Fitopatologia Colombiana 34-2 PDF

FITOPATOLOGA COLOMBIANA
ISSN 0120-0143
VOLUMEN 34
JUNTA DIRECTIVA ASCOLFI 2009-2011 Principales Suplentes Presidencia Cristian Olaya Rodrigo O. Campo A. Vicepresidencia Benjamn Pineda L. Celsa Garca Secretara Gustavo Adolfo Prado Nancy Arciniegas Tesorera Juan Carlos ngel S. Cristian Norea Vocales Bertha Lucia Castro Gabriel Andrs Torres . Revisora Fiscal Jos Albeiro Arias Representantes Internacionales Francisco J. Morales Fernando Correa V. Gabriel Cadena Revista FITOPATOLOGA COLOMBIANA RGANO DE DIFUSIN DE LA ASOCIACIN COLOMBIANA DE FITOPATOLOGA Y CIENCIAS AFINES- ASCOLFI ISSN 01120-0143 Licencia de Min. Gobierno No 001808, Cali, Apartado Areo 5004, Nit : 891 301.725-6 Sociedad sin nimo de lucro, Personera Jurdica 1097 de abril 1 de 1977 Editor Benjamn Pineda L, Ing. Agr. M Sc. b.pinedalopez@gmail.com COMIT EDITORIAL
Benjamn Pineda Lpez Francisco J. Morales G. Jorge I. Victoria K. Elizabeth lvarez C. Lee. Calvert Ivan Lozano Carlos Jara Ing .Agr. M Sc Fitopatologa Ing. Agr. Ph D Virologa Ing. Agr. Ph D Bacteriologa Ing. Agr. Ph D Fitopatologa Biol. Ph D Virologa Biol. M Sc Ciencias Ing. Agr. M Sc Fitopatologa
NMERO 2
DICIEMBRE 2010
CONTENIDO
Poltica Editorial ........................................................................... i
Relationship between severity of potato early blight and yield loss of tubers in epidemics of different duration R. O. Campo A., L. Zambolim y F. X. Ribeiro Do Vale........... 35-39
Escala diagramtica para evaluar la severidad de la bacteriosis de la gulupa (Passiflora edulis Sims) S. Y. Castillo, J. F. Rivera y L. M. Hoyos... 41-45
Arvenses hospedantes de nematodos fitoparsitos en el cultivo de pltano S. Rivera A. scar A. Guzmn P. y C. Zamorano M. . 47-51
Efecto de nematodos entomopatgenos (Rhabditida: Steinernematidae y Heterorhabditidae) en la mortalidad de juveniles y en la inhibicin de la eclosin de juveniles de Meloidogyne mayaguensis (Tylenchida) J. P. Molina, C. De Mello D., R. Moreira S. y E. Lewis. 53-56
Representante de publicidad Gabriel Robayo V., Ing Agr, M.Art Contacto Revista: Oficina Ascolfi, Km 1 Via al Penal Granja Corpoica C.I. Palmira, Cel:+57- 3164303079 Palmira - Valle del Cauca Colombia Apartado Areo 5004- Cali- Valle del Cauca -Colombia Correos electrnicos: ascolfi.colombia@gmail.com Pgina web:
contacto@ascolficolombia.org http://www.ascolficolombia.org/
Efecto de bacterias entomopatgenas Xenorhabdus y Photorabdus y sus metabolitos sobre juveniles y huevos de Meloidogyne mayaguensis (Tylenchida) J. P. Molina, C. Dolinski, R.M. Souza, A. Valencia, V. Dalbon y E. Lewis.. 57- 63
Suscripciones y Canje: publicaciones@ascolficolombia.org ascolfi.colombia@gmail.com Diseo y Diagramacin: Benjamn Pineda L Impresin: COMPUIMAGEN, Tel 2716528 Fecha de impresin: Diciembre de 2010 Tiraje 300 ejemplares
Reaccin de genotipos de tomate de rbol (Solanum betaceum (Cav.) Sendt) al nematodo Meloidogyne spp. Chitwood S. L. lvarez S. , J. L. Chaves M., C. Salazar G. y C. Betancourth G. 65-70
Publicacin Indexada por COLCIENCIAS en la Categora C del ndice Nacional de Publicaciones Seriadas Cientficas y Tecnolgicas de Colombia (Publindex). Referenciada internacionalmente por el ndice Latinoamericano de Publicaciones Cientficas y Tecnolgicas (Latindex).
Fitopatologa Colombiana, normas para la elaboracin de artculos...... . 71-74
2010 Fitopatologa Colombiana /Volumen 34 No 2
Editorial
Para nuestros colegas fitopatlogos y otros lectores de la revista, esta vez gran parte del fascculo est dedicado a la publicacin de contribuciones relacionadas con los nematodos. Buen indicador, puesto que a la investigacin con este tipo de organismos del reino animal, asociados a muchos cultivos de inters agrcola, son pocas las personas que le dedican tiempo y recursos. De todos es conocida la tendencia a trabajar preferencialmente con hongos y poco o nada con los dems agentes patgenos de las plantas. Las bacterias, esta vez, en la revista tambin se destacan con un trabajo en Gulupa (Passiflora edulis Sims), un frutal promisorio para el pas en donde Xanthomonas axonopodis ha estado ocasionando problemas a los cultivadores. La respuesta al manejo del problema va de la mano con un grupo de investigacin de la Universidad Nacional, sede Bogot, quienes, estoy seguro seguirn con sus aportes investigativos y de divulgacin fitopatolgica. La epidemiologia tambin ocupa algunas pginas de Fitopatologa Colombiana con el tema del tizn temprano en papa (Alternaria solani), otro de los problemas que se adiciona a la papicultura. Sus resultados, que tienen que ver con la relacin entre la severidad de la enfermedad y las prdidas en rendimiento de tubrculos, de seguro contribuirn a aportar elementos de juicio para la toma de decisiones en el manejo oportuno de la enfermedad. Espero que ms fitopatlogos y profesionales interesados en la fitosanidad aprovechen las pginas de Fitopatologa Colombiana para divulgar sus resultados, siempre hay pginas disponibles, pero muy pocos contribuyentes Benjamn Pineda Lpez Editor Revista Fitopatologa Colombiana
2010 Fitopatologa Colombiana /Volumen 34 No2
RELATIONSHIP BETWEEN SEVERITY OF POTATO EARLY BLIGHT AND YIELD LOSS OF TUBERS IN EPIDEMICS OF DIFFERENT DURATION*
Rodrigo Orlando Campo Arana1, Larcio Zambolim2 y Francisco Xavier Ribeiro do Vale2 Universidad de Crdoba, Facultad de Ciencias Agrcolas, Montera (Cordoba , Colombia). Universidade Federal de Viosa. Centro de Cincias Agrrias. Departamento de Fitopatologa. AV. P.H. Rolfs, Viosa MG, Brasil, e- mail contacto: rodrigocampo43@hotmail.com; zambolim@ufv.br.
*Artculo cientfico recibido el 01/11/2010; aceptado el 10/12/2010
1
SUMMARY
To compare the epidemic effect on the reduction of green leaf area and tuber yield, four intensities of early blight (Alternaria solani) of potato (Solanum tuberosum) were established in field plots with the use of a gradient severity method, at phenological stage III or IV (beginning of tuberization or maximum tuber fill). The maximum disease severity (Ymax) and epidemic duration of each epidemic was estimated from the disease progress curves. The lowest Ymax occurred when epidemics were started at stage IV or when the plants were protected with sprays of chlorothalonil. Early blight epidemics that begun at the stage III were most severe and resulted in yield losses that varied from 7.3 to 50%, compared to the losses of 0.3 to 29.4% if the epidemic started at stage IV. There was a linear relationship of green leaf area and defoliation at 60 days after planting with the tuber yield. Thus, these two parameters could be used to design models to predict final tuber yield. The maximum stage III epidemic resulted in 31.2% fewer tubers and 37.8% reduced tuber yield than if the epidemics were started at stage IV. Although lower yield losses occurred in late epidemics, stage IV, these losses can be significant if control measures are not used. key words: early blight, Solanum tuberosum, yield loss.
29,4%. Hubo una relacin linear entre el rea foliar verde y la defoliacin a los 60 das despus de la siembra con la produccin de tubrculos; por tanto, esos dos parmetros, pueden ser utilizados para disear modelos para predecir la produccin final de los tubrculos. Las epidemias iniciadas en el estado fenolgico III en relacin a las del estado fenolgico IV redujeron la cantidad de tubrculos en peso 37,8%. Aunque las menores perdidas ocurrieron en las epidemias tardas, estado IV, las perdidas pueden ser mayores si no se establecen medidas de control. Palabras claves: Tizn temprano, Solanum tuberosum, Prdidas de la produccin.
RESUMO
RELAO ENTRE A SEVERIDADE DA PINTA-PRETA DA BATATA E DANOS NA PRODUO DE TUBRCULOS EM EPIDEMIAS DE DURAO DIFERENTES Visando comparar o efeito de epidemias de pinta-preta (Alternaria solani) na reduo da rea sadia e na produo de tubrculos de batata (Solanum tuberosum) quatro gradiente de severidade da doena foram estabelecidas em campo no estdio fenolgico III ou IV (incio da tuberizao ou mximo de enchimento). A intensidade mxima de doena (Ymax) e a durao da epidemia de cada foi estimada das curves de progresso da doena. O mais baixa Ymax ocorreu quando a epidemia iniciou no estdio IV ou quando as plantas foram atomizadas com chlorothalonil. A epidemia de pinta-preta no estdio III foi a mais severa e resultou em danos que variou de 7,3 a 50%, comparado aos danos causados no estdio IV que foram de 0,3 a 29,4%. Houve uma relao linear da rea sadia verde e desfolha aos 60 dias aps o plantio. Portanto, estes dois parmetros, podem ser empregados em modelos para predizer a produo final de tubrculos. A epidemia no estdio III, resultou numa quantidade de tubrculos 31,2% e em peso de 37,8% menor do que epidemias iniciadas no estdio IV. Embora menor dano tenha ocorrido em epidemias tardias (estdio IV), as perdas ainda podem ser significantes se medidas de controle no forem adotadas. Palabras chaves: Pinta-preta, Solanum tuberosum, perdas da produo
RESUMEN
RELACION ENTRE LA SEVERIDAD DEL TIZN TEMPRA NO DE LA PAPA Y PERDIDAS EN RENDIMIENTO DE TUBERCULOS EN EPIDEMIAS DE DIFERENTE DURACIN Para comparar el efecto de epidemias del tizn temprano en papa (Alternaria solani) en la reduccin del rea foliar verde y en la produccin de tubrculos de papa (Solanum tuberosum) se establecieron bajo condiciones de campo cuatro gradientes de severidad en los estados fenolgicos III o IV (inicio de la tuberizacin o mximo llenado del tubrculo). La intensidad mxima de la enfermedad Ymax y la duracin de cada epidemia fue estimada de las curvas de progreso de la enfermedad. Los menores Ymax ocurrieron cuando las epidemias iniciaron em el estado fenolgico IV o cuando las plantas fueron asperjadas con chlorothalonil. Las epidemias iniciadas en el estado fenolgico III fueron las mas severas causando prdidas entre 7,3 a 50%; mientras que, las ocurridas en el estado IV fueron de 0,3 a
INTRODUCCIN
Early blight (Alternaria solani Sorauer) is the most important disease of potatos (Solanum tuberosum L.) cultivated in warm climates, optimum 25-270C, (Kapsa, 2004). In general, tuber yield loss of 20% is common (Johnson and Teng, 1990; Shtienberg et al., 1996), but
losses up to 50% have been reported (Campo et al., 2001; Kapsa, 2004). Generally, the disease is controlled by fungicide sprays during the warm periods (Easton & Nagle, 1985; Johnson & Teng, 1990; Shtienberg et al., 1996; Reis et al., 1999; Ardestani, et. al. 2010). Early blight occurs commonly worldwide
on potato crops, specialty in regions with high temperature and humidity (Kapsa, 2004). The etiology of disease are fungi from Alternaria genus; six Alternaria species have been reported A. alternate, A. tenuissima, A. dumosa, A. solani, A. arborescens and A. infectoria (Ardestani et al., 2010); been the more commonly reported A. solani . 35
Models to correlate yield loss with the disease severity have been reported (Large, 1966; James, 1972), but these models are considered to have low precision (Gaunt, 1987). The inclusion of physiological variables, where the disease is correlated to host development and growth, permits the development of models with greater precision and transportability to different agro-ecological regions (Waggoner and Berger, 1987; Johnson and Teng, 1990; Gaunt, 1995). However, to predict yield losses, it is important to know the most susceptible phenological stage (PS) of the plants (Lipps and Maden, 1989; Madden et al., 2000). Rotem et al. (1983) showed a correlation between final potato tuber yield and green leaf area duration between the initial period of tuberization and harvest. Quantification of disease severity is an important tool to construct disease progress curves, which helps to compare different epidemics in an experimental area and between regions. Superimposition of a disease progress curve on a crop growth curve can be used to determine the plant growth stage of most damage. Thus, the effect of the disease on the tuber yield can be explained (Large, 1966). Potato early blight epidemics are most severe at the beginning of tuberization (Shtienberg et al., 1996; Campo et al., 2001; Trikale et al., 2008). There is lack of studies to relate tuber yield loss to epidemics started at different PS, and the healthy leaf area of the plants (Campo et al., 2007; Iglesias et al., 2007). This study was conducted to evaluate early blight epidemics in potato crops at different PS and to correlate tuber yield loss to the green leaf area.
MATERIALS AND METHODS

Experiments were conducted in field plots of the Federal University of Viosa, state of Minas Gerais, during September to December of 2000, when the climatic conditions are conducive to the establishment of early blight epidemics. The experimental area of 800 m2 was planted using 40 to 60 g seed-potato 'Bintje', with a distance of 25 cm between plants and 75 cm between rows. The area was divided into two main blocks, which were further sub-divided into four 5 m wide consecutive plots of 10 rows of 6 m each. The early blight epidemics were initiated at PS III (beginning of tuberization) in the first block and at PS IV (maximum tuber fill) in the second block (Rowe, 1993; Filgueira, 1999). Conventional commercial practices were followed regarding fertilization, insecticide sprays, weed control, and supplemental irrigation during the crop cycle. Plots to disseminate (D0) the pathogen were established three weeks prior to planting of the main experimental area, by planting 36
four rows of potato on the north side. Early blight in this plot developed naturally and served as the inoculum source for the main experimental plot (Nutter, 1989). The plots succeeding D0, were designated as D1, D2, D3 and D4, in sequence, such that each preceding plot served as the inoculum source for the succeeding plot until D4, thus forming a disease gradient of highest (D1) to lowest severity (D4). The PS III epidemic plots were sprayed with chlorothalonil, at 14-day intervals starting from the appearance of the first symptoms at the following doses: D1 (0x), D2 (0.25x), D3 (0.75x), D4 (1x), where 1x is the commercially recommended dose of the product [1.7 kg (75% a.i.)/ha]. The PS IV epidemic plots were protected with the use of full dose of the fungicide until the end of the PS III (50 days after planting) and thereafter were sprayed as described for the PS III plots. Disease severity in each plot was evaluated on previously marked five plants, at 10- to 15-day intervals according to the diagrammatic scale of Granovsky and Peterson (1954). Evaluation was done in the upper, middle and lower portion of the shoot. The mean severities were used to plot the epidemic curves to obtain the maximum disease severity (Ymax), the area under the disease progress curve (AUDPC) and the duration of the epidemic. Linear regressions between Ymax of the eight epidemics and the tuber yields were calculated. With the use of the computer program SAS, the epidemic progress curves of both the PSs were transformed into exponential, monomolecular, logistic or Gompertz models. After comparisons, the logistic model was selected because it gave the highest coefficient of determination (R2), the least standard deviation of the epidemic rate (r) and the lowest mean error square, and permitted the plotting of the residuals (Campbell & Madden, 1990). The following equation was used to adjust the disease progress curve to the logistic model:
estimated by subtracting the necrotic area. The relationship between mean green leaf area and the tuber yield in all epidemics was obtained through regression analysis. Tuber yield was estimated by harvesting 20 plants selected and marked 30 DAP on the bases of similarity in height, stem number and the dossal appearance (Causton, 1991). The yield means were compared at p > 0.05. The leaf area and yield loss were expressed relative to the healthiest plot (D4).
RESULTS AND DISCUSSION

Plant emergence started 16 DAP and the tuberization initiated 30 DAP. The PS III occurred between 30 and 50 DAP and the PS IV between 50 and 75 DAP. The first symptoms of early blight were observed on the lower leaves in the D1 plots at PS III (30 DAP) and thereafter the disease progressed to the other leaves. Epidemic progress curves The epidemic progress curves of PS III and PS IV are shown in figure 1. The epidemics in the PS III block started at 28 DAP together with the initiation of tuberization and lasted for 40 days, with plant mortality starting 70 DAP in the D1 and D2 plots. The Ymax of 49.3% in the most diseased D1 plot decreased gradually to 2.5% in the healthiest D4 plot. The AUDPCs also increased according to the disease severity. The epidemic rate adjusted to the logistic model (rL), was highest in D1 (0.13) and D2 (0.10) plots and the least in D3 (0.08) and D4 (0.01) plots (Table 1). In the PS IV block, epidemics started 48 DAP and lasted for 18 days without causing plant mortality. The Ymax of 25% in the most diseased D1 plots decreased gradually to 2.4% in the healthiest D4 plot. The AUDPC increased with the increase in the disease severity (Table 2). The rL was maximum in D1 (0.27) and D2 (0.20) and minimum in D3 and D4 plots (0.15 each) (Table 2). Relationship between green leaf area, disease severity, defoliation and tuber yield Most reduction in the green leaf area (GLA) occurred at 60 DAP in the PS III epidemic block, with a defoliation of 82.2% (D1 plot) and 26.4% (D2 plot) compared to 22.5 and 10.6% in the corresponding plots of PS IV epidemics (Tables 1 and 2). There was a significant linear correlation between GLA and tuber yield, with the maximum yield and GLA occurring in D3 and in D4 plots. This relationship could be explained by the equation 1147.3x + 1167.4, with R2=0.82 at y p 0.01 (Figure 2).
Wt
W max 1 Ae Bt
where, the Wt is the total severity, Wmax is the asymptotic estimate of the maximum severity, A is the antilogarithm of the intercept obtained in the linear regression multiplied by (-1), B is the rate of disease progress and t is the time in days. The disease effect on the green leaf area was evaluated 60 days after planting (DAP), i.e. the maximum tuber fill stage, on five plants from each plot. The leaf area was measured with a leaf area meter (Model Li 3100, Li-Cor) and the green leaf area was
The Ymax at 68 DAP, in the eight epidemics, also showed a linear relationship with the
50
50
A
40
20 00 D1 40
B
D1
Severidade ( % )
Severity (%)
D3 D4 30
Severity (%)
Severidade( % )
D2
D2 D3 D4 30
20
20
10
10
0 0 10 30 40 50 60 70
0 0 10 50 55 60 65 70
Dias aps o plantio
Dias Aps o plantio
Days after planting Figure 1. Pattern of early blight epidemics initiated at phenological stage III (A) and IV (B).
Days after planting
final tuber yield
-45.8x + 4039.3
AUDPC (% - days)
Tuber yield (gm-2)
Plot
Duration (days)
Y max. (%)
CI (gm-2)
GLA
Loss (%)
-2.52x + 3756.9 (R2 = 0.74) (Figure 4). Depending upon the severity, early blight affected the yield components of the potato plants (Table 3). Independent of the time of epidemic initiation the reduction in yield was dependent on the disease severity and the epidemic duration. Epidemics that started at PS III reduced the tuber number by 27.6% and the tuber weight by 29%, in contrast to 13.6% and 39.3%, respectively, in the PS IV epidemic. Potato early blight epidemics initiated at PS III or IV reduced green leaf area of potato plants through leaf necroses and defoliation. The epidemic effects were greater when the disease started at PS III, because at this stage the plants started tuber formation and the disease caused greater reduction in the GLA (Shtienberg et al., 1996). The disease not only reduced GLA but also its duration, which was detected in the decreased crop vegetative cycle by 20 days in the most affected plots in PS III and 15 days PS IV epidemics. The duration of GLA from PS III onwards is the determining factor for a good tuber yield, because the tuber growth depends upon the photosynthetic assimilation rate
D1 D2 D3 D4
a
49.3 20.0 8.0 2.5
711.2 502.6 82.7 15.4
210.1 33.9 49.0 48.0
0.13 0.10 0.08 0.01
40 40 40 40
0.43 1.78 1.88 2.42
82.2 26.4 22.3 0.0
1805 2785 3325 3581
1457 2152 2453 3116 2879 3770 2896 4265
Maximum severity (Ymax) at 68 DAP; area under the disease progress curve (AUDPC); standard deviation for the mean of five plants ( ); apparent infection rate (rL). bGreen leaf area index (GLA). cConfidence interval for the mean of 20 plants (p = 5%). Table 2 - Early blight epidemic initiated at phenological stage IV and its effect on the green leaf area index (GLA) and tuber yield Severitya (% - days) Plot Duration (days) AUDPC Healthy leaf areab Tuber Yield (gm-2) TuberYieldc
Y mx
(gm-2)
GLA
Loss
Loss
.(%)
(%)
D1 25.0 206.4 42.6 0.27 18 1.82 22.5 2904 2381 3428 29.4 D2 12.0 110.5 48.0 0.20 18 2.10 10.6 4013 3382 4644 2.6 D3 3.3 36.0 18.4 0.15 18 2.30 2.1 4104 3484 4724 0.3 D4 2.4 1.9 1.1 0.15 18 2.35 0.0 4124 3544 4703 0.0 a Maximum severity at 68 DAP (Ymax); area under the disease progress curve (AUDPC); standard deviation for the mean of five plants ( ); apparent infection rate (rL). bGreen leaf area index (GLA). cConfidence interval for the mean of 20 plants (p = 5%).
Table 3. Effect of early blight epidemics starting at the phenological stage III or IV on the yield components of potato plants: mean tuber number, tuber weight, and total yield per plant Stage IIIa Stage IVa Tuber Yield (g) No. of tubers Weight (g) Tuber Yield (g) No. of tubers Weight (g) D1b 339 139.6 15.4 7.4 24.0 8.2 547 209.8 22.4 9.2 24.2 6.7 D2 523 132.6 18.3 7.3 30.0 5.8 753 253.0 22.9 8.5 32.8 8.3 D3 624 178.4 21.5 6.4 30.0 8.8 770 248.4 20.8 7.9 37.0 12.5 D4 672 274.2 21.3 9.3 34.4 12.2 773 232.0 19.3 7.2 39.9 12.3 a Mean of 20 plants with respective standard deviation Decreasing order of disease severity from the maximum D1 to the minimum D4 Plot
(%)
CI
rL
Loss (%) 49.6 22.6 7.3 0.0
(R2=0.85, p 0.01) (Figure 3). Similarly the disease severity expressed as AUDPC, also had a linear relationship with tuber yield,
Table 1. Early blight epidemic initiated at phenological stage III and its effect on the green leaf area index (GLA) and tuber yield. Severitya Healthy leaf area Tuber Yieldc
b
rL
37
4500 4000 3500 3000 2500 2000 1500 1000 500 0

0
y = 1147.3x + 1167.4 R2 = 0.8254
GLA
Figure 2. Relationship between green leaf area index (GLA) and potato tuber yield at 60 days after planting
4500 4000 3500 3000 2500 2000 1500 1000 500 0 0 10 20
y = - 45.791x + 4039.3 R2 = 0.8511
30
40
50
60
Maximum Severity ( % )
Figure 3. Relationship between the maximum disease severity and final tuber yield 68 days after planting.
5000
Tuber Yield (g/m2)
y = -2.5204x + 3756.9 R2 = 0.7474
4000 3000 2000 1000 0 0 200 400 AUDPC 600 800
after the initiation of tuberization. According to Moorby and Milthorpe (1983), once initiated, the tubers have an exponential growth during the following three weeks, which corresponds to the PS III, followed by a linear growth rate coinciding with the PS IV. Thus, greater yield loss occurred in plots of PS III epidemics. The disease symptoms appeared only on the leaves and not on the stems and the tubers as observed by Johnson and Teng (1990). There was a linear relationship of Ymax with the tuber yield. However, these findings may require further trials in different agroclimatic conditions, because Shtienberg et al., (1996) reported that the behavior of early blight of potato differs along the crop seasons. In studies with other pathosystems, disease severity may not always correlate to yield (Waggoner and Berger, 1987; Gaunt, 1987). The magnitude of GLA 60 DAP differed in the epidemics initiated two PSs, being greater when the epidemic was initiated at PS IV. At 60 DAP, the GLA of the epidemic plots and in fungicide protected plots (D3 and D4) showed a linear relationship with the tuber yield. These plots had maximum GLA and its duration thus contributing to the higher tuber yield. Early blight, depending upon the severity and the epidemic duration, can affect the yield components of potato plants (Table 3). The early epidemic reduced tuber number as well as the weight of tubers and this resulted in a yield reduction of nearly 50% in the most diseased plots. Although the late epidemic was less harmful to the plants, the yield losses could still reach about 30% if appropriate control measures are not adopted. Although there was a linear relationship between Ymax and AUDPC with the tuber yield, it was considered inappropriate to predict tuber yield because these parameters are measured after the yield has been defined. The GLA at 60 DAP for potato cultivar Bintje, that also showed a significant correlation with tuber yield, was found to be the most appropriated variable to predict tuber yield of potato plants affected by early blight in various intensities. The GLA at 60 DAP coincides with the maximum tuber filling stage, therefore, it can be a critical point that can be used to determine the final tuber yield or the disease management strategy.
Tuber yield ( g/m 2 )
Tuber Yield ( g/m2 )
LITERATURE CITED Ardestani, T.S., Sharifnabi, B., Zare, R. and Moghadam, A. 2010. New Alternaria species associated with potato leaf spot in various potato growing region of iran. Iran.J.Plant Path. 45(4):83-86. Campbell C.L. and Madden, L.V .1990. Introduction to plant disease epidemiology. Wiley, New York. 532p.
Figure 4. Relationship between the area under the disease progress curve (AUDPC) and tuber yield at 68 days after planting
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ASOCIACIN COLOMBIANA DE FITOPATOLOGIA Y CIENCIAS AFINES, ASCOLFI
Misin Contribuir a la creacin y utilizacin del conocimiento cientfico en la fitosanidad para facilitar soluciones a los problemas de la produccin de cultivos sanos con rentabilidad social y econmica, protegiendo el medio ambiente Visin Ser una entidad lder, reconocida nacional e internacionalmente por su excelente labor en beneficio de la promocin, divulgacin y consolidacin del conocimiento cientfico de personas e instituciones allegadas a la fitosanidad y sus ciencias afines como elemento esencial de la produccin de cultivos de alta calidad Objetivos Contribuir a la creacin de una conciencia nacional sobre la importancia de la ciencia y tecnologa en la sanidad vegetal como aporte al desarrollo agropecuario y econmico del pas Promover el inters en todos los aspectos de la fitopatologa y ciencias afines Contribuir a la creacin y difusin del conocimiento cientfico de la fitopatologa y ciencias afines Promover y estimular la publicacin de los resultados de los estudios y/o investigaciones sobre fitopatologa y ciencias afines Promover la cooperacin entre entidades del sector pblico y privado tanto nacional como internacional que tengan inters en estas disciplinas Promover el mejoramiento del nivel acadmico de sus asociados y de quienes manifiesten inters en las reas de la fitopatologa y ciencias afines Estrechar los vnculos de solidaridad y compaerismo entre sus afiliados Informar y motivar a la opinin pblica y sus representantes sobre la problemtica de las enfermedades de las plantas y su control
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ESCALA DIAGRAMTICA PARA EVALUAR LA SEVERIDAD DE LA BACTERIOSIS DE LA GULUPA (Passiflora edulis Sims)*
Sandra Yulieth Castillo1, Juan Felipe Rivera1 y Lilliana Mara Hoyos1
1
Universidad Nacional de Colombia Sede Bogot. Facultad de Agronoma e- mail contacto: limhoyosca@unal.edu.co
*Artculo cientfico recibido el 08/06/2010; aceptado el 26/09/2010.
RESUMEN
La bacteriosis de la gulupa, causada por un complejo bacteriano, dentro del cual se encuentra Xanthomonas axonopodis, es una enfermedad importante en las zonas productoras de Colombia . Teniendo en cuenta que no existen mtodos estndar para su evaluacin, se desarroll una escala diagramtica con los niveles de severidad 5%, 10%, 20%, 35%, 55% y 80%. La escala fue validada por diez evaluadores (cinco sin experiencia y cinco con experiencia) quines estimaron la severidad de 80 hojas con diferentes valores, previamente calculados con el software QUANT Versin 1.0.1. La exactitud y precisin de cada evaluador se determin mediante una regresin lineal simple entre la severidad real y la estimada. Sin el uso de la escala, la mayora de los evaluadores sobrestimaron la severidad de la enfermedad. Con la escala, los evaluadores obtuvieron mejores niveles de exactitud y precisin, con medias de 99 y 98% respectivamente, con errores absolutos concentrados alrededor del 10%. Los evaluadores presentaron una excelente reproducibilidad de las estimaciones con valores 90% en el 87% de los casos. Por lo tanto se puede concluir que la escala diagramtica desarrollada es adecuada para la evaluacin de la bacteriosis de la gulupa. Palabras claves:, fitopatometra, pasifloras, frutas
SUMMARY
Diagrammatic scale for assessment of purple passion fruit (Passiflora edulis Sims) bacteriosis severity The bacteriosis of gulupa is an important disease in the purple passion fruit producing areas of Colombia. It is caused by a bacterial complex, where lies the Xanthomonas axonopodis. Given that there are no standard methods for its assessment, a diagrammatic scale was developed with 5%, 10%, 20%, 35%, 55% and 80% of affected leaf area. The scale was validated by ten raters (five without experience and five with experience) who estimated the severity of 80 leaves with different values, previously measured using the software QUANT version 1.0.1. The accuracy and precision of each evaluator was determined by a simple linear regression between actual and estimated severity. Without the use of the scale, most evaluators overestimated the severity of the disease. With the scale, the evaluators had better levels of accuracy and precision, with means of 99 and 98% respectively, with absolute errors around 10%. The evaluators have excellent reproducibility of the estimates with values 90% in 87% of cases. Therefore, it concludes that the diagrammatic scale developed is appropriate for the bacteriosis of gulupa assessment. Keywords: phytopathometry, Fruits, Passiflorae
INTRODUCCIN
La bacteriosis de la gulupa es causada por un complejo bacteriano, en donde se encuentra Xanthomonas axonopodis. Esta enfermedad es relativamente nueva y se presume que el avance de sus sntomas est ampliamente relacionado con la alta humedad relativa (Angulo, 2009). Los sntomas se pueden presentar en varias partes de la planta. En hojas se presenta como una mancha clortica que se inicia en los bordes en hojas, que se desarrollan rpidamente hasta necrosar los tejidos; en tallos se presentan manchas translcidas que necrosan los tejidos vasculares, afectando el transporte de nutrientes a otras partes de la planta; en frutos se presenta como manchas aceitosas de forma circular que desintegran los tejidos, causando un dao por el cual no se puede exportar ni comercializar en el mercado local (Angulo, 2009; Bentez y Hoyos, 2010). Este cultivo ha tenido una amplia aceptacin en los mercados extranjeros, ya que posee caractersticas de sabor y aroma superiores al del maracuy, adems de ser una fuente de vitaminas esenciales como la vitamina A, B12, C, niacina, rivoflavina y cido
ascrbico (Pinzn et al., 2007). Debido a esto, la intensificacin del cultivo de la gulupa ha trado consigo la aparicin de enfermedades y el incremento de su incidencia, lo cual exige disponer en forma oportuna, de medidas de manejo eficaces y de bajo costo. En todas las regiones del pas que se han incorporado recientemente a la produccin de gulupa, la enfermedad conocida como bacteriosis o mancha de aceite, constituye el mayor problema sanitario, tanto por el impacto negativo en la produccin como por el limitado conocimiento de su manejo (Ministerio de Agricultura y Desarrollo Rural, 2007). Los datos objetivos de cuantificacin de enfermedades son importantes en el manejo de las mismas, debido a que permite evaluar diferentes medidas de control, resistencia varietal y eficacia de productos fitosanitarios. La utilizacin de escalas diagramticas pueden reducir la subjetividad de las estimaciones de severidad, mejorando la exactitud y precisin de las evaluaciones. Los mtodos utilizados en la cuantificacin de enfermedades que permitan un mejor entendimiento de estas, deben ser preferiblemente simples, rpidos, de bajo costo y suministrar resultados exactos, precisos y
reproducibles (Gaunt, 1995; Castao, 2001). La exactitud se refiere a la aproximacin de una estimacin a un valor real de la enfermedad evaluada; la precisin se refiere a la variacin o repeticin asociadas con una estimacin y la reproducibilidad se refiere a la ausencia de la variacin de la estimacin cuando la misma muestra de enfermedad es evaluada por otro evaluador (Campbell y Madden, 1990 citados por Nascimento et al., 2005). Existen tcnicas modernas que pueden ser utilizadas para evaluar severidad con precisin: las imgenes de vdeo, la fotografa en color infrarrojo, la termografa infrarroja, la reflectancia espectral del dosel, y la resonancia nuclear magntica (Nilsson, 1995). stos mtodos requieren equipos sofisticados y costosos, lo que dificulta su implementacin, por lo tanto en pases como Colombia, la severidad de las enfermedades se evala en forma visual a pesar de estar sujeta a grandes subjetividades y a que puede inducir a graves errores de exactitud, precisin y reproducibilidad (Nutter Jr et al., 2006). Sin embargo, una de las formas de disminuir estos inconvenientes es seleccionar un sistema de cuantificacin que permita aproximar satisfactoria41
mente el valor de una medicin estimada al valor real de una enfermedad (Tovar-Soto et al., 2002 citados por Nascimento et al., 2005), en este sentido, las escalas diagramticas, se han convertido en la principal herramienta para los evaluadores (Godoy, 1997). Teniendo en cuenta la inexistencia de mtodos estndares para la cuantificacin de la bacteriosis de la gulupa, este trabajo tiene como objetivo desarrollar una escala diagramtica para evaluar la severidad de la enfermedad y analizar los niveles de exactitud, precisin y reproducibilidad de las estimaciones generadas con su uso.
el valor real y estimado). La exactitud se evalu por medio de los parmetros (a) y (b) de la ecuacin de regresin, comparados con los valores 0 y 1 respectivamente por la prueba t (p < 0,05). Los datos se procesaron, utilizando el programa Statistical Anlisis System 9.0 (SAS Institute, Cary, NC, USA, 1999).
RESULTADOS Y DISCUSIN
Se determinaron los niveles inferior y superior de severidad observada en campo que result de 5,0 % y 80,5 %, posteriormente se calcularon cuatro valores intermedios, de acuerdo con la ley de la agudeza visual de Weber-Frechner obtenindose los siguientes valores para la escala 5; 10; 20; 35; 55 y 80% de rea afectada (Figura 1). El 50 % de los datos se ubic en el rango de severidad de 30,6 % a 49,0 %, mientras que tan solo un 8% de los datos se situ en el rango de 70,3% a 80,5%, esto se debe a que cuando la hoja tiene un grado de afeccin alto se cae.
MATERIALES Y MTODOS
Se recolectaron 80 hojas de gulupa con diferentes niveles de severidad de bacteriosis, en el municipio de Granada (Cundinamarca), regin donde la enfermedad se manifiesta de la misma forma que en el resto de las zonas productoras. Las hojas fueron digitalizadas con un escner y se analizaron con el software QUANT Versin 1.0.1 (Vale et al., 2001). Debido a la similitud de colores entre los sntomas y algunas partes sanas de la hoja, se vio la necesidad de imprimir las fotografas, para que las lesiones fueran coloreadas con un color diferente a los dems colores de la hoja y facilitar as su deteccin. Posteriormente stas se escanearon y procesaron con el programa QUANT, obtenindose la severidad real de la enfermedad en trminos porcentuales. A partir de la severidad mxima y mnima encontrada en las hojas analizadas y obedeciendo a la ley del estmulo visual de Weber y Fechner (Horsfall y Barratt, 1945), se establecieron cuatro niveles intermedios de la enfermedad para elaborar la escala diagramtica. La validacin de la escala se realiz en dos etapas: en la primera, cinco evaluadores con experiencia en la evaluacin de enfermedades y cinco sin experiencia analizaron 80 hojas de gulupa con diferentes niveles de severidad de la bacteriosis, sin el uso de la escala diagramtica propuesta. En la segunda etapa, para la validacin de la escala, los mismos evaluadores analizaron nuevamente las fotos con ayuda de la escala diagramtica propuesta, realizndose interpolacin para los niveles de enfermedad Tambin, se analiz la reproducibilidad de las evaluaciones, comparndose las severidades estimadas por los diferentes evaluadores en pares. A partir de los datos de cada evaluador, se determin la exactitud y precisin por medio de regresiones lineales simples entre la severidad real (variable independiente cuantificada en el programa QUANT) y la severidad estimada (variable dependiente), sin y con el uso de la escala. La precisin se evalu por medio del coeficiente de determinacin (R2) de la regresin y por la varianza de los errores absolutos (diferencias entre 42
escala (Figura 3) se calcularon los coeficientes de la ecuacin de regresin lineal. Sin la utilizacin de la escala los valores de intercepto (a) del 80% de los evaluadores ron significativamente de cero, indicando la presencia desvos constantes (Tabla 1). La mayora de los evaluadores sobrestim significativamente la severidad, indicando la presencia de desvos positivos constantes para todos los niveles de severidad de la enfermedad. Con la utilizacin de la escala tan solo el 20% de los evaluadores presentaron valores de (a) significativamente diferentes de cero, con desvos positivos constantes (Tabla1 y Figura 2). Con relacin a los valores del coeficiente angular de la recta (b), el 80% de los evaluadores present valores significativamente diferentes de uno sin la utilizacin de la escala diagramtica, indicando la presencia de desvos sistemticos. Con la utilizacin de la escala esta situacin mejor, ya que ninguno de los evaluadores present valores de (a) significativamente diferentes de cero (Tabla 1 y Figura 3).
Figura 1. Escala diagramtica para la evaluacin de bacteriosis en gulupa ( Passiflora edulis Sims).
Validacin de la escala diagramtica La escala se valid con cinco evaluadores experimentados y cinco sin experiencia, a quines se solicit que estimaran la severidad de 80 hojas de gulupa con valores de severidad conocidos sin utilizar la escala. riormente, se entreg la escala y se solicit que estimaran nuevamente las severidades utilizndola como referencia visual. Con los datos de las estimaciones de cada evaluador sin utilizar la escala (Figura 2) y utilizando la
En el anlisis de precisin, la severidad estimada sin la utilizacin de la escala diagramtica para los evaluadores sin experiencia explica el 0.00 a 0.03 % de la variacin (R2) observada con un promedio de 0.01, estos valores son muy bajos debido a que estas personas no tienen ningn tipo de experiencia en la evaluacin de enfermedades y tienden a ser menos precisos en la primera evaluacin. Para los evaluadores con experiencia se observ que los valores estimados explican el
Severidad estimada (%)
Severidad estimada (%)
Severidad real (%)
Severidad real (%)
Figura 2. Severidad estimada de bacteriosis de gulupa ( Passiflora edulis Sims) sin Figura 3. Severidad estimada de bacteriosis de gulupa ( Passiflora edulis ayuda de la escala diagramtica. Los evaluadores A-E son inexpertos y F-J exper- Sims) con ayuda de la escala diagramtica. Los evaluadores A-E son inexpertos y F-J expertos en la evaluacin de enfermedades. tos en la evaluacin de enfermedades.
0,51 a 0,77% de la variacin, con un promedio de 0,65% (Tabla 1). La distribucin de los errores absolutos permite evaluar el grado de precisin de los evaluadores y la existencia de tendencias en la distribucin de la varianza de los errores (Cracogna, 2007). Al no utilizar la escala algunos evaluadores superaron el 40% de
error absoluto, mientras que al utilizar la escala los errores absolutos se concentraron en la franja inferior al 10% (Figura 4). Estos valores son considerados buenos segn los criterios adoptados en varios estudios de validacin de escalas diagramticas (Michereff, 2006). La reproducibilidad de las evaluaciones
Tabla 1. Intercepto (a), coeficiente angular (b) y coeficiente de determinacin (R 2) de las regresiones lineales entre severidades real y estimada por cada evaluador sin y con el uso de la escala diagramtica. Evaluacin de severidad Evaluadores sin escala con escala Inexpertos a b R2 a b R2 A 31,77** 0,06** 0,00 -0,62 1,00 0,97 B 22,74** 0,17** 0,03 1,87** 0,97 0,99 C 24,84** 0,10** 0,02 -0,02 1,00 0,99 D 26,53** 0,00** 0,00 -0,38 1,00 0,96 E 46,13** -0,09** 0,01 0,14 0,99 0.99 Media 30,4** 0,05** 0,01 0,20 0,99 0.98 Expertos F -0,26 1,30** 0,70 2,32** 1,01 0,96 G -4,31** 0,78** 0,72 0,97 1,01 0,92 H 7,03** 0,61** 0,54 0,44 1,04 0,94 I 1,79 0,93 0,77 0,99 1,01 0,94 J 5,68** 0,57** 0,51 0,52 1,06 0,92 Media 1,99 0,84** 0,65 1,05** 1,03 0,94 ** Situaciones en las cuales las hiptesis nulas (a=0 o b=1) fueron rechazadas por la prueba t con un nivel significancia de 1%
entre los evaluadores combinados por pares tambin puede ser utilizada como un indicativo de precisin de un mtodo de evaluacin de enfermedades (Nutter Jr. et al., 1993). Diferentes evaluadores, utilizando la misma escala para la evaluacin del mismo material, deben estimar los mismos valores de severidad (Nutter Jr. y Schultz, 1995). En las regresiones de las severidades estimadas por los evaluadores en pares, fueron observados coeficientes de determinacin que variaron de 85 a 99%, siendo 90% en el 87% de los casos (Tabla 2), lo que indica que las estimaciones realizadas con la escala son reproducibles. La diferencia de los evaluadores en la evaluacin de esta enfermedad concuerda con las observaciones de Nutter Jr. y Schultz (1995), quines afirman que los individuos varan considerablemente en su habilidad para discriminar diferentes niveles de severidad. La calidad de los valores estimados de severidad no est solamente influenciado por el estmulo sicolgico y su respuesta, sino por factores tales como la complejidad de la muestra, color, nmero de lesiones de la muestra, la fatiga del evaluador y dificultad para mantener la atencin en la muestra 43
nal de Colombia por la financiacin de este proyecto contrato 2007L4348_49-837/07.
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Figura 4. Errores absolutos (severidad estimada - severidad real) para los diez evaluadores con el uso de la escala. Tabla 2. Coeficientes de determinacin (R2) de las ecuaciones de regresin lineal simples combinando las estimaciones de los evaluadores por pares utilizando la escala diagramtica. Evaluador B C D E F G H I J 0.96 0,97 0,99 0,97 0,93 0,90 0,91 0,91 0,91 A 0,97 0,96 0,99 0,96 0,91 0,93 0,94 0,91 B 0,97 0,99 0,95 0,92 0,94 0,93 0,93 C 0,97 0,93 0,90 0,91 0,91 0,91 D 0,96 0,92 0,94 0,94 0,93 E 0,89 0,92 0,94 0,90 F 0,86 0,87 0,86 G 0,89 0,92 H 0,85 I
(Kranz, 1988; Shokes et al. 1987 citados por Michereff, 2009). CONCLUSIONES Estos resultados demuestran que la utilizacin de la escala permite cuantificar la severidad de la enfermedad de forma ms precisa y exacta, confirmando la importancia de la utilizacin de las escalas diagramticas para calibrar el sistema visual del evaluador. Por lo tanto se puede concluir que la escala diagramtica para evaluar bacterio44
Error absoluto
sis de gulupa presentada en este trabajo, es una herramienta valiosa para realizar estudios epidemiolgicos y comparacin de mtodos de control de la enfermedad.
AGRADECIMIENTOS
Los autores agradecen al Ministerio de Agricultura y Desarrollo Rural, a ASOHOFRUCOL y a la Universidad Nacio2010 Fitopatologa Colombiana /Volumen 34 No 2
ment systems. Phytopathol. 83: 806812. Nutter Jr, F. W. y P. M. Schultz. 1995. Improving the accuracy and precision of disease assessments: selection of methods and use of computer-aided training programs. Can. J. Plant Pathol. 17: 174-184. Nutter Jr, F.W., P.D. Esker y R. A. Coelho Netto. 2006. Disease assessment con-
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Diagnstico Fitosanitario
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ARVENSES HOSPEDANTES DE NEMATODOS FITOPARSITOS EN EL CULTIVO DE PLTANO*

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1
Universidad de Caldas. Facultad de Ciencias Agropecuarias. Departamento de Fitotecnia.
e-mail contacto: santyrive861@hotmail.com oscar.guzman@ucaldas.edu.co carolina.zamorano@ucaldas.edu.co

RESUMEN
En los cultivos, las arvenses compiten por nutrientes, agua, luz, espacio; y son hospedantes de plagas y patgenos como los nematodos fitoparsitos que afectan la absorcin y transporte de agua y nutrientes a travs de las races e interfieren con el crecimiento de las plantas. El objetivo de sta investigacin fue reconocer las arvenses asociadas a lotes donde haba pltano y parcelas comerciales de pltano e identificar los nematodos fitoparsitos asociados a ellas en la granja Montelindo de la Universidad de Caldas. Se identificaron 24 especies de arvenses, en 22 gneros pertenecientes a 15 familias. La mayora de especies pertenecan a las familias Poaceae (25%), Asteraceae (12.5%) y Cyperaceae (8.3%). Solanum mammosum, Momordica charantia, Paspalum paniculatum y Bidens pilosa hospedaron el mayor nmero de fitonematodos con 13.347, 6.990, 6.693 y 4.752 nematodos/100 g de races, respectivamente. Se encontraron nueve arvenses hospedantes de Radopholus similis, principalmente Borreria laevis y Phyllantus corcovadensis, 22 especies hospedantes de Helicotylenchus spp., principalmente Paspalum paniculatum, Panicum laxum, Solanum mammosum, Cassia tora y Eleusine indica, y para Meloidogyne spp., la principal hospedante fue Momordica charantia. Los resultados son tiles para agricultores e investigadores en la identificacin de arvenses hospedantes de nematodos fitoparsitos en pltano y para establecer estrategias de manejo integrado como rotacin de cultivos y barbecho antes de resembrar con material de siembra sano. Palabras clave: Poaceae, Asteraceae, Cyperaceae, Radopholus similis, Helicotylenchus spp.
SUMMARY
Weeds compete with crops for nutrients, water, light, space, and also they can harbor nematodes that affect the absorption and transport of water and nutrients through their roots interfering with the normal development of the plants. In order to identify the main weeds associates with plantain and the parasitic nematodes hosted by them, a field study was conducted at the Montelindo farm of the Universidad de Caldas, department of Caldas. It was identified 24 weedss species belonging to 22 genera and 15 families. Most of the species belonged to the families Poaceae (25%), Asteraceae (12.5%) and Cyperaceae (8.3%). Solanum mammosum, Momordica charantia, Bidens pilosa and Paspalum paniculatum had the largest number of phytonematodes with 13,347, 6,990, 6,693 and 4,752 nematodes per 100 g of roots, respectively. Nine weedss species were hosts of Radopholus. similis, being Borreria laevis and Phyllanthus corcovadensis the most important. Twenty two species were also hosts of Helicotylenchus spp., mainly Paspalum paniculatum, Panicum laxum, Solanum mammosum, Cassia tora and Eleusine indica. The most important host of Meloidogyne spp. was Momordica charantia. These results are useful for farmers and researchers for the identification of weedss hosts of parasitic nematodes in plantain and to establish integrated management strategies such as crop rotation and fallow before re-planting with healthy plant material. Key words: Poaceae, Asteraceae, Cyperaceae, Radopholus similis, Helicotylenchus spp.
INTRODUCCIN
Los cultivos comerciales de pltano, banano, entre otros, son afectados por arvenses o malezas que producen efectos negativos en su desarrollo al disminuir su rendimiento, tanto en forma directa como indirecta. Directamente, por la interferencia de ellas con el cultivo por la coincidencia de sistemas radicales que ocasionan competencia por nutrientes del suelo, agua, luz, espacio, y por efectos alelopticos, al secretar sustancias txicas que inhiben o impiden el crecimiento normal de la raz de las plantas cultivadas (Aranzazu et al., 2002; Gmez y Rivera, 1994; Pinilla, 2002; Rivera, 1997). As mismo, indirectamente, debido a que algunas especies de arvenses son hospedantes de insectos plaga o agentes patgenos o nematodos fitoparsitos que afectan el crecimiento y desarrollo de los cultivos (Arango y Gmez, 2000; Rojas y Acua, 1999; Salazar, 2004; Vidal, 2005). Los nematodos fitoparsitos ocasionan
dao directo en las races y el cormo, provocando debilitamiento del sistema radical y reduccin en la absorcin y transporte de agua y nutrientes (Araya et al., 1995; Luc et al., 2005; Perry y Moens, 2006). Como consecuencia de esto, se produce crecimiento deficiente de las plantas, las hojas son ms pequeas y en menor nmero; los frutos tienen un peso reducido y las plantas se vuelcan debido a la pudricin del sistema radical (Agrios, 2005; Montiel et al., 1997). La produccin se reduce notablemente, alcanzando valores del orden de 60% y 51% en la primera y segunda cosecha, respectivamente, cuando no se controla la principal especie fitoparsita Radopholus similis (Coob, 1893) Thorne, 1949 (Jones, 1996; Fogain, 2000; Gowen et al., 2005; Romn, 1978). En otros casos, la reduccin en el rendimiento por efecto de R. similis puede llegar al 80% (Moens et al., 2003). Debido a la importancia de los nematodos fitoparsitos Radopholus similis, Pratylen2010 Fitopatologa Colombiana /Volumen 34 No 2
chus coffeae (Zimmermann, 1898) Filip. Schu. Tek., 1941, Helicotylenchus multicinctus (Cobb, 1893) Golden, 1956., y Meloidogyne incognita (Kofoid White, 1919) Chitwood, 1949, en el cultivo de pltano en la granja Montelindo de la Universidad de Caldas (Guzmn y Castao, 2004), es necesario buscar alternativas a esta problemtica y enfrentarla de manera directa, mediante el estudio de arvenses hospedantes de fitonematodos asociadas a ste cultivo, y por ende, determinar sobre cules especies se debe tener mayor cuidado al momento de realizar las prcticas de manejo. Por tales motivos, el objetivo de sta investigacin fue reconocer las arvenses asociadas a lotes con arvenses donde se tuvo pltano y a lotes comerciales de pltano en la granja Montelindo e identificar los nematodos fitoparsitos asociados a ellas.
MATERIALES Y MTODOS
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Procedimiento en condiciones de campo La investigacin se realiz en condiciones de campo en la Granja Montelindo de la Universidad de Caldas, ubicada en el municipio de Palestina, vereda Santagueda, a una altitud de 1010 msnm, temperatura media de 22,8 C, humedad relativa del 76% y precipitacin anual de 2200 mm, donde se recolectaron muestras de races y suelo de las plantas, en lotes con arvenses (1600 m2) donde se tuvo pltano Dominico Hartn y en lotes comerciales de ste cultivo (2700 m2). Se realizaron tres recolecciones de arvenses, la primera en mayo, la segunda en junio y la tercera en julio. Tanto en el lote comercial de pltano como en el lote con arvenses se hizo un muestreo de arvenses con un recorrido en zig-zag. Debido a que la mayora de arvenses se encontraban distribuidas aleatoriamente en todo el lote, se recolectaron 15 submuestras de races y suelo de cada especie de arvense prevalente en cada lote para conformar una muestra, las cuales se homogenizaron y empacaron en bolsas plsticas sellables. En cada lote, se realiz un anlisis descriptivo y la identificacin de cada especie y familia de arvense con base en el libro de Gmez y Rivera (1995), al igual que en el conocimiento de los autores en el tema y se construyeron tablas de las familias y especies encontradas. Despus de recolectar las muestras, stas fueron llevadas al Laboratorio para su evaluacin. Procedimiento en condiciones de laboratorio En el Laboratorio de Fitopatologa del departamento de Fitotecnia de la Facultad de Ciencias Agropecuarias de la Universidad de Caldas, se realiz la extraccin de los fitonematodos de races y suelo. Las muestras de races recolectadas en el campo se lavaron con agua de la llave por 3 minutos, permitiendo un escurrimiento superficial, separando las races funcionales (no necrosadas, vivas) de las no funcionales (necrosadas y muertas). De cada muestra, en una balanza se pesaron 25 g de races funcionales y con la ayuda de tijeras se cortaron transversalmente trozos de 1 cm y luego se homogenizaron (Araya et al., 1995). La extraccin de los fitonematodos de races y suelo se realiz con base al principio de flotacin de los nematodos en azcar (Meredith, 1973; Araya et al., 1995) de la siguiente manera: Los trozos de races se colocaron dentro del vaso de una licuadora Osterizer, modelo 565-15, con 500 mL de agua y luego se licuaron a alta velocidad por 30 seg. La solucin del licuado fue depositada en un tamiz de 250 m el cual estaba colocado sobre un tamiz de 106 m, y ste sobre otro de 25m. La muestra se lav con agua a presin para que hubiera desprendi48
miento de los nematodos, y del material que quedaba en el tamiz de 25 m, luego se deposit todo su contenido en tubos de centrifugacin de 30 mL de capacidad. Posteriormente, se centrifug a 3.800 rpm durante 5 min. Como consecuencia de la centrifugacin hubo sedimentacin de las partculas pesadas en el fondo del tubo y se procedi a eliminar el sobrenadante. Seguidamente, los tubos fueron llenados nuevamente con solucin de sacarosa al 50% y sometidos a centrifugacin a 3.800 rpm durante cinco minutos con el propsito de que los nematodos quedaran flotando en la solucin de sacarosa por densidad diferencial y fueran separados de las partculas ms pesadas. Luego el sobrenadante se deposit en el tamiz de 25m para lavar la sacarosa con agua corriente a presin baja y evitar que los nematodos fueran afectados por sta. Finalmente se recogieron 20 mL de agua con nematodos en una caja de Petri. La extraccin de nematodos de suelo se realiz de similar manera, omitiendo el procedimiento de licuado. En cada muestra se registr el nmero de nematodos fitoparsitos en 100 g de races y en 100 g de suelo. La identificacin de fitonematodos se realiz recolectando 30 nematodos de cada caja de Petri, los cuales se montaron en un portaobjetos con una gota de agua que se cubri con un cubre-objetos y se observaron en el microscopio compuesto de luz marca Nikon a travs del objetivo 40X. Con los nematodos encontrados se obtuvieron promedios para la variable nmero de nematodos fitoparsitos en las arvenses de ambos lotes evaluados (con arvenses y comercial); se estim el nmero de nematodos fitoparsitos de cada especie de acuerdo con su identificacin. Para la identificacin de los nematodos fitoparsitos se utilizaron las figuras de los principales fitonematodos de musceas diseadas por Guzmn y Castao (2004), adems de los libros de Mai et al. (1996), Maggenti et al., (1987), Perry et al. (2009), Siddiqi (2000) y Thorne (1961) que poseen figuras y claves taxonmicas. As mismo, con base en la escala de Qunherv et al. (2005), las arvenses se clasificaron como pobres, buenas o excelentes hospedantes de nematodos fitoparsitos en el cultivo del pltano. Para R. similis, la escala consider a una arvense como pobre, buena y excelente hospedante cuando el nmero de nematodos en 100 g de races estaba entre 10-1000, 1001-10.000 y >10.001, respectivamente; para Helicotylenchus spp., cuando estaba entre 10-1000, 1001-10.000 y >10.001, respectivamente; para Meloidogyne spp., cuando estaba entre 10-10000, 10.001-1.000.000 y >1.000.000, respectivamente; y para Pratylenchus spp., cuando estaban entre 10-1000, 1001-10.000 y >10.001, respectivamente. Anlisis estadstico
Se realiz un anlisis descriptivo donde se registraron cada una de las familias y especies de arvenses presentes en cada uno de los muestreos y se construyeron tablas de cada muestreo. Se determin de acuerdo con la escala de Qunherv et al. (2005), cul de stas era pobre, buena o excelente hospedante de nematodos fitoparsitos. As mismo, se determin en cada arvense y en cada lote (comercial o descanso) la mayor cantidad (nmero) de nematodos fitoparsitos que estaban asociados al pltano, de la misma forma se estableci cual fue el nematodo que ms se presentaba en cada uno de los lotes. RESULTADOS Y DISCUSIN En el lote con arvenses y en el comercial de pltano Dominico Hartn se identificaron 24 especies de arvenses, en 22 gneros pertenecientes a 15 familias. Las arvenses colectadas pertenecieron principalmente a tres familias: Poaceae (25%), Asteraceae (12,5%) y Cyperaceae (8,3%) (Tabla 1). Estos resultados son inferiores a los obtenidos por Qunherv et al. (2005) en Martinica quienes encontraron 41 especies de arvenses asociadas en banano; as mismo, inferiores a los obtenidos por Gonzlez (2006) en Chile que report 37 especies de arvenses anuales, bianuales, perennes y leosas asociadas con nematodosfitoparsitos en frutales y vides. Estos valores difieren con los encontrados en ste estudio debido a ellos realizaron los muestreos en varios campos de banano y frutales, al igual que en diferentes condiciones ecolgicas donde vari el tipo de suelo, el clima y la historia de cada lote. En el lote con arvenses y en los tres meses que se recolectaron las muestras, Solanum mammosum y Momordica charantia fueron las arvenses que hospedaron el mayor nmero de nematodos fitoparsitos con 13.347 y 6.990 nematodos/100 g de raz, respectivamente; mientras que todas las dems arvenses obtuvieron valores inferiores a 3.000 nematodos /100 g de races (Figura 1). En el lote comercial de pltano, tambin en los tres meses de muestreo, se registraron a Paspalum paniculatum y Bidens pilosa como las arvenses con mayor nmero de fitonematodos con 6.693 y 4.752 nematodos / 100 g de raz, respectivamente (Figura 1); as mismo, las dems especies de arvenses encontradas presentaron valores inferiores a 3.000 nematodos por 100 g de races (Figura 1). Estos resultados coinciden con lo encontrado por Gonzlez (2006) en Chile en zonas hortcolas y frutales, quien reporta a B. pilosa, como hospedante de nematodos fitoparsitos. Adicional a las arvenses antes descritas, se identificaron 16 especies de arvenses como las principales hospedantes de nematodos fitoparsitos con valores mayores o iguales a 1.000 nematodos/100g de raz, pertenecientes a las familias Asteraceae ( Bidens pilosa,
Tabla 1. Familias y especies de arvenses encontradas en lote con arvenses y comercial de pltano Dominico Hartn en la granja Montelindo Lote con arvenses Lote comercial X 0 0 X X X X 0 X X X 0 0 X 0 X X X 0 X X 0 0
Nombre cientfico
Nombre vulgar
Familia
Chloris radiata Linnaeus. Panicum laxum Linnaeus. Paspalum paniculatum Linnaeus. Rottboellia exaltata Linnaeus.Friis. Digitaria sanguinalis Linnaeus. Eleusine indica Linnaeus. Bidens pilosa Linnaeus. Emilia sonchifolia Linnaeus. Conyza bonaeriensis Linnaeus. Cyperus ferax Linnaeus. Cyperus flavus Linnaeus. Osmunda cinnamomea Linnaeus. Hyptis atrorubens Poit. Jussiaea suffruticosa Linnaeus. Lantana camara Linnaeus. Momordica charantia Linnaeus. Murdannia nudiflora (L.) Brenan, Kew Bull. Borreria laevis (Lam.) Griseb. Cassia tora Linn Phyllantus corcovadensis Muell.Arg. Portulaca oleracea Linnaeus. Sida acuta Burm. Solanum mammosum Linnaeus. X: Presencia, 0: Ausencia
Cola de zorro Pasto mijillo Gramalote Caminadora Guardaroco
Pategallina
Cadillo Hierba socialista Venadillo Cortadera Cortadera Helecho Yerbabuenilla Palo de agua Venturosa Archucha Piita Chiquiza Comida de murcilago Balsillo Verdolaga Escobadura Lulo de perro
Poaceae Poaceae Poaceae Poaceae Poaceae Poaceae Asteraceae Asteraceae Asteraceae Cyperaceae Cyperaceae Dennstaedtiaceae Lamiaceae Onagraceae Verbenaceae Cucurbitaceae Commelinaceae Rubiaceae Fabaceae Euphorbiaceae Portulacaceae Malvaceae Solanaceae
0 X X 0 0 0 X X X X X X X 0 X X 0 X X X 0 X X
Figura 1. Nmero de nematodos en races y suelo de plantas presentes en el lote con arvenses (descanso) y en el lote comercial de pltano Dominico Hartn en la granja Montelindo entre mayo y julio de 2010 .
Emilia sonchifolia, Coniza bonaerensis), Poaceae (Chloris radiata, Panicum laxum, Paspalum paniculatum, Rottboelia exaltata,
Digitaria sanguinalis, Eleusine indica), Euphorbiaceae (Phillantus corcovadensis) y Solanaceae (Solanum mammosum). Segn
Qunherv et al. (2005), stas tres ltimas familias de arvenses, Poaceae (Setaria barbata, Leptochloa filiformis y Eleusine indica), Asteraceae (Mikania micrantha, Vernonia cinerea) y Solanaceae (Solanum americanum) fueron reportadas como hospedantes consistentes de nematodos fitoparsitos en Martinica, en especial de R. similis. Al separar las principales arvenses hospedantes de cada especie de nematodo fitoparsito, se encontraron 13 especies de arvenses hospedantes de R. similis; y con base a la escala de Qunherv et al. (2005), no hubo arvenses buenas o excelentes hospederas de ste fitonematodo. Con base en sta escala, en el lote con arvenses se clasificaron como pobres hospedantes de R. similis a Borreria laevis (Rubiaceae), Phyllanthus corcovadensis (Euphorbiaceae) Cassia tora (Caesalpiniaceae) y Lantana cmara (Verbenaceae) con 654, 540, 295 y 150 nematodos/100 g de raz, respectivamente (Figura 2). Las dems especies de arvenses tuvieron valores inferiores a 100 nematodos / 100 g de races y suelo. Una explicacin para las bajas poblaciones encontradas en ste lote con arvenses, pudo haberse debido a que el nematodo Barrenador (R. similis) tiene una alta preferencia por las races del pltano y sobrevive en niveles poblaciones muy bajos en las arvenses presentes en el lote con arvenses. En el lote comercial de pltano, se encontraron resultados similares a los del lote con arvenses, debido a que no se encontraron arvenses que se clasificaran como buenas o excelentes hospedantes de R. similis (Figura 2). De stas arvenses se puede destacar la especie Borreria laevis donde el nmero de R. similis aument en el lote comercial solo hasta 790 nematodos/100 g de raz; resultados que nuevamente corroboran que ste nematodo fitoparsito tiene una alta preferencia por las races de pltano. Qunherv et al., (2000) encontraron que los principales reservorios de R. similis fueron Phenax sonneratii, Euphorbia heterophylla, Echinochloa colonna, Eleusine indica, Paspalum fasciculatum, Solanum torvum) con un promedio general de 19.200 nematodos/100 g de races secas. De stas arvenses, Eleusine indica es la nica que coincide con las encontradas en ste estudio pero con un valor muy inferior a 33 R. similis /100 de suelo (Figura 2), resultado que son diferentes posiblemente debido al hospedante y las condiciones agroecolgicas diferentes en ambos sitios. En ambos lotes estudiados en la granja Montelindo, el mayor nmero de R. similis se encontr en las arvenses Borreria laevis y Phyllantus corcovadensis, lo que amerita un mayor cuidado en las medidas de manejo de stas arvenses, debido a que son hospedantes del nematodo Barrenador en cultivos comerciales de pltano. Estos resultados no concuerdan con los reportados en una revisin realizada por Marn (1997) quien encontr 49
Suelo
Raz Nmero de nematodos por 100 g de muestra
Figura 2. Nmero de Radopholus similis en races y suelo de plantas presentes en el lote con arvenses y en el lote comercial de pltano Dominico Hartn.
Suelo Nmero de nematodos por 100 g de muestra
Raz
con un nmero de 6.307, 2.501, 2172 y 1.409 nematodos/100 g de raz, respectivamente (Figura 3). Las anteriores arvenses coinciden con los gneros reportados por Qunherv et al. (2005) y Arias (2009) quienes encontraron adems de estas especies, a Euphorbia hirta, Dichromena ciliata, Borreria suaveolens y Phyllanthus niruri, en un estudio realizado en el departamento de caldas en el cultivo Zingiberales y arvenses hospedantes de nematodos fitoparsitos en cultivos de musceas. En las muestras de suelo Panicum laxum, Sida acuta, Cyperus flavus y Paspalum paniculatum fueron las arvenses con mayor nmero con 889, 777, 654 y 649, nematodos/100 g, respectivamente; las dems especies tuvieron valores inferiores a 500 nematodos / 100g. En el lote comercial de pltano, solo fue buena hospedante Eleusine indica para Helicotylenchus spp., con 1.421 nematodos/100 g de raz; las dems arvenses tuvieron valores inferiores a 1.000 nematodos/100 g de raz; siendo consideradas como pobres hospedantes (Figura 3). En las muestras de suelo, todas las arvenses fueron pobres hospedantes de ste nematodos, siendo Borreria laevis la arvense con el mayor nmero de Helicotylenchus spp., con 945 nematodos /100 g de suelo; las dems especies tuvieron valores inferiores a 232 nematodos /100 g (Figura 3). Para el gnero Meloidogyne spp., en el lote con arvenses, se encontr solo a Momordica charantia como buena hospedante con un nmero mximo de 9.313 nematodos / 100 g de raz. En el lote comercial se identificaron las especies Borreria laevis y Murdannia nudiflora con 800 y 1.135 nematodos/100 g de raz, respectivamente (figura no mostrada).
CONCLUSIONES
En los lotes con arvenses y comerciales de pltano de la granja Montelindo de la Universidad de Caldas, las principales arvenses hospedantes para R. similis, fueron Borreria laevis y Phyllantus corcovadensis; para .Helicotylenchus spp., fueron Eleusine indica, Paspalum paniculatum, Panicum laxum, Solanum mammosum y Cassia tora; y para Meloidogyne spp., fueron Momordica charantia, Borreria laevis y Murdannia nudiflora. Los resultados anteriores son tiles para agricultores e investigadores dentro de un programa de manejo integrado de nematodos fitoparsitos, donde se debe tener en cuenta el control de las anteriores arvenses, para idear en el futuro medidas de manejo apropiadas como rotacin de cultivos y para evitar el crecimiento de ellas ya que pueden ser foco de infeccin de los principales fitonematodos del pltano antes de re-sembrar con material de siembra libre de nematodos.
Figura 3. Cantidad de Helicotylenchus spp., en races y suelo de arvenses presentes en el lote con arvenses el lote comercial de pltano Dominico Hartn.
que estos gneros no son hospederos de R. similis, lo cual puede estar relacionado con las caractersticas de los lugares donde se realizaron los muestreos y a las condiciones agro-climticas de cada lugar. De igual manera, los resultados obtenidos en ste estudio son cruciales para idear en el futuro medidas de manejo como rotacin de cultivo y barbecho antes de re-sembrar con material de 50
siembra libre de nematodos como lo expresaron Qunherv et al., (2000). De las 24 arvenses identificadas, se encontraron 22 especies hospedantes de Helicotylenchus spp., y con base a la escala de Qunherv et al. (2005), en el lote con arvenses fueron buenas hospedantes de ste nematodo Paspalum paniculatum, Panicum laxum, Solanum mammosum y Cassia tora
AGRADECIMIENTOS
Los autores agradecen la colaboracin del seor Bernardo Gutirrez, auxiliar del labora-
torio de Fitopatologa, por su apoyo en los procedimientos de extraccin de nematodos.
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ASOCIACIN COLOMBIANA DE FITOPATOLOGIA Y CIENCIAS AFINES - ASCOLFI
XXX Congreso Colombiano y XVI Latinoamericano de Fitopatologa

Bogot (Colombia), Hotel Crowne Plaza Tequendama del 17 al 19 de agosto de 2011.
Actividad conjunta con la ASOCIACIN LATINOAMERICANA DE FITOPATOLOGA - ALF
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EFECTO DE NEMATODOS ENTOMOPATGENOS (Rhabditida: Steinernematidae y Heterorhabditidae) EN LA MORTALIDAD DE JUVENILES Y EN LA INHIBICIN DE LA ECLOSIN DE JUVENILES DE Meloidogyne mayaguensis (Tylenchida)*
Juan Pablo Molina1, Claudia De Mello Dolinski2, Ricardo Moreira Souza2 y Edwin Lewis3
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Corporacin Colombiana de Investigacin Agropecuaria, Corpoica. 2 Universidade Estadual do Norte Fluminense Darcy Ribeiro. CCTA/LEF. 3 Departments of Nematology and Entomology, University of California Davis. e-mail contacto: jpmolina@corpoica.org.co juanpamolina@yahoo.com.b
RESUMEN
Estudios con nematodos entomopatgenos (NEPs) vienen comprobando su interferencia en la infeccin de plantas por fitonematodos, pero an no se sabe cual el estadio afectado por ellos. En este estudio se evalu el efecto de NEPs en la mortalidad de J2 y en la viabilidad de huevos de Meloidogyne mayaguensis. En el primer bioensayo se evalu el efecto de diferentes concentraciones de Steinernema feltiae Sn y Heterorhabditis baujardi LPP7 (100, 300, 600. 1000 JIs/mL), en arena estril, sobre la mortalidad de 300 J2 de M. mayaguensis despus de cinco das post aplicacin. En el segundo bioensayo se utilizaron t 600 y 1000 JIs NEP, para evaluar la mortalidad 1, 3, 5, 7 9 das post tratamiento. En el tercer bioensayo se evalu el efecto sobre la eclosin de juveniles de la aplicacin de 1000 JIS/mL de S. feltiae y de H. baujardi, en 300 huevos de M. mayaguensis en recipientes con una plntula de tomate a los 3, 10, 13, 16 y 19 das despus de la aplicacin. En el primer bioensayo, las concentraciones de 600 y 1000 JIs de H. baujardi LPP7 causaron las mayores mortalidades comparadas con el testigo (32,3 36,4 vs. 16,2%). En el segundo bioensayo, la mortalidad de J2 fue creciente del 3 al 9 da, donde 1000 JIs de H. baujardi LPP7 indujeron mortalidades entre 41,7% a 90,8% y, 1000 JIs de S. feltiae Sn causaron mortalidad del 27,3% a 80,3%. En el tercer bioensayo la eclosin fue ms influenciada por los NEP del 3 al 19 da, donde S. feltiae Sn redujo la eclosin para 32,3% y H. baujardi para 42,06%, significativamente diferente del testigo (68,33%). Se puede afirmar que algunos NEP poseen efecto directo en la mortalidad y eclosin en M. mayaguensis. Palabras claves: control biolgico, nematodos fitoparsitos
SUMMARY
Studies with entomopathogenic nematodes (EPNs) have being proving interference on the infection by plant parasitic nematodes, but it is still unknown which the stage affected by these EPN. This study evaluated the effect of NEPs on the mortality of J2 and eggs hatching of Meloidogyne mayaguensis. In the first biossay it was evaluated at five days, the effect of different concentrations of Steinernema feltiae Sn and Heterorhabditis baujardi LPP7, (100, 300, 600 and 1000 IJs/mL) in the mortality of 300 J2 of M. mayaguensis, in sterile sand, after five days. In the second biossay 600 and 1000 IJs of same NEPs were used, being the mortality evaluated at 1, 3, 5, 7 and 9 days. In the third biossay egg hatching was evaluated, after application of 1000 IJs/mL of S. feltiae and of H. baujardi, on 300 eggs of M. mayaguensis in recipients with a tomato seedling, at 3, 10, 13, 16 and 19 days. In the first biossay, the concentrations of 600 and 1000 IJs of H. baujardi LPP7 caused the highest mortalities compared to control (32.3 and 36.4 vs. 16.2%). In the second biossay, J2 mortality was higher from 3rd to 9th day, when 1000 IJs of H. baujardi LPP7 caused mortalities from 41.7% to 90,8% and 1000 IJs of S. feltiae Sn caused mortality between 27.3% and 80.3%. In the third biossay, egg hatching was more influenced by NEP from 3rd to 19th day, when S. feltiae Sn decreased until 32,3% and H. baujardi to 42,06%, significantly different to the control (68,33%). It was possible to assure that some EPNs produced some effect on the mortality and hatching of M. mayaguensis Key words: biological control, plant parasitic nematodes
INTRODUCCIN
En el control de algunas especies de nematodos fitoparsitos han sido reportados varios microorganismos del suelo con respuesta antagonista, pero pocos han presentado alta efectividad en la reduccin de la poblacin de estos fitonematodos, por tanto, se requiere explorar la diversidad y potencialidad de nuevos agentes para su control (Meyer y Roberts, 2002). De acuerdo con Eapen et al (2004), el efecto antagonista de algunos hongos como Aspergillus spp., Fusarium spp., Trichoderma spp., Pochonia spp., aplicados en huevos de fitonemtodos, consisti en la inhibicin de la eclosin, efecto atribuido a un factor exgeno, lo que indica la existencia de otros mecanismos adems del parasitismo. En el caso especfico de la accin de hongos, ocurre una
desintegracin enzimtica de la capa vitelina y de la quitina, que aumentan la permeabilidad de la cscara de huevo y favorece la penetracin del micelio, a fin de aumentar la desintegracin de su contenido. De acuerdo con Meyer y Roberts (2002), la bacteria Burkholderia cepacica (Palleroni y Hohnes) inhibi la eclosin de juveniles por un perodo prolongado y afect la movilidad de J2 de Meloidogyne incognita (Chitwood) (Tylenchida: Meloidogynidae). Algunos trabajos aplicando nematodos entomopatgenos (NEPs) (Rhabditida: Heterorhabditidae y Steinernematidae) sobre diferentes especies de nematodos parsitos de plantas (NPPs) muestran que existe efecto sobre la inhibicin de la eclosin y de la penetracin de los juveniles (Prez y Lewis, 2004). Lewis et al (2001) evaluaron el efecto de diferentes dosis de JIs de Steinernema
feltiae (Filipjev) sobre J2 y huevos de y M. incognita, verificando que en las menores concentraciones (100 y 500 JIs) ocurri la mayor reduccin de eclosin del experimento. Trabajos posteriores de Prez y Lewis (2002) mostraron que las especies S. riobrave (Cabanillas et al.) y S. feltiae redujeron la produccin de huevos y eclosin de juveniles de M. incognita. En cuanto al efecto de NEPs sobre juveniles de fitonemtodos, algunos trabajos como los realizados por Prez y Lewis (2004), mostraron que JIs de S. feltiae tuvieron un efecto en la disminucin de la penetracin de juveniles tanto de M. hapla (Chitwood) como de M. incognita en races de cacahuete y tomate. Hu et al., (1999) afirman que los alelo qumicos de nematodos entomopatgenos y/o sus bacterias causan toxicidad, repelencia y afectan la eclosin en fitonem53
todos. Sin embargo, an existe controversia sobre el efecto directo de los NEPs sobre los diferentes estadios infectivos de los fitonematodos (Lewis y Grewal, 2005). As, este trabajo tuvo por finalidad evaluar el efecto de JIs de S. feltiae Sn y Heterorhabditis baujardi LPP7 (Phan et al.) en la mortalidad de J2 y en la eclosin de juveniles de M. mayaguensis.
MATERIALES Y MTODOS
El experimento se realiz en el Laboratorio de Entomologa y Fitopatologa de la Universidad Estatal del Norte Fluminense Darcy Ribeiro (UENF), Campos Rio Janeiro, Brasil de Julio a Diciembre de 2006. Se utilizaron dos especies de NEPs, S. feltiae Sn (Filipjev) originara de Estados Unidos y H. baujardi LPP7 (Phan et al.) aislada de la selva amaznica en Monte Negro, RO, Brasil. Esos NEPs se multiplicaron y reactivaron in vivo en larvas en el sptimo instar de Galleria mellonella L. (Lepidoptera: Pyralidae), de acuerdo con la metodologa descrita por Woodring y Kaya (1988). Se utiliz el fitonemtodo M. mayaguensis (Rammah y Hirschmann). Los Juveniles de segundo instar (J2) y los huevos usados en los bioensayos se extrajeron de races de guayabos provenientes del municipio de San Joo da Barra-RJ, y multiplicados en plantas de tomate de la variedad Santa Cruz Gigante (Top Seed Petropolis-RJBrasil). Despus de 12 semanas, las races de tomate con agallas se extrajeron y cortaron, de acuerdo con la metodologa descrita por Lewis et al. (2001); las races infectadas por el nematodo se colocaron en hipoclorito de sodio a 0,05%, agitadas con suavidad entre los dedos por aproximadamente dos minutos para extraccin de huevos. Otra muestra de races se colocaron en placas de Petri (15 cm de dimetro), sobre una malla de metal con papel absorbente, levemente humedecido con cinco mL de agua destilada estril (ADE), en agitacin constante por 24 horas a 25 C, con el objeto de extraer J2 de M. mayaguensis, Los huevos y juveniles recin eclosionados, se utilizaron en un tiempo no superior a 24 horas. Una vez extrados los JIs dos NEPs y los huevos y J2 de M. mayaguensis, se establecieron los respectivos experimentos, as: Evaluacin del efecto de diferentes concentraciones de juveniles infectantes de S. feltiae y H. baujardi en la mortalidad de juveniles de M. mayaguensis. Se evalu el efecto de dos especies de nematodos, S. feltiae Sn y H. baujardi LPP7, aplicadas en cuatro concentraciones (100, 300, 600 y 1000 JIs /mL) sobre 300 J2 de M. mayaguensis. La unidad experimental (UE) fue un plato de Petri (4,5 cm de dimetro) con 20 g de 54
arena estril, siendo aplicadas las concentraciones de JIs y J2, de acuerdo con los tratamientos. Los platos se sellaron con PVC para evitar contaminacin y mantenidos a la temperatura de 25 C (Cmara de Germinacin MOD.347 CDG-FANEM) por 5 das. Los J2 de M. mayaguensis se extrajeron en el laboratorio por el mtodo de flotacincentrifugacin en solucin de sacarosa (Jenkins, 1964) y se contaron en lmina de Peters. Ese bioensayo se estableci en un diseo completamente aleatorio con esquema factorial 2 X 4 (ocho tratamientos con ocho repeticiones cada). La variable evaluada fue el porcentaje de mortalidad de J2. Se analizaron los factores especie de nematodo y concentracin de JIs, para determinar que factor (Es) determina la mortalidad (m) de los juveniles de M. mayaguensis. Cuando la interaccin simple entre los factores de los tratamientos evaluados (concentracin y especie de nematodo) fue significativa (P<0,05), se compar las promedios por la prueba de Duncan (P<0,05). De esa forma fueron seleccionadas las especies de NEPs y las concentraciones que tuvieron mayor efecto en la mortalidad de los juveniles de M. mayaguensis. Adicionalmente, para evaluar el efecto de los tratamientos y del testigo en la mortalidad de los juveniles, se hizo anlisis de varianza (P<0,05), donde al existir significancia, los promedios fueron comparados por Duncan (P<0,05). Para el anlisis estadstico se utiliz el programa SAEG (2001).
Para la variable independiente, das de evaluacin, se hizo un anlisis de regresin, aplicando la prueba t (P<0,05), para evaluar la significancia de los coeficientes de la regresin. Para el anlisis estadstico, se utiliz el programa SAEG (2001). Evaluacin del efecto del tiempo de exposicin a juveniles infectantes de S. feltiae y H. baujardi en la eclosin de juveniles de M. mayaguensis Se aplicaron 1000 JIs/mL de S. feltiae Sn y H. baujardi LPP7 en 300 huevos/mL de M. mayaguensis en recipientes con agua y tres plntulas de tomate de 12 cm de altura y tres pares de hojas, mantenidos bajo agitacin constante (TECNALte-420) a 26 2C. La eclosin se evalu a los 3, 10, 13, 16 19 das, despus del tratamiento. Los testigos fueron: uno relativo, con plntulas de tomate y huevos de M. mayaguensis, y otro absoluto con huevos, pero sin plntulas de tomate. El bioensayo se estableci siguiendo un diseo completamente aleatorio, con cuatro tratamientos y ocho repeticiones. La unidad experimental (UE) consisti en un vaso plstico de 100 mL con 40 mL de la mezcla de agua con huevos, JIs y plntulas, de acuerdo con los tratamientos. Para cada da de evaluacin, por UE se extrajo una alcuota de 1 mL para conteo de los juveniles eclosionados en lmina de Peters. Se hizo un anlisis de varianza (P<0,05) para comparar la variable porcentaje de eclosin en cada da de evaluacin, se aplic la prueba Duncan (P<0,05). Para la variable independiente das de evaluacin, se hizo un anlisis de regresin, aplicando la prueba t (P<0,05), para evaluar la significancia de los coeficientes de la regresin. Para el anlisis estadstico, se utiliz el programa SAEG (2001).
Evaluacin del efecto del tiempo de exposicin a juveniles infectantes de S. feltiae y H. baujardi en la mortalidad de juveniles de M. mayaguensis Se aplicaron dos concentraciones de S. feltiae Sn y H. baujardi LPP7 (600 1000 JIs) sobre 300 juveniles de M. mayaguensis. En el testigo se aplic ADE sin JIs. La mortalidad se evalu a los 1, 3, 5, 7 y 9 das. El bioensayo se estableci en un diseo completamente aleatorio con cinco tratamientos. Para cada tratamiento, por tiempo de evaluacin, fueron procesadas ocho repeticiones, as, cada tratamiento tuvo un total de 40 repeticiones. La UE fue un plato de Petri (4,5 cm de dimetro) con 20 g de arena estril, siendo aplicadas las concentraciones de JIs y J2 de M. mayaguensis, de acuerdo con los tratamientos. Los platos se sellaron con PVC para evitar contaminacin y mantenidos a la temperatura de 25 C (Cmara de germinacin MOD.347 CDG-FANEM). Despus cada perodo de evaluacin, por el mtodo de la flotacincentrifugacin en solucin de sacarosa (Jenkins, 1964), se extrajeron los JIs y J2 de la arena y contados en lmina de Peters. Se hizo un anlisis de varianza (P<0,05) para comparar la variable mortalidad en cada da de evaluacin y se aplic la prueba Duncan (P<0,05) para comparacin de las Promedios.
Efecto de diferentes concentraciones de juveniles infectantes S. feltiae y H. baujardi en la mortalidad de juveniles de M. mayaguensis. Para la variable porcentaje de mortalidad de M. mayaguensis hubo diferencias significativas en el factor concentracin (F=8,53 Gl=3, P<0,05), siendo que la mayor concentracin de 1000 JIs present la mayor mortalidad del bioensayo con 34,651,03, siendo diferente (Duncan P<0,05) de la mortalidad encontrada en las otras concentraciones (Tabla 1). De la misma forma, la concentracin de 600 JIS tuvo efecto en la mortalidad con 32,00 0,89. Con relacin al efecto de las especies de NEP evaluadas en cuanto a lo variable Porcentaje de mortalidad, no presentaron diferencias entre S. feltiae Sn y H. baujardi LPP7 con 31,88 5,17 30,64 2,97, respectivamente (P=0,2420) (Tabla 1). Las concentraciones de 1000 JI, 600 JI y las dos especies de nema-
todos se seleccionaron para los bioensayos posteriores. En cuanto al efecto de los diferentes tratamientos en la mortalidad de juveniles de M. mayaguensis, todos presentaron diferencias (P<0,05) con relacin al testigo, destacndose los tratamientos H. baujardi y S. feltiae en las concentraciones de 1000 JIs, causando mortalidades de 36,31 y 32,99% respectivamente (Tabla 1). Efecto del tiempo de evaluacin a juveniles infectantes S. feltiae y H. baujardi en la mortalidad de juveniles de M. mayaguensis Ocurrieron diferencias significativas entre los das de evaluacin (F=246,27; GL=4; P<0,05), entre las concentraciones y especies de NEPs (F=71,68, GL=4, P<0,05) y en la interaccin de todos los factores (F=2,74; GL=16; P<0,05). La mortalidad de los J2 fue creciente del 1 al 9 da en todos los tratamientos evaluados, con la mayor mortalidad en el ltimo da de evaluacin. En la concentracin de 1000 JIs de H. baujardi LPP7 se encontr la mayor mortalidad acumulada en el 3 y 9 das (Tabla 2), desde el 3 da, a ms alta concentracin de S. feltiae Sn se destac de las dems, igualando a H. baujardi LPP7 en el 3 y 5o das. Efecto del tiempo de exposicin a juveniles infectantes S. feltiae y H. baujardi en la eclosin de juveniles de M. mayaguensis Hubo diferencias significativas en la eclosin de juveniles de M. mayaguensis entre los das de evaluacin (F=240,64; GL=4 P<0,05), entre los tratamientos (F=125,52; GL=3; P<0,05) y en la interaccin de los das de evaluacin y los tratamientos (F=8,47; GL=15; P<0,05). En evaluaciones previas, se vio la necesidad de colocar una plntula de tomate para estimular la eclosin de los juveniles y evitar errores en la evaluacin del experimento. As, desde el tercer da, tanto los JIs de H. baujardi LPP7 como de S. feltiae Sn, redujeron la eclosin en un 4,78% y 5,13%, respectivamente, siendo estos valores diferentes (P<0,05) de la eclosin encontrada en los testigos evaluados (Tabla 3). En el dcimo da, se puso en evidencia que los tratamientos con NEPs causaron algn tipo de interferencia, disminuyendo la eclosin (Tabla 3). En el decimotercero da, se mantuvo la misma tendencia, sin embargo los NEPs presentaron reduccin en la eclosin estadsticamente semejante a la encontrada en el testigo absoluto, pero diferente del testigo relativo (22,78; 20,11; 22,93 35,61, respectivamente) (Tabla 3). En el decimosexto da, el tratamiento con S. feltiae Sn fue el que ms redujo la eclosinde los juveniles de M. mayaguensis, siendo diferente de los testigos relativo y
Tabla 1. Comparacin entre las mortalidades Promedio (%) de J2 de Meloidogyne mayaguensis despus de la aplicacin de los nematodos Heterorhabditis baujardi y Steinernema feltiae. Mortalidad Promedio (%) error estandar Concentracin Promedio H. baujardi LPP7 S. feltiae Sn Concentracin (%) 100 JIs 28,82 0,87 28,46 1,47 28,64 1,25C 300 JIs 30,14 1,86 29,37 3,15 29,76 0,45BC 600 JIs 32,28 4,04 31,73 2,24 32,00 0,89B 1000 JIs 36,31 2,37 32,99 5,94 34,65 1,03A Promedio 31,88 5,17A 30,64 2,97A Promedios seguidos de la misma letra, en la columna y en la lnea para la misma variable por factor analizado, no difieren entre s por la prueba de Duncan (P<0,05) Tabla 2. Efecto de la concentracin de juveniles de Heterorhabditis baujardi y Steinernema feltiae en la mortalidad de J2 de Meloidogyne mayaguensis en el tiempo Mortalidad acumulada (Promedio error estandar) segn das de evaluacin Tratamientos 1 3 5 7 9 Testigo 3,500,92 B 15,501,83 C 28,172,02 B 46,332,64 D 51,173,42 C 600 JIs H. baujardi 10,501,26 AB 17,331,59 C 45,335,07 B 62,503,87 C 64,831,79 BC 1000 JIs H. baujardi 21,831,42 A 41,663,02 A 73,334,12 A 86.924,56 A 90,747,04 A 600 JIs S. feltiae 7,520,56 B 19,831,62 C 43,042,43 B 52,500,56 CD 64,503,15 BC 1000 JIs S. feltiae 17,671,82 AB 27,171,96 B 62,127,65 A 77,678,43 AB 80,333,37 B Promedios seguidos de la misma letra, en la columna y en la lnea para la misma variable por factor analizado, no difieren entre s por la prueba de Duncan (P<0,05) Tabla 3. Efecto de la concentracin de juveniles infectantes de H. baujardi y S. feltiae en la eclosin de juveniles de Meloidogyne mayaguensis en el tiempo Porcentaje de Eclosin (Promedio Error estndar) segn das de evaluacin Tratamiento 3 10 13 16 19 JIs Hb + raz 4,780,69 B 19,831,53 A 22,781,61 A 34,111,09 B 42,062,13 BC JIs Sf + raz 5,130,38 B 19,212,29 A 20,111,44 A 24,611,32 A 32,281,52 A TR: huevos + raz 12,050,42 A 27,282,51 B 35,611,80 B 60,072,54 C 68,332,34 BC TA: huevos sin raz 8,561,05 AB 23,442,44 B 22,932,43 A 38,782,37 B 50,783,59 AB Promedios seguidos por letras distintas en la columna, difieren entre s en prueba de Duncan (P<0,05). TR: Testigo relativo; TA: Testigo absoluto; Hb: Heterorhabditis baujardi LPP7; Sf: Steinernema feltiae Sn
absoluto (24,61; 60,07 y 38,78%, respectivamente) (Tabla 3). El Porcentaje de eclosin bajo efecto de H. baujardi LPP7 fue semejante a los testigo absolutos, pero diferente de los relativos, mostrando que los JIs estn causando algn efecto, disminuyendo la eclosin normal de los juveniles (34,11; 38,78 60,07, respectivamente). En el decimonoveno da, fue registrada la mxima disminucin de la eclosin encontrada en todos los tratamientos, causada por S. feltiae Sn con relacin al testigo absoluto (32,28 y 50,78%, respectivamente), evidenciando una vez ms el papel de la plntula de tomate como estmulo en la eclosin de los juveniles de M. mayaguensis y el efecto negativo de los NEPs. En todos los bioensayos fue evidente el efecto de la aplicacin de los nematodos entomopatgenos en la mortalidad y en la inhibicin de la eclosin de los juveniles de M. mayaguensis en el tiempo, dependiendo de la concentracin de JIs utilizada, pero independientemente de la especie de NEP. En cuanto a los juveniles de M. mayaguensis, fue evidente que la aplicacin de altas concentraciones de JIs increment de forma creciente la mortalidad hasta el da final de evaluacin. Aparentemente, la mortalidad causada a los juveniles de M. mayaguensis por los JIs de los NEPs evaluados se debi a un efecto txico de stos. De acuerdo con experimentos preliminares recientemente realizados en el laboratorio de Nematologia da UENF-Campos-RJ Brasil por Molina y
Ferreira (Datos no publicados), los JIs de H. baujardi y S. feltiae, en la presencia de juveniles de M. mayaguensis, aparentemente liberan sus bacterias simbiontes en medio Nutritivo slido. De esta manera, podra existir algn efecto asociado a las bacterias simbiontes de H. baujardi y S. feltiae que estaran causando la mortalidad de los juveniles de M. mayaguensis. De otra parte, segn Grewal et al (1999), posiblemente los aleloqumicos de los JIs y de las bacterias simbiontes tienen un efecto repelente y txico sobre los juveniles de algunas especies de fitonemtodos. En cuanto al efecto de los nematodos entomopatgenos en la eclosin de los juveniles de M. mayaguensis, fue evidente que con el incremento de los das de evaluacin, ocurri una inhibicin y decrecimiento en la eclosin, en la presencia de races de tomate como estimulador, pudiendo existir alguna interferencia y/o efecto txico de S. feltiae y H. baujardi o sus bacterias simbiontes. As mismo, Lewis et al. (2001) determinaron la reduccin de la eclosin de J2 de M. incognita, extrados de races plantadas en arena, previamente inoculadas con JIs de S. feltiae. Despus la extraccin de los huevos en agua por una semana, se verific una alta inhibicin en la eclosin, fenmeno que no ocurri con huevos extrados de races, en las cuales no fue aplicado S. feltiae. El efecto letal pudo estar asociado a las bacterias simbiticas de H. baujardi y S. feltiae, que podran causar algn efecto inhibitorio a la eclosin 55
de juveniles de M. mayaguensis. Segn Le y Webster (1999), alelo qumicos como amonio e ndol, producidos por nematodos entomopatgenos y/o sus bacterias simbiontes (Xenorhabdus spp. y Photorhabdus spp), estaran relacionados en la reduccin de la eclosin de los juveniles J2 en fitonemtodos. De esta forma, se estableci que juveniles infectantes tanto de S. feltiae como de H. baujardi y/o sus bacterias simbiticas, causan algn tipo de toxicidad, interferencia o inhibicin sobre los juveniles y huevos de M. mayaguensis. Sin embargo, se deben realizar ms estudios especficos, con nfasis en las bacterias simbiontes.
AGRADECIMIENTOS
Los autores agradecen al Dr. Juvenil Enrique Cares Ph.D Fitopatologa de la Universidad de California, Riverside, E.U.A., actualmente asociado a la Universidad de Brasilia (Brasil) y la Dra. Nancy Eunice Nio M. Sc en Fitopatologa Universidad Nacional de Colombia, por sus valiosos aportes en la revisin general del texto y por su conocimiento en el rea nematolgica.
Eapen, S. J., Beena, B. y Ramana, K. V. 2005. Tropical soil microflora of spicebased cropping systems as potential antagonists of root-knot nematodes. Journal of Invertebrate Pathology 88:218225. Grewal, P. S. , Lewis, E. E. y Venkatachari, S. 1999. Allelopathy: a possible mechanism of supression of plantparasitic nematodes by entomopathogenic nematodes. Nematology 1:735-743. Jenkins, W. R. 1964. A rapid centrifugalflotation technique for separating nematodes from the soil. Plant Disease Report 48: 692. Lewis, E. E. y Grewal, P. S. 2005. Effects of entomopathogenic nematodes on plantparasitic nematodes. In: Nematodes as biocontrol agents (P. S. Grewal, R. U. Ehlers and D. Shapiro-Ilan, Eds.), CABI Publishing, Wallingford, UK, p. 349-361. Lewis, E. E., Grewal, P. S. y Sardanelli, S.
CONCLUSIONES
Existi un efecto antagnico de los nematodos entomopatgenos en la mortalidad de juveniles y en la reduccin de la eclosin de juveniles de M. mayaguensis. Los JIs de H. baujardi y S. feltiae, influyeron en la mortalidad de los juveniles de M. mayaguensis, principalmente en las mayores concentraciones evaluadas, siendo creciente hasta el noveno da de tratamiento. Los JIs de S. feltiae y H. baujardi determinaron una disminucin de la eclosin a lo largo perodo de observacin, as mismo, en la presencia de un estimulante de la eclosin (raz de tomate).
2001. Interactions between the Steiner nema feltiae Xenorhabdus bovienii insect pathogen complex and the root-knot nematode Meloidogyne incognita. Biological Control 21:55-62. Meyer S. L. F. y Roberts D. P. 2002. Combinations of biocontrol agents for management of plant parasitic nematodes and soil borne plant pathogenic fungi. Journal of Nematology 34:1-8. Prez, E. E. y Lewis, E. E. 2002. Use of entomopathogenic nematodes to suppress Meloidogyne incognita on greenhouse tomatoes. Journal of Nematology 34: 171174. Prez, E. E. y Lewis, E. E. 2004. Suppression of Meloidogyne incognita and Meloidogyne hapla with entomopathogenic nematodes on greenhouse peanuts and tomatoes. Biological Control 30: 336-341 SAEG (Sistema para anlises estatsticas e genticas, verso 9.0.) 2001. desenvolvido pela Fundao Artur Bernardes da Universaidade Federal de Viosa (UFV-MG-Brasil). Woodring, J. L. y Kaya, H. K. 1988. Steinernematid and heterorhabditid nematodes: a handbook of techniques. Arkansas Agricultural Experiment Station, Fayetteville, AK. Series Bulletin 331.
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EFECTO DE BACTERIAS ENTOMOPATGENAS Xenorhabdus y Photorabdus Y SUS METABOLITOS SOBRE JUVENILES Y HUEVOS DE Meloidogyne mayaguensis (Tylenchida)*
Juan Pablo Molina1, Claudia De Mello Dolinski2, Ricardo Moreira Souza2, Arnubio Valencia3, Viviane Dalbon2 y Edwin Lewis4 Corporacin Colombiana de Investigacin Agropecuaria, Corpoica, 2Universidad Estatal del Norte Fluminense Darcy Ribeiro. CCTA/LEF, 3Empresa de pesquisa agropecuaria EMBRAPA, Recursos Genticos e Biotecnologia. 4 Departments of Nematology and Entomology, University of California Davis. e-mail contacto: jpmolina@corpoica.org.co juanpamolina@yahoo.com.br
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RESUMEN
Recientes estudios sugieren que las bacterias simbiontes portadas por los nematodos entomopatgenos poseen efecto en la viabilidad de fitonematodos. En este estudio fue evaluado el efecto de dos bacterias, Xenorhabdus sp. y Photorhabdus sp., multiplicadas en dos concentraciones de inculo en medio nutriente N lquido, siendo aplicadas las bacterias y sus productos metablicos sobre J2 y huevos de Meloidogyne mayaguensis en tres experimentos: el primer experimento evalu el efecto directo de las suspensiones bacterianas multiplicadas. El segundo experimento evalu el efecto de los productos bacterianos sin bacterias y en el tercer experimento se evalu el efecto de metabolitos primarios sobre J2 y huevos de M. mayaguensis. En el primer experimento, las altas concentraciones de las suspensiones bacterianas de Photorabdus sp., causaron mortalidad del 54,61% en J2 y de Xenorhabdus sp., causaron reduccin del 5,4% en la eclosin de J2. En el experimento 2, los productos metablicos logrados de las bacterias en la mayor concentracin de Xenorhabdus sp. y Photorabdus sp., causaron mortalidades en J2 entre 44 y 57%. De la misma forma la mayor inhibicin en la eclosin de juveniles fue entre 34 y 45%, evidenciando el efecto directo de metablitos primarios, secundarios y toxinas en la mortalidad de J2 y reduccin de la eclosin de M. mayaguensis. En el tercer experimento, metablitos primarios de Xenorhabdus sp. y Photorabdus sp., tuvieron poca influencia en la mortalidad de los J2, entre 6 y 8%, y no tuvieron efecto en la eclosin de huevos de M. mayaguensis. As puede ser atribuido el mayor efecto en la mortalidad de J2 y en la inhibicin de la eclosin, principalmente a metabolitos secundarios y toxinas derivados de las bacterias evaluadas. Palabras claves: control biolgico, eclosin, nematodo fitoparsitos
SUMMARY Recent studies suggest that symbiotic bacterias of entomopathogenic nematodes affect the viability of plant parasitic nematodes. In this work the effect of two bacterias were evaluated: Xenorhabdus sp. and Photorhabdus sp., were multiplied in two concentrations in nutrient liquid medium, being applied bacteria and metabolic products on J2 and eggs of Meloidogyne mayaguensis in three experiments: The first experiment evaluated the direct effect of the multiplied bacterial suspensions. The second one evaluated the effect of bacterial products without bacteria and in the third experiment the effect of primary metabolites was evaluated on J2 and eggs of M. mayaguensis. In the first experiment, the bacterial suspension in high concentration of Photorabdus sp. caused J2 mortality of 54.61% and of Xenorhabdus sp. caused a reduction of 5.40% egg hatching. In the second experiment, metabolic products of bacteria in high concentration of Xenorhabdus sp. and Photorabdus sp. caused J2 mortality between 44 and 57%. In the same way the highest inhibition of egg hatching was between 34 and 45%, evidencing the direct effect of primary and secondary metabolites and toxins on the mortality of J2 and reduction of egg hatching of M. mayaguensis. In the third experiment, primary metabolites of Xenorhabdus sp. and Photorabdus sp. had low effect on J2 mortality, between 6 and 8%, and it did main not have any effect on egg hatching of M. mayaguensis. Therefore, the main effect of bacteria on increased mortality of J2 an egg hatching inhibition, may be attributed to secondary metabolites, since poor effect of primary metabolites was evidenced. Key words: biological control, metabolites, hatching, plant parasitic nematodes.
INTRODUCCIN
Las bacterias Xenorhabdus spp. y Photorhabdus spp., se encuentran en simbiosis con nematodos entomopatgenos de los gneros Steinernema y Heterorhabditis, respectivamente. Esas bacterias simbiontes presentan toxicidad oral e inyectable en insectos y otros artrpodos (Boemare, 2002). Como varias otras bacterias Gram-negativas, Xenorhabdus spp. y Photorhabdus spp., producen endotoxinas. Las endotoxinas de X. nematophilus (Akhurst) consisten de lipopolissacaridos que han mostrado alta toxicidad a insectos (Dunphy y Webster, 1988). En cuanto al efecto de las bacterias simbiontes en fitonemtodos, an no est claro si
la bacteria tiene algn efecto directo en la mortalidad o en la viabilidad de J2 y/o huevos (Lewis y Grewal, 2005). Jagdale et al. (2002) sugieren que el complejo nematodobacteria asociada, tanto bajo la forma de juveniles infectantes (JIs) vivos como muertos, poseen algn efecto en la disminucin de algunos fitonemtodos, pero no est claro si el efecto es consecuencia de la accin de la bacteria, del nematodo o del complejo. Trabajos realizados por Fallon et al. (2002) demostraron el efecto del complejo nematodo-bacteria S. feltiae - X. bovienii (Givaudan) aplicando una concentracin de 1010mL-1 unidades formadoras de colonia (UFC), observaron una reduccin en la penetracin des juveniles, siendo ese efecto atri2010 Fitopatologa Colombiana /Volumen 34 No 2
buido a una posible repelencia del complejo a los fitonemtodos. Recientes investigaciones realizadas por Jagdale y Grewal (Datos no publicados) citados por Lewis y Grewal (2005) establecieron que el uso de las bacterias simbiontes Xenorhabdus spp. y Photorhabdus spp., presentan efecto en la reduccin de poblaciones de fitonemtodos. Por otro lado, Siddiqui y Mahmood (1999) afirman que la disminucin de fitonemtodos puede ser debida a metabolitos bacterianos, que estaran reduciendo la eclosin de juveniles. Especficamente, la actividad txica de las bacterias simbiontes sobre los fitonemtodos an se discute. As, ese trabajo tuvo como 57
objetivo evaluar el efecto de dos bacterias entomopatgenos Xenorhabdus sp. y Photorhabdus sp., aisladas de los nematodos S. feltiae Sn (Filipjev) y H. baujardi LPP7 (Phan et al.) respectivamente, en la eclosin y mortalidad de J2 de Meloidogyne mayaguensis (Rammah y Hirschmann) y separar los metabolitos responsables de ese efecto.
MATERIALES Y MTODOS Los estudios se realizaron en el Laboratorio de Entomologa y Fitopatologa de la Universidad Estatal del Norte Fluminense Darcy Ribeiro (UENF), en Campos, Rio de Janeiro, Brasil, de Agosto a Diciembre de 2006 y de Mayo a Agosto de 2007. En la investigacin se utilizaron dos especies de NEPs (Rhabditida: Steinernematidae y Heterorhabditidae): Steinernemia feltiae Sn (Filipjev) y Heterohabditis baujardi LPP7 (Phan et al.), siendo la primera especie originaria de Estados Unidos y la segunda aislada de la selva amaznica en Monte Negro, Roraima, Brasil. Las especies de NEPs, se multiplicaron y reactivaron in vivo en larvas en el sptimo instar de Galleria mellonella L. (Lepidoptera: Pyralidae), de acuerdo con Woodring y Kaya (1988). El fitonematodo objetivo utilizado fue el M. mayaguensis. Los juveniles de segundo estadio (J2) y los huevos usados en los bioensayos se extrajeron de races de guayaba provenientes del municipio de San Joo da Barra-RJ, y multiplicados en tomateros de la variedad Santa Cruz. Aislamiento de bacterias simbiontes de nematodos entomopatgenos en medio Nutriente lquido Para el aislamiento se utilizaron dos concentraciones de JIs (600 y 1000) para cada especie de nematodo entomopatgeno empleado. Los JIs se centrifugaron en tubos Eppendorf de un mL a 1200 rpm por un minuto (Eppendorf Centrifugue 5415C). El sobrenadante se retir y se agreg un mL de solucin esterilizante [NaOCl 12%, NaOH 4 mol y agua destilada estril ADE)]. Se llev a centrifugacin por ms de un minuto. La solucin se removi y se aadi un mL de ADE, por dos veces ms. Se inocul un mL de los JIs, de acuerdo con la concentracin y especie en un Erlenmeyer de 25 mL conteniendo 10 mL de medio de cultivo Nutriente (N) lquido estril. El medio de cultivo y los JIs se mantuvieron en agitacin constante (TECNALte-420) a 28 C durante 24 horas, para que los JIs liberasen las bacterias simbiontes en medio. Conteo de bacterias en medio de cultivo Las bacterias multiplicadas se cuantificaron y se confirm su base. De acuerdo con Neder (1992), para establecer el nmero de UFC en medio a cultivo, se retir una alcuota de 1 58
mL de medio de cultivo para distribuirlas en en platos de Petri (9 cm) con N slido, mantenidas por 24h a una temperatura de 28C (Cmara de Germinacin MOD.347 CDGFANEM). Para la identificacin de las diferentes suspensiones bacterianas en las diferentes concentraciones fueron nombradas, segn la especie bacteriana, de la siguiente manera: Xenorhabdus sp., en baja concentracin, Xenorhabdus 1; Xenorhabdus sp. en alta concentracin, Xenorhabdus 2; Photorabdus sp., en alta y baja concentracin, Photorhabdus 1 y Photorhabdus 2, respectivamente. Determinacin del efecto de bacterias entomopatgenas sobre juveniles y huevos Para la determinacin del efecto de las bacterias entomopatgenas Xenorhabdus sp. y Photorhabdus sp., aisladas de los nematodos S. feltiae Sn (Filipjev) y H. baujardi LPP7 (Phan et al.), sobre juveniles y huevos de Meloidogyne mayaguensis, se establecieron diferentes experimentos, segn se detalla a continuacin: Determinacin del efecto de bacterias entomopatgenas sobre juveniles (J2) Para determinar el efecto de las suspensiones bacterianas entomopatgenas sobre los juveniles, se realizaron dos ensayos; uno en arena y otro en medio nutritivo (N) lquido, as: Suspensiones bacterianas en arena. Se utilizaron platos de Petri (4,5 cm) con 20 g de arena autoclavada humedecida con 5 mL del medio N lquido con las clulas bacterianas, y se agregaron 300 J2 de M. mayaguensis. Como testigo absoluto, se aplicaron J2 de M. mayaguensis en ADE en la arena, y como testigo relativo, se aplicaron los J2 en N lquida sin bacteria en la arena. Las bacterias se evaluaron bajo dos condiciones, con y sin calentamiento. El calentamiento de las suspensiones bacterianas se efectu a 100 C por 10 min. Los platos de Petri se mantuvieron por 24h a una temperatura de 28C (Cmara de Germinacin MOD.347 CDG-FANEM). El bioensayo se estableci en un diseo completamente aleatorio, en esquema factorial 2x2x2+2 (dos especies de bacteria, dos concentraciones y dos condiciones de la bacteria) y los testigos absoluto y relativo, totalizando 10 tratamientos y 10 repeticiones. La unidad experimental fue la placa de Petri con arena. Despus de tres das los J2 de M. mayaguensis se retiraron de la arena por el mtodo de la flotacin-centrifugacin en solucin de sacarosa (Jenkins, 1964) y se estableci el Porcentaje de mortalidad de J2 de M. mayaguensis. Para evitar la prdida de alguna unidad experimental por contaminacin, en el inicio del bioensayo se establecieron 20 rplicas por tratamiento, siendo seleccionadas de manera
casual, 10 rplicas sin ninguna contaminacin al final del perodo de evaluacin. Suspensiones bacterianas en medio nutritivo lquido. En la determinacin del efecto de las suspensiones bacterianas en medio nutritivo lquido, se utilizaron placas de poliestireno con 24 pozos (Placas para prueba ELISA), siendo cada pozo una unidad experimental, en el que se aplic un mL del medio nutritivo lquido con clulas bacterianas y 300 J2 de M. mayaguensis. Las placas se incubaron y mantuvieron durante 24h a 28C (Cmara de Germinacin MOD.347 CDG-FANEM). En el bioensayo se incluyeron 10 tratamientos y 10 repeticiones en un diseo completamente aleatorio, en esquema factorial 2x2x2+2 (dos especies de bacteria, dos concentraciones y dos condiciones de la bacteria) y los testigos absoluto y relativo. Despus de tres das, los J2 se contaron directamente en las placas y se estableci el porcentaje de mortalidad. Determinacin del efecto de bacterias entomopatgenos sobre huevos La investigacin se realiz de manera similar al estudio del efecto sobre juveniles, as: Suspensiones bacterianas en arena. Se utilizaron platos de Petri (4,5 cm) con 20 g de arena autoclavada humedecidas con 5 mL del medio N lquido con las clulas bacterianas, y se agregaron 300 huevos de M. mayaguensis por unidad experimental. Despus de 10 das de establecido el experimento se determin el porcentaje de eclosin de juveniles. Suspensiones bacterianas en medio nutritivo lquido. Se estableci la misma metodologa utilizada en la determinacin del efecto sobre juveniles, con la diferencia que se aplicaron 300 huevos de M. mayaguensis por unidad experimental. Los tratamientos evaluados fueron los mismos, con un total de 10 rplicas por tratamiento. Despus de 10 das los J2 que eclosionaron se contaron directamente en directamente en los platos, estableciendo el porcentaje de eclosin. Determinacin del efecto de metabolitos bacterianos en juveniles y huevos Para evaluar el efecto directo de los compuestos txicos generados por las bacterias (metabolitos primarios y secundarios), inicialmente se extrajeron los metabolitos y luego se procedi a determinar su efecto sobre juveniles y huevos. Para la obtencin de metabolitos, despus de multiplicar las bacterias Xenorhabdus sp. y Photorabdus sp., utilizando las mayores concentraciones de inculo (1000 JIs/mL) y hacer conteo de las UFC, la suspensin bacteriana se coloc en tubos Eppendorf de un mL, que se centrifuga-
ron dos veces a 20.000 rpm a 4C por 30 min (Eppendorf Centrifugue 5415C). En cada centrifugacin, se elimin el precipitado con las clulas bacterianas y se colect el sobrenadante. Para evitar posibles contaminaciones y eliminar clulas bacterianas el sobrenadante se pas por un filtro Milipore 0,22 m. Ya obtenidos los sobrenadantes con los metabolitos, se procedi a determinar su efecto sobre juveniles y huevos, as: Efecto de metabolitos sobre juveniles. Se utiliz una placa de poliestireno de 24 cavidades, siendo cada pozo una unidad experimental, en donde se coloc un mL del sobrenadante filtrado de las bacterias y 100 J2 por 48 horas a 24 2C. Como testigo se aplic el medio nutriente lquido puro sobre 100 J2. Adicionalmente, se evalu el efecto del sobrenadante calentado procedente de cultivos de Photorabdus sp. y Xenorhabdus sp., en medio nutritivo lquido. Los sobrenadantes se sometieron a tratamiento trmico a 100 C por 20 minutos para inactivar la actividad biolgica de las protenas. Los Erlenmeyers con los medios y bacterias se colocaron en un recipiente conteniendo agua y hielo, el contenido lquido se centrifugo por tres veces a 20.000 rpm a 4 C durante 30 min eliminando el precipitado resultante. Los sobrenadantes extrados se filtraron en una membrana de 0,22m. El bioensayo se estableci bajo un diseo completamente aleatorio, en esquema factorial 2x2+2 (dos sobrenadantes bacterianos, dos condiciones y testigos absoluto, solamente ADE, y relativo solamente medio nutritivo lquido), totalizando seis tratamientos, con 10 repeticiones cada. Despus de tres das, se contaron los J2 directamente de los platos para establecer el porcentaje de mortalidad. Efecto de metabolitos sobre los huevos. Se realiz el procedimiento anterior, con la diferencia de que los sobrenadantes bacterianos se aplicaron sobre 300 huevos de M. mayaguensis por unidad experimental por un perodo de siete das y despus de 10 das se evalu el porcentaje de eclosin. Tambin, se evalu el efecto de sobrenadantes calentados aplicados sobre huevos de M. mayaguensis, evaluando, despus de 10 das del tratamiento, directamente en los platos la presencia de los J2 que eclosionaron, estableciendo el Porcentaje de eclosin. Determinacin del efecto de dializados de suspensiones bacterianas entomopatgenas sobre juveniles y huevos Para evaluar el efecto de metabolitos primarios (fraccin proteica con actividad biolgica, de peso molecular mayor de que 5 Kda), se obtuvieron dializados de los sobrenadantes no calentados y filtrados de Photo-
rabdus sp. y Xenorhabdus sp. El procedimiento para separar del sobrenadante bacteriano las protenas de alto peso molecular consisti en colocar los sobrenadantes en una bolsa de dilisis con membrana de 3,5 Kda, inmersa en un recipiente con agua a 4 C por 48 horas, sometido a agitacin constante (Cmara de Germinacin MOD.347 CDGFANEM), y con dos cambios de agua por da. Al final del proceso, el producto dializado se colect para evaluar el efecto de su contenido sobre juveniles y huevos, de la siguiente manera: Efecto de dializados sobre juveniles Para evaluar el efecto real de los compuestos generados por las bacterias separados en el sobrenadante dializado de Photorabdus sp. y Xenorrabdus sp., se utiliz un plato de poliestireno con 24 pozos, siendo cada pozo una unidad experimental, en el cual se aplic un mL del sobrenadante dializado y 100 J2. El plato se incub por 48 horas a 24 2C (Cmara de Germinacin MOD.347 CDGFANEM). Como testigo se aplic el medio N lquido sobre J2 de M. mayaguensis. Alternativamente, se evalu el efecto del sobrenadante dializado calentado sobre J2 de M. mayaguensis, con el objetivo de desactivar cualquier toxicidad relacionada con protenas y/o enzimas. El sobrenadante de Photorabdus sp. y Xenorrabdus sp. se dializ y se calent a 100 C por 20 min. Se utiliz una un plato de poliestireno con 24 pozos, siendo cada pozo una unidad experimental, en el cual se aplic un mL del sobrenadante dializado y calentado, y 100 J2 de M. mayaguensis, incubando el plato por 48 horas a 24 2C. El bioensayo tuvo un diseo completamente aleatorio, en esquema factorial 2x2+2 (dos sobrenadantes bacterianos dializados, dos condiciones y testigos absoluto, solamente ADE, y relativo, medio N lquido), totalizando seis tratamientos, con 10 repeticiones cada. Despus de tres das, se hizo el conteo de los J2 directamente en los platos,
estableciendo el porcentaje de mortalidad. Efecto de dializados sobre huevos. Para la determinacin se realiz el mismo procedimiento anterior, aplicando los dializados sobre huevos. Tambin, se evalu el efecto del sobrenadante dializado calentado sobre 100 huevos de M. mayaguensis. Despus de 10 das los J2 eclosionados se contaron directamente en las placas y se estableci el porcentaje de eclosin. Anlisis de datos Cada variable de los tratamientos se someti a lo anlisis de varianza (P<0,05) y cuando hubo significancia, se hizo la prueba de comparacin de Promedios Duncan (P<0,05), siendo utilizado el programa SAEG (2001).
Aislamiento de bacterias simbiontes de nematodos entomopatgenos en medio Nutriente lquido Las bacterias fueron liberadas en medio N lquido, y la concentracin de JIs puede ser observada por la intensidad de la turbidez del medio de cultivo (Figura 1). Las concentraciones de clulas bacterianas logradas desde el inculo inicial de 600 y 1000 JIs de S. feltiae Sn y H. baujardi LPP7, fueron: 47,50 10,5 x 10-4 25,52 5,54 x 10-5 UFC de Xenorhabdus sp. y 130,75 19,10 x 10-4 104,51 13.12 x 10-5 UFC de Photorabdus sp., respectivamente. La multiplicacin de la bacteria en el medio N slido, present UFCs en la Fase I, que corresponde a la fase virulenta de la bacteria. Las colonias de la bacteria Photorabdus sp., presentaron coloracin amarilla, y las colonias de la bacteria Xenorhabdus sp., coloracin blanca, confirmando que las colonias bacterianas se encontraron en la fase virulenta.
Figura 1. Liberacin de bacterias a partir de JIs de NEPs. Los dos primeros Erlenmeyers corresponden al testigo, medio sin nematodos. (B) Bacterias liberadas a partir de 600 JIs de S. feltiae (izquierda) y H. baujardi (derecha). (A) Bacterias liberadas de 1000 de S. feltiae (izquierda) y H. baujardi (derecha). Ntese la diferencia de turbidez (Intensidades de gris) indicadora de concentracin.
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Efecto de bacterias entomopatgenas sobre juveniles El efecto de las suspensiones bacterianas sobre juveniles en arena se tradujo en altas mortalidades. Las suspensiones bacterianas en alta concentracin de Photorabdus sp. y Xenorhabdus sp. no calentadas, causaron tasas de mortalidad significativamente diferentes (F=61,85 ; GL=9 ; P<0,05) sobre J2 con relacin a los testigos (16,78 0,98, 10,17 1,34 % y testigos absoluto y relativo 1,72 0,41 2,78 0,57 %, respectivamente). As mismo, se destacaron significativamente las tasas de mortalidad presentadas por las suspensiones bacterianas de baja concentracin no calentadas de las dos especies bacterianas (8,22 0,53 para Photorabdus sp. y 5,89 0,32 %para Xenorhabdus sp.) (Figura 2). Las suspensiones bacterianas calentadas en la concentracin alta y baja de Xenorhabdus sp. y en alta concentracin de Photorhabdus sp., fueron diferentes del testigo absoluto (4,61; 4,05 y 4,39%, respectivamente, sin embargo ningn tratamiento de las suspensiones bacterianas calentadas tuvieron diferencias con relacin a la testigo relativo. De los tratamientos testigo, al final del perodo de evaluacin, los juveniles presentaron movilidad, siendo ste el comportamiento que diferenci los juveniles encontrados en otros tratamientos. El efecto de las suspensiones bacterianas sobre juveniles en medio Nutritivo lquido, tambin fueron efectivas. Las suspensiones bacterianas no calentadas en alta y baja concentracin de Photorabdus sp., causaron la mayor tasa de mortalidad sobre los J2, siendo significativamente diferente de los testigos relativo y absoluto (F=58,81; GL=9; P<0,05) (54,61 4,39, 48,911,53%, 3,92 0,43 1,81 0,21%, respectivamente) (Figura 3). Las altas concentraciones de Photorhabdus sp. y Xenorhabdus sp., causaron prcticamente el doble de mortalidad que las concentraciones ms bajas de las mismas suspensiones bacterianas (20,08 0,92; 19,93 0,60 %, respectivamente), siendo as mismo, significativamente diferentes de los testigos (Figura 3). Por otro lado, todas las suspensiones bacterianas calentadas no causaron mortalidad significativa con relacin a los testigos (5,41 0,61; 4,81 0,53 %). Determinacin del efecto de suspensiones de bacterias entomopatgenas sobre huevos Las suspensiones bacterianas aplicadas sobre huevos en arena afectaron la eclosin de juveniles. Las suspensiones bacterianas no calentadas y calentadas, tuvieron efecto negativo significativo (F=52,47; GL=9; P<0,05) en la eclosin de juveniles de M. mayaguensis (variacin de 0,5 a 3 %) con relacin a los testigos absoluto y relativo (27,05 1,55; 60
Figura 2. Porcentaje de mortalidad de juveniles de Meloidogyne mayaguensis en arena por la aplicacin de suspensiones bacterianas. Siglas: T1: Photorhabdus sp. C1 no calentada; T2: Photorhabdus sp. C2 no calentada; T3: Photorhabdus sp. C1 calentada; T4: Photorhabdus sp. C2 calentada; T5: Xenorhabdus sp. C1 no calentada; T6: Xenorhabdus sp. C2 no calentada; T7: Xenorhabdus sp. C1 calentada; T8: Xenorhabdus sp. C2 calentada; T9: Testigo absoluto (ADE); T10: Testigo relativo (N = media Nutriente lquido). C1=Concentracin baja; C2= Concentracin alta. Promedios seguidos por letras distintas difieren entre s, en la prueba de Duncan (P<0,05).
Figura 3. Porcentaje de mortalidad de juveniles de Meloidogyne mayaguensis en medio Nutritivo lquido, desde la aplicacin de suspensiones bacterianas. Siglas: T1: Photorhabdus sp. C1 no calentada; T2: Photorhabdus sp. C2 no calentada; T3: Photorhabdus sp. C1 calentada; T4: Photorhabdus sp. C2 calentada; T5: Xenorhabdus sp. C1 no calentada; T6: Xenorhabdus sp. C2 no calentada; T7: Xenorhabdus sp. C1 calentada; T8: Xenorhabdus sp. C2 calentada; T9: Testigo absoluto (ADE); T10: Testigo relativo (N = Media Nutritivo lquido). C1=Concentracin baja; C2= Concentracin alta. Promedios seguidos por letras distintas difieren entre s, en la prueba de Duncan (P<0,05).
14,93 1,43 %, respectivamente). Destacndose las suspensiones bacterianas con alta concentracin no calentada de Xenorhabdus sp., significativamente diferente de la suspensiones calentadas de la misma especie (0,47 0,17% y 0,28 0,12 %) (Figura 4). Entre las suspensiones no calentadas y calentadas para Photorabdus sp., no se encontraron diferencias significativas. Las aplicaciones de suspensiones bacterianas no calentadas sobre huevos en medio Nutriente lquido, en baja y alta concentracin, en general causaron reduccin significativa en la eclosin de J2 de M. mayaguensis (F=62,75; GL=9; P<0,05) diferentes a los testigos (5,40 0,48 y 5,82 0,37 para
Xenorhabdus sp.; 7,97 0,93y 4,22 0,67% para Photorhabdus sp.) con relacin a los testigos absoluto y relativo (46,15 4,91 y 32,16 4,13%, respectivamente) (Figura 5). Al contrario, las suspensiones bacterianas calentadas en todas las concentraciones presentaron valores superiores a 20% de eclosin de juveniles, sin presentar diferencias entre s, pero siendo diferentes de los testigos, (Figura 5). Efecto de metabolitos de suspensin bacteriana sobre juveniles y huevos Los sobrenadantes extrados de las suspensiones bacterianas de mayor concentracin de
Xenorhabdus sp. y Photorabdus sp., presentaron efecto directo en la mortalidad de los juveniles de M. mayaguensis. El sobrenadante no calentado de Photorabdus sp., ocasion la mayor mortalidad de J2 del experimento, siendo diferente de los testigos relativo y absoluto (F=80,78; GL=5; P<0,05) (56,95 3,67% ; 2,75 0,48 y 1,97 0,29 %, respectivamente (Figura 6). De la misma forma, el sobrenadante no calentado de Xenorhabdus sp., ocasion alta mortalidad, siendo diferente des testigos (43,72 4,40 %). En cuanto a los sobrenadantes calentados de Xenorhabdus sp. y Photorhabdus sp., las tasas de mortalidades presentadas no fueron diferentes entre s, pero fueron diferentes de los testigos (16,62 1,75 y13,11 1,87 %) (Figura 6). Los sobrenadantes bacterianos no calentados de Photorabdus sp. y Xenorhabdus sp., presentaron efecto directo en la eclosin de los juveniles de M. mayaguensis. El sobrenadante no calentado de Xenorhabdus sp., ocasion la mayor inhibicin en la eclosin de juveniles del experimento, comparado con los testigos (F=28,45; GL=5; P<0,05) (33,82 2,26; 60,32 4,57 y 58,71 4,57 %). De la misma forma, el sobrenadante no calentado de Photorhabdus sp., caus una inhibicin diferente de los testigos (45,12 2,71 %) (Figura 7). Mientras, los sobrenadantes calentados de Photorhabdus sp. y Xenorhabdus sp., presentaron bajo efecto en la eclosin de los juveniles y no presentaron diferencias con relacin a la eclosin de los testigos (49,17 1,78% y 55,19 3,44) (Figura 7). Efecto de dializados de suspensiones bacteriales entomopatgenas sobre juveniles y huevos Los sobrenadantes no calentados y dializados de Photorabdus sp. y Xenorhabdus sp., afectaron positivamente la mortalidad de juveniles de M. mayaguensis y fueron (F=16,94; GL=5; P<0,05) diferentes de los testigos (8,26 0,25; 6,46 0,74; 2,75 0,43 y 1,71 0,34% (Figura 8). Los sobrenadantes dializados y calentados de Photorabdus sp. y Xenorhabdus sp., no evidenciaron efecto en la mortalidad de juveniles de M. mayaguensis. Los sobrenadantes dializados calentados o no de las bacterias, en ningn caso, presentaron efecto en la inhibicin de la eclosin de M. mayaguensis, siendo que la eclosin en general estuvo entre 54,68 3,58 y 57,14 4,41 %. En general, los resultados demuestran el efecto de las suspensiones bacterianas no calentadas, en la mortalidad des J2 de M. mayaguensis, tanto en el bioensayo en arena como en Nutriente liquido, confirmando el efecto directo en el bioensayo con el medio de cultivo. Las suspensiones bacterianas en alta y baja concentracin de Photorhabdus
Figura 4. Porcentaje de eclosin de juveniles de Meloidogyne mayaguensis en arena desde la aplicacin de suspensiones bacterianas. Siglas: T1: Photorhabdus sp. C1 no calentada; T2: Photorhabdus sp. C2 no calentada; T3: Photorhabdus sp. C1 calentada; T4: Photorhabdus sp. C2 calentada; T5: Xenorhabdus sp. C1 no calentada; T6: Xenorhabdus sp. C2 no calentada; T7: Xenorhabdus sp. C1 calentada; T8: Xenorhabdus sp. C2 calentada; T9: Testigo absoluto (ADE); T10: Testigo relativo (N = media Nutriente lquido). C1=Concentracin baja; C2= Concentracin alta. Promedios seguidos por letras distintas difieren entre s en la prueba de Duncan (P<0,05).
Figura 5. Porcentaje de eclosin de juveniles de M. mayaguensis en medio Nutritivo lquido, desde la aplicacin de las suspensiones bacterianas. Siglas: T1: Photorhabdus sp. C1 no calentada; T2: Photorhabdus sp. C2 no calentada; T3: Photorhabdus sp. C1 calentada; T4: Photorhabdus sp. C2 calentada; T5: Xenorhabdus sp. C1 no calentada; T6: Xenorhabdus sp. C2 no calentada; T7: Xenorhabdus sp. C1 calentada; T8: Xenorhabdus sp. C2 calentada; T9: Testigo absoluto (ADE); T10: Testigo relativo (N = media Nutriente lquido). C1=Concentracin baja; C2= Concentracin alta. Promedios seguidos por letras distintas difieren entre s, en la prueba de Duncan (P<0,05).
sp., causaron la mayor mortalidad, mostrado que los juveniles de M. mayaguensis son susceptibles al efecto patgeno de la bacteria. As mismo, las suspensiones bacterianas calentadas tuvieron las protenas y/o enzimas desnaturalizadas con el tratamiento trmico y presentaron algn efecto en la mortalidad de los juveniles de M. mayaguensis, lo que indica la actividad biolgica letal, est asociada a la naturaleza proteica. De esta forma, Photorhabdus sp. y Xenorhabdus sp., pueden estar influyendo en la mortalidad de J2 de M. mayaguensis por medio de un principio txico, relacionado con sus metabolitos. De acuerdo con trabajos realizados por Grewal et al. (1999), filtrados de clulas bacterianas pertenecientes a tres separados de Xenorhabdus spp., en la concentracin del
15% fueron txicos a juveniles de M. incognita, causando mortalidad de 98-100%. Los filtrados, tanto de Xenorhabdus sp. como de Photorhabdus sp., presentaron alta toxicidad a juveniles de M. incognita, efecto atribuido al Amonaco del filtrado (Hu et al., 1995; Hu et al., 1999). Samaliev et al. (2000) verificaron que las dosis de 106 y 107 mL-1 de clulas bacterianas de Xenorhabdus nematophilus (Akhurst) en juveniles de M. javanica causaron mortalidad del 100%, despus de 24 horas de exposicin, siendo considerada una bacteria altamente txica. Los resultados de este estudio demostraron la existencia de un efecto significativo de las suspensiones bacterianas en la reduccin de la eclosin y en la mortalidad des J2 recin eclosionados. Los huevos tratados con ADE, 61
presentaron una eclosin media del 27% en comparacin con la eclosin normal de 5060% registrada en laboratorio, en la ausencia del estimulante de eclosin para huevos de este fitonemtodo. Es evidente que existen prdidas de J2 y huevos, durante el procesamiento de la arena para la extraccin de los juveniles en laboratorio. Para confirmar los datos, se procedi la repeticin del experimento en un segundo bioensayo, aplicando directamente los J2 en las suspensiones bacterianas en el mismo perodo de evaluacin. Los resultados confirman que las suspensiones bacterianas no calentadas presentaron la reduccin de la eclosin de juveniles de M. mayaguensis, en el bioensayo en arena, cuyo efecto txico directo fue confirmado en el bioensayo con el medio de cultivo. As, toxinas y/o otros compuestos txicos de las bacterias, podran presentar un efecto directo en la eclosin de los juveniles del fitonemtodo, ya que los testigos presentaron una mayor tasa de eclosin. Segn Grewal et al. (1999), hubo reduccin en la eclosin de J2 de M. incognita, cuando los huevos fueron expuestos a la concentracin del 10% de una cultivo de clulas bacterianas de Xenorhabdus sp., aislada de la especie del nematodo S. riobrave. As, mismo, Samaliev et al. (2000) evaluaron el efecto nematicida de las bacterias X. nematophilus en huevos de M. javanica, concluyendo que el efecto de las bacterias y sus metabolitos redujo la eclosin. La tasa de mortalidad presentada por los dos sobrenadantes bacterianos no calentados, guarda una estrecha relacin con la tasa de mortalidad lograda en el primer experimento con las suspensiones bacterianas no calentadas de Xenorhabdus sp. y Photorabdus sp., en alta concentracin, lo que evidencia que los productos de la bacteria en medio a cultivo bajo la forma de metabolitos secundarios (bajo peso molecular), metabolitos primarios (de alto peso molecular, mayores a 3,5 kD) y/o toxinas, estaran ocasionando la mortalidad de los J2 de M. mayaguensis. En ese caso, es evidente que existe un efecto que causa la mortalidad de los J2, al contrario del efecto presentado por las suspensiones bacterianas calentadas de Photorabdus sp. y Xenorhabdus sp. donde stas tuvieron un bajo efecto en la mortalidad de los J2. Esta respuesta de los sobrenadantes calentados, evaluados en la mortalidad de los J2, puede ser un indicativo de toxicidad debido a protenas y/o enzimas. Las altas temperaturas aplicadas al sobrenadante bacteriano dializado, desactivaron cualquier actividad txica debido a protenas y/o enzimas, ya que tales sobrenadantes calentados no tuvieron efecto en la eclosin con resultados equivalentes a la eclosin registrada para los testigos. En los diferentes experimentos donde fueron evaluados los metabolitos, stos tuvieron efecto sobre la mortalidad y eclosin de 62
Figura 6. Porcentaje de mortalidad de juveniles de M. mayaguensis debido a la aplicacin de sobrenadante de suspensiones bacterianas. Siglas: T1: Sobrenadante no calentado de Xenorhabdus sp.; T2: Sobrenadante no calentado de Photorabdus sp.; T3: Sobrenadante calentado de Xenorhabdus sp.; T4: Sobrenadante calentado de Photorabdus sp. T5: Testigo relativo (N = media Nutriente lquido).; T6: Testigo absoluto (ADE). Promedios seguidos por letras distintas difieren entre s en prueba de Duncan (P<0,05).
Figura 7. Porcentaje de eclosin de juveniles de M. mayaguensis debido a la aplicacin de sobrenadante de suspensiones bacterianas. Siglas: T1: Sobrenadante no calentado de Xenorhabdus sp.; T2: Sobrenadante no calentado de Photorabdus sp.; T3: Sobrenadante calentado de Xenorhabdus sp.; T4: Sobrenadante calentado de Photorabdus sp. T5: Testigo relativo (N = media Nutriente lquido).; T6: Testigo absoluto (ADE). Promedios seguidos por letras distintas difieren entre s en prueba de Duncan (P<0,05). J2 de M. mayaguensis. De acuerdo con Grewal et al. (1999), las propiedades de metabolitos nematicidas, asociadas a las bacterias simbiontes de Xenorhabdus spp., se han demostrado en algunos estudios de laboratorio y invernadero. As, metabolitos de Xenorhabdus sp., tuvieron un efecto mayor en la reduccin de la eclosin de J2 de M. mayaguensis. Por otro lado, metabolitos asociados a Photorabdus sp., ejercieron un mayor efecto en la mortalidad de juveniles de M. mayaguensis. La mortalidad y la reduccin de la eclosin des J2 de M. mayaguensis puede ser atribuida principalmente a metabolitos secundarios de los sobrenadantes bacterianos antes de ser dializados. En ese sentido, excluyendo
la mortalidad conferida a los metabolitos primarios, aproximadamente 35% a 49% de la mortalidad de los J2 puede ser atribuida a metabolitos secundarios de Photorabdus sp. y Xenorhabdus sp. En bioensayos de laboratorio se ha determinado que la concentracin de 300 g mL-1 de indol, causa parlisis en juveniles de M. incognita. Por otra parte, St y indol en concentraciones de 100 y 25 g mL respectivamente, inhiben la eclosin de juveniles de M. incognita (Hu, et al., 1999). En cuanto a la alta inhibicin de la eclosin de los huevos de M. mayaguensis, se atribuye principalmente a metabolitos secundarios de Xenorhabdus sp. y Photorabdus sp., ya que de los experimentos realizados con los sobrenadantes dializados, la eclosin encon-
Figura 8. Porcentaje de mortalidad de juveniles de M. mayaguensis debido a la aplicacin de sobrenadante de suspensiones bacterianas dialisadas. Siglas: T1: Sobrenadante dializado de Xenorhabdus sp.; T2: Sobrenadante dialisado de Photorabdus sp.; T3: Sobrenadante dializado y calentado de Xenorhabdus sp.; T4: Sobrenadante dialisado y calentado de Photorabdus sp. T5: Testigo relativo (N = media Nutriente lquido).; T6: Testigo absoluto (ADE). Promedios seguidos por letras distintas difieren entre s en prueba de Duncan (P<0,05). trada por efecto des metabolitos primarios fue semejante a la encontrada en los testigos. Hu, et al. (1996) afirman que los aleloqumicos con indol de 3,5-dihidroxy 4-isopropilstilbene (St) provenientes de extractos orgnicos de filtrados de Photorhabdus luminescens (Poinar), presentan efecto nematicida. De esta forma, se establece que las suspensiones bacterianas de Xenorhabdus sp. y Photorabdus sp., y sus metabolitos asociados, causan toxicidad e inhibicin sobre los juveniles y huevos de M. mayaguensis, siendo necesarios estudios especficos principalmente con metabolitos secundarios, determinando los compuestos que estn presentando efecto en el fitonemtodo.
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CONCLUSIONES
Suspensiones bacterianas de Photorabdus sp. y Xenorrabdus sp., tuvieron efecto directo en la mortalidad de los juveniles y en la reduccin de la eclosin de J2 de M. mayaguensis, ya que existi un fuerte efecto antagnico, atribuido principalmente a metabolitos secundarios de las mismas bacterias.
teriaceae); bacterial symbiont of entomopathogenic nematodes. Nematology 1: 457-469. Jagdale, G. B., Somasekhar, N., Grewal, P. S. and Klein, M. G. 2002. Suppression of plant-parasitic nematodes by application of live and dead infective juveniles of an entomopathogenic nematode, Steinernema carpocapsae, on boxwood (Buxus spp.) Biological Control 24:42-49. Jenkins, W. R. 1964. A rapid centrifugalflotation technique for separating nematodes from the soil. Plant Disease Report 48: 692. Lewis, E. E. and Grewal, P. S. 2005. Effects of entomopathogenic nematodes on plant-parasitic nematodes. In: Nematodes as biocontrol agents (P. S. Grewal, R. U. Ehlers., D. Shapiro-Ilan, (eds.). CABI Publishing, UK, p. 349-361. Lewis E.E., Grewal P.S. and Sardanelli, S. 2001. Interactions between the Steinernema feltiae Xenorhabdus bovienii insect pathogen complex and the root-knot nematode Meloidogyne incognita. Biological Control 21:55-62. Neder, R. N. (1992) Microbiologia: Manual de laboratrio, 138 p. Nobel, So Paulo. SAEG (Sistema para anlises estatsticas e genticas, verso 9.0). 2001. Desenvolvido pela Fundao Artur Bernardes da Universaidade Federal de Viosa (UFV-MG-Brasil). Samaliev, H.Y., Andreoglou, F.I. Elawad, S.A., Hague N.G.M. and Gowen, S.R. 2000. The nematicidal effects of the bacteria Pseudonomas orizihabitans and Xenorhabdus nematophilus on the rootknot nematode Meloidogyne javanica. Nematology 2:50714 Siddiqui, Z.A. and Mahmood, I. 1999. Role of bacteria in the management of plant parasitic nematodes: A review Bioresource Technology 69:167179 Woodring, J. L. and Kaya, H. K. 1988. Steinernematid and heterorhabditid nematodes: a handbook of techniques. Arkansas Agricultural Experiment Station, Fayetteville, AK. Series Bulletin 331.
AGRADECIMIENTOS
Los autores agradecen al Dr. Juvenil Enrique Cares Ph.D Fitopatologia de la Universidade de Califrnia, Riverside, E.U.A., actualmente .asociado a la Universidad de Brasilia (Brasil) y la Dra. Nancy Eunice Nio M. Sc en Fitopatologa Universidad Nacional de Colombia, por sus valiosos aportes en la revisin general del texto y por su conocimiento en el rea nematolgica.
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FITOPATOLOGA COLOMBIANA
rgano de difusin de la Asociacin Colombiana de Fitopatologa y Ciencias Afines- ASCOLFI
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REACCIN DE GENOTIPOS DE TOMATE DE RBOL (Solanum betaceum (Cav.) Sendt) AL NEMATODO Meloidogyne spp. Chitwood*
Sonia Lorena lvarez Solarte1, Jenith Lorena Chaves Melo 1 Claudia Salazar Gonzlez1 y Carlos Betancourth Garcia1
1
Facultad de Ciencias Agrcolas, Universidad de Nario, Pasto, Colombia e- mail contacto: cbet70@yahoo.com.
RESUMEN
Con el objeto de evaluar la reaccin de 45 genotipos de tomate de rbol, de la coleccin de la Universidad de Nario se realiz una seleccin preliminar de posibles fuentes de resistencia. Se utiliz un diseo experimental DIA con 45 tratamientos y cuatro repeticiones, se inocularon plantas de dos meses de edad con 10.000 huevos de Meloidogyne spp. Las variables evaluadas fueron: incidencia, severidad, altura, peso fresco y seco de raz, reconocimiento y frecuencia del nematodo. Se realiz un anlisis de varianza para las variables de crecimiento, destacndose los genotipos CBp18 y CBg27 como moderadamente resistentes con un bajo porcentaje de reduccin en dos de las variables de crecimiento evaluadas. Empleando la tcnica de cortes perineales se determin que Meloidogyne incognita Chitwood fue la especie ms frecuente . Palabras claves: Material Vegetal, Severidad, Resistencia
SUMMARY
Reaction of Tree Tomato (Solanum betaceum (Cav.) Sendt) Genotypes to the nematode Meloidogyne spp. Chitwood. In the producing area of Nario department the presence of this pathogen was reported and because of its importance this study was carried out in order to evaluate the reaction of 45 tree tomato genotypes, from the collection of the University of Nario to make a preliminary selection of possible sources of resistance. DIA design was used with 45 treatments and 4 replicates, two months old plants were inoculated with 10.000 eggs of Meloidogyne spp. The variables evaluated were: incidence, severity, height, dry and fresh root weight and recognition and frequency of the nematode. The data were processed using SAS v.8 and analysis of variance for growth. Genotypes CBp18 and CBg27 were highlighted as moderately resistant with a low rate of reduction in two of the growth variables evaluated. Using the perineal cuts technique found that Meloidogyne incognita Chitwood was the most frequent specie Key words: Plant Material, Severity, Resistance
INTRODUCCIN
El tomate de rbol, Solanum betaceum (Cav.) Sendt, (Cyphomandra betacea Sendt; C. hartwegi Sendt) es importante para los cultivadores de la zona de clima fro en Colombia por la buena aceptacin, alta demanda, posibilidades de consumo en fresco y potencial agroindustrial (Lobo, 2006). Para el ao 2008, la superficie sembrada en el pas correspondi a 6446 hectreas, con una produccin de 107.136 ton. y un rendimiento promedio de 16,6 ton. ha-1. Comercialmente esta fruta se produce en los departamentos de Antioquia, Cundinamarca, Boyac, Tolima y Nario, donde la superficie cultivada fue de 601 hectreas, obteniendo una produccin total de 5.736 ton y un rendimiento promedio de 9,5 t. ha-1 (MADR, 2009). El cultivo de tomate de rbol, an bajo las condiciones ptimas de clima y suelo, presenta variabilidad en su productividad, fundamentalmente, debido a la incidencia de enfermedades y plagas, tal es el caso de los nematodos causantes del nudo radical que destruyen lentamente las plantaciones (Salda-
rriaga et al., 2000). En los ltimos aos el rea sembrada se ha reducido debido a una alta incidencia y severidad de la enfermedad del nudo radical, a la susceptibilidad de los materiales cultivados y al alto costo del control (Gaviria, 2004). Por otra parte la resistencia vegetal no slo es necesaria para reducir los niveles poblacionales de nematodos y por lo tanto evitar prdidas econmicas a corto plazo, sino tambin para garantizar a mediano plazo la utilidad de un mtodo de control que ha demostrado ser muy efectivo en la lucha contra nematodos, y que es econmico e inocuo para los seres humanos y el medio ambiente (Cortada et al, 2009; Bridge, 1996). La identificacin de las fuentes de resistencia es el paso inicial dentro de cualquier programa que busca obtener plantas de valor econmico con resistencia a este parsito (Morera y Lpez, 1987). La resistencia de solanceas silvestres a nematodos formadores de agallas est basada en la presencia de un gen simple dominante llamado gen Mi, que confiere resistencia a tres de las especies ms dainas M. incognita, M. arenaria y M. javanica. La resistencia mediada por el gen Mi activa una respuesta de
hipersensibilidad a travs de la muerte de la clula momentos despus de que los nematodos inician su alimentacin en los sitios cercanos a los haces vasculares (Gonzlez et al., 2010). Teniendo en cuenta estas consideraciones se llev a cabo un estudio para conocer la reaccin de 45 genotipos de tomate de rbol al ataque de Meloidogyne spp., en busca de fuentes de resistencia que puedan ser tiles para posteriores trabajos de campo.
MATERIALES Y MTODOS
Localizacin Se realiz en el Laboratorio de Microbiologa e Invernadero de la Universidad de Nario, ubicada al noreste de la ciudad de San Juan de Pasto (01 12' 13'' latitud norte y 77 15' 23'' longitud oeste), 2540 msnm, humedad relativa promedio del 70% y una temperatura promedio anual de 13oC y 18oC respectivamente. Manejo agronmico de material vegetal El Grupo de Frutales Andinos, adscrito a la 65
Facultad de Ciencias Agrcolas de la Universidad de Nario, suministr 45 genotipos (Tabla 1) que se sembraron en bolsas de polietileno con capacidad de cuatro kg de suelo; el manejo agronmico consisti en riego diario, una fertilizacin con fertilizante compuesto (tres g/planta 10-30-10) al mes despus de la siembra, eliminacin manual de arvenses mensual, control sanitario de damping off (Pythium sp) (un cm3 Lt1 Propamocarb y babosas (Deroceras sp, Milax sp.), (dos grnulos/planta Methaldehido) cada 8 das durante el primer mes. cenicilla (Oidium sp) (0,75 cm3 Lt-1Penconazol) a los dos meses de edad de las plantas. mosca blanca (Trialeurodes vaporariarum) y afidos (Aphis gossypii) (un cm3 Lt-1 Metomilo) a los tres meses despus de la siembra. Inoculacin con Meloidogyne spp. Se inocularon plantas de tomate de rbol de dos meses de edad, empleando la tcnica de licuado/tamizado, (Saudo et al., 2003). Se utilizaron races afectadas con Meloidogyne spp, colectadas en lotes de la vereda La Caldera, Municipio de Pasto, las cuales se lavaron, y cortaron en pequeos trozos, luego se licuaron 50 g de raz con 50 ml de agua destilada durante 25 segundos; se verti la suspensin de huevos por un juego de tamices de 200, 325 y 400 mallas; se lav lentamente y se recogi con agua destilada la porcin retenida en los tamices de 325 y 400 mallas (Saudo et al., 2003). Posteriormente utilizando una pipeta se tom una alcuota de un mL de la misma, se llev a una placa de recuento para calibrar a una concentracin de 200 huevos/ml (Coyne et al., 2007). De esta solucin se usaron 50 mL por planta (10.000 huevos) para inocular 9 plantas de cada genotipo, vertindolos en el suelo alrededor del tallo (Volcy, 1998). Por cada genotipo se dejaron 3 plantas como testigo las cuales se inocularon con 50 ml de agua destilada (Mauzca y Varn, 2001; Lozada et al., 2002). Diseo experimental Se utiliz un diseo completamente al azar con 45 tratamientos correspondientes a los genotipos de tomate de rbol, cuatro repeti ciones por tratamiento, y 180 unidades experimentales con tres plantas cada una. Para las evaluaciones, una de las repeticiones no fue inoculada y se dej como comparador de cada genotipo. Este diseo se aplic a las variables de crecimiento (altura, peso fresco y seco de raz). Variables evaluadas A los genotipos de tomate de rbol inoculados a los dos meses de edad con Meloidogine spp., se les realizaron las respectivas evalua-
Tabla 1. Identificacin de los genotipos utilizados en el trabajo Genotipo msnm Municipio Genotipo CBb01 2100 Buesaco CBsj35 CBb02 CBb03 CBb04 CBp05 CBb06 CBb08 CBa09 CBc10 CBc11 CBc12 CBc13 CBc14 CBp16 CBp18 CBp21 CBp23 CBg27 CBg28 CBg29 CBg30 CBg31 CBcon33 2139 2159 2073 2109 2109 2029 2040 2112 2112 2112 2112 2125 2194 2028 2361 2361 2760 2749 2658 2633 2520 2391 Buesaco Buesaco Buesaco Buesaco Buesaco Buesaco Arboleda Pasto Pasto Pasto Pasto Pasto Pasto Nario Nario Nario Guaitarilla Guaitarilla Guaitarilla Guaitarilla Guaitarilla Contadero CBsj36 CBsj37 CBsj38 CBco39 CBco40 CBco41 CBg42 CBco44 CBco45 CBco46 CBp48 CBi49 CBg52 CBco53 CBim91 CBim92 CBgu94 CBsa95 CBsa96 CBsa98 CBsa99
msnm Municipio 2532 Ipiales 2432 2526 2525 2556 2730 2703 2703 2602 2602 2580 2670 2938 2554 2579 2063 2062 2570 2559 2558 2550 2511 Ipiales Ipiales Ipiales Cordoba Cordoba Cordoba Cordoba Cordoba Cordoba Cordoba Potos Ipiales Guaitarilla Cordoba Imues Imues Guachavez Samaniego Samaniego Samaniego Samaniego
Fuente: Grupo de Frutales Andinos, Universidad de Nario
ciones de cada una de sus variables 90 das despus de la inoculacin. Incidencia: Se estableci el porcentaje de plantas afectadas observando si sus races presentaban nudos y se expres en porcentaje; tomando como poblacin las nueve plantas inoculadas. Severidad: Para establecer el grado de infeccin se determin mediante la escala cuantitativa y cualitativa de infeccin radical propuesta por Taylor y Sasser, (1983) (Tabla 2 y Figura 1).
Tabla 2. Escala de infeccin radical (Taylor y Sasser, 1983) Grados 0 1 2 3 4 Infeccin radical Races sin dao de nematodos Pocos nudos pequeos, difciles de encontrar Nudos del mismo tamao que el anterior, pero ms numerosos Nudosidades alargadas. El sistema radial no sufre mucho. El 50 % del sistema radical no funciona, debido a la hipertrofia de los tejidos. La alimentacin de la planta es interrumpida, hay pudricin de tejidos afectados.
mando como referencia la escala de resistencia planteada por Saudo et al. (2003) con
Tabla 3. Escala de reaccin (Saudo et al., 2003) Grados % de afeccin 0% 1 -10% 11 25% 26 50% 51 75% 76 - 100% Reaccin del genotipo Inmune Resistente Moderadamente resistente Moderadamente susceptible Susceptible Altamente susceptible
0 1 2 3 4 5
base a la escala de severidad (Tabla 3).
Variables de crecimiento Altura: Se midi la altura de las plantas desde la base del tallo hasta el extremo superior del pice de la hoja ms joven. Peso fresco y seco raz: Una vez evaluada la incidencia y severidad se tomaron las plantas inoculadas y los testigos, se separ su raz, para as tomarles el peso fresco en una balanza analtica; posteriormente se empacaron en bolsas de papel rotuladas y se llevaron a horno a 70 o C por 72 horas, luego se tom su peso seco. Anlisis estadstico Los parmetros de crecimiento (altura, peso
Reaccin del genotipo: La determinacin de la reaccin de cada genotipo se realiz to2010 Fitopatologa Colombiana /Volumen 34 No 2
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fresco y seco de raz), se analizaron determinando inicialmente el porcentaje de reduccin de cada variable en cada genotipo respecto al testigo correspondiente asumiendo el valor de este como el 100%, lo que permiti medir el efecto de Meloidogyne spp., sobre las plantas evaluadas. Estos datos se transformaron con la frmula Y = arcoseno%. Utilizando el programa estadstico SAS v. 8.0 (Statistical Analysis System, SAS Institute), se sometieron los datos obtenidos a un Anlisis de Varianza para las tres repeticiones inoculadas. La separacin de medias se efectu mediante la prueba de Duncan. Reconocimiento y frecuencia de Meloidogyne spp. En forma aleatoria se tomaron races infectadas de diferentes genotipos inoculados con el nematodo del nudo radical. Se realizaron 50 cortes perineales, siguiendo la metodologa citada (Jacob and Van Bezooijen 1984; Cepeda, 2001; Vergel et al., 2000; Saudo et al., 2003; Garca y Obando, 2005; Coyne et al., 2007). Las observaciones de los cortes de patrones perineales se hicieron bajo microscopio con aumento de 100X y se determinaron las especies confrontndolas con las claves de Taylor y Sasser (1983); (Cepeda, 2001; Gaviria, 2004).
Figura 1. ndice y porcentaje de infestacin radical en tomate de rbol por Meloidogyne spp. (Taylor y Sasser, 1983)
Incidencia Todas las plantas inoculadas y de todos los genotipos fueron infectadas por el nematodo del nudo radical mostrando menor desarrollo, clorosis, agallas y en ocasiones marchitez; en el sistema radical se presentaron agallas en diferentes cantidades y tamaos, necrosis, acortamiento y disminucin de races laterales y escasos pelos radicales. Dicho de otro modo modo ningn genotipo fue inmune al ataque del nematodo. Resultados similares reportan Lozada et al. (2002) quienes encontraron una incidencia del 100% en plantas de tomate de rbol de tres meses de edad, inoculadas con 6000 huevos de Meloidogyne spp. provenientes de diferentes zonas productoras del Valle del Cauca. Del mismo modo, Pea (1994), evalu materiales de caf (Coffea canephora), para obtener variedades de portainjertos resistentes a Meloidogyne incognita, en plantas inoculadas tres meses despus del trasplante con 6000 huevos; y encontr efectos parasticos del nematodo. lvarez (2006) seala que en general, los nematodos que atacan las races de las plantas, inducen daos por su interferencia en la capacidad de absorber agua y minerales desde el suelo por parte de la planta y por convertirse en consumidores de los productos sintetizados por la planta. Al respecto Aballay
(1995), menciona que el resultado final de los efectos antes mencionados es una disminucin importante en los rendimientos, puesto que los frutos deben competir con la capacidad de las races de actuar como consumidores de los compuestos asimilados por la fotosntesis, para el consumo de los nematodos y para el continuo recambio de races daadas. Puesto que todos manifestaron sntomas asociados al ataque de Meloidogyne spp. Severidad En la totalidad de genotipos inoculados con Meloidogyne spp. se encontraron agallas radiculares a los 90 das despus de la inoculacin; solo se tuvo grado de afeccin 2 y 3 un rango de severidad entre el 11 al 50%. No se encontraron genotipos inmunes, resistentes, susceptibles ni altamente susceptibles al
patgeno, pero si moderadamente resistentes (MR) y moderadamente susceptibles (MS) (Tabla 4). Los porcentajes de severidad registrados, permitieron categorizar los genotipos en dos grupos: 31 genotipos con un grado de afeccin 2, y un rango de severidad entre 11-25%, indicando que el 68,8% de ellos son moderadamente resistentes (MR). Estos genotipos presentaron pequeos y escasos nudos radicales demostrando que el nematodo puede multiplicarse, pero de manera restringida o retardada (Tabla 4). Los 14 genotipos restantes tuvieron un grado de afeccin 3, encontrndose en un rango de severidad del 26-50%; estos datos muestran que el 31,1% de los genotipos evaluados fueron catalogados moderadamente susceptibles (MS), mostrando nudosidades
Tabla 4. Categorizacin de genotipos mediante reaccin % de severidad Genotipos clasificados Reaccin
Grados
0 1 2
0% 1-10% 11 - 25%
26 - 50%
4 5
51 - 75% 76- 100%
0 Inmune 0 Resistente CBco44, CBg28, CBco39, CBp21, CBco45, Moderadamente Resistentes CBim92, CBsa96, CBb04, CBco41, CBp23, CBb06, CBg42, CBb03, CBc14, CBsj36, CBgu94, CBsa99, CBb02, CBb08, CBsj38, CBp18, CBg27, CBco40, CBi49, CBco53, CBa09, CBim91, CBsa98, CBb01, CBsj37, CBg52. CBc13, CBp05, CBg29, CBc10, CBp16, CBg31, Moderadamente SusceptiCBc11, CBc12, CBp48, CBcon33, CBg30, bles CBco46, CBsj35, CBsa95 0 Susceptibles 0 Altamente Susceptible
0 0 68,8
31,1
0 0
67
alargadas, con una elevada multiplicacin de Meloidogyne spp, y presencia de hipertrofia de los tejidos. De acuerdo a las diferentes respuestas encontradas en los genotipos, se afirma que posiblemente se presente una resistencia horizontal ya que no se encontraron genotipos inmunes, caracterstica propia de este tipo de resistencia polignica gobernada por diversos genes. En general la resistencia horizontal no evita que las plantas sean infectadas, sino que retarda el desarrollo en cada uno de los sitios de infeccin en la planta y por lo tanto retrasa la propagacin de la enfermedad (Zamora et al, 2008), todos sus efectos son parciales, y sumados producen una disminucin en la tasa de desarrollo de la enfermedad, a pesar de conferir proteccin incompleta es duradera o permanente (Vallejo y Estrada, 2002). Variables de crecimiento Para las variables de crecimiento: altura, peso fresco y seco de raz, se encontraron diferencias estadsticas significativas entre tratamientos con un nivel de probabilidad del (P 0 ,05). Altura Segn la prueba de comparacin de medias Duncan, para la variable altura, los genotipos con menores reducciones (75,5 al 90%) presentaron diferencias en los porcentajes, sin embargo no tuvieron diferencia estadstica significativa; dentro de este grupo se destacan los genotipos CBsa99, CBco46, CBi49, CBco44, CBg31, CBg42, los cuales alcanzaron el 90% de altura respecto a sus testigos, mostrando diferencias significativas con relacin a los genotipos CBco41, CBco53, CBc12, CBb02, CBsa95, CBsj36, CBg52, CBp16, CBp23, CBb08, CBb03, CBb01, CBsj35 y CBp21, CBb04, CBc10, CBco39, CBc13, CBsj38, CBa09, CBp18, CBb06, CBc11 y CBp05 los cuales no superaron el 74.6% de la altura del testigo. Es importante mencionar que dentro del grupo de mayor porcentaje se encuentran genotipos MR (CBsa99, CBi49, CBco44, CBg42, CBsa96, CBgu94 y CBim96) pero tambin MS (CBco46, CBg31), lo cual implica que en algunos casos el nematodo no causa reduccin importante de esta variable, aun con porcentajes de severidad superiores al 26%, esta situacin permite reflexionar sobre la importancia de valorar variables diferentes a severidad para precisar el potencial de un genotipo; puesto que de manera anloga; tambin se encontraron genotipos MR (CBb06, CBco53) en el grupo de menor altura: es decir que algunos genotipos pueden verse muy afectados en su crecimiento con bajos grados de severidad de la enfermedad y ser calificados como resistentes a la luz de la escala grfica. Respecto a lo anterior, Volcy, (1998); Christie, (1970) argumentan que una escala de severidad sola no es definitiva en el momento de determinar la resistencia o susceptibilidad 68
de una especie vegetal, debido a que existe un nivel de error y de subjetividad por lo tanto es necesario complementar con evaluaciones de variables de crecimiento debido a que estas variables vegetativas llevan informacin sobre la resistencia (Surez y Rosales, 2008); Navarro et al., (2009) ratifica que la escala de severidad no debe ser utilizada como nico elemento para determinar la resistencia de genotipos, pues otros factores tales como la reproduccin o no del nematodo y componentes de crecimiento son criterios que ayudan a establecer su grado de resistencia o susceptibilidad. Debido a que la diferencia en altura entre los genotipos MS (CBco46, CBg31) y el testigo fue de 10% se deduce que la altura no fue afectada por accin del nematodo. estos resultados son corroborados por Nio et al., (2008), quienes trabajando en la evaluacin de altura en plantas de uchuva, en los primeros meses no se observaron diferencias significativas entre los tratamientos, inoculados con Meloidogyne spp. De igual manera, Gaviria (2004) atribuye este efecto a que fisiolgicamente las plantas absorben mayor cantidad de agua y aumentan su elongacin, como respuesta inicial al ataque de nematodos. Peso fresco de raz. La variable peso fresco de raz, de acuerdo a la prueba de comparacin de medias Duncan, muestra que los genotipos con las menores reducciones (60 al 90%), tuvieron diferentes porcentajes promedio, pero no presentaron diferencias estadsticas significativas; se destacan los genotipos CBg31, CBp18, CBco53, CBsa95 y CBg27, los cuales el 90% de peso fresco de raz con relacin a sus respectivos testigos, manifestando diferencias estadsticas significativas respecto a los genotipos CBp16, CBb08, CBi49, CBp23, CBsa99, CBsj37, CBsj36, CBco44, CBsa96, CBc10, CBb03, CBgu94, CBim91, CBco46, CBb01, CBp48, CBc11, CBsj38, CBb02, CBb04, CBg52, CBsa98,Ba09 que solo alcanzaron hasta el 59.5% de peso fresco de raz de sus testigos. Entre los genotipos que alcanzaron el 90% respecto a su testigo hay dos materiales MS (CBg31, CBsa95) que expresaron un elevado grado de severidad y no fueron afectados en forma significativa en esta variable. Sin embargo, es posible que en una etapa inicial de ataque por el nematodo la planta produzca races nuevas de manera atpica como respuesta de defensa y adems las agallas producidas contribuyan a no reducir el peso fresco de la raz. Lpez, (1980) manifiesta que el incremento obtenido en las plantas inoculadas, en la mayora de los cultivares, podra atribuirse a que Meloidogyne incognita provoca la formacin de agallas en las races, lo que posiblemente causa el aumento en el peso. Corroborando los resultados anteriores, Crozzoli et al., (1995); Morera y Lpez, (1987), al evaluar plantas de frijol y caf
respectivamente, notaron un ligero aumento en la altura y en el peso fresco de las races de los tratamientos inoculados con Meloidogyne spp. Esta afirmacin concuerda con resultados obtenidos por Barker y Olthof (1976) y Morera (1984) quienes afirman que el ataque de Meloidogyne spp., causa incrementos en el peso de las races afectadas y que densidades poblacionales bajas de nematodos pueden ocasionar cambios en algunos reguladores del crecimiento o causar la formacin de races nuevas en las reas que presentan agallas, lo que aumenta el crecimiento de las plantas, en una etapa inicial. Por el contrario, Morera (1984), en evaluacin de variedades de arveja, no encontr diferencias significativas entre tratamientos en altura, peso seco areo, peso fresco de raz y rea foliar, a los 80 das despus de la inoculacin con Meloidogyne spp, aunque observ un aumento leve en la altura y el peso fresco de la raz de los tratamientos inoculados con respecto a los testigos sin inocular. Peso seco de raz. La variable peso seco de raz segn la prueba de comparacin de medias Duncan muestra que los genotipos con menores reducciones (57.3 al 90), presentaron diferentes porcentajes promedios, mientras que no tuvieron diferencias estadsticas significativas, se destacan los genotipos CBg31, CBp18, CBco41, CBg30, CBg27, CBsa95 y CBco40 alcanzaron el mayor porcentaje promedio del 90%, respecto a sus testigos correspondientes; presentando diferencias estadsticas significativas con los genotipos que no superaron el 56% de peso seco de raz de sus testigos, estos materiales fueron CBp16, CBb01, CBc10, CBb06, CBco45, CBb08, CBb04, CBp48, CBsj38, CBb02, CBsa96, CBg52, CBco46, CBsj37, CBb03, CBgu94, CBco53, CBa09 y CBsa98. Al igual que en los casos anteriores entre los genotipos con mayor porcentaje promedio hay materiales MR (CBp18, CBg27,CBco41) como tambin MS (CBg31, CBg30, CBsa95) en igual proporcin, indicando una vez ms la compleja relacin existente entre el nematodo y su hospedante, que permite afirmar la importancia de tener en cuenta varios parmetros en el momento de determinar la existencia de algn grado o no de resistencia. Los genotipos CBp18, CBco41, CBg27, MR presentan un efecto leve ocasionado por el nematodo, sin embargo, hay poca formacin de agallas, que se puede atribuir a diferentes factores involucrados en la moderada resistencia, donde intervienen diferentes mecanismos de defensa inducida bioqumicamente en las clulas del hospedante. Madriz (2002), por ejemplo manifiesta que estas lesiones son el resultado de una reaccin hipersensible. Arias et al, (2009), mencionan que a continuacin del reconocimiento del patgeno, una de las respuestas de defensa ms rpida que ocurre es la llamada explosin oxidativa,
la cual consta de la produccin de intermediarios reactivos del oxgeno (ROS, Intermediarios de Oxgeno Reactivo) en el sitio de invasin del nematodo (Ryals et al., 1996), desencadenando en una reaccin hipersensible, adems est asociada a la expresin simultanea o paralela de otros mecanismos de defensa, incluyendo la acumulacin de fitoalexinas, deposicin de lignina, suberina y protenas ricas en hidroxiprolina y con la produccin y acumulacin de altas cantidades de protenas relacionadas con la patognesis, que se asocian con el fenmeno de resistencia sistmica adquirida (Cepeda, 2001; Christie, 1970). En los genotipos moderadamente resistentes con reduccin en sus variables de crecimiento se observ que bajos grados de severidad causan efectos negativos en las variables, indicando que los materiales no soportan el ataque del patgeno y su reaccin es inmediata afectando negativamente su normal crecimiento y desarrollo; adems tienen la capacidad gentica de no expresar visualmente sntomas en sus races. Datos similares reporta Araya, (2003) en musceas donde en muchos casos races asintomticas y aparentemente sanas contienen altas poblaciones de nematodos que pueden disminuir el crecimiento y desarrollo de las plantas. Lpez (1980), evalu diez variedades de frijol comn a Meloidogyne spp., afirmando que materiales con baja incidencia presentaron menor peso radical en plantas inoculadas, y atribuye este efecto a que el cultivar es intolerante al ataque del nematodo. En los genotipos moderadamente susceptibles con gran reduccin de sus variables de crecimiento, se manifestaron los sntomas tpicos del ataque de Meloidogyne spp. a plantas susceptibles, por lo tanto estos materiales son descartados para posteriores evaluaciones en campo. Sin embargo, fueron interesantes ya que permitieron observar claramente los efectos del patgeno y comparar con otras situaciones encontradas (Coyne et al., 2007 Madriz, 2002; Volcy, 1998; Aballay, 1995; Lordello, 1992). Resultados semejantes reporta Estaol et al., 1999, en un ensayo de produccin de materia seca en plantas jvenes de maz, que el peso seco de raz y peso seco de la parte area a los 50 das posteriores a la inoculacin de huevos de Meloidogyne, mostr un porcentaje de reduccin significativa. Los genotipos MR (CBg27 y CBp18) y MS (CBg31 y CBsa95) con menores reduccines en sus variables de crecimiento tienen condiciones deseables en la bsqueda de resistencia a Meloidogyne spp. y es esencial valorar su comportamiento en condiciones de campo en sus componentes de rendimiento, debido a que existe la posibilidad que se comporten como plantas tolerantes al patgeno. Las diferentes reacciones de los genotipos indican que existe variabilidad gentica que promueve respuestas diversas al ataque del
nematodo, que van desde efectos muy leves hasta daos severos en el crecimiento. Se explica por la alogamia de la especie. Reconocimiento y frecuencia de Meloidogyne spp. Los patrones perineales obtenidos de los 45 genotipos evaluados presentaron caractersticas con las descritas para M. incognita Chitwood, M. arenaria Neal Chitwood, M. hapla Chitwood, M. exigua Goeldi y M. javanica Chitwood (Fig. 2); Saldarriaga et al., (1997), quienes afirman que en el tomate de rbol se han registrado las especies de M. incognita Chitwood, M. arenaria Neal Chitwood, M. javanica Chitwood, M. hapla Chitwood como las que mayor dao producen a este cultivo en todas las zonas productoras. Con base en las huellas perineales identificadas y apoyados en las caractersticas de las descripciones reportadas por Taylor y Sasser, 1983; Garcia y Obando, 2005; Vergel et al., 2000, en las muestras de los 45 genotipos de tomate de rbol se encontr el 58% M. incognita Chitwood, 20% M. arenaria Neal Chitwood, 12% M. hapla Chitwood, 8% M. exigua Goeldi y 2% M. javanica Chitwood Lozada et al (2002), encontraron que M. incognita Chitwood fue la especie ms predominante mientras que M. arenaria Neal Chitwood estaba en menor porcentaje en un estudio de identificacin de especies de Meloidoyne spp. provenientes de municipios productores en el Valle del Cauca. Gaviria (2004), identific especies de Meloidogyne spp. asociadas con los cultivos de tomate de rbol, lulo y granadilla y encontr que en tomate de rbol hay asociacin entre especies de M. incognita Chitwood 42%, M. javanica Chitwood 28%, M. hapla Chitwood 21%, M. arenaria Neal Chitwood 4%. Garcia y Obando, (2005), reportan que se encuentra el 57.3% M. incognita Chitwood, 22.5% M. arenaria Neal Chitwood, 10.79% M. hapla Chitwood, 7.84% M. exigua Goeldi, corroborando que la especie M. incognita Chitwood, es la ms predominante en el Departamento de Nario; adems indican que la presencia de M. exigua Goeldi, afectan cultivos de tomate de rbol; en cuanto al porcentaje de especies es muy similar al encontrado en la presente investigacin. Diferentes estudios realizados en identificacin de especies de Meloidogyne, en tomate de rbol por Lozada et al., (2002), Gaviria, (2004), Garca y Obando, (2005) y los datos encontrados en la presente investigacin coinciden que M. incognita Chitwood es la especie ms predominante encontrada afectando cultivares de tomate de rbol con frecuencias superiores al 40%. La alta frecuencia de M. incognita Chitwood, se presenta porque las hembras de otras especies de Meloidogyne, producen en promedio 400 huevos cada una, mientras que la cantidad cuantificada para M.incognita, esta
alrededor de los 800 hasta 2000 huevos (Lordello, 1992). Entre los genotipos evaluados es posible que haya otras respuestas a los diferentes grados de severidad a alguna de las especies de Meloidogyne spp., sin embargo, debido a la inoculacin de varias especies juntas, el efecto de resistencia especifica se diluye y no es perceptible; debe tenerse en cuenta que este efecto no es evaluado en la presente investigacin, aunque seria de inters conocer la especificidad de las diferentes especies de Meloidogine spp. inoculadas a plantas de tomate de rbol, que permitira comprender la relacin existente entre huspedpatgeno, y adems de tomar medidas preventivas y de control ms acertadas respecto a esta enfermedad. CONCLUSIONES Los genotipos de Solanum betaceum (Cav.) Sendt evaluados y su reaccin al nematodo Meloidogyne spp., permitieron determinar una baja variabilidad gentica entre ellos, encontrando respuestas de moderada resistencia y moderada susceptibilidad, que son categoras contiguas en la escala de severidad, pero no inmunes, resistentes o altamente susceptibles. Los genotipos MR (CBg27 y CBp18) y MS (CBg31 y CBsa95) con menores porcentajes promedios de reduccin en sus variables de crecimiento tienen condiciones deseables en la bsqueda de resistencia a Meloidogyne spp. y es esencial valorar su comportamiento en condiciones de campo en sus componentes de rendimiento. AGRADECIMIENTOS Los autores expresan su agradecimiento al grupo de Investigacin de Sanidad Vegetal de la Universidad de Nario por su valiosa y oportuna colaboracin para la realizacin de esta investigacin.
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REVISTA FITOPATOLOGA COLOMBIANA

Normas para la elaboracin de artculos
Presentacin del Trabajo Para enviar el trabajo a la revista (original y tres copias), se deber aplicar el siguiente orden, comenzando cada tem en pginas independientes, segn lo detallado a continuacin: Cartula: Una pgina con el ttulo del artculo, el autor, su direccin y el tipo de publicacin y la entidad. (1 pgina). Resumen y palabras claves (1 pgina) Summary y palabras claves en ingls (1 pgina). Cuerpo del trabajo (Texto). (Las necesarias sin sobrepasar los lmites de este reglamento). Agradecimientos (si lo considera necesario). Referencias Bibliogrficas. Tablas (1 por pgina). (Con su respectivo ttulo ). Figuras (una por pgina, debidamente numeradas). "Leyendas" o pies de las figuras.
Estructura general, secciones El artculo cientfico incluir las secciones que se indican ms adelante; en la nota cientfica se podrn unir algunas de las secciones y la revisin bibliogrfica es de estructura libre. Los tres tipos de colaboraciones deben incluir siempre el resumen y el summary. La estructura del artculo cientfico debe contener lo siguiente:
1. Ttulo Deber reflejar adecuadamente el contenido de la publicacin con el menor nmero posible de palabras; estas no deben ser ms de veinte. El ttulo no debe incluir abreviaturas ni frmulas qumicas (salvo para los istopos).
2. Autor(es) Se describirn sus nombres y apellidos debajo del ttulo, seguidos del nombre de la entidad donde se gener la investigacin y la direccin y la del autor. Enseguida se coloca, si es el caso, toda la informacin correspondiente al personal tcnico que haya colaborado en la investigacin. 3. Resumen y Summary El resumen debe hablar de la naturaleza e importancia del trabajo, la metodologa usada y los resultados sobresalientes. Debe tener un mximo de una pgina (200 a 300 palabras) si corresponde a un artculo cientfico, o de media pgina si corresponde a una nota tcnica o cientfica. 4. El summary Es la traduccin al portugus o al ingls del resumen, incluido el ttulo. Si se desea, se pueden adicionar resmenes en Portugus, Francs, o Alemn.
5. Palabras claves Deber seleccionarse la palabra o palabras claves ms importantes, preferiblemente no contenidas en el ttulo, y colocarlas en un listado lo ms breve posible.
6. Introduccin Deber destacar la necesidad e importancia de la investigacin, mencionar las limitaciones del trabajo, y los resultados de otros trabajos similares o relacionados (revisin de literatura breve referida a la informacin ms relevante).
7. Materiales y mtodos
2010 Fitopatologa Colombiana /Volumen 34 (2)
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Se deben escribir en forma ordenada, clara y precisa, con detalles suficientes para que el lector pueda, si lo desea, repetir el experimento.
8. Resultados y discusin: Ambos temas se pueden incluir preferiblemente en una sola seccin. Los resultados se deben escribir en forma precisa y ordenada. En la discusin se explican los hechos y se relacionan con los resultados de otras investigaciones, debidamente sustentados con citas bibliogrficas entre parntesis, utilizando el Sistema Autor, Ao.
9. Conclusiones Deben ser breves y claras y basarse estrictamente en los resultados (no en conjeturas).
10. Agradecimientos (Si se desea).
11. Referencias Bibliogrficas Se debe limitar a la estrictamente necesaria y en relacin directa con la investigacin realizada. Todas las referencias citadas en esta seccin deben ser citadas en el texto. Las referencias se deben colocar en la lista en orden alfabtico por los apellidos de los autores. Cuando hay varias referencias encabezadas por un mismo autor, se escriben primero aquellas en las cuales ste aparece slo, y luego aquellas en las que est seguido por coautores; dentro de cada grupo se sigue en orden cronolgico. No use la palabra Annimo para asignar autores desconocidos; en su lugar, escriba el nombre del editor (seguido de un parntesis con la abreviatura ed. o eds.) o el de la editorial o, si no hay ninguno comience con el ttulo de la obra. No incluya en la bibliografa las referencias de informaciones personales, ni de trabajos sin publicar aunque estn aceptados. Estas fuentes se pueden citar en el texto, entre parntesis. La referencia de una publicacin peridica se har en el siguiente orden: autor, ao, ttulo del artculo, nombre abreviado de la revista, volumen, nmero (entre parntesis) y pginas.
Ejemplo: Bowman, J.M., Delwiche, P.A., Brabiebson, R.L. y Williams, P.H. 1980. Lepthosphaeria maculans on cabbage in Wisconsin. Plant. Dis. 64(3):326328. En los libros y folletos el orden general es: autor, ao, ttulo, nmero de la edicin, casa editora, lugar de la publicacin y nmero de pginas. En caso de incluir referencias consultadas electrnicamente en Internet estas se pueden presentar en el siguiente orden:
Autor(es). Ao de publicacin. Ttulo del documento. Subttulo. El medio, en lnea [entre corchetes]. Nmero de la edicin (slo a partir de la segunda). Editorial o entidad que publica en web. Lugar de publicacin. Fecha en que se consult el material, para los documentos en lnea [entre corchetes].Serie, si la tiene (entre parntesis). Disponible en:
Ejemplos:
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Myers, M.P., Yang, J. y Stampe, P. 1999. Visualization and functional analysis of a maxi-K-channel (mSlo) fused to green fluorescent protein (GFP). Electronic Journal of Biotechnology 2(3) [en lnea ]. [consultado 21 Marzo 2000]. Disponible en : http://www.ejb.org/content/vol2/issue3/full/3/index/html Dvila, M. y Coyne, D. 2000. Deteccin de genes de letalidad en caraota mediante el uso de la tcnica de anlisis de segregantes en grupos. Agronoma Tropical 50(3):323-335 [en lnea]. [citado 12 octubre 2001]. Disponible en: http://www.redpav-fpolar.info.ve/agrotrop/index.html
Extensin y formato para los trabajos La extensin mxima del artculo completo (Resumen, summary cuerpo, agradecimientos, referencias, tablas y figuras ) escrito con un tipo de letra de 12 cpi (caracteres por 2,5 cm o una pulgada) ser de 16 pginas a doble espacio si se trata de un "artculo cientfico" o una "revisin bibliogrfica"; 6 pginas si es una "nota cientfica" y una pgina si es una "carta al editor Cualquier colaboracin para la revista debe estar mecanografiada o mecanotipiada en papel tamao carta, por una sola cara, a doble espacio y con letra grande (no ms de 12 caracteres por pulgada). Los mrgenes superior, inferior, izquierdo y derecho tendrn 2,5 cm. Cada pgina se numerar en la esquina inferior derecha. Se prefieren los trabajos elaborados en computador utilizando el procesador de palabra "Word". A la copias del escrito impresas en texto de alta calidad se anexar el disquete o el Disco compacto respectivo conteniendo exactamente lo presentado en el escrito.. Los ttulos de primer orden deben ser en maysculas; los ttulos de segundo orden deben ir en minsculas; los ttulos de tercer orden son en minscula, dos puntos y seguido de texto, as:
TITULO DE PRIMER ORDEN
Ttulo de segundo orden
Ttulo de tercer orden: Seguido de texto como en este ejemplo.
Redaccin general y estilo El trabajo se debe redactar en pasado impersonal y debe ser claro, conciso, coherente y exacto. Los nombres cientficos se deben escribir en itlicas y completos la primera vez que se nombren; despus se pueden abreviar, escribiendo slo la inicial del gnero, pero dejando la especie completa. Las referencias deben ser citadas en el texto utilizando el Sistema Autor, Ao, colocados en parntesis, por ejemplo (Arbelez, 1988). Cuando son varios (ms de dos) los autores de la publicacin citada, debe colocarse el primer autor seguido del latn et al. y luego el ao respectivo, pero en el listado de Referencias Bibliogrficas deben figurar todos los autores. Al referirse a productos se deben preferir los nombres comunes a los comerciales. En el caso de nombres de marcas registradas, se deben escribir seguidos de la letra R (mayscula) y de la direccin del fabricante. Para las unidades de medida se debe usar el Sistema Internacional de Unidades (SI). Tanto las tablas como las figuras se deben numerar en forma consecutiva con nmeros arbigos. Todos ellos, al igual que todas las referencias bibliogrficas se deben citar en el texto. En la medida de lo posible se deben evitar las notas de pie de pgina. Es preferible reemplazarlas por parntesis dentro del texto.
Elaboracin de tablas
Cada tabla o figura se debe presentar en una hoja aparte, al final del texto, pero debe estar nombrada dentro de ste.
73
Las tablas deben ser sencillas y contener slo la informacin indispensable para claridad del trabajo. Su formato puede o no llevar lneas verticales; se recomienda dejar solamente las horizontales necesarias para destacar el encabezamiento (ttulos y subttulos de las columnas) y para cerrar los datos, al final de la misma. La tabla debe estar identificada por un nmero y por un ttulo, el cual debe ser claro y autoexplicativo. Los datos no deben ser una repeticin de los del texto o de alguna figura y debern limitarse a aquellos indispensables para claridad del artculo cientfico. Ejemplo: Los valores contenidos en las tablas deben usar el punto (.) para separar los miles y la coma (,) para los decimales, ejemplo 1.545,20.
Tabla 5. Incidencia y severidad de la Antracnosis en mango cultivar HadenICA, bajo diferentes medidas de manejo de la enfermedad, durante 1993. Tratamientos 1 2 3 4 5 6 9 12 13 Aspersin floracin Aspersin frutos alfileres Aspersin frutos con 50% de maduracin Aspersiones floracin y frutos alfileres Aspersiones floracin y frutos con 50% maduracin Aspersiones floracin a cosecha (8 aspersiones) Podas floracin a cosecha Aspersiones floracin a cosecha y podas Testigo absoluto Incidencia (%) 81,7 AB 80,33 AB 73,33 B 74,33 B 72,66 B 50,50 C 66,67 B 25,34 D 90,0 A Severidad (%) 50 50 40 40 38 20 45 10 55 A A AB AB AB C A D A
La tabla puede incluir abreviaturas y llamadas, las cuales se identificarn con letras minsculas (usadas a manera de exponentes para que no se confundan con los correspondientes a diferencias estadsticas). Las llamadas se aclararn en las notas de pie. Cuando hay niveles de significacin estadstica, se indican con asteriscos (uno a tres) y se explican en las notas del pie de la tabla. El nmero de tablas a incluir en el artculo deben ser las estrictamente necesarias Figuras Por figuras se entienden diferentes ilustraciones como fotografas, grficas, mapas, dibujos, etc. Al igual que las tablas, deben tener un ttulo claro, y estar numeradas en el orden en que se citan en el texto. Deben ser muy ntidas y de buen tamao, teniendo en cuenta que su calidad disminuye en el proceso de impresin, y que en dicho proceso ellas no se ampliarn sino que muy probablemente se reducirn. Las fotografas deben ser en papel brillante y con buen contraste, y estar bien enfocadas sin elementos distractores (etiquetas elaboradas a mano con letras ms grandes que el sujeto a destacar); tambin se aceptan transparencias a color de buena calidad o imgenes electrnicas en formato JPG entre 500 y 1000KB en su respectivo diskette o CD. En cuanto al nmero de fotografas a incluir deben ser las estrictamente necesarias y preferiblemente en una composicin. Las grficas deben ser sencillas en la medida que lo permita el trabajo y todos sus elementos deben estar identificados claramente. Cuando se elaboren mediante el uso de computador debe incluirse los archivos en el disquete o un disco compacto, indicado en la etiqueta el programa y la versin del mismo. Utilizar tramas y tonos de gris contrastantes. Se prefiere que las grficas no sean a color. Las leyendas de las figuras y las convenciones, si las hay, deben quedar dentro del rea del grfico colocadas en una posicin conveniente de manera que faciliten la interpretacin. Los pies de figuras o ttulos de estas deben elaborarse en una pgina aparte y no dentro del rea de la grfica del archivo electrnico, el texto debe ser lo suficientemente descriptivo como para que se pueda entender sin recurrir al texto. Cada figura debe estar identificada al respaldo con su nmero correspondiente y con el nombre del autor del artculo. Figuras desalineadas, con lneas borrosas o fotocopias no sern aceptadas. Solamente incluir las estrictamente necesarias (los costos de separacin de color e impresin son muy altos). Nota: Para mayor ilustracin respecto a estas normas se pueden consultar las guas para preparacin de artculos de Plant Disease, Phytopathology y especialmente las instrucciones para los autores de la Revista Corpoica 2(1): 64-70, 1997
74
COMIT CIENTIFICO Alberto Pez Redondo Benjamn Pineda Lpez Bernardo Villegas Estrada Carlos Germn Muoz Perea Diana Marcela Vanegas Villa Edwinson Alberto Rojas Trivio Elizabeth Alvarez Cabrera Francisco Jos Morales Garzn Gerardo Martnez Lpez Gustavo Adolfo Prado Jess Eliecer Larrahondo Aguilar Jorge Enrique Gmez Hurtado Jorge Ignacio Victoria Kafure Jos Mara Hernndez Murillo Juan Carlos ngel Snchez Liliana Mara Hoyos Carvajal Marina Snchez de Prager Maritza Cuervo Ibaez Mnica Betancourth Vsquez Nelson Bravo Otero Oscar Adrin Guzmn Piedrahita Pedro Alfonso Alarcn Gmez Rodrigo Orlando Campo Arana Ing. Agr. M Sc Fitopatologa Ing. Agr. M Sc Fitopatologa Ing. Agr. M Sc Fitopatologa Ing. Agr. Ph D in Plant Sciences Adm.CAgr. M Sc. Biotecnologa Microbilogo M Sc Fitopatologa Ing. Agr. Ph D Fitopatologa Ing. Agr. Ph D Virologa Ing. Agr. Ph D Virologa Ing. Agr. M Sc Ciencias Agrcolas Qumico Ph D Fitoqumica Ing. Agr. M Sc. Fitopatologa Ing. Agr. Ph D Bacteriologa Ing. Agr. Espec. Fitopatologa Ing. Agr. M Sc Fitopatologa Ing. Agr. Ph D Biologa Ing. Agr. Ph D Suelos y Aguas Ing. Agr. - M Sc Rec. Fitogenticos Ing. Agr. Ph D Biotecnologa Ing. Agr. M Sc Sistemas de Semilla Ing. Agr. M Sc Fitopatologa Ing. Agr. M Sc Fitopatologa Ing. Agr. Ph D Fitopatologa
ARBITROS Ana Cecilia Velasco Fernndez Ana Milena Caicedo Bernardo Villegas Estrada Bertha Lucia Castro Charles Volcy Diana Marcela Vanegas Villa Francia Varn de Agudelo Gloria Mara Mosquera Cifuentes Jairo Castao Zapata Jos Maria Hernndez Murillo Juan de Dios Jaraba Maria Luisa Guzmn Mauricio Castao Jaramillo Nelson Bravo Otero Octavio Montoya Estrada Bacteriloga Biolloga PhD Ciencias Ing. Agr. M Sc Fitopatologa Ing. Agr. M Sc.Fitopatologa Ing. Agr. Ph D Nematologa Adm. C Agr. M Sc. Biotecnologa Ing. Agr. M Sc Fitopatologa Bacteriloga Ph D Fitopatologa Ing. Agr. Ph D Fitopatologa Ing. Agr. Espec. En Fitopatologa Ing. Agr. Ph D Fitopatologa Bacteriloga y Laboratorista Clnica Ing. Agr. Ing. Agr. M Sc Sistemas de Semilla Ing. Agr.

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FITOPATOLOGA COLOMBIANA

Fitopatologa Colombiana, normas para la elaboracin de artculos...... . 71-74

2010 Fitopatologa Colombiana /Volumen 34 No 2

2010 Fitopatologa Colombiana /Volumen 34 No2

MATERIALS AND METHODS

RESULTS AND DISCUSSION

Dias aps o plantio

Dias Aps o plantio

Days after planting

final tuber yield

Tuber yield (gm-2)

49.3 20.0 8.0 2.5

711.2 502.6 82.7 15.4

210.1 33.9 49.0 48.0

0.13 0.10 0.08 0.01

0.43 1.78 1.88 2.42

82.2 26.4 22.3 0.0

1805 2785 3325 3581

1457 2152 2453 3116 2879 3770 2896 4265

Loss (%) 49.6 22.6 7.3 0.0

4500 4000 3500 3000 2500 2000 1500 1000 500 0

y = 1147.3x + 1167.4 R2 = 0.8254

4500 4000 3500 3000 2500 2000 1500 1000 500 0 0 10 20

y = - 45.791x + 4039.3 R2 = 0.8511

y = -2.5204x + 3756.9 R2 = 0.7474

4000 3000 2000 1000 0 0 200 400 AUDPC 600 800

Tuber yield ( g/m 2 )

Tuber Yield ( g/m2 )

2010 Fitopatologa Colombiana /Volumen 34 No 2

ASOCIACIN COLOMBIANA DE FITOPATOLOGIA Y CIENCIAS AFINES, ASCOLFI

Severidad estimada (%)

Severidad estimada (%)

Severidad real (%)

Severidad real (%)

nal de Colombia por la financiacin de este proyecto contrato 2007L4348_49-837/07.

2010 Fitopatologa Colombiana /Volumen 34 No 2

Cmo solicitar ei servicio?

ARVENSES HOSPEDANTES DE NEMATODOS FITOPARSITOS EN EL CULTIVO DE PLTANO*

Universidad de Caldas. Facultad de Ciencias Agropecuarias. Departamento de Fitotecnia.

e-mail contacto: santyrive861@hotmail.com oscar.guzman@ucaldas.edu.co carolina.zamorano@ucaldas.edu.co

Cola de zorro Pasto mijillo Gramalote Caminadora Guardaroco

Raz Nmero de nematodos por 100 g de muestra

Suelo Nmero de nematodos por 100 g de muestra

torio de Fitopatologa, por su apoyo en los procedimientos de extraccin de nematodos.

2010 Fitopatologa Colombiana /Volumen 34 No 2

ASOCIACIN COLOMBIANA DE FITOPATOLOGIA Y CIENCIAS AFINES - ASCOLFI

XXX Congreso Colombiano y XVI Latinoamericano de Fitopatologa

Actividad conjunta con la ASOCIACIN LATINOAMERICANA DE FITOPATOLOGA - ALF

Informes Sede Congreso http://concolfi.com/ ascolfi2011@gmail.com

Sede ASCOLFI www.ascolficolombia.org ascolfi.colombia@gmail.com celular: 316-4303079

2010 Fitopatologa Colombiana /Volumen 34 No 2

rgano de difusin de la Asociacin Colombiana de Fitopatologa y Ciencias Afines- ASCOLFI

Suscripciones y Canje: publicaciones@ascolficolombia.org

Fuente: Grupo de Frutales Andinos, Universidad de Nario

base a la escala de severidad (Tabla 3).

Tabla 4. Categorizacin de genotipos mediante reaccin % de severidad Genotipos clasificados Reaccin

51 - 75% 76- 100%

2010 Fitopatologa Colombiana /Volumen 34 No 2

2010 Fitopatologa Colombiana /Volumen 34 No 2

REVISTA FITOPATOLOGA COLOMBIANA

10. Agradecimientos (Si se desea).

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TITULO DE PRIMER ORDEN