BIOLOGA. Tema 6a. EL DNA Y LOS GENES (Captulo 11 de Vida al 14 de Fundamentos de Biologa Freeman)) DNA.

- Cadena de doble hlice compuesta por zcares y grupos fosfato. Es componente importante del ncleo y los cromosomas. Contiene la informacin gentica para la sntesis de protenas. Que el DNA es el material gentico fue demostrado en 1920 a travs de una lnea experimental sobre bacterias y sobre virus bacterianos. El mdico ingls Griffith, estudiando el comportamiento de la bacteria Streptococus pneumoniae para desarrollar una vacuna contra ella, se encontr con algo que no buscaba y que fue la transformacin o alteracin gentica de la bacteria, que una vez muerta se converta en virulenta al mezclarse con otra no virulenta. A partir de ah Avery identific el denominado Principio Transformante. Si el DNA era destrudo en las muestras, la actividad transformante se perda, por lo que Avery, McLeod y McCarty aislaron el DNA casi puro a partir de una muestra de Principio Transformante Pneumoccico y mostraron que era l el que causaba la transformacin bacteriana. Ellos publicaron el DNA como el material gentico de las clulas. - Los experimentos de replicacin viral confirman que el DNA es el material gentico. El experimento se realiz con un virus que infectaba a las bacterias. Lo realiz HersheyChase; ese virus consiste en DNA empaquetado en una protena; demostraron que el DNA pasaba a la bacteria y no a la protena. Debido a que el DNA era transportado en el virus de una generacin a otra, concluyeron que la informacin hereditaria de los virus est contenida en el DNA. ESTRUCTURA DEL DNA Hacia 1950 la cristalografa de rayos X proporcion indicios sobre la estructura del DNA, revelando la naturaleza helicoidal (doble hlice dextrgira) bsica de la estructura del DNA. El DNA es un polmero de nucletidos. Cada nucletido consiste en una molcula de azcar desoxiribosa, un grupo fosfato y una base nitrogenada: purina (adenina, guanina) o pirimidina (citosina, timina). En casi todo el DNA se mantiene que la cantidad de adenina es igual a la de timina y la cantidad de guanina a la de citosina; la cantidad de purinas se iguala a la de pirimidinas. Watson y Crack describieron la doble hlice: la molcula de DNA es helicoidal (cilndricamente espiralada). Concluyeron que en la molcula existen dos cadenas de polinucletidos y corren en direcciones opuestas (son antiparalelas) Caractersticas que definen la estructura del DNA: Hlice de doble cadena Dimetro uniforme Es dextrgira

Es antiparalela (las dos cadenas corren en sentidos opuestos.

Las dos cadenas se unen por puentes de hidrgeno. Adenina se une siempre a timina por 2 puentes de H y guanina se une siempre a citosina por 3 puentes de H. El material gentico: - Debe ser capaz de almacenar la informacin gentica del organismo - Debe ser sensible a mutaciones (cambios permanentes en la informacin) - Debe ser replicado con precisin en el ciclo de divisin celular - Debe ser expresado como un fenotipo. En lo anterior la estructura de doble hlice es esencial para su funcin. El esqueleto azcar-fosfato se enrolla en la parte externa, las bases nitrogenadas en la interna (fig. 11.6 de Vida y 14.6 y 14.7 del Freeman) REPLICACIN DEL DNA. En un principio el DNA se replic en tubo de ensayo en presencia de una enzima (DNA polimerasa) y 4 desoxiribonucletidos trifosfatos. Las dos cadenas de la doble hlice sirven de molde par la nueva cadena. Cmo se replica la molcula?: Replicacin semiconservativa.- cada cadena madre sirve de molde para una nueva cadena; los dos DNA nuevos poseen una cadena nueva y una vieja. Replicacin conservativa.- la doble hlice espiral sirve de molde pero no contribuye a la nueva hlice Replicacin dispersiva.- Los fragmentos de la molcula DNA original sirven de molde para ensamblar dos molculas cada una de las cuales contiene parte nuevas y viejas aleatoriamente.

Meselson y Sthal demostraron que la replicacin del DNA es semiconservativa; utilizaron como marcador un istopo pesado de Nitrgeno15 y disolucin en cloruro de cesio y por centrifugacin separaron el DNA ms denso del ms liviano (fig. 11.10 de Vida y 14.10 a 14.12 del Freeman) MECANISMO DE REPLICACION DEL DNA El DNA se replica en forma semiconservativa y para esto se requiere: El DNA debe actuar como molde para el apareamiento de las bases Deben estar presentes los cuatro desoxiribonucleidos trifosfato ATP, GTP, CTP y TTP Se precisa un enzima como acercador de los sustratos al molde y como catalizador, el DNA polimerasa Se precisa una fuente de energa qumica. Y un origen de replicacin

La replicacin tiene lugar en dos pasos: El DNA se desnaturaliza (desenrolla) y los nucletidos nuevos se ligan a cada cadena naciente.. Los nucletidos se agregan siempre al grupo OH en el extremo 3 (fig. 11.11 de Vida y 14.11 a 14.13 del Freeman) El DNA es enhebrado mediante un complejo de replicacin que se trata de un complejo proteico enorme que cataliza las reacciones. Origen de replicacin.- es una secuencia de nucletidos que tienen todos los cromosomas y es reconocido como tal por la enzima ADN polimerasa. Horquillas de replicacin.- Se denominan as las dos direcciones en que se replica el DNA desde el origen. El DNA se replica en sentidos opuestos a partir del origen. La DNA polimerasa accede a los nucletidos y coloca los complementarios. El complejo de replicacin est estacionario y el DNA se mueve enhebrndose a travs de l como una cadena simple y saliendo de l como una cadena doble. Los complejos de replicacin contienen varias proteinas con diferentes funciones: Tabla 4.1 y fig. 14.14 del Freeman - La Helicasa DNA abre la doble hlice (utiliza la energa de la hidrlisis del ATP) - Proteinas que se unen a la cadena individual (mantienen separadas las dos cadenas) - La RNA Primasa fabrica la cadena para iniciar la replicacin (es el cebador) - La DNA Polimerasa III agrega nucletidos complementarios y prolonga las nuevas cadenas. - La DNA Ligasa sella las roturas en el esqueleto azcar-fosfato y da una cadena continua. Cadena Lider.- Es la cadena hija; se prolonga con nucletidos desde el extremo 5 (extremo con un fosfolpido) hacia el extremo 3 (extremo con un OH- libre) Crece continuamente y hacia adelante. Cadena retardada.- Es la segunda cadena hija. Es sintetizada a partir de los fragmentos de Okazaki (trabaja por tramos discontinuos y hacia atrs). Estos fragmentos discontinuos son sintetizados como en la cadena Lider con agregacin de nucletidos. Esta cadena crece en tramos cortos y hacia atrs por fragmentos. Cada tramo requiere su propio cebador. Al final la DNA Ligasa unir los fragmentos de Okazaki para tener una hebra completa y continua de DNA. REPARACION DE LOS ERRORES DE REPLICACIN El DNA debe ser replicado y mantenido con fidelidad ya que la transmisin de la informacin gentica est en juego y en riesgo. La replicacin no es perfectamente precisa estando enfrentada a daos por agentes ambientales. Los mecanismos de reparacin del DNA son preservadores de la vida. Hay errores en el ensamblaje de cadenas polinucletidas, pero las clulas disponen de:

Mecanismos de lectura y correccin de prueba que corrige errores asegurando que la replicacin del DNA sea precisa. La realiza la propia ADN Polimerasa. Mecanismo de reparacin de apareamientos incorrectos. La realiza la ADN Polimerasa Mecanismo de reparacin por escisin que elimina las bases anormales y las reemplaza por bases funcionales

El mecanismo de lectura lo realiza la ADN polimerasa cada vez que se agrega un nucletido a la cadena. Si detecta un apareamiento incorrecto, elimina el nucletido e intenta una nueva colocacin. Una vez que el DNA ha sido replicado, el mecanismo de reparacin de apareamientos incorrectos examina la molcula recin replicada. Si este mecanismo falla, la secuencia del DNA se altera (en esto se basa un tipo de cncer de clon) El organismo depende de los mecanismos de reparacin que lo hacen resistente a enfermedades; as el mal funcionamiento de estos mecanismos supone al cncer de piel cuando no se reparan los daos causados por la radiacin ultravioleta de la luz solar. La reparacin del DNA requiere energa. Estos procesos de reparacin son ineficientes, gastan energa; a la clula le cuesta energa pero es necesario mantener esos sistemas. APLICACIONES PRACTICAS DE LA REPLICACION DEL DNA A partir de los principios que subyacen a la replicacin del DNA se han desarrollado dos tcnicas de laboratorio para analizar genes y genomas. a). Se puede determinar la secuencia de nucletidos del DNA b). La reaccin en cadena de la Polimerasa (PCR) hace mltiples copias del DNA en laboratorio con interesantes aplicaciones en medicina. En un tubo de ensayo una regin del DNA es copiada muchas veces por la polimerasa; es un proceso cclico. Aplicacin en produccin de proteinas.