UNIVERSIDAD NACIONAL DEL

ALTIPLANO
FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA

C U LT I V O S D E L E C H E
MASTITICA
(staphylococus, streptococus,
chericha coli clostidium,
listeria, bacillus)

PRESENTA:
QUISPE CUCHO Analia Kherly
 MASTITIS
• Se define como mastitis al proceso infeccioso e inflamatorio de las
glándulas mamarias, que genera alteraciones en el tejido glandular
y modifica los aspectos físicos, químicos y bacteriológicos de la
leche. Esta enfermedad puede ocurrir por múltiples factores como
alergias, alteraciones metabólicas, traumatismos e infecciones por
hongos, levaduras y con mayor frecuencia por bacterias.
 MASTITIS. LOS
MICROORGANISMOS MÁS
FRECUENTES
Los principales contagiosos patógenos son el Staphylococcus
aureus y el Streptococcus agalactiae, y este grupo de contagiosos
incluye también las bacterias Corynebacterium bovis,
Mycoplasma bovis y al Streptococcus dysgalactiae , aunque este
último es el único patógeno que tiene características de
contagioso y de ambiental.
 LA MUESTRA CLINICA
La limpieza de la areola mamaria y el pezón antes de la recogida de la leche no
disminuye la concentración bacteriana de la muestra.
Descartar los primeros mililitros de leche, Y para la recolección y transporte de las
muestras de leche se utilizaron tubos estériles de un solo uso de 15 ml, con 8 ml de
medio triptona, como medio de transporte y conservación de la muestra. Cada tubo
estaba debidamente etiquetado con el nombre o número de la vaca, la fecha y el
nombre del hato.
Materiales para la toma de muestras
Tubos estériles con tapa a rosca o descartables con tapón a presión.
Normalmente se utilizan tubos de 15 a 25 ml de capacidad debido a la
facilidad para manipular los mismos. Sin embargo, se pueden utilizar
viales o tubos de menor capacidad. Tubos de vidrio o plástico estériles
pueden obtenerse en laboratorios dedicados al procesamiento de muestras
de leche. En caso que se desee utilizar material de vidrio propio, se debe
limpiar cuidadosamente y esterilizar en autoclave a 121°C por 15 minutos
con las tapas ligeramente flojas. Las mismas deberán ajustarse luego de la
esterilización. Se recomienda colocar cinta de enmascarar o similar a cada
tubo para posibilitar la identificación de cada muestra utilizando bolígrafo
o marcador permanente. Esta práctica es preferible a escribir directamente
sobre el tubo de vidrio ya que facilita el lavado del material en el
laboratorio. Es conveniente identificar los tubos cuando están secos antes
del muestreo. Los viales de plástico se pueden identificar con marcador
permanente. Los tubos deberán posteriormente ubicarse en gradillas
adecuadas para su manipuleo y almacenamiento.
 MÉTODO DE SIEMBRA
una siembra inicial de la leche positiva a CMT en medios de cultivo como agar sangre
para aislar estreptococos y estafilococos, también agar Mc Conkey para
enterobacterias, se incubaron por 24 hrs, a 36°C, de las colonias abundantes y típicas
se les realizó un frotis con coloración Gram; a las Gram positivas se les hizo la prueba
de catalasa, posteriormente tanto a las gran positivas como a las gram negativas se les
realizó la bioquímica para identificar el microorganismo por género y especie por el
método comercial Microscana, hasta que se efectuó el cultivo en las 24 horas
siguientes
 MEDIOS DE CULTIVO
Para inocular placas de agar sangre Difco® al 5% y placas de agar Baird-Parker
Difco®. Las placas inoculadas se incubaron (37 °C por 24-48 h) en aerobiosis en una
estufa de cultivo Mod E Riossa. Las colonias que se desarrollaron en los medios de
cultivo, producto del crecimiento bacteriano, fueron resembradas en agar nutritivo
Difco® para su aislamiento y obtención de cultivo puro, a las condiciones
anteriormente descritas. A cada colonia obtenida se le realizó las pruebas de oxidasa,
coagulasa, catalasa y tinción Gram para la clasificación de género
 STAPHYLOCOCCUS

• Son las bacterias causantes

de hasta el 75% de las
mastitis infecciosas. Dentro
de ellos, los estafilococos
coagulasa negativos,
especialmente el s.
epidermidis, probablemente
están implicados en la
mayoría de las mastitis
MEDIOS DE CULTIVO

• El método estándar para

la detección e
identificación de
Staphylococcus incluye
el cultivo en una placa
de agar sangre no
selectiva, así como en
caldo de
enriquecimiento
 STREPTOCOCCUS

• Streptococcus es el nombre
genérico de un género de
bacterias responsables de
causar mastitis en vacas
lecheras: Streptococcus
agalactiae) es una causa
muy común de mastitis
subclínica en vacas de
leche.
MEDIOS DE CULTIVO

En general, para el
crecimiento de
estreptococos son
aptos diversos caldos
de cultivo y todos se
han utilizado para
detectar EGB, como el
caldo de
tioglicolato12 o el
caldo de Mueller-
Hinton5.
 ESCHERICHIA COLI

• Mastitis aguda
(generalmente de tipo
ambiental por E. coli)
Hay fiebre, dolor, calor,
hinchazón o dureza en la
ubre, la secreción
generalmente puede ser
acuosa o amarillenta.
MEDIOS DE CULTIVO

• El medio Luria-Bertani
(LB), es uno de los más
usados para el cultivo de
Escherichia coli y de otras
especies bacterianas,
debido a que es rico en
nutrientes, de fácil
elaboración y permite el
crecimiento de una gran
variedad de cepas.
 CLOSTRIDIUM

• Clostridium perfringens.
Esporádicamente puede ocasionar
mastitis fulminante. La secreción
de la ubre es sanguinolenta y con
burbujas de gas, la muerte
sobreviene en 20 días.
 MEDIOS DE CULTIVO

Utilizar los siguientes

medios: agar sangre para
anaerobios, como agar
Brucella, agar sangre
PEA, agar Schaedler.
 LISTERIA

• L. monocytogenes puede causar

mastitis bovina y ser secretada en
la leche, también se ha
reconocido que este
microorganismo puede llegar a la
leche por contacto con
superficies y utensilios
contaminados, por lo que el
riesgo de contaminación es
mayor.
 MEDIOS DE CULTIVO

BD Listeria Agar (Agar para

Listeria) es un medio selectivo de
diferenciación para el aislamiento
de Listeria monocytogenes y otras
especies de Listeria a partir de
muestras clínicas, alimentos y
productos lácteos.
 BACILLUS

• Es responsable en las glándulas

mamarias de las vacas infectadas
de la presentación de cuadros
clínicos da mastitis hemorrágicas
y ocasionalmente gangrenosas.
 MEDIOS DE CULTIVO

medio cromogénico y método para

la enumeración de Bacillus Cereus
en productos alimenticios. Este
medio cromogénico garantiza tanto
la rápidez como la confiabilidad de
los resultados.
 PRUEBAS QUIMICAS
Conductividad eléctrica de la leche
La Prueba de Conductividad
Eléctrica (PCE) se ha utilizado como
un indicador de la mastitis durante la
última década, se basa en el aumento
de conductividad eléctrica de la
leche debido a su mayor contenido
electrolítico especialmente iones de
sodio y de cloro y se ha desarrollado
como un método para monitorear el
estado de la mastitis en la vaca.
Papel indicador de mastitis
Este método, consiste en un
papel sobre el que se hace caer
directamente del pezón algunas
gotas de leche, se consideran
sospechosas las leches que dan
una coloración correspondiente a
un pH igual o superior a 7. La
prueba descubre el 50% de las
leches infectadas.
 PRUEBAS QUIMICAS
Prueba de Whiteside
La mezcla de leche con una
solución de NaOH al 4%
ocasiona que la leche se
gelifique formando grumos que
son visibles. Los grumos serán
más grandes conforme la leche
contenga mayor número de
células somáticas. Para hacer
más visible la reacción es
conveniente usar una placa de
acrílico negra que puede tener
dibujada 4 cuadros de 3 cm x 3
cm, uno por cada cuarto.
Procedimiento:
a) Colocar 5 gotas de leche fría
en el centro del cuadrito y
agregar 2 gotas de la solución
de NaOH al 4%.
b) Mezclar vigorosamente,
dispersando la leche en el
cuadrito por medio de un
palillo. Continuar mezclando
por alrededor de 20 segundos y
dar lectura al resultado.
 ANTIBIOGRAMA
El antibiograma es una técnica de estudio in Vitro de la actividad de los
antimicrobianos sobre un microorganismo determinado. La valoración de dicha
actividad constituye una de las bases fundamentales para el tratamiento de
muchas enfermedades infecciosas, ya que orienta en la selección de antibióticos
que se ha de utilizar en un enfermo en el que se conoce el agente causal de la
infección mediante el establecimiento de una predicción de la respuesta
terapéutica que se obtiene a través del análisis de datos y conceptos
microbiológicos, farmacológicos y clínicos continuamente actualizados. Los
microorganismos pueden clasificarse en:
Sensibles. Resistentes. Intermedios.
IDENTIFICACIÓN DE LOS ORGANISMOS
MÁS FRECUENTEMENTE AISLADOS

Los organismos más frecuentemente aislados en nuestro país

son los cocos Gram positivos (estafilococos y estreptococos). El
diagnóstico preliminar de S. aureus puede hacerse sobre la base
de la morfología de las colonias y la hemólisis. Una zona amplia y
una estrecha de hemólisis alrededor de las colonias son
características de S. aureus. El diagnóstico definitivo se hará
sobre la base de coloración de Gram, presencia de catalasa y
coagulasa en plasma de conejo. Estas son las pruebas mínimas
necesarias para un laboratorio de rutina. En casos que se
requiera una identificación más ajustada se pueden realizar más
pruebas (producción de acetoína, presencia de cumpling factor,
etc.). Es importante que se diferencien los estafilococos
coagulasa negativos de S. aureus, ya que la patogenicidad y
características epidemiológicas de ambos son distintas.
Gracias