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DISEO DE UN BIOFILM A PARTIR DE COLGENO DE PIELES DE TILAPIA Y DE QUITOSANO DE CAMARN COMO SOPORTE PARA APLICACIONES EN INGENIERA DE TEJIDOS
Vanessa Zamora-Mora1*, Mara Sibaja1, Jose Vega-Baudrit1,2
1) Laboratorio de Polmeros, Escuela de Qumica, Universidad Nacional, Heredia, Costa Rica 2) Laboratorio Nacional de Nanotecnologa, San Jos, Costa Rica. Correo electrnico: vzamora4@gmail.com RESUMEN Como una iniciativa para la disminucin de los desechos de la actividad acucola y pesquera en Costa Rica, se ha llevado a cabo la obtencin de productos de mayor valor agregado, especficamente el colgeno y quitosano respectivamente. Estos polmeros naturales, surgen como componentes promisorios en la elaboracin de soportes bidimensionales para la ingeniera de tejidos, con el fin de poder sustituir los soportes sintticos, debido a que los naturales presentan una serie de ventajas como la biodegradabilidad y biocompatibilidad adems, facilitan la adhesin de la clula y mantienen la funcin de diferenciacin. En el presente trabaj se evalu (i) el proceso de obtencin de soportes y materiales reforzados bidimensionales, por evaporacin de disolvente, (ii) las caractersticas fsicas, tales como absorcin de humedad, propiedades de hinchamiento y porosidad, (iii) la morfologa de los soportes a travs de microscopa electrnica de barrido (SEM) y por microscopa de fuerza atmica (AFM), (iv) las propiedades trmicas por medio de calorimetra diferencial de barrido (DSC). Los resultados obtenidos demostraron que los biofilm presentaron buenas caractersticas de absorcin, hinchamiento y propiedades trmicas, para su posterior aplicacin en Ingeniera de Tejidos. Palabras claves: colgeno, quitosano, biomateriales, biofilm, ingeniera de tejidos. ABSTRACT As an initiative for the reduction of waste from aquaculture and fishing in Costa Rica, has been carried out to obtain higher value-added products, specifically collagen and chitosan, respectively. These natural polymers, are key components in developing promising two-dimensional biofilm for tissue engineering, in order to replace the synthetic polymers because the natural polymers have a number of advantages such as biodegradability and biocompatibility also improve the adherence cell and maintain the function of differentiation. In this study we evaluated (i) the process of obtaining two-dimensional composite by solvent evaporation, (ii) physical characteristics such as moisture absorption, swelling properties and porosity, (iii) the morphology through scanning electron microscopy (SEM) and atomic force microscopy (AFM), (iv) the thermal properties by differential scanning calorimetry (DSC). The results showed that the biofilm has good absorption characteristics, swelling and thermal properties for later use in tissue engineering. Keywords: collagen, chitosan, biomaterials, biofilm, tissue engineering.

1. INTRODUCCIN: Los biomateriales son componentes habituales, de origen natural o sinttico, empleados en los procesos de reparacin, restauracin o incluso sustitucin de tejidos u rganos humanos que han sufrido daos considerables por causas muy diversas [1]. El estudio de los biomateriales se ha desarrollado gracias a la diversidad de materiales que permiten la preparacin de implementos con aplicaciones avanzadas, entre los ms destacados se encuentran los materiales polimricos debido a que son ampliamente utilizados en la fabricacin de dispositivos biomdicos, donde su xito se debe a las enormes posibilidades de fabricarlos de muy

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distintas maneras con caractersticas bien determinadas, y con facilidad de conformarlos en fibras, tejidos, pelculas o bloques [2]. Esta versatilidad de los materiales polimricos, abren su campo de aplicacin a campos tan importantes como lo son las aplicaciones biomdicas. Especficamente en este trabajo es de gran inters aquellos biomateriales que se emplean en la ingeniera de tejidos, los cuales deben de cumplir requisitos necesarios para su seleccin, entre los ms importantes se encuentran: un comportamiento mecnico adecuado durante suficiente tiempo para garantizar un buen proceso de regeneracin, buena compatibilidad del implante, no ser txico, ni carcingeno, ser metabolizado en el organismo despus de cumplir su funcin en el caso de los polmeros biodegradables y demostrar durabilidad [2,3]. Uno de los objetivos primordiales de la ingeniera de tejidos, es el desarrollo de materiales para lograr la reparacin funcional y la reconstruccin de estructuras biolgicas. En este sentido se est dedicando especial atencin a la obtencin y caracterizacin de superficies de diferentes sustratos, para su aplicacin en el desarrollo de andamios tridimensionales y bidimensionales. Uno de los aspectos prioritarios es el estudio y modificacin de las propiedades superficiales de los sustratos, con el fin de modular su interaccin con entidades biolgicas tales como macromolculas y clulas, por lo que el cultivo de clulas in vitro, la arquitectura del soporte y el biomaterial empleado para la elaboracin del soporte son vitales para obtener excelentes resultados. Los soportes pueden ser desarrollados usando polmeros naturales o sintticos. Actualmente los polmeros naturales son ampliamente usados para regeneracin de rganos y tejidos dado que ellos facilitan la adhesin de la clula y mantienen la funcin de diferenciacin. En el procedimiento de regeneracin de tejido, el papel de las macromolculas demuestra ser vital, dentro de las cuales se encuentran glicosaminoglicanos (GAG), colgeno, glicoprotenas y el quitosano que puede ser considerado como un instrumento de modulacin mediado por clulas [4]. El colgeno es un material extracelular fabricado por los fibroblastos y es una protena fibrosa que resulta relativamente insoluble en agua. Esta protena estructural representa en los mamferos cerca del 30% del total de protenas en el organismo. Su funcin es mecnica y de soporte, siendo un componente importante de la matriz extracelular, se encuentra especialmente en los cartlagos, huesos y pieles [5]. Adems es considerado como uno de los principales materiales para construir sustitutos artificiales para tejidos u rgano daados [6]. Los materiales usados para la fabricacin de soportes, no solamente determinan propiedades fsicas como la biocompatibilidad,

biodegradabilidad y estabilidad mecnica, sino tambin provee las seales apropiadas para procesos de crecimiento celular, guiando la formacin de tejidos. Por consiguiente, el colgeno es uno de los materiales favoritos para aplicaciones industriales en la ingeniera de tejidos [7].
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Asimismo, el quitosano es un polisacrido catinico lineal compuesto por dos unidades monomricas la D-glucosamina y N-acetil-D-glucosamina [8]. Es un polmero natural muy recomendado ya que posee excelentes propiedades, como biodegradabilidad, biocompatibilidad, no txico, buena absorcin, entre otros, caractersticas que unidas a su naturaleza policatinica, han estimulado su empleo en diversas aplicaciones biomdicas [9]. Una de las caractersticas ms prometedoras del quitosano es su excelente habilidad para ser procesado dentro de una estructura porosa para uso en transplantacin celular y regeneracin de tejidos [10]. Segn concuerdan Ma et al. [11] y Shanmugasundaram et al. [4] un soporte acta como un sustrato para promover la adhesin celular, ayuda en la formacin de una matriz extra celular (ECM) anloga, la cual ofrece soporte mecnico a las clulas y manteniendo la funcin diferenciada sin intervenir en la proliferacin y crecimiento celular. Se han empleado diversas matrices la regeneracin de tejido a partir de polmeros naturales una de las ms usadas son aquellas compuestas por polmeros naturales como el colgeno, debido a que es el principal componente de la matriz extracelular, adems se ha venido empleando otros materiales naturales tales como el quitosano y algunos materiales artificiales. El colgeno y el quitosano no existen juntos como mezclas en la naturaleza, pero las propiedades especficas de cada uno, han sido empleadas para producir un material que le confiere propiedades estructurales y mecnicas nicas. Los usos de estos materiales son relativamente de bajo costo, baja contaminacin de los biomateriales con propiedades especficas, con un gran potencial para el desarrollo de una nueva generacin de implantes [10].

2. PARTE EXPERIMENTAL 2.1. Materiales. El quitosano fue suministrado por el Laboratorio de Polmeros (POLIUNA), Universidad Nacional (Costa Rica), este quitosano fue extrado a partir de las conchas de camarn Heterocarpus vicarius, con un grado de desacetilacin del 65% el cual fue evaluado por anlisis potenciomtrico, el peso molecular se determin viscosimtricamente fue de 3,62x105 g/mol. El colgeno fue extrado a partir de pieles de tilapia Oreochromis sp y fue suministrado por el Laboratorio de Polmeros, se determin la temperatura de desnaturalizacin de acuerdo a Nagai et al. [12] y fue de 37C. El cido actico (Aldrich) se utiliz tal y como se recibi. 2.2 Elaboracin de biofilm de colgeno y quitosano. Se prepar una disolucin tanto

de colgeno, como de quitosano purificado al 0,5% m/v en cido actico con agitacin moderada a temperatura ambiente. Las disoluciones desgasificadas se colocaron en moldes de vidrio y se

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dejaron secar a temperatura ambiente. La cantidad apropiada de disolucin por adicionar al molde de vidrio vara de acuerdo al grosor deseado. 2.3. Elaboracin de biofilm del complejo colgeno-quitosano. Se sigui en forma general la metodologa propuesta por Ma et al. [11], en la cual se prepararon las disoluciones de colgeno y de quitosano al 0,5% m/v en cido actico. Se prepararon dos mezclas de colgeno-quitosano en las siguientes relaciones 8:2 y 2:8 y se agit moderadamente por 20 minutos. Luego se coloc en el molde de vidrio. Se sigui la metodologa de secado para las pelculas al 100% de colgeno y quitosano. 2.4. Estudios morfolgicos por medio de microscopa electrnica de barrido y Microscopa de Fuerza Atmica. El anlisis morfolgico de los soportes se realiz por medio de microscopa electrnica de barrido (SEM) y por microscopa de fuerza atmica (AFM). Para el AFM todos los ensayos se realizaron en el modo discontinuo y con una escala de 50 m para el escaneo de las muestras. 2.5. Absorcin de humedad de los biofilm. El anlisis se realiz segn el DIN 50008 [13]. El anlisis se efectu a las pelculas del complejo colgeno-quitosano en sus dos relaciones, as como a las pelculas al 100% de composicin de ambos biomateriales. En el anlisis se emple cinco humedades distintas con los siguientes valores: 40, 55, 70, 85 y 100%. Las muestras se cortaron en tamaos de 1 x 1 cm y el anlisis se realiz por triplicado. Se determin la masa de muestra inicial y se introdujo en los distintos recipientes de atmsferas relativas durante 24 horas. Al finalizar el ensayo se determin la masa de las muestras y se calcul el porcentaje de humedad ganada mediante la frmula:
% humedad ganada = M muestra F - M muestra I 100 M muestra I

(1)

Donde M. muestra

es la masa de la muestra final, despus de las 24 horas, y M. muestra I es la

masa de muestra inicial, a las 0 horas. 2.6. Anlisis de hinchamiento. Se ejecut la prueba de hinchamiento siguiendo la metodologa empleada por Ma et al. [11] para la cual se cortaron las muestras en tamaos de 1 x 1 cm, se colocaron en 100 mL de agua destilada en un recipiente plstico. Se pes las pelculas secas (Mseca) y posteriormente se introdujeron las pelculas por un perodo de 24 h a temperatura ambiente, y finalmente se pesaron las muestras hmedas (Mhmeda). El porcentaje de hinchamiento fue calculado de acuerdo a la frmula:
% hinchamiento = M hmeda - Mseca 100 Mseca

(2)

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2.7. Anlisis de calorimetra diferencial de barrido (DSC). Los soportes secos fueron evaluados en un Perkin Elmer, Pyres DSC 6, desde los 25 hasta los 200C a una velocidad de calentamiento de 5 grado/min, en una atmsfera inerte de gas nitrgeno como gas de purga. 3. RESULTADOS Y DISCUSIN 3.1. Biofilm de quitosano-colgeno. Al elaborar las pelculas de colgeno y de quitosano y sus respectivos materiales reforzados, se tomaron en cuenta factores importantes como la forma de secado de los biopolmeros con el fin de preservar las caractersticas atribuidas a cada uno de ellos. El grosor de los diferentes biofilm es de aproximadamente 0,6 m, el control del grosor se logr de acuerdo a la cantidad del polmero que se us durante su preparacin.

a)

b)

c)

d)

Figura 1. Biofilm de los biopolmeros colgeno y quitosano: a) quitosano al 100% de composicin, b) colgeno al 100% de composicin, c) material reforzado 2:8 colgeno-quitosano y d) material reforzado 8:2 colgeno-quitosano.

En cuanto a la apariencia fsica de dichas pelculas, como se observa en la figura 1, se observaron diferencias poco significantes, sin embargo, en cuanto a las pelculas de quitosano, stas poseen un tenue color amarillo y las de colgeno tienden a ser ms blanquecinas que las de quitosano. 3.2. Anlisis morfolgico por medio de microscopa electrnica de barrido (SEM) y microscopa de fuerza atmica (AFM). Mediante microscopa electrnica de barrido se analiz la morfologa de los cuatro soportes elaborados, los cuales presentaron homogeneidad tanto a escala

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macroscpica como microscpica, como se puede evidenciar en la figura 2 y 3. Asimismo, cabe destacar que en los materiales reforzados realizados no se observan fases que indiquen la separacin entre los biopolmeros empleados. La eleccin del colgeno como del quitosano, hace que la mezcla elaborada sea totalmente apta debido a que ambos biopolmeros son de carcter hidrfilo, es decir, que se pueden disolver en soluciones acuosas, este factor resulta de gran importancia debido que no entorpece la miscibilidad de los biopolmeros en las mezclas elaboradas.

a)

b)

Figura 2. SEM de los biofilmes: a) quitosano, b) colgeno (X800).

a)

b)

Figura 3. SEM de los biofilmes: a) material reforzado 2:8 colgeno-quitosano y b) material reforzado 8:2 colgeno-quitosano (X800).

En la Figura 2, se evidencia como la superficie del soporte de quitosano result con una morfologa mucho ms lisa que el soporte de colgeno, por lo tanto en el material reforzado, figura 3, en el cual se incrementa la concentracin de colgeno (material reforzado 8:2 colgenoquitosano) se observa que hay un incremento en la rugosidad del mismo. En la Figura 4 se obtiene una vista transversal tanto de los soportes al 100% de composicin, como de los dos materiales reforzados, se observan diferencias principalmente en la compactacin de los soportes. En cuanto al soporte de quitosano se observa como est conformado por pequeas lminas superpuestas, en cambio en el soporte de colgeno se da una mayor compactacin del soporte mostrndose bastante denso.

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Esta tendencia en la forma de cmo se compactan los soportes, influye directamente en las propiedades de absorcin de humedad e hinchamiento. La alta compactacin que se observa, promueve que los grupo O-H, formen enlaces de hidrgeno intramoleculares, por lo tanto pierde su capacidad de absorcin con las molculas de agua del medio. Asimismo, como se observa en la Figura 4, el soporte de quitosano, posee ms espacios libres y, por lo tanto, una menor compactacin, incrementando de acuerdo a esta morfologa su propiedad de hinchamiento en comparacin con los dems soportes.

a)

b)

c)

d)

Figura 4. SEM vista transversal de los soportes: a) quitosano, b) colgeno, c) material reforzado 2:8 colgenoquitosano y d) material reforzado 8:2 colgeno-quitosano. (X2000).

El anlisis superficial de los soportes por medio de la microscopa de fuerza atmica (AFM), se obtuvieron imgenes sin evidenciar alguna porosidad en las mismas, afirmando la poca porosidad que presentaron los cuatro soportes, de acuerdo a los resultados del SEM.

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Quitosano

Colgeno

2:8 Colgeno Quitosano

8:2 Colgeno - Quitosano

Figura 5. Estudio morfolgico de los soportes por medio de AFM.

En la topografa de las muestras, se encontr variaciones entre las superficies de los soportes, mostrando especialmente en el soporte de quitosano y en el material reforzado de mayor relacin de ste polmero natural, una superficie bastante lisa en comparacin con los soportes de colgeno y del material reforzado en su mayor relacin. Al considerar los resultados obtenidos en la microscopa electrnica de barrido (SEM), se considera que las variaciones en las superficies de los soportes se pueden atribuir a la diferencia en la compactacin de los biopolmeros, debido a que el quitosano present un orden laminado en la formacin del soporte, en oposicin al colgeno. 3.3 Absorcin de humedad en atmsferas con humedades relativas. La capacidad de absorcin de humedad de los biofilmes elaborados, depende significativamente de la estructura de cada uno de los materiales, por esta razn al observar la Figura 6, se observa una similitud bastante importante a bajos porcentajes de humedades relativas, pero la principal diferencia se da al 100% de humedad, en el cual las pelculas de quitosano absorben ms que las de colgeno, debido a la presencia de grupos O-H libres los cuales interactan con la molcula de agua. Por el contrario, el colgeno en su estructura est constituido por grupos O-H. Sin embargo, debido a las interacciones que presenta la fibra a lo largo de su estructura, estos grupos hidrfilos estn formando enlaces de hidrgeno intramoleculares, lo que se ve reflejado en su menor capacidad de absorcin de humedad.
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En cuanto a los biofilmes de los dos materiales reforzados, se observan que se encuentran entre los parmetros, que poseen cada uno de los biopolmeros empleados al 100% de su composicin, siendo en el caso de 2:8 colgeno-quitosano, ms cercano a las caractersticas del quitosano y el de 8:2 colgeno-quitosano con mayor tendencia hacia las caractersticas del colgeno.
% Absorcin de Humedad
300 250 200 150 100 50 0 0 20 40 60 80 100 120 % Humedades Relativas Pelcula Quitosano Pelcula 2:8 C-Q Pelcula 8:2 C-Q Pelcula Colgeno

Figura 6. Absorcin de humedad a diferentes atmsferas relativas de las pelculas de colgeno y quitosano al 100% y sus respectivos materiales reforzados.

Al considerar el tratamiento qumico para la obtencin de quitosano a partir de la quitina, se realiza un fuerte tratamiento con hidrxido de sodio, lo cual genera cierta cantidad de cloruro de sodio en el producto, este hecho ocurre a raz del tratamiento inicial de la quitina con cido, lo cual puede darse por la falta de neutralizacin del producto, esto conlleva que al continuar el proceso con NaOH, va a generar cantidades de cloruro de sodio en el producto final. Este cloruro de sodio, segn estudios de Phongying et al. [14], produce obstruccin entre las interacciones de las cadenas polimricas cuando se elabora el soporte, impidiendo de esta forma los enlaces intramoleculares, lo cual va a generar una mayor sensibilidad del polmero al medio donde se encuentre, al tener grupos como O-H y NH2 libres, aumentando de acuerdo a Phongying et al. [14] propiedades como la absorcin de humedad, hinchamiento y solubilidad. 3.4 Propiedades de hinchamiento. La facilidad de un biofilm para absorber agua es un aspecto muy importante al evaluar su propiedad para ingeniera de tejidos, debido a que demuestra la capacidad de retencin de agua, as como su estabilidad durante el crecimiento celular. Esta propiedad hace alusin al agua presente en los poros pequeos y la que est unida a las cadenas hidrfilas del polmero [15]. Por esta razn, al determinar dicha propiedad se realiz un leve proceso de secado despus de las 24 horas sumergida la muestra, por medio de un papel de filtro. Con este proceso se procur eliminar el agua presente en los poros ms grandes, debido a que sta no contribuye a la capacidad de absorcin total de la pelcula.
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Los resultados para la prueba de hinchamiento el promedio para la muestra del soporte de quitosano, fue de 132 veces el peso inicial de las pelculas, para el caso del material reforzado 2:8 colgenoquitosano fue de 111, el material reforzado 8:2 colgeno quitosano dio 86 veces y para el colgeno al 100% de composicin obtuvo 82 veces su peso inicial, valores totalmente aceptables de acuerdo a Ma et al. [11] quienes establecen que una capacidad de hinchamiento 80 veces mayor a su peso inicial, es suficiente para poder ser aplicado en ingeniera de tejidos. Por lo que estos datos refuerzan tambin la tendencia, de que el quitosano posee ms grupos hidrfilos libres capaces de formar enlaces de hidrgeno con las molculas de agua del medio, as como se vio en su capacidad de absorcin de humedad en atmsferas relativas. En la Figura 7, se observan los soportes despus de las 24 horas, notndose una diferencia significante en su apariencia fsica, al obtener en el caso de quitosano un hinchamiento muy superior al que present el colgeno. Los materiales reforzados presentaron sta tendencia entre los biopolmeros empleados.

a)

b)

Figura 7. Resultado de la prueba de hinchamiento, 24 horas despus de a) quitosano camello, b) colgeno de piel de tilapia.

Al darse un proceso de hinchamiento de los biofilmes, resulta beneficioso el uso de los mismos, debido a que demuestra su poder para absorber agua y esto provoca un cambio

morfolgico al darse la expansin y una tensin en las cadenas polimricas haciendo posible que el material sea estable en tamao y forma durante el cultivo celular [15]. Sin embargo, esta estabilidad decrece de acuerdo a los altos valores de hinchamiento, debido a que las muestras pueden llegar a formar un hidrogel, como se observ en el caso de los soportes de quitosano y del material reforzado en mayor proporcin de dicho biopolmero, provocando casi la degradacin del polmero en tan solo 24 horas de exposicin en medios acuosos. Respecto al quitosano, se considera que su comportamiento es dependiente del pH de la
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solucin empleada para dicha prueba y del grado de ionizacin del grupo amino del quitosano [16]. Al mismo tiempo, es importante considerar probable que las pelculas de quitosano posean una mayor afinidad a las molculas de agua, que en su presentacin como polvo, debido a que la molcula de quitosano en la pelcula est protonada, consecuentemente el soporte va ser ms hidrfilo que el polvo, adems, de que la protonacin de las molculas, va a causar repulsin entre ellas mismas, disminuyendo las interacciones secundarias, tipo enlaces de hidrgeno intramoleculares, logrando por consiguiente espacio vacos en la red polimrica y en los cuales puede penetrar la molcula de agua [17]. Es importante considerar que su capacidad de hinchamiento se puede regular por medio de procesos de entrecruzamiento, debido a la disminucin de grupos aminos libres capaces de formar enlaces de hidrgeno. 3.5 Calorimetra diferencial de barrido. En el anlisis de DSC de los diferentes biofilmes, que se muestra en la Figura 8, se da una transicin de tipo endotrmico, en el intervalo de temperaturas entre los 30-160C, la cual se le atribuye a deshidratacin por la prdida de las uniones con las molculas de agua. La entalpa de deshidratacin de los diferentes soportes, se observa en la Tabla 1, mostrando el soporte de quitosano la entalpa mayor respecto a los dems, lo cual indica que se suministr una energa mayor para eliminar el agua presente en el soporte. Este hecho confirma como el soporte de quitosano posee una mayor capacidad de absorcin de las molculas de agua a su estructura, obteniendo esta tendencia en anlisis como lo fue la capacidad de absorcin en humedades relativas e hinchamiento. Los dems biofilmes presentan una tendencia decreciente respecto al H, del soporte del quitosano, con la excepcin de soporte 8:2 colgeno-quitosano. Flujo de calor- Endo hacia abajo (mW)

Temperatura (C)
Figura 8. Curvas calorimtricas (DSC) de los soportes de colgeno y quitosano al 100% de composicin y de sus respectivos materiales reforzados en relacin 8:2 y 2:8.

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Al final de la curva de DSC de los soportes se evidencia otro proceso trmico que da inicio, a partir de los 170 C el cual se le atribuye a la descomposicin de los biopolmeros a temperaturas mayores que las del presente anlisis.
Tabla 1. H de deshidratacin para los distintos soportes.

Soporte Colgeno 8:2 Colgeno-Quitosano 2:8 Colgeno-Quitosano Quitosano

H (J/g) ( 0,001) 291,176 328,037 309,563 345,603

Estudios realizados por Giraud-Guille et al. [18], consideran que el colgeno de pez, al poseer menor cantidad de prolina e hidroxiprolina, en comparacin con el colgeno bovino, genera una menor estabilidad trmica.

4. CONCLUSIONES La combinacin del colgeno, el principal componente de la matriz extracelular y del quitosano, un polielectrolito que favorece la adhesin celular, resulta un material reforzado con buenas caractersticas de absorcin, hinchamiento y propiedades trmicas, para su posterior aplicacin en ingeniera de tejidos. Los dos biofilm elaborados a partir de colgeno y quitosano, no presentaron heterogeneidad en las disoluciones, ni separacin de fases en los biofilmes, como se mostr en los estudios morfolgicos. La elaboracin de soportes bidimensionales, gener soportes con una alta compactacin entre las cadenas polimricas, como se observ en el SEM, lo cual repercute en forma directa en las propiedades de absorcin e hinchamiento, debido a que sta disminuye, por la escasa posibilidad de interaccin con las molculas de agua del medio y por un aumento en los enlaces de hidrgeno intramoleculares. Los estudios morfolgicos de los soportes (AFM y SEM), presentaron concordancia entre los mismo, mostrando superficies bastantes lisas las que poseen mayor cantidad de quitosano y decreciendo conforme disminuye la relacin del mismo. Se obtuvieron biofilmes compuestos de colgeno-quitosano 8:2 y 2:8 las que fueron sometidas a evaluacin trmica, presentando valores altos de degradacin, as como de las entalpas de deshidratacin de los soportes.
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Diciembre de 2010 Diseo de biofilms

La capacidad de absorcin de humedad, as como la de hinchamiento, se ven influenciadas por factores tales como la compactacin de las cadenas polimricas en el soporte, la posible interaccin intramolecular, grado de desacetilacin y la presencia de cloruro de sodio en el quitosano. Los biofilmes preparados a partir de polmeros naturales colgeno y quitosano presentan caractersticas promisorias para estudios en el campo de la ingeniera de tejidos.
Agradecimientos. Al Laboratorio de Polmeros de la Universidad Nacional, Costa Rica por donar el quitosano y el colgeno. Al Grupo ACI S.A por donar las pieles de tilapia para la extraccin de colgeno. Al Consejo Nacional de Rectores (CONARE) de Costa Rica y a la Escuela de Qumica de la Universidad Nacional (Costa Rica) por ayudar con el financiamiento de este trabajo BIBLIOGRAFA [1] Sastre R, de Aza S, San Romn J, 2004. Biomateriales. En CYTED. Programa Iberoamericano de Ciencia y Tecnologa para el Desarrollo. Editorial FAENZA EDITRICE IBERICA s.l. [2] Vallet Reg M. Biomateriales para sustitucin y reparacin de tejidos. Informe cientfico. Madrid, Espaa. Universidad de Complutense. 2006. [3] Armelin E. Sntesis y caracterizacin de nuevas poliesteramidas: estudio de sus propiedades. Tesis Doctoral. Barcelona, Espaa. Universidad Politcnica de Catalua, 2002. [4] Shanmugasundaram N, Ravichandran P, Neelakanta Reddy P, Ramamurty N, Pal S, Panduranga Rao K, Biomaterials, 22, 1943 (2001) [5] Bernales D, Caride F, Lewis A, Martn L, Revista Cubana Investigaciones Biomdicas. Sociedad Odontolgica de La Plata, Argentina, 23, 65 (2004) [6] Wang X.H, Li D.P, Wang W.J, Feng Q.L, Cui F.Z, Xu Y.X, Song X.H, Mark van der Werf, Biomaterials, 24, 3213 (2003) [7] Song E, Yeon Kimb S, Chunc T, Byunc H, Moo Leea Y, Biomaterials, 27, 2951 (2006) [8] Berger J, Reist M, Chenite A, Felt-Baeyens O, Mayer J.M, Gurny R, INT.J.PH.SCI, 288, 17 (2005) [9] Gupta K.C, Ravi Kumar M.N.V, J.M.S.Rev. Macromol. Chem. Phys., C4(4), 273 (2000) [10] Sionkowska A, Wisniewski M, Skopinska J, Kennedy CJ, Wess TJ, Biomateriales, (2003) [11] Ma L, Gao C, Mao Z, Zhou J, Shen J, Hu X, Han C, Biomaterials, 24, 4833 (2003) [12] Nagai T, Ogawa T, Nakamura T, Ito T, Nakagawa H, Fujiki K, Nakao M, Yano T, J Sci Food Agr, 79, 855 (1999) [13] DIN 50008: Konstantklimate ber waesserigen Loseungen. Deutsches Institut fr Normung. Alemania. [14] Phongying S, Aiba S, Chirachanchai S, Polymer, 48, 393 (2007) [15] Ma J, Wang H, He B, Chen J, Biomaterials, 22, 331 (2001) [16] Adekogbe I, Ghanem A, Biomaterials, 26, 7241 (2005) [17] Fernndez M, Heinmki J, Krogars K, Jrgensen A.C, Karjalainen M, Iraizoz A, Yliruusi J, AAPS PharmSciTech, 5, 1 (2004) [18] Giraud-Guille M.M, Besseau L, Chopin C, Durand P, Herbage D, Biomaterials, 21, 899 (2000)

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Rev. Iberoam. Polm., 11(7), 607-619 (2010)