BIOQUÍMICA

o Semestre-2022

Departamento Académico de Cursos Básicos

Determinación de concentración
en suero triglicéridos, colesterol
HDL-C, LDL-C y VLDL-C

Semana 12
Sesión 24
Contenido
o Dislipidemia
o Espectro de absorción de luz
o Métodos de determinación de colesterol,
triglicéridos y lipoproteínasAplicación del
espectrofotómetro
o Muestra de sangre para determinar parámetros de
perfil lípidico
o Procedimientos experimentales
o Determinación de la concentración de colesterol,
triglicéridos, VLDL-c, HDL-c, LDL-c
o Apliquemos lo aprendido
o Integremos lo aprendido
 Resultado de aprendizaje de la sesión
Resultado de aprendizaje de la sesión

Al finalizar la sesión, el estudiante

puede determinar la concentración
sérica de colesterol total,
triglicéridos, LDL, VLDL y HDL a
través de diferentes procedimientos
https://acortar.link/vkd2ZC experimentales.

04
 Reflexión desde la experiencia
Participemos en lasReflexión
siguientes preguntas
desde la experiencia
¿De las estructuras que se muestran a continuación indique cuál es el
colesterol y el triglicéridos?

(A)

(B)
05
Importancia del perfil
lípidico
 Dislipidemia

o Cualquier alteración en los niveles normales de lípidos plasmáticos

(fundamentalmente colesterol y triglicéridos) se conocen como
DISLIPEMIAS.

o Son una serie de diversas condiciones patológicas cuyo único elemento

común es una alteración del metabolismo de los lípidos, con su consecuente
alteración de las concentraciones de lípidos y lipoproteínas en la sangre.

Se clasifican según su etiología en dos grandes grupos:

1. HIPOLIPIDEMIAS: Raras y de origen genético

2. HIPERLIPIDEMIAS: Muy comunes en la población general

07
 Dislipidemia
Concentraciones anormales
de lípidos sanguíneos:

• Incremento de colesterol o
hipercolesterolemia
• Incremento de triglicéridos
o hipertrigliceridemia
• Incremento de LDL-c o
disminución de la HDL-C

Son consideradas como un factor

de riesgo para enfermedades
cardiovasculares.
 Enfermedad cardiovascular

09
https://acortar.link/UsYEUM
Métodos de determinación de
colesterol, triglicéridos y
lipoproteínas
Métodos de determinación de
colesterol

https://www.valtek.cl/wp-content/uploads/2020/02/Colesterol-total-CHOD-PAP.-
Inserto.pdf

011
 Toma de muestra de sangre

Condiciones para la toma de muestra.

o Ayuno de 9-12 horas.
o No ingerir bebidas alcohólicas 24 horas antes.
o Conveniente que el paciente permanezca 5-10
minutos sentado antes de la extracción.
o No oclusión venosa prolongada antes de la
venipuntura.
o La oclusión prolongada puede conducir a
hemoconcentración y aumento en un 15 % de los
niveles de CT.

Almacenamiento:
o Colesterol, HDL, Tg 4oC < 48 horas o
(LDLc Friedewald) -20 ó –70oC > 48 horas

o Lipoproteínas (Ultracentrifugación): MUESTRA:

4oC procesar de inmediato, no congelar - Suero, Plasma (EDTA) 13
- Plasma: (lipoproteínas
ultracentrifugación, electroforesis)
Determinación de
colesterol total
 Determinación de colesterol total

Métodos Analíticos

Enzimáticos (CHOP-POD):

Esteres + H2O Colesterol + Ácido graso

Colesterol Colesterol esterasa

Colesterol + O2 Colestenona + H 2O2

Colesterol oxidasa

H2O2 + Fenol + 4 amino antipirina Rx de color (505 nm)

Peroxidasa
TÉCNICA: 1,0 mL de reactivo de trabajo y 0,01 mL de muestra, mezclar e
incubar por 10 minutos a 37ºC. Intervalos de referencia: ≤ 200 mg/dL.
 Determinación de colesterol total
1. Identificar tubos de ensayos de 13x100 mm

Concentración del St: 200 mg/dL

B St P
¿Material? LEER TÉCNICA

AJUSTAR EL
EQUIPO

FC= Conc. St/Abs St Conc. Paciente=FC x 20

Abs Paciente
INTERPRETACIÓN Intervalos de referencia: ≤ 200
Determinación la
concentración sérica de
triglicéridos
Métodos de determinación de
triglicéridos

https://www.valtek.cl/wp-content/uploads/2020/02/Triglic
%C3%A9ridos-GPO-PAP.-Inserto.pdf
 Determinación la concentración
sérica de triglicéridos
Enzimático- Colorimétrico

Triglicéridos + H2O Glicerol + AG

Lipasa

Glicerol + ATP Glicerol-3-fosfato + ADP

Glicerol quinasa

Glicerol-3-fosfato + O2 Dihidroxiacetona + H 2O2

Glicerofosfato oxidasa fosfato

H2O2 + 4-AAP* + DCBS** Reacción de Color (520 nm) + 4 H 2O

Peroxidasa
TÉCNICA: 1 mL del reactivo con 0,01 mL del suero, se mezcló e incubó por 5
minutos a 37ºC.
Valores de referencia: 36 a 165 mg/dL.
*4-Amino antipirina ; **Acido 3,5-Dicloro-2-Hidroxibencensulfónico
 Determinación la concentración
sérica de triglicéridos
1. Identificar tubos de ensayos de 13x100 mm

Concentración del St: 200 mg/dL

B St P
¿Material? LEER TÉCNICA

AJUSTAR
EL
EQUIPO
Abs Estándar: 0.380 FC= Conc. St/Abs St Conc. Paciente=FC x
Abs Paciente: 0.620 Abs Paciente
INTERPRETACIÓN Valores de referencia: 36 a 165 mg/dL.
Perfil lípidico

22

https://acortar.link/pi2Pjv
Lipoproteínas
Determinación la
concentración sérica
de HDL-colesterol
 Determinación la
concentración sérica de HDL-
colesterol
1. Precipitación de lipoproteínas de baja densidad (VLDL-c y LDL-
c)
2. Determinación de la concentración de HDL, a partir del
sobrenadante. Para ello, se usará el reactivo de trabajo de
colesterol, lo que varía es la concentración del estándar

sobrenadante (HDL-c)
Precipitado (VLDLc y LDL-c)
34
 Determinación la concentración
sérica de HDL-colesterol
1. Precipitación de lipoproteínas de VLDL-c
y LDL-c

2. Determinación de la concentración de
HDL-c.

35

https://www.valtek.cl/wp-content/uploads/2020/02/Colesterol-HDL.-Inserto.pdf
 Determinación la concentración
sérica de HDL-colesterol
FUNDAMENTOS DEL METODO El
HDL-Colesterol:

Es obtenido precipitando selectivamente

las lipoproteínas LDL y VLDL,
quedando el primero en solución. El HDL-
Colesterol en solución se determina por
acción de las enzimas Colesterol éster
hidrolasa y Colesterol oxidasa. La primera
libera el colesterol de los ésteres de
colesterol, y la segunda oxida el colesterol
libre produciéndose peróxido de
hidrógeno, el cual en presencia de la
enzima peroxidasa reacciona con el
sistema cromogénico dando origen a un
compuesto coloreado que absorbe a 505
nm.
https://www.valtek.cl/wp-content/uploads/2020/02/Colesterol-HDL.-Inserto.pdf
 Determinación la
concentración sérica de HDL-
Métodos de Determinación HDLc: colesterol
•Métodos de Precipitación Química
(Heparina- Mn+2: Referencia), Sulfato de dextrano, fosfotugstato de Sodio-
Mg+2)

Fundamento: precipitación de las LDL-c, VLDL-c y quilomicrones con un

reactivo precipitante (ácido fosfotúngstico e iones de magnesio), quedando
en el sobrenadante las lipoproteínas de alta densidad (HDL-c), cuya
concentración sérica se determina por el método para el colesterol total
(CHOP-POD).
Técnica: 1 mL de reactivo de colesterol enzimático y 0,1 mL del
sobrenadante mezclándose e incubándose por 10 minutos a 37ºC. Valores
de referencia: 40-60 mg/dL.
 Determinación la
concentración sérica de HDL-
FD= Vf/Vi colesterol
Vf= (500 +200) µL= 700 µL
Vi= 200 µL
1. Adicionar500 µL
FD= 3.5

Precipitado 1
2. Adicionar 200 µL de suero

12X75mm

Sobrenadante (HDL-c)
Precipitado (VLDLc y LDL-c)
3. Mezclar (VORTEX) y incubar por
15 min a TA.
4. Centrifugar a 3000 rpm por 15 min,
o por 3 min a 10000 rpm
Muestra (suero) de
paciente/desconocido
 Determinación la
concentración sérica de HDL-
colesterol
76,5 mg/dL
B ST D
1000 uL
PRECIPITAD
B O
SOBRENADAN
St D
TE Ajustar a 0 Abs y 100%T

-Mezclar (vortex)
-Incubar 10 min a 37°C
Colesterol ester hidrolasa
Colesterol oxidasa
Peroxidasa 505 nm

505 nm
 Determinación la
concentración sérica de HDL-
Abs St= 0.400
colesterol
Abs Desconocido= 0.030

Obtenidas las absorbancias:

Calcular el Factor de calibración: 76,5 mg/dL (concentración de St de HDL-c)
Abs St 505 nm

Concentración de HDL-c desconocido= FC x Abs desconocido 505 nm x FD (3.5)

INTERVALOS DE REFERENCIA:

40
Determinación la
concentración sérica
de LDL-colesterol

(Fórmula de Friedewald)
 Determinación la
concentración sérica de LDL-
Triglicéridos: 229 mg/dL colesterol
Colesterol total:143 mg/dL
HDL-c: 20 mg/dL

Determinación de Lipoproteínas:
VLDL-c= Tg/5 (Friedewald)= 229 mg/dL/5= 45.8 mg/dL=46 mg/dL
LDL-c= Colesterol total -HDL-VLDL (Precipitación y Friedewald)
LDL=(143-20-46)mg/dL=77 mg/dL

Intervalos Referenciales:

HDL-c : mayor a 45 mg/dL

LDL-c: menor a 130 mg/dL
VLDL-c: menor 30 mg/dL
 Perfil lípidico

Colesterol
Triglicéridos
HDL colesterol
LDL-c, VLDL -c (Friedewald)

LDL-C=COLESTEROL TOTAL-HDLColesterol-VLDL
Colesterol
LDL colesterol=(143-?-45.8) mg/dL= XX mg/dL

LDL-C (mg/dL)= COLESTEROL TOTAL(mg/dL)-HDL-C (mg/dL) –TRIGLICÉRIDOS

(mg/dL)/5
VLDL-c= Triglicéridos/5= mg/dL ¿LDLc qué debo tener?
VLDLc=229 mg/dL/5=45.8 mg/dL Colesterol total= 143 mg/dL
Triglicéridos son necesarios para
obtener la concentración de VLDLc.
31
Concentración de HDL-c
 Determinación la
concentración sérica de LDL-
colesterol
¿Cuál es la interpretación clínica de acuerdo a los
datos obtenidos?

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS:
Dislipidemia asociada a un incremento de
triglicéridos y VLDL-c con disminución de HDL-
c.
Apliquemos lo aprendido
 Apliquemos lo aprendido

Participemos en las siguientes preguntas

¿Cómo determinaste la concentración de

las lipoproteínas?

¿Puede analizar la concentración de las

lipoproteínas obtenidas en la práctica del día de
hoy?

https://acortar.link/NhlLlJ

46
Integremos lo aprendido
 Integremos lo aprendido
Participemos en la siguiente pregunta

¿Qué Participemos en las siguientes preguntas

aprendiste ¿Qué indicas las figuras que se muestran a continuación?
hoy?

1) 2)
 Integremos lo aprendido
Participemos en la siguiente pregunta

Participemos en las siguientes preguntas

¿Qué indicas las figuras que se muestran a continuación?

3) 4)
Actividad asincrónica
 Actividad asincrónica
Realizar un informe (trabajo colaborativo).
Este informe debe presentar las siguientes partes:

o Portada (título: Determinación de la concentración sérica

colesterol total, triglicéridos, HDL, VLDL y LDL colesterol,
persona quien lo realizó, sección-hora-docente)
o Introducción
o Objetivos
o Materiales y métodos (Procedimiento experimental)
o Resultados
o Conclusiones
o Referencias
52

Fecha y hora de entrega será establecida por el docente.

 Referencias Bibliográficas

DE CONSULTA

Cuadros Trillos, G. (2019). Mapas conceptuales en bioquímica (1.a ed.). El Manual Moderno
http://elibro.net.cientifica.remotexs.co/en/lc/ucsur/titulos/128368

Melo, V. y Cuamatzi, O. (2019). Bioquímica de los procesos metabólicos. Reverté, S.A.

https://elibro.net/es/ereader/ucsur/127790

Müller-Esterl, W. (2020). Bioquímica: fundamentos para medicina y ciencias de la vida. Reverté, S.A.
http://elibro.net.cientifica.remotexs.co/en/lc/ucsur/titulos/129564

Piña Garza, E., Martínez Montes, F., Riveros Rosas, H., Laguna, J. y Pardo Vázquez, J.P. (2018).
Bioquímica de Laguna y Piña (7.a ed.). El Manual Moderno.

Pulido Villamil, X. C. (2019). Prácticas de bioquímica y estudios de casos en ciencias de la salud.

Universidad de Tolima. http://elibro.net.cientifica.remotexs.co/en/lc/ucsur/titulos/142510 53

Simes, L. E. (2020). Introducción a la bioquímica: interpretación de análisis clínicos. Universitas.

http://elibro.net.cientifica.remotexs.co/en/lc/ucsur/titulos/172171
 Referencias Bibliográficas

OBLIGATORIAS

Bittencourt, J. (2018). The Power of Carbohydrates, Proteins, and Lipids (4.a ed.). CreateSpace, An
Amazon.com Company. https://www.researchgate.net/publication/322473648

Macías Alvia, A., Hurtado Astudillo, J. R., Cedeño Holguín, D. M., Cedeño Holguín, F. A., Scott ÁLava,
M., Vallejo Valdivieso, P. A., Macías Alvia, M. J., Santana Sornoza, J. W., Espinoza Macías, M. J.,
Ubillús Saltos, S. P., Arteaga Espinoza, S. X., Torres Macías, O. E., Pigüave Reyes, J. M., Pigüave
Reyes, Chavarría Cedeño, D. I., & Intriago Sánchez, K. J. (2018). Introducción al estudio de la
bioquímica (1.a ed.). Área de Innovación y Desarrollo, S.L https://doi.org/10.17993/CcyLl.2018.28

Nelson, D. L., y Cox, M. M. (2017). Lehninger Pinciples of Biochemistry (7.a ed.). W.H Freeman
Macmillan Learning.

Navarro, M., Salazar, J., Salazar, Y. Zarkovic, G. (2022). Manual de prácticas de laboratorio.
Bioquímica. Universidad Científica del Sur. 54