HISTOTECNOLOGÍA

SEMANA 10
Método de coloración de Ziehl Neelsen

Dirección de Calidad Educativa

 Propósito:

Desarrolla el método de coloración de Ziehl Neelsen para

demostrar la presencia de Mycobacterium tuberculosis en
cortes histológicos.
Video “COLORACIÓN BK”

https://www.youtube.com/watch?v=RaSJUcv78Yk

- ¿Qué aplicaciones tiene la Coloración de

BK?
 HISTORIA
●
1869 Jean Antoine Villemin demuestra que la tuberculosis es contagiosa
inoculando material infectado humano en conejos de laboratorio.
●
1882 Robert Koch, aisla el Mycobacterium tuberculosis, (bacilo de Koch en su
honor).
●
1890 Koch y Camille Guérin desarrollan la tuberculina (derivado proteico
purificado del bacilo).

●
1921 Albert Calmette y Camille Guérin sintetizan la BCG (bacilo de Calmette-
Guérin)  de una variante atenuada de Mycobacterium bovis Canneti.
 ¿QUÉ ES LA TUBERCULOSIS?
●
Provocada por
micobacterias,
principalmente por
Mycobacterium
tuberculosis.
●
Compromete sobre todo a
los pulmones, pero puede
propagarse al SNC, aparato
digestivo, huesos,
articulaciones, etc.
TBC EXTRAPULMONAR
 Mycobacterium tuberculosis
●
Responsable de la mayor cantidad de casos de Tuberculosis.
●
Bacilo curvo o recto, intracelular obligado,
aerobio, inmóvil, con dimensiones de
1,4 x 0,3 x 0,6 micrómetros.
●
Pared gruesa y compleja de lípidos y proteínas.
●
Ante circunstancias adversas puede entrar en
latencia y retrasar su multiplicación de días a
años.
●
Reservorio natural ser humano (sano o enfermo).
 MICOBACTERIAS
NO
INMOVIL AEROBIO
BACILOS POSEEN PARED CELULAR
ES S
ESPORAS

NECESITAN
OXIGENO
NO POSEEN RICA EN
PARA BAAR
FLAGELOS LÍPIDOS
SOBREVIVI
R
 MICOBACTERIAS

Complejo Micobacterias no
Mycobacterium C.M.Leprae tuberculosas atípicas o
tuberculoso ambientales

POTENCIALMENTE PATÓGENOS
PATÓGENOS ESTRICTOS
SAPRÓFITAS
 Muestra
2-3
Muestras
La muestra más examinada es el
ESPUTO debido a que, como se ha
dicho, la tuberculosis pulmonar es
la más frecuente.
• Orina
• Líquido Cefalorraquídeo,
• Líquido Pleural
• Líquido Ascítico
• Sangre
• Pus De Cavidades Abiertas
• Biopsias
DESARROLLO DE LA
ENFERMEDAD

(1
Wells
os d e
Núcle bacilos) en
ó más sión en el
n
suspe re.
ai
 DESARROLLO DE LA ENFERMEDAD

●
A los 10 días existen 4000
bacilos formando un
nódulo controlable por las
defensas. A los 14 días se TUBERCULO
●

alcanzan los 100000

bacilos: respuesta inmune
en forma de necrosis
caseosa.
 SIGNOS Y SÍNTOMAS (TB
PULMONAR):
• Fiebre o febrícula por más de dos semanas.
• En el caso de los niños se presentan poca o nula ganancia ponderal de
acuerdo con el peso.
• Tos seca y con expectoración purulenta de más de dos semanas. A veces
estrías de sangre en el esputo.
• Presencia de adenopatías.
• Pérdida de peso.
• Presencia de flemas y/o sangre en la expectoración (hemoptisis).
• Anorexia, hiporexia. (pérdida total o parcial del apetito).
• Dificultad respiratoria.
Tinción De Ziehl Neelsen
• La tinción de Ziehl-Neelsen es una
coloración diferencial útil en la
identificación de Micobacterias,
aunque no permite la diferenciación
de distintas especies.
• La característica de ácido-resistencia
de estos microorganismos hace de
esta coloración un método
rápido en el
diagnóstico, presuntivo,
de infección
micobacteriana.
 PRINCIPIO
Las micobacterias que
resisten la decoloración
se  llaman ácido alcohol
resistentes (AAR) son
coloreadas de rojo
por la Fucsina y retienen
el color a pesar de la
acción del ácido y del
alcohol.
 FUNDAMENTO
• La técnica de Z-N fuerza la penetración de la Fucsina básica en la pared
celular mediante la acción combinada del fenol y el calor, que aumentan
la fluidez de la capa de ácidos micólicos; el calor “derrite” el componente
ceroso y el fenol actúa a modo de disolvente, permitiendo el paso del
colorante básico que se une a los ácidos micólicos con carga negativa.
• Cuando cesa la aplicación de calor y/o se elimina el exceso de fenol
mediante un lavado con agua, la pared recupera su consistencia cerosa,
pero las moléculas de fucsina quedan atrapadas en su espesor.
• Con la coloración de Ziehl Neelsen se observan como bastoncitos
delgados, ligeramente curvos, rojo fucsia, destacándose claramente
contra un fondo azul.
 Resultados
Organismos ácido-alcohol resistentes (mycobacterium, Criptosporidium
sp.) de color rojo brillante, eritrocitos de color naranja amarillento,
otros elementos tisulares de color azul pálido.
HISTOLOGÍA
Reacción
inflamatoria
granulomatosa

Gránulos
encerrados por un
anillo fibroblástico

En los granulomas se
reconocen células
gigantes
multinucleadas
GRANULOMA
RESUMEN