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INTRODUCCIN
La fabricacin de medicamentos estriles est
sujeta a requisitos especiales para minimizar los riesgos
de contaminacin microbiana, de partculas y de pir-
genos (NCF, 1999). Esta fabricacin debe realizarse en
zonas limpias. Las diversas operaciones de preparacin
de los componentes, preparacin del producto y llenado
deben realizarse en zonas separadas dentro de la zona
limpia (EPE, 1992).
En nuestro laboratorio farmacutico, la prepara-
cin de componentes se realiza en cabina de flujo lami-
nar vertical, en donde se consigue una concentracin de
partculas en el aire controlada (Grado A), tal como se
indica en la Tabla 1.
En la cabina de flujo laminar, el aire ultrafiltrado
hace un barrido total del rea de trabajo ya que se
desplaza siguiendo unas lneas de flujo paralelas y a
velocidad uniforme con lo cual desplaza a todos los
contaminantes.
El correcto mantenimiento y control de la cabina
de flujo laminar es fundamental para garantizar la au-
sencia de contaminacin en los componentes utilizados
en la preparacin de los medicamentos, y es una parte
del programa de Garanta de Calidad de nuestro labora-
torio farmacutico (VPP, 1990).
MATERIAL Y MTODOS
En la gua ENAC (1997) se indica que en las
cabinas de flujo laminar se debe verificar peridica-
mente la velocidad del aire, el estado de los filtros y
debe realizarse un control microbiolgico de esterilidad
del aire. En la Tabla 2 se muestran las verificaciones y
mantenimientos peridicos recomendables en una cabi-
na de flujo laminar.
Cabina de flujo laminar
En nuestra instalacin disponemos de una cabi-
na de flujo laminar vertical AV 30/70 (TELSTAR).
VERIFICACIONES Y MANTENIMIENTOS EN
CABINAS DE FLUJO LAMINAR
Miguel Cantero
Esta cabina est equipada con ventiladores centrfugos
de alta eficacia con sistema automtico de regulacin
de velocidad. El aire impulsado por estos ventiladores
es descargado en una cmara o plnum y a travs del
filtro absoluto HEPA (High Efficiency Particulate Air)
es filtrado y en rgimen laminar entra en la zona de
trabajo, obtenindose el Grado A (NCF, 1999).
Las cabinas de flujo laminar vertical (modelos
30/70) proporcionan una extraccin del 30% de volu-
men de aire y un reciclado del 70%, creando depresin
en la zona de trabajo y ofreciendo as elevada protec-
cin al operador y al medio ambiente, adems de total
proteccin al producto. Estas cabinas incorporan filtro
absoluto HEPA en la extraccin (Figura 1).
Figura 1. Funcionamiento de la cabina
de flujo laminar AV 30/70
Ensayo de integridad de filtros HEPA
El objetivo de este ensayo es demostrar la ausen-
cia de fugas puntuales en el papel filtrante, la estanquei-
dad de la junta elstica entre el filtro y el marco de
35
ajuste y del medio filtrante con la estructura del filtro.
Para realizar este ensayo se necesita un equipo genera-
dor de aerosol y un fotmetro detector (TDA 2G aero-
sol photometer de ATI).
- Con la cabina de flujo laminar funcionando se
realiza el siguiente proceso:
- Inyectar aerosol a la corriente de aire antes del
filtro (plenum) y ajustar la escala del 100 %
del fotmetro con este aerosol.
- Medir con el fotmetro la concentracin de
aerosol despus del filtro.
- Medir alrededor de toda la periferia del filtro
y rastrear su superficie.
Se permite una fuga al 0.01 % de la concen-
tracin antes del filtro. Tambin se conoce este ensayo
como la prueba del D.O.P (Dioctilftalato monodisper-
sado), haciendo referencia al producto utilizado para
generar un aerosol de tamao de partcula definido.
Ensayo de velocidad y uniformidad del aire
El objetivo es determinar la velocidad promedio
del aire as como el rango de uniformidad a lo largo de
toda la zona laminar. Para ello se necesita un anemme-
tro (EDRA6 100 mm Hd Dual).
Con la cabina de flujo laminar funcionando se
realiza el siguiente proceso:
- Se mide la velocidad en distintos puntos de la
superficie de trabajo y se calcula la media
aritmtica de los valores obtenidos.
- Las medidas se realizan a una distancia aproxi-
mada de 15 cm de los filtros.
La velocidad media del aire de impulsin deber
ser de 0.45 m/s 20 %, y ninguna lectura individual
deber diferir en ms del 20% de la velocidad media.
Contaje de partculas
La finalidad de esta medida es comprobar que se
cumple el grado A en la zona de trabajo. Para ello
necesitamos un contador de partculas (Met One - 3313
de Pacific Scientific).
Con la cabina de flujo laminar funcionando se
realiza el siguiente proceso:
- Se localizan varios puntos de contaje, y se
realizan 3 medidas en cada punto.
- Se coloca la sonda del contador en direccin
del flujo del aire.
El resultado debe ser inferior a 3500 partculas/
m
3
para partculas 0.5 , y ausencia de partculas
para partculas de 5 .
Ensayo de humo
El objetivo es comprobar que la cabina cumple
con el requisito de flujo laminar sin que aparezcan
turbulencias en el flujo de aire, protegiendo as el pro-
ducto, el operario y el ambiente.
Para ello se inyecta humo dentro de la cabina, en
el exterior de la cabina junto al cristal protector y en el
interior de la cabina a unos 5 cm por encima del borde
del cristal protector.
Debe haber ausencia de turbulencias durante el
ensayo, fluyendo el humo de forma laminar.
Control microbiolgico del ambiente
Se realiza el siguiente procedimiento:
- Limpiar todas las superficies internas con un
trapo hmedo que no ceda partculas ni fibras
y desinfectar la superficie de trabajo con eta-
nol de 70%.
- Esterilizar la cabina con la lmpara UV duran-
te 20 minutos con el flujo en marcha.
- Disponer 5 placas Petri con medio de cultivo
no selectivo (por ejemplo columbia agar san-
gre) en los extremos y en el centro de la
cabina.
- Abrir las placas y dejar la tapa superior boca
abajo apoyada sobre el borde de la placa sin
que cubra el medio de cultivo. Dejar las placas
abiertas durante 30 minutos.
- Cerrar todas las placas e incubarlas en posicin
invertida en estufa de cultivo (Estufa Digitronic
de Selecta) a 33 C ( 1 C) durante 72 h.
- Hacer el recuento de colonias en cada placa.
En el recuento de las placas se permite un creci-
miento de 1 ufc por placa o de 5 ufc en la suma de las
cinco placas.
Eficacia de la lmpara UV
Los microorganismos expuestos a radiacin UV
sufren un dao en su material gentico debido a un
proceso de fotolisis, el cual impide la divisin celular y
por tanto el crecimiento de estos microorganismos. La
mxima efectividad de la luz UV para conseguir esta
accin germicida se ha demostrado que ocurre a 265
nm, esta longitud de onda se encuentra en la regin
conocida como Ultravioleta C (200-280 nm).
Las lmparas UV de mercurio a baja presin
muestran una lnea de emisin a 254 nm, lo cual est
bastante prximo al mximo efecto germicida y, ade-
ms, muestran un 40 % de conversin elctrica en
radiacin UV-C, por lo que se consideran las ms apro-
piadas para la mayora de aplicaciones convencionales
(UV-LTD, 2003). La lmpara UV instalada en nuestra
cabina tiene una potencia de 30 W.
Para comprobar la eficacia de la luz UV se ha
seguido el siguiente procedimiento (Jardiel 2000):
Se utilizan dos cepas, una Gran positiva (Staphi-
m
m
36
lococcus aureus) y una Gran negativa (Escherichia
coli). A partir de un cultivo de 16 a 24 h en columbia
agar sangre de cada una de las cepas, se realiza una
emulsin en agua de peptona tamponada, y mediante
patrn de la escala de Mac Farland se aproxima la
densidad a 10
8
. Esta opacidad se confirma mediante una
lectura de absorbancia a una longitud de onda de 620
nm en un espectrofotmetro SPECTRONIC (Bausch &
Lomb). Una lectura entre 0.1 y 0.2 nos asegura una
concentracin aproximada de 10
8
microorganismos/mL.
A partir de esta emulsin, se realizan diluciones
decimales para llegar hasta la concentracin de 10
3
microorganismos/mL. Para cada cepa se preparan dos
placas de PCA (Standard Methods Agar), una de ellas
se expondr a la luz UV y la otra servir como control.
Se toman 100 L de la dilucin anterior y se siembran
en la placa de PCA, distribuyndolo de manera unifor-
me con asa de Drigalsky.
A continuacin, dos placas se exponen a la luz
UV durante 2 minutos, y las otras dos placas restantes
servirn como control para confirmar la correcta con-
centracin de los microorganismos expuestos. Segn
recomendacin de la FAO (1992), las placas de control
de la dilucin apropiada deben contener entre 200-250
colonias.
Transcurrido el tiempo de exposicin, se cierran
las placas y se incuban a 33C ( 1 C) durante 48 h
(Estufa Digitronic de Selecta). Tras el tiempo de incu-
bacin, se extraen las placas y se realiza el recuento de
las colonias crecidas en cada placa. Se calcula el por-
centaje de reduccin que ha supuesto el exponer las
placas sembradas a las lmparas UV mediante la si-
guiente ecuacin:
solucin de CoCl
2
0.17 M, se realizaron diluciones a 1/
2, 1/4 y 1/8 y se comprob que la lectura de absorbancia
decreca de forma lineal.
RESULTADOS Y
CONCLUSIONES
Los resultados obtenidos en los diferentes ensa-
yos de verificacin de la cabina AV 30/70 se muestran
en la Tabla 3.
Los resultados obtenidos en la ltima verifica-
cin anual nos indican que hay ausencia de partculas
en el interior de la cabina, corroborando por tanto el
Grado A (Tabla 1). Se comprueba adems la ausencia
de fugas en el filtro HEPA, as como la correcta velo-
cidad del aire y su laminaridad.
En cuanto al control microbiolgico del ambien-
te, todos los controles mensuales muestran un recuento
total inferior a 5 ufc (en las cinco placas). Si el recuento
fuera superior, se debera repetir el ensayo para deter-
minar si la contaminacin se debe a un funcionamiento
deficiente de la cabina o a una mala ejecucin del
ensayo.
Los resultados obtenidos en la comprobacin del
espectrofotmetro utilizado en el ensayo de eficacia de
la lmpara UV son satisfactorios. Por un lado, la escala
de longitud de onda est correctamente ajustada ya que
el mximo de absorbancia estaba localizado en 510 nm
(Figura 2), valor que se encuentra dentro del intervalo
100 (%) x
control placa en colonias
UV placa en colonias control placa en colonias
reduccin de Porcentaje

Para realizar las medidas de absorbancia se ha

utilizado un espectrofotmetro SPECTRONIC 20 (Baus-
ch & Lomb). Este equipo permite trabajar entre 340-
950 nm mediante un monocromador de red de difrac-
cin de 600 trazos/nm. Tiene una exactitud de la longi-
tud de onda de 2.5 nm, una exactitud en la lectura de 1
nm, y una banda de paso de 20 nm.
Para comprobar el ajuste de la escala de longitud
de onda se han realizado medidas de % Transmitancia
con una solucin de CoCl
2
0.17 M entre 495 nm y 535
nm, ajustando el 100% de Tansmitancia con agua des-
tilada. La escala de longitud de onda est perfectamente
ajustada cuando la mxima absorbancia est entre 505
y 515 nm.
Para comprobar el medidor de lecturas se reali-
zaron medidas en el mximo de absorbancia con una
establecido por el fabricante. Por otra parte, el medidor
de lecturas funciona correctamente, pues se observ un
comportamiento lineal al realizar diluciones a partir de
una solucin 0.17 M de CoCl
2
(y = 0.2 x 0.005; r =
0.9996). Estos resultados nos permiten asegurar la fia-
bilidad de la medida de absorbancia para preparar la
suspensin de 10
8
microorganismos/mL.
0
10
20
30
40
460 470 480 490 500 505 510 515 520 530 540 550
Longitud de onda (nm)
%

T
r
a
n
s
m
i
t
a
n
c
i
a
Figura 2. Comprobacin del ajuste de la escala
de longitud de onda del espectrofotmetro
37
GRADO N mximo permitido de partculas/m
3

EN REPOSO EN FUNCIONAMIENTO
0.5 m 5 m 0.5 m 5 m
A 3500 0 3500 0
B 3500 0 350000 2000
C 350000 2000 3500000 20000
D 3500000 20000 Sin definir Sin definir
Tabla 1. Grados de limpieza del aire segn las Normas de Correcta Fabricacin (NCF)
VERIFICACIN/MANTENIMIENTO PERIODICIDAD
Integridad de filtros HEPA Anualmente
Velocidad y uniformidad del aire Anualmente
Contaje de partculas Anualmente
Ensayo de humos Anualmente
Control microbiolgico del ambiente Mensualmente
Limpieza de la lmpara UV Cada 500 h de funcionamiento
Eficacia de la lmpara UV Cada 6 meses
Cambio de la lmpara UV Cada 7500 h de funcionamiento
o cuando lo recomiende el
control de eficacia.
Sustitucin de los filtros absolutos de impulsin y
extraccin

Cada 3000-4000 h de
funcionamiento

Tabla 2. Verificaciones y mantenimientos peridicos en la cabina de flujo laminar AV 30/70
Ensayo Resultado
Integridad de filtros HEPA 0.01 %
Velocidad y uniformidad del aire Velocidad lenta: 0.32 m/s
Velocidad rpida: 0.42 m/s
Uniformidad: correcta
Contaje de partculas 0 p/m
3
0.5 m
0 p/m
3
5 m
Ensayo de humos Ausencia de turbulencias
Control microbiolgico del ambiente < 5 u.f.c. en cinco placas
Eficacia de la lmpara UV Resultados para la cepa Escherichia coli:
Recuento en placa control: 205 ufc
Recuento en placa expuesta a UV: 0 ufc
Porcentaje de reduccin: 100 %
Resultados para la cepa Staphilococcus aureus:
Recuento en placa control: 235 ufc
Recuento en placa expuesta a UV: 0 ufc
Porcentaje de reduccin: 100 %


Tabla 3. Resultados obtenidos en la ltima verificacin de la cabina AV 30/70
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Con respecto a la comprobacin de la eficacia de
la luz UV, el recuento de colonias en las placas control
estaba de acuerdo con la recomendacin de la FAO
(1992). El porcentaje de reduccin observado en las
placas expuestas a la luz UV fue del 100 % tanto para
la cepa de Escherichia coli como para la cepa de Sta-
philococcus aureus (Figura 3). El resultado es confor-
me a la indicacin de la FAO (1992), segn la cual este
porcentaje debe ser del 99%, y slo cuando sea menor
del 80% debe ser reemplazada la lmpara UV.
Podemos concluir por tanto, que los resultados
obtenidos son aceptables y que el trabajo en la cabina
de flujo laminar se realiza en condiciones de esterili-
Figura 3. Recuento de colonias en el ensayo de
eficacia de la lmpara UV
dad. El establecimiento de un Programa de Verificacio-
nes y Mantenimientos en nuestra cabina de flujo lami-
nar nos permitir introducir medidas correctoras cuan-
do exista una disconformidad en alguno de los ensayos
y de esta forma mantener las condiciones de esterilidad
en la cabina.
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Miguel Cantero
Centro Andaluz de Diagnstico PET. Sevilla.