HEMATOLOGIA Y BIOQUMICA SANGUNEA.

HEMATOLOGA Tcnicas hematolgicas

Volumen de muestra mximo 1% del peso corporal (expresado en ml ) Puntos de extraccin Vena yugular derecha, vena cutnea cubital (a nivel del codo), vena braquial (cara ventral del hmero), vena medial metatarsal (por encima de la articulacin metatarsal), corte de ua Anticoagulantes Heparina : 25 UI por ml de sangre. Suele provocar artefactos de tincin. Ideal si se desea obtener plasma. EDTA : 1-2 mg de EDTA por ml de sangre. Anticoagulante de eleccin en hematologa si el almacenamiento de la muestra no es prolongado Extensin Tcnica de portaobjetos-portaobjetos, portaobjetos-cubreobjetos o cubreobjetos-cubreobjetos ( minimiza el dao celular). Tincin Tipo Romanowsky para hematologa

Parmetros hematolgicos Serie roja: Valor Hematocrito, Slidos Totales, Recuento Total de Eritrocitos, Concentracin de Hemoglobina, ndices Eritrocitarios y Recuento de Reticulocitos e ndice de eritrocitos policromticos. Serie Blanca: Recuento Total de Leucocitos y Recuento Diferencial de Leucocitos. Dado que todas las clulas sanguneas de las aves son nucleadas, los contadores electrnicos de clulas sanguneas no pueden emplearse en para el estudio del leucograma es hematologa aviar. En la prctica clnica se usan mtodos hemacitomtricos para realizar los recuentos celulares. El mtodo de Natt y Herrick permite el recuento de eritrocitos y leucocitos simultneamente. El procedimiento y caractersticas se especifican en la tabla siguiente: Mtodo de Natt y Herrick para recuento de eritrocitos y leucocitos
Se trata de un mtodo directo. El violeta de metilo 2B tie todas las clulas con diferentes tonos de azul Material: Camara de Neubauer modificada Pipeta hemacitomtrica de bola roja Aspirar sangre hasta la marca 0.5 y limpiar la parte exterior de la pipeta Aspirar solucin de Natt y Herrick hasta la marca 101 (Dilucin 1 : 200) Mezclar durante 1-2 minutos. Desechar las primeras gotas, llenar la cmara de recuento y esperar 3 minutos Contar el nmero total de eritrocitos en cinco cuadros ( cuadros de las esquinas y el cuadro central) del retculo central de un lado de la cmara de recuento Multiplicar el nmero de eritrocitos por 10.000 ( Expresado en eritrocitos/ul) Contar el nmero total de leucocitos en los nueve cuadros grandes de un lado de la cmara y aplicar la frmula : Recuento Total de Leucocitos (clulas/ul) = Leucocitos contados x 1.1x 200 Los leucocitos se tien de color azul oscuro

Composicin de la Solucin de Natt y Herrick

NaCl Na2 SO4 3.88 g 2.5 g

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Na2HPO4 x 12 H2O

2.91 g

KH2PO4 0.25 g Formalina 37% 7.5 ml Metil Violeta B 0.10 g Disolver en el orden indicado y disolver en agua destilada hasta un volumen total de 1000 ml. Se deja 12 horas en reposo y posteriormente se filtra (paper Whatman n 2). El pH final ha de ser de 7.3

Otro mtodo hemacitomtrico frecuentemente empleado es el sistema Unopette 5877 de eosinfilos (Becton-Dickinson, Rutherford, NJ 07070). En al tabla siguiente se resume el procedimiento: Mtodo Unoppette para recuento de leucocitos
Se trata de un mtodo indirecto. La floxina B tie especificamente heterfillos y eosinfilos. Llenar la pipeta Unopette con sangre (25ul) Mezclar durante menos de 5 minutos, desechar las primeras gotas, cargar la cmara de recuento y esperar 5 minutos. Contar los leucocitos granulocitos en todo el retculo a ambos lados de la cmara de recuento Los heterfilos, eosinfilos se tien de color rojo-anaranjado y aparecen redondos y refrctiles Realizar el Recuento diferencial a partir de la extensin Calcular el recuento total de leucocitos aplicando la frmula: Recuento Total de Leucocitos (por ul) = Nmero de clulas teidas contadas x 1.1x 16x 100 % Heterfilos + % Eosinfilos

Mtodo estimativo: Aunque se trata de un mtodo menos preciso, el recuento estimativo de leucocitos a partir de la extensin de sangre es fcil de realizar y posee un gran valor diagnstico. Se cuentan los leucocitos en 10 campos de 40x, se calcula la media y se multiplica por 2000. Estudio de trombocitos: Mtodo estimativo : Consiste en contar el nmero de trombocitos en cinco campos de immersin y aplicar la Frmula :
Recuento estimado de trombocitos (trombocitos/ul) = Media de trombocitos en cinco campos x 3.500.000 1.000 Si el valor hematocrito no se encuentra en el rango normal (35-55%) se realiza una correccin del recuento mediante la Frmula : Recuento estimado x Hematocrito observado Hematocrito normal

Estudio del frotis sanguneo: Se basa en la evaluacin de las clulas sanguneas y la valoracin de la morfologa, abundancia relativa de cada tipo celular y presencia de hemoparsitos.

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Morfologa de las clulas sanguneas de las aves

Eritrocitos Leucocitos Heterfilos Eosinfilos Basfilos Monocitos Linfocitos Trombocitos La clula madura es oval o elptica, con citoplasma anaranjado, ncleo oval de color prpura situado centralmente. Las formas inmaduras son ms redondeadas y con citoplasma azulado (basfilo). En aves sanas son frecuentes formas juveniles Grnulos alargados o redondeados eosinfilos. Citoplasma incoloro Grnulos redondos, eosinfilos y refrctiles. Citoplasma azulado, ligeramente granulado. Las rapaces sanas poseen un nmero elevado de eosinfilos Clula de pequeo tamao con grnulos intensamente basfilos. Forma irregular. Ncleo redondo, bilobulado, normalmente excntrico; citoplasma azulgris, finamente granulado o vacuolado Ncleo normalmente redondo y central, con cromatina condensada. Alto ratio ncleo/citoplasma (escaso citoplasma) Citoplasma basfilo. Se diferencian tres poblaciones celulares (medianos, pequeos y grandes). Citoplasma claro o ligeramente azulado. Ncleo oscuro. Pueden observarse grnulos de color magenta. Menor tamao que el eritrocito.

Hemoparsitos
Gnero Caractersticas en Haemoproteus Gametocito eritrocitos; esquizogonia en clulas endoteliales (pulmn, hgado, rin) en Leucocytozoon Gametocito eritrocitos y leucocitos ;esquizogonia en clulas endoteliales (pulmn, hgado, rin) Gametocitos i Plasmodium esquizontes en eritrocitos Vector Culicoides, moscas hipoboscidas Simulium, Culicoides Cuadro clnico Anemia en casos de infeccin masiva Aves afectadas Palomas Anseriformes, rapaces, Passeriformes, Psitaciformes Anemia, disnea, Anseriformes, muerte sbita Galliformes, Passeriformes, Psitcides y rapaces Anemia, Pinginos, rapaces, debilidad, muerte Passeriformes, sbita Galliformes, Anseriformes

Mosquitos (Aedes, Culex)

BIOQUMICA SANGUNEA: Tcnica: Las determinaciones se realizan a partir de suero o plasma heparinizado. Parmetros recomendados : AST, cidos biliares, Glucosa, Calcio, Creatnfosfoquinasa, cido rico, Protenas totales Plasmticas, Fibringeno y Cociente albmina/globulinas.
Parmetro
Protenas totales

Indicacin
Enfermedad gastrointestinal, heptica o renal.

Interpretacin
Durante la puesta, deshidratacin, enfermedades infecciosas crnicas. Malnutricin, parasitismo, enteropata,

comentario
Se aconseja el empleo de tcnicas colorimtricas (Biuret/Lowry) ya que el

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Cociente Albmina : Globulinas Glucosa

Procesos inflamatorios, enfermedad heptica, gastrointestinal y renal Convulsiones, glucosuria

enfermedad renal, estrs y enfermedad heptica crnica Enfermedad infecciosas crnicas (Tuberculosis, Clamidiosis, Aspergilosis), hipoalbuminemia (hepatopata, nefropata). Estrs, diabetes mellitus e hipertermia Inanicin , malnutricin, septicemia y enfermedad heptica

Colesterol

Lipidosis heptica

Hipotiroidismo, enfermedad heptica, dieta

rica en grasas, obstruccin de conductos biliares Enfermedad heptica , aflatoxicosis, dieta baja en grasa Fallo renal, ayuno, trauma tisular, contaminacin de la muestra con uratos. Deshidratacin, obstruccin ureteral.

mtodo refractomtrico es inexacto Permite evaluar la respuesta al tratamiento Si se realiza la determinacin en menos de dos horas no es necesario emplear floururo sdico para prevenir gluclisis Escaso valor diagnstico

Acido rico

Enfermedad renal

Urea

Deshidratacin

Creatinina cidos biliares Aspartato Aminotransferasa Creatn fosfoquinasa (CK) Sodio

Deshidratacin, Enfermedad heptica Lesin heptica o muscular Lesin muscular

Deshidratacin, fallo renal Enfermedad heptica Enfermedad de Pacheco, Clamidiosis, intoxicaciones, necrosis muscular. Necrosis muscular, inyecciones intramusculares, deficiencia de Vitamina E y Selenio , clamidiasis, septicemia, neuropatas e intoxicacin por plomo Deshidratacin, intoxicacin por sal Diarrea, enfermedad renal, insuficiencia adrenocortical Enfermedad renal, insuficiencia adrenocortical, deshidratacin, acidosis, ingestat excesiva de potasio Diarrea crnica, dieta deficitaria, anorexia, vmito, alcalosis

Representa el 60-80 % del total del nitrgeno excretado La reabsorcin en tbulos renales depende del grado de hidratacin. Elevacin artefactual debido a cromgenos No especfica de enfermedad heptica Permite diferenciar lesin heptica de lesin muscular Los valores son falsamente bajos si existe hiperlipemia o hiperproteinemia En muestras de suero, el tiempo de almacenamiento provoca un descenso en la concentracin de potasio. Los valores son falsamente bajos si existe hiperlipemia o hiperproteinemia Debe medirse la concentracin de albmina.

Colapso circulatorio, diarrea, vmito, quemaduras

Potasio

Diarrea, vmito, parlisis, arritmias, debilidad, tratamientos con diurticos

Calcio

Temblores, ataques, poliuria polidipsia, arritmias

Hipervitaminosis D3 , durante la puesta Hipoalbuminemia, hiperparatiroidismo nutricional avanzado

Tabla: Parmetros de bioqumica sangunea en aves y su aplicacin en el diagnstico

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