Viendo como linfocito en Neubauer

S. Sigüenza Robles, G. Zambrano Morales, J. Peralta Guevara, M. Torres

Departamento de Ciencias de la vida y Agricultura, Laboratorio de Inmunología y Virología.
Laboratorio de Ingeniería en Biotecnología, Universidad de Las Fuerzas Armadas – ESPE, Sangolquí, Ecuador.
Correo electrónico del autor correspondiente: svsiguenza@espe.edu.ec, gazambrano5@espe.edu.ec,
jbperalta@espe.edu.ec, mmtorres@espe.edu.ec

INTRODUCCIÓN
El 30% de la sangre está constituida por linfocitos (90% pequeños y 10% entre medianos y grandes) que tienen la capacidad de reconocer antígenos y responder a
ellos [7]. De acuerdo a su función se clasifican en linfocitos T, linfocitos B y células NK [1]. La centrifugación por gradiente de densidad recupera aproximadamente el
50% de linfocitos con una viabilidad mayor al 90% [3]. Las células se separan por la diferencia de densidad: los granulocitos se sedimentan, los monocitos se
mantienen en la interfase (entre el plasma y medio) y los leucocitos mononucleares se acumulan en el anillo blanco que se forma en la interfase entre el plasma e
Histopaque 1007 (polisucrosa + solución de diatrizoato) [5]. El objetivo de la práctica fue la purificación de linfocitos por gradiente de densidad para su cuantificación
por conteo en cámara de Neubauer para determinar la concentración de células en un volumen de sangre y el porcentaje de viabilidad.

METODOLOGÍA RESULTADOS

a b

c d

Figura 1. Conteo de linfocitos viables en cámara de Neubauer. Lente 40x. (a) Cuadrante
N1 = 372 células. (b) Cuadrante N2 = 343 células. (c) Cuadrante N3 = 211 células. (d)
Cuadrante N4 = 309 células (Zambrano, 2018).

Figura 2. Porcentaje de viabilidad y Figura 3. Concentración de células totales

mortalidad de células. (Zambrano, (Zambrano, 2018).
2018).  
 
CONCLUSIONES RECOMENDACIONES
Existe distintos métodos de separación de linfocitos, como la técnica de Elispot donde linfocitos se extienden en una placa Bioseguridad en el laboratorio
 
sensibilizada con antígeno generando la unión anticuerpo-antígeno para detectar células B. Para células T se añade a la placa
anticuerpo anti-citoquina [8].
Un conteo de células sanguíneas (CSC) comprueba el tipo y número de células en la sangre, y sirve para detectar o vigilar muchas
• Colocar los desechos en el respectivo
recipiente
afecciones diferentes o como parte de un chequeo de rutina [9]. Las sustancias o químicos que se pueden utilizar son: Ficoll PM400,
Ficoll PM70, Lymphoprep (LP), Percoll, NycoPrep (NP), iohexol entre otros [4]. Manejo de Equipos
Se determinaron y con diluciones 1:1 y 1:2 respectivamente; el porcentaje de viabilidad fue de 72.52%.
• Manejar adecuadamente la pistola de
Métodos de criogenización, según Polar Expres (2016) Centrifugación La muestra a analizar se dosificación
Centrifugación [2]

[6]
zonal deposita en el parte superior • Equilibrar bien los tubos en la centrifuga
Tipos de

El hielo (T=-80°C) método apto
para el proceso de criogenia.
de un gradiente
Nitrógeno líquido (T=-196°C), utilizado en la Las partículas con el mismo Seguimiento de Metodología
conservación de muestras biológicas o
criogenia, debido a su forma más rápida de coeficiente de sedimentación • No mezclar las fases después de la
Centrifugación se separan al usar medios de
ultracongelar. centrifugación
isopíctica diferente densidad

REFERENCIAS
[1] Abbas, A., Lichtman, A. & Pillai, S. (2015). Inmunología celular y molecula, octava edición. España:
ELSEVIER SAUNDERS.
[2] Biología Celuar y Molecular. (2005). En H. Lodish. España: Panamericana. Obtenido de
https://books.google.com.ec/books?
id=YdyMSxY2LjMC&pg=PA181&dq=centrifugacion&hl=es&sa=X&ved=0ahUKEwi9lb7wipH
AhVDp1kKHXYUBr8Q6AEILTAB#v=onepage&q&f=true
[3] Frei, M. (2015). Sigma Aldrich. Obtenido de Isopycnic
Centrifugation:https://www.sigmaaldrich.com/technicaldocuments/articles/biofiles/centrifugation-
separations.html
[4] GE Life Sciences. (27 de abril de 2007). GE Healthcare Bio-Sciences AB. Recuperado el 24 de mayo de
2018, de https://www.gelifesciences.co.jp/catalog/pdf/18115827.pdf
[5] Merck KGaA. (2018). Sigma Aldrich. Obtenido de Histopaque 1077:
https://www.sigmaaldrich.com/content/dam/sigmaaldrich/docs/Sigma/Product_Information_Sheet/1/10
[6] Polar Expres. (24 de Mayo de 2016). Criogenia: ultracongelación ¿hielo seco o nitrógeno líquido?
Obtenido de Clinical & Biomedical Logistics Services: https://polarexpres.es/criogenia-ultracongelacion-
hielo-seco-nitrogeno-liquido/
[7] Ross, M. & Pawlina, W. (2008). Histología, texto y atlas color con biología celular y molecular, quinta
edicón. China: Editorial médica panamericana.
[8] Siachoque, H. O. (2006). Inmunología. Diagnóostico e interpretación de pruebas de laboratorio.
Colombia: Centro Editorial Universidad del Rosario. Obtenido de https://books.google.com.ec/books?
id=KthmqoNj8VkC&pg=PA54&dq=tecnicas+de+separacion+de+linfocitos&hl=es&sa=X&ved=0ahUKEwjdjv
K-vYfeAhUFvFkKHR2jAoMQ6AEILDAB#v=onepage&q&f=true
[9] Vajpayee, N., Graham, S., & Bem, S. (2017). Basic examination of blood and bone marrow. En R.
McPherson, & M. Pincus, Henry's Clinical Diagnosis and Management by Laboratory Methods. Elsevier.