Instituto Tecnolgico de Villahermosa Tema:

Produccin del glutation

Materia:

Microbiologa industrial
Equipo #6:

De la Paz Carballo Edson Alejandro Merz Prez Ivanna Michelle Mora Ocampo Irma Yuliana
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Peregrino lvarez Jonatan

AMINOCIDOS Molculas orgnicas . Unidades qumicas del cuerpo que forman las protenas.

Estructura general
Carbono central alfa

Cadena lateral

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Aplicaciones industriales

Alimentos 66%

Aditivos de piensos 30% FABRICACIN COMERCIAL DE AMINOCIDOS

Medicina y cosmtica 4%

Extraccin a clic para modificar el estilo de subttulo del Produccin Haga partir de Sntesis hidrolizados de microbiolgica patrn qumica protena.
Fermentaci n directa Conversin de productos intermediarios baratos Uso de enzimas o clulas inmovilizadas

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ANTIOXIDANTES

Medicina

Conservante de alimentos y cosmticos

Previene degradacin del caucho y gasolina

Molcula capaz de retardar o prevenir la oxidacin de otras molculas

oxidaci n

Trasnf. De electron es

Radical es libres

Reaccione s en cadena

Dao a las clulas

Antioxid ante Glutation Vitamina C Vitamina E Catalasa Peroxidas

De una sustancia a un agente oxidante

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GLUTATION (GSH) Tripptido Cistena Glicina

cido glutmico

glutamilcisteinilglici na

Es uno de los antioxidantes celulares ms importantes Su funcionalidad se debe a su grupo tiol. 11/10/12 Es un producto

BIOSNTESIS DEL GLUTATIN

La enzima GSH1 est regulada por la concentracin de GSH, por un efecto de retrohinibicin o inhibicin por producto final 11/10/12

FUNCIONES DEL GSH EN EL ORGANISMO

Cofactor de diversas enzimas Protege el ADN y protenas Interviene en la comunicacin intramolecular Transporte de metales Detoxificacin frente a compuestos electrolticos o metales pesados Reservorio de cistena para la clula.

USOS TERAPEUTICOS Y NUTRICIONALES

Bajos niveles de glutation se asocian con enfermedades como:

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Aditivo en la industria cosmtica. Fabricacin de cremas faciales y cosmticos. Suplemento en productos para la alimentacin infantil. Conservante para alimentos. Suplementos en dieta para mejorar el sistema inmunolgico.

OTRAS APLICACIONES

Cataratas Alzheimer Parkinson Esclerosis mltiple Cncer Derrames cerebrales Enfermedades del corazn Problemas digestivos Hepatitis Previene la anemia

PRIMEROS ESTUDIOS Bacterias

No afectadas por deficiencia de GSH

Afectadas por deficiencia de GSH

Saccharomyces cerevisiae

Clulas eucariota s

PRODUCCIN BIOTECNOLGICA DE GLUTATION

Descubierto en un extracto de levadura S. cerevisiae por ReyPailhade Extraccin a partir de tejidos animales y de plantas
Mezcla racmica (aminocidos L y D)

Baja velocidad de crecimiento Defectos mitocondriales

Biosntesis qumica Va fermentativa

Limitada cantidad de material Baja cantidad intracelular Producto muy caro

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SNTESIS ENZIMTICA Bioconversi n Clulas y extractos de S. cerevisiae

E. Coli Candida krusei Corynebacterium glutamicum

Elementos esenciales
Enzimas: GSH1 y GSH2 Aminocidos precursores ATP Mg 2+ Control de pH (7.5) Concentraciones de GSH de hasta 9 g/l
Coste de produccin aumenta por el uso de aminocidos y ATP

S. Cerevisiae es la mas utilizada por su facilidad de manipulacin y bajo coste operacional

La utilizacin de un solo organismo para llevar a cabo de forma simultnea, tanto la biosntesis de GSH como la regeneracin de ATP, no permiti buenos resultados.

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PRODUCCIN POR FERMENTACIN Objetivo

Conseguir elevada concentracin de GSH Contenido intracelular de GSH en cepas salvajes de S. cerevisiae 0.1-1% del peso seco

Aumento del contenido intracelular

Aumento de biomasa

Mutagnesi s Tcnicas de ADN recombinante Adicionar aminocidos precursores

Optimizaci n y control

Al evitar la retrohinibicin de GSH1 por glutatin (3-5% del peso seco celular)

Lote alimentado
Cuidar la velocidad especfica de crecimiento

Mejora de produccin de GSH un 40% en cepas de S. cerevisiae

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Obtencin de GLUTATION a partir de Saccharomyces cerevisiae

Anlisis de la concentracin de Glutation

VA FERMENTATI VA

Preparacin de muestras

Centrifugacin

Lisis Fermentacin Optimizacin Cultivo y aislamiento de cepas

Seleccin

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Preparacin de muestras

Ricos en almidones o azucares

Adecuados para fermentaciones

Fermentacin

Mx 48 hras

Produccin de levaduras Saccharomy ces cerevisiae

Cultivo y aislamiento de cepas

Placas petri

Estra cruzada

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Seleccin

Cepas resistente s

Capaces de crecer en presencia de altas concentraciones de agentes oxidantes

Optimizacin

Estrs

pH Temp Nutriente s Etc. 11/10/12

Respuesta que induce a los sistemas de defensa antioxidantes

Aumenta la concentracin del tripptido

Lisis

Rompimiento de clulas

Agitacin fuerte, 1 min

Centrifugacin

10,000 rpm 2min

Anlisis de la concentracin de Glutation Interpolacin de resultados con recta 11/10/12 patrn

colorimetra

Cromgeno 5,5'-ditiobis(2nitrobenzoico)

cuantific a

Absorbancia de 415 nm

NUEVAS ESTRATEGIAS Principales problemas

Retrohinibicin del GSH sobre GSH1 Presencia de -GT que degrada al GSH sintetizado intracelularmente

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