CURSO 2010/2011

UNED

VIRUS

Grado en Ciencias Ambientales. Biologa I | Jos Luis Martnez

GRADO EN CIENCIAS AMBIENTALES. UNED BIOLOGA I VIRUS

NDICE
1. ESTRUCTURA Y COMPOSICIN 2. CICLO BIOLGICO 3. VIRUS: PATOGENIA Y UTILIDAD 4. OTRAS FORMAS INFECCIOSAS ACELULARES

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Estructura y composicin o Material gentico: ARN/ADN o Cpsida o Envoltura o Maquinaria enzimtica o Tipos de virus segn su material gentico Virus ARN Virus ADN

Ciclo biolgico o Fases o Estrategias de replicacin: dos formas de vida; lisis y lisogenia Virus: patogenia y utilidad o Portadores de enfermedades o Potenciales armas biolgicas o Usos en investigacin Otras formas infecciosas acelulares o Viroides: molculas de ARN infecciosas o Priones: protenas alteradas

Introduccin
Antes de descubrirse los organismos acelulares a los que se refiere el trmino virus esta palabra latina, cuya traduccin es toxina o veneno, ya se empleaba. Bsicamente los virus son formas acelulares microscpicas constituidas por material gentico, de tipo ADN o ARN, protegido por una cpsida proteica, que puede albergar adems alguna enzima para llevar a cabo alguna funcin metablica especfica y que se reproduce utilizando el metabolismo de clulas vivas especficas. Sin una clula los virus no pueden realizar su ciclo vital ya que no son capaces de sintetizar protenas, al carecer de ribosomas, ni generar o almacenar energa, al carecer de orgnulos para ello, o producir elementos estructurales. Por lo tanto deben tomar todo de la clula en la que se encuentren, lo que supone que deben tomar el control sobre su metabolismo. En 1892 el bilogo ruso Dimitri Ivanovsky, empleando un filtro Chamberland desarrollado para capturar las bacterias de una solucin, estudi el que posteriormente se conocera como virus del mosaico del tabaco. Sus experimentos demostraron que tras filtrar un extracto de hoja procedente de una planta infectada la solucin resultante poda producir la enfermedad, descartando as los agentes bacterianos. Esto le llev a sugerir que la infeccin se deba una toxina producida por bacterias. Posteriormente, en 1898, el microbilogo holands Martin Beijerinck repiti los experimentos demostrando que el agente solo se multiplicaba en clulas que se dividan pero no consigui aislar las partculas correspondientes, denominando al conjunto como solucin viva contagiosa. En 1899 Loeffler and Frosch demostraron que el agente poda replicarse al pasar el agente de la fiebre aftosa, el aftovirus, a travs del mismo filtro y descartar que fuera una toxina por su escasa concentracin. Adems de estos virus a inicios del siglo XX se describieron tambin virus bacterianos o bacterifagos. Al aadirse a una placa de agar donde crecan bacterias aparecan halos de bacterias muertas que permitan contabilizar el nmero de virus que tena la solucin original. No ser hasta los aos 30 cuando

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se consiga la primera imagen de un virus gracias a la aparicin del microscopio electrnico. En estos aos se realiza tambin la descripcin de los componentes de los virus, protenas y cidos nucleicos, siendo el virus del mosaico del tabaco el primero en ser cristalizado para estudiar su estructura. La segunda mitad del siglo XX supone una poca dorada para la virologa con el descubrimiento de los distintos tipos de virus y su caracterizacin, tanto en su estructura como en su forma de reproduccin.

1. ESTRUCTURA Y COMPOSICIN
Los virus estructuras simples y se constituyen, en su forma ms bsica, por un cido nucleico y una o ms protenas, aunque hay algunos que presentan tambin lpidos, hidratos de carbono, glicoprotenas, etc. El cido nucleico puede ser de cualquier tipo (RNA, DNA ambos mono o bicatenarios) siendo una de las caractersticas que sirven para diferenciar a los distintos tipos de virus. Las protenas forman una cubierta que encapsula al cido nucleico y algunos virus presentan adems una envuelta de lpidos y protenas. En su forma infectiva, fuera de la clula, a una partcula vrica se la denomina virin y contiene al menos una protena sintetizada por la informacin que contienen sus genes. El tamao de los viriones oscila entre los 0.02 y los 0.3 m, o lo que es lo mismo, entre los 20 y los 300 nanmetros. Los virus generalmente se clasifican de acuerdo con los organismos que infectan diferencindose as virus animales, vegetales y bacterianos. Los virus vegetales no son capaces de penetrar la pared vegetal por lo que se introducen en las clulas gracias a insectos y otros organismos que se alimentan de las plantas. Por su parte, ciertos virus bacterianos han desarrollado estructuras para realizar la infeccin como por ejemplo una cola que les permite unirse a la superficie de la bacteria gracias a ganchos proteicos. Esta cola les sirve tambin para inyectar su cido nucleico en el interior de la clula. Las familias vricas se diferencian principalmente de acuerdo a tres criterios: el tipo y el tamao de cido nucleico, la forma y el tamao de la cpsida y la presencia o no de envuelta lipdica. A nivel morfolgico entre los virus hay dos formas especialmente abundantes, el cilindro y la esfera. El primero se debe a una disposicin linear del cido nucleico alrededor del cual se sitan las subunidades proteicas mientras que la esfera en realidad corresponde a un polgono de veinte caras, el icosaedro. De esta manera, tomando la cpsida y la envuelta como referencia podemos diferenciar morfologa: Icosadrica.- virus polidricos. Las protenas que forman la cpsida se distribuyen irregularmente. A cada una de las subunidades que forman la cpsida se le denomina capsmero y pueden ser todas iguales o no. Es una estructura tpica de adenovirus. En los vrtices hay glicoprotenas mientras que el resto de capsmeros son protenas. Helicoidal.- solo tiene un tipo de capsmero en el cual hay una muesca que es donde se aloja el cido nucleico dispuesto de manera helicoidal. Con envoltura membranosa - polidricos envueltos.- para diferenciarlos se puede llamar a los dos tipos anteriores como virus desnudos y a estos envueltos. La membrana que llevan realmente no es del virus y tampoco es igual a la de la clula aunque procede de ella. En algunos casos, como puedan ser los fagos, es posible observar la combinacin de estas estructuras bsicas para dar lugar a viriones con elementos helicoidales y elementos polidricos. Todas estas molculas que rodean al virus son antgenos y su utilidad a nivel diagnstico es mayor que en bacterias porque los virus son ms difciles de identificar y clasificar. Desde el punto de vista inmunolgico los virus son distintos aunque tengan la misma morfologa.

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Material gentico: DNA/RNA

Los genomas vricos son de pequeo tamao ya que, normalmente, solo portan aquella informacin necesaria para las funciones que no pueden adaptar de la clula hospedadora (tabla 1). El cido nucleico codifica la informacin necesaria para la sntesis de las protenas que precisa el virus. Puede ser tanto mono como bicatenario y tanto RNA como DNA, algunos virus presentan un cido nucleico circular pero en la gran mayora es lineal. En cualquier caso, el flujo de la informacin siempre se produce desde el cido nucleico hacia las protenas y los virus emplean la maquinaria celular para expresar su informacin por lo que es obligado la produccin de mRNAs que puedan ser traducidos en los ribosomas.
Virus Parvovirus H-1 X174 SV40 Poliovirus Virus del mosaico de la coliflor Virus del mosaico del caupi Reovirus de tipo 3 Bacterifago lambda Virus del herpes simple tipo 1 Bacterifago T4 Citomegalovirus humano Hospedador Animales Bacterias Animales Animales Plantas DNA o RNA DNA DNA DNA RNA DNA Mono o bicatenario Monocatenario Monocatenario Bicatenario Monocatenario Bicatenario Estructura Lineal Circular Circular Lineal Circular N de molculas 1 1 1 1 1 Tamao 5176 5386 5243 7433 8025

Plantas Animales Bacterias Animales Bacterias Animales

RNA RNA DNA DNA DNA DNA

Monocatenario Bicatenario Bicatenario Bicatenario Bicatenario Bicatenario

Lineal Lineal Lineal Lineal Lineal Lineal

2 diferentes 10 diferentes 1 1 1 1

9370 23549 48514 152260 168903 229351

Tabla 1.- Ejemplos de genomas vricos

Los virus que presentan RNA monocatenario son los ms abundantes siendo posible diferenciar dos tipos si la hebra que portan es la que se traduce, por lo que ese mismo RNA acta como RNA mensajero, o si precisan generar la hebra complementaria por accin de una enzima que forma parte de su estructura, la transcriptasa (una RNA polimerasa dependiente de RNA). En el primer caso se dice que el RNA es + mientras que en el segundo se dice que el RNA es (figura 1).
Clase vrica Virus de DNA Virus de RNA Virus RNA DNA

Genoma vrico

ssDNA

dsDNA

ssRNA

dsRNA

ssRNA (retrovirus)

dsDNA (hepadnaviru)

Figura 1.- Relacin entre clases de virus y los posibles genomas que portan. Ss significa hebra simple y ds hebra doble.

Cpsida
La cpsida es la cubierta proteica que envuelve al cido nucleico, denominndose nucleocpsida cuando contiene el cido nucleico. Se compone de protenas que se organizan en subunidades denominadas capsmeros, asocindose estrechamente con el cido nucleico y reflejando su configuracin,

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bien un cilindro o bien una esfera. La cpsida tiene tres funciones: protege al cido nucleico de la digestin enzimtica, contiene sitios de unin en su superficie que permiten al virin anclarse a la clula husped y proporciona las protenas que permiten al virion penetrar en la membrana de la clula husped o inyectar el cido nucleico en el citoplasma. La informacin para el correcto plegamiento y la agregacin de las protenas en capsmeros se encuentra en la estructura de las propias protenas por lo que el proceso de ensamblaje se denomina autoensamblaje. A
cido nucleico

B
cido nucleico

Cpsida

Cpsida o cabeza Protena

Protena

Envoltura

Cola Fibras de anclaje

Placa de la cola

Figura 2.- En A se puede observar el esquema de un bacterifago con las distintas partes que contiene. En algunos casos portan protenas, generalmente enzimas, y el cido nucleico puede variar segn el tipo de virus. En B se puede ver el esquema de un virus eucariota con envoltura, estructura que no aparece en todos los virus eucariotas. Las protenas que portan normalmente son enzimas y el cido nucleico puede ser variado.

Envoltura
Hay muchos virus que poseen una envuelta glicoproteica que envuelve a la nucleocpsida. Se compone de una bicapa de lpidos en las que se dispersan las protenas y puede contener material de la membrana de la clula hospedadora as como procedente del virus. Las molculas de lpidos se consiguen de la membrana celular durante la salida de los virus pero este sustituye las protenas de la misma por sus protenas generando una estructura hbrida. Ciertos virus adems presentan espculas de glicoprotenas que les ayudan a unirse a superficies celulares especficas. La envoltura se adquiere cuando el virus sale de la clula que parasita. Aunque deriva de las membranas de la clula, no tiene porque proceder de la membrana plasmtica ya que hay virus que se reproducen incluso a nivel nuclear. Generalmente la adquisicin de la envoltura se produce durante la gemacin del virus que, en estos casos, no suele llevar a la lisis de la clula. La gemacin se produce por los lugares donde hay insertadas molculas del virus. Esto tambin puede darse en el ncleo pasando por el retculo endoplsmico rugoso hasta el exterior (geman por la membrana nuclear).

Maquinaria enzimtica
A menudo los virus precisan de enzimas que portan en los viriones porque no son parte de las enzimas de la clula. A menudo son enzimas necesarias en los primeros momentos, bien en la entrada del virus en la clula, bien en los momentos iniciales de replicacin del material gentica o bien para anular algn tipo de mecanismo celular de defensa y poder as tomar el control del metabolismo de la clula. Por

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ejemplo, en el caso de ciertos virus de RNA poseen una transcriptasa reversa que les permite retrotranscribir su RNA a DNA. En ciertos virus bacterianos tambin es posible encontrar lisozimas, que les permiten digerir la pared bacteriana e inyectar as sus cidos nucleicos. Pero tambin pueden ser enzimas necesarias para la liberacin de las partculas vricas, como ocurre con las neuraminidasas que degradan glucoproteinas y glucolpidos de la membrana plasmtica de clulas del tejido conectivo del hospedador.

Tipos de virus segn su material gentico

El descubrimiento de la transcriptasa inversa de los retrovirus en la dcada de 1970 llev a que se realizara una clasificacin de los virus de acuerdo a los cidos nucleicos que portaban dando una visin global de las posibilidades que se pueden dar en estos organismos. El sistema Baltimore de clasificacin de los virus se basa en los mecanismos de replicacin del genoma viral (figura 2). Todos los virus deben producir a partir de sus genomas una hebra de mRNA que se pueda traducir, el denominado mRNA +, para dar lugar a las protenas que necesitan y replicarse. La forma en que se obtiene este mRNA + difiere segn la familia de virus, pero se pueden agrupar en siete grupos fundamentales segn la estrategia bsica que siguen. Por convencin se acepta que la hebra de DNA codificante escrita en la direccin 5 3 es el sentido +, y la secuencia de mRNA tambin se escribe en sentido +. De acuerdo con esto tenemos: Tipo I.- Virus con doble hebra de DNA (Adenoviruses, Herpesviruses, Poxviruses, etc); algunos se replica en el ncleo y otros en el citoplasma.
Virus dsDNA () Clase I Clase VII Virus ssDNA (+) Clase II Virus dsRNA () Clase III Virus ssRNA (+) Clase IV Virus ssRNA (-) Clase V Retrovirus ssRNA (+) Clase VI

Sntesis de la otra cadena

Intermediario dsDNA Transcripcin de la cadena Transcripcin de la cadena Usado directamente como mRNA Transcripcin de la cadena Transcripcin inversa

mRNA (+)
Replicacin del genoma: Clase II Clase VII semiconservativa clsica se desecha la cadena (-) transcripcin seguida de transcripcin inversa Clase I semiconservativa clsica Replicacin genoma:

mRNA (+)
del Clase III Clase IV Clase V Clase VI

Transcripcin de la cadena -

Intermediario dsDNA

Sintetiza ssRNA (+) y transcribe desde este para dar la pareja ssRNA (-) Sintetiza ssRNA (-) y transcribe desde este para dar el genoma ssRNA (+) Sintetiza ssRNA (+) y transcribe desde este para dar el genoma ssRNA (-) Sintetiza genoma de ssRNA (+) por transcripcin a partir de la cadena (-) del dsDNA

VIRUS DE DNA

VIRUS DE RNA

Figura 3.- Formacin del genoma en virus de DNA y virus de RNA.

Tipo II.- Virus con hebra simple de DNA + (Parvoviruses); la replicacin se produce en el ncleo e implica la formacin de una hebra en sentido -, que sirve de molde para la sntesis del mRNA + y la sntesis de DNA.

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Tipo III.- Virus con doble hebra de RNA (Reoviruses, Birnaviruses); tienen genomas segmentados y cada segmento se transcribe separadamente para dar lugar a mRNAs monocistrnicos (que llevan informacin para una sola protena). Tipo IV.- Virus con hebra simple de RNA + (Picornaviruses, Togaviruses, etc); pueden ser mRNAs policistrnicos y, por tanto, a partir del mismo RNA se produce la traduccin en un producto poliproteico que posteriormente se procesa para dar las protenas maduras. En este caso el RNA mismo puede ser infectivo. Otra posibilidad es que se produzca una transcripcin compleja por la que tras dos o ms rondas de traduccin se hace necesario producir ms RNA genmico para continuar con la reproduccin del virus. Tipo V.- Virus con hebra simple de RNA - (Orthomyxoviruses, Rhabdoviruses, etc); el virin debe aportar una polimerasa que replique el RNA que lleva. Pueden ser segmentados y no segmentados. Tipo VI.- Virus con hebra simple de RNA + con un intermediario de DNA en su ciclo vital (Retroviruses); el genoma es + pero es diploide y no sirve para obtener el mRNA sino que es el molde para obtener el DNA por retrotranscripcin. Tipo VII.- Virus con doble hebra de DNA y con un intermediario de RNA (Hepadnaviruses); estos virus tambin realizan la retrotranscripcin pero a diferencia de los retrovirus lo hacen en el interior de la partcula vrica durante la maduracin.

2. CICLO BIOLGICO
Para que un virus pueda replicarse debe introducirse en una clula e inducirla a sintetizar los componentes que necesita. Posteriormente estos componentes se ensamblarn para dar lugar a las partculas vricas que saldrn de la clula y continuarn con el ciclo vital. Aunque existen virus muy diversos, encontramos dos tipos bsicos de infeccin. El mecanismo ms comn es infectar a la clula e inmediatamente replicarse para dar lugar a nuevos virus. Sin embargo, algunos virus son capaces de detener este ciclo y entrar en un estado latente durante cierto tiempo. En ambos casos se requiere que una parte o la totalidad de la partcula vrica entre en la clula hospedadora. Para que se produzca la replicacin vrica deben suceder una serie de eventos que se pueden dividir en cinco etapas: unin a la clula hospedadora, entrada en la misma, sntesis de los componentes del virus, ensamblaje de esos componentes y liberacin de las partculas vricas.

Fases
Fijacin de la clula hospedadora: esta unin tiene gran especificidad y se debe al reconocimiento por parte del virin, gracias a protenas que presenta en su cpsida, de receptores de la membrana plasmtica de la clula. Estos receptores son protenas, hidratos de carbono, lpidos, glucoprotenas o lipoprotenas que tienen funciones normales en la clula. De esta forma, solo si se encuentran presentes el virus podr entrar por lo que si la clula los presenta mutados o carece de ellos no habr infeccin. Por otro lado, es posible que el virus mute y no pueda entrar en las clulas con los receptores normales pero si en el caso de que sufran mutaciones. De esta forma el rango de posibles hospedadores de un virus depende de la disponibilidad del receptor que el virus tiene que reconocer para entrar. En el caso de organismos multicelulares el hecho de que las clulas de los distintos tejidos y/u rganos expresen receptores diferentes en sus

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superficies explica que los virus afecten solo a ciertos tejidos u rganos y no a todas las clulas del organismo. A
Figura 4.- Fases del ciclo de reproduccin de un virus. En A se muestran las distintas etapas en la reproduccin de un virus en relacin a la sntesis de los componentes que posee en relacin al tiempo y la cantidad de virus que se pueden encontrar. En B se muestran las distintas etapas de la reproduccin vrica empezando por la entrada, continuando por la sntesis de componentes y finalizando con el ensamblaje y la liberacin al medio.

Recuento relativo de virus

Eclipse

Maduracin

Enzimas tempranas

Protenas de cubierta Ensamblaje y liberacin

cido nucleico Adicin del virus Periodo de latencia

Tiempo

B
Unin (adsorcin) cido nucleico Virin Clula Penetracin Sntesis de cido nucleico y protenas

Liberacin

Ensamblaje y empaquetamiento

Viriones

Penetracin y descapsidacin: en esta fase el virin completo o una parte de l penetran en el interior de la clula hospedadora. La unin del virus a la clula hospedadora produce cambios en ambos que permiten su entrada o, al menos, la de su cido nucleico. La entrada del virus no supone que se pueda replicar ya que si la informacin que porta no puede ser leda entonces no se da la replicacin. Existen distintas estrategias para realizar la penetracin. En el caso de los virus animales, algunos virus envueltos pierden su envuelta en la membrana plasmtica y liberan el contenido de los viriones en el citoplasma pero la mayora de ellos entran en la clula por endocitosis. Una vez en el interior deben perder la envuelta y/o la cpsida para liberar su genoma. En el caso de los virus envueltos algunos pierden la cubierta en el citoplasma pero otros lo hacen en la membrana nuclear. Las clulas que presentan pared celular, como bacterias o clulas vegetales, presentan mecanismos diferentes. El caso ms complejo se ha encontrado en bacterias con el bacterifago T4 (figura 10.10 del brock). Es un virus con cabeza icosadrica y cola helicoidal que presenta tambin una serie de fibras que salen de la cola. El primer paso es el contacto de sus fibras con los polisacridos de la bacteria, lo que provoca que se retraigan y el centro de la cola entre en contacto con la pared bacteriana. Con una

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enzima, similar a la lisozima, produce un pequeo poro y contrae su cola inyectando su material gentico en el citoplasma. Debido a que las clulas vegetales presentan lignina, celulosa, etc los virus se encuentran condicionados por la rotura de la pared para poder entrar, algo que generalmente ocurre por la accin de un vector animal o por factores traumticos como daos durante la cosecha o factores meteorolgicos. Para que el virus pueda multiplicarse su genoma debe ser accesible a las enzimas implicadas en la replicacin y transcripcin, por lo que una vez dentro de la clula, y en caso de que tambin se hayan introducido la cpsida y la envoltura, se eliminan las estructuras protectoras. Sntesis de cidos nuclicos y protenas: es la fase principal de la multiplicacin ya que se produce la replicacin del cido nucleico y la produccin de las protenas necesarias para la cpsida. La produccin de protenas puede empezar de manera temprana, especialmente si el mismo genoma del virus es el mRNA a traducir. En otros casos es preciso primero preparar el material gentico para ser susceptible de transcribirse, algo que depende del tipo de virus. En el caso de los virus de DNA, aquellos que tienen como material gentica doble hebra pueden iniciar la transcripcin de manera inmediata. Los virus con DNA de cadena simple primero deben sintetizar la hebra complementaria ya que la RNA polimerasa precisa de DNA de doble hebra para transcribir. Este intermediario de doble hebra tambin ser el molde para la sntesis del DNA que llevarn los viriones. En el caso de los virus que tienen RNA como material gentico podemos encontrar diversas estrategias. En el caso de los virus con cadena de RNA + pueden traducirlo directamente para obtener las protenas. La replicacin del material gentico se hace por medio de una RNA polimerasa RNAdependiente, denominada RNA replicasa, que codifica el mismo virus. Esta enzima emplea las cadenas del RNA + para producir cadenas RNA y, a partir de estas, producir de nuevo el RNA + que ir en las partculas vricas. Los virus con RNA poseen una enzima, que entra con el material gentico en la clula, que es capaz de sintetizar el RNA + para realizar la traduccin de las protenas. Esta enzima tambin se encarga de producir la hebra de RNA que portarn las partculas vricas. En el caso de los virus con RNA de doble hebra el problema es similar, portando tambin una RNA polimerasa RNAdependiente capaz de producir el mRNA a partir del RNA de doble hebra y de sintetizar el material gentico que se incluir en los viriones. Por su parte, los virus que tienen RNA monocatenario pero producen un DNA de doble cadena como intermediario de replicacin tambin aportan desde el virin la enzima responsable del proceso, la transcriptasa inversa o retrotranscriptasa. Esta enzima sintetiza una hebra de DNA a partir del RNA del virus y posteriormente una polimerasa celular sintetiza la hebra complementaria. Este DNA de doble hebra sirve para la produccin de las protenas y el material gentico del virus. Por ltimo, los virus con una cadena doble de DNA pero que usan un intermediario de RNA en su replicacin utilizan tambin una retrotranscriptasa en el proceso pero su peculiaridad hace que tengan una replicacin compleja. Las protenas del virus, independientemente de la forma de sntesis del mRNA, se pueden agrupar en dos categoras:

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Protenas tempranas.- se sintetizan inmediatamente despus de la infeccin, generalmente implican las protenas necesarias para la sntesis del cido nucleico por lo que suelen tener actividad enzimtica. Protenas tardas.- se sintetizan posteriormente y habitualmente incluyen aquellas protenas que forman la cpsida y la cubierta del virus por lo que son de tipo estructural. Ensamblaje: consiste en el montaje de los distintos componentes a expensas de la clula hospedadora. Se pueden diferenciar dos tipos de ensamblaje de las protenas: Autoensamblaje.- se da en los virus ms sencillos y consiste en que las protenas se van incorporando "espontneamente" sin que haya enzimas que intervengan. Se precisan unas condiciones fsicoqumicas adecuadas que, generalmente, coinciden con aquellas que se encuentran en el interior celular. Ensamblaje dirigido.- el ensamblaje se controla por el propio virus a travs de la informacin de su genoma, principalmente por los llamados factores morfogenticos que son enzimas que catalizan dicho ensamblaje. Liberacin: las partculas vricas recin formadas pueden salir de distintas maneras de la clula hospedadora. Los virus desnudos generalmente provocan la lisis de la clula que los contiene de manera que producen la muerte y desintegracin celular. Por su parte, los virus con envoltura suelen salir de la clula por medio de exocitosis de tal forma que se liberan envueltos en membrana de la clula infectada. En realidad se puede decir que es un proceso de gemacin que no lisa la clula en el que la envoltura tiene componentes virales cuya insercin puede dirigirse a una determinada zona de la membrana celular, que ser por la que el virus saldr al exterior.

Estrategias de replicacin: dos formas de vida; lisis y lisogenia

La replicacin de los virus, como se ha comentado, generalmente es un proceso que implica la entrada en la clula, la reproduccin y la salida de la clula. Este proceso se observa en los virus bacterianos, vegetales y animales pero en ciertos virus bacterianos se ha observado la existencia de dos caminos en el proceso de replicacin. El primer camino se conoce como ciclo ltico y sigue las fases que se han comentado en el apartado anterior sin interrupcin entre la entrada en la clula hospedadora y el inicio de la replicacin. Los virus que lo llevan a cabo son los virus virulentos. El segundo camino es el ciclo lisognico, en el que el bacterifago se mantiene latente durante un tiempo gracias a la integracin de su DNA en el DNA celular o a su permanencia como plsmido. Al dividirse la clula produce nuevas clulas que llevan el DNA del virus incorporado, recibiendo esta cepa bacteriana el nombre de cepa lisognica. En un momento determinado, dependiendo de las circunstancias, el ciclo lisognico se rompe producindose la activacin del ciclo ltico. Estos virus se denominan virus atemperados y la forma integrada se conoce como provirus. Como se ha visto, el virus virulento una vez dentro de la clula produce una desorganizacin del metabolismo bacteriano ponindolo al servicio del fago. Se lleva a cabo la expresin del genoma del fago, las protenas tempranas, las protenas estructurales y los factores morfogenticos de ensamblaje de tal manera que la bacteria se llena de virus. Tras el ensamblaje se produce la lisis de la pared bacteriana y la liberacin de las partculas vricas. Por su parte, los fagos atemperados integran su genoma en el genoma bacteriano de modo que al dividirse la bacteria se originan nuevas clulas infectadas. Se han descrito dos tipos de lisogenia:

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Divisin de la bacteria llevando el DNA del virus

Figura 5.- Posibles ciclos de un virus. En la parte superior se presenta el ciclo lisognico, en el que el DNA del virus se integra en el cromosoma
La bacteria se puede dividir muchas veces sin que el DNA del virus se escinda

bacteriano y se replica al mismo tiempo que se divide la bacteria. En ciertos casos, se produce la escisin del DNA del virus y comienza un ciclo ltico, presentado en la parte inferior.

El DNA del virus se escinde del cromosoma bacteriano e inicia el ciclo ltico

Ciclo lisognico

Integracin del DNA del virus en el cromosoma bacteriano

DNA bacteria

Ciclo ltico

a.- Lisogenia tipo (fago de E. coli).- el fago tiene DNA bicatenario circular/lineal, con los extremos monocatenarios complementarios entre s (son extremos cohesivos). Una vez que el fago entra en la bacteria se integra en el genoma de E. coli al reconocer el genoma viral unas secuencias del cromosoma bacteriano. El genoma del fago codifica unas protenas, el represor Cro y la protena cI, que controlan que se realice el ciclo ltico o el ciclo lisognico. Cuando la protena cI se une al DNA del fago en forma de dmero impide que se produzca el ciclo ltico al inhibir su expresin. Por su parte, el represor Cro es una protena represora del gen CI por lo que cuando acta impide la sntesis de la protena cI y, por tanto, permite la activacin del ciclo ltico. El ciclo en el que se entra, por tanto, depende de qu protena domine el proceso regulador. b.- Lisogenia tipo P1.- el fago P1 no se integra en el genoma cuando inicia la lisogenia mantenindose como un plsmido. En algunos casos se insertan en determinados puntos.

3. VIRUS: PATOGENIA Y UTILIDAD

Si bien la faceta de los virus ms conocida es su capacidad de producir enfermedades, lo cierto es que son cada vez ms las aplicaciones que se les encuentra para aprovecharlo en biotecnologa. La propia naturaleza parsita de los virus los hace susceptibles de causar enfermedades, aunque no siempre tiene que ser as. Sin embargo, el conocimiento que hemos adquirido de su fisiologa desde que se descubrieron permite que actualmente se les utilice para distintas tcnicas tanto en los laboratorios de investigacin como en la obtencin de beneficios por su utilidad en biotecnologa.

Portadores de enfermedades
Los virus bacterianos actan sobre la bacteria por lo que al ser organismos unicelulares el resultado es la muerte de la clula. Esto mismo ocurre con todos aquellos organismos eucariotas unicelulares. Sin embargo, en los organismos multicelulares la accin del virus se cie a las clulas a las que puede infectar y, debido a su especificidad, esto se traduce en un dao localizado en tejidos y/u rganos determinados.

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Segn el tipo de clulas que infecte el dao que puede producir al individuo vara, de tal forma que si afecta a tejidos perifricos o que no son vitales para el individuo el dao ser reducido mientras que si afecta a rganos vitales puede producir la muerte del individuo. En el caso de los virus vegetales la especificidad es relativa ya que no existen realmente virus especficos de una planta sino que existen virus que afectan a una variedad de plantas. Por ejemplo, el virus del mosaico del tabaco afecta no solo a especies de Nicotiana sino que afecta tambin a otras solanceas y a varias especies de otras familias. Normalmente el nombre del virus deriva de la planta ms frecuente en que se ha encontrado. La entrada a menudo se produce a travs de un vector animal en el que el virus tambin es capaz de replicarse por lo que se podra decir que tiene una doble accin como virus animal y vegetal. En plantas las enfermedades vricas son relativamente escasas y, generalmente, no suelen ser tan potentes como para poder matar al individuo. La tendencia al monocultivo hace que sea ms sencillo su extensin y a nivel econmico pueden producir prdidas como ocurre con el virus X y el virus Y de la patata. En algunos casos los virus pueden transmitirse de manera vertical, es decir, transmitirse de una generacin a otra. Dentro de los virus animales patgenos podemos citar el virus de la gripe o la familia de los herpesvirus, que incluye algunos tan conocidos como el herpes simple o el de la varicela. La variedad de clulas que pueden infectar hace que las enfermedades que pueden originar sean mltiples, aunque a menudo no somos capaces de identificar el agente de manera clara debido a su carcter microscpico. En general, actualmente la mayor parte de las enfermedades vricas no se tratan ya que los agentes antivirales son escasos (se han desarrollado principalmente para el virus HIV) y es el mismo organismo el que activa sus defensas para acabar con la infeccin, principalmente a travs de anticuerpos y clulas que eliminan las partculas conjugadas con anticuerpos y clulas infectadas. Por otro lado, los virus tambin son agentes oncognicos al ser capaces de insertar oncogenes en las clulas hospedadoras o producir mutaciones en genes relacionados con el ciclo celular. De esta manera su accin produce clulas tumorales que segn la evolucin que sufran pueden causar cncer. A la hora de hablar de los virus patgenos es importante tener en cuenta la capacidad que tienen de pasar de una especie a otra. Segn las molculas que reconocen y la conservacin que tengan estas entre las distintas especies es posible que un virus de una especie pueda infectar a otra especie. Esta infeccin cruzada puede no generar ningn dao porque el organismo receptor sea capaz de eliminar sin mayor dificultad el virus que ha entrado o tambin puede ser el origen de una enfermedad.

Potenciales armas biolgicas

Los virus, como ocurre con las bacterias o las toxinas bacterianas, son potenciales armas biolgicas. El hecho de que sean capaces de replicarse en el individuo hace de ellos una herramienta potente a la hora de usarse como armas de ah que se controle su uso desde mltiples instituciones y se haya prohibido su utilizacin en cualquier tipo de conflicto. A la hora de evaluar un agente como posible arma biolgica los criterios que se siguen es que sea infectivo, toxico, estable en el medio ambiente, fcil de producir, fcil de distribuir (principalmente en forma de aerosol) y que cause una enfermedad grave. Varios virus cumplen estos requisitos como pueden ser el virus de la viruela o el virus de la encefalitis equina. Otros virus, como los que producen la fiebre hemorrgica (virus del Ebola, virus de

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la fiebre del Valle del Rift, etc), son susceptibles de emplearse debido a su alta letalidad, alta infectividad por medio de aerosoles y su posibilidad de ser replicados en cultivos celulares.

Usos en investigacin
Las mismas propiedades que hacen de los virus efectivas armas tambin permiten su utilizacin como herramientas en los laboratorios de investigacin y su empleo en biotecnologa para mejorar el nivel de vida de la poblacin. Muchos de los descubrimientos llevados a cabo en biologa molecular se deben a los virus. El conocimiento de su genoma y su forma de actuar permiten aprovechar sus propiedades en el laboratorio como ha ocurrido, por ejemplo, con la realizacin de genotecas para el estudio de las clulas eucariotas. El DNA genmico de una clula eucariota se puede fragmentar con enzimas de restriccin en pequeos fragmentos susceptibles de introducirse en virus. Estos virus se emplean en la infeccin de bacterias para que se multipliquen y as poder extraer el DNA que contienen. Con ese DNA se pueden realizar distintas tcnicas como la hibridacin in situ, la secuenciacin o su introduccin en clulas. Tambin se utilizan en el estudio de la produccin de ARN mensajero y de enzimas implicados en la replicacin del ADN o la determinacin de algunas rutas metablicas (se incorporan virus que interrumpen pasos especficos de esas rutas). Adems, teniendo en cuenta la especificidad de los virus bacterifagos, se investigan este tipo de virus para eliminar bacterias causantes de enfermedades. Se utilizan tambin virus animales como insecticidas ecolgicos, que eliminan determinados insectos sin alterar los ecosistemas. Actualmente se utilizan tambin virus modificados por ingeniera gentica en la fabricacin de vacunas y como vectores para transformar clulas bacterianas y lograr as producir una determinada protena.

4. OTRAS FORMAS INFECCIOSAS ACELULARES

Adems de los virus se han descubierto otras formas infecciosas acelulares, como son los priones y los viroides, molculas ms pequeas y desprotegidas que los virus, y sin embargo tambin agentes patgenos causantes de enfermedades como la enfermedad de las vacas locas, entre otras.

Viroides: molculas de ARN infecciosas

Los viroides son molculas infecciosas de RNA propias de vegetales que carecen de cubierta proteica, lo que les diferencia de los virus. Su RNA es monocatenario y circular, con la suficiente estabilidad para transmitirse entre clulas. Su tamao oscila entre 250 y 400 nucletidos, presentando una secuencia parecida entre ellos lo que hace pensar que tienen un origen evolutivo comn. Son responsables de varias enfermedades de plantas y tienen inters econmico por el dao que hacen a la agricultura, como ocurre con el cadang-cadang del coco o el de la exocortis de los ctricos. A nivel funcional es importante el hecho de que an siendo un RNA de cadena sencilla circular adquiere una estructura secundaria compleja similar a la que podra encontrarse en un RNA de doble cadena. Es posible que esta estructura sea la responsable de su estabilidad en el exterior de la clula. A diferencia de los virus no precisa de receptores para poder entrar en la clula ya que lo hace a travs de los daos que esta pueda sufrir por la accin mecnica de un insecto o cualquier otro fenmeno. Una vez dentro de la clula el paso de una a otra se produce a travs de los plasmodesmos, las estructuras que conectan los citoplasmas de un tejido vegetal. El RNA del viroide no codifica para ninguna protena y se replica por la accin de las RNA polimerasas de la clula, bien del ncleo o bien del cloroplasto. Como resultado de la accin de estas

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enzimas se produce un RNA multimrico, es decir, con varias copias del viroide. Es en este punto cuando entra en accin el viroide ya que posee actividad cataltica, es decir, es una ribozima capaz de realizar el corte que libere cada monmero dando lugar a las copias del viroide.

Priones: protenas alteradas

Los priones son una forma acelular de naturaleza proteica. Carece de cido nucleico pero es infecciosa causando enfermedades como la Encefalopata Espongiforme Bovina (EBB) o la enfermedad de Creutzfeldt-Jakob (ECJ) en humanos. No se conocen priones en plantas pero si se han observado en levaduras. Los priones se producen a partir de una protena normal de la clula hospedadora, denominada PrPc (protena prinica celular), codificada por el gen Prnp. Esta protena se encuentra en los animales en las neuronas, especialmente las cerebrales, y forma parte de una glicoprotena de membrana. La protena patgena se denomina PrPSc (protena prinica del scrapie, la enfermedad de ovinos que se relacion con los priones) y tiene la misma secuencia de aminocidos que la protena normal pero se diferencia de ella en que adquiere una estructura tridimensional diferente. Aunque la secuencia de la protena es parecida entre los distintos mamferos, no es idntica y se sabe que influye en cierta manera en el hecho de que el prin de una determinada especie pueda afectar a alguna otra especie pero no se ha identificado an cul es el principal motivo. De esta manera, el prin de vaca puede afectar a humanos pero no ocurre lo mismo con el de oveja. La protena normal presenta en su estructura varios segmentos de hlices mientras que en la protena prinica predominan las lminas . Este cambio hace que pierda su funcin normal y sea resistente a las proteasas por lo que no se puede eliminar, producindose su agregacin en el interior de las neuronas. Este cambio de una forma a otra se produce cuando una forma infecciosa PrPSc entra en la clula, haciendo que las molculas de protena normal modifiquen su conformacin y comiencen a agregar en forma de estructuras insolubles que llevan, posteriormente, a la destruccin de las neuronas y, por tanto, del tejido nervioso. Para que se produzca la enfermedad es necesario que la protena infectante se una a las formas normales de la protena presentes en la membrana, si no puede hacerlo entonces no produce efectos patolgicos. La enfermedad que produce un prin puede deberse a tres posibilidades. La primera es que entre una molcula infectiva desde el exterior causando la enfermedad prinica infecciosa. Esto es lo que ocurre cuando se ingiere el prin procedente de la vaca por ejemplo. La segunda posibilidad es que la enfermedad se produzca debido a un mal plegamiento de protena normal en el individuo que acta como primera protena infectante y transmitindose a otras clulas del mismo individuo. A esta forma se la denomina enfermedad prinica espordica. La tercera posibilidad es que el gen que codifica para la protena normal sufra una mutacin que lleve a que se produzca protena prinica patgena, denominndose a esta forma como enfermedad prinica hereditaria.