a +ilirru+ina directa de+e leerse eIactamente a los $ minutos..
C'=C/=5<)

"C M C#'c/ St
A-s St/
F% M "C 2 <A-s %#ta+ N A-s F+a'c#= M m*@d+
FD M "C 2 <A-s Directa N A-s F+a'c#= M m*@d+
FI M F% N FD M m*@d+
Nom+re del 'lumno) 77777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777
ru*o) 77777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777 Fec:a) 777777777777777
>. D.3.RM!N'C!5N D. B!=!RR/B!N' D!R.C3' . !ND!R.C3')
Fundamento de la Bilirru+ina Directa y Bilirru+ina !ndirecta
C+cu+#$ Determine los mgBdl de Bilirru+ina 3otal? Bilirru+ina Directa y Bilirru+ina !ndirecta en cada sujeto.
I'ter6retaci4'$ Correlacione los "alores de Bilirru+ina con el uro+ilin#geno y uro+ilinas (ecales y urinarios.
--------------------------------------- ---------------------------------------------------------- --------------
10%RANSA!INACICN
=a reacci#n de transaminaci#n consiste en la trans(erencia de un gru*o amino de un amino1cido a un ceto1cido con la
consiguiente (ormaci#n de nue"os amino1cidos y ceto1cidos. .l o+jeti"o es entender como el organismo a tra",s de este
*roceso los car+o:idratos se trans(orman en amino1cidos o como los amino1cidos se intercon"ierten.
=as en0imas que catali0an estas reacciones se llaman transaminasas? que tienen como coen0ima al (os(ato de *iridoIal 2BF4.
=a glut1mico *irC"ico y oIal7 ac,tico son de im*ortancia en el diagn#stico de en(ermedades :e*1ticas y cardiacas toda "e0 que
se *roduce aumento en el torrente circulatorio tras la muerte celular del #rgano.
CI CI
V V
CI2 CI2
V V
CI2 CI2
V V
CI-NI2 CM
V V
Ac/ G+utmic# CI GLU%A!IC CI Ac/ Cet#*+utarat#
P0F3
CI
KALACE%ICA
CI
V V
CI2 CI2
V V
CM CMNI2
V V
Ac/ 2a+acRtic# CI CI Ac/ As6rtic#
1) R.'CC!5N D. 3R'N<'M!N'C!5N
8ara demostrar la reacci#n de la transaminaci#n? se eItraer1 la en0ima de :omogeni0ado de :gado de *ollo y se a*licar1 a el
siguiente esquema )
%u-# NJ ) ) 2 ( 0
C.35=/3'R'35 H.$ M 2ml4 H.6 H.6 777 777
'='N!N' H.$ M 2ml4 H.6 H.6 777 777
8!R/V'35 H.$ M 2ml4 777 777 H.6 H.6
=/3'M'35 H.$ M 2ml4 777 777 H.6 H.6
'R<.N!35 H.$ M 2ml4 H.% H.% H.% H.%
.Na!M' 'C3!V' H.$ M 2ml4 H > H >
.Na!M' !N'C3!V' H.$ M 2ml4 > H > H

!ncu+ar a 6OR I %Emin . 'gregar F ml. alco:ol etlico en cada tu+o centri(ugar y usar los so+renadantes *ara la cromatogra(a.
Demostrar si :u+o transaminaci#n? utili0ando el *roceso de cromatogra(a ascendente.
2) .V!D.NC!' D. =' 3R'N<'M!N'C!5N 85R CR5M'35R'F!' )
Cr#mat#*ra9a asce'de'te e' 6+acas c#' Si+ica*e+$
P#r cr#mat#*ra9a e' ca6a 9i'a se e'tie'de +a tRc'ica ca6a: de se6arar +#s c#m6#'e'tes de u'a muestra e'tre
d#s 9ases7 u'a m4&i+7 >ue sue+e ser +>uida 5 #tra estaci#'aria7 >ue 6uede ser +>uida # s4+ida7 5 >ue est
dis6uesta c#m# u'a ca6a de materia+ 6#r#s# de u' es6es#r determi'ad#7 c#+#cada s#-re u' s#6#rte 6+a'# i'erte7
de &idri# # de a+umi'i#/ D#s 6ri'ci6i#s 9isic#->umic#s 6artici6a' e' esta se6araci4'$ 6artici4' 6#r s#+&e'te 5
ads#rci4'/
L#s ami'#cid#s A+a'i'a7 Ac/ As6rtic#7 5 Ac/ G+utmic#7 se &a' a se6arar e' 9u'ci4' de sus di9ere'tes
s#+u-i+idades e'tre +a 9ase m4&i+ +>uida7 c#'stituida 6#r 6r#6a'#+$a*ua <10@20=7 5 +a 9ase estaci#'aria7 tam-iR'
+>uida a+ estar c#'stituida 6#r e+ a*ua ads#r-ida 6#r e+ materia+ s4+id# de +a ca6a 9i'a7 e' este cas# ce+u+#sa/
P#r ta't#7 e+ 9u'dame't# de +a se6araci4' im6+ica >ue +#s ami'#cid#s cu5a cade'a +atera+ <R= te'*a u' carcter
ms a6#+ar7 te'dr' te'de'cia a des6+a:arse c#' +a 9ase m4&i+7 mie'tras >ue +#s ami'#cid#s >ue sea' 6#+ares7
5a sea' c#' car*a # si' car*a7 ser' rete'id#s 6#r +a 9ase estaci#'aria/ E++# es as7 6#r>ue +a 9ase m4&i+ est
9#rmada 6#r s#+&e'tes >ue s#' ms a6#+ares >ue e+ a*ua7 >ue es e+ s#+&e'te de +a 9ase estaci#'aria/
2/ WC4m# rea+i:ar u'a cr#mat#*ra9a e' ca6a 9i'aX

Primera eta6a$ A6+icaci4' de +as muestras a a'a+i:ar/

Se c#+#ca +a 6+aca e'cima de +a mesa7 5 c#' u' +6i: se tra:a u'a +'ea mu5 dR-i+ a u'#s )7, cm de+ -#rde i'9eri#r
de +a 6+aca7 6r#cura'd# da?ar +# m'im# 6#si-+e +a ca6a de ce+u+#sa 5 si' t#car +a su6er9icie de ce+u+#sa/
E' +a +'ea se se?a+a' dR-i+me'te cuatr# 6u't#s7 distri-uid#s e>uitati&ame'te a +# a'c;# de +a 6+aca/
E' cada 6u't# de e++#s se a6+ica cada u'# de +#s muestras$ 6atr4' # sta'dares 5 +as muestras 6r#-+emas c#'
6r#-a-+e tra'sami'aci4'/ La a6+icaci4' se rea+i:a media'te ca6i+ares/

La se*u'da 6recauci4' a c#'siderar es +a de '# c#'tami'ar +as dis#+uci#'es de +#s ami'#cid#s 6atr4' 5 +a
muestra 6r#-+ema/ Para e++#7 se uti+i:a u' ca6i+ar 6ara cada u'# de +as s#+uci#'es a a6+icar/ E+ ca6i+ar se
i'tr#duce e' e+ tu-# de muestra 5 6#r ca6i+aridad &a a asce'der +a muestra a a6+icar/

Se a6+ica e' +a 6+aca u'a *#ta de +a muestra7 6r#cura'd# >ue se e2tie'da +# me'#s 6#si-+e 5 '# da?e +a ca6a/ Se
seca a c#'ti'uaci4' c#' e+ secad#r de aire/ Se a6+ica u'a se*u'da *#ta 5 se &ue+&e a secar/ Esta #6eraci4' se
re6ite 6ara cada u'as de +as tres muestras resta'tes/

Se*u'da eta6a$ E+uci4' de +as muestras/
La cr#mat#*ra9a se rea+i:a e' +a cu-eta # cmara de desarr#++#/ La cu-eta c#'tie'e u' &#+ume' de 9ase m4&i+7
cu5a a+tura de +>uid# de-e de estar siem6re 6#r de-a8# de +a +'ea de a6+icaci4' de +as muestras/

La tRc'ica de e+uci4' >ue se &a a uti+i:ar 6ara +a rea+i:aci4' de +a cr#mat#*ra9a es +a asce'de'te7 6uest# >ue +a
9ase m4&i+ ascie'de 6#r ca6i+aridad 6#r +#s 6#r#s e i'terstici#s de +a ce+u+#sa/
La 6+aca >ue c#'tie'e +as muestras se i'tr#duce e' +a cu-eta/ Se c#+#ca +a ta6a de +a cu-eta 5 se es6era >ue +a
9ase m4&i+ ascie'da 6#r +a ca6a ;asta >ue a+ca'ce u'a a+tura de ;asta u'#s 2-( cm de+ e2trem# #6uest# a +a
6arte sumer*ida/ U'a &e: rea+i:ada +a e+uci4'7 se a-re +a ta6a de +a cu-eta 5 se saca +a 6+aca/

%ercera eta6a$ Secad# 5 &isua+i:aci4' de +#s ami'#cid#s/

I'mediatame'te >ue se ;a sacad# +a 6+aca7 c#' e+ +6i: se marca e' u' -#rde e+ 'i&e+ a+ca':ad#/ Se i'tr#duce
e' +a estu9a dura'te u'#s , mi' 6ara >ue se se>ue/ A c#'ti'uaci4'7 c#' a5uda de u' 6u+&eri:ad#r se r#sea
6#r t#da +a 6+aca e+ re&e+ad#r S#+uci4' de 'i';idri'a 0/)L e' -uta'#+/ Secar 'ue&ame'te 5 #-ser&e +a
&isua+i:aci4' de +#s ami'#cid#s 6atr4' 5 de +a muestra 6r#-+ema >ue se rea+i:a 6#r +a a6arici4' de u'as
ma'c;as de c#+#r 6r6ura7 reacci4' es6ec9ica de+ reacti&# c#' +#s ami'#cid#s/

Calcular los "alores del R(.
R9 M dista'cia <cm= rec#rrid#s 6#r +a susta'cia
dista'cia <cm= rec#rrid#s 6#r e+ s#+&e'te
IN"R!E PRAC%ICA NJ )0
Nom+re del 'lumno) 77777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777
ru*o) 77777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777777 Fec:a) 777777777777777
3R'N<'M!N'C!bN)
Iacie'd# us# de 94rmu+as >umicas7 e26+i>ue e+ 6r#ces# de tra'sami'aci4' ;ec;a e' c+ase/
!edidas de +#s R9 e ide'ti9icaci4' de ami'#cid#s/
Discusi4' 5@# c#me'tari#s
--------------------------------------- ---------------------------------------------------------- --------------

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