REGULACIÓN

ENZIMÁTICA
Dr. Giuliano Bernal Dossetto
Departamento de Ciencias Biomédicas
Facultad de Medicina
Universidad Católica del Norte
 Inhibidores
 Los inhibidores enzimáticos son agentes
moleculares que interfieren con la catálisis, ya
sea disminuyéndola o deteniéndola.
 Ha permitido obtener información sobre el
mecanismo y las rutas de las catálisis
enzimáticas.
 Se utilizan como agentes farmaceúticos.
 Los inhibidores pueden ser reversibles o
irreversibles.
 Los inhibidores pueden unirse a E o al
complejo ES
 Tipos de inhibición reversible.

1.- Inhibición competitiva.

2.- Inhibición acompetitiva.

3.- Inhibición no competitiva (Mixta).

 Inhibición competitiva
El inhibidor puede combinarse con la enzima
libre, de modo que compite con el sustrato normal,
para reaccionar con el sitio activo. Forma un
complejo enzima - inhibidor (E-I), análogo al
complejo E-S. Estos inhibidores por lo general son
moléculas que se asemejan con el sustrato.

V0= VMax[S] donde α = 1 + [I] y KI = [E] [I]

αKm + [S] KI [I]
 Inhibición competitiva
 El inhibidor no resulta químicamente alterado
por la enzima.
 Experimentalmente el porcentaje de inhibición,
para una concentración de inhibidor constante,
disminuye al incrementarse la concentración del
sustrato.
 Experimentos que se repiten con una
concentración diferente de inhibidor dan como
resultado una familia de líneas rectas cuyo punto
de intersección es común en el eje 1/Vo.
 Inhibición competitiva

 Se requiere concentraciones de
sustratos mayores para alcanzar Vmax.
 El inhibidor competitivo no interfiere
con la velocidad de ruptura del complejo
E-S.
 Un ejemplo lo constituye la inhibición
competitiva de la succinato
deshidrogenasa por el malonato.
Inhibición competitiva.
 Inhibición acompetitiva

 El inhibidor no se combina con la enzima

libre y no afecta a su reacción con el sustrato.
 Se combina con el complejo E-S, para formar
un complejo E-S-I, el cual no experimenta su
transformación a producto.

V0 = Vmax[S] donde α’ = 1 + [I] y KI = [ES] [I]

Km + α’[S] KI [ESI]
 Inhibición acompetitiva

 La pendiente de las rectas permanece

constante al aumentar la concentración del
inhibidor.
 Vmax decrece con aumento del inhibidor.
 Es poco frecuente en las reacciones de un
solo sustrato.
Inhibición acompetitiva.
Inhibición no competitiva (Mixta)
 En la inhibición no competitiva el inhibidor puede
combinarse con la enzima libre o con el complejo
E-S.
 Este inhibidor se une a un sitio de la enzima
diferente al sitio activo.
 Generalmente deforman la enzima y no puede
formarse el complejo E-S a una velocidad normal.
 Sus efectos no se anulan al aumentar la
concentración del sustrato.
 Inhibición no competitiva (Mixta)
 El inhibidor produce dos formas inactivas E-I y E-S-I
 En las gráficas de doble recíprocas las rectas
difieren en pendiente, pero no comparten un punto
común de intersección en el eje de la ordenada (1/Vo).
 Este tipo de inhbición se observa en enzimas que
poseen 2 o más sustratos
 Vmax disminuye en presencia del [I] y no cambia con
la concentración del S.
V0 = Vmax[S]
αKm + α’[S]
Inhibición no-competitiva (Mixta).
 Inhibición irreversible
 Estos inhibidores son moléculas que se combinan
o destruyen grupos funcionales esenciales para la
catálisis enzimática.
 La formación de enlaces covalentes entre la
enzima y el inhibidor es común.
 Su estudio es importante porque permite obtener
información respecto de los grupos funcionales
catalíticos del centro activo.
 Hongos y Metabolismo del Alcohol
 Coprina, toxina producida por una hongo, forma un
enlace covalente con la enzima alcohol
deshidrogenasa.
 No es tóxica excepto en individuos que hayan
bebido alcohol mientras comían el hongo.
 Las personas desarrollan una reacción tóxica por el
acetaldehído acumulado en la oxidación de etanol.
 La droga Disulfuram, usada para inhibir el consumo
excesivo de alcohol tiene el mismo mecanismo.
Inhibición irreversible: La reacción de quimiotripsina
con diisopropilfluorofosfato (DIFP) inhibe
irreversiblemente a la enzima. Esto lleva a la conclusión
que Ser195 es el residuo clave dentro del sitio activo.
Inhibidores del estado de transición
 Son moléculas diseñadas para poseer una
estructura similar a la del sustrato en el estado
de transición.
 Soncapaces de unirse en forma más estable
que el sustrato a la enzima.
 Algunos análogos se unen con una afinidad 102
- 106 veces mayor que el sustrato.
 Este
principio se utiliza en el desarrollo de
nuevas drogas.
 Inhibidores Suicida
 Corresponden a una clase de inhibidores
irreversibles.
 Soncompuestos poco reactivos hasta que se
unen al sitio activo de la enzima.
 Son diseñados de tal forma de llevar a cabo el
primer paso de la reacción enzimática normal,
pero en lugar de convertirse en producto se
transforman en una molécula reactiva que
permanece covalentemente unida en el sitio
activo de la enzima.
 Inhibidores enzimáticos usados
como fármacos
 Lasdrogas utilizadas para inhibir enzimas de
microorganismos no poseen efecto sobre las
células humanas.
 En humanos se utilizan drogas que inhiben
específicamente una isoenzima, sin afectar las
otras.
 Porejemplo el Viagra (Sildenafil) inhibe
específicamente una isoenzima de la
fosfodiesterasa.
 Mecanismo de acción del Viagra
 La
enzima fosfodiesterasa (PDE) cataliza la
degradación de cGMP y cAMP.
 Lainhibición de esta enzima prolonga la acción
de estos segundos mensajeros.
 Viagra inhibe específicamente PDE5, el cual es
específico para cGMP y se encuentra
principalmente en los cuerpos cavernosos y en
el tejido muscular liso vascular y
gastrointestinal.
 Mecanismo de acción del Viagra
 La
erección es mediada por NO a través de un
mecanismo dependiente de cGMP.
 Viagra presenta afinidad por PDE5 sobre PDE3,
la cual regula la contractibilidad en el tejido
cardiaco.
 Sin embargo presenta cierta afinidad por PDE6,
la cual se expresa en la retina. De esta forma
algunos pacientes presentan ciertos tintes
verde-azulados en la visión luego de consumir
el fármaco.
 Mecanismo de acción del sildenafil (Viagra)

Erección

Por efecto de la excitación sexual se libera de las neuronas NANC de los cuerpos
cavernosos y de las células endoteliales, óxido nítrico (NO). Este va a promover una
serie de cambios que resultan (mediados por GMPc) en una relajación del músculo liso
cavernoso, que permiten la vasodilatación de las arterias del pene y en la subsiguiente
erección. Pero la GMPc es degradada por la fosfodiesterasa tipo 5 (PDE 5),
responsable de la pérdida de la erección. El sildenafil es un potente inhibidor, de la
PDE 5, lo que se opone a la degradación de la GMPc, impidiendo así la detumescencia
peneana.
Sildenafil
 Enzimas reguladoras
 Sonenzimas que catalizan el paso limitante en
una reacción.
 Pueden aumentar o disminuir su actividad
catalítica en respuesta a diversas señales.
 Porlo general el sitio activo difiere del sitio
regulatorio.
 Se conocen 2 tipos:
 Enzimas alostéricas
 Enzimas modificadas covalentemente
 Enzimas alostéricas
 Son enzimas que responden a un modulador, el
cual se une a un sitio denominado alostérico.
 La unión de un efector alostérico a la enzima
cambia su estado conformacional de modo que
altera su unión al sustrato.
 Moduladores (+) aumentan su afinidad por el
sustrato mientras que los moduladores (-) la
disminuyen.
 Se dividen en 2 clases: K y V.
 Enzimas alostéricas
 El modulador alostérico en las enzimas clase K
altera su Km pero no su Vmax.
 El modulador alostérico en las enzimas clase V
altera su Vmax pero no su Km.
 La mayoría de las enzimas alostéricas son
oligoméricas.
 Si el ligando favorece la unión de otros ligandos
similares, es una interacción homotrópica.
 Si se estimula la interacción de un ligando
distinto, es heterotrópica.
Model of allosteric enzyme
with separate catalytic (C)
and regulatory (R) subunits
Feedback inhibition
Modelo concertado Modelo secuencial
 Modificación covalente
 Grupos como fosforil, adenilil, uridilil,
metil, son unidos covalentemente a las
enzimas.
 Estamodificación es mediada por otras
enzimas, así como su posterior remoción.
 Másde un tercio de todas las enzimas
eucarióticas son fosforiladas.
 Unakinasa agrega un fosfato, mientras
que una fosforilasa lo remueve.
 Regulación por proteólisis de un
precursor

 Algunasenzimas provienen de un
precursor inactivo denominado zimógeno.
 La mayoría de las enzimas del estómago
y del páncreas son reguladas así
(tripsinógeno).
 Enotros casos se denomina proenzima al
precursor inactivo (fibrinógeno).
 Aplicaciones clínicas de las
enzimas
 En el plasma encontramos 2 tipos de enzimas:
las que están presentes en forma normal en el
plasma y las que son liberadas desde los
tejidos.
 Eldaño tisular induce un aumento o la aparición
de enzimas intracelulares en el plasma.
 Eltiempo de aparición y desaparición de una
enzima en el plasma puede ser usado como
ensayo clínico
Marcadores del daño al miocardio
 Enzyme-Linked
Immunoadsorbent Assay
 El test de ELISA se basa en un ensayo enzimático
unido a la detección por anticuerpos.
 Un anticuerpo específico se une a la proteína de
interés (anticuerpo primario).
 Un anticuerpo secundario marcado con peroxidasa
es específico contra el anticuerpo primario.
 La peroxidasa es usada para generar un producto
coloreado que es medible, y cuya concentración es
relativa a la cantidad de antígeno en la muestra.
Schematic of ELISA for detecting the human immunodeficiency virus (HIV)
envelope proteins.
 Medición de isoenzimas: Uso
diagnóstico
 Las isoenzimas pueden ser separadas por
electroforesis.
 Si las enzimas son multímeros, pueden ser
halladas en diferentes formas.
 LDH, CK y fosfatasa alcalina tienen importancia
clínica.
 CK es un dímero con dos tipos de subunidades
M (Músculo) y B (Cerebro). En el miocardio se
encuentra el dímero MB.
 LDH posee 4 subunidades y 5 isoformas
Lactate Dehydrogenase Isozymes
Type Composition Location

LDH1 HHHH Myocardium

LDH2 HHHM Myocardium

LDH3 HHMM Brain and

Kidney
LDH4 HMMM

LDH5 MMMM Liver and

Skeletal Muscle
Tracings of densitometer scans of LDH isozymes at time intervals following
a myocardial infarction