TOMA DE MUESTRAS

MICOLOGÍCAS

Y EXAMEN DIRECTO DE HONGOS

INTEGRA
NTES:
Edwar Flores
 Amelia Sotomayor
Cristian Castro
Danilo Perales
Janet Reyes
Godolfredo Gutiérrez
SEDE
PETIT THOUARS

INSTITUTO DANIEL
3
ALCIDES CARRIÓN
CICLO
 REQUISITOS PARA UN LABORATORIO
MICOLOGÍCO

Requerimientos básicos para un laboratorio de micología:

• Espacio para recolectar muestras.
• Herramientas para análisis directos, cultivos e identificación
de hongos.
• Técnicas de detección de anticuerpos contra hongos.
• Idealmente, laboratorio de biología molecular para estudios
de ADN fúngico.
 ANTES DE REALIZAR LA TOMA DE
MUESTRA MICOLOGICA:
 Orden del médico
 Datos completos del paciente.
 Estudios de laboratorio.
 Características clínicas de las infecciones clínicas.
 Las muestras deben estar siempre acompañadas con todos los datos por el
laboratorio y los que el médico considere relevante para el estudio.
 El tipo de muestra dependerá de la micosis y de su localización anatómica.
 Los recipientes de recolección deben ser estériles.
 Sellados y etiquetados correctamente con los datos del paciente
MATERIALES PARA TOMA DE MUESTRA
MICOLOGÍCA

EPP Laminas Portaobjetos Alcohol 70° Hisopos Estériles Cinta Adhesiva

Plumón marcador Bisturí Algodón Pinzas Quirúrgicas Placa Petri

PROCESO PARA LA TOMA
DE MUESTRA
P LUZ DE WOOD
Se recolectan escamas abundantes del borde de la lesión o de

I
Se emplea
varios equipo
sitios, previo
Se raspa conal una
estudio micológico
cucharilla, para de
una hoja mejorar
bisturílaodetección
de infeccionescon
simplemente micóticas. Es útil en micosis
un portaobjetos. superficiales.
Las escamas Implica una
se colocan
lámpara
dentro dedeuna
luz caja
ultravioleta
de Petrique emitedos
o entre radiaciones de 320
portaobjetos a 400 onm
estériles

E
(promedio
flameados, 366
y senm) en una
cubren con habitación
una hojaoscura. La luz
de papel induce
donde fluorescencia
pueden
reconocible, facilitando la identificación de estas infecciones.
anotarse los datos.

L
El procedimiento de recogida se lleva a cabo según protocolo U
Ñ
(desinfección local de la piel y la lámina ungueal con alcohol de
70º, mediante técnica estéril se corta la mayor parte posible de
porción ungueal afectada y se arrastra todo el detritus subungueal

A
sobre un recipiente estéril que permita su transporte cerrado con
seguridad hacia el laboratorio.
P Antes de tomar muestras, es importante limpiar el área mediante una
gasa o algodón con alcohol de 70 grados. La muestra debe obtenerse

E
de la parte activa del borde de la lesión. En casos de tiña en el cuero
cabelludo, se debe intentar recolectar folículos pilosos además de
fragmentos de pelos afectados. Estos fragmentos de pelo suelen

L
desprenderse fácilmente al raspar la zona, sin requerir arrancarlos .

O M
U
Se utilizan asas de alambre de platino rectas o redondas, o de
C
O
preferencia hisopos. Si el análisis no es inmediato, estos últimos
se colocan en suero fisiológico y luego se refrigeran hasta
procesar la muestra, de preferencia con algún antibiótico para

S
evitar la reproducción bacteriana.

A
ANALSIS
DIRECTO
El examen directo con microscopía óptica
confirma hongos en productos biológicos
como escamas, pelos y líquidos. Es simple
y económica, usando asa de platino o
pipeta de Pasteur. Elementos fúngicos de 2
a 20 micrómetros se ven con lentes débiles
o medianas. Hongos patógenos son
escasos, oportunistas son comunes.
Solución Lugol colorea los exudados.
MATERIALES
NECESARIOS
EN EL Microscopio Pipeta KOH

ANALISIS
DIRECTO

Mechero La Muestra
 USO DE
Hidróxido de potasio (KOH)
REACTIVOS
Es un compuesto químico inorgánico de formula KOH, es una base fuerte de uso común. En el laboratorio
clínico su uso permite la identificación de micosis, se suelen utilizar 2 concentraciones, la de 20-30% para
uñas y del 10-15% para el resto de las muestras.

PROCESAMIENTO DE LA MUESTRA:
1. Colocar 1 gota de KOH al 10-30% sobre el portaobjetos.
2. Con ayuda de un asa de siembra coger una porción de la muestra a
estudiar y extenderla de forma homogénea.
3. Cubrir con laminilla 22X22 mm. El portaobjetos se coloca en cámara
húmeda a T.A. durante 60 min.
4. Este proceso se puede mejorar calentando la parte inferior del
portaobjetos con la muestra suavemente con un mechero Bunsen.
5. Observar al microscopio con aumento de 200X y 400X.
 COLORANTES QUE SE LE PUEDE AÑADIR AL KOH
KOH + DIMETILSULFÓXIDO KOH +GLICEROL

Agregar glicerol a la solución de KOH

La adición de DMSO acelera
evita la degradación de elementos
la clarificación, evita la
fúngicos, cristalización y deshidratación
necesidad del
entre el portaobjetos y el cubreobjetos,
calentamiento, la
haciendo que la preparación sea
cristalización y la formación
semipermanente. La versión con glicerol
de artefactos.
es la más empleada.

Reactivo Reactivos
• Añadir 40 ml de DMSO a 30 ml de agua destilada y disolver; luego •Preparación de solución de KOH al 15 %: Disolver 15 g de KOH en 40 ml de agua
añadir 10 g de KOH y disolver completamente; completar hasta 100 destilada, agregar 20 ml de glicerol y completar a 100 ml con agua destilada.
ml con agua destilada. Mezclar bien, evitando recipientes de vidrio para evitar precipitados.

Procedimiento
Se realiza como KOH Glicerol pero sin calentar la preparación; la
observación se debe realizar antes de 20 min. Para mantener la
preparación se debe guardar en cámara húmeda en frío.
Procedimiento
Se coloca el material en estudio en un portaobjetos y se agrega una gota de solución
de KOH. Después de mezclar adecuadamente, se coloca un cubreobjetos sobre la
muestra. Tras un tiempo para que el KOH aclare la muestra, se examina a aumentos
de x100, x400 o x1000. En caso necesario, se puede aplicar calor suave.
VISUALIZACION DE
MICROSCOPIO
1. Observar al microscopio con aumento de 200x y 400x
EJE
2. Con el objetivo de 20 aumentos se recorrerá la muestra hasta
tener sospecha de identificar hifas. M:

3. Una vez localizadas, se observarán con el objetivo de 40

aumentos. Se realizará la identificación y diferenciación de los
hongos, pudiendo encontrar hifas hialinas, tabicadas y
ramificadas de 4 a 6 μm de diámetro.
4. Las levaduras se visualizarán como elementos esféricos u Se realizaron los
ovalados (blastosporos), pudiendo presentar brotes y/o exámenes directos
en KOH 40% que
pseudohifas. mostró abundantes
5. Los hongos miceliales se verán como hifas hialinas o hifas fuliginosas
septadas
pigmentadas, tabicadas o no, de diámetro irregular según el
hongo al que corresponda
 BIBLIOGRAFIA
 http://paratecnicosdelaboratorio.blogspot.com/201
4/10/tincion-azul-de-lactofenol-o-azul.html

 https://www.laboratoriumdiscounter.nl/es/quimico
s/a-z/d/dimetilsulfoxido-dmso/#:~:text=El%20dime
tilsulf%C3%B3xido%20(DMSO)%20es%20un,punto%
20de%20ebullici%C3%B3n%20relativamente%20alt
o

 https://www.guia.reviberoammicol.com/Capitulo14
.pdf
MUCHAS
GRACIAS :)