Oncogenes del virus del papiloma

humano (VPH) y diferentes técnicas

moleculares para su detección y
relación con la carga viral en lesiones
cervicales y carcinoma oral de células
escamosas

Laura Daniela Clavijo Galvis

Michel Camila Garzón Pulido
Jennifer Dayan Calderon Mora
Stacy Alexandra Montenegro Florez
Karin Mercedes Rodríguez Sánchez
 Introducción
El virus del papiloma humano (VPH) es una
infección de transmisión sexual, que por lo general
causa proliferaciones epiteliales en las superficies
cutáneas y mucosas(1). El cáncer de cuello uterino
es el segundo cáncer ginecológico más común en
todo el mundo a causa de una infección por virus
del papiloma humano de alto riesgo oncogénico
persistente (HR-HPV) (6).
Se une e induce la degradación de la
proteína supresora de tumores p53,
inhibiendo la apoptosis; contribuye a la
E6 evasión de la respuesta inmunitaria y a
la persistencia del virus; activa la
Proteínas No expresión de la telomerasa
Estructurales
Se une e induce la degradación de la
proteína supresora de tumores pRB;
E7 incrementa la actividad de cinasas
dependientes de ciclinas,contribuye a la
evasión de la respuesta inmunitaria
 Introducción
El uso de sondas de hibridación in situ de ARN
(ISH) complementarias al ARNm de E6 / E7
permite la visualización directa de
transcripciones virales en tejidos procesados ​
de forma rutinaria(5). Se ha encontrado que
una carga viral alta está asociada con la
persistencia de la infección, y progresión
neoplásica asociada al VPH-AR , para llevar a
cabo una correlación de la carga viral y la
gravedad de las lesiones cervicales se
explicara el ensayo de captura híbrida II (6),
el (VPH) es considerado un factor causante
del carcinoma oral de células escamosas
(OSCCs), pero la función patogénica no es
bien comprendida, para ello se hablará de la
técnica qPCR que detecta ADN de VPH 16 en
para determinar la probabilidad de relación (7).
Consiste en marcar una hebra sencilla
de ácidos nucleicos denominada sonda
Sondas de y permitir que se empareje con su
hibridación in secuencia complementaria en el ARN o
situ el ADN presente en una muestra de
tejido.
Tecnología molecular computarizada
para determinar si usted tiene uno o más
variantes de VPH que causan el cáncer
Tecnicas Captura
moleculares de cuello uterino. Funciona detectando la
hibrida ll "huella" genética del virus, su ADN
Variante de la
reacción en cadena de la polimerasa
(PCR) utilizada para amplificar y
qPCR simultáneamente cuantificar de forma
absoluta el producto de la amplificación
de ácido desoxirribonucleico (ADN)
 Pregunta de investigación

¿Qué técnicas moleculares se pueden utilizar

para la detección de oncoproteinas virales del
VPH, ADN y determinación de la carga viral en
mujeres con lesiones cervicales y carcinoma
oral de células escamosas?
 Objetivo general

Determinar técnicas de detección de infección por VPH que ilustren la relación entre
la carga viral del virus, el grado de lesión cervical y el carcinoma oral de células
escamosas.
 Objetivos específicos

Mostrar la efectividad de una nueva estrategia frente

a otros métodos de detección de VPH de uso común.

2.

3.
Demostrar la importancia de la prueba de captura
híbrida II y su relación con la carga viral
3. 3.
3.

Determinar la presencia de los oncogenes E6 y E7 del

VHP16 en el carcinoma oral de células escamosas
mediante qPCR
1. Método de hibridación in situ

1. Pretratamiento con calor y con proteasas antes de la

hibridación
2. Sonda diana para el genotipo HPV16
3. Cóctel de sondas diana para genotipos de VPH de alto
riesgo
4. Las señales de hibridación positivas se realizaron
mediante incubación.
 1. Método de hibridación in situ

Orofaringe
Selección de los sitios Cavidad oral
282 Pacientes con
precisos de origen del Laringe
HNSCC
tumor Hipofaringe
Nasofaringe

❖ Permite identificar los tipos celulares infectados

por el ADN viral
❖ Visualización de las señales de hibridación
mediantes un sustrato cromogenico
2. CAPTURA HÍBRIDA II

1. DESNATURALIZACIÓN
2. HIBRIDACIÓN CON SONDAS ARN DE
ALTO Y BAJO RIESGO
3. CAPTURA DEL HÍBRIDO ADN/ARN
MEDIANTE ANTICUERPOS
ANTI-ADN/ARN
4. FIJACIÓN AL HÍBRIDO DE
ANTICUERPOS ANTI- ADN/ARN
MARCADOS CON FOSFATASA
ALCALINA
5. DETECCIÓN DE LA ENZIMA FIJADA
MEDIANTE SUSTRATO
QUIMIOLUMINISCENTE
 2. CAPTURA HÍBRIDA II

1 2 3 4

Selección División Recolección Detección de ADN-

273 mujeres para el 2 grupos: Células exfoliadas del VPHr
estudio. 1. Múltiples tipos de VPH ectocérvix y endocérvix
2. Un solo tipo de VPH Se realizó utilizando un kit de
prueba de VPH GenoArray.
3. qPCR de HPV16 E6 y E7
 3. qPCR de HPV16 E6 y E7
E6
Cebador directo
5'CGAAACCGGTTAG
TATAA-3'
Cebador Inverso
5'GTATCTCCATGCAT
GATT-3
Tamaño 130 pb

E7
Cebador Directo
5ʹATAATATAAGGGGT
CGGTGG-3ʹ
Cebador Inverso
5ʹCATTTTCGTTCTCG
TCATCTG-3ʹ
Tamaño 505 pb
 Resultados esperados
Hibridación in situ

qPCR

Se encontrará si existe
predominancia de VPH en la Se espera determinar la expresión de
orofaringe, además si el Hibridación II ARNm de VPH16 E6/E7 en el carcinoma
carcinoma faríngeo alberga VPH de células escamosas orales, además
Se espera encontrar
activo. Por otro lado, se usará la comparar si existen diferencias
diferencias en cuanto a carga
ayuda de esta técnica para significativas en la determinación del tipo
viral dependiendo del tipo de
determinar si ésta, junto con la de carcinoma (según OMS). Así mismo,
muestreo. Así mismo los
inmunohistoquímica son se encontrará la sensibilidad de la
factores que influyen en la
medidas independientes de inmunohistoquímica de p16 como
carga viral (edad y severidad
presencia y actividad biológica biomarcador para carcinomas por VPH.
de la lesión) y cómo lo
de VPH.
hacen.
 Referencias
CDC. Virus del papiloma humano:información sobre VPH para los médicos [Internet]. Agosto 2007 [consultado 2 Mayo 2021].
Disponible en: [
https://www.minsalud.gov.co/salud/Documents/observatorio_vih/documentos/literatura_interes/Virus%20del%20papiloma%20hu
mano.pdf
] (1)

Santos Lopez G et al. Aspectos generales de la estructura, clasificación y la replicación del virus del papiloma humano[Internet].
Revistas médicas; Mayo 2015 [consultado 2 Mayo 2021]. Disponible en: [
https://www.medigraphic.com/pdfs/imss/im-2015/ims152h.pdf ] (2)

Doorbar J, Quint W et al. La biología y el ciclo de vida de los virus del papiloma humano [Internet] ; Noviembre 2021 [Consultado
2 Mayo 2021]. Disponible en:

[https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23199966/] (3)

MJ Conway, C Meyers. Replicación y ensamblaje del virus del papiloma humano. [Internet]; Abril 209 [Consultado 2 Mayor 2021].
Disponible en:

[https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19407149/] (4)

Obispo J, Ma X et al.Detección de VPH de alto riesgo transcripcionalmente activo en pacientes con carcinoma de células
escamosas de cabeza y cuello como se visualiza mediante un nuevo método de hibridación in situ de ARNm de E6 / E7.
[Internet]; Diciembre 2012 [Consultado 2 Mayo 2021]. Disponible en:

[https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23060353/] (5)
 Referencias

Lu X, Wang T et al. Análisis de factores que influyen en la carga viral en pacientes con virus del papiloma humano de alto riesgo
[Internet]. Enero 2021 [Consultado 2 Mayo 2021]. Disponible en:

[https://virologyj.biomedcentral.com/articles/10.1186/s12985-020-01474-z ] (6)

Thammaiah S, et al. Detección cuantitativa basada en la reacción en cadena de la polimerasa del ADN del VPH 16 E6 y E7 en el
carcinoma oral de células escamosas. [Internet]. Octubre 2018 [Consultado 2 Mayo 2021]. Disponible en:

[https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/30059164/] (7)
 Sex Education Infographics

20% 30%
Neptune Mercury
Neptune is the farthest Mercury is the closest
planet from the Sun planet to the Sun

35% 15%
Mars Venus
Despite being red, Mars is Venus has a beautiful
actually cold name, but it’s hot
 Sex Education Infographics

Neptune Venus Earth

Neptune is the farthest Venus has a beautiful Earth is the beautiful
planet from the Sun name, but it’s hot planet we all live on

Mars Mercury Jupiter

Despite being red, Mars is Mercury is the closest Jupiter is the biggest
actually a cold place planet to the Sun planet of them all
Sex Education Infographics

30 Mars

%
Despite being red, Mars is
actually a cold place

60 Venus

%
Venus has a beautiful
name, but it’s hot

10 Earth
Earth is the beautiful

% planet we all live on

 Sex Education Infographics

Mars Earth
Despite being red, Mars is Earth is the beautiful
actually a cold place planet we all live on

Moon 70% Moon 20%

Sun 40% Sun 40%

Mercury Neptune
Mercury is the closest Neptune is the farthest
planet to the Sun planet from the Sun

Moon 50% Moon 70%

Sun 80% Sun 90%
 Sex Education Infographics

25% 10%
Venus Neptune
Venus has a beautiful Neptune is the farthest
name, but it’s hot planet from the Sun

30% 30%
Mars Earth
Despite being red, Mars is Earth is the beautiful
actually really cold planet we all live on

5%
To modify this graph, follow the link, Mercury
change the data and replace it Mercury is the closest
planet to the Sun
 Sex Education Infographics
1 2 3 4 5 6 7

Mercury - Mercury is the closest planet to the Sun Mars - It is really cold
8 9 10 11 12 13 14

Mars - It is really cold Neptune - Neptune is the farthest planet from the Sun
15 16 17 18 19 20 21

Neptune - Neptune is the farthest planet from the Sun

22 23 24 25 26 27 28

Jupiter - Jupiter is the biggest planet of them all

Venus Venus has a beautiful name, but it’s hot

 Sex Education Infographics

50% 99% 70%

Neptune Venus Earth
Neptune is the farthest Venus has a beautiful Earth is the beautiful
planet from the Sun name, but it’s hot planet we all live on

1st 2nd 3rd 4th 1st 2nd 3rd 4th 1st 2nd 3rd 4th
 Sex Education Infographics

Mars Neptune Saturn

Despite being red, Mars is Neptune is the farthest Saturn is a gas giant and
actually cold planet from the Sun has many rings
5/10 8/10 3/10

Jupiter Earth Moon

Jupiter is the biggest Earth is the beautiful This is Earth’s only
planet of them all planet we all live on natural satellite
7/10 2/10 8/10

Venus Mercury Sun

Venus has a beautiful Mercury is the closest The Sun is the big star in
name, but it’s hot planet to the Sun the center of all
6/10 9/10 4/10
 Sex Education Infographics
20%
Neptune
Neptune is the farthest
planet from the Sun

35%
Mars
Despite being red, Mars is
actually cold

He
45% They
She

Neptune
Venus has a beautiful
name, but it’s hot
 Sex Education Infographics

Venus Neptune
Venus has a beautiful Neptune is the farthest
name, but it’s hot planet from the Sun

Mars Earth
Despite being red, Mars is Earth is the beautiful
actually really cold planet we all live on

Mercury Jupiter
Mercury is the closest Jupiter is the biggest
planet to the Sun planet of them all
 Sex Education Infographics

Venus Mars
Venus has a beautiful Despite being red, Mars is
name, but it’s hot actually cold

Neptune Mercury
Neptune is the farthest Mercury is the closest
planet from the Sun planet to the Sun
 Sex Education Infographics

2019 Venus
Venus has a beautiful
name, but it’s hot

2018

Neptune
2020 Neptune is the farthest
planet from the Sun

Mars
To modify this graph, follow the link, Despite being red, Mars is
change the data and replace it actually cold
 Sex Education Infographics
201 201 202
8 9 0
201
6
201
Venus Neptune 7
Venus has a beautiful Neptune is the farthest
name, but it’s hot planet from the Sun

Mars Earth
Despite being red, Mars is Earth is the beautiful To modify this graph, follow the link,
actually really cold planet we all live on change the data and replace it
 Sex Education Infographics

202
1 453,432
202 202 Neptune
0 2 Neptune is the farthest
201 201
8 9 planet from the Sun

789,324
Mars
Despite being red, Mars is
actually cold

To modify this graph, follow the link, change the data and replace it
 Sex Education Infographics

Neptune
Neptune is the farthest
planet from the Sun

25% 35% 40%

Earth
Earth is the beautiful
planet we all live on

30% 15% 55%

To modify this graph, follow the link, change the data and replace it
 Sex Education Infographics

Mercury

Mercury is the closest

planet to the Sun

Venus Mars Neptune

Venus has a beautiful Despite being red, Mars is Neptune is the farthest
name, but it’s hot actually really cold planet from the Sun
 Sex Education Infographics

Mars Neptune Saturn Mercury

Despite being red, Mars is Neptune is the farthest Saturn is a gas giant and Mercury is the closest
actually cold planet from the Sun has many rings planet to the Sun

Venus 35%
456,876,093
Sun 20%
Venus
Venus has a beautiful Earth 10%
name, but it’s hot
Jupiter 25%
 Sex Education Infographics

345,654 876,345
Mars Neptune
Despite being red, Mars is Neptune is the farthest
actually cold planet from the Sun

Mercur 100,34 Mercur 390,87

y 5 y 6
254,30 485,46
Earth Earth
9 9
 Sex Education Infographics

1950 1962 1981 2005

Mars Mercury Venus Jupiter
Despite being red, Mars is Mercury is the closest Venus has a beautiful Jupiter is the biggest
actually really cold planet to the Sun name, but it’s hot planet of them all
 Sex Education Infographics

Mercury Jupiter
Mercury is the closest Jupiter is the biggest
planet to the Sun planet of them all

14 years old 21 years old 30 years old 44 years old

Mars Venus
Despite being red, Mars is Venus has a beautiful
actually really cold name, but it’s hot
 Sex Education Infographics

Mercury

Mercury is the closest

planet to the Sun

Yes No

Venus has a beautiful Neptune is the farthest

name, but it’s hot planet from the Sun
 Sex Education Infographics
Women
Venus
Venus has a beautiful
name, but it’s hot
Mars
Despite being red, Mars is
actually really cold
Mercury
Mercury is the closest
planet to the Sun
Men
Neptune
Neptune is the farthest
Saturn planet from the Sun
Saturn is a gas giant, two
main gasses
Earth
Sun Earth is the beautiful
It’s the star at the center of planet we all live on
the Solar System
Jupiter
Jupiter is the biggest
planet of them all
Sex Education Infographics

40% 60%

Mars Venus
Despite being red, Mars is Venus has a beautiful
actually really cold name, but it’s hot

Mercury 5/10

Jupiter 4/10

Saturn 8/10
 Sex Education Infographics

Mars Venus
60% Despite being red, Mars is Venus has a beautiful 40%
actually cold name, but it’s hot

100K 205M 35%

Jupiter Neptune Saturn
Jupiter is the biggest Neptune is the farthest Saturn is a gas giant and
planet of them all planet from the Sun has many rings
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