UNIVERSIDAD DE LA HABANA

INSTITUTO DE FARMACIA Y ALIMENTOS

METODOS DE ANLISIS DE DROGAS Y EXTRACTOS.

Dra. Migdalia Miranda Martinez Profesora Titular.

Ciudad de la Habana, CUBA. 2002

MTODOS DE ANLISIS DE DROGAS. Introduccin. A nivel mundial, las drogas y los preparados fitoteraputicos obtenidos a partir de ellas, ocupan un lugar importante dentro del comercio de medicamentos, y debido a ello, se ha enfatizado en la necesidad de garantizar su control de calidad con aplicacin de tcnicas modernas y el uso de patrones adecuados. En diversas Farmacopeas se describen mtodos de ensayos generales para evaluar o valorar las drogas oficiales. La Organizacin Mundial de la Salud ha recomendado la realizacin de monografas y la implantacin de normas o especificaciones de calidad, basadas en la experiencia de cada pas, para aquellas drogas no incluidas en las Farmacopeas y que son ampliamente utilizadas en Medicina Tradicional. Evaluar o valorar las drogas vegetales significa, identificarlas y determinar su calidad y pureza, lo cual se traduce en su valor intrnseco, o lo que es lo mismo, en la cantidad de principios activos presentes en ella. En este captulo expondremos los aspectos tericos de algunos de los mtodos generales empleados en el anlisis de droga. Seleccin de las muestras a evaluar. La confiabilidad del resultado obtenido en el anlisis de una muestra, depende de la seleccin que se haya realizado de la misma. Debido a las caractersticas especficas de las drogas, en particular, su poca homogeneidad, se requiere de procedimientos especiales de manipulacin relacionados con la toma de muestras. La toma de la muestra para anlisis puede realizarse de la siguiente forma: Si el lote de la droga, est integrado por 5 menos sacos o paquetes, se inspeccionan todos. Si ste est formado por ms de 5 paquetes (entre 6 y 50), se inspeccionan al azar 5 de ellos. Si fuera mayor de 50 paquetes, se escogern aleatoriamente el 10% de ellos. Una vez determinado el nmero de sacos o paquetes a inspeccionar, se toman tres muestras de cada uno, (de la parte superior, media e inferior), mezclndose bien todas las muestras para lograr la mayor homogeneidad. La muestra mezclada se divide en cuatro partes, formando un cuadrado y se seleccionan las de dos lados opuestos, las cuales se vuelven a mezclar bien, repitiendo el proceso cuantas veces sea necesario,

hasta obtener la cantidad de muestra para los ensayos. A sta se le denomina Muestra Promedio, y es representativa del lote a analizar. Si durante la inspeccin y toma de muestras se detecta deterioro en algn saco o paquete, ste debe ser analizado independientemente. Con la Muestra Promedio se llevan a cabo los ensayos de calidad, dentro de los cuales se encuentran: Mtodos de percepcin, fsico-qumicos y qumicos, que pueden llegar hasta el aislamiento y purificacin de los principios activos. Determinacin de Materias extraas. Se entiende por materias extraas, aquellas partes de la droga que no corresponden a las exigencias que seala la monografa en cuanto a color, tamao, estado y grado de pulverizacin, mezclas de otras partes de la planta o de otras plantas, polvo, arena, piedra y otras sustancias minerales. Las drogas deben estar libres de organismos patgenos y de microorganismos, insectos y cualquier otra contaminacin animal, incluyendo excretas. No deben presentar olores anormales, decoloraciones o algn signo de deterioro. Durante la cosecha de la droga, deben ser removidas las partculas de polvo, tierra, arena etc., y despus de la recoleccin, las drogas pueden ser sometidas a lavado y desinfeccin. El almacenamiento debe realizarse en lugares higinicos para evitar la contaminacin, tomndose especial cuidado ante la presencia de hongos, ya que ellos pueden ser productores de aflatoxinas. Los lmites para las materias extraas, se establecen en la monografas o especificaciones de calidad de cada droga en particular. La presencia de cualquier otro contaminante, en especial animal o microbiano, o el no cumplimiento de los parmetros establecidos para la droga, hace que la misma sea declarada NO APTA PARA EL CONSUMO.

Parte experimental Materiales Equipos - Placas de Petri - Balanza tcnica. - Lupa o microscopio estereoscpico. A. Peso de la muestra Para este ensayo se utilizan segn el tipo de droga las cantidades siguientes: -De semillas y frutos muy pequeos........10g. -De semillas y frutos normales ................20g. -De drogas pulverizadas ......................... 50g. -De flores, hojas, hierbas, cortezas, races, rizomas y bulbos .......................100g. B. Orden de ensayos - Determinacin de partes de la droga que no corresponden con las exigencias que seala la monografa. - Determinacin de partes de otras plantas. - Determinacin de mezclas minerales (polvo, piedra, etc.)

Procedimiento

Teniendo en cuenta el peso de la droga sealado en el epgrafe A; proceda a la separacin manual de las partes sealadas en el epgrafe B con la ayuda de una pinza o medio adecuado Una vez concluido pese cada una de las partes por separado. El resultado se expresa en por ciento y se calcula por la frmula siguiente: X . 100 P= -----------M Donde: P= Porcentaje de materia extraa segn su clasificacin. X= Peso de la materia extraa. M= Peso inicial de la droga. Determinacin de microorganismos. Las drogas normalmente transportan bacterias y tierra del suelo. Un gran nmero de bacterias y hongos de la naturaleza aparecen en la microflora de las drogas, siendo predominantes las esporas aerbicas. La prctica de cosechas, manipulacin y produccin son tambin causas adicionales de contaminacin y crecimiento microbiano. Adicionalmente la presencia de aflatoxinas provocadas por hongos se consideran contaminantes altamente peligrosos en una droga. Los lmites establecidos para la contaminacin microbiana estn de acuerdo al uso que se le va ha dar al material y al material en si mismo. a) Contaminacin de drogas crudas que se emplearn en procesos posteriores (incluyendo descontaminacin adicional por un proceso fsico o qumico): Los lmites son dados para drogas no tratadas, cosechados bajo condiciones higinicas aceptables. por gramo mximo 104 Escherichia coli mximo 105 Tierra vegetal b) Drogas que sern pretratadas, (elaboracin de infusiones y decocciones), o se usarn en forma tpica. por gramo mximo 107 bacterias aerbicas mximo 103 Sacharomycetes e Hyphomycetes mximo 102 Escherichia coli mximo 104 otras enterobacterias NO SALMONELLA c) drogas para uso interno por gramo mximo 105 bacterias aerbicas mximo 103 Sacharomycetes e Hyphomycetes mximo 101 Escherichia coli mximo 103 otras enterobacterias NO SALMONELLA Examen visual e inspeccin microscpica. Las drogas son categorizadas atendiendo a sus caractersticas sensoriales, macroscpicas y microscpicas. De ah que la mayor informacin acerca de su identidad, pureza y calidad pueden darse de estas observaciones. La inspeccin visual (Caractersticas sensoriales y macroscpicas), est basada en la forma, tamao, color, caractersticas superficiales, texturas y fracturas. Este no puede considerarse como un ensayo definitorio, ya que en caso de adulteraciones con otras drogas de caractersticas similares suelen llegarse a resultados errneos y es necesario la aplicacin de los mtodos microscpicos y fsico-qumicos para poder llegar a resultados concluyentes.
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La evaluacin microscpica de las drogas es indispensable para su identificacin pudiendo emplearse reactivos qumicos para lograr una mayor informacin y visualizacin de los tejidos. Este ensayo aisladamente, no puede siempre llegar a una completa identificacin, aunque utilizado en asociacin con otros mtodos analticos ofrece un soporte incalculable. La comparacin con materiales de referencia puede revelar caractersticas no descritas en las especificaciones de las drogas. Evaluacin macroscpica de las drogas. Por conveniencia para su estudio, las drogas se agrupan de acuerdo a su clasificacin morfolgica en: rganos subterrneos; corteza y leos; flores; frutos; semillas y una categora final que incluye las drogas que no pueden clasificarse bajo los anteriores acpites entre las cuales se encuentran resinas, muclagos, etc. Parte experimental. Como primer aspecto antes de comenzar las descripciones macromorfolgicas, se debe conocer para las drogas a evaluar la siguiente informacin. -Nombre cientfico. -Uso tradicional o reconocido. -Nombre vulgar o vernculo. -Planta endmica o aclimatada. -Familia botnica. Con la ayuda del microscopio esteroscpico, se realizar una monografa de las drogas crudas a evaluar, teniendo en cuenta para las mismas los siguientes acpites: A. rganos subterrneos. Las estructuras subterrneas a estudiar de inters farmacognstico se clasificarn en alguna de las siguientes categoras Raz Rizoma, Bulbo y Tubrculo. Se observar prcticamente las caractersticas siguientes: 1. Tamao. Dimensiones en largo y dimetro. 2. Color. 3. Olor. 4. Forma y consistencia. Algunos de los trminos usados para describir la forma son: rectos, torcidos simples y ramificados tambin generalmente se habla de forma cilndrica cnica fusiforme, ovoide, piriforme, napiforme, etc. 5. Condicin. Fresca, seca, entera, cortada, privada de algn tejido. 6.Caracteres de la superficie. Lisa, arrugada, estriada, anillada, fisurada. Presencia o no de cicatrices y yemas. 7. Seccin transversal. Tamao relativo de la corteza, del leo y de la mdula. 8. Fractura. Describir como se rompe la pieza cuando se somete a presin; puede ser completa, incompleta, corta, fibrosa, dura, dbil, flexible, crnea, etc. 9. Otras particularidades. B. Corteza y leos. La mayora de los trminos descriptivos aplicados a los rganos subterrneos tambin pueden utilizarse para cortezas y leos. Pueden destacarse adems algunas peculiaridades como: 1. Forma de la pieza. Curvada, aplanada, acanalada, tubo simple, tubo doble, tubo compuesto. 2. Superficie externa. Cicatrices de hojas, presencia de lenticelas, mohos, lquenes, etc. 3. Superficie interna. Color, estriaciones, surcos, etc. C. Hojas. Para describir las hojas podemos guiarnos por las siguientes caractersticas.
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1. Forma. Puede clasificarse tomando en cuenta el peciolo, lmina, base, pice, bordes y venacin. (Ver Fig.1 a-f). 2 .Textura. Membranosa, coracea, frgil, suculenta. 3. Superficie. Glabra o pubescente. 4. Color. 5. Olor. 6. Dimensiones Largo y ancho. 7. Condicin. Fresca, seca, completa, rota. 8. Peculiaridades. Presencia de glndulas, puntuaciones, pelos, etc.

D. Flores. Al describir las flores tendremos en cuenta las siguientes caractersticas: 1. Estado de desarrollo. 2. Condicin Fresca, seca, completa o parte de ella. 3. Color. 4. Olor. 5. Peculiaridades. Aspectos morfolgicos ms sobresalientes como son: tipo de inflorescencia, tipo de cliz, tipo de ptalos, nmero de stos tipo de ovario, estambres, etc. E. Frutos. Al hacerse el estudio macroscpico del fruto deben definirse que tipo y/o que parte del mismo constituye la droga. Las caractersticas ms importantes son: 1.Pericarpio. Color, textura, uniforme o modificado. 2.Dehiscencia. 3.Forma. 4.Dimensiones. 5.Color. 6.Olor. 7.Marcas externas o peculiares. F. Semillas. Las caractersticas ms relevantes a considerar son: 1. Caracteres fsicos. Forma, dimensin, dureza y peso, etc. 2. Color. 3. Olor. 4. Peculiaridades.

Determinacin de las dimensiones de las hojas. En la descripcin de las hojas, uno de los parmetros evaluados son sus dimensiones, (largo y ancho), los cuales pueden variar en dependencia del grado de desarrollo de la planta en el momento de la recoleccin. El estudio estadstico de la homogeneidad o dispersin de estos valores resulta importante para reconocer si en un tamao de muestra determinado, los valores encontrados se encuentran dentro de los informados en la monografa de referencia, si esta existe. En el estudio macromorfolgico de las hojas se incluye por tanto la evaluacin de sus dimensiones. Para ello se selecciona un tamao de muestra n = 50 y con la ayuda de un pie de Rey o de una regla graduada se determina el largo y el ancho de las mismas. Aplicando conocimientos estadsticos se realizan los histogramas o representaciones grficas de cada parmetro y se determinan los valores de la media X, desviacin estndar y coeficiente de variabilidad, analizando la correspondencia entre los valores calculados y los valores grficos. Determinacin de Cenizas. Se entiende por cenizas, el residuo que queda despus de la ignicin de una droga, y se determina por tres mtodos diferentes: Cenizas totales, cido-insolubles y solubles en agua. Las cenizas totales permiten determinar la cantidad de material remanente despus de la ignicin: Cenizas fisiolgicas, Derivados de los tejidos de la planta y Cenizas no fisiolgicas, que son el residuo despus de la ignicin de la materia extraa (Polvo, arena, tierra, etc.), adherida a la superficie de la droga. Parte experimental Materiales y reactivos. - Crisol de porcelana o platino. - cido clorhdrico al 10 % - Trpode. - Agua destilada. - Tringulo de porcelana. - Papel de filtro libre de cenizas - Mechero. - cido ntrico reactivo. - Mufla. - Solucin de nitrato de amonio 10g/100 mL. - Desecadora. - Perxido de hidrgeno conc. Se determina la masa de no menos de 2.0 g ni ms de 3.0 g de la porcin de ensayo pulverizada y tamizada con una desviacin permisible de 0.5 mg en un crisol de porcelana o platino (en dependencia de la sustancia analizada) previamente tarado. Caliente suavemente la porcin de ensayo aumentando la temperatura hasta carbonizar y posteriormente incinere en un horno mufla a una temperatura de 700 a 750 C, si no se seala otra temperatura en la norma especfica, durante 2 h. Se enfra el crisol en una desecadora y se pesa, repitindose el proceso hasta que dos pesadas sucesivas no difieran en ms de 0.5 mg por g (masa constante).
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Para obtener la masa constante los intervalos entre calentamiento y pesada son de 30 min. Si el residuo presenta trazas de carbn, se le aaden unas gotas de solucin de perxido de hidrgeno concentrado, cido ntrico o solucin de nitrato de amonio al 10 % m/v y se calienta hasta evaporar los solventes. Al enfriar el crisol el residuo es de color blanco o casi blanco. M2-M C =--------- 100 (%) M1-M

Expresin de los resultados: donde:

C= porcentaje de cenizas totales en base hidratada. M= masa del crisol vaco (g) M1= masa del crisol con la porcin de ensayo (g) M2= masa del crisol con la ceniza (g) 100= factor matemtico para los clculos. Los valores se aproximan hasta las dcimas. Las cenizas cido-insolubles son los residuos despus de la ebullicin de las cenizas totales con cido clorhdrico diluido. Esta determinacin mide la presencia de slice, especialmente de arena y tierra silcea. Procedimiento. A las cenizas totales obtenidas segn la tcnica descrita, se le aaden de 2-3mL de cido clorhdrico al 10%. El crisol se tapa con un vidrio reloj y se calienta sobre un bao de agua hirviente durante 10 min. Se lava el vidrio reloj con 5mL de agua caliente y se une al contenido del crisol. La solucin se filtra a travs de un papel de filtro libre de cenizas; se lava el residuo con agua caliente hasta que el filtrado acidulado con cido ntrico p.a; al cual se le aade una o dos gotas de solucin de nitrato de plata 0.1 mol/L, no muestre presencia de cloruros. El filtrado con el residuo se deseca de 100 a 105 C, se transfiere al crisol inicial y se incinera en un horno mufla a una temperatura de 700-750 C durante 2h (sino se seala otra temperatura en la norma especfica). Posteriormente se coloca en una desecadora y cuando alcance la temperatura ambiente se pesa. Se repite el procedimiento hasta obtener masa constante. M2-M Expresin de los resultados: B=--------- 100 (%) M1-M donde: B= porcentaje de cenizas insolubles en cido clorhdrico en base hidratada. M= masa del crisol vaco (g) M1= masa del crisol con la porcin de ensayos (g) M2= masa del crisol con la ceniza (g) 100= factor matemtico. Los valores se aproximan hasta las dcimas.
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Las cenizas insolubles en agua son calculadas por diferencia en peso entre las cenizas totales y el residuo remanente despus del tratamiento de las cenizas totales con agua. Cuando los valores obtenidos para las cenizas totales son elevados (>5%), es necesario conocer si las mismas estn compuestas por metales pesados, lo cual se determina mediante los ensayos de cenizas insolubles, y si este resultado es elevado hay que someter la droga a otros anlisis antes de aprobar su uso. Procedimiento. A las cenizas totales obtenidas en (A), se le aaden de 15 a 20 mL de agua. El crisol se tapa y se hierve suavemente a la llama del mechero durante 5 min. La solucin se filtra a travs del papel de filtro libre de cenizas. El filtro con el residuo se transfiere al crisol inicial, se carboniza en un mechero y luego se incinera en un horno mufla de 700-750 C, durante 2 h. Posteriormente se coloca en una desecadora y cuando alcance la temperatura ambiente se pesa. Se repite el procedimiento hasta alcanzar peso constante. M2-Ma Expresin de los resultados: Ca= --------- x 100 M1-M. Ca= Porcentaje de cenizas solubles en agua en base hidratada. M2= masa del crisol con las cenizas totales (g). Ma= masa del crisol con las cenizas insolubles en agua (g) M1= masa del crisol con la muestra de ensayo. M= masa del crisol vaco. 100= factor matemtico. Los valores se aproximan las dcimas. Determinacin de arsnico y metales pesados. La presencia en las drogas de arsnico y metales pesados, puede ser atribuida a muchas causas, entre las cuales se citan la contaminacin ambiental y los residuos de pesticidas. Las contaminacin con trazas de arsnico se debe fundamentalmente, al tratamiento de las plantas con ciertos pesticidas, estando los lmites permisibles en trminos de g de arsnico por gramo de droga. Para cadmio y plomo, cuya presencia se atribuye fundamentalmente a contaminacin de los suelos por desechos industriales, las cantidades mximas permitidas estn en el orden de 10 ppm y 0,3 ppm, respectivamente. Determinacin de agua (Humedad residual). Un exceso de agua en una droga puede provocar el crecimiento microbiano, la presencia de hongos o insectos y el deterioro, seguido de la hidrlisis de los principios activos. Este ensayo es especialmente importante para drogas que absorben humedad fcilmente o se deterioran rpidamente en presencia de agua. Los lmites de agua establecidos en la Farmacopea para las drogas, oscila entre un 8 y un 14 % con pocas excepciones, correspondiendo los valores ms altos con la humedad de cortezas, tallos y races.
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La humedad residual o lmite para la cantidad de agua, puede ser establecida mediante el estudio de secado de la droga. Para esta determinacin puede ser empleados dos mtodos: Mtodo azeotrpico: Mediante el cual debe obtenerse de forma directa la cantidad de agua presente en la droga cuando sta es destilada junto con un solvente inmiscible tal como tolueno o xileno. Si el solvente es anhidro, el agua puede ser absorbida por el solvente y el resultado sera falso, por lo que se recomienda saturar el solvente con agua, antes de usarlo. Parte experimental. Materiales y reactivos. - Plancha elctrica o fuente de calor. - Tolueno. - Equipo esquema (Fig. 2).

Fig. 2 Equipo de determinacin de humedad. Mtodo azeotrpico.

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Procedimiento. A un baln de 500mL se transfiere 200 mL de tolueno, se le aaden 2 mL de agua, se monta el equipo, se le aade tolueno al tubo colector hasta el cuello. Se coloca en la fuente de calor y se destila hasta que el volumen de agua en el tubo colector permanezca constante y se mide el volumen inicial de agua (V1). Se deja enfriar el tolueno (tolueno saturado). De la muestra de ensayo pulverizada y tamizada, se pesan 10g, con un error mximo de 0.5 mg y se transfiere al baln que contiene el tolueno saturado de agua; se pone el equipo a la fuente de calor nuevamente y se destila hasta que el volumen de agua en el tubo colector permanezca constante, midindose el volumen final de agua (Vt).

Expresin de los resultados:

Vt-V1 H= ------- 100 M

donde: H= Humedad residual (%) V1= Volumen de agua inicial (mL) Vt= Volumen de agua final (mL) 100= Factor matemtico. Los resultados se aproximan hasta las dcimas. Prdida por desecacin: El cual determina el agua y las sustancias voltiles ya que el mtodo plantea el calentamiento de la droga a 100 - 105C , en una desecadora sobre pentxido de fsforo a presin atmosfrica o reducida a temperatura ambiente por un perodo de tiempo especfico para cada droga. Este mtodo no es recomendable cuando la planta contiene aceites esenciales u otras sustancias voltiles, para evitar el error que introduciran stas, en el resultado final. Parte experimental. Materiales y Equipos Balanza analtica Vd. 0.1 mg. Cpsula de porcelana. Estufa u horno de calentamiento. Desecadora.

Procedimiento. De la muestra de laboratorio, con el grado de trituracin que determine la norma especfica, se pesan 2 g con desviacin permisible de 0.5 mg y se transfieren a una cpsula de porcelana previamente tarada y secada, se calienta y se deseca a 105 C durante 3 h. La cpsula se coloca en la
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desecadora, donde se enfra a temperatura ambiente y se pesa, colocndose nuevamente en la estufa durante 1h, volvindose a pesar, hasta obtener una masa constante. M2-M1 Expresin de los resultados : Hg= ---------- 100 M2-M donde: Hg= Prdida en peso por desecacin (%). M2= masa de la cpsula con la muestra de ensayos(g) M1= masa de la cpsula con la muestra de ensayo desecada (g) M= masa de la cpsula vaca. 100= factor matemtico. Los resultados se aproximan a las dcimas. Determinacin de sustancias extrables. Se basa en la extraccin de las sustancias solubles en agua, alcohol o mezclas hidroalcohlicas mediante maceracin y evaporacin hasta sequedad de una alcuota del extracto. Este mtodo determina la cantidad de principios activos en una cantidad dada de droga, extrable con un solvente. Se emplea para aquellas drogas en las cuales no se dispone de un mtodo de ensayo qumico o biolgico aprobado, para determinar su composicin qumica cuantitativa. Parte experimental. Materiales y reactivos. Balanza analtica. Disolvente indicado (agua, alcohol mezclas hidroalcohlicas) Erlenmeyer de boca esmerilada c/tapa 250 mL. Zaranda. Embudo. Pipetas de 20 mL. Papel de filtro. Cpsula de porcelana. Bao de agua. Estufa.

Procedimiento. De la muestra de ensayo previamente pulverizada y tamizada, se pesan exactamente 5 g y se transfieren a un erlenmeyer de 250 mL; se aaden 100 mL del disolvente, se tapa y se agita durante 6h, dejndose en reposo hasta el da siguiente; se agita 30 min., se deja reposar alrededor de media hora ms y se filtra por papel. Se toma una alcuota de 20 mL que se transfiere a una cpsula previamente tarada. Se evapora sobre bao de agua, se deseca en estufa a 105 C durante 3 h, se enfra y se pesa. R . 500.100
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Expresin de los resultados: S= -------------M. (100-H) donde: S= Sustancias solubles (%). H= Humedad de la muestra (%) 500 y 100= factores matemticos para los clculos. R= Residuo de la muestra (g) M= Masa de la muestra (g). Los resultados se aproximan hasta las dcimas. Determinacin del ndice de amargor. Muchas drogas empleadas como medicinales presentan un fuerte sabor amargo; aspecto ste utilizado en teraputica como estimulante del apetito. Los principios amargos estimulan las secreciones del tracto gastrointestinal y en particular del jugo gstrico. Las sustancias amargas pueden ser determinadas qumicamente, pero al estar compuestas por dos o ms constituyentes con diferentes grados de amargor, es necesario primeramente medir el total de amargor empleando un mtodo biolgico. Las propiedades amargas de una droga son determinadas por comparacin del extracto de la droga a diferentes concentraciones con una solucin diluida de hidrocloruro de quinina. El valor de amargor es expresado en trminos de unidades equivalentes a la solucin diluida de quinina que contiene 1 g en 2000 mL. Como vehculo para la extraccin de la droga se emplean generalmente agua potable, la cual se utiliza tambin en el lavado bucal despus de cada ensayo; no siendo necesario el uso de agua destilada ya que su dureza no tiene una influencia marcada sobre el amargor. La sensibilidad del amargor vara de persona a persona y en una misma persona puede variar en diferentes momentos (despus de fumar, ingerir alimentos de sabor fuerte, etc.). Para llevar a cabo el ensayo, el catador, (persona que est entrenada en ensayos de este tipo), debe comenzar probando la concentracin menor de la muestra de ensayo, y transcurrido un perodo corto de tiempo (15 min.), despus de haberse enjuagado la boca con agua potable, debe comparar el amargor contra la concentracin menor de la sustancia de referencia (hidrocloruro de quinina). La sensacin de amargor debe ensayarse en la parte superior de la lengua, en las partes laterales de la boca y en la parte inferior o base de la lengua. Si la persona no es capaz de apreciar la sensacin amarga de la concentracin menor, 10,058 mg de la solucin de quinina, no se considera apta para esta determinacin.

Determinacin del ndice de espuma.

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Esta determinacin se realiza con vista a establecer la capacidad que presentan algunas drogas de formar espuma persistente cuando una decoccin o solucin acuosa se agita vigorosamente en un corto perodo de tiempo. Este ensayo es caracterstico de compuestos de tipo saponina o de otros que debido a sus caractersticas estructurales son capaces de disminuir la tensin superficial del agua. Determinacin de la actividad hemoltica. Muchas drogas en especial aquellas derivadas de Caryophyllaceae, Araliaceae, Sapindaceae, Primulaceae, y Dioscoreaceae, contienen saponinas. La propiedad ms caracterstica de stos compuestos es la de causar, la ruptura o lisis de los glbulos rojos. La actividad hemoltica de una droga, o de un preparado que contiene saponinas, se determina por comparacin con un material de referencia o saponina R, la cual tiene una actividad hemoltica de 1000 unidades por gramos. Una suspensin de glbulos rojos se mezcla con igual volumen de una dilucin seriada de la droga y se determina la menor concentracin que produce un efecto completo de hemlisis. Este ensayo se lleva a cabo simultneamente con el patrn de referencia. Todos los procedimientos propuestos para determinar la actividad hemoltica estn basados en el mismo principio, pero presentan algunas variaciones referidas a: la procedencia de los glbulos rojos; los mtodos de preparacin de la suspensin de los glbulos rojos y del extracto de la droga, la actividad hemoltica definida del material de referencia y el mtodo experimental. Con vista a obtener valores confiables, es esencial estandarizar las condiciones experimentales y especialmente determinar la actividad hemoltica por comparacin con la saponina de referencia. Cromatografa en capas delgadas. La cromatografia en capa delgada es particularmente til para la determinacin cualitativa de pequeas cantidades de impureza. La tcnica es fcil de realizar, efectiva y emplea aparatos no costosos. Se usa con frecuencia para evaluar drogas y sus preparaciones. Deben establecerse las siguientes especificaciones para cada determinacin: a) Tipo de absorbente y mtodo de activacin; s ste ltimo no se menciona calentar a 110C por 30 min. b) El mtodo de preparacin y la concentracin de la muestra y la solucin de referencia. c) El volumen de la solucin a aplicarse en la placa. d) La fase mvil, la temperatura de desarrollo y la distancia de migracin del solvente (fase mvil). e) El mtodo de secado, la temperatura y el mtodo de deteccin. f) Para el resultado obtenido observar las manchas. - Nmero y posicin aproximada. (o el valor Rf si es necesario). - Fluorescencia y/o color. Determinaciones cualitativas. Antes de realizar la extraccin completa de la muestra a ser analizada, es necesario llevar a cabo pruebas preliminares sencillas y rpidas que permitan detectar cualitativamente la presencia de determinados grupos de compuestos. Esto se logra mediante las tcnicas de "screening" (tamizaje), que
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se ayudan de la microqumica para evidenciar estos grupos de constituyentes mediante formacin de precipitados, coloraciones, etc. Estas reacciones se caracterizan porque son selectivas para las clases o grupos de compuestos que se investigan, son simples y rpidas, detectan la mnima cantidad posible y utilizan un mnimo de equipo de laboratorio. No debe olvidarse que cuando se obtiene un resultado negativo, este puede deberse a la ausencia de la clase de compuestos buscada, a la seleccin errnea del solvente para extraer, a la presencia de sustancias extraas que interfieran a una concentracin en el orden de trazas del compuesto ensayado. Con relacin a la seleccin del disolvente, este da lugar a diferentes mtodos o esquemas de trabajo para el tamizaje fitoqumico. En el desarrollo de esta actividad se persigue el aprendizaje y aplicacin de tcnicas de tamizaje al material vegetal fresco, seco o en forma de extracto blando o seco. Parte experimental. Materiales y reactivos. - Gradillas - ter etlico. - Tubos de ensayo - Etanol. - Agua destilada. - Reactivos del tamizaje. Procedimiento. La planta fresca, seca o el residuo de una extraccin; es sometida a tres extracciones sucesivas segn el esquema de la Fig.3. A cada extracto I, II y III, se le mide el volumen obtenido y se le calcula su concentracin, esto es, gramos de sustancias extradas por mL de extracto. Para ello tome una alcuota de 5 mL y pselo a una cpsula previamente tarada, evapore a sequedad en bao de agua y pese nuevamente. Se procede de igual forma que la tcnica descrita para le determinacin de sustancias solubles.

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30 - 50 g MATERIAL VEGETAL

EXTRAER CON 90 -150 mL DE TER ETLICO POR MACERACION DURANTE 48 HORAS A TEMPERATURA AMBIENTE FILTRAR

Medir volumen y calcular concentracin

EXTRACTO ETREO

RESIDUO SLIDO
Secar y pesar

EXTRAER CON 3 VECES EL PESO DEL RESIDUO EN VOLUMEN CON ETANOL POR MACERACIN DURANTE 48 HORAS. FILTRAR

Medir volumen y calcular concentracin

EXTRACTO ALCOHLICO

RESIDUO SLIDO
Secar y pesar

EXTRAER CON 3 VECES EL PESO DEL RESIDUO EN VOLUMEN CON AGUA DESTILADA POR MACERACIN DURANTE 48 HORAS. FILTRAR

Medir volumen y calcular concentracin

EXTRACTO ACUOSO

RESIDUO SLIDO Secar, pesar y desechar

Fig. 3 Extraccin sucesiva del material vegetal para la aplicacin de tcnicass de Tamizaje Fitoqumico. Posteriormente en cada extracto por separado se procede de acuerdo a los esquemas representados en las Figuras 4, 5 y 6. En cada caso para realizar los ensayos se procede de la siguiente forma: Ensayo de Sudan: Permite reconocer en un extracto la presencia de compuestos grasos, para ello, a la alcuota de la fraccin en el solvente de extraccin, se le aade 1 mL de una solucin diluida en agua del colorante Sudan III o Sudan IV. Se calienta en bao de agua hasta evaporacin del solvente.

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EXTRACTO ETREO DIVIDIR EN FRACCIONES

5 mL ENSAYO DE SUDAN
(ACEITES Y GRASAS)

5 mL

ENSAYO DE BALJET
(LACTONAS Y COUMARINAS)

15 mL (dividir en 3 porciones) ENSAYOS DE DRAGENDORFF MAYER Y WAGNER

(ALCALOIDES)

5 mL ENSAYO DE LIEBERMAN-BUCHARD
(TRITERPENOS-ESTEROIDES)

Fig. 4 Esquema de las reacciones a realizar en el extracto de ter etlico. La presencia de compuestos grasos se considera positiva si aparecen gotas o una pelcula coloreada de rojo en el seno del lquido o en las paredes del tubo de ensayos respectivamente.
EXTRACTO ALCOHLICO DIVIDIR EN FRACCIONES

1mL ENSAYO DE CATEQUINAS

2 mL ENSAYO DE FEHLING
(AZ. REDUCTORES)

2 mL ENSAYO DE RESINAS

(TRITERPENOS-ESTEROIDES)

2 mL ENSAYO DE LIEBERMAN-BUCHARD

2 mL ENSAYO DE Cl Fe
(FENOLES Y TANINOS)
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2 mL ENSAYO DE BORNTRAGER
(QUINONAS)

(CARDENLIDOS)

2 mL ENSAYO DE KEDDE

6 ML en 3 porciones ENSAYOS DE DRAGENDORFF MAYER Y WAGNER

(ALCALOIDES)

2 mL ENSAYO DE BALJET
(LACTONAS)

2 mL ENSAYO DE NINHIDRINA
(AMINOCIDOS)

2 mL ENSAYO DE ANTOCIANIDINA 2 mL ENSAYO DE SHINODA

(FLAVONOIDES)

2 mL ENSAYO ESPUMA
(SAPONINAS)

Fig. 5 Esquema de las reacciones a realizar en el extracto alcohlico. Ensayo de Dragendorff: Permite reconocer en un extracto la presencia de alcaloides, para ello, si la alcuota del extracto est disuelta en un solvente orgnico, este debe evaporarse en bao de agua y el residuo redisolverse en 1 mL de cido clorhdrico al 1 % en agua. Si el extracto es acuoso, a la alcuota se le aade 1 gota de cido clorhdrico concentrado, (calentar suavemente y dejar enfriar hasta acidez). Con la solucin acuosa cida se realiza el ensayo, aadiendo 3gotas del reactivo de Dragendorff, si hay opalescencia se considera (+), turbidez definida (++),precipitado (+++). Ensayo de Mayer: Proceda de la forma descrita anteriormente, hasta obtener la solucin cida. Aada una pizca de cloruro de sodio en polvo, agite y filtre. Aada 2 o 3 gotas de la solucin reactiva de Mayer, si se observa opalescencia (+), Turbidez definida (++), precipitado coposo (+++). Observacin: En el caso de alcaloides cuaternarios y/o amino-xidos libres, stos solo se encontrarn en el extracto acuoso y para considerar su presencia la reaccin debe ser (++) (+++), en todos los casos, ya que un resultado (+), puede provenir de una extraccin incompleta de bases primarias, secundarias o terciarias.

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EXTRACTO ACUOSO DIVIDIR EN FRACCIONES

6 ML en 3 porciones ENSAYOS DE DRAGENDORFF MAYER Y WAGNER

(ALCALOIDES)

2 mL ENSAYO DE SHINODA
(FLAVONOIDES)

10 mL ENSAYO DE MUCLAGOS 1 2 GOTAS ENSAYO DE PRINCIPIOS AMARGOS

2 mL ENSAYO DE FEHLING
(AZ. REDUCTORES)

2 mL ENSAYO DE CLORURO FRRICO

(TANINOS)

2 mL ENSAYO DE ESPUMA
(SAPONINAS)

Fig. 6 Esquema de las reacciones a realizar en el extracto acuoso. Ensayo de Wagner: Se parte al igual que en los casos anteriores de la solucin cida, aadiendo 2 3 gotas del reactivo, clasificando los resultados de la misma forma. Ensayo de Baljet: Permite reconocer en un extracto la presencia de compuestos con agrupamiento lactnico, en particular Coumarinas, aunque otros compuestos lactnicos pueden dar positivo al ensayo. Para ello, si la alcuota del extracto no se encuentra en alcohol, debe evaporarse el solvente en bao de agua y redisolverse en la menor cantidad de alcohol (1 mL). En estas condiciones se adiciona 1mL del reactivo, considerndose un ensayo positivo la aparicin de coloracin o precipitado rojo (++ y +++) respectivamente. Ensayo de Hidroxamato frrico para coumarinas: Una gota del extracto se coloca en una placa de porcelana y se aade una gota de clorhidrato de hidroxilamina disuelto en etanol al 10 %. Se aaden unas gotas de hidrxido de potasio al 10% en etanol y se calienta a la llama hasta burbujeo, se aaden unas gotas de cido clorhdrico 0.5 mol/L y una gota de cloruro frrico al 1% en agua. El desarrollo de una coloracin violeta (+), claro (++), intenso (+++). El reactivo de Baljet se prepara de la siguiente forma: Solucin 1: Hidrxido de sodio al 10 % en agua. Solucin 2: cido pcrico al 1 % en etanol. Las soluciones se tienen preparadas de forma independiente y se mezcla igual cantidad en volumen de cada una de ellas justo en el momento de realizar el ensayo. Dicha mezcla es la que se adiciona a la alcuota a evaluar. Ensayo alcuota residuo potasio de Borntrager: Permite reconocer en un extracto la presencia de quinonas. Para ello si la del extracto no se encuentra en cloroformo, debe evaporarse el solvente en bao de agua y el redisolverse en 1 mL de cloroformo. Se adiciona 1 mL de hidrxido de sodio, hidrxido de amonio al 5 % en agua. Se agita mezclando las fases y se deja en reposo hasta su
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ulterior separacin. Si la fase acuosa alcalina (superior) se colorea de rosado o rojo, el ensayo se considera positivo. Coloracin rosada (++), coloracin roja (+++). Ensayo de Lieberman-Burchard: Permite reconocer en un extracto la presencia de triterpenos y/o esteroides, por ambos tipos de productos poseer un ncleo del androstano, generalmente insaturado en el anillo B y la posicin 5-6. Para ello, si la alcuota del extracto no se encuentra en cloroformo, debe evaporarse el solvente en bao de agua y el residuo redisolverse en 1 mL de cloroformo. Se adiciona 1 mL de anhdrido actico y se mezcla bien. Por la pared del tubo de ensayos se dejan resbalar 2-3 gotas de cido sulfrico concentrado sin agitar. Un ensayo positivo se tiene por un cambio rpido de coloracin: 1- Rosado-azul muy rpido. 2- Verde intenso-visible aunque rpido. 3- Verde oscuro-negro-final de la reaccin. A veces el ensayo queda en dos fases o desarrollo de color. Muy pocas veces puede observarse el primer cambio. El tercer cambio generalmente ocurre cuando el material evaluado tiene cantidades importantes de estos compuestos. IMPORTANTE : Para realizar este ensayo no puede haber agua en el medio de reaccin pues sta con el cido sulfrico reacciona de forma violenta y puede ocurrir un accidente. La reaccin de Lieberman-Burchard se emplea tambin para diferenciar las estructuras esteroidales de los triterpenoides, las primeras producen coloraciones azul o azul verdoso, mientras que para las segundas se observa rojo, rosado o prpura. Estas coloraciones pueden variar por interferencias producidas por carotenos, xantofilas y esteroides saturados que puedan estar presentes. Ensayo de catequinas: Para ello, tome de la solucin alcohlica obtenida una gota, con la ayuda de un capilar y aplique la solucin sobre papel de filtro. Sobre la mancha aplique solucin de carbonato de sodio. La aparicin de una mancha verde carmelita a la luz UV, indica un ensayo positivo. Ensayo de resinas: Para detectar este tipo de compuesto, adicione a 2 mL de la solucin alcohlica, 10 mL de agua destilada. La aparicin de un precipitado, indica un ensayo positivo. Ensayo de Fehling: Permite reconocer en un extracto la presencia de azcares reductores. Para ello , si la alcuota del extracto no se encuentra en agua, debe evaporarse el solvente en bao de agua y el residuo redisolverse en 1-2 mL de agua. Se adicionan 2 mL del reactivo y se calienta en bao de agua 5-10 minutos la mezcla. El ensayo se considera positivo si la solucin se colorea de rojo o aparece precipitado rojo. El reactivo se prepara de la siguiente forma: Solucin A: Se pesan 35 g de sulfato cprico hidratado cristalizado y se disuelven con agua hasta un volumen total de 1000 mL. Solucin B: Se pesan 150 g de tartrato de sodio y potasio y 40 g de hidrxido de sodio y se disuelven con agua hasta un volumen total de 1000 mL. Las soluciones se tienen preparadas de forma independiente y se mezcla igual cantidad en volumen de cada una de ellas justo en el momento de realizar el ensayo. Dicha mezcla es la que se adiciona a la alcuota a evaluar.
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Ensayo de la espuma: Permite reconocer en un extracto la presencia de saponinas, tanto del tipo esteroidal como triterpnica. De modo que si la alcuota se encuentra en alcohol, se diluye con 5 veces su volumen en agua y se agita la mezcla fuertemente durante 5-10 minutos. El ensayo se considera positivo si aparece espuma en la superficie del lquido de ms de 2 mm de altura y persistente por mas de 2 minutos. Ensayo del cloruro frrico: Permite reconocer la presencia de compuestos fenlicos y/o taninos en un extracto vegetal. Si el extracto de la planta se realiza con alcohol, el ensayo determina tanto fenoles como taninos. A una alcuota del extracto alcohlico se le adicionan 3 gotas de una solucin de tricloruro frrico al 5 % en solucin salina fisiolgica (cloruro de sodio al 0.9 % en agua). Si el extracto es acuoso, el ensayo determina fundamentalmente taninos. A una alcuota del extracto se aade acetato de sodio para neutralizar y tres gotas de una solucin de tricloruro frrico al 5 % en solucin salina fisiolgica, un ensayo positivo puede dar la siguiente informacin general: -Desarrollo de una coloracin rojo-vino, compuestos fenlicos en general. -Desarrollo de una coloracin verde intensa, taninos del tipo pirocateclicos. -Desarrollo de una coloracin azul, taninos del tipo pirogalotnicos. Ensayo de la ninhidrina: Permite reconocer en los extractos vegetales la presencia de aminocidos libres o de aminas en general. Se toma una alcuota del extracto en alcohol, o el residuo de la concentracin en bao de agua, si el extracto se encuentra en otro solvente orgnico, se mezcla con 2 mL de solucin al 2 % de ninhidrina en agua. La mezcla se calienta 5-10 minutos en bao de agua. Este ensayo se considera positivo cuando se desarrolla un color azul violceo. Ensayo de Shinoda: Permite reconocer la presencia de flavonoides en un extracto de un vegetal. Si la alcuota del extracto se encuentra en alcohol, se diluye con 1 mL de cido clorhdrico concentrado y un pedacito de cinta de magnesio metlico. Despus de la reaccin se espera 5 minutos, se aade 1 mL de alcohol amlico, se mezclan las fases y se deja reposar hasta que se separen. Si la alcuota del extracto se encuentra en agua, se procede de igual forma , a partir de la adicin del cido clorhdrico concentrado. El ensayo se considera positivo, cuando el alcohol amlico se colorea de amarillo, naranja, carmelita o rojo; intensos en todos los casos. Ensayo de Kedde: Permite reconocer en un extracto la presencia de glicsidos cardiotnicos. Una alcuota del extracto en etanol se mezcla con 1 mL del reactivo y se deja reposar durante 5-10 minutos. Un ensayo positivo es en el que se desarrolla una coloracin violcea, persistente durante 1-2 horas. El reactivo de Kedde se prepara de la siguiente forma: -Solucin 1: cido 3.5 dinitrobenzico al 2 % en metanol. -Solucin 2: Hidrxido de potasio al 5.7 % en agua. Las soluciones se tienen preparadas de forma independiente y se mezcla igual cantidad en volumen de cada una de ellas justo en el momento de realizar el ensayo. Dicha mezcla es la que se adiciona a la alcuota a evaluar.
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Ensayo de antocianidinas: Permite reconocer en los extractos vegetales la presencia de estas estructuras de secuencia C6-C3-C6 del grupo de los flavonoides. Se calientan 2 mL del extracto etanlico 10 min. con 1 mL de HCL conc. Se deja enfriar y se adiciona 1 mL de agua y 2 mL de alcohol amlico. Se agita y se deja separar las dos fases. La aparicin de color rojo a marrn en la fase amlica, es indicativa de un ensayo positivo. Ensayo de muclagos: Permite reconocer en los extractos de vegetales la presencia de esta estructura tipo polisacrido, que forma un coloide hidrfilo de alto ndice de masa que aumenta la densidad del agua donde se extrae. Para ello una alcuota del extracto en agua se enfra a 0-5 C y si la solucin toma una consistencia gelatinosa el ensayo es positivo. Ensayo de principios amargos y astringentes: El ensayo se realiza saboreando 1 gota del extracto acuoso o del vegetal y reconociendo el sabor de cada uno de estos principios, bien diferenciados al paladar. Tambin pueden realizarse otros ensayos no comprendidos en este esquema de tamizaje, para la deteccin de otros compuestos. A continuacin expondremos algunos de estos ensayos. Glicsidos cianogenticos: Coloque unos 5 g de material vegetal en un erlenmeyer de 125 mL y adicione suficiente agua para humedecer la muestra. Prepare un papel de picrato de sodio sumergiendo una tira de papel de filtro en una solucin recin preparada de picrato de sodio (5 g de carbonato de sodio + 0.5 g de cido pcrico y cantidad suficiente de agua para 1000 mL); conserve esta solucin en frasco seco. Aproximadamente 1 mL de cloroformo se aade a la muestra humedecida para resaltar la actividad enzimtica. Inserte el papel de picrato de sodio en el recipiente con la muestra, colocndolo de forma tal que no toque las paredes del mismo. Tape el recipiente y caliente a 35 C por unas 3 horas. Observe los cambios de coloracin del papel, si en 3 h no se produce variacin, puede afirmarse la ausencia de los glicsidos cianogenticos, pero si en 15 min. el papel cambia de amarillo a diferentes tonos rojos, indica la presencia de HCN en cantidades apreciables. Aceites, hidrocarburos y carotenos: En un embudo de separacin al cual se le coloca un pedacito de algodn en el orificio interior, se adicionan 5 g de droga en polvo y 15 mL de solvente de baja polaridad (ter de petrleo o tetracloruro de carbono). Tape el embudo para evitar la evaporacin del solvente y djelo en reposo 6 h como mnimo. Abra la llave del embudo y obtenga de esta forma el extracto. I- Ensayo de aceite fijo, secante o esencial: Tome 5 mL del extracto y djelo evaporar sobre un vidrio reloj o placa petri a temperatura ambiente. La aparicin de un lquido oleoso despus de la evaporacin, si deja mancha de grasa sobre el papel de filtro indica presencia de aceite fijo. Si al evaporarse el disolvente aparece una pelcula fina resinosa, indica presencia de aceite secante. Si al evaporarse el disolvente aparece un lquido oleoso aromtico que no deja mancha de grasa sobre el papel de filtro indica la presencia de aceite esencial. II- Ensayo de hidrocarburos: Tome 10 mL del extracto y djelo evaporar al aire, disuelva el residuo obtenido en acetona calentando suavemente sobre bao de agua si fuera necesario. Deje algunas horas en el refrigerador. La aparicin de un precipitado, indica la presencia de hidrocarburos.
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III- Ensayo de carotenos: Si el ensayo de hidrocarburos descrito en II, resultara positivo, filtre el precipitado obtenido y disuelva el residuo en 2 mL de cloroformo. Tome la solucin clorofmica y adicione reactivo de Carr-Price. La aparicin de una coloracin verde-azulada indica presencia de carotenos. Determinaciones cuantitativas. Introduccin. Los anlisis cuantitativos de drogas y extractos requieren de una manipulacin precisa lograr dosificar los principios activos ensayados. para

Existen algunos mtodos generales que permiten determinar la concentracin de algunos principios activos en sus mezclas y otros que permiten cuantificar un principio activo en particular. Los anlisis de las drogas no estn restringidos a los mtodos discutidos en el presente captulo y pueden ser usados adems, otros muchos mtodos y tcnicas de alta resolucin, para ofrecer mayores detalles sobre las drogas y sus constituyentes. Determinacin de taninos. Los taninos (o sustancias tnicas), son sustancias capaces de cambiar la piel en cuero por enlazamiento con las protenas formando sustancias insolubles en agua, las cuales son resistentes a los enzimas proteolticas. Este proceso cuando se aplica a tejidos vivos es conocido como accin teraputica de los taninos. Estn ampliamente distribuidos en las plantas y se encuentran disueltos en el jugo celular, con frecuencia en algunas vacuolas. Son sustancias de composicin qumica compleja. Cuando se degradan o hidrolizan se obtienen polifenoles relativamente simples. En general son polmeros de alto peso molecular que forman soluciones coliodales cuando se disuelven con agua. Dan reacciones caractersticas de coloracin con las sales frricas precipitacin. y algunos reactivos de

Existen diferentes mtodos para su cuantificacin, dentro de los cuales citaremos: A. Mtodo espectrofotomtrico con polvo de piel. Parte experimental. Materiales y reactivos. SR cido fosfotngstico. Matraz de 25 mL. Soln. de carbonato de sodio. Embudo.
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- Polvo de piel. - Papel de filtro 12 cm de dimetro - Pirogalol. - Espectrofotmetro UV-vis. Procedimiento. En un matrz de 25 mL se diluye la cantidad indicada de droga finamente pulverizada con 150 mL de agua. La mezcla se lleva a ebullicin y se deja reposar durante unos 30 minutos en bao de agua. Posteriormente la mezcla se enfra en agua corriente a 20 C y se diluye con agua potable a 250 mL. Despus que se sedimentan las partculas de drogas, se filtra el lquido sobrenadante a travs de un filtro de papel de 12 cm de dimetro. Los primeros 50 mL filtrados se desechan y los siguientes se utilizan para la determinacin. Polifenoles totales : Se pipetean 5,0 mL de lquido filtrado y se diluyen con agua a 25,00 mL. A 2,00 mL de esta solucin se le aaden 1,00 mL de solucin reactivo de cido fosfotngstico y cuidadosamente se le aaden tambin 17,0 mL de solucin de carbonato de sodio (50,0 g/100,0 mL). Despus de 120 seg. de aadida la solucin de carbonato de sodio, se mide la absorbancia (A1) de la solucin en celda de 1 cm de espesor a una longitud de onda de 750 nm, usando agua como blanco. Polifenoles no reactivos con polvo de piel : A 10,0 mL de lquido filtrado se le aaden 0,100 g de polvo de piel y se agita por una hora. La mezcla se filtra. Se pipetean 5,00 mL de filtrado y se diluyen con agua a 25,0 mL. A 2,0 mL de esta solucin se le aade 1,00 mL de solucin reactivo de cido fosfotngstico y cuidadosamente se le aaden tambin 17,0 mL de solucin de carbonato de sodio (50,0 g/100,0 mL). Despus de 120 seg. de aadida la solucin de carbonato de sodio se mide la absorbancia (A2) de la solucin en celda de 10 mm de espesor a longitud de onda 750 nm, usando agua como blanco. Solucin de referencia : Se disuelven 0,500 g de pirogalol en 100,00 mL de agua. Se pipetean 5,0 mL de esta solucin y se diluyen con agua a 100,00 mL. A 2,00 mL de esta solucin se le aaden 1,00 mL de solucin reactivo de cido fosfotngstico y ciudadosamente se le aaden tambin 17,00 mL de solucin de carbonato de sodio, se mide la absorbancia (A3) de esta solucin en celda de 1 cm de espesor a la longitud de onda de 750 nm, usando agua como blanco. Expresin de los resultados: 6250 (A1 - A2)Ew1 % de tanino= -----------------------Ew2 (100-a) A3

donde: A1= absorbancia de los polifenoles totales. A2= absorbancia de los polifenoles no reactivos con polvo de piel. A3= absorbancia de la solucin de comparacin. a= prdida por desecacin en porcentaje de masa. Ew1= pesada de la droga en gramo.
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Ew2= pesada del pirogalol en gramo. % taninos, calculados como pirogalol sobre la base de la droga desecada a 105 C. B. Mtodo del permanganato de potasio. Parte experimental. Materiales y reactivos. - Solucin ndigo carmn. - Beakers 1L. - Solucin gelatina. - Bureta 50 mL. - Solucin acidificada de NaCl - Probetas 25 y 50 mL. - Solucin KMnO4 0,1 mole/L - Pipetas 2 mL. - Agitador de vidrio. Procedimiento. Adicionar 25 mL de solucin de ndigo carmn y 750 mL de agua a 2 mL de extracto acuoso. Aadir solucin de permanganato lentamente con una bureta y con agitacin hasta obtener coloracin verde claro. Continuar la valoracin hasta cambio de color a amarillo brillante con el borde rosado dbil. Designe los mL de KMnO4 utilizados como "a". Mezcle 20 mL del extracto, 80 mL de agua destilada, 50 mL de solucin de gelatina, 100 mL de solucin cida de NaCl y 10 g de Caoln polvo en un frasco. Tape el frasco y agite durante unos minutos. Deje sedimentar y filtre a travs de papel de filtro. Mezcle 25 mL de filtrado, con 25 mL de solucin de ndigo carmn y 750 mL de agua. Valorar con KMnO4; designe los mL consumidos como b Calcule el porcentaje de taninos totales segn:

(a-b) . equiv.KMnO4 . 0,0042 % taninos = ------------------------------------------------ . 100 mL de alcuota tomada del extracto. C. Mtodo del tungsto-molibdico-fosfrico. Parte experimental. Materiales y reactivos. - Etanol - Balanza analtica.
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Tungstato de sodio Erlenmeyer. Ac. fosfomolibdico Zaranda. Carbonato de sodio deshidratado Embudo. cido tnico Papel de filtro. Pipeta 5. Matraz aforado 50 mL. Equipo reflujo.

Procedimiento. 10,0 g de la droga en polvo se lleva a un frasco cnico de 250 mL con 500 mL de alcohol al 50 %. Se mantiene en agitacin durante 6 h en zaranda, se deja en reposo 8 h y se agita nuevamente 30 min. y se filtra. Se transfieren 3 mL del filtrado a un matrz aforado de 50 mL y se diluye con agua destilada hasta enrase (Sm). Se prepara un juego de 4 matraces aforados de 50 mL cada uno (B,P,M1 y M2) y se procede de la siguiente forma: Reactivo Soln muestra. (SM) Soln referencia Agua destilada Reactivo para taninos. B 5,0 mL 2,0 mL P M1 y M2

1,0 mL 3,0 mL 2,0 mL 4,0 mL 2,0 mL 2,0 mL

Se agita se deja en reposo 5 min. Reactivo Soln sodio carbonato B 1,0 mL P M1 y M 2 1,0 mL 1,0 mL

Se completa con agua destilada hasta enrase y se mezcla bien. Se leen las absorbancias de la soln de referencia y las muestras a 700 nm en un trmino no mayor de 2 min. Los clculos se determinan segn:

Am . P . 1000 . 100 X= ---- -------------------Ap . PM . (100-p) donde: X= % de taninos en la droga. Am= absorbancia de la muestra. Ap= absorbancia de la soln de referencia.
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P= masa de la sustancia de referencia (g). p= % de humedad de la droga. PM= masa de la droga (g) 1000 y 100= factor matemtico para el clculo. Reactivo para tanino. Se disuelven 10 g de tungstato de Na dihidratado, 0,2 g de c. fosfomolibdico y 5 mL de c. fosfrico al 85 % en 75 mL de agua destilada. se refluja la soln por 2 h y despus se completa a 100 mL con agua. Solucin de carbonato de sodio. Se disuelven 10 g de carbonato de sodio anhidro en 50 mL de agua destilada.

Solucin de referencia. Se pesan con exactitud 25 mg de c. tnico (previamente secado a 100 C durante 2 h) y se disuelven en agua hasta completar 100 mL. Se pipetean 20 mL de la soln y se diluye a 100 mL con agua destilada (Sr). Determinacin de antraquinonas. Introduccin. Las quinonas son dicetonas insaturadas, que por reduccin, se convierten en polifenoles, los que fcilmente las regeneran por oxidacin. Por sus colores amarillo a violeta, contribuyen a la pigmentacin de numerosos vegetales y de algunos animales. Algunas como la vitamina K, la ubiquinona (coenzima Q) y las plastoquinonas intervienen en los fenmenos respiratorios, transportando electrones, por lo que se les encuentra en todos los seres vivos. Sin considerar las anteriores, alrededor de la mitad de las conocidas se han encontrado en Angiospermas, otras tantas en hongos y vegetales unicelulares; pero casi no se han localizado quinonas en las monocotiledneas. Por el sistema armatico que dan al reducirse, se les puede dividir en: benzoquinonas, naftoquinonas, antraquinonas y fenantroquinonas. Si los grupos cetnicos estn contiguos se le llama orto y si estn separados por un grupo vinilo, para. Las antraquinonas constituyen el grupo ms numeroso de quinonas. Se encuentran frecuentemente en las Rubiaceaes, Rhamnaceaes y Poligonaceaes. Las cualidades tintoreas y purgantes de algunas plantas de esta familias se debe a sus quinonas. La mayora de las antraquinonas estn hidroxiladas en C1 y C2 y con frecuencia estn en forma de glicsidos, los que se hidrolizan durante el aislamiento.

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Parte esperimental. Materiales y reactivos. - Erlenmeyer de 150 mL - Metanol-agua 1:1 - Embudo - HCL 10 %. - Papel de filtro - Eter etlico. - Papel indicador rojo congo - H2S04 50 %. - Embudo separador - Soln. de NaOH de conc. molar en equiv. 1 mol/L. - Soln. HCO3Na de conc. molar en equiv. 1 mol/L. Procedimiento. En un erlenmeyer se colocan 10 g de planta molida y se le aaden 50 mL de una solucin de metanol agua 1:1. Se agita durante 30 min. Se filtra y el residuo se somete nuevamente al mismo proceso dos veces ms. Se elimina el metanol al vaco, en bao de agua y se acidifica la solucin restante con HCL al 10 % hasta que tome coloracin azul el papel de rojo congo. Extraer 5 veces con 20 mL de ter etlico. Reunir las fases etreas y separar la fase acuosa que se desecha. La fase terea se extrae con 5 mL de solucin de HCO3Na de concentracin molar equivalente 1 mol/L 4 veces, reuniendose los extractos acuosos y desechndose el extracto etreo. Al extrato acuoso se le aaden 40 mL de ter y se acidifica con cido sulfrico al teniendo cuidado pues se produce la eliminacin de un gas. 50 %,

Se separa la fase etrea. La fase acuosa se extrae con 20 mL de ter 2 veces y se procede a unir con la anteriormente extraida. Filtre por papel y pase el filtrado a un matrz aforado de 100 mL y complete con ter. (Esta solucin es muy sensible a la luz, por lo que se debe trabajar rpido. Tome 5 mL de esta solucin y extraiga con 10 mL de NaOH de concentracin molar en equivalente 1 mol/L. Tome la fase acuosa y aadale 0,3 mL de H2O2 al 3 %. Caliente en bao Mara durante 4 min. Enfrie. Lea en el fotocolormetro con filtro 530. Determine la concentracin de la muestra en la grfica previamente trazada con el patrn. Patrn. En un baln aforado de 100 mL, aada 0,01 g de 1,8 dihidroxiantraquinona y enrase a 100 mL con H2O. En 5 embudos de separacin aada las siguientes cantidades: a) b) c) d) e) 29,9 29,7 29,5 28,0 28,0 mL mL mL mL mL de de de de de ter 0,1 ter 0,3 ter 0,5 ter 1,0 ter 2,0 mL mL mL mL mL de de de de de patrn patrn patrn patrn patrn.
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Aada 10 mL de NaOH de conc. molar en equivalente 1 mol/L a cada uno. Mezcle lentamente durante 3 min. y djelo en reposo. Separe la fase acuosa y lea en cubeta de 1 cm con filtro 530 contra NaOH de concentracin molar en equivalente 1 mol/L. Determine la grfica y realice los clculos. Determinacin de aceites voltiles. Los aceites voltiles son caracterizados por su olor, apariencia oleosa y facilidad de volatilizarse a temperatura ambiente. Qumicamente, estn compuestos por lo general, por mezclas de diversos compuestos, entre los cuales se encuentran los monoterpenos y sesquiterpenos, tanto los hidrocarburos como sus derivados oxigenados, as como, algunos compuestos aromticos. Para estos compuestos se emplean los trminos de esencias, aceites esenciales y aceites voltiles; siendo ste ltimo el preferido por ser el que mejor describe sus propiedades fsicas. La obtencin y caracterizacin de aceites esenciales responde a un mtodo de obtencin de extractos por destilacin, pudiendo servir adems como mtodo cuantitativo de anlisis. La destilacin comprende variantes segn si el material fresco o seco se altera por ebullicin con agua. En la destilacin de una mezcla de dos lquidos inmiscibles, las cantidades relativas en peso de los dos lquido que se recogen en el colector son directamente proporcionales a: 1.- Las tensiones de vapor de ambos lquidos a la temperatura de destilacin. 2.- A sus masas molares. Adems, la mezcla destilar a una temperatura constante mientras exista por lo menos algo de cada uno de los componentes. Para la obtencin de aceites esenciales, pueden ser empleados alguno de los equipos representados en la Fig. 7

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Fig. 7 Equipos de obtencin de aceites esenciales. A y B, Hidrodestilacin C. Arrastre con vapor

Parte experimental. Materiales y reactivos. - Balanza analtica.

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Plancha elctrica o fuente de calor. Baln o matraz de destilacin. Aparato para la determinacin de aceite esencial. Pesa filtro de 25 mL. Bao de agua termostatado. Sulfato de sodio anhidro. Eter etlico. Sol. de NaCL 1 % m/v.

Procedimiento. Se pesan 100 g de la droga seca y molida, si no se especifica otra cosa en la norma, se transfieren a un baln de destilacin de 1 L, se aaden 400 mL de solucin de cloruro de sodio y se conecta el equipo de destilacin de aceite. Se calienta el baln a ebullicin y se ajusta la destilacin a 2-3 mL/min. Mantener la destilacin por 2 h o ms de acuerdo a la monografa de la droga. Finalizada la destilacin, dejar enfriar y aadir por el condensador pequeas porciones de ter dietlico. Transfiera el contenido a un embudo separador, adale de 2-3 mL ms el ter dietlico, agite y decante la fase acuosa. Al extracto etreo, adale 0,5 g de sulfato de sodio anhidro y lave el residuo con varias porciones de ter dietlico, los cuales se renen en el pesa filtro. Evapore el solvente cuidadosamente en bao de agua a temperatura no mayor de 40 C.y determine la masa del aceite voltil por la diferencia entre las pesadas del pesafiltro vaco y con el aceite esencial. Expresin de los resultados. A1 . 100 % a.e= ------------ 100 (en base anhidra) 100-H Pa-Pv % a.e= --------- x 100 (en base hidratada) M donde: Pa= Masa del pesafiltro con acite voltil (g) Pv= Masa del pesafiltro vaco. 100= Factor matemtico. M= Masa de la droga (g). H= Humedad de la droga (%) A1= % de aceite esencial en base hidratada. Los resultados se aproximan hasta las dcimas. En los aceites esenciales pueden realizarse determinaciones cuantitativas de componentes que respondan a una misma funcin, atribuyendo el porcentaje de al componente en particular que presente mayor proporcin.
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grupos y los mismos

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Los mtodos que se describen aceites esenciales. Parte experimental.

continuacin permiten evaluar algunos componentes de los

A. Determinacin del ndice de acidz. Materiales y reactivos. - Balanza analtica - Alcohol etlico al 90 %. - Fenolftaleina. - Solucin alcohlica KOH 0,1 mol/L. Procedimiento. Se pesa exactamente, con presicin hasta las milsimas, de 2 a 5 g del aceite a ensayar. Se aade alcohol etlico al 95 % (neutralizado) un volumen igual en mg a 5 veces el peso de la muestra y 5 gotas de fenolftaleina. Se agita hasta total disolucin y se valora con solucin alcoholica de KOH 0,1 mol/L. El ndice de acidz se calcula por la frmula siguiente: 56,1 x V x Z IA= -----------------------g donde: V= mLs de KOH 0,1 mol/L consumidos. Z= conc. molar en equiv. de la solucin de KOH 56,1= miliequivalentes de KOH expresados en mg. g= peso de la muestra en gramos.

B. Determinacin del ndice de steres y porciento de Materiales y reactivos. - Balanza analtica - Etanol al 95 % - Frasco de saponificacin - Fenolftaleina - Condensador - Soln acuosa NaOH 0,1 mol/L - Bao Mara - Soln alcoholica KOH 0,5 mol/L - Fragmentos de plato poroso - Soln HCL 0,5 mol/L
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steres.

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Procedimiento. Se pesan exactamemtente de 2 a 5 g de la muestra en el frasco de saponificacin,con una presicin hasta la milsimas. Se aade alcohol etlico al 95 %, un volumen igual a 5 veces el peso de la muestra y 3 gotas de solucin indicadora de fenolftaleina, neutralizando despus los cidos, con solucin acuosa de NaOH 0,1 mol/L Se aaden 10 mL de solucin alcoholica de KOH 0,5 mol/L medidos exactamente y algunos fragmentos de plato poroso y se ajusta el condensador de reflujo al frasco de saponificacin, reflujando en Bao Mara durante 1 hora. Se deja enfriar y se aade al condensador 10 mL de alcohol etlico neutro. Se desmonta el condensador, se adiciona 5 gotas de solucin indicadora de fenolftaleina y se valora el exceso se lcali con solucin de HCL 0,5 mol/L. Paralelamente con el ensayo de la muestra se realiza un ensayo en blanco. El ndice de steres se calcula por la frmula siguiente, teniendo en cuenta el ndice de acidz. 56,1 . (V-V') . N IE= -------------------------g donde: 56,1= Miliequivalentes de KOH expresados en mg. V= mL de KOH 0,1 mol/L consumidos. V'= mL de KOH consumidos en el ensayo en blanco. N= Conc. molar de la solucin de NaOH 0,1 mol/L. g= gramos de aceite empleados para el ensayo.

El porciento de steres se calcula por la siguiente frmula. 56,1 . (V-V') . N --------------------------10 g.

% E=

donde: 56,1= miliequivalente de KOH expresados en mg. V= mL de la solucin de KOH consumidos. V'= mL de la solucin de KOH consumidos en el ensayo en blanco. N= Conc. molar de la solucin de NaOH 0,1 mol/L. 10 g= cantidad de aceite empleado en el ensayo. Bibliografa. 1. World Health Organization. Quality Control Methods for Medicinal Plant Materials. WHO/Pharm 92 559. 2. The United States Pharmacopeia. USP XXII, 1990, suppl. 1990,1991.
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3. World Health Organization. The use of essential drugs. Technical Report Series, 796, Geneva, 1990. 4. World Health Organizatin. WHO Expert Committee on Specifications for Pharmaceutical Preparations Thirty first Report, Technical Report Series 790, p47, WHO, Geneva, 1990.

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METODOS DE EXTRACCION DE PRODUCTOS NATURALES. Concepto y fundamento del proceso de extraccin. La extraccin es uno de los procesos ms utilizados desde el punto de vista farmacutico y se refiere conceptualmente a la separacin de las porciones medicinalmente activas a partir de los tejidos de las plantas y animales, de los componentes inertes de los mismos, mediante el uso de solventes selectivos denominados menstruos, utilizando procedimientos establecidos y correctamente estandarizados. Este trmino se diferencia del referido a la disolucin donde toda materia debe ser soluble no quedando en el proceso componentes inertes insolubles. Los extractos como preparacin se denominan popularmente como galnicos en honor a Galeno, el muy conocido mdico Griego de la antigedad, el cual dio grandes aportes en su poca al desarrollo de la Farmacia y la Medicina, y generalmente se obtienen como lquidos, semislidos o slidos relativamente impuros. La extraccin, es un proceso complejo que contempla varios fenmenos por separado o en conjunto como son: la dilisis, la desorcin, la disolucin y la difusin. Para ejecutar un proceso de extraccin puede trabajarse con material fresco o seco. Cuando las clulas de los tejidos vegetales estn vivas, la pared celular se comporta como un tabique impermeable que permite el intercambio entre la clula y el medio, intercambio que se regula fisiolgicamente y donde juegan un papel importante las enzimas. Para evitar las transformaciones enzimticas, las clulas se matan por desecacin provocada por el calor o por tratamiento con alcohol. En ambos casos, al morir la clula, la pared celular pierde su carcter de tabique impermeable y se transforma en un tabique poroso, donde el proceso de intercambio ya no es fisiolgico y se rige por fenmenos fsico-qumicos que se explican en las tres fases generales contempladas en todo proceso de extraccin. La primera fase corresponde al traslado de las sustancias que se encuentran dentro de la clula hacia el exterior a travs de la membrana celular ahora tabique poroso. Este proceso depende tanto de la difusin molecular libre como del coeficiente de difusin interno y su cuantificacin puede realizarse a travs de la ley de Fick y su forma de expresin que es la siguiente:
Sc = Dint . Fs C- c .t l

donde: Sc: Cantidad de sustancia a difundir expresada en kilogramos. Dint: Coeficiente de difusin interior que corresponde a la cantidad de sustancia a difundir en un segundo a travs de una superficie de 1m2. Fs: Superficie de contacto entre las fases del proceso expresada en m2. C-c: Diferencia de las concentraciones de sustancia entre las fases expresada en kg/m3. l: Espesor de la capa a travs de la cual ocurre la difusin expresada en metros. t: Tiempo durante el cual ocurre el proceso de difusin expresado en segundos. De esta expresin, pueden analizarse los siguientes aspectos relacionados con la primera fase de un proceso de extraccin.
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Con excepcin al espesor de la capa a travs de la cual ocurre la difusin, el resto de los factores influyen directamente sobre el proceso de difusin. As, mientras mayor es la superficie de contacto, la diferencia de concentraciones y el tiempo de difusin, la cantidad de sustancia a difundir es mayor y por tanto la eficiencia del proceso es mayor. Tambin, es evidente de la expresin que mientras menor es el espesor de la capa a travs de la cual ocurre la difusin ms eficiente es el proceso. Cuando las sustancias a difundir se trasladan a la capa de difusin limtrofe entre la pared y el menstruo de extraccin, el proceso depende totalmente de la ley de difusin molecular libre que se explica por la siguiente expresin:
Dm = RT No 1 6rn

donde: Dm: Coeficiente de difusin molecular. R: Constante de los gases(8,32 Joule/mol). T: Temperatura absoluta expresada en grados Kelvin. No: Nmero de Avogadro(6,02 x 1023). r: Radio de las partculas a difundir expresado en metros. n: Viscosidad del medio expresada en Newton/seg. m . Al igual que en la primera fase del proceso, en sta, la difusin tambin aumenta con la temperatura pero disminuye con el aumento de la viscosidad del medio y con el aumento del tamao de las partculas a difundir (se relaciona directamente con su masa molecular lo que determina molculas grandes o pequeas). Finalmente la ltima fase del proceso corresponde al traslado de las sustancias difundidas al centro de flujo o menstruo del proceso. Esto se realiza a travs de la difusin convectiva y depende de la velocidad de transporte del menstruo y de su capacidad de disolucin. Mientras ms se disminuya la capa limtrofe donde llegan las sustancias difundidas, ms rpidamente se incorporarn las mismas al menstruo y ms eficiente ser el proceso de extraccin. Sobre estas tres fases del proceso, hay varios factores que pueden influir de forma decisiva sobre la calidad del mismo. Por su importancia, enumeraremos y comentaremos algunos de ellos. Factores que influyen sobre el proceso de extraccin. Grado de divisin de la droga. De acuerdo a la expresin de la ley de Fick, mientras mayor es el grado de divisin de la droga, mayor ser la superficie entre las fases del proceso de extraccin y por tanto, mayor ser la difusin a travs de la membrana porosa. No obstante, este anlisis terico no se cumple totalmente en la prctica, ya que a mayor grado de divisin de la droga, la misma se compacta ms en presencia del menstruo y el proceso de difusin se dificulta en vez de mejorar.
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Por otra parte, una divisin muy grande del tejido vegetal puede romper clulas y esto puede aportar a la extraccin sustancias indeseables. Por ello, para asegurar que el proceso de extraccin cumpla con los requisitos de calidad, se sugiere por las normas cubanas y algunas Farmacopeas los siguientes tamaos de partculas para las drogas a extraer: - Hojas, flores y plantas herbceas, no ms dividido que 5mm. - Cortezas, tallos y races, no ms de 3mm. - Frutos y semillas, no ms de 0,5mm. Viscosidad del medio. Segn la expresin de la ley de difusin molecular, la cantidad de sustancia a difundir guarda una relacin inversa con la viscosidad del medio. Por ello, para un adecuado relativamente alta viscosidad. proceso de extraccin no deben seleccionarse menstruos de una

De la misma forma, debe ajustarse el tiempo del proceso de forma tal que la cantidad de sustancia extrada no aumente la viscosidad del medio para lo que, debe asegurarse una adecuada velocidad de transporte del menstruo. Balance de concentraciones. En la expresin de la ley de Fick queda claro que la difusin depende del balance de concentraciones. Cuando dentro de la clula hay ms concentracin de una sustancia que en el medio, la difusin hacia afuera ocurre de forma gil, por lo que durante el proceso, debe asegurarse que en el medio siempre haya menor concentracin de las sustancias a extraer. Esto puede lograrse a travs del tiempo de contacto y remocin del solvente entre otros. Temperatura. En general, tanto la difusin interna como la molecular dependen directamente de la temperatura. No obstante, no siempre un aumento de la temperatura va a favor de una mejor calidad en la extraccin. Cuando el menstruo es voltil no debe aplicarse temperatura al proceso, tampoco cuando las sustancias a extraer tienen estas caractersticas, como son los aceites esenciales, o cuando son termo-lbiles como es el caso de los alcaloides. Por ello, en preparaciones galnicas, se utiliza temperatura cuando se extrae con agua o menstruos donde prevalece el agua, o en el caso de aquellos tejidos crneos como es el caso de las races, rizomas, cortezas y hojas duras. Otro aspecto a considerar en la temperatura es que cuando la droga contiene almidones, estos se aglutinan por el calor, aumentan la viscosidad y por tanto disminuyen el proceso de difusin y la calidad de la extraccin. Continuidad del proceso de extraccin en el tiempo.

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Al inicio del proceso, la extraccin es ms gil tanto por una mayor velocidad de difusin as como de las zonas del tejido de mayor acceso para el menstruo, no obstante, segn aumenta el tiempo, la velocidad de difusin disminuye y la extraccin se limita a las zonas de ms difcil acceso para el menstruo. Por ello, debe estar definido el principio activo a extraer y en que momento se concluye el proceso de extraccin y evitar prdidas de tiempo y de solvente en el mismo. Grado de absorcin de agua o de menstruo. Cuando se mata la clula vegetal, la superficie de la membrana disminuye dificultando la difusin, esto se expresa por la ley de Fick. Por ello, para mejorar la calidad del proceso, debe restituirse en la clula agua o menstruo en cantidad suficiente para restituir aproximadamente su volumen inicial y que el proceso de difusin ocurra con calidad. De esta forma, est demostrado que la extraccin se favorece en un 15-20%. No obstante, hay muchos criterios hinchamiento de la clula vegetal. respecto a como realizar este proceso de humectacin e

De forma general se sugiere que se incorporen las siguientes cantidades en peso respecto a las drogas. Para races 1,5 veces el peso. Para hierbas, cortezas y flores 2,0 veces el peso. Para semillas 3,0 veces el peso. Estos valores se denominan coeficientes de absorcin de agua y para algunas drogas oficiales se conocen con mayor exactitud. Tambin, se propone una expresin para realizar ste clculo y es la siguiente:
Cantidad de Volumen final agua complementaria = de Extracto Coeficiente de absorcin Proporcin de + de agua de la droga la droga

Ej: Cul ser la cantidad de agua complementaria para humectar las flores de una droga previo a la extraccin en una proporcin droga solvente 10 en 180.? cant. de agua = 180 + (2,0 . 10) = 180 +20 cant. de agua = 200 mL Otro aspecto a considerar dentro de ste factor corresponde al tiempo de humectacin previo a la extraccin. Las drogas oficiales tienen definido este tiempo que en general, en dependencia de la droga puede fluctuar entre 15 minutos y 4 horas. La humectacin previa es uno de los factores que ms influyen en la calidad de un proceso de extraccin. pH del medio. El pH es un factor que influye positivamente en un proceso de extraccin en dependencia del tipo de sustancia que se desee obtener. En particular, los alcaloides se ven favorecidos por adicin de cidos al menstruo de extraccin.
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Estandarizacin de la materia prima. Si la materia prima no cumple los parmetros de calidad establecidos en las normas correspondientes, la extraccin no cumple con la calidad del proceso y el extracto no tiene los porcentajes establecidos respecto a los principios activos. Naturaleza qumica de la sustancia a extraer. El conocer aproximadamente la naturaleza qumica de la sustancia a extraer, permite ajustar adecuadamente los parmetros y factores que determinan la calidad del proceso de extraccin, ya que lgicamente, por ejemplo la extraccin de flavonoides no tiene que ver con el proceso de extraccin de aceites esenciales o de alcaloides. Equipos para la extraccin. En dependencia de la naturaleza qumica de las sustancia a extraer y el uso que se dar al extracto, as se seleccionar el tipo de extracto a preparar. En concordancia , cada tipo de extracto tiene su sistema de equipamiento particular que responde a la calidad requerida para el proceso y a la calidad final esperada para el extracto. Tipos de extractos y mtodos para su preparacin. Oficialmente se reconocen slo tres tipos de extractos en cuanto a su forma fsica de presentacin: I- Lquidos o semilquidos de consistencia siruposa. II- Masa plstica denominada extracto slido o pilular. III- Extracto pulverizado o polvo seco. Teniendo en cuenta la metodologa empleada para la obtencin del extracto, pueden describirse varios tipos de mtodos relacionados con estos extractos los cuales se comentan a continuacin. Infusin y Decoccin. Ambos mtodos de extraccin utilizan el agua como menstruo, la infusin poniendo la droga en contacto con agua caliente o fra durante 15 minutos y la decoccin hirviendo la droga conjuntamente con el agua durante 30 minutos todos los calentamientos se realizan en bao de agua o de vapor de agua. En cualesquiera de los mtodos se utilizan recipientes de cristal, esmaltados o de acero inoxidable cerrados adecuadamente. Ambos mtodos, adems del principio activo extraen ms cantidad de sustancias acompaantes o inactivas. De forma general, se sugieren tres proporciones que son las ms utilizadas de cantidad de droga respecto al volumen de solvente. I - Proporcin de 1 a 10 cuando la droga no tiene sustancias drsticas. II - Proporcin de 1 a 30 cuando la droga tiene principios activos generales y III - Proporcin de 1 a 400 cuando la droga tiene principios activos txicos.

usuales.

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Independientemente de esto, la medicina tradicional utiliza la proporcin 1 a 20 como la generalizada y divulgada.

ms

En estos mtodos, es importante el tiempo de enfriamiento, que en el caso de las decocciones puede ser breve, pero en el caso de las infusiones no debe ser inferior a las 4 horas. Las decocciones aumentan la viscosidad con un enfriamiento prolongado lo que dificulta el colado o filtrado. En el caso de las infusiones el tiempo de enfriamiento debe ser prolongado para mejorar el proceso de extraccin con un tiempo adicional en contacto la droga y el agua. Estos mtodos eliminan protenas y enzimas que ayudan a la fermentacin, pero los extractos son muy poco estables y se preparan para consumo rpido. En general, es necesario adicionar preservativos qumicos para mejorar algo la estabilidad de los mismos. En dependencia de los principios activos que tengan las drogas, se sugieren algunas reglas para la preparacin de extractos por estos mtodos y que son los siguientes: - Si la droga contiene alcaloides y conocemos el porcentaje de los mismos, la adicin de igual porcentaje de cido ctrico, cido tartrico o cido clorhdrico al agua favorece la extraccin mediante la formacin de sales solubles. - Si la droga contiene aceites esenciales debe utilizarse fresca, sin triturar, y si es seca, entera y con la calidad establecida por las normas correspondientes. Debe taparse adecuadamente el sistema de extraccin sin agitarse y slo filtrar despus de enfriarse el tiempo establecido de acuerdo al mtodo de extraccin. - Si la droga contiene taninos como principio activo debe asegurarse un grado de trituracin que asegure una buena extraccin y siempre utilizar como mtodo la decoccin, de lo contrario no se extrae todo el tanino como principio activo. - Si la droga contiene glicsidos cardiotnicos debe cuidarse la trituracin y la fermentacin que destruye los glicsidos, as como cuidar la temperatura y el tiempo de calentamiento, pues puede acelerarse el proceso de hidrlisis de estos glicsidos. - Si la droga contiene glicsidos antraquinnicos el mtodo de extraccin debe ser decoccin, ya que la infusin realiza una extraccin incompleta. - Si la droga contiene glicsidos saponnicos, a diferencia de los alcaloides, la adicin de 1g de bicarbonato de sodio por cada 10g de material vegetal a extraer, facilita una mejor y ms rpida extraccin. Maceracin. La maceracin, es un mtodo de extraccin que consiste en remojar la droga con la cantidad de menstruo preestablecida, a temperatura ambiente, en recipiente cerrado, durante un tiempo entre 2-14 das si no se conoce el tiempo necesario para una droga en particular, se sugiere 7 das como promedio para el proceso. El lquido de extraccin se acostumbra a extraer por decantacin, exprimiendo el residuo de la extraccin. Este residuo se lava y exprime varias veces cuidando tener el volumen final requerido para el extracto.
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De acuerdo a la ley de la difusin y para evitar el aumento de la viscosidad por un aumento de la concentracin de la capa lmite entre la clula del tejido vegetal y el menstruo, y con el objeto de aumentar la velocidad de transporte del menstruo, la agitacin hace ms efectivo el proceso. Agitar la masa total produce un gasto energtico excesivo, por lo que se acostumbra a resuspender el material vegetal en el menstruo y agitar ste, para que constantemente est intercambiando con el material vegetal. La maceracin es un mtodo de extraccin de eleccin cuando los principios activos pueden sufrir alteracin por el calor o por el aire y son solubles a temperatura ambiente en un menstruo que no debe ser voltil. Tambin cuando no puede aplicarse el mtodo de lixiviacin, que se considera uno de los ms aplicados en preparaciones galnicas. Entre sus ventajas se tiene el hecho que no determina en el proceso el grado de trituracin de la droga, ya que est implcita la desventaja de que no extrae todo el principio activo. Por ello, el proceso requiere ms tiempo, aunque se asegura por el tipo de equipamiento que no hay prdidas de solventes por evaporacin. Digestin. Es un mtodo de extraccin que est basado en todos los principios del proceso que rige la maceracin, aunque en este caso el principio activo admite la aplicacin de calor. Para el mismo, se aplica una temperatura superior a la ambiente pero inferior a la de ebullicin del menstruo y su aplicacin mediante cualquier variante que permita su regulacin. Lixiviacin o percolacin. Es un mtodo de extraccin muy relacionado al desarrollo de la Farmacia en cuanto a la extractiva se refiere en el siglo pasado, mrito que corresponde a los Boullays a partir de 1833, que lo aplicaron de forma general a drogas y plantas medicinales. La importancia de este mtodo se evidencia, pues la Farmacopea de los Estados Unidos lo acepta como procedimiento oficial desde el ao 1840. Se utiliza para la preparacin de uno de los extractos ms difundidos en preparaciones galnicas, los extractos fluidos. Los extractos fluidos son extractos lquidos de materias vegetales, de tal manera preparados, que la cantidad de extracto final en volumen es equivalente a la de la droga desecada al aire en peso, o sea, la relacin peso de droga / volumen final de extracto 1 es a 1. Equipo para el proceso. El mtodo de extraccin utiliza un equipo denominado lixiviador o percolador que retiene la droga a travs de la cual se hace fluir el menstruo en forma descendente. Existen diversas formas y variantes descritas para los lixiviadores o percoladores, no obstante la ms generalizada es la que se representa en la Fig. 8

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Fig. 8 Tipos ms empleados de percoladores. Para que un percolador permita agotar totalmente 500g de droga durante el proceso de necesita que tenga 2 litros de capacidad. extraccin, se

Para ello, la altura sin contar la parte estrecha, debe ser de 36 cm, el dimetro superior de 10 cm y el inferior de 6,5cm por lo que va estrechndose poco a poco haciendo que la desviacin de las paredes de la vertical sea aproximadamente de 3 grados. Para lixiviadores mayores, la forma cnica puede ser ms pronunciada an, aunque la desviacin no debe ser mayor de 5 grados para una buena extraccin. De la misma forma, la parte final extrema no debe tener ms de 5cm de altura. Se pueden fabricar de vidrio, de lminas de hierro esmaltado, de hojalata o de cobre estaado. Preparacin del proceso. De forma general se describe la siguiente metodologa para la preparacin del proceso. La droga seca segn la norma y con el grado de divisin que le corresponda, se humedece con la cantidad de menstruo calculada para una adecuada humectacin de la misma. La mezcla se realiza con las manos en un recipiente adecuado de forma que quede una masa grisosa homognea. El polvo humectado se deja en reposo 12 horas (si no se especifica otra cosa), bien tapado para un correcto hinchamiento sin prdida de menstruo por evaporacin. Posteriormente se pasa por una criba con frotacin para que no quede apelmazado.
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En el percolador, que en su parte inferior tiene una placa porosa o una capa fina de algodn o lana de vidrio humedecida con el menstruo, se va colocando la droga hmeda en capas, presionando la misma de igual forma de modo que no queden espacios vacos llenos de aire. Despus de compactar la droga dentro del lixiviador, en la parte superior se coloca una capa doble de papel de filtro o absorbente cortado de forma circular, fijndola con una placa de porcelana con hueco o con una tapa de cristal grueso, para evitar la descomposicin de la droga por el menstruo durante el proceso. Se abre la llave inferior del lixiviador y se vierte por la parte superior lentamente y con cuidado, menstruo, en cantidad apropiada para que la droga quede completamente impregnada de menstruo y un exceso de alrededor de 0,5cm de altura por encima de la droga. Se cierra nuevamente el lixiviador y la pequea cantidad de menstruo que gote se vierte en el lixiviador por la parte superior. Se cierra adecuadamente el lixiviador y se macera 48 horas a temperatura ambiente, si no se especifica otro tiempo. Desarrollo de la lixiviacin. Transcurrido el tiempo previsto de la maceracin, se comienza el desarrollo de la lixiviacin. Se abre la llave inferior y se permite salir el menstruo a la velocidad establecida de acuerdo a lo que se explica ms adelante, restituyendo con menstruo limpio el volumen de salida por la parte superior del lixiviador. Se recoge del macerado unas 75-85 partes del volumen final que le corresponder al extracto y se conserva aparte. En otro frasco colector se continua el proceso, pasando la cantidad de menstruo necesaria para agotar la droga. Durante todo el proceso la droga debe estar embebida en el solvente y para una mejor calidad, debe lograrse la restitucin automtica del menstruo. La segunda fraccin del lixiviado se concentra a presin reducida hasta consistencia de extracto blando y que reunido con la primera fraccin separada completen las 1000 partes correspondientes al extracto final programado. Este extracto se deja reposar: - 4 das a una temperatura de 8-10oC - 10 das a una temperatura de 15-20oC - 20 das a temperatura ambiente. Despus de transcurrido el tiempo de reposo, se filtra y el lquido obtenido se envasa como extracto fluido. Si, como ocurre en la mayora de los casos, el vehculo es alcohlico, entonces, antes de la evaporacin, el alcohol del segundo lixiviado se recupera por destilacin, haciendo lo mismo con el disolvente que queda dentro del lixiviador y que se recupera por expresin final de la droga. La velocidad de salida de lquido se calcula de acuerdo a la cantidad de droga a utilizar en el proceso. Generalmente se establece entre 10-15 gotas por minuto para 1 Kg. de la droga y a partir de aqu se toman las proporciones. En otros casos, la velocidad de salida se estima de la siguiente forma: - lenta a razn de 1ml /min. - moderada a razn de 1-3ml /min. - rpida a razn de 3-5ml /min. En la medida de la velocidad de salida, no slo influye la cantidad de la droga sino tambin el dimetro y altura del percolador. Con cantidades iguales de droga, un lixiviador estrecho produce, a igual
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velocidad de salida, una primera fraccin ms concentrada que uno ancho. La velocidad de salida puede ser, por lo tanto, mayor con una capa de droga ms alta que con otra ms baja. La Farmacopea de los Estados Unidos propone que la velocidad de salida del menstruo en el percolado se calcule teniendo en cuenta que en 24 horas se obtenga un volumen total de lixiviado equivalente a vez y media el peso de droga de partida. Segn esto, para lixiviar un gramo de droga a la velocidad de salida del menstruo debe corresponder a 20 gotas por minuto. Tampoco, el agotamiento de la droga es igual en todos los casos, pues adems de la velocidad de salida del menstruo depende de la naturaleza de la droga. En cada caso hay que comprobar de vez en cuando si el lquido que gotea contiene cantidades apreciables del principio activo. Se recoge 10g de lquido que gotea y se evapora a sequedad en bao de Mara, calculando por el peso del residuo cuando conviene detener la lixiviacin. Si se tiene un ensayo cualitativo seguro, la lixiviacin se detiene cuando el mismo d resultados negativos para el principio activo deseado. Segn la Farmacopea de los Estados Unidos, 1 Kg. de la droga se agota con 3 litros de lixiviado, o sea, para agotar una parte de droga se necesitan 10 partes de menstruo. Lixiviacin fraccionada o dividida. (Relixiviacin o Repercolacin). Este proceso se sugiere especialmente para extraer drogas que contienen principios voltiles o sustancias a las cuales perjudica el calor. Primera variante: Cada 1000g de la droga se fracciona en tres partes. Parte I (500g) Parte II (300g) y parte III (200g). La parte I se humedece bien con la cantidad de menstruo calculada y se deja reposar 6 horas en un recipiente cerrado. se coloca en el lixiviador transcurrido ste tiempo con los cuidados ya descritos y se macera con el menstruo 48 horas. Se comienza el proceso de lixiviacin y se separan los primeros 200ml, se recoge una segunda fraccin de 1500ml y a partir de este momento numeradas en orden fracciones de 300ml hasta que se agote el principio activo. La parte II de la droga se humedece con la segunda fraccin del primer lixiviador de la forma establecida. El proceso se desarrolla utilizando como menstruo el resto de la segunda fraccin del lixiviado. Se separan los primeros 300ml y se recoge una segunda fraccin de 500 mL y a partir de ste momento numeradas en orden, fracciones de 200ml hasta que se agote el principio activo. Como menstruo se utilizan en el mismo orden las fracciones de 300ml obtenidas del primer percolado. La parte III de la droga se humedece con la segunda fraccin del segundo lixiviado y se monta el tercer lixiviador de la forma establecida. El proceso se desarrolla utilizando como menstruo el resto de la segunda fraccin del lixiviado. Se lixivia hasta recoger 500ml. Estos 500ml se renen con los 200 y 300ml anteriores para completar los 1000ml que corresponde al extracto fluido. Segunda variante: La droga se fracciona en 4 partes. Una parte de la droga se humedece con una parte en volumen de menstruo y se prepara el percolador de la forma establecida. Se macera durante 24 horas. Se comienza la lixiviacin recogiendo dos volmenes de lixiviado adicionando al percolador 3 volmenes de menstruo limpio. Con los dos volmenes de lixiviado se humecta la segunda parte de la
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droga y se macera el segundo percolador. En cada percolador se repite el mismo proceso. El lixiviado del primero para el segundo y el del segundo para montar el tercero. Se repite el proceso hasta montar el cuarto percolador. A partir de este momento, no se coloca menstruo nuevo en el primer percolador, sino se pasan los lixiviados de un percolador a otro recogiendo del cuarto percolador cada da, el volumen de lixiviado que en conjunto al final aporten el volumen correspondiente al extracto fluido. Tipos de extractos. Conceptos. Tinturas. Las tinturas se definen como soluciones alcohlicas o hidroalcohlicas de los principios activos contenidos en vegetales. Para drogas que contienen principios activos muy potentes se preparan tinturas al 10% que representan el extracto de 10g de la droga en 100ml del solvente. Para el resto de las drogas que contienen otros principios activos se preparan tinturas al 20% que representan el extracto de 20g de droga en 100ml de solvente. Las tinturas pueden prepararse por el mtodo de percolacin teniendo en cuenta los detalles del mtodo descritas. O pueden prepararse por maceracin. En este caso, se usa el 80% del volumen total del menstruo para macerar y el 20% restante para lavar y exprimir la droga despus de la maceracin. Extractos fluidos. Los extractos fluidos se definen como preparaciones lquidas de los principios activos contenidos en vegetales, utilizando el etanol, como solvente, como preservativo o con ambos fines, de forma tal que cada mililitro de extracto contenga los principios activos que aporte 1g de droga. Extracto blando. El extracto blando se define como el extracto fluido correspondiente a 4-6Kg de la droga, concentrado con vaco a una temperatura inferior a 60oC hasta el peso de 1Kg de extracto. Extracto seco. El extracto seco se define como el extracto fluido concentrado con vaco a una temperatura inferior a 60oC, hasta que despus de molinado quede en forma de polvo seco. A continuacin se describen algunos mtodos de obtencin de extractos y tinturas: Obtencin de extractos fluidos y tinturas. Para la obtencin de estos tipos de extractos, pueden ser empleados los mtodos de extraccin siguientes: maceracin, percolacin y repercolacin. Para realizar estos procedimientos debe haberse comprobado la calidad de las materias primas a utilizar (requisitos de calidad de la droga cruda y pureza y concentracin del menstruo). El tamao de prticula de la droga cruda no debe exceder de 5 mm. Debe efectuarse la comprobacin de la masa de la droga y el volmen de menstruo a utilizar para lograr los extractos de la forma prevista. Generalmente se preparan tinturas al 10 % para drogas potentes o muy activas (drogas hericas) y de un 20 a 50 % para drogas de menor actividad. (drogas no hericas).
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A. Obtencin de tinturas por maceracin. Parte experimental Materiales y reactivos. Recipiente de vidrio o acero inoxidable con tapa. Papel de flitracin mediana. Recipiente de color mbar. Balanza tcnica. Droga . Menstruo seleccionado.

Procedimiento. En un recipiente de vidrio o acero inoxidable con tapa, se vierte el 90 % del menstruo requerido; se le aade la droga cruda pesada y se mezcla bien. La mezcla debe ocupar como mximo las 3/4 partes del recipiente. Se tapa el recipiente y se macera el nmero de das establecidos, agitando 15 min. dos veces al da. Transcurrido el tiempo de maceracin, el lquido se extrae por decantacin y el residuo se filtra por papel de filtracin de velocidad moderada, se escurre y se lava con menstruo hasta completar el volmende tintura establecido. En este procedimiento debe evitarse lo ms posible la evaporacin del menstruo. Se deja reposar en un recipiente bien cerrado segn el esquema siguiente:

Temperatura. De 8-10 C De 15-20 C Ambiente

Tiempo de reposo. No menos de 4 das 15 das. 30 das.

Transcurrido ese tiempo se filtra y evapora en recipiente de vidrio mbar y se extrae una porcin para ensayos. B. Obtencin de tinturas por percolacin. Materiales y reactivos. Recipiente de vidrio o acero inoxidable. Percolador. Algodn o gasa. Papel de filtracin de velocidad moderada. Frasco mbar. Balanza tcnica. Droga cruda fragmentada.
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- Menstruo seleccionado. Procedimiento. 1) A un recipiente de vidrio o acero inoxidable (tanque, cubeta o cubo),de poca profundidad, se le transfiere la droga cruda pesada y se humedece con menstruo, procurando que no quede lquido residual.(Generalmente se emplea para la humectacin un volumen no menor del peso de la droga). Se deja reposar (para que la masa vegetal embeba el menstruo y se hinche) de15 min a 4 h en dependencia de la dureza y carartersticas de la droga cruda. 2) En un percolador cuyo orificio de salida se cubre con algodn o gasa u otro material inerte, se transfiere la droga humectada. La superficie se cubre con papel o placa de filtro o un disco metlico con orificio y se presiona. 3) Para garantizar que no queden burbujas de aire en la masa vegetal, se vierte menstruo con el orifico de salida del percolador abierto y cuando este comienza a salir se cierra el mismo. Se sigue vertiendo menstruo hasta que este cubra la masa vegetal y quede de 3-5 cm por encima de ella. Se recircula la tercera parte del volumen del lquido contenido en el percolador y si baja el nivel del lquido, este se repone. Se macera durante 24 h. 4) Se abre el orificio de salida y se deja salir el percolado a la vez que se aade mas menstruo, estableciendose un flujo de 3-5 mL/min hasta obtener la cantidad de tintura necesaria.( En base a un Kg de droga): 10 L si es tintura al 10 % 5 L si es tintura al 20 % 2 L si es tintura al 50 %. 5) Se deja reposar en un recipiente bien cerrado segn el siguiente esquema: De 8 a 10 C. No menos de 4 das. De 15 a 20 C. 15 das. T. Ambiente. 30 das. 6) El lquido es evacuado por sifn del sedimento, posteriormente se filtra el restante por gravedad, a presin o con vaco a travs de papel de filtracin de velocidad moderada, evitando lo ms posible la evaporacin y se envasa en recipiente plstico apto para contener productos farmacuticos. Se extrae una porcin para ensayos y se le realizan los anlisis establecidos, si cumple con los parmetros se envasa. C) Obtencin de extractos fluidos por percolacin. Materiales y reactivos. Recipiente de vidrio o acero inoxidable Percolador. Algodn o gasa. Papel de filtracin mediana. Frasco de color mbar. Balanza tcnica.
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- Droga cruda fragmentada. - Menstruo seleccionado. Procedimiento. Los primeros tres pasos se desarrollan de la forma descrita en la obtencin de tinturas por percolacin, seguidamente se abre el orifio de salida y se deja salir el percolado a la vez que se aade ms menstruo, establecindose un flujo de 3-5 mL/min hasta obtener una primera fraccin de 85% de extracto, los que se guardan en un recipiente. Se detiene la extraccin y con el volumen de menstruo requerido, se macera durante 24 h y se hace una extraccin de 1 L del extracto. Este proceso se repite por segunda vez. Los ltimos 2 L de extracto obtenido se reunen y se concentran a una temperatura que no exceda los 60 C hasta obtener el volumen requerido (15 % restante, se prefiere la concentracin por vaco). Este extracto blando se mezcla con laprimera fraccin obtenida y si fuese necesario se aade menstruo hasta completar el volumen del extracto fluido. Se deja reposar en un recipiente bien cerrado segn el esquema siguiente: De 8 a 10 C. No menos de 4 das. De 15 a 20 C. 15 das. T. ambiente 30 das. Transcurrido el tiempo de reposo se filtra por papel de velocidad moderada, evitando lo ms posible la evaporacin, y se envasa en recipientes de vidrio color mbar o recipientes de plstico aptos para contener productos farmauticos. Se toma una muestra para ensayo. D) Obtencin de extractos fludos por repercolacin. Materiales. - 4 percoladores. - Algodn, gasa o papel de filtro. - Beaker. - Probeta. - Frasco con tapa. - Balanza tcnica. - Droga cruda. - Menstruo seleccionado. Procedimiento. Excepto el paso de la extraccin del percolador, los dems siguientes son vlidos en este mtodo. Se prepara una batera de percoladores (4 5) con la misma cantidad de droga, utilizando el mesnstruo que va saliendo de un percolador para humectar el otro de la forma siguiente: Extracciones: 2do da: Del percolador I se evaca un volumen H de extracto con el que se humedece la droga del percolador II y se deja humedecer de la misma forma que se hizo para el percolador I. Al percolador I se aade un volumen T = H + M de menstruo fresco estando la llave abierta. Se deja salir
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un volumen M de extracto del percolador I y se cierra hasta el otro da. La materia prima hinchada se carga en el percolador II y se le aaden los lquidos del percolador I (volumen M), se recircula y despus se cierra la llave. Se deja hasta el da siguiente. 3er da: Siguiendo el mismo procedimiento se incorpora el percolador III a la bateria, teniendo presente siempreque el menstruo fresco se incorpora por el percolador de ms tiempo montado (PI). 4to da: Idem al tercero. 5to da: Se evacua de los percoladores montados un volumen en litros equivalente al peso en Kg de la carga de material vegetal en cada percolador. La fraccin obtenida del percolador IV constituye la primera fraccin de producto terminado, la que se reserva en recipiente aparte. Se repone el volumen extraido del percolador No4 con la misma cantidad de extracto proveniente del percolador anterior y asi sucesivamente se transfieren las fracciones de un percolador al siguiente. La mecnica que se sigue es semejante a la descrita anteriormente con la diferencia de que del percolador I se extrae el lquido contenido en l despus de lo cual se elimina este percolador del proceso. Por otra parte el lquido requerido para completar el volumen del percolador II, se hace con menstruo fresco. 6to da y sgtes: Siempre que haya droga cruda para seguir montando nuevos percoladores se sigue igual que para el 5to da. Se recuerda que la fraccin del producto terminado se extrae del ltimo, es decir del montado el da anterior; y que el percolador mas agotado en cuanto a droga sale del proceso. Cuando no haya ms percoladores que montar, la transferencia de un percolador a otro, se limita a lacantidad del extracto que equivale a una fraccin del producto terminado, extrayendo siempre la fraccin correspondiente a cada percolador montado, por el ltimo percolador. Lgicamente en los ltimos percoladores montados queda siempre un remanente de menstruo que se reunen al final. Este lquido residual puede adicionarse a las fracciones de producto terminado siempre que se conozca el ttulo de ambas partes; tambin se utiliza como menstruo en un prximo lote de la misma droga cruda. En resumen se obtienen tantas fracciones de producto terminado como percoladores se hayan montado, debiendo coincidir el volumen de extracto fluido con el peso de la droga cruda empleada. (Fig. 9).

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Fig. 9 Esquema de obtencin de extractos fluidos por repercolacin.

Anlisis de Extractos. Una vez preparados los diferentes tipos de extractos, deben establecerse los parmetros que definan la calidad de los mismos. Teniendo en cuenta que los extractos desde el punto de vista fsico se presentan de diferente forma, los parmetros usuales para definir su calidad presentan tambin diferencias entre ellos. Hay mtodos de anlisis que se ensayan en todos los tipos de extractos y otros que no. La forma prctica de realizar estos ensayos, as como de realizar los clculos correspondientes, estn descritos en los libros oficiales, tanto Farmacopeas como normas internas para el trabajo con drogas y plantas medicinales. (Tabla I) La evaluacin de los extractos comprende un conjunto de mtodos, alguno de los cuales sern descritos a continuacin. A. Determinacin de los requisitos organolpticos. Determinacin de olor: Se toma una tira de papel secante de aproximadamente 1 cm de ancho por 10cm de largo y se introduce un extremo en la muestra de ensayo. Se huele y se determina si corresponde con la caracterstica del producto. Determinacin del color: Se toma un tubo de ensayos bien limpio y seco y se llena hasta las tres cuartas partes con la muestra de ensayo y se observa el color, la transparencia, la presencia de partculas y la separacin en capas. Se informa los resultados. Tabla I . Diferentes ensayos que se les aplican a Extractos y Tinturas para el anlisis de la calidad. Ensayos 1. Descripcin del extracto 2. pH 3. ndice de refraccin 4. Peso especfico 5. Slidos Totales solubles 6. Anlisis capilar 7. Contenido de etanol 8. Determinacin cualitativa de principios activos 9. Composicin qumica general 10. Identificacin general Tinturas s s s s s s s s s s Extracto Extracto Extracto Fluido Blando Seco s s s s s s s no no s no no s s no s no no s no no s s s s s
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s s

s s

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11. Solubilidad 12. Humedad o residuo seco 13. Cenizas

no no no

no no no

s s s

s no s

B. Determinacin de la densidad relativa. Se entiende por densidad relativa a la relacin entre la masa de un volumen de la sustancia a ensayar a 25 C y la masa de un volumen igual de agua a la misma temperatura. Este trmino equivale a peso especfico. Materiales y reactivos. - Picnmetro de al menos 10 mL de capacidad. - Balanza analtica VD 0,1 mg LSP 200 g. Procedimiento: Primeramente psese el picnmetro vaco y seco a 2 C y llnese con la porcin de ensayo, mantngalo a la temperatura de 25 C ( 1 C) durante 15 min. y ajstese el lquido al nivel empleado, si es preciso, una tira de papel para extraer el exceso y secar exteriormente el picnmetro. Se pesa cuidadosamente el picnmetro con la porcin de ensayo y se repite la operacin con el agua destilada a 25 C, despus de limpio el picnmetro. Expresin de los resultados: La densidad relativa a 25 C se calcula por la sguiente frmula: M1 - M = -----------M2 - M

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donde: M1 : peso del picnmetro con la muestra (g) M2 : peso del picnmetro con el agua (g) M: peso el picnmetro vaco (g). Los resultados se aproximan hasta la tercera cifra. C. Determinacin del ndice de refraccin. El ndice de refracin es una constante caracterstica de cada sustancia, la cual representa la relacin entre el seno del ngulo de incidencia de la luz y el seno del ngulo de refraccin cuando la luz pasa oblicuamente a travs del medio. Esta relacin viene dada por la sgte ecuacin:

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Sen i --------- = n Sen r Asi los refractmetros utilizan como principio de medicin, la determinacin del ngulo lmite el cual presenta en el campo visual un contraste claro y otro oscuro. La lnea de separacin entre ambos campos establece el ngulo lmite de la luz incidente.

Materiales y reactivos. - Refractmetro de Abb - Varilla de vidrio. - Solucin mezcla de alcohol etlico-ter dietlico (1:1) para la limpieza del equipo. Procedimiento: Se coloca sobre el prisma de medicin una gota de agua destilada, utilizando para ello una varilla de vidrio que no tenga cantos agudos, se ajusta el equipo seleccionando la zona del espectro visible que aparece en la lnea lmite del campo visual, moviendo el compensador cromtico y colocando la interseccin del retculo sobre la lnea lmite de los campos claro y oscuro. Despus de haber realizado el ajuste del refractmetro, se coloca una gota de la muestra de ensayo sobre el prisma de medicin, se cierra el termo prisma y se enfoca la luz por medio del espejo, de modo tal que la misma incida sobre la apertura de entrada del prisma de medicin y se proceda de la misma forma que con el agua. Expresin de los resultados. Se hacen tres lecturas y se calcula el promedio de las mismas. Dos o mas lecturas no deben diferir en mas de 0.002 No. Si las determinaciones no se efectuan siguiente: Nd25 =Ndt + 0.00044 (t-25) donde: Nd25 = Indice de refraccin a 25 C Ndt = valor ledo en la escala del aparato a la temperatura t. t = valor de la temperatura a que se realiza la medicin (C) 0.00044 =factor de correccin por grado celcior. Los valores se aproximan hasta las milsimas. D. Determinacin del pH de extractos y tinturas: a la temperatura de referencia se emplea la frmula

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La acidz o la alcalinidad de las soluciones acuosas se caracterizan por el valor del ndice de hidrgeno, pH. El pH es por tanto un ndice nmerico que se utiliza para expresar la mayor o menor acidz de una solucin en funcin de los iones hidrgeno. Se calcula tericamente mediante la ecuacin: pH= -log aH+ aH + = actividad de los iones hidrgeno. En la prctica, la medicin de pH se lleva a cabo por medio de la lectura de pH en la escala de un instrumento medidor de pH, ya sea digital o analgico. Esta lectura est en funcin de la diferencia de potencial establecida entre un electrodo indicador y un electrodo de referencia usando como solucin de ajuste de la escala del medidor de pH, una solucin reguladora del mismo. Materiales y reactivos - Medidor del PH con electrodo de vidrio combinado. - Solucin reguladora de PH, para rango de 0-7, preparada de la siguiente forma: 2,5 g de Bitartrato de potasio para 250 mL de agua (PH= 3,5).

Procedimiento. Ajuste el equipo con la solucin reguladora de pH adecuada al rango en que la determinacin. Posteriormente determnese el valor del pH de la muestra. Los resultados se darn apreciando hasta la dcima. E. Determinacin de los slidos totales. La determinacin de la variacin de la masa, debido a la prdida o eliminacin de sustancias voltiles por accin el calor, mediante un proceso de evaporacin de la porcin de ensayo y secado del residuo en estufa, hasta masa constante, se le asigna como slidos totales. Materiales y reactivos. Cpsula de porcelana, platino o cristal. Bao de agua. Balanza analtica de LSP 200 g y VD 0.1 mg. Desecadora conteniendo slica gel. Estufa con temperatura controlada (105 2 C) Pipeta aforada de 5 mL. se realizar

Procedimiento:
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5,0 mL del producto se llevan a una cpsula previamente tarada a 105 C, se evapora sobre bao de agua hasta que el residuo est aparentemente seco. Se pasa entonces hacia una estufa y se deja hasta peso constante (aproximadamente 3 h). Se retira la cpsula de la estufa y se coloca en una desecadora hasta que alcance la temperatura ambiente. Para obtener la masa constante entre una pesada y otra se mantendr un tiempo de secado de 60 minutos. Expresin de los resultados. La cantidad de slidos totales, expresado en %, R, se calcula por la siguiente frmula: Pr-P St = -------100 V donde: Pr= masa de la cpsula ms el residuo (g) P= masa de la cpsula vaca (g) V= volumen de la porcin de ensayo. 100=factor matemtico para el clculo. Observacin: En caso de aceites esnciales F. Determinacin del contenido alcohlico. Consiste en la obtencin de una solucin hidroalcohlica mediante el proceso de destilacin de la muestra y donde debe garantizarse que todo el alcohol presente en la misma sea arrastrado hacia el destilado. Con la posterior determinacin del peso especfico de dicho destilado se obtiene el porcentaje de alcohol de la muestra. Materiales y reactivos. Equipo de destilacin de contenido alcohlico. Matraz aforado de 100 mL. Pipeta aforada de 25 mL. Picnmetro con termmetro (Geissler). se denomina como residuo de evaporacin (R).

Procedimiento Se seleccionar el mtodo A B en depedencia del producto que se vaya a analizar. Mtodo A: resinosas). (Para productos que no contengan sustancias voltiles, ni sustancias cidas

Se miden 25 mL del producto, el cual ha sido enfriado a 20 C ( 2 C); a un baln de destilacin de 500 mL se aaden 150 mL de agua para anlisis y algunas perlas de vidrio u otro material que contraste el bumping. Se conecta teniendo cuidado que las uniones estn bien
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cerradas. Se destilan de 90-95 mL recogiendo el mismo en un matrz aforado de 100 mL, el cual se encuentra sumergido en un bao de hielo. Se lleva la temperatura del destilado a 20 C (1 C) aproximadamente y se enrasa con agua para anlisis la cual ha sido enfriada a 20 C ( 2 C). Tambin se determina el peso especfico de la solucin a 20 C ( 1 C) empleando un picnmetro con termmetro (Geissler). Mtodo B: Para productos con sustancias voltiles o resinosas cidas. Se miden 25 mL de la preparacin la cual ha sido enfriada a 20 C ( 2 C) y se transfiere a un baln de destilacin de 500 mL. Se aaden 150 mL de agua para anlisis y algunas perlas para evitar el bumping. Se conecta el equipo teniendo cuidado de que las uniones estn bien selladas. Se destilan alrededor de 100 mL recogiendo el destilado en un embudo separador de 500 mL, se aade suficiente cantidad de cloruro de sodio para saturar el lquido (aproximadamente 31 g). Se aaden 100 mL de ter de petrleo de 40-60 C y se agita vigorosamente durante 2 3 min. Se deja reposar la mezcla durante unos 20 min, se lleva la capa inferior a un baln de destilacin. La capa etrea remanente se lava con 25 mL de una solucin saturada de cloruro de sodio, se dejan separar bien ambas capas y se incorpora la capa acuosa (inferior) al baln de destilacin. Se hace alcalina la solucin del baln con NaOH 1 mol/L, usando fenolftalena sdica como indicador, se aaden algunas perlas de vidrio u otro material para evitar el bumping adems de 100 mL de agua para anlisis. Se conecta el equipo y se destila alrededor de 95 mL del lquido, recogiendolo en un matrz aforado de 100 mL que se encuentra en un bao de hielo. Llevar la temperatura del destilado a 20 C antes de diluir hasta el enrase usando agua anlisis previamente enfriada tambin a 20 C. Expresin de los resultados. El peso especfico se determina como sigue: M1 - M P.E = ---------M2 - M donde: M1 = peso del picnmetro con la muestra a 20 C. M2 = peso del picnmetro con agua a 20 C M = peso del picnmetro vaco Se determina el porciento de alcohol en la muestra segn los datos de la Tabla II. para

G. Anlisis capilar: (Especfico de extractos y tinturas) Es un mtodo ingenioso e interesante para la caracterizacin de extractos y tinturas. Este mtodo se basa en los fenmenos de absorcin y de reparticin de sustancias en materiales colorantes a travs de los espacios capilares del material inerte que constituye el papel de filtro.
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Materiales y reactivos Beaker pyrex de 100 mL de aproximadamente 5 cm de dimetro y 70 cm de alto. Bandas de papel de filtro de 4 cm x 20 cm. Cmara protectora de la luz. Probeta o copa graduada de 25 mL. - Lmpara de luz UV de 366 nm.

Procedimiento Se vierten 20 mL de la muestra o de la disolucin de la muestra cuando la monografa lo indique en un bewaker de 100 mL, colquelo en la cmara protectora. Coloque una banda de papel de filtro verticalmente de manera que su extremidad inferior est sumergida dentro de la muestra, pero sin tocar el fondo ni las paredes del recipiente. (Fig. 10 ). Cierre la cmara y deje transcurrir 2 horas, al cabo de este tiempo se retirar el papel y se deja secar. Una vez seco se proceder a su inspeccin visual y caracterizacin. Exmen e interpretacin de la imagen Para el anlisis e interpretacin de la imagen se tienen en cuenta los aspectos siguientes: Color. Altura. Descripcin de las diferentes partes. Cambios de coloracin con vapores de amonaco. Examen bajo la luz ultravioleta.

Tabla II. Valores de peso especfico para la determinacin del contenido alcohlico. Peso especfico 0,9710 0,9715 0,9720 0,9725 0,9730 0,9735 0,9740 0,9745 % alcohol (V/V) 95,93 94,12 92,32 90,49 88,66 86,81 84,96 83,11 Peso % alcohol especfico (V/V) 0,9850 45,02 0,9855 43,32 0,9860 41,62 0,9865 39,95 0,9870 38,28 0,9875 36,63 0,9880 34,99 0,9885 33,37
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0,9750 0,9755 0,9760 0,9765 0,9770 0,9775 0,9780 0,9785 0,9790 0,9795 0,9800 0,9805 0,9810 0,9815 0,9820 0,9825 0,9830 0,9835 0,9840 0,9845

81,26 79,39 77,53 75,67 73,82 71,96 70,10 68,24 66,38 64,55 62,72 60,90 59,09 57,28 55,48 53,71 51,94 50,19 48,45 46,73

0,9890 0,9900 0,9905 0,9910 0,9915 0,9920 0,9925 0,9930 0,9935 0,9940 0,9945 0,9950 0,9955 0,9960 0,9965 0,9970 0,9975 0,9980 0,9985 0,9990 0,9995 1,0000

31,76 30,19 27,07 25,53 24,01 22,49 20,99 19,50 18,04 16,59 15,15 13,71 12,01 10,89 9,49 8,10 6,74 5,38 4,03 2,68 1,34 0,00

Fig.10. Esquema del anlisis capilar.

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Color: El color de la imagen se define en su conjunto inicialmente como: - Vivamente coloreada. - Poco coloreada. - Muy poco coloreada. En dependencia de la tonalidad que predomine en toda la imagen y posteriormente se detallan los colores caracteristicos de cada una de las 4 zonas si son fcilmente detectables. Altura: La altura de una imagen capilar se determina midiendo con una regla graduada en cm, del borde inferior del papel a la franja, siendo esta inversamente proporcional al grado alcohlico de la muestra. La altura promedio de una imagen capilar es de 8 cm aproximadamente, de ahi que se pueden clasificar las imagenes en: Altas: De 8,0 cm en adelante. Mediana: Entre 5,0-8,0 cm. Pequeas: Menos de 5,0 cm. En el anlisis de la imagen es posible distinguir 4 zonas: - Franja: Lmite superior de ascencin del lquido. - Sub-franja: Regin generalmente poco coloreada, comprendida entre la franja y la zona superior de la banda. - Banda: Zona generalmente pigmentada debido a la presencia de sustancias coloreadas. - Sub-banda: Situada debajo de la banda hasta el lmite de inmersin (Fig. 11).

Fig.11 Partes de la imagen capilar Descripcin de las diferentes partes:

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Una de las zonas de mayor inters es la franja, que sta puede ser o no traslucida, lo que denotar la presencia de resinas o aceites escenciales y grasas. En la franja tambin debe describirse la forma que esta adopta, dentro de ella: (Fig. 12 ). Lineal. Festonada Dentada ( regular o irregular). Profundamente dentada.

Fig. 12 Formas de la franja.

En la sub-banda debe considerarse el color y la longitud de la misma. La banda debe observarse a trasluz, ya que puede ser translcida. En algunas imagenes como en la de la tintura de ajo, colombo, condurango aloe, no se aprecia la banda, mientras que en otras aparecen bandas dobles como la grindelia. La sub-banda que comprende toda la parte de la imagen situada debajo de la banda, es quiz la menos importante, aunque debe considerarse su color. Posibles cambios por alcalinidad La alcalinizacin consiste en exponer la imagen capilar a los vapores de amonaco, para observar los posibles cambios de coloracin. Es recomendable realizar la alcalinizacin de la imagen capilar inmediatamente despus de su anlisis para garantizar que la misma an est hmeda. El efecto de la alcalinizacin es temporal ya que debe desaparecer al retirar la tira de papel de los vapores amoniacales. Las imagenes pueden variar su coloracin desde el amarillo hasta el violeta, por la accin de estos vapores y en otros casos puede no cambiar, es por ello que resulta de gran inters para la caracterizacin de la imagen.
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Exmen bajo la luz UV a 366 nm Resulta de gran inters para la caracterizacin de algunas muestras, ya que en ellas aparecen materiales fluorescentes que se detectan facilmente exponiendo la tira de papel con la imagen capilar bajo los rayos de la luz UV. As tenemos por ejemplo los extractos de quina que exhiben una fluorescencia azul o los de hidrastis, con una fluorescencia amarillo brillante. Contrariamente con el ensayo de alcalinidad en este caso debe dejarse secar bien la tira de papel despus de corrido el anlisis, antes de observarla bajo la luz. Factores que influyen en el anlisis capilar 1.Factores extrnsecos: a) Calidad del papel de filtro. b) Temperatura en que se desarrolla el anlisis. c) Tiempo de corrimiento. a) Tiempo de fabricacin de la tintura.

2.Factores intrnsecos:

1.a) Calidad del papel de filtro: El soporte del anlisis capilar, o sea, el papel de filtro, juega un rol importante en el aspecto de la imagen obtenida, ya que el mismo puede variar la altura de la imagen, el aspecto de la franja, etc. Debe por tanto tenerse en cuenta la clase de papel y el sentido de la fibra del papel al cortar las tiras. 1.b y c) Temperatura y tiempo de corrimiento: Se ha comprobado que a bajas temperaturas la altura se reduce, mientras que a temperaturas mayores de C tiende a subir de 1 a 2 cm por encima de lo normal. De igual forma para corrimiento de ms de 2 horas la imagen obtenida es ms oscura y la franja tiende a tomar borde irregularmente dentado . Por lo que los mejores resultados se obtendran para 2 horas y a temperaturas de 25 C ( 1). 2.a) Tiempo de fabricacin de la tintura: - La altura de la imagen disminuye con relacin a la normal de fabricacin. - El color de imagen disminuye en intensidad en muestras con - Influye tambin en el aspecto de la franja y la banda. Bibliografa. 1- Farmacopea de la URSS XI vol. 1, 1987. 2- The United States Pharmacopeia.Edic XXI y XXII, 1990, 1991. 3- Hager. Tratado de Farmacia Prctica. Tomo II. Editorial Labor SA 1948. 4- Remigton. Farmacia Prctica XII. Edicin Revolucionaria 1972. para muestras de mas tiempo

mayor tiempo de fabricacin.

SOLUCIONES Y REACTIVOS

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1. Alcohol extractivo : 84 mL de alcohol de 95 % y agua destilada csp 100 mL. 2. cido clorhdrico diluido (10 %) : 36 mL HCL concentrado (d=1,16;31 %) en agua csp 1L. 3. cido clorhdrico c(HCl/z*) l mol/L 85 mL de HCL concentrado, en agua csp 1 L. 4. cido sulfrico diludo (10 %) : 52 mL de H2 S04 concentrado en unos 100 mL de agua destilada. Enfrese a temperatura ambiente y diluya con agua a 1 L. 5. Sol. saturada de cido pcrico : 2 g de c. pcrico en agua destilada csp 100 mL. Se reposa por 24 h, se agita y se filtra. 6. Sol. pcrica-clorhdrica : La solucin saturada acuosa de cido se mezcla con el cudruple volumen de HCL al 30 %. 7. Sol de cido picrolnico : Solucin saturada en alcohol al 20 % o en agua. 8. S.R de acetato de plomo c (PbAc 2 /z*) 0,5 mol/L 6,5 g de cristales transparentes de acetato de plomo se disuelven en suficiente agua recen hervida para obtener 100 mL. Se preserva en frascos mbar bien cerrados. 9. S.R de acetato de calcio : Acetato de calcio al 10 % en agua destilada. 10. Sol. de cido silicotngstico : 5g de Ac. silicotngstico se disuelven en H 2 SO 4 mol/L csp 100 mL. c(H 2 SO 4 /z*) 6

11. S.R de amonaco : 400 mL de amonaco concentrado al 28 % en suficiente cantidad de agua para 1 L. 12. Almidn indicador : Se tritura 1 g de almidn soluble en 10 mL de agua fra y se vierte lentamente, con agitacin constante, en 200 mL de agua hirviente. Se hierve hasta obtener un lquido transparente; deje sedimentar, filtre y utilice solamente el lquido sobrenadante. 13. Sol de cido tnico : 1 g de tanino (cido tnico) en 8 mL de agua y 1 mL de etanol. Debe prepararse en el momento de usarse. 14. S.R de anilina clorhdrica : 2 g de Cloruro de anilina se diluyen en 65 mL de etanol al 90 % y 35 mL de agua destilada; se aaden 2 mL de HCL concentrado. 15. Sol. de cido crmico : Solucin acuosa al 50 % 16. S.R de Bial : 1 g de orcinol se disuelve en 500 mL de HCl, agregando luego 25 gotas de una solucin de cloruro frrico al 10 %. 17. Sol de bencidina : Solucin alcohlica al 5 % o en cido al 5 %. 18. Sol de bencidina cprica : 10 mL de sol. de acetato de bencidina, se satura con acetato de cobre al 3 %. 19 Sol de Bromuro de potasio : Bromuro de potasio al 20 % en agua.
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20. Reactivo de Baljet : Sol.A: 1 g de cido pcrico (2,4,5-Trinitrofenol) en 100 mL de etanol. Sol.B: 10 g de NaOH en 100 mL de agua. 21. Reactivo de Benedict : Sol.A: 17,3 de citrato de sodio; 10 g de carbonato de sodio anhidro y 60 mL de agua. Sol.B: 1,73 g de CuSO4 5H2O en 15 mL de agua. Se mezclan ambas soluciones y se afora a 100 mL. 22. Reactivo de Bertrand : 5 g de cido silicotngstico cristalizado se disuelven en 100 mL de agua destilada. Para detectar ciertos alcaloides, se acidula la solucin con HCL al 10 %. 23. Reactivo de Burchardat :2 g de cristales de yodo, 4 g de KI y agua destilada csp 100 mL. 24. Buffer de acetato : Acetato de amonio al 10 %; se le aade en el momento de usarse, suficiente cantidad de amonaco al 10 % para llevar el pH a 8,1-8,3. 25. Buffer de Borato : 3,092 g de cido brico y 3,728 g de cloruro de potasio, en 250 mL de agua; se agrega suficiente cantidad de NaOH c(NaOH/z*) 1 mol/L, para llevar el pH a 8,1-8,3. 26. S.R de cloruro de calcio : Solucin acuosa de cloruro de calcio al 10 %. 27. S.R de cloruro de bario : Cloruro de bario al 10 % en agua. 28. S.R de cloruro de hierro : Cloruro frrico al 10 % en agua. 29. S.R de cloruro mercrico : Disuelva 68 g de HgCl2 en agua y diluya hasta 1 L. 30. S.R de cloruro frrico-ferricianuro : Se mezclan partes iguales de cloruro frrico al 0,3 % y ferricianuro de potasio al 0,3 %. Si se utiliza en cromatografa de papel, el cromatograma se sumerge en la mezcla reactiva, luego en HCl diludo y por ltimo en agua; finalmente se seca. 31. Sol. de clorozinc-yodo : 30 g de cloruro de zinc, 5 g de yoduro de potasio, y 1 g de cristales de yodo, se dicuelven en 14 mL de agua. Conservar en frasco mbar. 32. Sol. de cuoxam (cobre amoniacal) : Triturar 0,5 g de carbonato cprico con 10 cc de concentrada de amonaco (d=0.88), lentamente y agitando la mezcla. Sol.

33. Sol. de carbonato de sodio c(CO 3 Na 2 /z*) 2 mol/L : 12,5 g de carbonato de sodio se disuelven en agua destilada, csp 100 mL. 34. Solucin cromo-actica : Fuerte: 1 mL de ac. actico glacial y 100 mL de Dbil: 10 mL de ac. actico glacial; 25 de ac. crmico al 1 %; 65 mL de agua. ac. crmico al 1 %.

35. Solucin de Calberla : 5 mL de glicerina; 10 mL de etanol y 15 mL de agua destilada; se le agregan 2 gotas de fushina bsica en solucin acuosa saturada. 36. S.R de Carr-Price : Cloruro de antimonio en cloroformo, al 20 %. 37. S.R de Dragendorff :Mezclar 21,3 mL de cido ntrico (d:1,42) con suficiente agua destilada para hacer 62 mL. En 20 mL de esta solucin se disuelven 5 g de subnitrato de bismuto. Por separado, se disuelven 31.2 g de yoduro de potasio en 69 mL de agua. Mezclar luego ambas soluciones.
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38. Dragendorff modificado : Sol.A: 17 g de subnitrato de bismuto; 200 g de cido tartrico, en 800 mL de agua. Sol.B: 160 g de yoduro de potasio en 400 mL de agua. 39. S.R de la DNP (2,4-dinitrofenilhidracina) : 0,4 g de DNP se disuelven en 100 mL de HCl c(HCl/z*) 2 mol/L 40. Sol. de dicromato de potasio c(K 2 Cr 2 O 7 /z*) 1mol/L : 49,035 g del reactivo pulverizado y desecado a 120 o C, se disuelven en agua hasta 1 L. 41. S.R del p-dimetilaminobenzaldehido (EHRLICH) : Solucin acuosa al 10 %. 42. S.R de difenilamina sulfrica : Difenilamina disuelta en H 2SO4 concentrado al 1 %. 43. S.R de digitonina : Digitonina al 0,5 % en etanol al 85 %. 44. S.R de Duquenois : Acetaldehido fresco 12 gotas, 1 g de vainillina en 50 mL de alcohol. 45. S.R de Emerson : Es la mezcla de las soluciones de carbonato de aminoantipirina al 5,4 % y ferricianuro de potasio al 5,4 %. 46. S.R de florogucina : Solucin al 1 % en alcohol de 90 %. 47. S.R de Fehling : Sol.A: 7 g de sulfato de cobre se disuelven en 100 mL de agua destilada, conteniendo 0,1 mL de ac. sulfrico. Sol.B: 35 g de tartrato de sodio y potasio y 15,5 g de NaOH disueltos en 100 mL de agua. Se mezclan partes iguales de A y B, en el momento de usarse. 48. S.R de Flin : 100 g de tungstato de sodio disueltos en 750 mL de agua; 20 g de cido fosfomolbdico mezclados con 50 mL de cido fosfrico. Se refluja por 2 horas, flitrar y enrasar a 1 L. 49. S.R de fosfato de sodio : Solucin acuosa al 1 %. 50. S.R de Ferricianuro de potasio : 1 g de ferricianuro de potasio en 10 mL de agua. 51. S.R de Frohde : 1 g de molibdato de sodio en 100 mL de ac. Sulfrico. 52. Solucin de gelatina : 1 % de gelatina en agua. Si se desea prepararle en misma al 50 %, con un 1 % de fenol como conservador. 53. Glicerina yodada : Yoduro de potasio al 3 % en glicerina al 50 %. 54. Solucin de resina de guayaco : 1 % de resina de guayaco en alcohol al 90 %. 55. S.R de Gibbs : 2,6-dicloroquinona cloroimida al 2 % en cloroformo. 56. S.R de Guignard (papel de picrato) : Se sumerge una tira de papel de filtro en solucin saturada de cido pcrico c(c. pcrico/z*) 0,05 mol/L; se deseca y luego se humedece con carbonato de sodio al 10% y se deseca de nuevo. glicerina, se utiliza la sodio al 0,5 %, 4-

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57. Gelatina salina (para sangre) : Gelatina al 3 % se mezcla con una solucin de sal comn (NaCl al 0,7 %, con adicin de 0,6 g de fosfato de sodio para obtener un pH de 7,4. Despus de calentar a unos 35 C, aadir un 5% de sangre desfribrinada. Puede aadirse 0,50 % de Nipagn como conservador. 58. Sol alcoholica de hidrxido de potasio c(KOH/z*) 0,5 mol/L: Se disuelven 28,05 g de hidrxido de potasio en 1000 mL de alcohol. Se titula contra HCl c(HCl/z*) 0,05 mol/L en presencia de anaranjado de metilo. Use tapn de goma. 59. Sol. de hidrxido de potasio c(KOH/z*) l mol/L : Disuelva 14,3 g de KOH en suficiente cantidad de agua destilada para hacer 100 mL. 60. Sol. de hidrxido de sodio : 10 % de NaOH en agua. 61. S.R de Hirsch : Solucin de cido triclorocetico al 10 % 62. Sol. de hidrato de cloral : Solucin acuosa al 66 % 63. Sol. de hidrxido de calcio (agua de cal) : Aproximadamente Ca(OH) 2 al 0,15 % en agua. 64. S.R de Kedde (modificacin de Bush y Taylor) : cido 3,5-dinitrobenzico al 2 % en metanol. KOH al 5,7 % en agua. 65. Solucin de Lugol : Yodo al 1 % con un 2 % de KI, en agua. 66. S.R de Legal : Nitroprusiato de sodio al 5 % en agua; se sigue con 3 gotas de NaOH c(NaOH/z*) 2 mol/L. 67. S.R de Liebermann : 1 mL de ac. sulfrico concentrado se mezclan con 20 mL de anhdrido actico y 50 mL de cloroformo. 68. S.R de Marquis : cido sulfrico, seguido de 1 gota de formaldehido al 40 %. 69. S.R de Mayer : 1,258 g de cloruro mercrico se disuelven en 60 mL de agua. Por otra parte se disuelven 5 g de yoduro de potasio en 20 mL de agua, se mezclan ambas soluciones y se enrasa a 100 mL con agua. 70. S.R de Millin : Se disuelven 6 mL de mercurio en 54 mL de cido ntrico fumante (d=1,52), sin calentar y diluyendo la solucin con un volumen igual de agua. 71. S.R de Marme : Disolver 5 g de yoduro de cadmio y 10 g de yoduro de potasio en 100 mL de agua. 72. S.R de Mandelin : Disolver 1 g de vanadato de amonio en 200 mL de ac. (d=1,843).Djese sedimentar y filtre. Preparar al momeno de usarse. 73. S.R de Molisch : 15 % de -naftol en alcohol de 95 %. Se aaden 3 concentrado. 74. Sol. de nitrato de plata : Solucin acuosa al 10 %.
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sulfrico concentrado

gotas de ac. sulfrico

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75. S.R de Nesler : Se disuelven 3,5 g de yoduro de potasio y 1,25 g de cloruro mercrico en 80 mL de agua, aadiendo una solucin saturada en fro de cloruro mercrico, con agitacin constante hasta que permanezca un precipitado ligeramente rojizo y luego disolviendo 12 g de hidrxido de sodio. Despus de aadir algunos mL ms de la solucin de cloruro mercrico, el volumen se lleva a 100 mL con agua. 76. S.R de p-nitrofenilhidracina : Solucin del reactivo, saturada en cido actico al 15 %. 77. Sol. de permanganato de potasio c(KMnO 4 /z*) 1 mol/L : Disolver 3,3 g de KMnO 4 en un litro de agua destilada. Se hierve por 15 minutos; se cubre el recipiente y se deja en reposo por dos das, para luego filtrar por asbesto. 78. Sol. de Picrato de sodio : 0,5 g de cido pcrico y 5 g de carbonato de sodio. Agua csp 100 mL. 79. S.R de Raymond : Solucin al 1 % de m-dinitrobenceno en etanol. 80. S.R de rojo escarlata : Una solucin al 0,5 % en hidrato de cloral al 66 %, amonaco. 81. S.R de Sanin : 20 g de trtaro emtico, 20 g de cloruro de sodio, bitartrato de sodio y potasio, todo disuelto en agua csp 1000 mL. se aaden gotas de

40 de acetato de sodio, 50 de

82. S.R de Sonneschein : 17,5 g de cido molbdico, 13,5 g de carbonato de sodio y fosfato disdico al 5 %, 30 mL. 83. S.R de Seliwanoff : 0,30 g de resorcinol en 100 mL de HCL al 12,5 %. 84. S.R de Shonteten : Solucin de borato de sodio 1:20, en agua. 85. Solucin de subacetato de plomo : Triturar 14 g de PbO hasta consistencia homognea, con 10 mL de agua; transfiera esta pasta a un frasco, usando otros 10 mL de agua, para enjuagar. Disuelva 22 g de acetato de plomo en 70 mL de agua y adase esta solucin a la mezcla. Agtese vigorosamente durante 5 min. y luego deje reposar por 7 das, agitando eventualmente. Fltrese y adase por el filtro agua hervida csp 100 mL. 86. Solucin reveladora para cromatografa de carotenoides : Bencina: 60 partes, benceno: 35 partes, cloroformo: 1,25 partes, isopropanol:0,06 partes y acetona 0,55 partes. 87. S.R de sulfato mercrico : Solucin acuosa al 1%. 88. S.R de sulfato de magnesio : Solucin acuosa al 1 %. 89. Solucin salina normal : Cloruro de sodio al 0,9 % en agua. 90. S.R de Sudn III : Solucin al 6 % en partes iguales de alcohol y glicerina. 91. Sol. de sulfato de anilina : Solucin al 2 % en cido sulfrico al 0,5 %.

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92. Sol. para la Taleoquinina : 1 mL de agua de bromo, adicionndose gotas de presencia de una sol. de quinina al 1:200.

amonaco, en

93. S.R de Tartrato ferroso : 1 g de sulfato ferroso anhidro se disuelve en 1 L de agua, conjuntamente con 5 g de tartrato de sodio y potasio. 94. S.R de Tollens : A 2 mL de nitrato de plata al 5 % se le aade 1 gota de NaOH al 10 %. Se agrega hidrxido de amonio hasta redisolver el precipitado. 95. S.R de Vainillina : Solucin alcohlica al 1 %. 96. S.R de Vainillina clorhdrica (Reactivo de Rosenthaler) : 1 g de vainillina en 10 mL de HCL concentrado. 97. S.R de Vainillina sulfrica : 0,5 de vainillina disueltos en 8 mL de etanol y 2 mL de ac. sulfrico concentrado. 98. S.R de Valser : Agrege una solucin de 10 g de yoduro de potasio en suficiente agua destilada para hacer 100 mL, a 14 g de yoduro mercrico, hata la disolucin de este. Filtre y deseche el exceso. 99. S.R de Van UrK : p-dimetilaminobenzaldehido al 0,2 % en cido sulfrico al 65 %. Se le aaden 0,2 mL de Sol. de cloruro frrico al 5 %, por cada 100 mL de reactivo. 100. S.R de Vrins : A una solucin de 10 partes de molibdato de amonio en 100 p. de agua, se aaden 60 p. de cido ntrico puro (d: 1,15). Se digiere algunas horas al bdm y se aade a la solucin enfriada, cido fosfrico al 25 %, hasta que no se forme precipitado. Se lava el precipitado de fosfomolibdato, se mezcla con agua regia en un matrz de vidrio y se hierve para expulsar el amonaco. Se evapora el lquido a sequedad, se disuelve el residuo en ac. ntrico diluido (10 %) y se filtra. 101. S.R Verde de bromocresol : A una solucin al 0,3 % del colorante en metanol al 80 % se le aaden 8 gotas de NaOH al 30 % por cada 100 mL. 102. S.R de Vitali : HNO3 conc. (d=1,40) una gota; evaporar a sequedad, enfriar. Repetir. Luego agrgar gotas de KOH al 10 % en metanol, recien preparado. 103. S.R de Wagner : Se disuelven 2 g de yodo y 2 g de yoduro de potasio en un pequeo volumen de agua, y luego llevando el enrase a 100 mL, con agua . 104. S.R de Wassacky : 2 g de p-dimetilaminobenzaldehido, con 6 g de cido sulfrico conc. y 0,4 mL de agua. 105. S.R de Xantidrol : 0,5 mL de solucin de xantidrol, se la aaden a 1 mL de ac. clorhdrico fumante y se completa a 100 mL con ac. actico de 96 %. 106. S.R de Yoduro de potasio : 16,5 g de KI se disuelven en suficiente agua para obtener 100 mL. 107. Sol. de Zincuranilo : 10 g de acetato de uranilo se disuelven en 6 mL de ac. actico al 30 % bajo calentamiento, y se lleva a 50 mL con agua (solucin A). 30 g de acetato de Zinc se mezclan con 3 mL de ac. actico al 30 % y se diluye con agua a 50 mL (solucin B). Se mezclan A y B en caliente,
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formndose un lquido transparente al cual se le agrega una pizca de sal y se filtra despus de reposo de 24 horas. 108. Indigo carmn (Indicador) : 3 g de indicador en sol. de cido sulfrico (25 mL en 500 mL de agua destilada)csp 500 mL. 109. S.R gelatina : Embeber 25 mL de gelatina durante 1 h en sol. saturada de ClNa, calentar hasta disolucin de gelatina, enfrie, diluya con solucin no saturada de ClNa hasta 1L. 110. Sol. acidificada de cloruro de sodio : Acidifique 975 mL de sol. saturada de CLNa con 25 mL de cido sulfrico. ----------------------------------------------------------------------------------------------------Nota: Para la preparacin de estas soluciones reactivos, algunas publicaciones pueden sugerir ciertas variaciones, sin que por ello se introduzcan cambios sustanciales. Los porcentajes anotados se entienden que son en peso/volumen, excepto para los alcoholes donde estn en v/v. -----------------------------------------------------------------------------------------------------

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