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ENZIMAS

Dr. Giuliano Bernal Dossetto


Departamento de Ciencias Biomédicas
Facultad de Medicina
Universidad Católica del Norte
Introducción
Son catalizadores de las reacciones químicas presentes
en los sistemas biológicos.
 Presentan alta especificidad.
 Disminuyen la energía de activación dentro de una
reacción permitiendo la formación de producto.
 Las enzimas son de naturaleza proteíca, a excepción
de un grupo de RNAs catalíticos (Ribozimas).
 La actividad catalítica de las enzimas, depende de la
integridad de su conformación nativa, cuyos pesos
moleculares fluctúan entre los 12 kDa a 1.000 kDa.
Enzimas y Medicina
Enzima Alteración Patología
Lactasa Inhibición de su Intolerancia a la lactosa
síntesis
Glucosa 6P- Diversas mutaciones Favismo (Destrucción
Deshidrogenasa eritrocitaria)
ALT, GPT Aumento en los niveles Indicio de ataque cardíaco
plasmáticos o falla hepática
Tirosinasa Deficiencia en la Albinismo
síntesis de Melanina a
partir de tirosina
Fenilalanina Conversión de Fenilcetonuria
hidroxilasa fenilalanina a tirosina
1897: Eduard Buchner demuestra que el extracto de levadura
puede fermentar azúcar a alcohol

1926: James Sumner aisló y cristalizó la enzima ureasa


encontrando que era una proteína. Postula que todas las
enzimas son proteínas.

1930: J.B.S Haldane sugiere en su tratado “Enzimas” que


interacciones débiles entre la enzima y el sustrato podrían
ser usadas para distorsionar a éste último e inducir la
catálisis.
Clasificación
 Enzimas simples: Son aquellas que para su función
catalítica no necesitan cofactor o coenzima.
 Enzimas conjugadas: Enzimas que necesitan para
su catálisis una coenzima o cofactor.
 Una enzima junto a su coenzima y/o cofactor se
designa como holoenzima. La región proteíca de tal
enzima se denomina apoenzima o apoproteína.
Cuando la coenzima o ión metálico se unen
covalentemente a la enzima, constituye un grupo
prostético.
 Isoenzima: Distinta estructura, misma función
Clasificación enzimática
 Para evitar ambiguedades la clasificación enzimática se
basa en un código de 4 dígitos para agrupar a todas las
enzimas.
 ATP + Glucosa ADP + Glucosa 6-P
 ATP-Glucosa fosfotransferasa (2.7.1.1.)
 (2) Clase: Transferasa
 (7) Subclase: Fosfotransferasa
 (1) Fosfotransferasa con un grupo hidroxilo como
aceptor
 (1) D-glucosa como aceptor del grupo fosforilo
Sitio Activo
Existen reacciones químicas
intracelulares que se presentan
en condiciones desfavorables.
Sin embargo las enzimas
solucionan el problema al
proporcionar un ambiente, donde
una reacción determinada es
energéticamente más favorable.

Binding of a substrate to an
enzyme at the active site.
Velocidad y equilibrio de una
reacción enzimática

 E+S ES EP E+P

 La función de un catalizador es aumentar la


velocidad de reacción.

 Los catalizadores NO modifican los equilibrios de


reacción.

 Cualquier reacción tal como S P, puede


describirse por un diagrama de reacción coordinada.
Definiciones termodinámicas de
equilibrio y velocidad de reacción

 Equilibrio de reacción se relaciona con ΔGº´


 Velocidad de reacción se relaciona con ΔG‡
 Termodinámicamente la relación entre ΔGº´ y
Keq puede ser descrita por la expresión:

ΔGº´ = -RT ln Keq (R= 1,987 cal/mol ºK)


Definiciones termodinámicas de equilibrio y
velocidad de reacción

 La velocidad de una reacción es determinada


por la concentración de los reactantes, y por una
constante de velocidad (k).
 V = k[S] Reacción de 1º órden
 V = k[S1][S2] Reacción de 2º órden

 La concentración de la enzima [E] es


despreciable en una reacción catlizada.
Pocos principios explican el poder catalítico y
la especificidad de las enzimas

 Durante una reacción catalizada ocurren muchas


reacciones químicas entre grupos funcionales de S y E.
Los grupos funcionales catalíticos podrían formar enlaces
covalentes transientes o se podrían transferir algunos
grupos desde el S hasta E. Estas reacciones disminuirían
la energía de activación de la enzima.
 Gran parte del poder catalítico de las enzimas deriva de
la energía libre liberada en la formación de múltiples
enlaces débiles e interacciones no covalentes entre la
enzima y su sustrato.
Pocos principios explican el poder catalítico y
la especificidad de las enzimas

 La interacción entre E y S (Complejo [ES]) es mediada


por las mismas fuerzas que estabilizan la estructura de
la proteína.
 La formación de cada interacción débil en el complejo
[ES] es acompañada por una pequeña liberación de
energía libre.
 El sitio activo de las enzimas no es complementario al
sustrato per se, sino que al estado de transición en el
cual el sustrato se convierte en producto en el curso de
una reacción enzimática.
E: Dihidrofolato reductasa
S1: Tetrahidrofolato
S2: NADP+
Cinética Enzimática
V0= Vmax(S)
Km+(S)
Teoría de Michaelis-Menten

 Desarrollada en 1913 explica la acción y


cinética de las enzimas. Supone que E se
combina con S para formar el complejo E-S, el
cual se escinde para formar E + P.
 La ecuación de Michaelis-Menten es la ecuación
de velocidad para las reacciones catalizadas por
enzimas frente a un sustrato.
 Cuando la velocidad inicial es exactamente
igual a la mitad de la velocidad máxima, se
deduce que la concentración de sustrato es igual
a la constante Km.
Concentración de sustrato
 Laconcentración de sustrato cambia con el
curso de la reacción, por lo tanto es complejo
estudiar su efecto.
 Para evitar esto se mide la velocidad inicial (V0),
la cual se obtiene cuando el tiempo es lo
suficientemente corto una vez que ha
comenzado la reacción. En este tiempo se
considera [S] constante.
 Cuando [S] no es capaz de modificar la
velocidad se dice que se alcanzó Vmax.
Características de Km y Vmax.
 Km no tiene un valor fijo, sino que varia con la
estructura del sustrato, con el pH y la temperatura.
 Para las enzimas que poseen más de un sustrato,
cada uno de estos exhibe una Km característica.
 En condiciones intracelulares, las enzimas no se
hallan saturadas por los sustratos.
 La velocidad máxima (Vmax) varía ampliamente de
una enzima a otra, dependiendo del sustrato, del pH y
la temperatura.
Representación de Lineweaver-Burk.

 Es una transformación algebraica de la ecuación de


velocidad de Michaelis-Menten.
 La más utilizada es la que considera los recíprocos
de ambos miembros de la ecuación de velocidad.
 Esta representación de doble recíproco, permite
una determinación más exacta del valor de Vmax de las
obtenidas de los gráficos de velocidad de Michaelis-
Menten.
 Además proporciona información acerca de la
inhibición enzimática.
Catálisis de dos o mas sustratos
Ternary complex
Ping Pong mechanism
Efecto del pH sobre actividad
enzimática
Efecto de la T° sobre actividad enzimática
Mecanismos de
reacción ilustran los
principios:
Quimiotripsina
Ejercicios
 The muscle enzyme lactate dehydrogenase
catalyzes the reaction:

Piruvate + NADH + H+ Lactate + NAD+

Solution of NADH, but not NAD+ absorb light at


340nm. Explain how these properties of NADH can
be used to design a quantitative assay for lactate
dehydrogenase.
 Human blood serum contains a class of enzymes known
as acid phosphatases, which hydrolyze biological
phosphate esters under slightly acidic conditions (pH
5.0). Acid phosphatases are produced by erythrocytes,
the liver, kidney, spleen, and prostate gland. The
enzyme from prostate gland is clinically important
because its increased activity in the blood is frequently
an indication of prostate cancer. The phosphatase from
the prostate gland is strongly inhibited by tartrate ion, but
acid phosphatases from other tissues are not. How can
this information be used to develop a specific procedure
for measuring the activity of the acid phosphatase of the
prostate gland in the human blood serum?
Estimation of Vmax and Km by inspection

[S] (M) V0 (μM/min)


2.5 x 10-6 28
4.0 x 10-6 40
1 x 10-5 70
2 x 10-5 95
4 x 10-5 112
1 x 10-4 128
2 x 10-3 139
1 x 10-2 140

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