ADN y su extraccin en el laboratorio. Prof. Liliana H. Perini.

EEMN 11 Alte Brown 6 de junio de 2008

La molcula que guarda todos los secretos

El ADN se compone de dos cadenas, cada una formada por nucletidos. Cada nucletido, a su vez, est compuesto por un azcar de 5 carbonos (desoxirribosa), un grupo fosfato y una base nitrogenada. Las bases nitrogenadas son cuatro: adenina (A), timina (T), citosina (C), y guanina (G), y siempre una A se enfrenta a una T y una C se enfrenta a una G en la doble cadena. Las bases enfrentadas se dice que son complementarias. El ADN adopta una forma de doble hlice, como una escalera caracol donde los lados son cadenas de azcares y fosfatos conectadas por "escalones", que son las bases nitrogenadas. La molcula de ADN se asocia a protenas, llamadas histonas, y se encuentra muy enrollada y compactada para formar el cromosoma. Esta asociacin de ADN y protenas se conoce como cromatina. La cromatina puede estar enrollada en mayor o menor grado, dependiendo de la etapa en que se encuentra la clula; por ejemplo, cuando el ADN se ha duplicado antes de que la clula se divida, la cromatina se compacta en su mayor grado, y como resultado se pueden visualizar los cromosomas duplicados al microscopio como corpsculos con forma de X.

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Extraccin de ADN en el laboratorio

El ADN se encuentra presente en todos los seres vivos. Un alfabeto de 20 Aminocidos puede escribir todas las protenas que regulan la vida sobre la tierra. En el laboratorio extraeremos ADN de clulas vegetales y animales. Protocolos de trabajo: Extraccin de ADN en clulas animales: El objetivo del presente trabajo es la extraccin de ADN presente en las clulas del hgado de pollo. Para ello debemos provocar la ruptura de los tejidos, el estallido de los ncleos y la separacin de las protenas asociadas al ADN. Los diferentes pasos de esta tcnica van cubriendo estas etapas. Materiales: Hgado de pollo Varilla de vidrio Mortero Vasos de precipitado Pipeta Probeta Etanol Solucin de cloruro de sodio 10% m/V Detergente de color claro o champ Arena Gasa Hielo Agua destilada

1- Colocar en un recipiente adecuado (conservadora de hielo o envase de helados) un vaso de precipitado con 50 cm3 de etanol entre cubos de hielo. Preparar la solucin de cloruro de sodio 2- Colocar el hgado pollo trozado en un mortero con un poco de arena y triturar (la arena favorece la ruptura de membranas) 3- Agregar al triturado 50 cm3 de agua destilada hasta formar una especie de papilla o pur

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4-Esta papilla se filtra colocando gasa en embudo varias veces hasta retener todos los posibles trozos de tejidos en suspensin. Medir el filtrado con probeta

5- Agregar al filtrado igual cantidad de solucin de cloruro de sodio 10% m/V con lo que se consigue producir el estallido de los ncleos y la exposicin de la fibras de cromatina. 6- Agregar 1 cucharadita de detergente o champ que formar un complejo con las protenas asociadas al ADN dejndolo libre. (Mezcla suavemente evitando la formacin de espuma)

ADN y su extraccin en el laboratorio. Prof. Liliana H. Perini. EEMN 11 Alte Brown 6 de junio de 2008 7- Agregar suavemente y deslizando por las paredes del vaso de precipitado el etanol helado. Se formar un sistema bifsico y en la interfase quedan suspendidas las fibras de ADN, simulando esos fideos de sopa llamados cabellos de ngel

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Las fotos fueron tomadas en el laboratorio de la EMN 11durante la prctica realizada por 3 4

ADN y su extraccin en el laboratorio. Prof. Liliana H. Perini. EEMN 11 Alte Brown 6 de junio de 2008 Extraccin de ADN en clulas vegetales: Vaso de precipitado Licuadora embudo y gasa 20 ml de agua destilada champ o detergente de color claro 1 banana Sal de mesa 1 tubo de ensayo Etanol hielo 1 varilla de vidrio o 1 pipeta Pasteur 1- Colocar en un recipiente adecuado (conservadora de hielo o envase de helados) un tubo de ensayo con etanol entre cubos de hielo 2- Licuar una banana con una taza de agua destilada.

3- Prepara en un vaso de precipitado una cucharadita de t de champ o detergente

junto a dos pizcas de sal y 20 cm3 de agua destilada, mezclar evitando la formacin de espuma

4- Agregar a esta ltima preparacin 3 cucharadas del licuado de banana, mezclar

durante 5 minutos

5- Filtrar con embudo y gasa. Tomar aproximadamente 5 cm3 del filtrado

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6- Agregar el filtrado al etanol helado, cuidando que se deslice por las paredes. Dejar reposar sin mover. Las fibras de ADN precipitan en la interfase

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