LIOFILIZADOS, ALBUMINA Y FACTOR VIII

Integrantes:
Jeniffer Avila V. Nicole Garrido Kaarem Lasmar L.

Consiste en separar el agua de una sustancia, o de una disolucin, mediante congelacin y posterior sublimacin a presin reducida del hielo formado, para dar lugar a un material esponjoso que se disuelve posteriormente con facilidad. Se utiliza en la deshidratacin de los alimentos, materiales biolgicos y otros productos sensibles al calor.

APLICACIONES

Vacunas Plasma sanguneo Venenos Microorganismos Medicamentos Alimentos crudos y cocidos Jugo

HISTORIA

Los cientficos franceses Bordas y DArsonval en 1906 y el americano Shackell en 1909, descubren la aplicacin del principio fsico de la sublimacin, construyendo un sencillo aparato de liofilizacin de laboratorio. El gran impulso se la aplicacin industrial de la liofilizacin, se debe a los trabajos de E.W Flosdorf yS.Murdd, que trabajando en la escuela de Medicina de la Universidad de Pennsylvania, liofilizan los primeros productos para uso clnico en gran escala, principalmente sueros y plasma humano. Durante la segunda guerra mundial, los bancos de sangre americanos, empiezan a producir industrialmente plasma humano liofilizado para el ejrcito.

En esta poca, Fleming, Flory y Cain, descubren la penicilina. El gran xito de la desecacin del plasma y su buena conservacin por liofilizacin fue rpidamente aplicado a la penicilina y a continuacin a muy diversos antibiticos, enzimas, sueros y vacunas a fines de prolongar su actividad teraputica. Gran nmero de resumenes de eventos cientficos y trabajos tcnicos, han sido publicados desde entonces, tanto perfeccionando la tcnica del proceso y los equipos e instalaciones, como introduciendo nuevas aplicaciones de la liofilizacin a nivel de investigaciones o de la industria.

ETAPAS DE LIOFILIZACIN

1.- Preparacin: de la materia prima previo a su tratamiento. El proceso de liofilizacin no admite manipulacin luego de realizado, las sustancias deben ser convenientemente preparados antes del proceso (limpiados, pelados, acondicionados, cortados, cubeteados y blanqueados o sulfitados cuando sea necesario). Para aumentar la permeabilidad, se hacen agujeros en la piel de algunos alimentos(arndanos, guisantes). A la carne se le saca la grasa, ya que interfiere con el proceso de sublimacin, y cuando se la corta, se lo hace perpendicular a la fibra, para facilitar la transferencia de calor y el escape del vapor de agua durante el secado. Los lquidos deberan concentrarse previamente para disminuir el contenido de agua, y de esta manera acelerar el proceso de liofilizado.

2.- Congelacin inicial: es una operacin previa y obligatoria. El tiempo necesario depende de varios factores como la cantidad, concentracin y naturaleza del producto. En lneas generales se puede decir que una congelacin adecuada es la base para que el producto liofilizado presente ptimas condiciones de aspecto, conservacin de sus propiedades originales y rpida rehidratacin. Se realiza a temperaturas inferiores a la desolidificacin total, o sea, el producto debe estar congelado a temperaturas entre 10 y 15 C por debajo de su temperatura eutntica.

3.- Sublimacin o desecacin primaria: es la etapa en la que la mayor parte del agua libre (en forma de hielo) pasa a vapor. Los parmetros temperatura, presin y tiempo pueden ser modificados independientemente pero estn intimamente relacionados, no es posible modificar, sin que se afecten los otros, por lo que en todo momento deben ser considerados conjuntamente y analizados sus efectos.
4.Desorcin o desecacin secundaria: Su misin es eliminar las ltimas trazas de vapor de agua, evaporando el agua no congelada ligada al producto. Se lleva a cabo a una temperatura inferior a la de desnaturalizacin del producto y se logra una humedad final hasta valores inferiores al 1 %.

DIFERENCIAS ENTRE EL SECADO

CONVENCIONAL Y LA LIOFILIZACIN
Secado convencional Liofilizado

Ventajas de la tcnica de liofilizacin.

La temperatura a que es sometida el producto, est por debajo de aquella a la que muchas sustancias inestables sufren cambios qumicos. 3.2-Debido a la baja temperatura que se opera, la prdida del constituyentes voltiles, es mnima, se reduce el peligro de contaminacin microbiana y los preparados enzimticos no sufren alteraciones. 3.3-Se eliminan los fenmenos de oxilacin, dado que se opera y envasa a alto vaco.

-La gran porosidad del producto facilita con rapidez la reconstitucin por la adicin de agua o del solvente adecuado. -Al ser despreciable la humedad remanente , el producto puede ser almacenado por tiempo ilimitado, constituyendo productos de larga estabilidad. Todas estas particularidades pueden resumirse en: una estabilidad ptima, una solubilidad fcil, rpida y completa; una conservacin ilimitada; una buena proteccin contra las influencias externas nacivas y una rpida disponibilidad de uso.

Desventajas de la liofilizacin:

-Es un proceso costoso. -Necesidad de personal calificado en la operacin y mantenimiento de los equipos. -Elevado costo de inversin de las instalaciones y equipos. En la Empresa Farmacutica "8 de Marzo"; el Departamento de tecnologa Farmacutica se dedica a la recuperacin de materias primas , que perdieron sus propiedades de esterilidad; mediante la filtracin esterilizante y su posterior liofilizacin .

QU ES LA ALBMINA?

Es la protena ms abundante en el plasma. Est constituida por 585 aminocidos con 17 puentes disulfuro entrecruzados en su molcula, y tiene un peso molecular de 67.000 dalton. El contenido total de albmina en el organismo est sobre los 300 gramos, de los cuales 120 g (40%) estn en el plasma. Por cada 500 ml de sangre perdida, solamente se pierden 12 g de albmina (4% de la albmina corporal total) y es reemplazada por sntesis normal en 3 das. En condiciones normales, la concentracin de protenas totales del plasma vara entre 6,2 y 7,9 g/dl, siendo la concentracin de albmina entre 3,6 y 5,2 g/dl. La albmina ejerce entre el 75% y 85% de la presin onctica de la sangre, que es de 20 mmHg.

FUNCIONES principales funciones Una de las DE LA ALBMINA

de la albmina normal es la de transportar y almacenar una amplia variedad de sustancias de bajo peso molecular como bilirrubina, cortisol, hormonas sexuales, cidos grasos libres y algunos medicamentos. En los neonatos hiperbilirrubinmicos, la bilirrubina se combina con la albmina limitando as su ingreso a los tejidos hidrofbicos del cerebro, atenuando con ello la toxicidad en los procesos hemolticos graves que se presentan a esa edad.

La mitad del calcio circulante est combinado con la albmina, por lo que la interpretacin clnica de la disminucin del calcio srico depende de la concentracin de la albmina. Esto se debe a que la fraccin biolgicamente activa del calcio es la forma ionizada o libre.

CONCENTRACIN DE ALBMINA EN LA SANGRE.

La albmina es sintetizada en el hgado. Los niveles de albmina en la sangre no son generalmente un ndice sensible de la funcin heptica, porque la degradacin de la albmina circulante disminuye siempre que est deprimido el ndice de sntesis, cualquiera sea el mecanismo del efecto anterior.

El hgado normal produce de 12 a 15 gramos de albmina por da y puede aumentar la produccin en ms de 2 gramos por da cuando hay prdidas mayores de 3,5 gramos por da (Sndrome Nefrtico) para prevenir la hipoalbuminemia.

OBTENCIN DE LA ALBMINA.

La albmina humana se puede obtener de plasma o placentas humanas. A nivel industrial se prepara por fraccionamiento de mezclas de plasma obtenido de cientos de donantes sanos. Todas las unidades de plasma utilizadas en el proceso son sometidas individualmente a un despistaje serolgico para el antgeno de superficie de la hepatitis B (HBsAg), y anticuerpos para el virus de la hepatitis C (HCV), el virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1 y 2 (HIV 1 y 2), el Tripanosoma cruzi (Enfermedad de Chagas) y el Treponema pallidum (Sfilis).

El mtodo utilizado en su obtencin fue desarrollado por Cohn y consiste en someter el plasma humano a un proceso de fraccionamiento con etanol fro a diferentes concentraciones y variaciones de temperatura, fuerza inica y pH para obtener diferentes fracciones o pastas.

La fraccin I contiene factor VIII y fibringeno.

La fraccin II contiene inmunoglobulinas y la fraccin V, albmina. Las fracciones III y IV contienen otras protenas y factores de la coagulacin

La albmina as preparada tiene una pureza del 95% mientras que por otros mtodos la pureza es del 85% o menos. Luego, el producto es sometido a pasteurizacin, calentndolo a 60C por 10 horas. El fraccionamiento con etanol es de probada actividad bactericida, y la pasteurizacin garantiza an ms la seguridad transfusional del producto. La solucin de albmina est ajustada a pH fisiolgico (6,7-7,3), no contiene preservativos y ha sido esterilizada durante el proceso de filtracin.

USOS DE ALBMINA.

Luego de su administracin la albmina humana tiene una vida media de 16 horas.

Se requiere de 48 horas luego de su administracin para alcanzar el equilibrio entre los compartimientos intravascular e intersticial. La solucin al 5% es isosmtica con el plasma y puede ser usada como expansor de la volemia. Las soluciones al 20% y 25% tienen concentraciones 4 y 5 veces mayores que la del plasma. Por lo tanto, cuando se administran por va intravenosa, por cada volumen de solucin se incrementa la volemia en 3,5 veces en un lapso de 15 minutos. Ello es debido al paso de lquido del espacio intersticial al intravascular pudiendo ocasionar sobrecarga circulatoria e incrementando la deshidratacin intersticial.

FACTOR VIII

Que es el factor VIII?

El factor VIII o factor antihemoflico es un factor de la coagulacin necesario para se produzca una correcta coagulacin sangunea tras una hemorragia. Las personas que nacen con dficit del factor VIII o que adquieren este dficit con el tiempo mediante la formacin de anticuerpos que lo inactivan, necesitan la administracin de factor VIII en determinadas situaciones (antes de una ciruga, tras heridas o hemorragias graves). El factor VIII que se utiliza en estos casos se extrae unas veces del plasma humano y otras veces es modificado genticamente a partir de protenas bovinas, de ratn o de hmster.El gen (fragmento de ADN) que codifica la sntesis de la protena del Factor VIII se encuentra ubicado en el cromosoma X.

El Factor VIII es una glicoprotena que se sintetiza en las clulas hepticas (hepatocitos) y en las clulas endoteliales, inicialmente como una protena precursora de cadena sencilla de 2.351 aminocidos con un peso molecular de 265.000 daltons.

La molcula precursora intacta comprende tres tipos de dominios.

Dominio A: tres segmentos A (A1, A2, A3), cada uno de 330 aminocidos aproximadamente. Dominio B: un segmento central nico que consta de 980 aminocidos

Dominios C: dos segmentos C (C1, C2) de 150 aminocidos cada uno.

En el plasma, la molcula de Factor VIII es escindida para producir dos pptidos, una cadena amino terminal pesada (dominios A1, A2, B) y una cadena carboxi terminal liviana (A3, C1, C2). La protena circula como un dmero, con iones de calcio ligando entre s las dos cadenas mediante el enlace de los dominio AyC.
Cuando se la activa con trombina, la cadena pesada se escinde, liberando el dominio B, que no se requiere para la actividad de la coagulacin. La trombina generada durante el proceso de coagulacin potencia la actividad coagulante.

Varias escisiones adicionales generan pptidos de 50, 43 y 73 kilodaltones (kd), producindose una actividad de coagulacin mxima. Si se efectan ms escisiones se inactiva la actividad coagulante de la protena del Factor VIII. La protelisis es en s misma un acontecimiento inactivante. El Factor VIII se inactiva al actuar la Protena C Activa (PCA) en la Arginina 336 formando una banda de 59 kd y otra de 43 kd. El Factor X lo inactiva mediante la protelisis en Arginina 336 y 1.721 generando una banda de 67 kd. La trombina lo inactiva al activar la PC que es su inhibidor fisiolgico. Por s solo, el Factor VIII es una molcula inestable altamente reactiva. Se estabiliza en el plasma mediante el enlace con el Factor von Willebrand.

ELABORACIN DEL FVIII

Los criterios para la preparacin del Factor VIII incluyen: Donaciones seguras provenientes de donantes sanos. Anlisis individual de cada donacin contra patgenos conocidos, especialmente VHB, VHC y VIH 1 y 2. Procesamiento rpido y diestro que conserve las cantidades activas presentes del factor de coagulacin y mejorar el rendimiento final. Uso de una tecnologa de reduccin viral para garantizar que los productos son seguros y no transmitirn enfermedades virales. Los factores de coagulacin se encuentran en las siguientes preparaciones de tratamiento ordenadas segn su concentracin de menor a mayor: -Sangre completa -Plasma -Crioprecipitado -Concentrado de factor VIII

La cantidad de cualquiera de los factores de coagulacin en la sangre completa o en el plasma es insuficiente en proporcin al volumen necesario para una terapia adecuada en la gran mayora de los episodios de sangrado.
En muchos casos de hemofilia A leve y en la mayora de los casos de la enfermedad de von Willebrand, el propio organismo es capaz de liberar suficiente Factor VIII si es estimulado por la hormona sinttica llamada Desmopresina (DDAVP). Las hemorragias graves o las cirugas requieren terapia de reemplazo continua o intermitente para mantener niveles adecuados de los factores de la coagulacin.

USOS DEL FACTOR VIII:

La dosis adecuada de factor VIII puede ser diferente para cada paciente. sta depende del peso corporal, del tipo de hemorragia que se vaya a tratar, del tipo de ciruga y de la respuesta individual de cada persona al tratamiento. Por este motivo, la dosis de cada presentacin existente de factor VIII ser establecida por su mdico en cada caso concreto.

FIN