Documentos de Académico
Documentos de Profesional
Documentos de Cultura
Guia Practicas Embriologia 2014
Guia Practicas Embriologia 2014
r
:,t
i
'
1 2 3
4 5
1 :
6 7 8 9 10
11 12
13 14
i
19
20
15 16 17
18
21 22 X
y
12 2014-1 GUIA DE PRACTICAS
CARIOGRAMA
Muestra: SANGRE PERIFRICA (Cultivo de Linfocitos)
Tcnica de coloracin: BANDAS GTG (Banda G usando Tripsina y Giemsa)
CARIOTIPO:............................................
Dx. CITOGENETICO:.....................................................................................
------------------------------------------------------ -----------------------------------
1 2 3 4 5
A B
----------------------------------------------------------------------------------------------------------
6 7 8 9 10 11 12
C
--------------------------------------------- --------------------------------------------
13 14 15 16 17 18
D
E
--------------------------- ------------------------------
19 20 21 22
F G
SEXUALES----------------------------------------
UPSMP MEDICINA HUMANA
EMBRIOLOGA HUMANA Y GENTICA BSICA
13 2014-1 GUIA DE PRACTICAS
PRACTICA N 03
D E T E R M I N AC I O N D E L C O RP S
C U L O X
CROMATINA SEXUAL CORPUSCULO DE BARR
I. COMPETENCIAS:
Observa en los ncleos de las clulas epiteliales en Interfase los elementos determinantes del
sexo,
identificando la presencia del cromosoma X en forma de corpsculo de Barr.
Diferencia los ncleos positivos y negativos que le permitan diagnosticar el sexo cromatnico
en la muestra estudiada.
II. GENERALIDADES
La masa cromatnica que se encuentra en las clulas de los mamferos hembras incluyendo a la
especie humana, con excepcin de la zarigeya, constituye la CROMATINA SEXUAL, CUERPO
DE BARR, O CORPSCULO X Puede encontrarse en diferentes tipos de clulas, pero debido a
la sencillez del procedimiento y a la rapidez de la tcnica empleada se le estudia en clulas
epiteliales de la mucosa oral.
En las clulas epiteliales se encuentra ADHERIDA A LA MEMBRANA INTERNA DEL
NCLEO COMO DESCANSANDO EN ELLA. Su tamao normal vara de 0.7 a 1.2 micras ().
Su forma puede ser triangular semi-esfrica, alargada o circular. Su nmero por ncleo vara
de 0-4 corpsculos.
En las clulas nerviosas se encuentra ubicada al centro del ncleo.
En los neutrfilos segmentados se encuentra a manera de palillo de tambor
La regla para determinar el nmero de cromosomas X puede indicarse en la siguiente frmula
NCS = NCX - 1
El nmero de cromatina sexual es igual al nmero de cromosomas X menos uno
Esto se puede observar en el siguiente cuadro
FENOTIPO
MASA
CROMATINICA
N DE
CORPUSCULOS
POR NUCLEO
COMPLEMENTO
CROMOSOMICO
Varn normal
0
46,
Sndrome de Turner
0
45, X0
Varn doble Y
0
47, XYY
Hembra normal
1
46, XX
Sndrome Klinefelter
1
47, XXY
Sndrome Triple X
2
47, XXX
Sndrome Tetra X
3
48, XXXX
14 2014-1 GUIA DE PRACTICAS
Sndrome Penta X
4
49, XXXXX
UPSMP MEDICINA HUMANA
EMBRIOLOGA HUMANA Y GENTICA BSICA
15 2014-1 GUIA DE PRACTICAS
Si el corpsculo de Barr es pequeo, es decir menor de 0.7; o es grande es decir mayor de 1.2,
dar lugar a anomalas estructurales del cromosoma X como se observa en el siguiente cuadro:
FENOTIPO
MASA
CROMATINICA
TAMAO DEL
CORPUSCULO
COMPLEMENTO
CROMOSOMICO
Delecin
Formacin de
anillo
Pequeo
46, X, del (X)(p)
46, X, del(X)(q)
46, X, i(X)(p)
46, X, r(X)
Isocromacin
Duplicacin
Grande
46, X, i(X)(q)
46, X, dup(X)(q)
Para el diagnstico debe examinarse por lo menos 100 ncleos por lmina y se obtendr el promedio
expresado en porcentaje.
Para la tcnica del Carbol-fucsina, de 0-5% es negativo y ms de 5% es positivo.
III. MATERIALES:
Lminas o porta-objetos,
Laminillas o cubre-objetos
Lpiz Markin o marcador de lminas, Esptulas de madera o bajalenguas.
Alcohol eter al 50%,
Batera completa de coloracin,
Blsamo del Canad,
Aceite de inmersin,
Microscopio con lentes de inmersin.
IV. PROCEDIMIENTO
1. OBTENCIN DE LA MUESTRA:
Limpiar las lminas y marcarlas con lpiz de vidrio.
Realizar el raspado de las clulas epiteliales de la mucosa oral (carrillos derecho e
izquierdo).
Hacer el extendido de las muestras en las lminas.
Fijarlas en alcohol-ter al 50% durante 5 a 10 minutos.
2. COLORACIN: METODO DE CARBO-FUCSINA
Hidrolizar las lminas con solucin de cido clorhdrico al 50% durante 10 minutos.
Lavar con agua destilada o agua corriente.
Colorear con carbol-fucsina durante 5 a 10 minutos.
Diferenciar en alcohol absoluto de 95% (aproximadamente 10 minutos).
Cambiar a alcohol absoluto por 1 minuto.
Clarificar con Xilol (2 cambios)
Montar en Blsamo de Canad
3. LEC TURA Y DIAGNOSTICO:
3.1. OBSERVAR A 10X: Ubicar la muestra en la lmina y observar estructuras puntiformes
de color fucsia o lila.
3.2. OBSERVAR A 40X: Diferenciar los ncleos buenos de los inadecuados e identificar el
corpsculo X si es posible.
3.3. OBSERVAR A 100X
Diferenciar los ncleos que presentan corpsculo de Barr (positivos) y los
ncleos sin corpsculo (negativos).
Observar la morfologa y el tamao de los corpsculos.
Realizar el conteo de por lo menos 100 ncleos buenos, indicando los
porcentajes analizados, luego obtener el promedio total.
Diagnosticar el sexo cromatnico, segn los criterios establecidos.
Esquematizar sus observaciones en el microscopio
UPSMP MEDICINA HUMANA
EMBRIOLOGA HUMANA Y GENTICA BSICA
15 2014-1 GUIA DE PRACTICAS
V. CUESTIONARIO:
1. Defina: Cromatina Eucromatina Heterocromatina Cromatina positiva Cromatina negativa Clava o
palillo de tambor Heteropicnosis Isopicnosis
2. Explique la hiptesis de Mary Lyon: Concepto, fundamento, propuesta resmen y conclusiones
3. Cules son los factores que alteran la cantidad y el tamao normal del corpsculo de Barr?
4. En qu da de formacin y desarrollo embrionario se puede observar la cromatina sexual?
VI. BIBLIOGRAFA:
CUMMINGS, HERENCIA HUMANA.
EGOZCUE, GENETICA MEDICA.
JORDE-CAREY-W HITE. GENETICA MEDICA
SOLARI, GENETICA HUMANA: FUNDAMENTOS Y APLICACIONES EN MEDICINA
LISKER-ARMENDARES. INTRODUCCION A LA GENETICA HUMANA.
16 2014-1 GUIA DE PRACTICAS
CROMOSOMAS HUMANO: CARIOTIPO MICROSCOPIA
COMPETENCIAS:
1. Reconoce bajo el microscopio los elementos responsables de la herencia: LOS CROMOSOMAS
EN LOS CULTIVOS CELULARES IN VITRO (CULTIVO DE LINFOCITOS) cuando las clulas
estn en Interfase y en divisin (metafase).
2. Comprueba el nmero de cromosomas en la especie humana diferencindolos por grupos (A, B,
C, D, E, F, G Y SEXUALES) mediante el MTODO CONVENCIONAL que podran
corresponder a anomalas numricas.
1. Observa los cromosomas mediante el MTODO DE BANDAS GTG (bandeo G, Tripsina
Giemsa) para identificar los cromosomas y poder averiguar anomalas estructurales.
GENERALIDADES
La clula en divisin est formados por elementos en form a de varillas llamados cromosomas, que
viene de Chroma = color y Soma = cuerpo. Es decir que se tien intensamente con los colorantes
bsicos como la fucsina, orceina, hematoxilina, etc.
Cada especie animal o vegetal posee un complemento cromosmico propio y caracterstico en cuanto
al nmero y forma de los cromosomas. El ser humano tiene 46 cromosomas.
PROCEDIMIENTO
Lmina N 1
Mtodo Convencional (Coloracin Giemsa).
Lminas preparadas con cultivo de linfocitos en sangre perifrica.
OBSERVAR A 10X:
Corpsculos pequeos de forma esfrica, intensamente teidos de color fucsia o lila
(linfocitos en Interfase)
Elementos puntiformes y/o alargados e intensamente coloreados formando grupos
(linfocitos en divisin o metafases).
Esquematizar sus observaciones.
Linfocito en interfase
Linfocito en divisin
OBSERVAR A 40X:
Realizar el recuento de los cromosomas en cada metafase.
Identificar los cromosomas reconociendo la morfologa de cada uno de ellos
Esquematizar sus observaciones.
UPSMP MEDICINA HUMANA
EMBRIOLOGA HUMANA Y GENTICA BSICA
17 2014-1 GUIA DE PRACTICAS
OBSERVAR A 100X:
Cromosomas en metafase identificando sus cromtide y la posicin de sus
centrmeros.
Identificar los cromosomas por grupos (A, B, C, D, F, G y sexuales).
Esquematizar sus observaciones.
Brazo p
Centrmero
Brazo q
Cromtide
Grupo G
Grupo A
Grupo D
18 2014-1 GUIA DE PRACTICAS
Lmina N 2
Mtodo de Bandeo: Bandas GTG
Lminas preparadas con cultivo de linfocitos en sangre perifrica.
Seguir el mismo procedimiento realizado en la lmina N 1 observando detenidamente a 10X y a 40X.
Cromosoma Metacntrico
Cromosoma Acrocntrico
Cromosoma Submetacntrico
OBSERVAR A 100X:
Cromosomas de los grupos antes mencionados.
Diferenciar las bandas en cada uno de los cromosomas buscando sus pares homlogos.
Comparar cada uno de los cromosomas y tratar de identificarlos con la ayuda del patrn de bandas
que se presentan en la hoja adjunta.
Esquematizar los cromosomas 1, 5, 13, 16, 19, 21 y el cromosoma sexual X.
Cromosoma 21
Cromosoma 13
Cromosoma 1
UPSMP MEDICINA HUMANA
EMBRIOLOGA HUMANA Y GENTICA BSICA
19 2014-1 GUIA DE PRACTICAS
PREGUNTAS
1. Defina los siguientes conceptos:
Sitios frgiles - Polimorfismo de los satlites
Heteromorfismo cromosmico - Polimorfismo del cromosoma Y
Heterocromatina constitutiva - Gaps
Microncleos
2. Explique cul es el fundamento y para qu se usan las tcnicas y marcadores moleculares de:
- PCR - RFLP - SSR - AFLP
- Microarrays - Souther Bloot - FISH
BIBLIOGRAFIA
CUMMINGS, MICHAEL. Herencia Humana.
DE ROBERTIS, E. Biologa Celular y Molecular.
GROUCHY-TURLEAU. Atlas de Enfermedades Cromosmicas
LISKER-ARMENDARES. Introduccin a la Gentica Humana.
MULLER-YOUNG. Gentica Mdica Emerys
SANCHEZ CASCOS Y COL Gentica al da Editorial Labor.
THOMPSON, THOMPSON. Gentica Mdica.
N 04
20 2014-1 GUIA DE PRACTICAS
M ARCADORES MOLECULARES PARA DETERMINAR VARIANTES INSERCIN /DELECIN (I/D)
EN EL GEN ECA, ASOCIADO A ENFERMEDADES CARDIOVASCULARES
INTRODUCCIN
El sistema RAS (Renin Angiotensin System) cumple una funcin muy importante en la homeostasis
cardiovascular. La enzima ACE (Angiotensin Converting Enzyme) ECA, cataliza la reaccin del
paso de Angiotensina I a Angiotensina II. La AngII es una potente vasoconstrictiora que ejerce su
influencia sobre el corazn y vasos sanguneos a travs de sus efectos hemodinmicos y celulares
directos. Se ha reportado que la inhibicin farmacolgica de ECA, conduce a la mejora en un grupo
de pacientes con desrdenes cardiovasculares (ej., hipertensin, enfermedades coronarias e
hipertrofia ventricular izquierda). Por ello, el anlisis gentico del polimorfismo de ECA y otros genes
asociados es de suma importancia, ya que conllevara a dilucidar los alelos implicados en dichas
enfermedades. En algunos estudios previos en distintas poblaciones, los individuos con genotipo DD,
tienen una propensin 3-4 veces mayor de sufrir algunas enfermedades cardiovasculares. Sin
embargo esto no sucede en otras poblaciones, por ello se est caracterizando la distribucin de los
alelos de ECA en pacientes y controles de la poblacin peruana.
OBJETIVO
Identificar los genotipos Insercin /Insercin (I/I), Insercin/Delecin (I/D) y Delecin/Delecin (D/D)
en muestras de sangre de algunos donantes.
M ATERIALES
.Muestras de sangre (<1ml)
.Guantes descartables
.Agarosa para preparar geles al 1%
.Buffer de carga (azul de bromofenol, xylene cyanol, sucrosa)
.Buffer TBE 1X (Tris base, Acido brico, EDTA)
.Solucin de bromuro de etidio (EtBr)
.Micropipetas de 10 ul
.Gradillas para tubos eppendorf de 1.5ml y 0.2ml
.Equipo de electroforesis horizontal, fuente de pode, temociclador
.Transiluminador UV
PROCEDIMIENTO
La extraccin de ADN de sangre perifrica comprende el lavado de las muestras con TE 20:5
(Tris- EDTA), lisado con lauryl sarcosine, digestin proteica con Proteinasa K, precipitacin del
ADN con sales y etanol
Se procede a la amplificacin por PCR de un sector del Intrn 16 del gen ECA (locus en 17q23).
La tcnica de PCR se basa en la aplicacin de la enzima Taq polimerasa que sintetiza las
cadenas complementarias del ADN, la misma que se inicia a partir de los oligodesoxinucletidos
(primers F y R) en el rea ESPECIFICA prevista a ser amplificada. El material bsico para una
reaccin de PCR incluye: desoxinucletidos (dNTPs: A,C,G,T), un buffer, cloruro de magnesio,
agua ultrapura, primers, enzima (Taq polimerasa) y el ADN de cada muestra. Los dNTPs hibridan
al ADN cuando ste se denatura y las cadenas se separan. Las cadenas madre sirven de molde
o matriz para que se sinteticen nuevas cadenas a temperaturas especficas de cada reaccin.
Se cumplen tres etapas o ciclos:
denaturacin del ADN (a 94C)
hibridacin de los primers (a 58C)
elongacin de la cadena de AND por accin de la Taq (72C)
Estos ciclos se repiten por 30 veces o ms, logrando as la amplificacin de un fragmento
determinado de ADN que despus se visualiza corriendo la reaccin (electroforesis horizontal a 100
voltios) en geles de agarosa al 1%.
- Tincin de geles en la solucin de bromuro de etidio.
- Se visualiza los productos de PCR en el transiluminador.
UPSMP MEDICINA HUMANA
EMBRIOLOGA HUMANA Y GENTICA BSICA
21 2014-1 GUIA DE PRACTICAS
Fig. 2 Esquema del gen ECA y de la regin polimrfica (delecin insercin)
El polimorfismo consta de dos fragmentos allicos: uno de 490 bp (pares de bases) denominado
Insercin (I) y otro de 190 bp denominado delecin (D)
Los posibles genotipos que se pueden hallar en las muestras seran:
I/I = homocigoto para la Insercin
I/D = heterocigoto (insercin/delecin)
D/D = homocigoto para la delecin
PREGUNTAS
1. Defina polimorfismo gentico
2. En la prctica realizada, identifique los genotipos de cada muestra: I/I, I/D D/D
3. Segn lo explicado, qu paciente(s) analizados en la prctica estaran en mayor riesgo
de desarrollar una enfermedad cardiovascular?
4. D otro ejemplo de enfermedad gentica a sociada a un polimorfismo