PRESENTACIÓN DE INFORME DE

PRÁCTICA N° 4

Jhon Kevin Bonilla León

Universidad Nacional Pedro Ruiz Gallo

Biología Molecular

28 de Agosto del 2020

I. TÍTULO
 Extracción de ADN con CTAB

II. OBJETIVOS

- Usar técnicas sencillas para extraer el ADN de un tejido animal y vegetal,

por el aspecto que presenta, confirmar su estructura fibrilar.

- Confirmar a partir a partir de la longitud enorme de las fibras en el núcleo

que el ADN se encuentra replegado.

III. MARCO TEÓRICO

El ADN es conocida como la molécula de la vida, el estudio de sus propiedad

estructurales, fisicoquímicas y biológicas es de mucha importancia debido a que

en él se encuentran cifradas las instrucciones que definen las características de

cada ser biológico (Walker, 1989).

Todo organismo vivo está formado por moléculas de ADN. Estas forman parte

de todas las células, y contienen la información genética utilizada en el

desarrollo y funcionamiento de los seres vivos. (Watson, J. D y Crick, F. H,

1953). Ahora bien, dentro de la morfología celular, se conoce que las

membranas de las células animales están formadas por dos capas de lípidos con

proteínas transmembranales que permiten el transporte de sustancias a través de

estas. (Solari, 2011).  El ADN se encuentra localizado principalmente en el

núcleo celular, pero, en los organismos eucariotas, también está en las

mitocondrias de animales, plantas y hongos, y en los cloroplastos de las plantas

(Sender et al, 2016). Estos tres compartimentos celulares también están

delimitados por membranas grasas, por lo que se pueden disolver utilizando

detergente (Llach y Vila, 2017). La extracción de ADN con materiales

cotidianos es una práctica muy atractiva que se realiza habitualmente en

 institutos y facultades. Aunque requiere poner en práctica conceptos

fundamentales de Química, Física y Biología. (Gallego, Rocio E. y Ochoa A. G

(2019). Estos trabajos prácticos en el área de ciencias mejoran las actitudes y el

interés de los alumnos, y los motivan a aprender ciencias (Hofstein y Lunetta,

2015).

Existen muchos métodos, protocolos que tienen como fin obtener ADN con

óptima calidad y cantidad. Los métodos tradicionales, desarrollados en los años

50, utilizan solventes orgánicos para separar a las proteínas del ADN y, una vez

suspendido en la fase acuosa, aislarlo por precipitación con etanol (Barea J.M

2014). Estos métodos requieren preparar soluciones y la extracción puede tomar

desde unas horas hasta varios días por los numerosos pasos que deben realizarse

(Laura A. V, María A. M, Amelia C.R, 2015), tienen en general cinco etapas

principales: homogeneización del tejido, lisis celular, separación de proteínas y

lípidos, precipitación y suspensión del ADN. (Andrés, 2011).

IV. MATERIALES Y MÉTODOS

1. Materiales.

- Muestra de tejido animal: Higado, corazón, carne

- Agua destilada

- Sal de mesa

- Detergente liquido

- Etanol 95% helado

- Mortero estéril

- Vaso de precipitación 100ml y 250ml

 - Embudo

- Vaso de precipitación

- Probeta 50ml

- Pipeta 5ml

- Bagueta

- Papel filtro

2. Métodos

- En un recipiente triturar la muestra con 50 ml de agua destilada hasta obtener una

solución homogénea

- En un vaso de precipitación mezclar 2 ml de lavavajilla 20%, con 50 ml de NaCl

2M, mezclar sin producir espuma.

- Mezclar 1 y 2 por 6 – 10 minutos sin producir espuma.

- Centrifugar a 2000 rpm por 5-10 minutos o filtrar la muestra.

- Pasar el sobrenadante o el filtrado a un vaso de precipitación de 200 ml (70 ml

como mínimo aproximadamente)

- Con una pipeta añadir 50 ml de alcohol helado por las paredes del vaso, se formarán

dos capas, en la interfase está el ADN, dejar reposar 6minutos.

- Agregar 2 gotas de violeta de genciana.

V. DISCUSIONES

En la práctica de laboratorio extracción del ADN animal, se identificó y se

obtuvieron los siguientes resultados: Al extraer el ADN del tejido animal, del

hígado de pollo el cual se encuentra en el interior del núcleo celular, disperso y

 muy replegado, unido a proteínas para formar la cromatina, donde fue necesario

homogeneizar el tejido y romper las células para separar el núcleo, además de la

envoltura nuclear para liberar su contenido, se separó el ADN de las proteínas

que lo protegen y se precipito para extraerlo de la solución. Una vez realizado

esto, el ADN iba apareciendo poco a poco en la interfase agua-alcohol en forma

de grumos blancos. Es así que se obtuvieron finalmente hebras blancas que

corresponden a miles de fibras de ADN. De acuerdo con la teoría, se concuerda

con lo siguiente: Las características fisiológicas y bioquímicas de todo ser vivo

están contenidas en sus respectivos genomas.

VI. CONCLUSIONES

- Se observó fibrillas de ADN de un color blanco en la interface del recipiente

coloreado con violeta de genciana.

- Así sea un experimento casero es necesario tener materiales de laboratorio (m.

vidrio, pipetas graduadas) para tener un proceso y resultado más eficiente.

VII. REFERENCIAS

Bibliografía
1. Andres, J. (2015). Evaluación de metodos de extracción de ADN pagina 83-97. Bogotá: Acta
biológica colombiana.

2. WALKER, J. (1989). Metodos en Biología Molecular. New Jersey: Human press.

3. Hofstein, A. y Lunetta, V. (2004). The laboratory in science education:

Foundations for the twenty-first century. Science education, 88(1), 28-54.

4. WATSON, J., CRICK, F. Molecular Structure of Nucleic Acids: A Structure for

Deoxyribose Nucleic Acid. Nature 171, 737–738 (1953).

https://doi.org/10.1038/171737a0

5. Sender, R., Fuchs, S. y Milo, R. (2016). Revised estimates for the number of human

and bacteria cells in the body. PLoS Biol, 14(8), 1-14.

6. BAREA J.M. (2014) El mundo que viene. Centro Libros PAPF, S.L.U. Grupo

Planeta.

7. Llach, M. y Vila, M. (2017). ¡Ha desaparecido un ratón! ¿Nos ayudáis a buscar al

culpable? Análisis del impacto didáctico y emocional de un encargo ficticio.

Enseñanza de las ciencias, 35(3), 151-173.

8. SOLARI, A.J. (2011) Genética Humana. Fundamentos y aplicaciones en Medicina;

Editorial Médica Panamericana

9. Checa Rojas, A. (2016, 22 de Junio ) Extracción de ADN. Conogasi, Conocimiento

para la vida. Fecha de consulta: Agosto 28, 2020

10. Alberto Checa Rojas. (2016). Extracción de ADN. 2020, Agosto 28, Conogasi.org

Sitio web: http://conogasi.org/articulos/extraccion-de-adn/

 Hofstein, A. y Lunetta, V. (2004). The laboratory in science education:

Foundations for the twenty-first century. Science education, 88(1), 28-54.

VIII. ANEXOS